Ling Eva. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2004. / Includes bibliographical references (leaves 175-202). / Abstracts in English and Chinese. / Abstract --- p.i / 論文摘要 --- p.iv / Acknowledgement --- p.vi / Abbreviations Frequently Used --- p.vii / Table of Contents --- p.viii / Chapter Chapter One --- Introduction --- p.1 / Chapter Chapter Two --- Materials and Methods --- p.35 / Chapter Chapter Three --- Results --- p.64 / Chapter Chapter Four --- Discussion --- p.148 / References --- p.175 / Tables --- p.203

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol inst., 2003. / Härtill 5 uppsatser.

La FSH est une hormone clé dans la fonction de reproduction. La compréhension de ces mécanismes moléculaires est essentielle pour comprendre ses effets biologiques. Nous montrons ici pour la première fois que non seulement la FSH induit le recrutement de polysomes dans la cellule de Sertoli, mais qu’en plus, elle stimule la traduction de deux ARNm sélectivement, c-fos et vegfa. La p70S6K est impliquée dans ce mécanisme. La FSH active et induit le recrutement de la p70S6K sur la coiffe des ARNm où elle active ses cibles traductionnelles. Les β-arrestines, des protéines d’échafaudage qui régulent la signalisation du RFSH, semblent participer à l’activation de la p70S6K. La déplétion des β-arrestines augmente massivement le recrutement de la p70S6K à la coiffe et diminue son activité enzymatique. De plus, la p70S6K et les β-arrestines interagissent mais cette interaction ne semble pas modulée par la FSH. Nos résultats suggèrent que les β-arrestines séquestreraient la p70S6K inactive pour permettre son activation et son recrutement à la coiffe m7GTP en réponse à la FSH. Ce travail apporte de nouvelles connaissances sur le rôle de la FSH dans la traduction et les mécanismes de signalisation impliqués. / FSH is a key hormone of the reproductive function. A clear understanding of its molecular mechanism is essential to fully understand its biological effects. Here, we show for the first time that FSH not only enhances the assembly of polysomes but also stimulates the translation of at least two mRNA selectively, c-fos and vegfa, in Sertoli cells. p70S6K participates in this mechanism. FSH activates and enhaced p70S6K recruitment to the m7GTP cap structure of mRNA where this kinase phosphorylates its targets. β-arrestins, which are scaffolding proteins that regulate FSH signalling, seem to participate in p70S6K activation. Accordingly, β-arrestins depletion increased p70S6K recruitment to the cap and reduced its enzymatic activity. Importantly, p70S6K and β-arrestins interact but the interaction is not FSH-dependent. We assume that β-arrestins sequester inactive p70S6K to activate it locally and then p70S6K translocates to the cap in response to FSH. In conclusion, this work brings new knowledge about FSH function in translational control and the signaling mechanisms involved.

Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Ana Paula Alves Favareto / Banca: Patricia Fernanda Felipe Pinheiro / Resumo: As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Abstract: Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility / Mestre

