Orientador: Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:18:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vomero_VivianeUrbini_M.pdf: 5561545 bytes, checksum: c1085796d04a6a9ee06c15ca62fe0c17 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital document / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-16Bitstream added on 2014-06-13T21:01:28Z : No. of bitstreams: 1 roque_dd_dr_botfm.pdf: 1702789 bytes, checksum: 439d013606e4a7b1c31a5e09458e60e3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foram estudadas neste trabalho quatro maneiras de regenerar o nervo ciático do rato em gap de 1O milímetros mediante tubulização com v4e'ia n.o.r.m. al e ao avesso, preenchida ou não com o músculo tibial caudal direito:Foram utilizados 70 ratos Wistar, machos, pesando entre 180 a 210 g, divididos em quatro grupos experimentais com 15 animais cada grupo (VASP - veia ao avesso sem preenchimento; VAME - veia ao avesso preenchida com músculo esquelético; VNSP - veia normal sem preenchimento e VNME - veia normal preenchida com músculo esquelético) e um grupo com 10 animais (Sham) usado como controle. A veia jugular externa esquerda foi utilizada como enxerto venoso. No grupo Sham o nervo ciático direito foi exposto sem realizar-se nenhum procedimento sobre o mesmo. Os animais foram sacrificados 12 semanas após a cirurgia. Retirou-se amostras nos locais dos enxertos e nos cotos distais do nervo reparado, destinadas às observações histomorfológicas e morfométricas. Para a análise estatística dos cinco grupos experimentais utilizou-se a análise de variância (ANOV A) com teste F e o método de Scheffé. Observou-se regeneração nervosa em todos os grupos. Os melhores resultados foram obtidos nos grupos VASP, VAME e VNSP. O pior resultado foi com o grupo VNME na maioria dos atributos analisados, tanto no enxerto quanto no coto distal. / The venous tubulization procedure filled with muscle was used to study nerve regeneration of the right sciatic nerve a 10 mm gap using different procedures. Seventy male Wistar rats weighting 180 to 210 g were divided into four experimental groups: inside-out vein graft (lOVG); inside-out vein graft filled with skeletal muscle (lOVGSM); standard vein graft (SVG) and standard vein graft filled with skeletal muscle (SVGSM), with 15 animaIs each. Ten rats were used as sham control. Left external jugular vein were harvested and used to bridge a 10 mm gap. 1n sham group the right sciatic nerve was expose without achieve someone procedure on nerve. AnimaIs were sacrificed 12 weeks after tubulization and fragments obtained from the grafts and distal stumps were histomorphometric analyzed. Statistical analysis (ANOVA, F-test and Scheffe's method) indicated that the best results regarding nerve regeneration were observed in 10VG; 10VGSM and SVG groups. The worst result was obtained with SVGSM.

Orientador: Francisco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AlexandreLeiteRodriguesde_M.pdf: 6072377 bytes, checksum: 2075ac4b8f4bc66fa04494ddc7adc7c0 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Atualmente é consenso que a regeneração do Sistema Nervoso Periférico pode ser determinada pelas propriedades regenerativas intrínsecas dos neurônios e/ou pelas características do microambiente do nervo, após uma lesão (Fawcett, 1992). Recentemente, Lu et aI. (1990,1994), estudando as características regenerativas de várias linhagens isogênicas, observaram que a linhagem C57BL/6J apresenta uma baixa capacidade regenerativa axonal após a lesão de um nervo periférico. Não há, porém, dados conclusivos sobre os motivos intrínsecos que promovem esta resposta. Este estudo teve como objetivo principal, dar subsídeos para um melhor entendimento da baixa capacidade regenerativa axonal apresentada pelos camundongos da linhagem C57BL/6J. Para isso, foram realizados quatro tipos de transplantes de segmentos de nervos pré-degenerados, utililizando-se camundongos isogênicos das linhagens C57BL/6J (C), BALB/cJ (B) e NJ (A), bem como seus descendentes FI advindos do cruzamento CxA e CxB. 1) isotransplantes utilizando os camundongos isogênicos das linhagens C (n=3), B (n=3) e A (n=3); 2) entre doadores da linhagem C (n=6) e receptores FI CxB (n=3) e FI CxA (n=3); 3) entre doadores da linhagem B (n=3) e receptores FI CxB (n=3) e 4) entre doadores da linhagem A (n=6) e receptores FI CxA (n=3). Após anestesia com pentobarbital (50mg/Kg), todos os doadores de cada linhagem (C, n=6; B, n=3; A, n=3) tiveram seu nervo ciático esquerdo transeccionado ao nível do terço médio da coxa, sendo o coto proximal implantado na musculatura adjacente com vistas a evitar-se qualquer processo regenerativo. Duas semanas após a transecção, os doadores foram reoperados, sendo o coto distal dissecado e um segmento de aproximadamente 7mm retirado para o subsequente transplante. Paralelamente, os receptores tiveram seu nervo ciático transeccionado ao nível do terço médio da coxa, sendo implantado em seu coto proximal, com auxílio de um tubo de polietileno (TP) de 3mm de comprimento (d.i.