Muitas ferramentas de diagnóstico da dengue tornaram-se disponíveis, porém requerem coleta de sangue como amostra para análise. Um método não invasivo de confirmar a infecção por dengue seria de importância considerável para os estudos clínicos e epidemiológicos. Testes de saliva podem encorajar os pacientes a serem mais receptivos para o diagnóstico da dengue. Possíveis problemas com o uso de sangue incluem a exigência de consentimento e a cooperação do paciente. Em muitos casos, flebotomia em indivíduos com fobia de agulhas, portadores de deficiências e discrasias sanguíneas e, especialmente em bebês e crianças, ou ainda devido a razões sociais, religiosas, à necessidade de um enfermeiro treinado e à necessidade de se separar o soro do plasma antes do teste. Objetivo deste trabalho foi identificar RNA viral em amostras de saliva de pacientes infectados com dengue durante o período febril; avaliar o teste rápido para identificar NS1 em amostra de saliva; identificar a presença de NS1 em amostras de saliva por meio do teste ELISA. Foram coletas amostras de saliva de pacientes durante o período febril com e sem dengue. Todos diagnósticos foram confirmados por exame de sangue para IgM/IgG. Foi feito o teste da Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real em 10 amostras de pacientes com dengue. Em 44 amostras foram testados as tiras de diagnóstico rápido da dengue e ao teste ELISA NS1, para a detecção da proteína NS1. Esse estudo ressaltou a importância da busca pelo diagnóstico laboratorial rápido, prático e financeiramente acessível de doenças febris agudas com sintomas inespecíficos, principalmente em áreas de ocorrência de dengue. Nesse estudo foi encontrada alta especificidade (94%) e média sensibilidade (73%) nos resultados da identificação da proteína NS1 nas amostras de saliva em estágios precoces da infecção por dengue. Esse método, se aprimorado para saliva, poderá ter resultados ainda melhores, por isso mais estudos são necessários. / This study brings a literature review about the current dengue status worldwide and in Brazil followed by a systematic review that highlights the dengue diagnosis through saliva. A prospective study was also made, which evaluated the dengue virus infection diagnosis accuracy through the NS1 antigen detection in saliva samples using ELISA assays. The NS1-ELISA results in saliva were compared to the IgM-ELISA and IgG-ELISA serology. A total of 44 saliva samples were obtained from November 2012 to February 2013. The results showed that de NS1-ELISA presented a sensibility of 0.73, specificity of 0.94, Positive Predictive Value of 0.95, Negative Predictive Value of 0.70, Positive Likelihood Ratio of 13.15, Negative Likelihood Ratio of 0.28. Having these findings in mind, it is possible to suggest that the NS1 detection in saliva may be an important diagnostic tool in special cases, such as people that fear needles, with blood dyscrasias, babies, children, as well as to quickly monitor epidemics and their dissemination.

Orientador: Márcio Ajudarte Lopes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T01:35:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos_LaraMariaAlencar_D.pdf: 993265 bytes, checksum: 9da6c3e7c0c22ceebc93d5f7eac147d1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A quimioterapia é um dos tratamentos utilizados para a cura do câncer, e têm como princípio o uso de drogas que alteram o metabolismo das células neoplásicas levando a morte celular. Apesar dos benefícios do tratamento quimioterápico, as drogas também afetam células normais e geram efeitos colaterais que prejudicam diretamente a qualidade de vida dos pacientes. Tais efeitos na cavidade oral podem ser classificados como agudos (mucosite, hipossalivação, candidose, herpes) ocorrem durante o tratamento, e tardios (hipossalivação) ocorrem após a conclusão do tratamento. A mucosite é o efeito colateral agudo mais importante, e causa principalmente dor e disfagia. Além da alteração na quantidade da saliva os quimioterápicos também alteram os componentes da mesma, predispondo os tecidos orais a alguns efeitos secundários. As proteínas SPLUNC (short palate, lung and nasal epithelium clone) foram identificadas em glândulas salivares, saliva, fluídos das vias aéreas e outros tecidos, com uma possível participação no sistema imune inato dessas regiões. O objetivo desse estudo foi avaliar a correlação entre a expressão das proteínas SPLUNC1 e SPLUNC2A com a presença de efeitos colaterais como mucosite e hipossalivação durante a quimioterapia, assim como a quantificação dessas proteínas antes, durante e após o tratamento. Foram realizadas três coletas de saliva total em 20 pacientes saudáveis, 20 pacientes submetidos à quimioterapia convencional e em 15 pacientes submetidos a regimes de condicionamento prévios ao transplante autólogo de células tronco hematopoiéticas e as proteínas foram avaliadas por meio de western blotting. Foi observada uma significativa mudança na qualidade da saliva durante a quimioterapia, caracterizada pelo aumento na expressão de SPLUNC1, mas não foi comprovado que essa variação esteja associada ao agravamento da mucosite e hipossalivação / Abstract: Chemotherapy is one of the treatments used to cure cancer, and have as a principle the use of drugs that alter the metabolism of neoplastic cells leading to cell death. Despite of the benefits of chemotherapy, the drugs also affect normal cells and cause side effects that directly affect the quality of life of patients. Such effects in the oral cavity can be classified as acute (mucositis, hyposalivation, candidosis, herpes) occur during the treatment, and late (hyposalivation) occur after completion of treatment. Mucositis is the most important acute side effect, and mainly causes pain and dysphagia. Besides the change in the amount of saliva, chemotherapy also alters the saliva composition, predisposing oral tissues to some collateral effects. Proteins SPLUNC (short palate, lung and nasal epithelium clone) were identified in salivary glands, saliva, fluid from the airways and other tissues, with a possible role in the innate immune system in these regions. The aim of this study was to evaluate the correlation between the expression of proteins SPLUNC1 and SPLUNC2A with the presence of side effects such as mucositis and hyposalivation during chemotherapy, as well as the quantification of these proteins before, during and after treatment. Were performed three collections of whole saliva in 20 healthy subjects, 20 patients undergoing conventional chemotherapy and 15 patients undergoing conditioning regimens prior to autologous hematopoietic stem cell transplantation and proteins were evaluated by western blotting. We observed a significant change in the quality of saliva during chemotherapy, characterized by increased expression of SPLUNC1, but it was not observed any association with worsening of hyposalivation and mucositis / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

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Lectins are proteins or glycoproteins of non-immune origin, capable of specific interaction with, and reversible binding to carbohydrate moieties of complex glycoconjugates. Lectins are ubiquitous in nature and are present in all living organisms. In nature lectins are implicated in cell recognition and adhesion processes, and have been described as "second generation" mucoadhesives. The aim of this project was to identify lectins that could be incorporated into dosage forms to allow their retention within the oral cavity. This would allow prolonged localised drug delivery. Initial screening studies on human buccal cells, usmg the avidin-biotincomplex/ diaminobenzidine method suggested that all the lectins tested appeared to bind to varying degrees, as visualised by a diaminobenzidine (DAB) precipitate to the oral epithelial surface. The stain intensities were analysed semi-qualitatively with E micro densitometer GN5 (Barr and Stroud). A substantial reduction in lectin binding was observed after exposing buccal cells to a series of lectin solutions pre-treated with secretor and non-secretor saliva. However when bound to the buccal cells, there was little displacement of lectins on exposure to either saliva types. Kinetic binding studies revealed the presence of the lectins from Pisum sativum and Arachis hypogaea, after only 20 s contact. There were some differences in lectin binding evident between rat oral tissue and human buccal cells, but those that bound avidly to both were selected for furthe studies. In order to allow a quantitative assessment of binding, the lectins from Canavali ensiformis, Arachis hypogaea and Triticum vulgaris were labelled with Technetium-99n (Tc-99m) using a cyclic diethylenetriamine pentaacetic acid conjugation technique. In this preliminary study it was found that 1.18 fmoles of the Canavalia ensiformis lectir 3.27 fmoles of the Arachis hypogaea lectin and 11.11 fmoles of the Triticum vulgari lectin bound per buccal cell. This was reduced when Tc-99m-labelled Canavali ensiformis lectin was inhibited by the presence of 40% w/v glucose solution. It was estimated that a therapeutic dose of a potential dosage form could be conjugated to the Triticum vulgaris lectin within the oral cavity, thus demonstrating the feasibility of using this, and possibly other