La stérilité affecte à l’heure actuelle près de 15-20 % des couples et sa prévalence est en progression depuis quatre à cinq décennies. Cette progression évolue parallèlement à la prévalence de l’épidémie d’obésité et de syndrome métabolique dans le monde. De multiples arguments physiologiques et épidémiologiques chez l’Homme soutiennent l’hypothèse de l’influence de l’homéostasie des lipides sur la fonction gonadique. En particulier, le cholestérol est un facteur clef dans la régulation de la stéroïdogenèse et de la gamétogenèse. Bien que les atteintes gonadiques semblent multifactorielles, les mécanismes moléculaires restent méconnus dans la majorité des cas. Les Liver X receptors (LXRα et β) sont des récepteurs nucléaires activés par les oxystérols. Ce sont classiquement des régulateurs du métabolisme lipidique. Plusieurs études ont démontré l’importance de ces récepteurs dans la physiologie des gonades. Ce travail identifie les rôles multiples des LXRs dans le maintien de la fertilité masculine et féminine, et décrit l’effet de l’homéostasie du cholestérol sur la maturation des cellules germinales dans le testicule et l’ovaire. Ce travail se concentre sur l’analyse comparative d’une lignée de souris ré-exprimant LXRβ (Lxrαϐ-/-:AMHLxrϐ) sous contrôle de promoteur d’AMH humain (expression spécifique dans les cellules de Sertoli dans le testicule et les cellules de granulosa dans l’ovaire) sur un fond génétique de souris Lxrαϐ-/-. L’absence d’un isoforme d LXR aboutit à des défauts spécifiques dans un type cellulaire du testicule. Néanmoins, le dysfonctionnement d’un type cellulaire est compensé. En effet, de multiples défauts sont nécessaires pour aboutir à la stérilité. LXR dans les cellules de granulosa est critique pour la maturation et la survie des ovocytes, l’ovulation, et par conséquence pour la fertilité. Ainsi, LXRβ est une cible potentielle pour réguler la fertilité féminine et la prévention de syndrome d’hyperstimulation ovarienne. Nos résultats ouvrent des perspectives pour des nouvelles cibles diagnostiques et pronostiques dans la fertilité. / Sterility affects 15 % of French population and its prevalence is propagating since four or five decades. Many human physiological and epidemiological arguments support the impact of lipid homeostasis on the gonads; indeed, cholesterol is a key regulator of steroidogenesis and gametogenesis. Nevertheless, the molecular mechanisms remain hidden. Liver X receptors alpha and beta (LXRα and β) belong to the superfamily of nuclear receptors and are activated upon binding to oxysterols. LXRs are mainly implicated in cholesterol homeostasis. Increasing bulk of literature identified these non-steroid nuclear receptors as major regulators of the gonad physiology. This work uncovers previously unidentified putative roles of LXRs and ability of cholecterol excess to alter male and female germ cell maturation. Herein, we analyse a new mouse strain (Lxrαϐ-/-:AMHLxrϐ) re-expressing LXRβ under control of AMH promoter (specific to Sertoli in testis and granulosa cells in ovary) in a background of Lxrαϐ-/- mouse. Our results identify LXRs as primordial to maintain male and female fertility. They have pleotropic « non-classical » roles ranging from lipid homeostasis to the regulation of germ cell maturation and bi-directional control of steroid synthesis. If the cellular defects in the absence of LXRs within the testis are significant, they are generally compensated and consequently, single cell compartment is tolerated. Unlike the testis, LXRβ in the granulosa cells is « the regulator » of multiple mechanisms essential for follicle maturation, ovocyte survival and for controlled ovulation. LXRβ is therefore a potnetial target to regulate female fertility and to prevent ovarian hyperstimulation syndrome. Our results open the perspectives for the identification of new diagnostic and/or prognostic markers in both male and female fertility.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:00Z : No. of bitstreams: 1 000847999.pdf: 2110688 bytes, checksum: 3cfbc2629db1b4c973c6917a12690b53 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-08T12:52:57Z No. of bitstreams: 1 Waldo Oliveira Monteiro Filho.pdf: 1607300 bytes, checksum: aa0749d6dd1cc7f00a1f19730ca34d59 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-08T12:52:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Waldo Oliveira Monteiro Filho.pdf: 1607300 bytes, checksum: aa0749d6dd1cc7f00a1f19730ca34d59 (MD5) Previous issue date: 2009-07-31 / Currently, selective serotonin reuptake inhibitors (SSRIs) are the most frequently prescribed antidepressants for the treatment of depression and major side effects in adults related to sexual dysfunction. Depressive disorders are common both during the prenatal period and early months after birth and fluoxetine is widely used to treat depression in this period. Until the present moment, no further study on the pharmacological intervention in the serotonin system during the critical period for testicular development in neonatal rats and the effects on the spermatogenic