=0,76mm), o enxerto do animal doador. Quatro semanas após o transplante, os animais foram perfundidos transcardiacamente com solução fixadora (Kamovsky, paraformaldeído 2%, Glutaraldeído 1 %) e os nervos regenerados foram dissecados, seguindo a rotina para inclusão em resina (AraIdite). Foram obtidos cortes transversais do nervo presente na região distal do TP sendo contado o número total de axônios mielínicos regenerados (NAM). Cortes transversais ultra-finos da mesma região foram obtidos, sendo quatro campos de cada espécime fotografados ao microscópio eletrônico (X2000). Os negativos foram ampliados (X3), medindo-se então, com auxílio de uma mesa digitalizadora e "software" (SigmaScan Measurement_, o diâmetro dos axônios mielínicos (DA) e a espessura da bainha de mielina (EBM). Os resultados mostraram não haver diferenças significativas entre os parâmetros, nos grupos de isoenxerto: NAM (C=3136:1:287; B=2759:1:170; A=2835:1:239); DA e EBM. Curiosamente, os resultados dos alotransplantes mostraram uma maior resposta regenerativa axonal nos grupos onde os doadores eram C57BL/6J (C para Fi CxB=4658:1:304; C para Fi CxA=3899:1:198), quando comparada àquela apresentada pelo grupo onde os doadores eram B e os receptores FI CxB (2595:1:300) [p<0,05]. Foram porém estatisticamente iguais aos obtidos quando os doadores eram A e os receptores FI CxA (3933:1:565). Por outro lado, os valores da EBM não variaram er1tre os grupos tanto de iso quanto de aloenxertos. Porém, o DA mostrou-se estatisticamente superior nos grupos de aloenxerto onde os doadores eram C57BL/6J. A partir dos resultados obtidos, é possivel sugerir que provavelmente o ambiente extracelular, incluindo as células não neurais, não são os maiores responsáveis pela baixa capacidade regenerativa axonal apresentada pelos animais C57BL/6J. Tal deficiência portanto, pode ser fruto de uma incapacidade dos axônios em regeneração de reconhecerem os estímulos presentes no meio extracelular. Tal incapacidade pode estar relacionada a problemas na síntese e/ou expressão de fatores de alta afinidade para neurotrofinas, tais como trkA para NGF, após uma lesão / Abstract: After a peripheral nerve lesion, the axonal regeneration can be detennined by the intrinsic neuronal properties and by nerve microenvironrnent features (Fawcett, 1992). Recently, the C57BL/6I isogenic mice strain was observed to presenting a subnormal axonal regeneration (Lu et al., 1990; 1994). The aim ofthis study was to investigate the peripheral axonal regeneration in adult male mice (8 to 10 weeks old) using a predegenerated nerve transplantation model. The mice were ITom C57BL/6I (C), BALB/cJ (B) and AlI (A) isogenic strains and ITom FI descendents. FI was obtained by crossing male C57BL/6I with female BALB/cJ (CxB) and AlI (CxA). Only male mice were used as donors and receptors ofthe nerve graft. Four types oftransplants were performed: 1st) isotransplants of C (n=3), B (n=3) and A (N=3) strains; 2nd) between donors of C strain (N=6) and receptors of CxB (n=3) and CxA (n=3); 3rd) between donors of B strain (N=3) and receptors of CxB (n=3) and 4th)between donors of A strain (N=3) and receptors of CxA (n=3). Under deep anesthesia (Pentobarbital, 50 mgIKg, i.p.), alI donors of each strain (C, n=6; B, n=3; A, n=3) had the left sciatic nerve transected at the levei of obturator tendon and the proximal nerve stump was ligated to avoid nerve regeneration. Two weeks after transection, the donor was reoperated and a 7mm-Iength segment of the distal nerve stump was removed for transplantation. At the same time, receptors (FI CxA; FI CxB [allotransplants] and isogenic strains [isotransplants]) had the left sciatic nerve transected at the leveI ofthe obturator tendon. The nerve graft was attached to the receptor nerve proximal stump bya 3mm-Iong polyethylene tube (PT) (i.d.