lectins in a drug delivery strategy. Preliminary in vivo studies in the conscious rat model suggested that the Tc-99m-labelled Canavalia ensiformis an Triticum vulgaris lectins were present within the oral cavity, 1 hand 2 h respectively after application, with about 25% of the Canavalia ensiformis lectin being lost into the stomach through swallowing. Transmission electron microscopy studies were initiated to determine the exact sites of lectins binding to the human buccal cell. Fresh, unfixed human buccal cells were incubated in a solution containing 20 nm gold-labelled Canavalia ensiformis lectin. was found that after processing, the lectin bound to the external surface of the buccal cells, or to external mucin. No binding was observed when pre-fixed human buccal cells were used, indicating that fixation affects the glucose/ mannose-containing binding site Canavalia ensiformis lectin binding to the buccal cells was partially inhibited by the presence of glucose, the hapten sugar. It was concluded that lectins will bind to the rat oral epithelial and human buccal cell surfaces to varying degrees, and will persist, even in the presence of saliva. In particular the lectin from Triticum vulgaris was shown to have good stability in the conscious rat model for up to 2 h, and shows great promise for use in a potential lectin-containing drug delivery system.

published_or_final_version / Dentistry / Doctoral / Doctor of Philosophy

published_or_final_version / Paediatric Dentistry / Master / Master of Dental Surgery

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Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Introducción: La xerostomía es una condición muy frecuente principalmente en adultos mayores, asociado a variadas causas tales como el envejecimiento, enfermedades, condiciones o consumo de fármacos, generando problemas funcionales y sensación de ardor con dolor permanente e infecciones oportunistas como Candidiasis que impactan en la calidad de vida los individuos que lo padecen. El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de una terapia paliativa para la sensación de boca seca, utilizando un sustituto salival casero en base a manzanilla (Matricaria chamomilla) y semillas de linaza (Linum usitatissimum) sobre la portación de levaduras del género Candida en adultos con xerostomía. Material y métodos: Mediante un ensayo clínico, doble ciego, aleatorizado cruzado con blanqueamiento, se tomaron muestras de saliva de 39 voluntarios con xerostomía, antes y después del uso por una semana del sustituto salival experimental y el convencional. Estas muestras fueron sembradas en placas agar Dextrosa Sabouraud-Tetraciclina y en placas de CHROMagar™ Candida. Se realizó recuento e identificación presuntiva de levaduras del género Candida. La presencia de hiposialia se determinó mediante el test de ―Saliva total no estimulada‖. Los recuentos de levaduras se analizaron mediante el Test de la prueba de rango con signo de Wilcoxon y la hiposialia con el Test exacto de Fisher. Se relacionó el estatus de portación y variedad de especies de levaduras con: la condición de hiposialia mediante una prueba de regresión logística. Se utilizó el software STATA 9.1. Resultados: El sustituto experimental en base a manzanilla (Matricaria chamomilla) y semillas de linaza (Linum usitatissimum) no generó una variación significativa en la portación de levaduras del género Candida en los individuos del estudio, a diferencia del sustituto convencional que aumentó de manera significativa esta variable. De los individuos participantes en el estudio un 48,7% presentó hiposialia acompañada de un mayor recuento inicial de levaduras del género Candida, lo que no fue observado en los individuos sin esta condición. De acuerdo a la identificación presuntiva de levaduras del género Candida en medio CHROMagar™ Candida; la especie aislada con mayor frecuencia fue Candida albicans seguida de Candida glabrata. Conclusiones: El sustituto salival en base a manzanilla y linaza no modificó la portación de levaduras del género Candida en los voluntarios del estudio, a diferencia del sustituto convencional, por lo que presenta una ventaja frente al único producto disponible en el mercado nacional. Se requiere de investigaciones adicionales sobre el efecto de la manzanilla y linaza y sus mecanismos de acción sobre levaduras del género Candida, de modo de generar mayor evidencia sobre la interacción de estos productos naturales con la microbiota oral. Evidencia que sería fundamental para la toma de decisiones en el tratamiento paliativo de la sequedad bucal de los pacientes xerostómicos, que permita efectivamente mejorar su calidad de vida.

