Physiologiquement, l’ADN, séquestré dans les noyaux, n’est pas détecté par les récepteurs de danger du système immunitaire. En revanche, au cours d’inflammations chroniques, une rupture de la tolérance vis-à-vis de l’ADN du soi, consécutivement à sa libération dans le milieu extracellulaire par les cellules mortes, a été démontrée. L’accès de l’ADN extracellulaire aux récepteurs intracellulaires est médié par des molécules cargo capables de s’associer à l’ADN extracellulaire et d’induire sont internalisation.L’IL-26, qui est un membre de la famille de l’IL-10, a été décrite comme une cytokine pro-inflammatoire, dont les mécanismes moléculaires restent mal connus. Nous avons démontré que l’IL-26 se lie à l’ADN, permet son internalisation dans le cytosol des cellules myéloïdes et la sécrétion de cytokines pro inflammatoires via la voie STING et la voie des inflammasomes. La modélisation informatique de l’IL-26, basée sur la structure de l’IL-10,met en évidence des caractéristiques structurales similaires aux molécules cargo : un domaine de liaison à l’ADN, deux hélices amphipathiques et un motif d’ancrage à la membrane. De plus, des complexes circulants d’IL-26-ADN sont retrouvés dans les sérums de patients en poussée aigues de vascularite à ANCA,une pathologie inflammatoire chronique. L’IL-26 est détectée dans les lésions de glomérulonéphrite aigue nécrosante à croissants, ainsi qu’au niveau des cellules musculaires lisses artérielles de ces patients. Ces dernières sécrètent de l’IL-26 en présence de cytokinespro-inflammatoires. En conclusion, l’IL-26 établit d’une boucle d’autoamplification entre une mort cellulaire intense et l’inflammation. / In physiological conditions, self-DNA released by dying cells is not detected by intracellular DNA sensors. Inchronic inflammatory disorders, unabated inflammation has been associated with a break in innate immune tolerance to self-DNA. However, to gain access to intracellular DNA sensors, extracellular DNA has to complex with DNA-binding molecules. IL-26 is a member of the IL-10 cytokine family, overexpressed in numerous chronic inflammatory diseases, which biological activity remains unclear. We demonstrate here that IL-26 binds to DNA and shuttles it in the cytosol of human myeloid cells. As a consequence, IL-26 allows extracellular DNA to trigger proinflammatory cytokine secretion by monocytes, in a STING- and inflammasome-dependent manner. Supporting these biological properties, IL-10-based modelling predicts two DNA-binding domains, two amphipathic helices, and an in-plane membrane anchor in IL-26, structural features of cationic amphipathic cell penetrating peptides. In line with these properties, patients with active autoantibody-associated vasculitis, a chronic relapsing autoimmune inflammatory disease associated with extensive cell death, exhibit high levels of both circulating IL-26 and IL-26-DNA complexes. Moreover, in patients with crescentic glomerulonephritis, IL-26 is expressed by renal arterial smooth muscle cells and deposits in necrotizing lesions. Accordingly, human primary smooth cells secrete IL-26 in response to proinflammatory cytokines. In conclusion, IL-26 expressed in lesions confers proinflammatory properties to DNA released by dying cells, setting up a positive amplification loop between extensive cell death and unabated inflammation.

Des mutations gains de fonction du gène STING chez l’Homme (telles que V155M) déclenchent une pathologie autoinflammatoire sévère de type interféronopathie, le SAVI (Sting associated vasculopathy with onset in infancy), une vasculopathie associée à une fibrose pulmonaire et des symptômes lupus-like. Afin de comprendre la physiopathologie du SAVI, nous avons généré un modèle murin porteur de la mutation correspondante grâce à la technologie CRISPR/Cas9. Ces souris STING V154M/WT développent un phénotype SCID (déficit immunitaire combiné sévère) avec diminution des LT, des LB et des NK en périphérie, et une expansion du compartiment myéloïde. Ce défaut de développement est observé précocement dès le stade pré-proB dans la moelle osseuse, et au stade DN2 dans le thymus, et semble intrinsèque aux cellules hématopoïétiques. De plus, ces souris présentent une hypogammaglobulinémie sévère. Les LT et LB matures présentent également des défauts intrinsèques. Enfin, les souris présentent une signature IFN, mais leur phénotype SCID est IFN de type I-indépendant. Ces résultats mettent en évidence un rôle important de STING dans le développement lymphoïde. / In humans, point mutations in STING gene, such as V155M, lead to a severe autoinflammatory disease called SAVI (Sting associated vasculopathy with onset in infancy), classified as interferonopathy and characterized by vasculopathy, pulmonary fibrosis and a lupus-like pathology. In order to better understand the pathophysiology of SAVI, we generated a mouse model with the corresponding mutation, using CRISPR/Cas9 technology. These STING V154M/WT mice develop a SCID (severe combined immunodeficiency disease) with decrease of peripheral T, B and NK cells, and expansion of myeloid compartment. This defect seems to be present since the early stages, i.e. pre-proB cells stage in bone marrow and DN2 stage in thymus, and seems intrinsic to hematopoiectic cells. In addition, these mice present a strong hypogammaglobulinemia. Mature T and B cells also present intrinsic defaults. Finally, these mice present an IFN signature but their phenotype is independent of the IFN pathway. These results highlight an important role of STING in lymphoid development.

Au cours d’une infection, les cellules de l’immunité innée sont capables de reconnaître via les Toll-like receptors (TLR) des motifs appelés pathogen-associated molecular patterns. Les cellules natural killer (NK) contribuent au processus inflammatoire en produisant de nombreuses cytokines. Chez la souris, nous avons montré que l’expression du TLR2 et du TLR4 dans les cellules NK spléniques est intracellulaire, comme pour le TLR9. La réponse des NK aux agonistes des TLR2, 4 et 9 nécessite la présence de cytokines accessoires (IL-15 et IL-18), afin d’obtenir une production significative des cytokines pro-inflammatoires IFN- et GM-CSF. En revanche, dans un modèle de sepsis polymicrobial, les NK spléniques de souris présentent une diminution dramatique de leur production d’IFN- et de GM-CSF en réponse aux agonistes des TLR. Cette diminution est sous le contrôle des cellules T régulatrices (Treg) et due au TGF-1. L’analyse des voies de signalisation nous a permis de montrer que la production de GM-CSF est abolie chez les cellules NK de souris déficientes pour STING en réponse au CpG-DNA. Ces résultats mettent en lumière une voie alternative et cytoplasmique pour la détection de l’ADN bactérien dans les cellules NK, différente de la voie classique TLR9-MyD88 dépendante. De plus, nous avons montré un trafic du récepteur TLR2 depuis l’intérieur vers la surface des cellules NK. La migration du TLR2 à la surface des NK nécessite la molécule UNC93B1, précédemment décrite comme transporteur endosomal de TLR.Chez les cellules NK humaines circulantes (sous-populations CD3-CD56bright et CD3-CD56dim), nous avons montré que l’expression des TLR2 et 4 est majoritairement intracellulaire, comme pour le TLR9 et comme chez la souris. La production d’IFN- par les NK de sujets sains en réponse aux agonistes des TLR nécessite également la présence de cytokines accessoires. Nous montrons que cette production est fortement altérée pour les NK des patients admis en soins intensifs et ayant un sepsis ou un syndrome de réponse inflammatoire systémique (SIRS). De même nous avons trouvé des différences entre les patients et les sujets sains dans l’expression du CD69 (marqueur d’activation précoce) et des TLR eux-mêmes. Cette étude indique que les NK des patients sepsis et SIRS deviennent tolérants aux agonistes des TLR en terme de production d’IFN-, de manière similaire à ce qui a été décrit pour d’autres cellules comme les monocytes / As sensors of infection, innate immune cells are able to recognize pathogen-associated molecular patterns by receptors such as Toll-like receptors (TLR). NK cells contribute to inflammatory processes by the production of numerous cytokines. In mice, we have shown that the protein expression of TLR2 and TLR4 in naive NK cells from spleen is predominantly intracellular, similarly to TLR9. The responsiveness of purified NK cells to TLR2, 4 or 9 agonists in vitro requires the presence of accessory cytokines (IL-15 and 18) to trigger a significant production of IFN- and GM-CSF. In contrast, NK cells purified from a model of in vivo polymicrobial sepsis, showed a dramatic reduction in their capacity to respond to TLR agonists in terms of IFN- and GM-CSF release due an inhibitory cross talk with Treg cells mediated by TGF-1. Analyzing the signaling pathways involved in cytokine production in response to CpG-DNA, we found that GM-CSF production was abolished in NK cells from STING-deficient mice, revealing that this intracytoplasmic receptor acts as a TLR9/MyD88-independent alternative sensor to bacterial DNA in NK cells. Additionally we show that intracellularly expressed TLR2 traffics to the cell surface of NK cells, by a mechanism involving UNC93B1, a protein previous described as an endosomal TLR carrier.In human peripheral blood NK cells (CD3-CD56bright and CD3-CD56dim subsets), we show that TLR2 and 4 protein expression is primarily intracellular, similar to TLR9, and similar to our findings in murine NK cells. The ex vivo responsiveness of human blood NK cells to TLR2, 4 or 9 agonists also requires accessory cytokines, to promote secretion of IFN-. In intensive care patients diagnosed with systemic inflammatory response syndrome (SIRS) and sepsis, IFN- production was significantly decreased. We also discovered modulations in the expression of CD69 (early activation marker) and in that of TLR themselves. This study indicates that NK cells undergo tolerance in response to TLR agonists during SIRS or sepsis, similarly to other cells, such as monocytes.

Thesis (Ph.D.) -- University of Western Sydney, 2002. / "A thesis submitted in fulfilment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy" Bibliography : leaves 241-266.

The nuclear envelope is a highly organised double membrane system that separates the activities of the nuclear and cytoplasmic compartments in eukaryotic systems. The wide range of functions recently associated with the NE and the identification of hundreds of proteins associated with this cellular structure indicates that it is a major signalling node for the cell. Recent work indicates NE functions in signalling innate immune responses to herpesviruses. The viruses, on the other hand, often target or usurp NE functions in different ways. The NE is also a physical barrier that must be overcome for viruses like the herpesviridae that assemble capsids in the nucleus. This thesis addresses two important questions: 1) How do herpesviruses cross the NE after new viral particles are produced in the nucleus? and 2) What is the nuclear envelope role of NET23/STING in the activation of immune factors upon herpesvirus infection? To address the first question, I followed two different approaches. The first used the isolation of microsomes from HSV-1 infected cells to identify possible host factors involved during herpesvirus exit through the NE on the prediction that such proteins would disperse into the ER during infection. I identified a group of vesicle fusion proteins that play a role in this herpesvirus exit through the NE. Depletion of three identified vesicle fusion proteins decreased the growth of HSV-1 in host cells, yielding accumulation of viral particles in the nucleus. The second approach was to follow the fate of nuclear envelope transmembrane proteins (NETs) during HSV-1 infection. To address the question of how NET23/STING is involved in innate immunity I tested the hypothesis that this NET acts as a transport receptor to carry signals through the peripheral channels of the NPC when central channel transport is blocked by pathogens. FRAP was used to quantify the mobility of NET23/STING upon the induction of the innate immune response, finding an increase of the mobility for this protein in the NE. To further elucidate its role within the NE I tested whether some NE-NET23/STING binding partners were being redistributed between the nucleus and cytoplasm during innate immune responses. This revealed two of these binding partners normally redistribute upon innate immune response activation and this is blocked in cells knocked down for NET23/STING. Finally, I confirmed that NET23/STING contributes to chromatin remodelling during infection involving an increase in the H3K9Me3 epigenetic mark. Collectively, these data argue the identification of novel host proteins involved in herpesvirus nuclear egress and the finding of a new role for NET23/STING within the NE.

Orientador: Carlos Alberto de Magalhães Lopes / Banca: Silvio Luis de Oliveira / Banca: Vidal Haddad Junior / Banca: Mônica Valdyrce dos Anjos Lopes Ferreira / Banca: Itamar Alves Martins / Resumo: Nossos estudos objetivaram caracterizar as respostas imune inata e específica induzidas pelas peçonhas do muco e do ferrão do bagre Cathorops agassizii . A coleta dos espécimes foi realizada no complexo Baía-Estuário de Santos e São Vicente, localizado no litoral sul do Estado de São Paulo. As peçonhas (do Muco e do Ferrão) apresentaram perfil eletroforético similar entre si. Induzida a inflamação aguda em um modelo experimental murino, as peçonhas apresentaram igualmente a capacidade de induzir aumento da permeabilidade vascular e também edema de pata. A detecção de Leucotrieno B4 e Prostaglandina E2 no lavado da cavidade peritoneal dos camundongos injetados, com ambas as peçonhas, corroboram esta hipótese. Nossos resultados através da microscopia intravital mostraram que as peçonhas induzem um grande número de leucócitos rolantes nas vênulas pós-capilares com focos de extravasamento leucocitário, principalmente de neutrófilos seguido pelo influxo de macrófagos. Além disso, a peçonha do Ferrão induziu uma resolução mais rápida do influxo leucocitário ao contrário da peçonha do Muco que manteve o infiltrado macrofágico por até 7 dias. De maneira interessante, somente a citocina IL-6 foi detectada no lavado peritoneal induzida principalmente pela peçonha do Muco e as quimiocinas KC e MCP-1, por ambas as peçonhas, expressando naquele momento, a participação destes mediadores no recrutamento de neutrófilos e macrófagos para o sítio da lesão. As peçonhas foram eficazes ao induzir uma produção primária e secundária de anticorpos das classes IgM e IgG anti-venenos. Observamos ainda, uma especificidade dos anticorpos produzidos para os componentes das próprias peçonhas e também uma reatividade antigênica cruzada entre elas. / Abstract: Our studies aimed to characterize the innate and specific immune responses induced by poisons of the mucus and sting of the catfish Cathorops agassizii. The collection of specimens was accomplished in the complex Bay-Estuary System of Santos and São Vicente located in the south coast of the São Paulo State. Poisons of the Mucus and Sting presented similarities in their electrophorectical profiles. In basis of an Induced process of inflammation throughout an experimental murine model, both poisons equally showed the capacity to increase the vascular permeability and also paw edema. The Leucotrien B4'S and Prostaglandine E2 detection in washings of mice peritoneal cavity injected with both poisons corroborates this hypothesis. Our results through an intravital microscopy procedure also showed that the poisons induced a great number of rolling leukocytes in the post-capillary venules with focus on the leukocyte overflow mainly neutrophiles followed by macrophage influx. Besides, the sting poison Sting induced a faster resolution of the leukocyte influx, as well as, the Mucus poison unlike maintained a macrophage infiltrated for up to 7 days. In an interesting way, only the cytokine IL-6 was detected in peritoneal washings induced mainly by the Mucus poison although Quimiokinins KC and MCP-1 were for both poisons, expressing on that moment the participation of these mediators in the neutrophile and macrophage recruitment for the lesion site. The poisons were also effective in the induction of a primary and secondary production of IgM and IgG classes of antibodies. In this research we still observed a specificity of the antibodies produced for the components of the own poisons and also a crossed antigenic reactivity among them. / Doutor

Le cancer du sein est le cancer le plus fréquent chez la femme. Malgré la chimiothérapie, certaines patientes ont une réponse incomplète et récidivent quelques années plus tard. Le but de ce travail était d’étudier les mécanismes moléculaires mis en place par les cellules tumorales en réponse aux traitements et leur rôle éventuel dans la récidive. La modélisation de ces événements a d’abord été réalisée grâce à des modèles expérimentaux appelés PDX (pour patient derived xenograft) impliquant la greffe de tumeurs de patientes chez la souris immunodéficiente. Une analyse transcriptomique a permis de mettre en évidence, au sein des PDXs qui répondent à la chimiothérapie, la surexpression précoce de gènes cibles de la voie interféron (IFN)/STAT1, suggérant que cette signature moléculaire pourrait être utilisée comme biomarqueur prédictif de la réponse initiale au traitement. Cette signature persiste néanmoins dans les cellules tumorales résiduelles, suggérant qu’elle pourrait également avoir un rôle dans la récidive observée pour l’ensemble des PDX étudiées. L’analyse fonctionnelle de cette signature IFN/STAT1 a été réalisée in vitro, en traitant diverses lignées de cancer du sein par du mafosfamide, principe actif d’une chimiothérapie classique induisant des dommages à l’ADN. Nos résultats montrent que, sous chimiothérapie, certaines lignées (dont les cellules MFC7) sont capables d’exprimer des IFNs de type I conduisant à l’activation autocrine/paracrine de la voie IFN/STAT1. Une étude mécanistique a mis en évidence l’implication du détecteur de l’ADN STING (stimulator of IFN genes) en amont de la production d’IFN, comme cela a été bien décrit dans des cellules immunitaires en présence de pathogènes. Nous avons montré que l’inhibition individuelle de l’expression de différents acteurs de la voie STING/IFN/STAT1 potentialise l’effet de la chimiothérapie, impliquant cette cascade dans la résistance au traitement. En résumé, notre travail suggère que l’activation de la voie STING/IFN/STAT1 dans les cellules tumorales mammaires traitées par chimiothérapie pourrait jouer un double rôle : biomarqueur de la réponse dans un premier temps, puis acteur de résistance dans un second temps. Ce travail ouvre de nouvelles perspectives pronostiques et thérapeutiques pour la prise en charge du cancer du sein. / Breast cancer is the most frequent cancer in women. Despite chemotherapy, tumor response is often incomplete, and relapse is frequently observed. The aim of this work was to analyze the molecular mechanisms triggered in breast cancer cells in response to chemotherapy. These events were modeled using breast cancer patient-derived xenografts (PDXs), i.e. samples of human tumors engrafted into immunodeficient mice. Transcriptomic analysis highlighted precocious induction of the interferon (IFN)/STAT1 pathway in response to chemotherapy only in tumors responding to treatment, suggesting that this molecular signature could be used as a biomarker of the initial response. The activation of this pathway persisted in residual tumor cells, suggesting that it could also play a role in cancer recurrence observed in all PDX models that we investigated. Functional deciphering of the IFN/STAT1 pathway was performed in vitro by stimulating breast cancer cell lines with mafosfamide, the active principle of a classical chemotherapy inducing DNA damage. In some cell lines, e.g. MCF-7 cells, this treatment triggered the upregulation of type I IFN expression leading to cell-autonomous activation of the IFN/STAT1 signaling pathway. A mechanistic study revealed the involvement of the DNA sensor STING (stimulator of IFN genes) upstream of the IFN production, mimicking what happens in immune cells facing pathogen infection. Individual silencing of various actors of the STING/IFN/STAT1 pathway potentiated genotoxic treatment efficacy, indicating that this cascade may be involved in tumor resistance to treatment. In summary, our study suggests that cell-intrinsic activation of STING/IFN/STAT1 pathway in response to chemotherapy could play a dual role: first, it may be used as a predictive biomarker of initial response; second, it may act as a resistance mechanism to treatment. This work opens new prognostic and therapeutic perspectives for the clinical management of breast cancer.

A epidemia promovida pela infecção com o vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) é um fator agravante de saúde pública mundial, representando altas taxas de morbidade, com perda de qualidade de vida e mortalidade. Uma vasta gama de fatores de resposta inata exercem atividade antiviral, sendo a maior parte deles regulados pelo interferon tipo I. Desta forma, a proposta de estudo foi avaliara expressão de fatores antivirais e fatores reguladores da resposta de interferon tipo I em especial o sensor de DNA viral STING em células mononucleares do sangue periférico e em células do lavado bucal, de indivíduos expostos ao HIV-1 e não infectados, seu parceiro infectado por HIV-1, de indivíduos infectados por HIV-1 com carga viral (CV) detectável (acima de 5000 cópias/µL) e indivíduos saudáveis. Os resultados obtidos até o momento mostram que a exposição ao HIV-1 não é capaz de induzir a expressão de fatores antivirais regulados por IFN tipo I, mostrando que é preciso a infecção ativa para indução dos fatores. / The quality of life and morbidity are the most important hallmarker or the HIV-1 infection on the worldwide. Some important factors has been connected with this protection, likewise genetic, viral and immune host factors. Thus, this study reviewed the expression profile of antivirals factors and INF-I production regulators, in special the DNA sensor STING. The type I Interferon (IFN-I) is the major factor in HIV-1 inflammatory response. Therefore, we investigate the expression levels of activation and regulation IFN-I factors expressed in peripheral mononuclear blood cells (PBMCs) and cells of buccal wash of Exposed non-infected subjects, your infected partner, high viremia subjects (under 5.000 copies/mL) and health controls Our results indicated na important control mechanism to avoid inflammation who provide the permissiviness and infection with HIV-1.

HINTERGRUND: Eine inadäquate Aktivierung von Typ-1-IFN kann in der Entstehung von Autoimmunität und Autoinflammation resultieren. Die einer solchen dysregulierten Typ-1-IFN-Achse zu Grunde liegenden Störungen werden primär über das angeborene Immunsystem vermittelt. Krankheitsbilder, die durch eine chronische Typ-1-IFN-Aktivierung bedingt sind, werden daher unter dem Begriff Typ-1-Interferonopathien zusammengefasst. Diese Gruppe seltener, genetisch bedingter Erkrankungen zeichnet sich durch eine große symptomatische Bandbreite aus, wobei vor allem neurologische und kutane Manifestationen im Vordergrund stehen. Bisher aufgeklärte Pathomechanismen dieser systemisch-entzündlichen Erkrankungen haben einen Einblick in neue zellintrinsische Mechanismen gegeben, die zu einer Typ-1-IFN-Aktivierung führen und auf Störungen im Metabolismus und der immunologischen Erkennung intrazellulärer Nukleinsäuren beruhen. Daraus ergeben sich auch Erkenntnisse hinsichtlich des Einsatzes einer immunmodulatorischen Therapie zur kausalen Behandlung von Typ-1-Interferonopathien. FRAGESTELLUNG: Typ-1-Interferonopathien gehören zu den genetisch bedingten, seltenen Erkrankungen. Eine Diagnosestellung ist jedoch aufgrund mangelnder Kenntnisse über die Krankheitsursache häufig nicht möglich, sodass kausale Therapieansätze für viele Patienten nicht existieren. Die Aufklärung der genetischen Ursache solcher Erkrankungen ist demnach von essentieller Bedeutung. Auch die hier untersuchten Familien leiden an bisher nicht molekulargenetisch diagnostizierten Krankheiten, deren Phänotyp jedoch eine Typ-1-Interferonopathie vermuten lässt. Vor diesem Hintergrund war es das Ziel dieser Arbeit, bisher unbekannte Gene zu identifizieren und zu charakterisieren, welche Krankheitsbilder mit chronischer Typ-1-IFN-Aktivierung verursachen. MATERIAL UND METHODEN: Anhand klinischer Daten wurden zunächst die Krankheitsbilder der zwei betroffenen Familien charakterisiert und hinsichtlich der Gemeinsamkeiten mit bekannten Typ-1-Interferonopathien untersucht. Zudem wurde das Vorliegen einer chronischen Typ-1-IFN-Aktivierung bei den erkrankten Familienmitgliedern untersucht. Mit Hilfe von Exomanalysen und anschließenden bioinformatischen Analysen wurde nach dem ursächlichen Krankheitsgen gesucht. Die in diesem Rahmen in der Familie 1 nachgewiesene STING-Mutation wurde unter Verwendung von molekularbiologischen sowie zellbiologischen Analysen eingehend untersucht und zudem ihre Konsequenzen auf die IFN-Achse und die Stabilität des STING-Dimers mittels Strukturmodellierungen charakterisiert. Hinsichtlich der Aufklärung der genetischen Ursache der Erkrankung der Familie 2 wurde ebenfalls eine Exomanalyse durchgeführt. Da dabei jedoch keine Mutation identifiziert werden konnte, erfolgte eine Analyse differentiell exprimierter Transkripte mit Hilfe von Transkriptomdaten von Fibroblasten gesunder Kontrollen im Vergleich zu erkrankten Familienmitgliedern der Familie 2. ERGEBNISSE: Im Verlauf dieser Arbeit konnte in der Familie 1 mit einem familiären Chilblain Lupus eine kausale heterozygote Mutation im STING-Gen identifiziert werden. Diese bisher nicht beschriebene Mutation bedingt den Aminosäureaustausch Gly166Glu (G166E) im hochkonservierten Dimerinterface des STING-Proteins. Strukturmodelle ergaben Hinweise auf strukturverändernde Eigenschaften der Mutation G166E, die das STING-Dimer konstitutiv aktivieren. Dies konnte experimentell bestätigt werden, da in den peripheren Blutzellen der Patienten eine erhöhte IFN-Signatur nachgewiesen werden konnte und Patientenfibroblasten eine erhöhte Produktion von IFN-β sowie eine vermehrte Phosphorylierung von IRF3 zeigten. Um den Einfluss einer therapeutischen Immunmodulation über eine JAK-Inhibition zu untersuchen, wurden zwei Erkrankte der Familie 1 mit dem JAK-Inhibitor Tofacitinib über einen Zeitraum von 17 Tagen behandelt. Es konnte dabei in vivo eine signifikant reduzierte IFN-Signatur nachgewiesen werden. Mit Hilfe der Exomanalyse konnte in der konsanguinen Familie 2 mit einem AGS-ähnlichen Phänotyp keine kausale Mutation identifiziert werden. Es zeigte sich zudem, dass in den Patientenzellen keine erhöhte IFN-Signatur sowie keine erhöhte IFN-β Produktion nachweisbar waren. Die vergleichende Transkriptomanalyse ergab keine auffällige differentielle Expression von Genen des Aminosäure-Metabolismus, der Seneszenz, des Zellzyklus, der DNA-Schadensantwort und DNA-Reparatur sowie von Genen immunologischer Prozesse. Allerdings wurde die vollständig fehlende Expression der Gene COL6A1 und COL6A2 in den Patientenzellen nachgewiesen. SCHLUSSFOLGERUNG: Die identifizierte STING-Mutation der Familie 1 führt zu einer chronischen Aktivierung der Typ-1-IFN-Achse und ist folglich als Gain-of-function Mutation anzusehen. Die Behandlung mit dem immunmodulierenden JAK-Inhibitor Tofacitinib führt zu einer Verminderung der IFN-Signatur und bietet somit einen vielversprechenden Ansatz für eine kausale Therapie. Weiterführende Untersuchungen, vor allem bezüglich der Langzeiteffekte, sind hier jedoch noch erforderlich. Die Erkrankung der Familie 2 ist dagegen vermutlich nicht den Typ-1-Interferonopathien zuzuordnen. Vielmehr scheint es zum jetzigen Zeitpunkt wahrscheinlich, dass eine Mutation innerhalb eines regulatorischen Elements, das die Expression der Gene COL6A1 und COL6A2 reguliert, für den Phänotyp der Erkrankten verantwortlich ist. Weiterführende Untersuchungen sind hier zukünftig von großem Interesse.

A epidemia promovida pela infecção com o vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) é um fator agravante de saúde pública mundial, representando altas taxas de morbidade, com perda de qualidade de vida e mortalidade. Uma vasta gama de fatores de resposta inata exercem atividade antiviral, sendo a maior parte deles regulados pelo interferon tipo I. Desta forma, a proposta de estudo foi avaliara expressão de fatores antivirais e fatores reguladores da resposta de interferon tipo I em especial o sensor de DNA viral STING em células mononucleares do sangue periférico e em células do lavado bucal, de indivíduos expostos ao HIV-1 e não infectados, seu parceiro infectado por HIV-1, de indivíduos infectados por HIV-1 com carga viral (CV) detectável (acima de 5000 cópias/µL) e indivíduos saudáveis. Os resultados obtidos até o momento mostram que a exposição ao HIV-1 não é capaz de induzir a expressão de fatores antivirais regulados por IFN tipo I, mostrando que é preciso a infecção ativa para indução dos fatores. / The quality of life and morbidity are the most important hallmarker or the HIV-1 infection on the worldwide. Some important factors has been connected with this protection, likewise genetic, viral and immune host factors. Thus, this study reviewed the expression profile of antivirals factors and INF-I production regulators, in special the DNA sensor STING. The type I Interferon (IFN-I) is the major factor in HIV-1 inflammatory response. Therefore, we investigate the expression levels of activation and regulation IFN-I factors expressed in peripheral mononuclear blood cells (PBMCs) and cells of buccal wash of Exposed non-infected subjects, your infected partner, high viremia subjects (under 5.000 copies/mL) and health controls Our results indicated na important control mechanism to avoid inflammation who provide the permissiviness and infection with HIV-1.