=0.76mm) leaving a lmm gap. Four weeks after transplantation, the animaIs were perfused transcardiacally with Kamovsky's solution (paraformaldehyde 2%, Glutaraldehyde 1%) and the regenerated nerves were embedded in epoxy resin (Araldite). Transverse semi-thin nerve sections were obtained at the distal end of the PT and the total number of regenerated myelinated axons (TMA) was counted. Transverse ultra-thin sections were obtained at the same level. Four fields of each specimen were photographed at the electron microscope (X2000). The negatives were enlarged (X3) and the diameter of myelinated axons (AD) and myelin thickness (M1) were measured on a digitalizing table using SigmaScan Measurement@ software. The results showed no significant differences between the evaluated parameters in the isograft groups: TMA (C=3136:i:287; B=2759:i:170; A=2835:i:239); AD and MT. Interestingly, the FI allograft results showed a higher TMA in the 2nd transplant type (C to FI CxB=4658:i:304; C to FI CxA=3899:i:198) than in 3rd transplant type (B to FI CxB=2595:i:300) [p<0,05], but it was similar to the 4th transplant type (A to FI CxA=3933:i:565). On the other hand, MT was not statistically different between the allograft groups, while AD was higher in the groups in wich C was donor. The main conclusion is that non-neural cells within the nerve of C57BL/6J strain probably are not the limiting factor for the myelinated axon regeneration. Also, these results support the hypothesis that C57BL/6J axons could not recognize in time the extracellular regenerating stimulus. This problem may be caused by a neuronal deficiency in the synthesis' and/or expression of neurotrophin high-affinity receptors, such as trkA for NGF, after injury / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendes_ZarifTorresRehder_M.pdf: 784934 bytes, checksum: dac9ec18f5f84c47d0194a64020fd1d8 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: No presente trabalho estudamos o padrão de distribuição dos receptores de acetilcolina (AChRs) e terminais nervosos em animais C57BL/10, após longo período de regeneração muscular. A degeneração-regeneração muscular foi induzida pelo anestésico local cloridrato de lidocaína no músculo esternomastóideo. Após 90 e 150 dias, os músculos foram retirados e os AChRs e terminais nervosos marcados com rodamina-a-bungarotoxina e anti-neurofilamento, respectivamente e observados através de microscopia de fluorescência confocal. Em todas as junções superficiais da fibra regenerada observada (n=416 junções) os receptores estavam distribuídos em ilhas e a fibra muscular apresentava núcleo central, caracterizando sua regeneração. Os terminais possuíam finas arborizações com dilatações em suas extremidades, situadas no centro das ilhas dos receptores. O padrão de distribuição da acetilcolinesterase foi semelhante ao observado para os AChRs. Nas fibras musculares regeneradas e desnervadas (n=900 junções) os AChRs não estavam distribuídos em ilhas. Esses resultados mostram que os receptores colinérgicos, após longo tempo de regeneração muscular, mantêm o padrão de distribuição em ilhas e o terminal nervoso parece determinar este padrão, provavelmente em consequência de brotamentos intraterminais que ocorrem em presença de regeneração muscular / Abstract: Mdx mice have deficiency of dystrophin and cycles of muscle fiber regeneration. Changes in the distribution of acetylcholine receptors have been reported at the neuromuscular junction of mdx and may be a consequence of muscle fiber regeneration. At the present, we verified whether the distribution of receptors is still altered in long-term regenerated muscle fibers from C57Bl/10 mice. The left sternomastoid muscle of adult mice was injected with 60 µl of lidocaine hydrochloride to induce degeneration-regeneration. Some animals had the STN denervated at the time of lidocaine injection. After 90 and 150 days, receptors were labeled with rhodamine-a-bungarotoxin for confocal observation. For both periods studied, receptors were distributed into clusters. In denervated-regenerated fibers, receptors were distributed as branches, similar to normal denervated muscles. This suggests that nerve-dependent mechanisms are involved in the changes in receptor distribution seen in regenerated muscle fibers, after lidocaine treatment and a similar