Procedimentos endodônticos regenerativos proporcionaram mudanças no tratamento de pacientes com dentes imaturos e periodontite apical possibilitando desenvolvimento radicular completo e menor incidência de fratura dental. Medicações intracanal são utilizadas para a realização da desinfecção; entretanto, o efeito delas sobre às células da papila apical é pouco elucidado. Adicionalmente, pouco se conhece a respeito do efeito destas substâncias sobre células previamente submetidas à condição pró- inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade de medicações intracanal empregadas em procedimentos regenerativos em Endodontia sobre células de papila humana em cultura em condição fisiológica e ativada. Cultura de células foi estabelecida a partir da papila apical removida de um terceiro molar imaturo extraído. As substâncias estudadas foram a pasta tripla antibiótica modificada: ciprofloxacina, metronidazol e cefalosporina (1:1:1); CFC: ciprofloxacina, metronidazol e hidróxido de cálcio (1:1:2) e CFC modificado: ciprofloxacina, metronidazol e hidróxido de cálcio (2:2:1). Parte das células foram estimuladas previamente por ácido lipoteicóico (LTA) de Enterococcus faecalis por 7 dias. Após plaqueamento, células foram expostas a concentrações crescentes das medicações por 1, 3, 5 e 7 dias. Foram avaliados viabilidade celular por meio de brometo de 3-(4,5-dimetiliazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e liberação de óxido nítrico (NO) pelo método de Griess. A análise estatística foi realizada por meio de análise de variância a 1 critério (ANOVA) seguida de pós teste de Tukey, com nível de significância de 5%. O CFC modificado foi a medicação que demonstrou menor efeito citotóxico sobre a viabilidade celular nos tempos experimentais estudados, o CFC promoveu queda da viabilidade celular especialmente após 7 dias de contato. A pasta tripla antibiótica modificada resultou em comprometimento importante da viabilidade podendo ser considerada a mais citotóxica. A ativação celular por LTA resultou em níveis aumentados de atividade mitocondrial para todas as medicações sendo mais evidente nos períodos experimentais mais longos. A ativação celular também contribuiu para níveis maiores de óxido nítrico. Conclui-se que o efeito citotóxico das medicações testadas é dependente de sua concentração, tempo de contato e condição celular, sendo a pasta tripla antibiótica modificada a mais citotóxica em concentrações elevadas podendo implicar clinicamente na diminuição da viabilidade das células da papila apical podendo diminuir o sucesso dos procedimentos regenerativos. / Regenerative Endodontic procedures have provided changes in treatment of patients with immature teeth and apical periodontitis enabling full root development and lower incidence of dental fracture. Intracanal dressings are used for disinfection; however, their effect on apical papilla cells is poorly elucidated. Additionally, the effect of these substances on cells previously subjected to proinflammatory condition is still unknown. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity of intracanal dressings used in Endodontics regenerative procedures on cultured human apical papilla cells at physiologic and activated condition. Cell culture was established from the apical papilla removed from an extracted immature third molar. The substances studied were triple antibiotic modified paste: ciprofloxacin, metronidazole and cephalosporin (1:1:1); CFC: ciprofloxacin, metronidazole and calcium hydroxide (1:1:2) and modified CFC: ciprofloxacin , metronidazole and calcium hydroxide (2:2:1). Part of the cells was stimulated previously with lipotheichoic acid (LTA) of Enterococcus faecalis por 7 days. Once plated, cells were exposed to increasing concentration of the medications for 1, 3, 5 and 7 days. Cell viability was evaluated by means of 3-bromide (4.5-dimetiliazol-2-yl) -2.5-difeniltetraze (MTT) and Nitric Oxide (NO) release was assessed by the Griess method. The statistical analysis was done through analysis of variance with 1 criteria (ANOVA) followed by Tukey test with 5% of significance level. Modified CFC was the medication that demonstrated the less cytotoxic effect on cell viabilityat the experimental periods studied while CFC promoted significant decrease on cell viability specially after 7 days of contact. The modified triple antibiotic paste resulted in important alteration of cell viability being considered the most citotoxic. Cellular activation by LTA resulted in increased levels of mitochondrial activity for all medications being more evident at the longer experimental periods. Cellular activation also contributed to higher levels of nitric oxide release. In conclusion, the cytotoxic effect of the tested medications is dependent on concentration, time of contact and cellular condition, being the triple antibiotic modified paste the most cytotoxic in high concentrations leading clinically in the decreased of the cells viability of the apical papilla, decreasing the success of regenerative procedures.

Com a evolução do Biomateriais houve melhorias nas opções de tratamentos e atualmente são utilizados em substituição de partes do corpo que foram perdidas e promovem a recuperação de funções biológicas. Dentre eles existem as chamadas Biocerâmicas, que incluem alumina, zircônia e derivadas de fosfato de cálcio. A hidroxiapatita possui composição e estrutura minerais semelhantes à fase mineral óssea e apresenta como propriedades a biocompatibilidade, osteocondutividade e bioatividade. O trabalho avaliou a viabilidade celular em cerâmica de hidroxiapatita experimental de origem bovina em comparação com dois tipos de zircônia comerciais e liga de titânio comercialmente puro, para que futuramente possa ser utilizada como material base para implantes dentários. A avaliação in vitro foi realizada por meio de testes nos quais células pré-osteoblásticas cultivadas de linhagem murina MC3T3-E1 foram colocadas em contato indireto e direto com estes materiais. Para viabilidade celular (n=8) foram feitos testes de ensaio MTT e Cristal Violeta em duplicata e após 24, 48 e 72 horas os níveis de absorbâncias foram analisados por meio de espectrofotometria no leitor de Elisa. Para as analises por microscopia eletrônica de varredura (n=6) as células foram plaqueadas diretamente sobre as superfícies dos discos, fixadas em vapor de tetróxido de ósmio 2% após 24 e 48 horas, seguido da metalização após 48 horas da fixação das células para análise em Microscópio Eletrônico de Varredura. Os resultados para viabilidade indireta foram submetidos ao teste paramétrico ANOVA, seguido de teste de Tukey (p<0,05). Tanto no teste de MTT quanto no Cristal Violeta, de acordo com o grupo controle positivo, todos os grupos apresentaram resultados satisfatórios. A cerâmica de hidroxiapatita não apresentou diferença estatística significante, demonstrando não ser um material citotóxico. Pelas imagens geradas no MEV do teste de viabilidade direta, verificou-se que houve adesão e proliferação das células nos dois períodos sobre as superfícies dos materiais. Portanto, pode-se afirmar que a cerâmica de hidroxiapatita apresentou-se como um material biocompatível. / With the evolution biomaterials there were improvements in treatment options, and are currently used in replacement body parts that were lost and promote the recovery of biological functions. Among them are the bioceramic which include alumina, zirconia and calcium phosphate derivative. Hydroxyapatite has mineral composition and structure similar to bone mineral phase and can be used as a biomaterial having biocompatibility, osteoconductivity and bioactivity. The study evaluated the cell viability in experimental hydroxyapatite ceramic bovine compared the two types of commercial zirconia and titanium alloy commercially pure, so that in future it can be used as base material for dental implants. In vitro evaluation was carried by means of tests in which the pre-osteoblastic cells MC3T3-E1 murine lineage cultured were placed in indirect and direct contact with these materials. For cell viability (n=8) were carried MTT assay and Crystal Violet tests in duplicate and after 24, 48 and 72 hours the absorbance levels were analyzed by spectrophotometry Elisa reader. For analysis by Scanning Electron Microscope variable pressure (n = 6) cells were plated directly on the discs surfaces, fixed in osmium tetroxide steam 2% after 24 and 48 hours, followed by metallization after 48 of cells fixation. The results for the cell viability were submitted to parametric test ANOVA, followed by Tukey test (p<0.05). Both in the MTT assay as Crystal Violet all groups exhibited satisfactory results absent cytotoxicity. By means of the SEM images produced, it was found that there was adhesion and proliferation of cells on the materials surfaces in the two periods. Therefore, it can be stated that the hydroxyapatite ceramic was presented as a biocompatible material.

Resumo: O propósito desse trabalho foi avaliar o efeito da osteotomia para implantes sobre a viabilidade celular óssea imediata, comparando a utilização de fresas do sistema convencional com a piezocirurgia em tíbias de coelhos. Foram utilizados 6 coelhos machos, divididos em 2 etapas: (1) Fresas - 5 grupos (G1 a G5) correspondentes às osteotomias 10, 20, 30, 40 e 50 vezes, respectivamente. Cada leito ósseo recebeu a sequência de fresas: lança e helicoidais de 2,0 mm, 2,8 mm, 3,0 mm e 3,15 mm; (2) Piezocirurgia - 5 grupos (P1 a P5) correspondentes às osteotomias 10, 20, 30, 40 e 50 vezes, respectivamente, efetuadas pela sequência de pontas de 2,0 e 3,0 mm, mediante vibração ultrassônica piezoelétrica. As áreas osteotomizadas foram coletadas e processadas laboratorialmente. A análise imunoistoquímica demonstrou equilíbrio das expressões de OPG e RANKL, ou seja, formação e reabsorção óssea, tanto nas osteotomias com fresas, quanto na piezocirurgia, embora mais intensas nesta última. A expressão de OC apresentou-se bastante intensa nos grupos de piezocirurgia, mas com redução da imunomarcação a partir da 30ª osteotomia, enquanto manteve-se constante nos grupos fresados. A CAS3 evidenciou a viabilidade osteoblástica a partir da 20ª osteotomia com piezocirurgia e manteve-se constante até a 50ª. No grupo de fresas, notou-se aumento gradativo da expressão dessa proteína, conforme o aumento do número de osteotomias. De acordo com a metodologia aplicada, foi possível concluir que a piezocirurgia propicia maior viabilidade celular osteoblástica do que o sistema de fresas convencional / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the effect of the osteotomy implant on bone cell viability immediately, comparing the use of conventional drilling system with piezosurgery® in tibiae of rabbits. We used 6 male rabbits were divided into 2 stages: (1) Drilling - 5 groups (G1 to G5) corresponding to the 10 osteotomies, 20, 30, 40 and 50 times respectively. Each received a bone bed following drills: Spear drill and 2.0 mm, 2.8 mm, 3.0 mm and 3.15 mm helicoidal drills, (2) Piezosurgery® - 5 groups (P1 to P5) corresponding to the 10 osteotomies, 20, 30, 40 and 50 times, respectively, analyzed by the sequence of inserts 2 and 3 mm by piezoelectric ultrasonic vibration. The receptor-beds were collected and processed in a laboratory. The immunohistochemical analysis showed balance expressions of OPG and RANKL, ie bone formation and resorption in both the osteotomies with drills and piezosurgery®, although more intense in the latter. The expression of OC had become quite intense in piezosurgery® groups, but with reduced immunostaining from the 30th osteotomy, while remained unchanged in groups drilled. The CAS3 showed the viability of the osteoblast from the 20th osteotomy with piezosurgery® and remained constant until the 50th. In the group of drills noticed a gradual increase in the expression of this protein, as the increase in the number of osteotomies. According to the methodology, it was concluded that the piezosurgery® provides greater osteoblastic cell viability than the system of conventional drilling / Orientador: Roberta Okamoto / Coorientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Idelmo Rangel Garcia Júnior / Banca: Darceny Zanetta Barbosa / Mestre

Procedimentos endodônticos regenerativos proporcionaram mudanças no tratamento de pacientes com dentes imaturos e periodontite apical possibilitando desenvolvimento radicular completo e menor incidência de fratura dental. Medicações intracanal são utilizadas para a realização da desinfecção; entretanto, o efeito delas sobre às células da papila apical é pouco elucidado. Adicionalmente, pouco se conhece a respeito do efeito destas substâncias sobre células previamente submetidas à condição pró- inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade de medicações intracanal empregadas em procedimentos regenerativos em Endodontia sobre células de papila humana em cultura em condição fisiológica e ativada. Cultura de células foi estabelecida a partir da papila apical removida de um terceiro molar imaturo extraído. As substâncias estudadas foram a pasta tripla antibiótica modificada: ciprofloxacina, metronidazol e cefalosporina (1:1:1); CFC: ciprofloxacina, metronidazol e hidróxido de cálcio (1:1:2) e CFC modificado: ciprofloxacina, metronidazol e hidróxido de cálcio (2:2:1). Parte das células foram estimuladas previamente por ácido lipoteicóico (LTA) de Enterococcus faecalis por 7 dias. Após plaqueamento, células foram expostas a concentrações crescentes das medicações por 1, 3, 5 e 7 dias. Foram avaliados viabilidade celular por meio de brometo de 3-(4,5-dimetiliazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e liberação de óxido nítrico (NO) pelo método de Griess. A análise estatística foi realizada por meio de análise de variância a 1 critério (ANOVA) seguida de pós teste de Tukey, com nível de significância de 5%. O CFC modificado foi a medicação que demonstrou menor efeito citotóxico sobre a viabilidade celular nos tempos experimentais estudados, o CFC promoveu queda da viabilidade celular especialmente após 7 dias de contato. A pasta tripla antibiótica modificada resultou em comprometimento importante da viabilidade podendo ser considerada a mais citotóxica. A ativação celular por LTA resultou em níveis aumentados de atividade mitocondrial para todas as medicações sendo mais evidente nos períodos experimentais mais longos. A ativação celular também contribuiu para níveis maiores de óxido nítrico. Conclui-se que o efeito citotóxico das medicações testadas é dependente de sua concentração, tempo de contato e condição celular, sendo a pasta tripla antibiótica modificada a mais citotóxica em concentrações elevadas podendo implicar clinicamente na diminuição da viabilidade das células da papila apical podendo diminuir o sucesso dos procedimentos regenerativos. / Regenerative Endodontic procedures have provided changes in treatment of patients with immature teeth and apical periodontitis enabling full root development and lower incidence of dental fracture. Intracanal dressings are used for disinfection; however, their effect on apical papilla cells is poorly elucidated. Additionally, the effect of these substances on cells previously subjected to proinflammatory condition is still unknown. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity of intracanal dressings used in Endodontics regenerative procedures on cultured human apical papilla cells at physiologic and activated condition. Cell culture was established from the apical papilla removed from an extracted immature third molar. The substances studied were triple antibiotic modified paste: ciprofloxacin, metronidazole and cephalosporin (1:1:1); CFC: ciprofloxacin, metronidazole and calcium hydroxide (1:1:2) and modified CFC: ciprofloxacin , metronidazole and calcium hydroxide (2:2:1). Part of the cells was stimulated previously with lipotheichoic acid (LTA) of Enterococcus faecalis por 7 days. Once plated, cells were exposed to increasing concentration of the medications for 1, 3, 5 and 7 days. Cell viability was evaluated by means of 3-bromide (4.5-dimetiliazol-2-yl) -2.5-difeniltetraze (MTT) and Nitric Oxide (NO) release was assessed by the Griess method. The statistical analysis was done through analysis of variance with 1 criteria (ANOVA) followed by Tukey test with 5% of significance level. Modified CFC was the medication that demonstrated the less cytotoxic effect on cell viabilityat the experimental periods studied while CFC promoted significant decrease on cell viability specially after 7 days of contact. The modified triple antibiotic paste resulted in important alteration of cell viability being considered the most citotoxic. Cellular activation by LTA resulted in increased levels of mitochondrial activity for all medications being more evident at the longer experimental periods. Cellular activation also contributed to higher levels of nitric oxide release. In conclusion, the cytotoxic effect of the tested medications is dependent on concentration, time of contact and cellular condition, being the triple antibiotic modified paste the most cytotoxic in high concentrations leading clinically in the decreased of the cells viability of the apical papilla, decreasing the success of regenerative procedures.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a utilização do ultra-som terapêutico (UST) na viabilidade de retalho cutâneo randômico isquêmico no rato. Métodos: A amostra constituiu-se de 30 ratos da linhagem Wistar-EPM com peso médio de 340,52 g e três meses de idade. O retalho cutâneo randômico foi realizado com dimensões de 10cm x 4cm e uma barreira plástica transparente foi interposta entre o retalho e o leito doador. Nos animais do Grupo Controle, imediatamente após o ato operatório e nos dois dias subseqüentes (POI, PO1 e PO2), o transdutor ultra-sônico foi posicionado e movimentos constantes e circulares foram realizados durante 5 minutos na base do retalho, porém sem qualquer tipo de emissão de energia ultra-sônica. No Grupo UST, imediatamente após a operação e nos dois dias subseqüentes, os animais foram submetidos à aplicação de ultra-som terapêutico pelo método direto, tendo sido o transdutor posicionado na base do retalho, onde foram realizados movimentos constantes e circulares, sendo adotados os seguintes parâmetros: freqüência de 3 MHz, modo de emissão de onda pulsada, regime de pulso de 1/2, freqüência de repetição de pulso de 100 Hz, e intensidade de 0,5 W/cm², durante 5 minutos. Resultados: Nos dois grupos foram calculadas e comparadas, no sétimo dia pós-operatório, as porcentagens de área de necrose dos retalhos (média de 39,95 no Grupo Controle e 28,90* no Grupo UST), sendo G1>G2* (p = 0,039*). Conclusão: O ultra-som terapêutico é eficaz na viabilidade de retalho cutâneo randômico isquêmico no rato. / Objective: This study aims to evaluate the use of therapeutic ultrasound in the viability of random skin flap in the rat. Methods: The sample was made up of 30 Wistar-EPM rats with average weight of 340.52 grs and three months old. The random skin flap was about 10 cm x 4 cm and a plastic barrier was inserted between the flap and the donor site. Immediately after the surgery and throughout the two following days (POI, PO1 and PO2) the ultrasound transducer was applied in the animals of the Control Group with constant and circular moves for 5 minutes, without any kind of ultrasonic energy. The animals in the UST group, immediately after the surgery and throughout the two following days, received ultrasonic energy by the direct method having the transducer in the flap’s base with constant and circular moves at the following parameters: frequency at 3 MHz, pulsed wave mode, pulse regime 1/2, repeated pulse at 100 Hz, and intensity 0,5 W/cm², for 5 minutes. Results: Percentages of necrosed areas were calculated and compared (the average was 39.95 in Control Group and 28.90* in UST Group) G1>G2* (p = 0,039*) on the seventh post-operative day. Conclusion: The therapeutic ultrasound was efficient for the viability of an isquemic random skin flap, in the rat. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-23T19:28:01Z No. of bitstreams: 1 2014-08-doutorado-delio-eulalio-martins-filho.pdf: 3477411 bytes, checksum: 6c3352a2689d802e6fe89d918f39869e (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-23T19:28:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014-08-doutorado-delio-eulalio-martins-filho.pdf: 3477411 bytes, checksum: 6c3352a2689d802e6fe89d918f39869e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014-08-doutorado-delio-eulalio-martins-filho.pdf: 3477411 bytes, checksum: 6c3352a2689d802e6fe89d918f39869e (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O disco intervertebral é avascular e não se sabe se apresenta capacidade de manter células ativas no seu interior ao longo dos anos. A vascularização da placa terminal tem influência direta no aporte de nutrientes para essas células. Objetivo: Analisar a vascularização da placa terminal e sua relação com a densidade de células metabolicamente ativas nos discos intervertebrais lombares de humanos adultos jovens e senis. Métodos: Foram utilizados 28 discos intervertebrais lombares de humanos divididos em dois grupos: Grupo 1 (n=15; menos de 50 anos de idade; ≤ grau 3 de Pfirrmann) e Grupo 2 (n=13; maior ou igual a 80 anos, ≥ grau 4 de Pfirrmann). A vascularização das placas terminais foi analisada utilizando Stereo Microscope Discovery® V.8. A viabilidade celular foi avaliada pelo método de MTT. A densidade celular total foi quantificada por técnica de PicoGreen® utilizando a quantidade de DNA como estimativa do número total de células. Resultados: As células mantiveramse estáveis em percentual de viabilidade celular em relação ao seu número total. A placa terminal inferior apresentou maior quantidade de orifícios (p < 0,05). A maior quantidade de células foi encontrada nas regiões do ânulo fibroso (p < 0,05). Houve correlação positiva (p < 0,05) entre a densidade de células metabolicamente ativas e a quantidade de orifícios vasculares da placa terminal inferior. Conclusão: A placa terminal inferior é a principal região de aporte de vasos sanguíneos para a nutrição do disco intervertebral e tem relação direta no número de células metabolicamente ativas. / Introduction: The intervertebral disc is avascular and remains unknown if it has the capacity to maintain viable cells inside over the years. The vascularization of the endplate has a direct influence on the nutrition to the disc cells. Objective: To analyse the vascularization of the end plate and its relation to the density of viable cells in lumbar intervertebral discs of young and old adult humans. Methods: Twenty-eight lumbar intervertebral discs were used and separated in two groups: Group 1 (n = 15; less than 50- year-old; Pfirrmann ≤ 3) and Group 2 (n = 13; greater or equal to 80-yearold, Pfirrmann ≥ 4). Vascularization of the endplates was analysed using Stereo Microscope Discover® V.8. Cell viability was assessed by MTT method. The cell density was measured by PicoGreen® technique using amount of DNA as an estimate of total cell number. Results: The viable cells remained steady in relation to the total cell density. The inferior endplate presented the biggest number of holes (p < 0.05). The greater number of cells was found in the annulus fibrosus (p < 0.05). There was a positive correlation (p < 0.05) between the density of viable cells and vascular openings in the inferior endplate. Conclusion: The inferior endplate has the main supply of blood vessels to nourish the intervertebral disc and has direct bearing on the number of viable cells.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334684.pdf: 2305342 bytes, checksum: b9cb002883d6321633171912bd0823eb (MD5) Previous issue date: 2015 / O aumento da radiação ultravioleta (UVB) na superfície terrestre é resultado da diminuição do ozônio estratosférico. A energia desta radiação é capaz de causar diferentes respostas nos organismos terrestres e aquáticos. Macrobrachium olfersi é um camarão de água doce que vive e se reproduz em águas claras e rasas, onde a radiação UVB pode penetrar facilmente. As fêmeas de M. olfersi carregam seus ovos até a eclosão em uma câmara incubadora externa, podendo-se supor que os embriões estão expostos às condições semelhantes de radiação UVB do ambiente, durante todos os estágios embrionários. O objetivo deste estudo foi caracterizar os efeitos da radiação UVB sobre a ultraestrutura, viabilidade celular e dinâmica mitocondrial nas células embrionárias de M. olfersi. A irradiância de 310 mW/cm2 que os embriões estão expostos nos ambientes naturais foi simulada em laboratório. Embriões no 6° dia embrionário (E6), que corresponde às fases de morfogênese e organogênese iniciais, foram irradiados com lâmpada UVB 6W, durante 30 minutos. Após 1, 12, 24 e 48 horas de exposição, os embriões foram analisados. Embriões não irradiados foram usados como controle. A análise ultraestrutural mostrou mudanças no núcleo, como a condensação da heterocromatina próxima ao envelope nuclear, bem como mudanças citoplasmáticas, como a diminuição dos ribossomos associados ao retículo endoplasmático rugoso, formação anômala de membranas, perda das cristas mitocondriais. As alterações mitocondriais foram os efeitos da radiação UVB mais evidentes. Então, a expressão das proteínas Mfn-1 e Drp-1, relacionadas à fusão e fissão mitocondrial, respectivamente, foram quantificadas. Nossos resultados mostraram que a radiação UVB induziu aumento significativo de Drp-1 em todos os tempos analisados e também diminuição significativa de Mfn-1, apenas após 24 e 48 horas de exposição à UVB. Estes resultados indicam que a radiação UVB compromete a dinâmica mitocondrial em células de M. olfersi. Analisando as mudanças observadas nas mitocôndrias, o próximo passo foi investigar a viabilidade celular utilizando um teste baseado na integridade mitocondrial. Uma diminuição significativa da viabilidade celular, em todos os tempos analisados após a radiação de UVB, foi verificada. Em resumo, este estudo revelou diferentes efeitos induzidos pela radiação UVB em embriões de M. olfersi, principalmente relacionados com a estrutura e função mitocondrial.<br> / Abstract : Increased ultraviolet B (UVB) in the Earth's surface is a result of the depletion of stratospheric ozone. The energy of this radiation is able to cause different responses in terrestrial and aquatic organisms. Macrobrachium olfersi is a freshwater prawn that lives and reproduces in clear shallow waters, where UVB radiation can easily penetrate. The females of M. olfersi carry eggs until hatching in external brood pouch, thus is reasonable to assume that the embryos are exposed to similar conditions of environmental UVB radiation during all embryonic stages. The aim of this study was to characterize the effects of UVB radiation on the ultrastructure, cell viability and mitochondrial dynamic in embryonic cells of M. olfersi. Then, the irradiance of UVB (310 mW/cm2) that embryos received in natural environment was simulated in laboratory. Embryos at 6th embryonic day (E6), which corresponds to the early morphogenesis and organogenesis stages, were irradiated with UVB 6W lamp for 30 minutes. After 1, 12, 24 and 48 hours of exposure to UVB radiation, the embryos were examined. Non-irradiated embryos were used as controls. The ultrastructural analysis showed changes in nucleus, as heterochromatin condensation near to the nuclear envelope, as well as, changes in the cytoplasm, as decrease of ribosomes associated to rough endoplasmic reticulum, formation of anomalous membrane, loss of mitochondrial crests, and disruption of mitochondrial membranes. Mitochondrial alterations were the most evident effect of UVB. Thus, the expression of Mfn-1and Drp-1 proteins, related to mitochondrial fusion and fission, respectively, was quantified. Our results showed that UVB radiation induced a significant increase in Drp-1 in all times analyzed and also a significant decrease in Mfn-1, only after 24 and 48 hours of UVB exposure. These results indicate that UVB radiation compromise the mitochondrial dynamic on embryonic cells of M. olfersi. Regarding the changes observed in the mitochondria, the next step was to investigate the cell viability using an assay based on mitochondrial integrity. A significant decrease in viability of cells, in all times analyzed after UVB irradiation, was verified. In summary, this study revealed different effects induced by UVB radiation in embryos of M. olfersi, mainly related to the mitochondrial structure and function.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aquicultura / Made available in DSpace on 2013-06-25T23:07:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 307891.pdf: 810210 bytes, checksum: fe22c3b977f1cee2ee5c08a6a878c118 (MD5) / A fim de avaliar o potencial de criopreservação para células espermáticas de Litopenaeus vannamei, 74 espermatóforos foram extraídos manualmente de indivíduos sexualmente maduros. Após teste de toxicidade para definir concentração dos crioprotetores, suspensões de células espermáticas foram criopreservadas em grupos com solução de congelamento contendo crioprotetores distintos: dimetilsfulfóxido (DMSO) e etilenoglicol (EG) ambos à concentração de 10%. Cada tratamento foi dividido em subgrupos para estocagem em nitrogênio líquido por diferentes períodos de tempo: 0, 30, 60 e 90 dias, em triplicata. Após o descongelamento em banho Maria a 25ºC por cerca de 40 segundos, a integridade celular das suspensões foi analisada sob microscopia com coloração por eosina-nigrosina, e por citometria de fluxo. Não observou-se diferença significativa entre os crioprotetores utilizados. Para todos os tratamentos, as menores e as maiores mortalidades ocorreram em 0 e 90 dias, respectivamente. Através da técnica de coloração, a menor e a menor e maior mortalidade foram, 23,17% e 82,11% com DMSO e 29,94% e 83,72% com EG. Com citometria de fluxo as mortalidades foram 2,42% e 55,13% com DMSO; e 0,90% e 55,56 % com EG. O coeficiente de correlação de Spearman indicou correlação positiva (R=0,91) entre as duas técnicas utilizadas. Concluiu-se que houve queda considerável da integridade celular com o aumento do tempo de criopreservação.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2013-07-16T04:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305252.pdf: 1400650 bytes, checksum: 83e4a007927147a9402a26f64b85b606 (MD5) / A utilização de materiais hidrogéis poliméricos visando ancorar células e promover a regeneração neuronal é uma abordagem atual e promissora. Neste sentido, o estudo da viabilidade e interação de células neuronais nesses biomateriais é de grande importância para engenharia de tecido neuronal. A interação das células com o material arcabouço pode definir o sucesso da formação do novo tecido. Neste trabalho foram avaliadas a viabilidade e a interação de células de gânglios da raiz dorsal de ratos Wistar em arcabouço hidrogel baseado em celulose bacteriana. Utilizou-se hidrogel de celulose bacteriana modificado com fibronectina e poli-L-lisina/laminina como arcabouço para o cultivo celular com o objetivo de avaliar a viabilidade e interação celular in vitro. Os resultados evidenciaram que houve interação entre as células e o arcabouço e que as mesmas se mantiveram viáveis e não apresentaram citotoxicidade para células neuronais, sendo que o hidrogel de superfície modificada composto de CB e poli-L-lisina/laminina manteve o maior número de células viáveis. Também, a adsorção de fibronectina e poli-L-lisina/lamina aumentou a adesão e a interação celular ao biomaterial e o tratamento enzimático hidrogel composto de CB-PL (CB-PL injetável) não apresentou citotoxicidade. No entanto ocorreu uma diminuição na viabilidade celular quando comparado ao biomaterial CB-PL sem tratamento enzimático. Portanto, o hidrogel de celulose bacteriana modificada com poli-L-lisina/laminina se apresenta como um biomaterial promissor para promover a regeneração de tecidos neurais uma vez que os mesmos potencializam a adesão celular e aumentam a sobrevida neuronal. / The use of polymeric hydrogel materials to anchor cells and to promote the neuronal regeneration is a promising current approach. In this way, the study of viability and interaction neuronal cells in these biomaterials is of great importance for neuronal tissue engineering. The cell interactions with the material scaffold can define the success of the new tissue formation. In this work was assessed the viability and interaction of ganglion cells of Wistar rat dorsal roots, hydrogel scaffold based in bacterial cellulose. It was used modified bacterial cellulose with fibronectin and poli-L-lisina/lamina as scaffold for cell culture, aiming to assess the cellular viability and interaction in vitro. The results showed that there was interaction between cells and scaffold and that ones were viable and did not present cytotoxity for neuronal cells, being that the modified surface hydrogel composed of CB and poli-L-lisina/lamina kept the highest number of viable cells. The absorption of fibronectin and poli-L-lisina/lamina also increased the cell adhesion and interaction to the biomaterial and the hydrogel enzymatic treatment compound of CD-PL (injected CB-PL) did not present cytotoxicity, however, occurred a decrease in the cell viability when compared to CB-PL biomaterial without enzymatic treatment. Therefore, the hydrogel of modified bacterial cellulose with poli-lisina/lamina present as a prosperous biomaterial to promote neuronal tissue regeneration, since they potentiate cell adhesion and increase the neuronal survival.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-07-16T21:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-24T20:24:10Z : No. of bitstreams: 1 317482.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Nossos resultados demonstraram que a exposição aguda ao glifosato-Roundup induz estresse oxidativo e ativa múltiplas vias de resposta ao estresse culminando com a morte de células testiculares em ratos pré-púberes. O pesticida aumenta a concentração de Ca2+ intracelular através da abertura dos canais de Ca2+ dependente de voltagem tipo-L (CCDV-L) e da liberação de Ca2+ do retículo endoplasmático, levando a uma sobrecarga de Ca2+ intracelular, e morte celular. Estes eventos foram prevenidos pelos antioxidantes Trolox® e ácido ascórbico. A ativação das vias de sinalização da proteína cinase C (PKC), fosfatidilinositol-3-cinase (PI3K), proteínas cinases ativadas por mitógeno (MAPKs), tais como a ERK 1/2 e p38 MAPK, e fosfolipase C (PLC) estão envolvidas na indução do influxo de Ca2+, no aumento da atividade da gama-glutamiltransferase (GGT) e na morte celular. A indução de estresse oxidativo por glifosato-Roundup foi confirmada através da redução nos níveis de glutationa reduzida (GSH) e do aumento nos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e de carbonilação de proteínas. Além disso, a exposição ao pesticida afetou os sistemas de defesa antioxidante enzimáticos, acarretando em aumento na atividade das enzimas glutationa peroxidase, glutationa-redutase, glutationa-S-transferase, GGT, catalase, superóxido dismutase e glicose-6-fosfato-desidrogenase. A exposição aguda ao glifosato-Roundup também induziu ao aumento da atividade das aminotransferases AST e ALT. O aumento da atividade da GGT poderia levar a um aumento no "turnover" de GSH; no entanto, a diminuição na captação dependente de Na+ do aminoácido modelo 14C-?-methyl-amino-isobutyric acid (14C-MeAIB) em células testiculares pode estar relacionada a menor disponibilidade de aminoácidos para a síntese de novo de glutationa. O conjunto dos resultados demonstra que o herbicida glifosato-Roundup induz estresse oxidativo, aumenta a concentração de Ca2+ intracelular, ativa vias de transdução de sinais, e pode levar a morte de células testiculares. Apesar da dificuldade de extrapolação dos resultados obtidos em modelos animais para a condição humana, é possível que mecanismos semelhantes possam estar envolvidos na diminuição da capacidade reprodutiva em adultos jovens expostos ao glifosato-Roundup durante a infância e puberdade.<br> / Abstract : Our results show that acute glyphosate-Roundup exposure induces oxidative stress and activates multiple stress-response pathways leading to testicular cell death in prepubertal rat testis. The pesticide increased intracellular Ca2+ concentration by opening L-voltage-dependent Ca2+ channels (L-VDCC) and endoplasmic reticulum IP3 and ryanodine receptors, leading to an overload of Ca2 + within the cells, which set off oxidative stress and cell death. These events have been prevented by the antioxidants Trolox® and ascorbic acid. Activated protein kinase C (PKC), phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) and the mitogen-activated protein kinases (MAPKs), such as ERK1/2 and p38MAPK have played a role in eliciting Ca2+ influx, gamma-glutamyl transferase (GGT) activation and cell death. Roundup® reduced the levels of reduced glutathione (GSH) and increased the amounts of thiobarbituric reactive species (TBARS) and protein carbonyl, characterizing oxidative damage. Also, exposure to the pesticide has stimulated the activity of glutathione peroxidase, glutathione reductase, glutathione-S-transferase, gamma-glutamyl transferase (GGT), catalase, superoxide dismutase and glucose-6-phosphate dehydrogenase, supporting downregulated GSH levels. The glyphosate-Roundup acute exposition also leads to the induction of the transaminase AST e ALT. The GGT activity could lead to increased glutathione turnover; however, downregulation of the Na+-coupled 14C-á-methyl-amino-isobutyric acid (14C-MeAIB) accumulation in testicular cells has decreased the amino acid availability to GSH de novo synthesis. Overall, Roundup® toxicity was implicated in Ca2+ overload, cell signaling misregulation, stress response of the endoplasmic reticulum and/or depleted antioxidant defenses. Although extrapolation from animal models to the human condition should be taken with caution, it is feasible that similar mechanisms could underlie impaired reproduction capability in young male people associated with glyphosate-Roundup exposure during childhood and puberty.