process in sexually mature rats was performed. We carried out 3 experiments using fluoxetine hydrochloride. In the first experiment observed the effect of direct administration of fluoxetine during postnatal testicular development in rats, but with assessment at 150 days of age. In this paper, we observed reduction in testicular weight gross and net volume of tubules and seminiferous epithelium. The tubular diameter was reduced in animals treated with 20 mg/Kg which caused an increase in total length of seminiferous tubules in this group. There were no histological changes in the population of Sertoli cells, daily sperm production and efficiency of the spermatogenic process. The second experiment studied the effects of transplacental transfer of fluoxetine and breast milk on the testicular development of prepubertal rats. In this experiment, were observed changes in the body weight development, in the testicular volumetric parameters and total length of seminiferous tubules, mainly in higher doses of fluoxetine. There was a trend of reduction of Sertoli cells population and delay in the appearance tubular lumen in animals exposed to higher dose. Inthe third experiment was used the same protocol of the second experiment, but the testis were performed in rats sexually mature. According to the results was observed that fetal and neonatal contact with fluoxetine during the critical period of Sertoli cells proliferation influenced the somatic development of animals and induced changes in testicular parameters, such as the weight of the epididymis and seminal gland, volumes of the seminiferous epithelium, the total Leydig cells volume, total length of seminiferous tubules and a trend of reduction in sperm production per testis. Although fluoxetine has interfered with the Leydig cells volumetry, were not observed changes in plasma levels of testosterone and spermatogenesis. Most of the changes were related to the group treated with the highest dosage of the antidepressant, 20 mg/kg, implying that this dosage fluoxetine may actually cause changes in somatic development and reproductive function. / Atualmente, os inibidores da recaptação seletiva da serotonina (ISRS) são os antidepressivos mais freqüentemente prescritos para o tratamento da depressão, sendo o principal efeito colateral em adultos relacionado às disfunções sexuais. Distúrbios depressivos são comuns tanto durante o período pré-natal quanto nos meses iniciais após o nascimento e a fluoxetina é largamente utilizado no tratamento da depressão neste período. Até o presente momento, nenhum estudo mais pormenorizado sobre a intervenção farmacológica do sistema serotoninérgico durante o período crítico do desenvolvimento testicular em ratos neonatos e os seus reflexos no processo espermatogênico em ratos maturos sexualmente foi realizado. Neste trabalho foram realizados 3 experimentos utilizando cloridrato de fluoxetina. No primeiro experimento foi observado o efeito da administração direta da fluoxetina durante o período pós-natal do desenvolvimento testicular de ratos Wistar porém, com avaliação aos 150 dias de idade. Neste trabalho se observou redução o peso testicular bruto e líquido, volume de túbulos e epitélio seminíferos. O diâmetro tubular foi reduzido nos animais tratados com 20mg/Kg o que gerou aumento no comprimento total de túbulos seminíferos neste grupo. Não foram observadas alterações morfométricas na população de células de Sertoli, produção espermática diária e eficiência do processo espermatogênico. No segundo experimento foram estudados os efeitos da transferência de fluoxetina transplacentária e pelo leite materno sobre o desenvolvimento testicular de ratos Wistar pré-buberes. Neste experimento se observou alterações no desenvolvimento ponderal de peso corporal, em parâmetros volumétricos testiculares e comprimento total de túbulos seminíferos em dosagensmais elevadas de fluoxetina. Notou-se tendência de redução da população total de células de Sertoli por testículo e atraso no aparecimento do lume tubular nos animais expostos a maior dose. No terceiro experimento se utilizou o mesmo protocolo do segundo experimento, porém as análises foram realizadas em animais maturos sexualmente. De acordo com os resultados observados o contato fetal e neonatal com fluoxetina, no período crítico de proliferação das células de Sertoli influenciou no desenvolvimento somático dos animais e ocasionou alterações em parâmetros testiculares, tais como o peso de epidídimo e glândula seminal, volumetria do epitélio seminífero, volumetria total das células de Leydig, comprimento total dos túbulos seminíferos e uma tendência de redução na produção espermática por testículo. Ainda que a fluoxetina tenha interferido na volumetria das células de Leydig, não se constatou alteração nos níveis plasmáticos de testosterona e da espermatogênese. A maior parte das alterações está relacionada ao grupo tratado com a maior dosagem do antidepressivo, 20mg/Kg, inferindo que nessa dosagem a fluoxetina pode, de fato, causar alterações no desenvolvimento somático e do aparelho reprodutivo.