phenomenon might explain the changes in receptor distribution seen in dystrophic muscle fibers / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Fabio Papes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:41:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_MateusAugustodeAndrade_M.pdf: 6121419 bytes, checksum: a603ea19d560e8cfebddccca9b7d824a (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Em mamíferos, os neurônios sensoriais do Sistema Olfatório (OSNs) se encontram no interior da cavidade nasal, mas estão diretamente expostos ao ambiente externo. Por um lado, tal localização permite a esses neurônios o acesso imediato aos estímulos químicos ambientais, tomando vantagem do fluxo respiratório. Por outro lado, esses neurônios estão constantemente sujeitos a injúrias por agentes nocivos, como toxinas e patógenos, capazes de destruir essas células sensoriais. Sua perda constante, contudo, é contrabalanceada pela geração de novos OSNs durante toda a vida do indivíduo, fato que torna o Sistema Olfatório um dos poucos locais do organismo com neurogênese contínua na idade adulta. A regeneração dos OSNs tem atraído a atenção da comunidade científica tanto pelo seu potencial uso como modelo de estudo do Sistema Nervoso quanto pela sua potencial aplicação para o tratamento de doenças neurodegenerativas. Nesse sentido, muito conhecimento já foi produzido sobre a dinâmica de fatores de transcrição que acompanha a diferenciação dos progenitores neuronais olfatórios em OSNs. Porém, uma grande lacuna no conhecimento diz respeito a outros elementos capazes de coordenar esse processo, como os fatores moduladores da cromatina. Diante desse cenário, escolhemos como objeto de estudo as proteínas do Grupo Polycomb (PcG), que constituem uma maquinaria de controle transcricional relacionada a modificações na organização da cromatina. Neste trabalho, genes PcG selecionados foram caracterizados molecular e funcionalmente no epitélio olfatório principal de camundongos (MOE). Através de ensaios de hibridação in situ, cinco dos seis genes avaliados apresentaram expressão ubíqua por todo o epitélio (Cbx2, Cbx4, Phc2, Ezh1, Bcl6), enquanto um (Ezh2) mostrou-se expresso somente nos estratos basais do MOE. Em ensaios de colocalização, provamos que Ezh2 é expresso exclusivamente nos progenitores olfatórios, onde o processo de diferenciação se inicia, e em parte dos OSNs recém-diferenciados, ainda não funcionais. Esta foi a primeira vez que a expressão de um gene PcG foi analisada detalhadamente no Sistema Olfatório. O interessante perfil de expressão de Ezh2 foi sugestivo de um possível papel funcional relacionado à diferenciação dos progenitores olfatórios. Para investigar essa hipótese, utilizamos como ferramenta experimental a habilidade do MOE em se regenerar após a indução de injúrias específicas. Para isso, o MOE de camundongos foi lesionado quimicamente com o composto diclobenil, que leva à perda abrupta de OSNs, estimulando a proliferação e a diferenciação dos progenitores olfatórios para repovoar as regiões lesionadas. Os animais assim tratados receberam, por via intranasal, o fármaco GSK126, uma molécula inibidora específica da atividade da proteína EZH2. Acompanhando a regeneração subsequente do MOE, observamos que a inibição da atividade de EZH2 levou ao incremento de OSNs no epitélio, favorecendo a sua regeneração. Interessantemente, esse incremento também foi observado em MOEs não lesionados, mostrando que o efeito de GSK126 não é dependente da indução de injúrias prévias. Através dessa investigação molecular e funcional, buscamos contribuir para o melhor entendimento da diferenciação neuronal do MOE, e apontamos as proteína PcG como elementos importantes para esse processo / Abstract: In mammals, the olfactory sensory neurons (OSNs) are located inside the nasal cavity, but they are directly exposed to the external environment. Taking advantage of the respiratory flux, this location favors the access to the chemical stimuli presented by the environment. On the other hand, it leads OSNs to be continually damaged by pathogens and toxic substances carried by the inhaled air. However, the persistence of neuronal progenitors in the olfactory epithelium makes the constant reposition of the OSNs possible. This unique ability of regeneration makes the Olfactory System one of the few sites of neurogenesis throughout the adult life. Olfactory