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Este estudo in situ se propôs a analisar o efeito erosivo de refrigerante tipo cola (ERO) no esmalte dentário humano ou bovino, associado a diferentes condições de abrasão (escovação imediata/JÁ ou mediata/1H) e avaliar a capacidade do fluxo salivar estimulado por chiclete em diminuir alterações no esmalte dentário. Durante dois períodos experimentais cruzados de 7 dias, 9 voluntários previamente selecionados utilizaram um dispositivo intrabucal palatino contendo doze espécimes de esmalte (6 humanos e 6 bovinos), aleatoriamente selecionados e distribuídos em três fileiras horizontais, cada uma com 4 espécimes, dois bovinos e 2 humanos. No 1º período (P1), os voluntários imergiram o aparelho em 150 mL da bebida, durante 5 minutos, nos horários pré-estabelecidos (8h, 12h, 16h e 20h), em seguida escovaram com dentifrício fluoretado quatro espécimes de uma das fileiras indicada como \"JÁ\" e recolocaram o aparelho. Depois de uma hora escovaram mais quatro espécimes de outra fileira indicada como \"1H\" e nada realizaram na fileira restante (ERO). Já no 2º período (P2), repetiram-se os mesmos procedimentos, no entanto após a imersão na bebida, os voluntários estimularam o fluxo salivar, mascando um chiclete sem sacarose por 30 minutos. A análise da alteração do esmalte foi realizada por meio de testes de microdureza (%PDS) e perfilometria (desgaste em µm). A Análise de Variância e o Teste de Tukey foram aplicados encontrando-se diferenças estatísticas (p<0,05) em todas comparações descritas abaixo. A porcentagem de perda de dureza foi maior para o substrato humano e o desgaste maior para o bovino. A ação do chiclete promoveu menor desgaste e menor perda de dureza. Observou-se uma perda de dureza decrescente e um desgaste crescente para as seguintes condições: ERO, 1H e JÁ. Os resultados sugerem que após um ataque erosivo a estimulação salivar diminui o desgaste dentário e, quando há associação com a abrasão pela escovação é melhor que esta seja postergada por uma hora. / This in situ study evaluated the erosive effect of a cola based soft drink (ERO) on human or bovine dental enamel, associated to different conditions of abrasion (immediately/NOW or mediately/1H toothbrushing). The use of chewing gum to stimulate salivary flow rate and minimize the enamel dental alterations was also studied. During two experimental 7 days crossover periods, 9 previously selected volunteers wore intraoral palatal devices, with 12 enamel specimens (6 human and 6 bovine), which were randomly selected and distributed in 3 rows, with 2 bovine and 2 human specimens each. On the first period, the volunteers immersed the device for 5 minutes in 150 mL of the soft drink, on a pre-established schedule (8h, 12h, 16h and 20h). Subsequently, 4 specimens of the row indicated row as \"NOW\" were brushed using a fluoride dentifrice and the device was replaced in mouth. After 1 hour, another 4 specimens of the row indicated as \"1H\" were brushed and no treatment was performed in the lasting row (ERO). On the second period, the procedures were repeated but after the drink immersion the volunteers stimulated the salivary flow rate by chewing a sugar-free gum for 30 minutes. Enamel alterations were measured using microhardness (%SMHC) and profilometry tests (wear-µm). ANOVA and Tukey Test showed statistical differences (p<0,05) for all following comparisons. The percentage of microhardness change was greater for the human substrate and the wear was greater for the bovine substrate. The chewing gum promoted less wear and microhardness change. It was observed a decreasing percentage of microhardness change and a crescent enamel wear in the following conditions: ERO, 1H e NOW. The data suggest that the salivary stimulation after an erosive attack can reduce the dental wear and in those situations where it is associated with abrasion by brushing, it is better to postpone this procedure by an hour.