Analisou-se por métodos quantitativos e qualitativos o testículo de roedores histricomorfos nas fases, pré-púbere, púbere e adulto da Paca (Cuniculus paca), Cutia (Dasyprocta leporina) e Porquinho-da-índia (Cavia porcellus). Mediante as técnicas de microscopia de luz, microscopia eletrônica de varredura, microscopia eletrônica de transmissão e método estereológico. Verificou-se a influência do Letrozol um inibidor da enzima aromatase nas dosagens de 0,15mg\\kg e 1,0 mg\\kg, sobre a morfologia testicular de pacas macho. Este modelo animal apresenta importância, comercial e científica sendo excelente alternativa para a pesquisa, colaborando com o desenvolvimento de investigações vitais ao homem e aos próprios animais. Os resultados desta investigação demonstraram, que os aspectos qualitativos da morfologia testicular do Porquinho-da-índia, Cutia e de Paca foram semelhante nas fases pré-púbere, púbere e adulta. As avaliações quantitativas do Porquinho-da-índia e Cutia realizados mediante o método estereológico permitiram quantificar parâmetros, sem hipóteses de forma, tamanho, orientação ou distribuição das partículas contadas, demonstrando ser um método imparcial e confiável para ser aplicado em estudos de reprodução. Considerando o estrógeno ser essencial para a função da espermatogênese, o efeito do Letrozol no testículo da paca (Cuniculus paca), sugeriu que a inibição da enzima aromatase mediante a utilização de Letrozol na dosagem de 0,15mg \\kg, sugeriu em um aumento no número das células de Sertoli, refletindo sobre as demais células testiculares, comparando com o testículo basal (controle). O testículo tratado (Letrozol) demonstrou epitélio germinativo íntegro, sendo este dado importante para a reprodução. No animal púbere houve um aumento no número de células de- Sertoli, semelhante ao descrito anteriormente. O epitélio seminífero mostrou com alterações morfológicas, tais como proliferação celular, presença de células germinativas com características apoptóticas, e vacúolos e núcleos em picnose. Estes dados poderão ser úteis para o estudo da Síndrome da Disgenesia testicular / Analysis by quantitative and qualitative methods testicular histricomorfs rodents in phases, pre-pubertal, pubertal and adult paca (Cuniculus paca), agouti (Dasyprocta leporina) and guinea-pig (Cavia porcellus). By means of light microscopy techniques, scanning electron microscopy, transmission electron microscopy, stereological method and the influence of an aromatase inhibitor, the Letrozole in dosages of 0.15 mg\\kg and 1.0 mg\\kg on testicular male morphology paca. This animal model has importance, excellent commercial and scientific alternative to research, contributing to the development of vital research to humans and from animals themselves. The results of this research have shown that the qualitative aspects of testicular morphology guinea-pig, Agouti and paca were similar in pre-pubertal, pubertal and adult stages. Quantitative assessments of the guinea-pig and agouti performed by the stereological method allowed quantify parameters, no change of shape, size, orientation or distribution of particles counted, it is proving to be a partial and reliable method to be applied to reproduction studies. Considering the estrogen is essential for the function of spermatogenesis, the effect of Letrozole in the testis of paca (Cuniculus paca), suggested that inhibition of aromatase enzyme through the use of Letrozole in a dosage of 0.15 mg\\kg suggested in an increase in number of Sertoli cells, reflecting on the other testicular cells, comparing the baseline testis (control). The treaty testis (Letrozole) showed intact germinal epithelium, which is important data for reproduction. In pubertal animals there was an increase in the number of de Sertoli cells, similar to that described above. The seminiferous epithelium showed to morphological changes such as cell proliferation, the presence of germ cells with apoptotic features and vacuoles and nuclei picnosis. These data may be useful for the study of testicular dysgenesis syndrome

published_or_final_version / Biological Sciences / Master / Master of Philosophy

published_or_final_version / Biological Sciences / Doctoral / Doctor of Philosophy