regeneration has attracted the attention scientific community because of its potential as a model of study of the Nervous System and application in the treatment of neurodegenerative diseases. A great amount of knowledge has been accumulated about the transcription factor dynamics that follows the differentiation of neuronal progenitors into OSNs. However, there is a great gap about other elements that could coordinate this process, such as chromatin modulator factors. In this scenario, we decided to study the Polycomb Group (PcG) proteins, a transcription control machinery involved in chromatin structure organization. In the present study, selected PcG genes were molecular and functionally analyzed in the mouse main olfactory epithelium (MOE). Using in situ hybridization assays, we characterized the expression of six PcG genes. Five of them were shown to be expressed throughout the MOE (Cbx2, Cbx4, Phc2, Ezh1, Bcl6), while one (Ezh2) was found only in the basal layers of this epithelium. Using colocalization strategies, we proved that Ezh2 gene is expressed exclusively in the olfactory progenitor cells, where the differentiation process begins, and in part of the newly differentiated OSNs that are still not functional. It was the first time that a PcG gene expression profile was finely analyzed in the Olfactory System. This interesting expression profile presented by Ezh2 suggested a possible involvement with the MOE neuronal progenitor differentiation. For this functional investigation, we used MOE¿s neuronal regeneration after specific injuries as an experimental tool. For this purpose, the MOE was chemically damaged by the compound dichlobenil, which causes a great loss of OSNs, stimulating proliferation and differentiation of neuronal progenitor cells, leading to the repopulation of the damaged tissue. Next, mice received by intranasal route the pharmacological inhibitor GSK126, which blocks EZH2 protein activity. The observation of the MOE regeneration that followed showed us that GSK126 application resulted in an increased number of OSNs, improving MOE regeneration. Interestingly, this increase was also found in intact MOEs, pointing that GSK126¿s effects do not depend on previous olfactory injuries. By this molecular and functional investigation, we aimed at a better understanding of olfactory neuronal differentiation, and we targeted the PcG proteins as relevant elements to this process / Mestrado / Genetica Animal e Evolução / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:08:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Spejo_AlineBarroso_M.pdf: 5889410 bytes, checksum: 655242e3ec4018faf3f968013fd8d36d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estudos recentes mostram resultados promissores no tratamento de lesões ao sistema nervoso (SN) através do implante de células-tronco, atribuindo essa melhora funcional à produção de fatores tróficos pelas células. Neste trabalho, o efeito neuroprotetor e neurorregenerativo de células-tronco mesenquimais (CTM) de ratos Lewis-EGFP foi investigado após o esmagamento das raízes motoras L4, L5 e L6. Cinco ratas fêmeas Lewis foram utilizadas em cada um dos seguintes grupos: G1 - esmagamento de raízes motoras; G2 - esmagamento de raízes motoras e injeção de DMEM (Meio de Eagle modificado pela Dubelco) na interface da substância branca e cinzenta (funículo lateral); G3 - esmagamento de raízes motoras e injeção de CTM (funículo lateral). Após 4 semanas, a sobrevivência neuronal foi estudada por coloração de Nissl, onde se observou, a partir da contagem neuronal, aumento da sobrevivência no grupo tratado com CTM. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para avaliar a expressão de sinaptofisina, sinapsina, VGLUT1 (Transportador vesicular de glutamato-1) e GAD65 (Glutamato descarboxilase 65KDa). A expressão de sinaptofisina e sinapsina na superfície dos motoneurônios lesionados mostrou uma menor redução de inputs em animais tratados com CTM, sugerindo uma possível redução no processo de eliminação sináptica. Para detectar possíveis mudanças no equilíbrio de inputs excitatórios / inibitórios em aposição ao corpo dos neurônios motores, os anticorpos VGLUT1 (marcador de terminais glutamatérgicos) e GAD 65 (marcador de terminais GABAérgicos) foram utilizados. A redução dos terminais glutamatérgicos foi semelhante em todos os grupos. Enquanto a redução de terminais GABAérgicos ocorreu em maior proporção em G1 e G2, em relação ao grupo tratado com CTM. Os dados indicam que CTM podem proteger os neurônios contra a excitotoxicidade, resultando em menor perda de células. Com sobrevida de 12 semanas após a lesão, a regeneração nervosa foi avaliada através da análise morfológica do nervo isquiático (área do nervo, número e morfometria de fibras mielínicas) e da recuperação da função motora (walking track test). O grupo tratado com DMEM apresentou nervo com menor área e menor número de fibras mielínicas do que o tratado com CTM, porém, o grupo tratado com células obteve resultados semelhantes ao grupo que sofreu apenas esmagamento. A morfometria revelou fibras com menor mielinização nos três grupos lesionados, em comparação ao nervo contralateral à lesão, porém, para os lados ipsilaterais não houve diferença entre os tratamentos. A função motora apresentou-se melhor no grupo tratado com CTM, quando comparada com o tratado com DMEM, mas não em relação ao grupo que sofreu apenas esmagamento. O efeito das CTM na função motora foi agudo, mostrando eficiência de 4 a 6 semanas após a lesão. Assim, as CTM mostraram efeito neuroprotetor e contribuíram para a regeneração, porém a forma de administração dessas células, através de injeção diretamente na medula, apesar de resultar num maior número de células enxertadas, contribuindo com a sobrevivência dos neurônios, mostrou-se um problema quando avaliada a regeneração e função motora dos animais, indicando a necessidade de desenvolvimento de outras formas de administração / Abstract: Recent studies have shown promising results in the treatment of nervous system injuries through stem cells implantation, attributing this functional improvement to the production of trophic factors by these cells. In this study, the neuroprotective and neurorregenerative effects of mesenchymal stem cells (MSC) from Lewis-EGFP mice was investigated after crushing the motor roots L4, L5 and L6. Five female rats Lewis were used in each of the following groups: G1 - motor roots crushing; G2 - motor roots crushing and DMEM (Dulbeco's Modified Eagle Medium) injection in the white/gray matter interface; G3 - motor roots crushing and MSC injection in the white/gray matter interface. At 4 weeks after injury, neuronal survival was evaluated by Nissl staining, and revealed, by the neuronal count, increased survival in the group treated with MSC. The technique of immunohistochemistry was used to evaluate the expression of synaptophysin, synapsin, VGLUT1 (Vesicular Glutamate Transporter-1) and GAD65 (Glutamate decarboxylase 65). The expression of synaptophysin and synapsin on the surface of lesioned motoneurons, showed a smaller decrease of inputs in animals treated with MSC, suggesting a possible reduction in synaptic elimination process. To detect possible changes in the balance of excitatory / inhibitory inputs reaching the cell body of the motoneurons, antibodies for VGLUT1 (marker of glutamatergic terminals) and GAD 65 (marker of GABAergic terminals) were used. The reduction of glutamatergic terminals was similar in all groups. While the reduction of GABAergic terminals was in greater extent in G1 and G2 with respect to the group treated with MSC. The data indicate that MSC can protect neurons against excitotoxicity, resulting in decreased cell loss. With survival of 12 weeks after the injury, nerve regeneration was assessed by morphological analysis of the sciatic nerve (nerve size, number and morphology of myelinated fibers) and motor function recovery (walking track test). The group treated with DMEM showed nerve with smaller area and fewer myelinated fibers than treated with MSC, however, the group treated with cells was not better than the group that only suffered crushing. Morphometry revealed fibers with less myelination in the three injured groups, compared to the contralateral side, but there was no difference between treatments. Motor function appeared better in MSC-treated group in comparison to the DMEM-treated, but not in relation to the group which only suffered crushing. The effect of MSC in motor function was acute, demonstrating efficiency between 4 to 6 weeks after injury. Thus, the MSC shown to be neuroprotective and contributed to regeneration, but the form of administration of such cells, by direct injection into spinal cord, has to be improved or substituted by another method / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:05:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benitez_SuzanaUlian_M.pdf: 7544701 bytes, checksum: 2e552c7219f0c635a4b0afecffd3204d (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Lesões nas raízes dorsais da medula espinal são frequentes e muitas vezes decorrentes de acidentes automobilísticos. Devido à possibilidade de geração de dor neuropática, os procedimentos cirúrgicos não priorizam o reparo do componente aferente, sendo reparado apenas o componente motor. Adicionalmente, a perda das informações sensoriais gera parestesia ou anestesia do membro lesado, bem como descoordenação motora. Nesse contexto, novas terapias precisam ser desenvolvidas para o reparo das raízes dorsais. Uma substância capaz de conectar tecidos por adesão e que promova a hemostase e estabilidade do tecido, como o selante de fibrina (SF), pode ser uma alternativa a ser empregada no reparo de raízes lesadas. Além disso, o emprego conjunto do SF com células-tronco mononuclares de medula óssea (CTMMO) pode potencializar uma eventual regeneração tecidual. Assim, o presente estudo avaliou a resposta glial, a reorganização sináptica, a morfologia das fibras sensoriais e a coordenação motora após reparo com SF e terapia celular. Para isso, foram empregados ratos Lewis fêmeas (6-8 semanas), sendo divididos em três grupos: rizotomia (RZ, n=20), rizotomia reparada com SF (RZ+SF; n=22) e rizotomia reparada com SF e CTMMO (RZ+SF+CT; n=20). O tempo de sobrevida pós-cirúrgico foi de até 8 semanas. Para imunoistoquímica, foram utilizados anticorpos anti-VGLUT1 (terminais pré-sinápticos glutamatérgicos), GAD65 (terminais pré-sinápticos gabaérgicos), sinaptofisina (terminais sinápticos), GFAP (astrócitos), Iba1 (microglia) e BDNF (fator neurotrófico). Além disso, foram realizados citoquímica com Sudan black (coloração para lipídeos) e os testes comportamentais von-Frey eletrônico e walking track test (sistema CatWalk). Os resultados demonstraram regeneração das aferências nos grupos RZ+SF e RZ+SF+CT. Porém, apenas no segundo grupo, houve crescimento axonal até lâminas mais profundas da medula espinal, o que resultou em melhor desempenho nos testes comportamentais. Concluímos que o reimplante de raízes sensitivas com SF e CTMMO pode ser uma alternativa terapêutica para o reparo de lesões dorsais na interface do SNC e SNP / Abstract: Dorsal root lesions are common and often occur in automobile accidents. Due to the possibility of generating neuropathic pain, surgical procedures do not prioritize the repair of the afferent component, focusing on the motor output instead. Moreover, the loss of sensory inputs triggers paresthesis or anesthesia of the injured limb, and motor impairments. In this context, new therapies have to be developed for dorsal root repair. A substance that can promote tissue adhesion and stability and tissue haemostasis, such as fibrin sealant (FS), could be an alternative for the repair of damaged roots. Furthermore, the combined use of FS plus bone marrow mononuclear stem cells (BMSC) may enhance tissue regeneration. Thus, the present study evaluated the glial response, synaptic changes, the cytoarchitecture of the sensory fibers and motor coordination with FS with or without cell therapy for root replantation. Female Lewis rats (6-8 weeks old) were divided into three groups: rhizotomy (RZ, n = 20), rhizotomy repaired with FS (RZ+FS, n = 22) and rhizotomy repaired with SF and BMSC (RZ+FS+SC, n = 20). The survival time after surgery was up to 8 weeks. For immunohistochemistry VGLUT 1 (presynaptic glutamatergic terminals), GAD65 (GABAergic presynaptic terminals), synaptophysin (synaptic terminals), GFAP (astrocytes), Iba1 (microglia) and BDNF (neurotrophic factor) antibodies were used. Also, cytochemistry with Sudan black (lipid staining) and the behavioral tests electronic von-Frey and Walking track test (CatWalk system) were carried out. The results showed regeneration of afferent inputs in groups RZ+FS and RZ+FS+SC. However, only in the group with BMSC, the axonal growth was able to reach deeper laminae of the spinal cord, resulting in a better performance in behavioral tests. We conclude that the sensory root replantation with FS and BMSC may be an alternative therapy for the repair of dorsal root injuries in the CNS and PNS interface / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural