Dissertation (Ph.D.)--University of South Florida, 2006. / Title from PDF of title page. Document formatted into pages; contains 90 pages. Includes vita. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-15Bitstream added on 2014-06-13T19:58:17Z : No. of bitstreams: 1 pinto_gcs_me_arafo.pdf: 899028 bytes, checksum: 57f6b9a787b99be24637541e57cbfc9c (MD5) / A necessidade de superar o desafio criado pelos biofilmes resistentes aos tratamentos antimicrobianos convencionais tem levado à busca por tratamentos alternativos, como terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). Este estudo avaliou in vitro a eficácia da aPDT na inativação de biofilmes de Staphylococcus aureus suscetíveis e resistentes à meticilina (MRSA e MSSA), mediado pelos fotossensibilizadores (PSs) Curcumina (Cur) e Photodithazine® (PDZ). Biofilmes foram formados e tratados com diferentes concentrações de Cur (0, 20, 40 e 80 μM) e PDZ (0, 50 e 75 mg/L), e iluminados ou não por fonte de luz LED (Cur 455 ± 3 nm/ 5,28 J/cm2; PDZ 660 ± 3 nm/ 5,28 J/cm2 ou 50 J/cm²). Os grupos Controle Positivo (CP) não receberam nenhum PS e também não foram iluminados. A viabilidade dos micro-organismos após a aPDT foi avaliado pelo número de colônias viáveis, pelo ensaio de XTT e pela utilização do kit LIVE/DEAD® na Microscopia Confocal de Varredura à Laser (MCVL). Os resultados foram avaliados por análises de variância de dois fatores de efeitos fixos (ANOVA) e complementados por comparações múltiplas de médias pelo teste de Tukey. Para ambas as cepas, todas as concentrações de Cur e PDZ testadas reduziram significativamente a atividade metabólica e o UFC/mL para ambos micro-organismos quando comparado com os grupos CN (p0,05). Os resultados foram otimizados para a Cur quando utilizou-se a maior concentração (80 μM), para a PDZ, a maior redução nos micro-organismos foi observada quando associou-se a maior concentração de PDZ (75 mg/L) com a maior dose de luz (50 J/cm²). Os biofilmes submetidos a aPDT demostraram pela MCVL um maior número de células coradas em vermelho, indicando que a aPDT foi eficaz para promover danos ou morte às células bacterianas. Assim, a aPDT pode ser considerada promissora para atuar de forma sinérgica no tratamento de infecções bacterianas / The need to overcome the challenge created by biofilms regarding conventional antimicrobial approaches has lead to search of alternative treatments such as Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). This in vitro study evaluated the efficacy of aPDT using the photosensitizer (PS) Curcumin (Cur) and Photodithazine® (PDZ) in the inactivation of biofilms of methicillin susceptible and resistant S. aureus (MSSA and MRSA). Biofilms were treated with different Cur (0, 20, 40 or 80 μM of Cur) and PDZ concentrations (0, 50 or 75 mg/L) and illuminated or not with LED source (Cur 455 ± 3 nm/ 5.28 J/cm2; PDZ 660 ± 3 nm/ 5.28 J/cm2 or 50 J/cm²). Positive control samples were not exposed to PS or light. The microorganisms viability after aPDT were evaluated by counting the number of colonies, the XTT assay and LIVE/DEAD® staining using confocal laser scanning microscopy (CLSM). The results were evaluated by analysis of variance, two-factor fixed effects (ANOVA) and complemented by multiple comparisons by Tukey test. For both strains, all the tested Cur and PDZ concentrations reduced significantly both biofilm metabolic activity and CFU/mL compared to the negative control (p0.05). Moreover, the results were optimized for Cur when the higher concentration was used (80 μM); For PDZ, the best results were obtained when it was associated a higher concentration of PDZ (75 mg/L) with the higher dose of light (50 J/cm²). Biofilms submitted to aPDT showed a large number of red-stained colonies, indicating that this therapy was efficient in disrupting the bacterial membrane. It can be concluded that PS was efficient in reducing viable colonies of both S. aureus strains by damaging cell membrane and causing cell death. Thus, the aPDT is can be considered promising to act synergistically in the treatment of bacterial infections

Neonatal sickness and death is increasingly becoming a public health problem worldwide. The colonization of Group B Streptococcus and Staphylococcus in the rectovaginal area is among the sources of infections in neonates which can result in illness and mortality. The over exposure of humans to antibiotics is the possible cause of resistance in bacteria. These resistant strains can be passed onto offspring, leading to resistant infections and increasing the morbidity of neonates because of treatment failures. Many people, including healthcare personnel are not aware of the effect of these bacteria, and informing clinics and hospitals can help create awareness and monitoring the levels of resistance among bacteria can assist in preventing the transference of the bacteria. In this study we investigated the prevalence of group B Streptococcus (GBS) and Staphylococcus aureus in the anogenital tract of pregnant women in the Eastern Cape Province, South Africa. A total of 49 isolates from 25 (30.5 percent) pregnant women colonized with GBS were isolated from vaginal and rectal swabs of 82 pregnant women at 25-37 gestation who participated in this study. These isolates were obtained using standard microbiological methods and confirmed by polymerase chain reaction (PCR) technique aimed at the ScpB gene. The isolates were further screened for the presence of 9 serogroups (Ia, Ib, II, III, IV, V, VI, VII, VII) and serogroups Ib 2 (4.8 percent), II 20 (40.8 percent) and IV 5 (10.2 percent) and 22 non-typable (44.9 percent) were identified. Susceptibility profiling of the isolates to 12 antibiotics (tetracycline, clindamycin, erythromycin, gentamycin, naladixic acid, norfloxacin, chloramphenicol, cefuroxime, cefotaxime, imipenem, penicillin and vancomycin) was tested in vitro by the standardized disc diffusion method. All the confirmed GBS isolates (49) were resistant to erythromycin, tetracycline and clindamycin. A higher percentage of the isolates were resistant to gentamycin 44 (90 percent), nalidixic acid 41 (84 percent), penicillin 41 (84 percent), chloramphenicol 38 (78 percent), cefuroxime 36 (74 percent), imipenem 36 (74 percent), cefotaxime 35 (71 percent), norfloxacin 32 (65 percent) and vancomycin 31 (78 percent). Multiple antimicrobial resistance patterns ranged from 9‒11 and indices ranged from 0.7‒0.9, respectively. Among the antimicrobial resistance determinants examined, genes encoding for resistance to erythromycin ermB 25 (51 percent), tetracycline tetM 32 (65 percent) and penicillin bla-Z 4 (8 percent) only were identified. On the other hand, screening for S. aureus yielded a total of 7 isolates from 4 study participants as confirmed by PCR based on staphylococcal, nuc gene. The isolates were further screened for the presence of six virulence genes (Hla, Hlb, LUKM, LUKED, PVL, Eta and Etb) and antibiotic susceptibility pattern by the disc diffusion method using 12 (penicillin, vancomycin, tetracycline, rifampicin, imipenem, gentamycin, chloramphenicol, norfloxacin, oxacillin, erythromycin and sulfamethoxazole-trimethoprim) antibiotics that are adopted in the treatment of infections caused by the organism. PVL 6 (85.7 percent) and eta 1 (14.3 percent) were the two virulence genes detected. The following percentages of antibiotics resistance among the isolates were observed; penicillin G 7 (100 percent), clindamycin 7 (100 percent), vancomycin 5 (100 percent), rifampicin 5 (71 percent), oxacillin 5 (71 percent), erythromycin 5 (71 percent) gentamycin 3 (43 percent), norfloxacin 3 (43 percent), sulfamethoxazole-trimethoprim 3 (43 percent), chloramphenicol 2 (29 percent), imipenem 1 (14 percent). Multiple antimicrobial resistance patterns ranged from 7‒8 and indices ranged from 0.6‒0.7, respectively. Genetic profiling of the resistance genes identified erythromycin ermB 5(71.4 percent), tetracycline tetM 5(71.4 percent) and penicillin bla-Z 1(14.3 percent) only. The findings from the study have revealed GBS and S. aureus colonization of pregnant women in the Eastern Cape Province, and these have great public health implications especially for the neonates who are mostly likely to be infected during birth. The unidentifiable multidrug resistant serogroups of GBS as well as resistant S. aureus limit the choice of drugs in the management of infections caused by these pathogens more so if transmitted to infants. Therefore asymptomatic pregnant women needed to be properly educated about the bacteria as well as the precautions that need to be taken.

Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-07-04T17:31:23Z No. of bitstreams: 1 cp076419.pdf: 1045738 bytes, checksum: 5237df70e47139e5fc38d68eed3c013a (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-07-04T17:31:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp076419.pdf: 1045738 bytes, checksum: 5237df70e47139e5fc38d68eed3c013a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-04T17:31:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp076419.pdf: 1045738 bytes, checksum: 5237df70e47139e5fc38d68eed3c013a (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivos: (i) avaliar a distribuição dos tipos de SCCmec e freqüência da leucocidina de Panton-Valentine (PVL) em Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA), coletados como parte de um programa de vigilância em sete centros médicos na Argentina, Brasil e Chile; (ii) avaliar a relação entre os tipos de SCCmec e perfis de sensibilidade a antimicrobianos; (iii) caracterizar os clones de MRSA predominantes nestes centros médicos, utilizando a técnica de eletroforese em campo pulsado (PFGE). Material e Métodos: Foram incluídos todos os isolados MRSA dos sete centros médicos, coletados como parte do Programa SENTRY na América Latina no período 1997-2006. As amostras foram estratificadas em dois subgrupos, de acordo com a sensibilidade in vitro a agentes não β-lactâmicos: multissensível (MS-MRSA) e multirresistente (MR-MRSA). Amostras representativas de cada subgrupo, selecionadas de acordo com o ano e país de isolamento, foram submetidas a testes fenotípicos e genotípicos adicionais. Os tipos de SCCmec foram caracterizados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex, seguidos da pesquisa do complexo ccr e PVL, caso pertinente. Os tipos clonais foram investigados por PFGE. As características demográficas dos pacientes infectados foram analisadas de acordo com cada subgrupo de SCCmec. Resultados: Foram avaliados 56 isolados de MS-MRSA e 141 de MR-MRSA. A maioria de amostras MS-MRSA carreavam SCCmec I (35,7%) ou IV (46,4%); por outro lado, o tipo III predominou no subgrupo MR-MRSA. A maioria de SCCmec I foi detectado na Argentina (n=5) e Chile (n=14). A maioria das 26 amostras tipo IV foram identificadas no Brasil (n=20), apenas cinco foram positivas para PVL, e a média da concentração inibitória mínima (CIM) para oxacilina foi de 45,1 µg/ml. O dendograma obtido pelo perfil de bandas de PFGE classificou as amostras em três grupos distintos: clone brasileiro epidêmico (SCCmec III), clone pediátrico (SCCmec IV), e uma linhagem possivelmente relacionada ao clone Chile/Córdoba (SCCmec I). Conclusões: A coleção de MRSA avaliada continha uma grande diversidade de tipos de SCCmec e linhagens clonais. Os perfis de sensibilidade (MS-MRSA e MR-MRSA) correlacionaram-se bem aos tipos de SCCmec nas diferentes regiões geográficas avaliadas. / Objectives: (i) to evaluate the SCCmec type distribution and the frequency of PantonValentine leukocidin (PVL) gene among methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) collected as part of a surveillance program from seven medical centers in Argentina, Brazil and Chile; (ii) to evaluate the relationship between SCCmec types and antimicrobial susceptibility profiles; (iii) to characterize the predominant MRSA clones in these medical centers, employing the pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) technique. Material and Methods: All MRSA isolates from the seven participant centers, collected as part of the SENTRY Latin American Program during 1997-2006 were included. MRSA were stratified into two subgroups: multi-susceptible (MS-MRSA) and multi-resistant (MR-MRSA), according to in vitro susceptibility to selected non-β- lactam agents. Representative isolates of each subgroup, selected by year and country of isolation, were submitted to additional phenotypic and genotypic testing. SCCmec types were characterized by multiplex polymerase chain reaction, followed by ccr complex and PVL assessment if applicable. Clonal types were determined by PFGE. Demographic characteristics of infected patients were analyzed according to each SCCmec subgroup. Results: Overall, a total of 56 MS-MRSA and 141 MR-MRSA were evaluated. Most MS-MRSA harbored either SCCmec I (35,7%) or IV (46,4%); in contrast, SCCmec III prevailed among MR-MRSA. The majority of SCCmec I was detected in Argentina (n=5) and Chile (n=14). Among the 26 type IV isolates, most were identified in Brazil (n=20), only five carried the PVL gene and their mean oxacillin minimal inhibitory concentration (MIC) value was 45,1 µg/ml. The band-based dendogram clustered the Latin American MRSA strains into three distinct PFGE groups: the Brazilian epidemic clone (SCCmec III), the pediatric clone (SCCmec IV), and a lineage possibly related to the Chile/Cordoba clone (SCCmec I). Conclusions: Genetic and geographic diversity of SCCmec and clonal types were identified in the MRSA collection evaluated. Phenotypic susceptibility patterns (MS-MRSA and MR-MRSA) correlated well to specific SCCmec types in the geographic regions evaluated.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-31 / Objetivo geral: Caracterizacao fenotipica e genotipica de S. aureus resistentes a oxacilina (MRSA), coletados de hemoculturas provenientes de diversos centros participantes do projeto SCOPE - Brasil, no periodo de Junho de 2007 a Julho de 2009. Objetivos especificos: (i) avaliar a distribuicao dos tipos de SCCmec atraves das tecnicas de PCR convencional e PCR multiplex das diferentes instituicoes participantes; (ii) detectar a possivel presenca do gene lukF codificador da toxina PVL (Panton Valentine Leukocidin); (iii) avaliar a similaridade genetica das amostras utilizando as tecnicas de PFGE e MLST e (iv) determinar as concentracoes inibitorias minimas a oxacilina e vancomicina. Material e Metodos: Foram avaliados 62 isolados de MRSA provenientes do primeiro episodio de infeccao de corrente sanguinea (ICS) de pacientes hospitalizados em 11 centros medicos de diferentes regioes do pais. Os isolados resistentes a oxacilina foram submetidos a PCR convencional para a deteccao do gene nuc e lukF e PCR multiplex para identificar os tipos de SCCmec. Foi feito diluicao em agar e EtestR para vancomicina, PFGE e MLST. Resultados: Do total de 62 amostras, 29 amplificaram para o SCCmec tipo III, 16 amplificaram para o SCCmec tipo II, 9 amostras amplificaram para o SCCmec tipo IV, 6 amplificaram para SCCmec tipo I e 2 amostras nao foram identificadas pelas metodologias de PCR multuplex utilizadas. A amostra com SCCmec subtipo IVc apresentou o gene que codifica PVL. As amostras com SCCmec tipo I, II e III apresentaram CIM >256 ƒÊg/ml para oxacilina por EtestR com excecao de uma delas com SCCmec tipo II com CIM igual a 128 ƒÊg/ml. Seis amostras do total de nove com SCCmec tipo IV apresentaram CIM.48 ƒÊg/ml. Observamos CIMs de 1,0, 1,5 e 2,0 ƒÊg/m para vancomicina por EtestR. Quando feito a diluicao em agar, duas amostras tiveram CIM igual a 2,0 ƒÊg/ml, todas as outras apresentaram valores entre 0,5 e 1,0 ƒÊg/ml. Dentre as 8 amostras de MRSA que foram submetidas a tecnica de MLST, verificou-se ST105 em amostras com SCCmec tipo I; ST5 e ST105 para amostras com SCCmec tipo II; ST239 para amostras carreando SCCmec tipo III e ST5 e ST1176 relacionados a amostras apresentando SCCmec tipo IV. Conclusoes: Houve predominio de amostras de MRSA carreadoras de SCCmec tipo III e relacionadas geneticamente ao clone CEB. Foram detectadas amostras portando SCCmec tipo II e IV relacionados aos clones Nova Iorque/Japao e Pediatrico em diferentes hospitais e regioes do pais e ausencia do clone Chile/Cordoba. Apenas uma amostra com SCCmec tipo IV (subtipo IVc) nao relacionada a nenhum clone foi produtora de PVL. Apenas dois ancestrais geneticos comuns (CC5 e CC8) nas amostras estudadas foram observados pela tecnica de MLST, sendo caracterizado um novo ST1176. Nao foram detectadas amostras resistentes a vancomicina. / General objective: Phenotypic and genotypic characterization of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) collected from bloodcultures from several centers participants of Brazilian SCOPE Project, from June 2007 to July 2009. Specific Objectives: (i) to assess the different types of SCCmec distribution through conventional and multiplex PCR for the different participant institutions; (ii) to detect the possible presence of lukF gene, which codes for PVL toxin (Panton Valentine Leukocidin); (iii) to assess the genetic similarity of these samples through PFGE and MLST and (iv) to determine the oxacillin and vancomycin minimal inhibitory concentration (MIC). Material and Methods: Sixty two MRSA isolated from the first episode of bloodstream infection (BSI) were evaluated. These samples came from patients hospitalized at the 11 medical centers from different regions of the country. The oxacillin-resistant isolated were submitted to conventional PCR to detect nuc and lukF genes and to multiplex PCR to identify SCCmec types. Agar dilution and E-test for vancomycin were performed. The strains were molecular typed by PFGE and MLST. Results: From the total of 62 samples, 29 amplified SCCmec type III, 16 SCCmec type II, 9 SCCmec type IV, 6 SCCmec type I and 2 could not be identified. A sample with SCCmec subtype IVc carried the gene which codifies for PVL. Samples with SCCmec types I, II and III showed MIC > 256 ƒÊg/ml for oxalicin by EtestR. Just one of them, with SCCmec type II, presented MIC = 128 ƒÊg/ml. From the nine samples with SCCmec type IV, six presented MIC . 48 ƒÊg/ml. MICs of 1.0, 1.5 e 2.0 ƒÊg/ml were also observed for vancomycin by EtestR. Regarding the agar dilution, two samples presented MICs of 2.0 ƒÊg/ml and all the others showed values between 0.5 e 1.0 ƒÊg/ml. From the 8 MRSA samples typed by MLST, it was observed ST105 in a sample with SCCmec type I; ST5 and ST105 in samples with SCCmec type II, ST239 with SCCmec type III and ST5 and ST1176 with SCCmec type IV. Conclusion: The majority of samples were MRSA carrying SCCmec type III and genetically related to CEB clone. Also were detected samples SCCmec type II and IV, related to New York/Japan and Pediatric clones in different hospitals at different regions of the country. Only one sample SCCmec type IV (subtype IVc) not related to any clone was positive for PVL. Only two common genetic ancestral (CC5 and CC8) were observed through MLST and a new ST1176 was characterized. No vancomycin-resistant isolate was detected. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus is a leading cause of hospital infections world-wide. Consecutive S. aureus wound isolates (n=561) were collected from PHW Microbiology ABM Laboratory, Swansea (PHW-ABM); 137 (24.4%) were mecA-positive; 424 (75.6%) were mecA-negative using real-time PCR. Audit revealed that 15 (10.9%) mecA-positive strains were not reported as MRSA. Genotyping was performed using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), spa typing and SCCmec typing. MRSA predominantly belonged to EMRSA-15 (89.1% >) and EMRSA-16 (5.8%) clones. All S. aureus strains were included in an evaluation of three SCCmec-orfX PCR assays. The assays had high diagnostic sensitivity (>95%) and specificity (> 94% >) but false negative and false positive results were obtained. A deletion at the SCCmec-orfX right junction was proposed as the probable cause of false negative results. SCCmec-associated loci ccrAB1, ccrAB4, ccrC, and dcs were detected in four false positive MSSA, respectively. MALDI Biotyper mass spectrometry was evaluated for identification of S. aureus. Nineteen (3.4%) of the PHW-ABM wound isolates were Panton Valentine-Leukocidin (PVL)-positive S. aureus. The molecular epidemiology of these and PVL-positive S. aureus (n=61) from Specialist Antimicrobial Chemotherapy Unit, Cardiff (SACU) was investigated using mecA and arginine catabolic mobile element PCRs, PFGE, spa and SCCmec typing. The PHW-ABM strains were predominantly MSSA belonging to the CC159 (n=5; 26.3%), CC275 (n=4; 21.1%) and CC005 (n=2; 10.5%) spa-BURP clusters, affiliated to the ST121, ST30 and ST22 lineages. Within the SACU cohort the USA300 clone (n=16; 26.2%) was predominant, other genotypes included: t044- MRSA-IVc (n=5; 8.2%); t002-MRSA-IVc (n=3; 4.9%) and t127-MRSA-IVa (n=2; 3.3%), affiliated to the European (ST80), USA800 (ST5) and USA400 (ST1) clones. Susceptibility testing demonstrated statistically significant differences between the SACU and PHW-ABM cohorts for oxacillin 57%/5% >, gentamicin 2%/16%, and tetracycline 10% >/42% resistance (p < 0.05). These observed differences highlight the importance of including unselected strains in addition to referred reference laboratory isolates in epidemiological investigations.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-12T19:39:14Z No. of bitstreams: 1 TESE Rosilma de Oliveira Araujo Melo.pdf: 9735947 bytes, checksum: 870f605bce15d8ff10d70fe0bc62ddbc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T19:39:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Rosilma de Oliveira Araujo Melo.pdf: 9735947 bytes, checksum: 870f605bce15d8ff10d70fe0bc62ddbc (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / FACEPE / Não existem estudos no que se refere à identificação de micro-organimos endofíticos de Bauhinia monandra, embora sejam relatados diversos estudos farmacológicos realizados com essa espécie. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi à prospecção de micro-organismos endofíticos de folhas de B. monandra, no intuito de identificar estes endofíticos, bem como explorar o potencial biotecnológico das actinobactérias endofíticas para produção enzimática e antimicrobiana. Folhas de B. monandra coletadas no Campus da Cidade Universitária (Recife, PE) foram desinfectadas, maceradas e semeadas em meios de cultura específicos. Após a purificação, as colônias bacterianas e fúngicas foram submetidas à identificação morfológica macroscópica e microscópica. As actinobactérias endofíticas foram avaliadas quanto à produção de enzimas; bem como foi realizada a avaliação antimicrobiana para seleção da estirpe com elevado potencial antimicrobiano e posterior produção de metabólitos ativos em cultivo submerso, seguido de processos de extração e separação cromatográfica dos compostos antimicrobianos obtidos do melhor meio de cultura. No presente estudo, as estirpes de fungos filamentosos endofíticos (59,7%) pertenciam aos gêneros Penicillium, Curvullaria e Aspergillus. As bactérias não-filamentosas endofíticas (26,9%) foram agrupadas nos gêneros Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. E cepas de actinobactérias endofíticas (13,4%) foram classificadas como Streptomyces e Nocardiopsis. A metodologia utilizada para verificar quantitativamente a capacidade de produção enzimática foi eficiente, demonstrando que todas as actinobactérias endofíticas (n=9) das folhas de B. monandra foram capazes de hidrolisar amido, pectina, Tween 20 e 80; e celulose, confirmando a presença de amilase, pectinase, lípase, esterase e celulase, respectivamente. Na avaliação da produção de caseinase todas as actinobactérias endofíticas foram positivas, no entanto, para a degradação da gelatina apenas Nocardiopsis spp. 2F foi negativo, bem como no ensaio de tirosina todas as estirpes foram positivas exceto Streptomyces spp. 1F. A avaliação da atividade antimicrobiana primária das actinobactérias endofíticas de folhas de B. monadra, realizada pelo teste de bloco de gelose mostrou que as cepas endofíticas Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F e Streptomyces spp. 8F, possuíam atividade antimicrobiana apenas diante de bactérias Gram-positivas, principalmente cepas de Staphylococcus aureus (n=16) isolados clínicos multiressistentes e oxacilina resitente (ORSA). A estirpe endofítica Streptomyces spp. 5F destacou-se como melhor produtor de substâncias antimicrobianas em 11 dos 12 meios de cultura submersa perante cinco cepas de S. aureus isolados clinicos, selecionando o meio ISP-3 com melhor desempenho produtivo. O processo extrativo dos produtos ativos com solventes foi bem sucedido com a massa micelial, destacando-se o metanol. Segundo separação cromatográfica de alta eficiência dos extratos brutos: aquoso do líquido metabólico (EAL) e metánolico da massa (EMM), o fracionamento demonstrou que os dois extratos apresentavam compostos com natureza polar. Estes resultados demonstram que a prospecção de micro-organismos endofíticos constitui uma fonte valiosa na obtenção de novas espécies e novos metabólitos bioativos, bem como a descoberta de moléculas com atividade enzimática e antimicrobiana promissora diante de bactérias multirresitentes do gênero Staphylococcus. / There are no studies regarding the identification of endophytic microorganisms of Bauhinia monandra, although several pharmacological studies with this species are reported. In this way, the objective of this work was to prospect endophytic microorganisms from B. monandra leaves, in order to identify these endophytes, as well as to explore the biotechnological potential of endophytic actinobacteria for enzymatic and antimicrobial production. B. monandra leaves collected at Campus Cidade Universitária (Recife, PE) were disinfected, macerated and seeded in specific culture media. After purification, bacterial and fungal colonies were submitted to macroscopic and microscopic morphological identification. Endophytic actinobacteria were evaluated for enzyme production; As well as the antimicrobial evaluation for selection of the strain with high antimicrobial potential and subsequent production of the active metabolites in submerged culture, followed by extraction and chromatographic separation of the antimicrobial compounds obtained from the best culture medium. In the present study, strains of endophytic filamentous fungi (59.7%) belonged to the genera Penicillium,Curvullaria and Aspergillus. Endophytic non-filamentous bacteria (26.9%) were grouped in the genera Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. And strains of endophytic actinobacteria (13.4%) were classified as Streptomycesand Nocardiopsis. The methodology used to verify quantitatively the enzymatic production capacity was efficient, demonstrating that all the endophytic actinobacteria (n = 9) of B. monandra leaves were able to hydrolyze starch, pectin, Tween 20 and 80, and cellulose, confirming the presence of amylase, pectinase, lípase, esterase and cellulase, respectively. In the evaluation of the caseinase production, all the endophytic actinobacteria were positive, however, for the degradation of the gelatin only Nocardiopsis spp. 2F was negative, as well as in the tyrosine assay all strains were positive except Streptomyces spp. 1F. The evaluation of the primary antimicrobial activity of the endophytic actinobacteria of B. monadra leaves, performed by the gel block assay showed that the endophytic strains Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F and Streptomyces spp. 8F, had antimicrobial activity only against Gram-positive bacteria, mainly strains of Staphylococcus aureus (n = 16), multiresistant clinical isolates and resistant oxacillin (ORSA). The endophytic strain Streptomyces spp. 5F was the best producer of antimicrobial substances in 11 of the 12 submerged culture media against five strains of S. aureus isolates clinically, selecting ISP-3 medium with better productive performance. The extractive process of the active products with solvents was successful with the mycelial mass, standing out the methanol. According to the high efficiency chromatographic separation of the crude extracts: aqueous of the metabolic liquid (AEL) and mass methanol (MME), the fractionation showed that the two extracts presented compounds with polar nature. These results demonstrate that the prospection of endophytic microorganisms is a valuable source in the acquisition of new species and new bioactive metabolites, as well as the discovery of molecules with promising enzymatic and antimicrobial activity against multiresistant bacteria of the genus Staphylococcus.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-16T21:03:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alyson Mykael Albuquerque Florenço.pdf: 1828798 bytes, checksum: 772741777a2659fadbf13dafce760c07 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-21T20:45:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alyson Mykael Albuquerque Florenço.pdf: 1828798 bytes, checksum: 772741777a2659fadbf13dafce760c07 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T20:45:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Alyson Mykael Albuquerque Florenço.pdf: 1828798 bytes, checksum: 772741777a2659fadbf13dafce760c07 (MD5) Previous issue date: 2016-07-28 / CAPES / Introdução: Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) tem sido um dos principais patógenos envolvidos em graves infecções hospitalares, apresentando altas taxas de morbidade e mortalidade, devido a sua resistência aos antimicrobianos atuais e produção de fatores de virulência. Assim, a comunidade científica busca novas opções terapêuticas que possam inibir esses fatores e consequentemente suas manifestações clínicas. A β-lapachona (β-lap), composto obtido principalmente através da semi-síntese do lapachol, molécula extraída da árvore “Ipê-roxo” (Tabebuia avellanedae), torna-se uma possível alternativa devido as suas propriedades farmacológicas, incluindo a atividade antibacteriana. Porém, essa molécula apresenta limitações, tais como, baixa solubilidade em água e toxicidade. Assim, os nanocarreadores, como, por exemplo, os lipossomas surgem como opções para ultrapassar essas limitações. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da β-lapachona livre e encapsulada em lipossomas convencionais (β-lap_SACL) e furtivos (β-lap_NSL) na inibição de fatores de virulência e da parede celular de MRSA. Metodologia: A avaliação da capacidade da β-lap, β-lap_SACL e β-lap_NSL na inibição da produção da catalase foi avaliada através da medição de coluna de efervescência e a inibição da hemolisina através da atividade hemolítica. A inibição do biofilme de MRSA foi avaliada através da determinação da Concentração Inibitória Mínima do Biofilme (CIMB) e Concentração de Erradicação Mínima do Biofilme (CEMB). A inibição da parede celular de MRSA foi determinada através de análise morfométrica por microscopia eletrônica de transmissão. Resultado: β-lap_SACL e β-lap_NSL, em concentrações subinibitórias, apresentaram inibição da produção de catalase (em torno de 70%, 65% e 70%, respectivamente) e de hemolisina (em torno de 60%, 60% e 65%, respectivamente). Quanto à inibição do biofilme, CIMB variou de 4 a 16 μg/mL e CEMB variou de 4 a 64 μg/mL. β-lap, β-lap_SACL e β-lap_NSL também foram capazes de inibir a parede celular em percentuais que variaram de 40 a 60%. Conclusão: Esses resultados sugerem que β-lap encapsulada em lipossomas é uma opção terapêutica promissora na inibição dos fatores de virulência catalase e hemolisina, além de inibir a formação do biofilme e parede celular de MRSA. / Introduction: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) has been one of the main pathogens involved in serious hospital infections, with high rates of morbidity and mortality, due to its resistance to current antibiotics and production of virulence factors. Thus, the scientific community looks for new therapeutic options that inhibit these factors and therefore its clinical manifestations. The β-lapachone (β-lap), composed mainly obtained by semi-synthesis of lapachol, extracted molecule by "Ipê-roxo" tree (Tabebuia avellanedae) becomes a viable alternative due to its pharmacological properties, including the activity antibacterial. However, this molecule has limitations such as low water solubility and toxicity. Thus, nanocarriers, such as, liposomes appear as options to overcome these limitations. Objective: This study aimed to evaluate the effect of pure β-lapachone and encapsulated into conventional (β-lap_SACL) and stealthy liposomes (β-lap_NSL) to inhibit virulence factors and cell wall of MRSA. Methodology: The evaluation of the ability of β-lap, β-lap_SACL and β-lap_NSL to inhibit the production of catalase was evaluated by bubbling column and the inhibition of hemolysin was measured by hemolytic activity. The inhibition of MRSA biofilm was evaluated by determining the minimum biofilm inhibitory concentration (CIMB) and minimum biofilm eradication concentration (CEMB). The inhibition of MRSA cell wall synthesis was determined by morphometric analysis by transmission electron microscopy. The biocompatibility of liposomes containing β-lap was assessed by hemolytic assay. Results: β-lap_SACL and β-lap_NSL at subinibitory concentrations showed inhibition of catalase production (about 70%, 65% and 70%, respectively) and hemolysin (around 60%, 60% and 65%, respectively). For inhibition of biofilm CIMB ranged from 4 to 16 ug/mL and CEMB ranged from 4 to 64 mg/mL. β-lap, β-lap_SACL and β-lap_NSL were also capable to inhibit cell wall in a percentage that varied between 43 and 63%. Conclusion: These results suggest that β-lap encapsulated into liposomes is a therapeutic option promising to inhibit virulence factors catalase and hemolysin, and to inhibit biofilm formation and cell wall synthesis of MRSA.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12054_Dissertação_Carina Knidel.pdf: 1789575 bytes, checksum: b6160bdd2d62dd644152668b80effd0b (MD5) Previous issue date: 2018-03-06 / As infecções bacterianas estão entre os principais problemas para a saúde pública e o surgimento de bactérias resistentes aos antimicrobianos se torna cada vez mais comum. Staphylococcus aureus é um patógeno oportunista, que pode causar uma variedade de infecções, tanto hospitalares como comunitárias. A epigalocatequina galato (EGCG), flavonoide presente nas folhas da planta Camelia sinensis, vem sendo estudada por apresentar diferentes atividades biológicas, incluindo potencial atividade antimicrobiana. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano, in vitro e in vivo, e antibiofilme da EGCG em isolados clínicos de S. aureus com diferente background genético. Foram utilizadas nove amostras isoladas de diferentes infecções, com distinta susceptibilidade aos antimicrobianos. A atividade antimicrobiana foi realizada por teste de microdiluição em caldo para a determinação da concentração mínima inibitória (CMI) e pelo ensaio de curva tempo-morte. Os resultados das CMIs variaram de 7,81 a 62,5 &#956;g/mL e uma atividade bactericida foi observada com o tratamento de 4x a CMI. A atividade antibiofilme foi avaliada após a incubação dos isolados na presença e ausência da EGCG. Concentrações sub-inibitórias foram capazes de inibir de forma significativa a produção de biofilme de S. aureus. Com o tratamento, a maior redução na produção de biofilme foi de 100% e as menores entre 50 a 60%. Ensaios de citotoxicidade mostraram que concentrações &#8804; 62,5 &#956;g/mL da EGCG não foram citotóxicas para macrófagos murinos. Em relação ao teste in vivo utilizando larvas de G. mellonella, a EGCG reduziu a mortalidade das larvas infectadas por este patógeno de forma significativa (P=0,0005) frente a apenas um isolado. De forma geral, a EGCG mostrou eficácia em inibir o crescimento de diferentes isolados clínicos de S. aureus e apresentou relevante propriedade antibiofilme. O tratamento in vivo com larvas de G. mellonella mostrou efeito variável. Portanto, a EGCG é uma substância promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12104_12-04-18- Dissertação completa - PÓS BANCA FINAL.pdf: 2165031 bytes, checksum: 166de54425438f1aa2ee476e04f24b8c (MD5) Previous issue date: 2018-03-12 / Staphylococcus aureus é um dos principais patógenos causador de uma gama de infecções tanto nosocomiais quanto comunitárias. Bacteremias são constantes e apresentam altos índices de mortalidade e morbidade e todo o globo. A vancomicina (van) é a terapia empírica para tratamento de infecções por cocos Gram-positivos em pacientes hemodialíticos. Em 1997 surgiram estirpes de S. aureus com suscetibilidade reduzida para van (VISA e hVISA). Estes isolados são associados a falhas terapêuticas por van e recidivas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar amostras de S. aureus cultivadas em altas concentrações de van quanto à suscetibilidade e atributos de virulência. Quarenta e uma amostras de S. aureus isoladas de pacientes hemodialíticos com bacteremias (parentais) foram crescidas em 4 a 16 &#956;g/mL de van e reisoladas após este teste, sendo denominadas derivadas. Foram isoladas derivadas de todas as 41 amostras S. aureus. Todas as amostras parentais e derivadas foram suscetíveis à van. A concentração mínima inibitória (CMI) de van nas amostras derivadas apresentou um aumento em relação as parentais, porém, dentro dos parâmetros de suscetibilidade pelo Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI). Vinte e quatro pulsotipos foram identificados através da técnica de PFGE e nove amostras (22%) apresentaram resistência à meticilina através do disco de cefoxitina e amplificação do gene mecA. Nove amostras derivadas isoladas em 16 µg/mL de van conseguiram crescer na presença de 8 µg/mL de van. A produção de biofilme e de cinco enzimas hidrolíticas foi menor nas amostras derivadas. A virulência das estirpes derivadas foi avaliada em modelo in vivo com Galleria mellonella, sendo que duas amostras derivadas apresentaram diminuição e uma aumento da virulência. Não houve diferença entre parentais e derivadas quanto a autólise, produção de &#948;-hemolisina, ligação ao fibrinogênio e viabilidade metabólica. Apesar de crescerem em concentrações altas de van as estirpes derivadas apresentaram crescimento lento e CMI na faixa de suscetibilidade, indicando tolerância. De todos os fatores de virulência testados a pressão seletiva com van afetou apenas a produção de biofilme e cinco enzimas hidrolíticas. No modelo in vivo a virulência das derivadas foi variada, indicando que ser estirpe-dependente.