O gênero Garcinia, também conhecido como Rheedia, é o mais numeroso da família Clusiaceae e rico em uma considerável diversidade de compostos, tais como benzofenonas polipreniladas, flavonóides, proantocianinas e xantonas. A espécie Garcinia brasiliensis é uma planta nativa da região amazônica e seus frutos são popularmente conhecidos como “bacupari”. Neste trabalho, a partir do extrato acetato de etila das sementes de Garcinia brasiliensis, foi possível isolar a benzofenona natural poliprenilada guttiferona-A. Modificações moleculares nas hidroxilas fenólicas deste composto levaram a obtenção de sete derivados semissintéticos inéditos, os quais foram avaliados quanto à atividade antiproteolítica, através de ensaios sobre as enzimas tripsina e papaína. O interesse pela busca de inibidores de proteases justifica-se pela comprovada relação desta classe de enzimas a uma série de patologias, incluindo entre outras, o câncer e a AIDS. A guttiferona-A, apresentou resultados relevantes para as duas enzimas testadas, demonstrando a importância dos grupos prenila e hidroxila da molécula. Além disso, os derivados acilados também apresentaram valores significativos de IC50 comparados ao produto de partida, com destaque dois deles, sendo possível ainda relacionar a atividade inibitória dessas moléculas com a presença do grupo carbonílico. / The genus Garcinia also known as Rheedia, is the biggest of the family Clusiaceae and rich in a considerable variety of compounds such as benzophenones polipreniladas, flavonoids, and xanthones proanthocyanins. The species Garcinia brasiliensis is a plant native to the Amazon region and its fruits are popularly known as "bacupari". In this work, from the ethyl acetate extract of the seeds of Garcinia brasiliensis were isolated the natural poliprenilada benzophenone guttiferone-A. Molecular changes in the phenolic hydroxyl of this compound led to the formation of seven novel semisynthetic derivatives, which were evaluated for anti-proteolytic activity, through experiments on the enzymes trypsin and papain. The interest in the search of protease inhibitors is justified by the proven link between this class of enzymes to a variety of diseases, including among others, cancer and AIDS. The guttiferone-A, showed significant results for the two enzymes tested, demonstrating the importance of the prenyl and hydroxyl groups of the molecule. Furthermore, the acylated derivatives also showed a significant IC50 compared to original product, especially two of them, is still possible to relate the inhibitory activity of these molecules in the presence of carbonyl group. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-04-25T12:12:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1655662 bytes, checksum: c2460b038388046dbed898dded1a7531 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T12:12:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1655662 bytes, checksum: c2460b038388046dbed898dded1a7531 (MD5) Previous issue date: 2018-02-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fungos nematófagos são controladores naturais de nematoides parasitos de plantas e animais. São amplamente usados no controle biológico de nematoides parasitos gastrintestinais (NPG) de ruminantes por reduzir formas de vida livre nas pastagens. O processo de captura de nematoides segue uma ordem de eventos que envolve atração, adesão, penetração e degradação da cutícula do nematoide. As fases de penetração e degradação, envolvem a produção e secreção de enzimas extracelulares capazes de hidrolisar a cutícula dos nematoides, causando sua morte. Proteases de Arthrobotrys cladodes (CG719) foram purificadas por cromatografia de troca aniônica (Mono Q) e gel filtração em coluna Protein-Pak em sistema HPLC. A atividade nematicida das proteases foi testada em larvas infectantes (L 3 ) de nematoides parasitos gastrintestinais de ruminantes. O efeito sobre a bainha e cutícula das larvas foi observado por microscopia eletrônica de varredura e transmissão. As proteases purificadas chamadas de proteases de Arthrobotrys cladodes I (AcPI) e proteases de Arthrobotrys cladodes II (AcPII), têm massa molecular estimada de 56 e 39 kDa, respectivamente. A atividade enzimática dessas proteases foi maior em pH neutro a alcalino (7-8) e em temperaturas de 55 a 60°C. Ambas foram inativadas pelo inibidor fluoreto de fenilmetilsulfonilo (PMSF) sugerindo pertencerem ao grupo das serina proteases. As proteases apresentaram maior atividade enzimática na presença do íon metálico Ca +2 . A fração de protease, purificada por cromatografia de troca aniônica, apresentou atividade larvicida provocando a morte de 53% das L 3 de NPG após 24 h de exposição. As AcPI e AcPII causaram mortalidade de 31 e 27% das L 3 , respectivamente, após 24 h, sugerindo ação aditiva na degradação da cutícula dos nematoides. Na microscopia eletrônica de varredura e transmissão, foram observadas alterações morfológicas, descamações, danos na camada basal, epicutícula, “annulis”, “furrows”, “alae”, hipoderme, e musculatura. Em algumas regiões, a camada cortical foi inteiramente destruída. Lesões provocaram extravasamento de líquido intracelular e perda de tecido. Proteases extracelulares secretadas por A. cladodes foram eficientes na penetração e degradação da cutícula de nematoides. Estas enzimas romperam a integridade física e fisiológica da dupla cutícula de L 3 de NPG. Isto pode permitir o desenvolvimento de fármacos para agir, diretamente, sobre helmintos ou, de forma sinérgica, com medicamentos comerciais. / Nematophagous fungi are natural enemies of parasitic nematodes of plants and animals. They are widely used in biological control of gastrointestinal nematodes (GIN) of ruminants by reducing free-living forms in pastures. The nematode capture process follows an order of events that involves attraction, adhesion, penetration and degradation of nematode cuticle. The phases of penetration and degradation, involve the production and secretion of extracellular enzymes capable of hydrolyzing the cuticle of the nematodes, causing their death. Proteases from Arthrobotrys cladodes (CG719) were purified by anion exchange chromatography (Mono Q) and gel filtration on a Protein-Pak column by HPLC system. The nematicidal activity of the proteases was tested in infective larvae (L3) of gastrointestinal parasitic nematodes of ruminants. The effect on the sheath and cuticle of the larvae were observed by scanning and transmission electron microscopy. The purified proteases called Proteases from Arthrobotrys cladodes I (AcPI) and Proteases from Arthrobotrys cladodes II (AcPII), have an estimated molecular mass of 56 and 39 kDa, respectively. The enzymatic activity of these proteases was higher at neutral to alkaline (7-8) pH and at temperatures of 55 to 60°C. Both were inactivated by the phenylmethylsulfonyl fluoride inhibitor (PMSF) suggesting that they belong to the serine proteases group. The proteases showed higher enzymatic activity in the presence of the Ca +2 metal ion. The protease fraction, purified by anion exchange chromatography, showed larvicidal activity causing the death of 53% of L 3 from GINs after 24 h of exposure. AcPI and AcPII caused mortality of 31 and 27% of L 3 , respectively, after 24 h, suggesting additive action in the degradation of the nematode cuticle. In scanning and transmission electron microscopy morphological changes, peeling, basal layer, epicuticle, annulis, furrows, alae, hypodermis, and musculature were observed. In some regions the cortical layer was entirely destroyed. Lesions caused extravasation of intracellular fluid and loss of tissue. Extracellular proteases secreted by A. cladodes were efficient in penetration and degradation of the nematode cuticle. These enzymes disrupted the physical and physiological integrity L 3 of GIN double cuticle. This may allow the development of drugs to act directly on helminths or, synergistically, with commercial drugs.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-03-17T18:50:12Z No. of bitstreams: 1 Portela, Aline Cordeiro [Dissertação, 2014].pdf: 9279752 bytes, checksum: 9172b58477a24ce8a80f3405e0759adb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T18:50:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Portela, Aline Cordeiro [Dissertação, 2014].pdf: 9279752 bytes, checksum: 9172b58477a24ce8a80f3405e0759adb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A dengue é um problema de saúde pública mundial, acometendo cerca de 50 milhões de pessoas por ano. O HCV é a principal causa de hepatite crônica e estima-se que 200 milhões de pessoas estejam infectadas no mundo. A terapia atual contra o HCV apresenta eficácia limitada e baixa tolerância, enquanto que para a dengue não existe um tratamento antiviral específico. Com o objetivo de explorar essa demanda, o presente trabalho descreve a síntese para a obtenção de quinze compostos peptideomiméticos inéditos, contendo o cerne rígido proveniente do isosorbídeo, como potenciais agentes inibidores da enzima NS3 protease de ambos os vírus. A estratégia de síntese dos peptideomiméticos consistiu inicialmente na obtenção de dez compostos inéditos, das séries 28a-c (derivada de oxazolonas) e 29a-g (derivada de aminoácidos N-protegidos). Os compostos foram inicialmente testados frente à inibição da protease do DENV-2, os quais não apresentaram resultados significativos. Entretanto, os resultados de inibição enzimática dos compostos frente à NS3/4A do HCV-1b foram mais satisfatórios, sendo o composto 28a (1,4:3,6-dianidro-5-[[(2Z)-2-(benzoilamino)-1-oxo-3-(2-tienil)-2-propen-1-il]amino] -2-deoxi-2-O-(fenilmetil)-D-iditiol, o mais ativo, com IC50 = 88μm. Estudos de docking molecular foram realizados para avaliar o modo de interação dos ligantes com a serina protease NS3/4A do HCV. Dentre os compostos sintetizados, 28a foi considerado protótipo para o desenvolvimento de novos compostos com potencial de inibição da enzima em questão. A partir de 28a, a nova série de compostos inéditos 42a-e foi proposta e obtida. Os resultados dos ensaios farmacológicos frente à NS3/4A do HCV-1b permitiram-nos inferir que a substituição do tiofeno de 28a pelo furano e 3-metiltiofeno em 42b e 42c, respectivamente, resultou em um aumento de cerca de 30% no perfil de inibição enzimática, com inibição de 70% dessa enzima viral. Dessa forma, podemos identificar esses dois novos compostos como protótipos para o planejamento de futuras moléculas potencialmente inibidoras da enzima serina protease do vírus da Hepatite C / Dengue fever is a worldwide public health concern, affecting approximately 50 million people per year. HCV is the main cause of chronic hepatitis and it is estimated that 200 million people are infected worldwide. Current therapy against HCV has limited efficacy and low tolerance, and there is no specific antiviral treatment for dengue fever. In order to exploit this demand, this work describes the synthesis for obtaining fifteen novel peptidemimetic compounds, isosorbide derivatives as potential inhibitory agents of the NS3 protease enzyme of both viruses. Initially the synthetic strategy of peptidemimetics consisted in obtaining ten novel compounds: 28a-c (derived from oxazolones) and 29a-g (derived from N-protected amino acids) series. The compounds were initially tested on the inhibition of protease DENV-2 , which results were not significant. However, the results of enzymatic inhibition of the compounds against the NS3/4A HCV-1b was more satisfactory, and the compound 28a (1,4 : 3,6- dianhydro -5 - [[( 2Z ) -2- ( benzoylamino) -1 -oxo- 3- (2- thienyl) -2 - propen -1- yl] amino] -2- deoxy -2- O- ( phenylmethyl ) -D- iditiol) , the most active , presenting IC50 = 88μm. Molecular docking studies were performed to assess the compounds mode of interaction with the serine protease NS3 / 4A HCV. Among the compounds synthesized, 28a was considered a prototype for the development of new compounds with a potential inhibition of the enzyme in question. Staring from 28a as a prototype the 42a-e serie was proposed and obtained. The results of pharmacological tests against the NS3/ 4A HCV -1b allowed us to conclude that substitution of the 28a furan thiophene and 3- methylthiophene in 42b and 42c respectively resulted in an increase of 30 % in the profile enzyme inhibition , with inhibition of 70 % of the viral enzyme . Thus , we can identify these new compounds as prototypes for planning future potentially molecule inhibitors of serine protease enzyme of the Hepatitis C virus

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2018-03-12T17:36:57Z No. of bitstreams: 1 PEDRO HENRIQUE RODRIGUES DE ALENCAR AZEVEDO.pdf: 15048741 bytes, checksum: a121d29e5dc4898c7b8e4a85def01e12 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-12T17:36:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PEDRO HENRIQUE RODRIGUES DE ALENCAR AZEVEDO.pdf: 15048741 bytes, checksum: a121d29e5dc4898c7b8e4a85def01e12 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As calicreínas teciduais humanas (KLKs) compreendem uma família de 15 enzimas serina proteases (KLKs 1-15) amplamente encontradas nos tecidos humanos. Em diversas patologias como a dermatite atópica, psoríase, síndrome de Netherton, câncer de ovário, mama e testículos, as KLKs encontram-se em concentrações elevadas. Por exemplo, as KLKs 5 e 7 estão mais abundantemente expressadas na pele, na qual estão envolvidas com o processo de descamação da mesma, e também presentes em alguns tipos de carcinomas. Dessa forma, as KLKs 5 e 7 são consideradas importantes alvos terapêuticos para o tratamento de doenças onde elas encontram-se superexpressadas, enfatizando a existência de somente um fármaco comercialmente disponível como inibidor de KLK. Nesse contexto, o trabalho descreve a síntese de 3 séries de compostos peptideomiméticos, incorporando o cerne estatina e diferentes resíduos de aminoácidos, planejados como candidatos a inibidores das enzimas serina proteases do KLKs 5 e 7. Os compostos finais foram obtidos utilizando uma rota sintética eficiente tendo como reação-chave a formação da ligação peptídica entre o cerne estatina e cloridratos de aminoésteres, previamente sintetizados. Os compostos sintetizados foram identificados por técnicas de Ressonância Magnética Nuclear, Infravermelho e Espectrometria de massas de alta resolução e os produtos finais serão avaliados em testes in vitro de inibição das enzimas KLKs / Human tissue kallikreins (KLKs) comprise a family of 15 serine protease enzymes (KLKs 1-15) widely found in human tissues. In several pathologies such as atopic dermatitis, psoriasis, Netherton syndrome, ovarian, breast and testis cancer, KLKs are in high concentrations. For example, KLKs 5 and 7 are more abundantly expressed in the skin, in which they are involved in the desquamation process, and also present in some types of carcinomas. Thus, KLKs 5 and 7 are considered important therapeutic targets for the treatment of diseases where they are over expressed, emphasizing the existence of only one commercially available drug as a KLK inhibitor. In this context, the work describes the synthesis of three series of peptideomimetic compounds incorporating the statin core and different amino acid residues, designed as candidates for inhibitors of the serine protease enzymes of KLKs 5 and 7. The final compounds were obtained using an efficient synthetic route based on the reaction of formation of the peptide bond between the statin core and previously synthesized amino acid hydrochlorides. The synthesized compounds were identified by Nuclear Magnetic Resonance, Infrared and High Resolution Mass Spectrometry techniques and the final products will be evaluated in in vitro inhibition assays of the KLKs enzymes

Orientador: Marcos Hikary Toyama / Resumo: A giroxina é a principal serino protease encontrada no veneno total de Crotalus durissus terrificus. As serino proteases de veneno de serpentes são proteínas que apresentam uma grande similaridade estrutural com a trombina humana incluindo a alta conservação do sitio catalítico. Os resμltados já obtidos pelo nosso grupo revelaram a capacidade dos flavonoides glicosilados de Laguncularia racemosa em reduzir de forma significativa a atividade enzimática das trombinas humanas. A identificação destas molécμlas revelou que dois flavonoides glicosilados (quercetina-3-O-arabinosidio (QAra) e quercetina-3-O-ramnosidio (QRham)) respondem pela inibição da trombina (Rodrigues et al., 2015). Sabe-se que a soroterapia antiveneno não consegue neutralizar de forma eficiente a ação farmacológica das serino proteases e consequentemente não é capaz de neutralizar os danos homeostáticos e teciduais. Neste trabalho, uma nova serino protease foi isolada do veneno total de Crotalus durissus terrificus (cdtsp-2) através de quatro estapas de separação, usando a superdex 75 com uma fase móvel de bicarbonato de amônia pH 8, a cdtsp-2 Estas duas frações foram então fracionadas em coluna de troca iônica em DEAE para separação das principais frações e posteriormente fracionadas em CLAE de fase reversa para confirmar o grau de homologia molecular e em todas as etapas cromatográfica foram acompanhadas pelos ensaios enzimáticos em BApNA. A nova serino protease denominada como Cdtsp-2 (Crotalus durissus terr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Gyroxin is the major serine protease present in Crotalusdurissusterrificus venom. Serine proteases from snake venom are proteins, which exhibit a great structural similarity to hμMan thrombin including the catalytic site conservation. The resμlts already obtained by our group revealed the glycosylated flavonoidsability of Laguncμlariaracemosato significantly reduce the enzymatic activity of hμMan thrombins. The molecμles identification reveals two glycosylated flavonoids (quercetin-3-O-arabinosidiμM (QAra) and quercetin-3-O-rhamnosidiμM(QRham)), which inhibit thrombin (Rodrigues et al., 2015). Antivenomserotherapycan not efficiently neutralize the serine proteases pharmacological action and is not able to neutralize homeostatic and tissue damage. In this work, a new serine protease was isolated from Crotalusdurissusterrificusvenom (cdtsp-2) by throμgh four separation stages , using superdex 75 with a mobile phase of ammoniμM bicarbonate pH 8. These two fractions were fractionated on ion exchange colμMn in DEAE for separation of the major fractions and subsequently fractionated in reverse phase CLAE to confirm the degree of molecμlar homology.All chromatographic steps were monitored by the enzymatic assays in BApNA. The new serine protease called cdtsp-2 (Crotalusdurissusterrificus serine protease 2) is an unpublished protein, with a molecμlar mass of 27 kDa and its N-terminal sequence showed structural differences when compared to the gyroxin of Crotalusdurissusterrificus. Re... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre