O objetivo desse trabalho foi avaliar o estado nutricional de mulheres obesas em relação ao zinco (Zn) e a associação com marcadores do estresse oxidativo e com polimorfismos em genes das enzimas antioxidantes SOD1 e SOD3. A amostra foi composta por 60 mulheres obesas (OB) e por um grupo controle composto por 55 mulheres eutróficas (CON). Amostras de sangue e urina de 24 horas foram coletadas para análise de zinco, malondialdeído (MDA), 8-isoprostano urinário, atividade antioxidante das enzimas superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx). Foram avaliados dois polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) presentes nas enzimas SOD1 e SOD3, o +35A/C e Arg213Gli. Foram aplicados três recordatórios alimentares de 24 horas, incluindo um dia de final de semana. As comparações entre os grupos foram feitas pelos testes qui-quadrado, t-Student, ANOVA e Mann-Whitney. As associações entre as variáveis quantitativas foram realizadas por meio do coeficiente de correlação r de Pearson. Modelo de regressão linear multivariada backward foi feito a fim de se analisar as regressões das variáveis desfecho zinco plasmático, MDA e 8-isoprostano. O equilíbrio de Hardy-Weinberg foi calculado pelo teste do qui-quadrado. A média da ingestão de zinco foi de 6,8 mg/dia e 7,4 mg/dia no grupo CON e OB, respectivamente. As concentrações de Zn plasmático e eritrocitário e a atividade das enzimas SOD e GPx não apresentaram diferença entre os grupos. Ambos os grupos apresentaram deficiência no Zn plasmático. As concentrações de MDA e 8-isoprostano foram maiores no grupo CON, enquanto as concentrações de creatinina e Zn urinários foram maiores no grupo OB. No grupo CON, foram verificadas associações negativas entre Zn plasmático e MDA (p=0,002) e glicemia (p<0,0001). A regressão multivariada mostrou correlação negativa entre o Zn plasmático e o MDA. O 8-isoprostano sofreu influência negativa da creatinina urinária e positiva da atividade física. Já a glicemia e o consumo de energia e de lipídio apresentaram correlação positiva com o MDA. Na análise dos SNPs, foram encontradas apenas duas participantes heterozigotas para o SNP +35A/C e nenhuma participante com o alelo variante para o SNP Arg213Gli. Concluiu-se que os indivíduos obesos e eutróficos apresentaram deficiência de Zn, o que pode estar relacionado ao estresse oxidativo. O estresse oxidativo foi mais intenso para o grupo controle e não foi observada associação entre o IMC e os marcadores MDA e 8-isoprostano. Não foi possível fazer correlação dos polimorfismos com os parâmetros avaliados / The aim of this study was to assess the nutritional zinc status and its association with oxidative stress markers and with polymorphisms in genes of SOD1 and SOD3 in obese women. The sample consisted of 60 obese women (OB) and a control group of 55 normal-weight women (CON). Blood samples and 24-hour urine were collected for analysis of zinc, malondialdehyde (MDA), urinary 8-isoprostane, antioxidant activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx). Two single nucleotide polymorphisms (SNP) were evaluated in the genes of SOD1 and SOD3 enzymes, +35A/C and Arg213Gly. Three food 24-hour recalls, including one weekend day were applied. Comparisons between groups were made by chi-square test, Student\'s t - test, ANOVA and Mann-Whitney. Associations between means of quantitative variables were performed by the correlation coefficient r of Pearson. Backward multivariate linear regression was done in order to analyze the regressions of outcome variables plasma zinc, MDA and 8-isoprostane. The Hardy-Weinberg equilibrium was calculated by chi-square. The mean zinc intake was 6.8 mg/day and 7.4 mg/day in CON and OB groups, respectively. Concentrations of plasma and erythrocyte Zn and activity of SOD and GPx enzymes showed no difference between groups. Both groups showed a deficiency in plasma Zn. The concentrations of MDA and 8-isoprostane were higher in the CON group, whereas the concentrations of creatinine and urinary Zn were higher in the OB group. In the CON group, negative associations between plasma Zn and MDA (p = 0.002) and glucose (p < 0.0001) were observed. Multivariate regression analysis showed a negative correlation between plasma Zn and MDA. The 8-isoprostane suffered negative influence of urinary creatinine and positive influence of physical activity. Blood sugar and energy and lipid consumption showed a positive correlation with MDA. In the analysis of SNPs, were found only two heterozygous participants for the SNP +35A/C and no participant with the variant allele for the SNP Arg213Gly. It was concluded that obese and normal subjects showed Zn deficiency, which may be related to oxidative stress. Oxidative stress was higher in the control group and no association was observed between BMI and MDA and 8-isoprostane markers. It was not possible to correlate polymorphisms with evaluated parameters.

Este trabalho teve como objetivo analisar os efeitos fisiológicos do herbicida Paraquat, indutor de estresse oxidativo, em plantas de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.). A escolha desta espécie como modelo fisiológico deste estudo deveu-se a sua importância econômica para o país, em especial para o Estado de São Paulo. O Paraquat (PQ) é um herbicida de contato que atua especificamente no Fotossistema II bloqueando o fluxo de elétrons e impedindo a redução do NADPH, aceptor final de elétrons. Como consequência, há a formação de radicais instáveis, reativos com a molécula de oxigênio (EROs), os quais causam danos em membranas, proteínas e ácidos nucleicos. A hipótese central foi a de que a atividade de peroxidase de ascorbato é mais sensível ao PQ do que a atividade de superóxido dismutase, nas mesmas condições. O experimento principal consistiu da aplicação, via pulverização foliar, de diferentes doses de PQ (0, 2, 4, 6 e 8 mM de Metil Violágeno, agente ativo), que permaneceu em contato por 24 e 48 horas. Após 18 horas de exposição, observou-se sintomas visuais de toxocidade e uma redução significativa da atividade fotossintética, medida através de parâmetros relacionados com a fluorescência da clorofila a. O nível de peroxidação de lipídeos, indicado pela concentração de TBARS, foi aumentado, indicando danos nas membranas causados pela geração de EROs. Um resultado importante foi o aumento da atividade específica de SOD (Superóxido Dismutase), primeira enzima de defesa contra EROs. Esse aumento foi gradativo com o aumento da dose e do tempo de exposição ao PQ. A isoforma mais evidente foi a SOD Cu/Zn, visualizada por atividade em gel nativo. Esta isoforma está presente preferencialmente em cloroplastos, organela alvo da ação do PQ. É importante ressaltar que mesmo em doses quase letais, a atividade desta enzima manteve-se em níveis semelhantes ao controle. Entretanto, a atividade de APX (Ascorbato Peroxidase), enzima que faz a remoção de radicais H2O2, gerados pela SOD, foi reduzida abruptamnete a partir de 4 mM PQ, apesar de ter sido observado um aumento na dose inicial (2 mM). Este fato sugere que os danos oxidativos em cana-de-açúcar tratadas com PQ podem ser causados pelo excesso de radicais H2O2. Diferente da SOD, a APX é considerada bastante susceptível a certos tipos de estresse ambiental, logo perdendo sua atividade. Analisou-se também a expressão de proteínas por SDS-PAGE e eletroforese 2-D. Em ambos resultados, foram observados diminuição na expressão de algumas proteínas ocasionada pelo tratamento com PQ. Contudo, não foi possível detectar claramente a indução de peptídeos nesse caso, provavelmente devido ao alto grau de degradação das estruturas celulares. O aumento da atividade de SOD em cloroplastos de folhas de cana-de-açúcar tratadas com PQ, deve ser mais estudado, pois esta pode ser uma enzima alvo para programas de melhoramento genético visando obtenção de plantas com resistência ao PQ e a outros herbicidas com modo de ação no sistema fotossintético. / This work had the objective to analyze physiological effects of Paraquat herbicide, an oxidative stress inductor, in sugarcane (Saccharum officinarum L.) plants. The choice to use this species as a physiological model for this study was due its recognized economical importance for our country, in special to the State of Sao Paulo. Paraquat (PQ) is a contact herbicide that acts specifically on Photosystem II by blocking the normal electron flux and the reduction reaction of NADPH, the electron acceptor molecule. As consequence, there is formation of instable radicals and highly reactive oxygen species (ROS), which cause damage to membranes, proteins and nucleic acids. The central hypothesis was that ascorbate peroxidase activity is more sensitive to PQ than the activity of superoxide dismutase in the same conditions. The main experiment consisted on the sprayed of different concentrations of PQ (0, 2, 4, 6 e 8 mM of Metil Violagen) that stayed in leaf contact for 24 and 46 hours. After 18 hours, it was observed visible symptoms of toxicity and the photosynthetic activity decreased, measured by chlorophyll a fluorescence. Also, the level of lipids peroxidation measured by the increase concentration of TBARS formation, indicate damage to cell membrane caused by the generation of ROS. An important result was the increase of SOD specific activity (superoxide dismutase) first enzyme related to defense against ROS. This gradation increase was correspondent to the exhibition period to PQ. The most evident SOD isoform by native PAGE was the SOD Cu/Zn. This isoform is located preferentially in chloroplasts, organelle target to the action of PQ. It is important to remark that even in almost lethal concentrations of PQ the chloroplast SOD activity still remains expressed beilng responsible for the removal of H2O2 generated by SOD, which was reduced abruptly after 4 mM treatment. Although, it has been observed increase with the initial dose (2 mM). This fact suggests that the oxidative damages in sugarcane treated with PQ can be caused by excess of H2O2. Differently of SOD, this enzyme is considered to be fragile to certain kinds of environmental adversities, loosing its activity Also the protein expression was analyzed by SDSPAGE and 2-D electrophoresis. In both analyses, it was observed decrease of some protein expression caused by PQ. However, it was not possible to clearly detect peptides induction in this case, probably due to the elevated level of degradation of cell structures. The increase of chloroplast SOD activity in sugarcane leaves treated with PQ should be detailed investigated since it can be a molecular target for breeding programs with the goal to obtain plants with an acquired resistance to PQ or others herbicides with model action in the photochemical system.

O estresse oxidativo reflete um desequilíbrio na manutenção do estado redox intracelular que pode resultar no acúmulo de espécies oxidantes. Nestas condições, estas espécies podem gerar danos na estrutura/função do DNA, disfunções mitocondriais, alterações no enovelamento de proteínas, peroxidação de lipídeos, dentre outros danos. Assim, o estresse oxidativo pode contribuir para diversas condições patológicas, como por exemplo, câncer, desordens neurológicas, aterosclerose, diabetes e asma. A infecção persistente por papilomavírus humano (HPV) de alto risco está etiologicamente associada ao câncer de colo uterino, uma das principais causas de morte por câncer em mulheres no mundo todo. Além disso, esses vírus estão associados a uma porcentagem relevante de cânceres de pênis, vulva, ânus e cabeça e pescoço. Em células infectadas por HPV de alto risco oncogênico, o estresse oxidativo resultante do metabolismo anormal dos queratinócitos e a resposta inflamatória crônica não efetiva, podem contribuir no processo de transformação celular. Além disso, a presença das oncoproteínas E6 e E7 interfere nos mecanismos de reparo de lesões em DNA, favorecendo o acúmulo de mutações. Ainda mais, a instabilidade genômica promovida pelo estresse oxidativo, pode favorecer a integração do HPV no genoma das células infectadas, principal causa da persistência viral e progressão de lesões ao câncer. A proteína superóxido dismutase 2 (SOD2) contribui com a homeostase celular ao catalisar a dismutação de radicais ânion superóxido em oxigênio e peróxido de hidrogênio, prevenindo a inativação direta de biomoléculas. Em estudos anteriores, observamos que o aumento do transcrito de SOD2 está associado à resistência ao efeito antiproliferativo do fator de necrose tumoral (TNF) em células imortalizadas por HPV. Além disso, mostramos que existe uma correlação direta entre o aumento dos níveis da proteína SOD2 e a severidade de lesões da cérvice uterina. Finalmente, identificamos SOD2 como um marcador preditivo independente de metástases linfonodais inguinais em pacientes com carcinoma de pênis. No entanto, o papel desta proteína na patogênese associada ao HPV não tem sido estudado em profundidade. O presente estudo visa determinar o envolvimento de SOD2 no processo de transformação celular mediado por HPV e seu valor como marcador preditivo de patologias associadas a este vírus / Oxidative stress reflects a redox imbalance in the cell in favor of oxidant species, which may result in DNA damage, mitochondrial dysfunction, protein misfolding and lipid peroxidation, among others. As a result, oxidative stress is thought to contribute to diverse pathologies such as cancer, neurological disorders, atherosclerosis, diabetes and asthma. Persistent infection with high risk human papillomavirus (HPV) types is etiologically associated with cervical cancer, one of the leading causes of cancer related female death worldwide. Moreover, HPV infection is associated with a significant percentage of penile, vulvar, anal and head and neck carcinomas. In cells infected with high-oncogenic risk HPV types the oxidative stress generated by the abnormal keratinocytes metabolism and non-efficient chronic inflammatory response may contribute to the cellular transformation process. Furthermore, expression of E6 and E7 oncoproteins interferes with several DNA repair mechanisms, favoring the accumulation of mutations. Moreover, genomic instability promoted by oxidative stress may favor HPV integration in host cell genome, the main cause of viral persistence and of precursor lesions progression to cancer. The protein superoxide dismutase 2 (SOD2) contributes to cellular homeostasis by catalyzing radical super anion dismutation in oxygen and oxygen peroxide preventing the direct inactivation of biomolecules. In previous studies we observed that SOD2 mRNA upregulation is associated with the resistance to tumor necrosis factor (TNF) antiproliferative effect in HPV-immortalized cells. Besides, we showed the existence of a direct correlation between increased SOD2 protein expression and cervical lesions severity. Finally, we identified SOD2 as an independent predictive marker of inguinal lymph node metastases in patients with penile carcinomas. However, the role of this protein in HPV-associated pathologies has not been investigated in depth. The goal of this study is to determine the involvement of SOD2 in HPV-mediated cell transformation and its value as a predictive marker in pathologies caused by this virus

Orientadores: Luiz Carlos Zeferino, Silvia Helena Rabelo dos Santos / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burger_MarianaGenaro_M.pdf: 2615876 bytes, checksum: 488a52bb185fe37468bb4b59d9eb01b6 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O papel da proteína SOD2 na carcinogênese e progressão tumoral, particularmente no carcinoma de células escamosas do colo uterino, continua a ser o objeto de incerteza e controvérsia. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a variabilidade na expressão da proteína SOD2 em cortes histológicos de epitélio cervical. Este estudo transversal incluiu 277 mulheres com indicação de procedimento conização ou excisão da zona de transformação devido a suspeita de NIC 2 ou lesão mais grave. A expressão SOD2 foi avaliada por ensaios de imunoistoquímicos realizados com base na porcentagem de células coradas em áreas representativas do diagnóstico histopatológico. A expressão positiva, independentemente da intensidade foi positivamente associada com o diagnóstico de NIC2/ NIC3 (OR = 2,64; 1,57-4,60) e carcinoma (OR = 14,32; 4,08-50,26). Tomando expressão SOD2 como referência para casos de NIC2/ NIC3, observou-se que a expressão positiva, independentemente da intensidade foi positivamente associada com um diagnóstico de carcinoma (OR = 5,33; 1,56-18,25). Observou-se que a expressão intensa SOD2 foi positivamente associada com o diagnóstico de NIC2/ NIC3 (OR = 7,31; 1,68-31,86) e carcinoma (OR = 36,63; 7,76-172,85). Quando a expressão de SOD2 foi tomada como referência para casos NIC2/ NIC3, observou-se que a expressão intensa foi positivamente associada com um diagnóstico de carcinoma (OR = 5,01; 2,24-11,20). Expressão SOD2 é observada com maior frequência e mais intensa em NIC2/ NIC3 e carcinoma espinocelular do que em tecido normal / NIC 1 . Além disso, a expressão SOD2 também é mais frequente e intensa em carcinomas do que em NIC2/ NIC3. Embora NIC2/ NIC3 e carcinomas invasivos iniciais são lesões contíguas na carcinogênese cervical, a expressão SOD2 pode diferenciá-los / Abstract: The role of SOD2 protein in carcinogenesis and tumor progression, particularly in squamous cell carcinoma of the uterine cervix, remains the object of uncertainty and controversy. Therefore this study aimed to evaluate the variability in SOD2 protein expression in histological specimens from cervical epithelium. This study cross-sectional study included 277 women with indication of conization procedure or transformation zone excision due to suspicion of CIN 2 or more severe lesion. The SOD2 expression was assessed by performed immunohistochemical assays based on the percentage of stained cells in representative areas of the histopathological diagnosis. Positive expression regardless of intensity was positively associated with a diagnosis of CIN2/CIN3 (OR=2.64; 1.57- 4.60) and carcinoma (OR=14.32; 4.08-50.26). Taking SOD2 expression as a reference for cases of CIN2/CIN3, it was observed that a positive expression, regardless of intensity was positively associated with a diagnosis of carcinoma (OR=5.33; 1.56-18.25). It was observed that intense SOD2 expression was positively associated with a diagnosis of CIN2/CIN3 (OR=7.31; 1.68-31.86) and carcinoma (OR=36.63; 7.76-172.85). When SOD2 expression was taken as a reference for CIN2/CIN3 cases, it was observed that intense expression was positively associated with a diagnosis of carcinoma (OR=5.01; 2.24-11.20). SOD2 expression is most frequently observed and more intense in CIN2/CIN3 and squamous carcinoma than in normal tissue/CIN 1. In addition, SOD2 expression is also more frequently observed and intense in carcinoma than in CIN2/CIN3. Although CIN 2/CIN 3 and early invasive carcinomas are contiguous lesions in cervical carcinogenesis, SOD2 expression can differentiate them / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-18T15:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maciel_RaquelApratto_M.pdf: 938949 bytes, checksum: 248a32d15aed7abd02f0ac036eb29872 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As doenças cardiovasculares ocupam o primeiro lugar em causas de morte no mundo e, segundo pesquisas, estas podem estar associadas ao estresse oxidativo - desequilíbrio entre produção de radicais livres e defesas antioxidantes. O tratamento e prevenção não farmacológico, dessas doenças, preconizado pela Organização Mundial da Saúde (OMS), considerando os hábitos alimentares, consiste em aumentar o consumo de frutas, hortaliças, cereais integrais e grãos, devido as suas propriedades antioxidantes, assim como aos efeitos fisiológicos das fibras alimentares também presentes nessas fontes alimentares. Por outro lado, estudos mostram que algumas substâncias xenobióticas podem estar presentes nos alimentos, como por exemplo, os inseticidas piretróides, aumentando o risco do desenvolvimento ou agravamento de alterações cardiovasculares e, ao mesmo tempo, desestruturando as defesas antioxidantes e produzindo radicais livres nocivos às células, colocando em risco a saúde humana. É inquestionável a necessidade do uso de agrotóxicos na produção agrícola, em programas de saúde pública, na saúde animal, bem como na silvicultura. O não cumprimento da legislação em vigor tem sido uma realidade preocupante, pois coloca em risco a saúde dos trabalhadores que manipulam essas substâncias, as pessoas que consomem os alimentos e o ecossistema. Assim, pesquisas que dimensionem os efeitos adversos que os agrotóxicos podem causar na saúde humana, contribuem com o cumprimento da legislação específica e, até mesmo, na atualização da mesma. Este trabalho teve por objetivo avaliar a exposição aguda, por via oral, de deltametrina, agrotóxico da classe dos piretróides, na excitação e condução cardíaca e no estresse oxidativo em ratos Wistar machos adultos, através de parâmetros eletrocardiográficos e da atividade de enzimas antioxidantes nos tecidos cardíacos e hepáticos. O plano de trabalho consistiu na administração aguda, por gavagem, de deltametrina (DMT), com os animais distribuídos em 4 grupos, com 10 animais,pesando em média 200 ± 10g cada, assim constituídos: 1) Grupo controle (5 mL de óleo de milho); 2) Grupo DMT10 [10% do valor da DL50 da deltametrina (3,2 mg/5mL de óleo de milho)]; 3) Grupo DMT25 [25% do valor da DL50 da deltametrina (8 mg/5mL de óleo de milho)]; 4) Grupo DMT100 [100% do valor da DL50 de deltametrina (32mg/mL de óleo de milho)]. No início do ensaio, foi introduzida uma sonda de gavagem nos ratos. Logo após, os animais foram submetidos à anestesia para realização do eletrocardiograma (ECG). Após 5 min de início dos registros do ECG, a DMT foi administrada através de gavagem, conforme o planejamento experimental de cada grupo, registrando-se o ECG por mais 30 min. Após, fez-se o sacrifício dos animais por aprofundamento da anestesia. Foram retirados o fígado e o coração para mensurar a atividade das enzimas: catalase, superóxido dismutase, fosfatase alcalina, glutationa S-transferase e quantificação da glutationa reduzida e do produto da peroxidação lipídica malondialdeído. A deltametrina alterou a condutividade elétrica do coração. O eletrocardiograma mostrou redução significativa da frequência cardíaca e aumento do intervalo RR, indicando bradicardia. Também foi constatado aumento da duração do complexo QRS e redução da amplitude da onda R, o que sugere alterações na excitação ventricular. A amplitude P não foi significativamente diferente, mostrando que a excitação e a condução elétrica atrial não foram prejudicadas. Da mesma forma, os intervalos QT e QTc não foram alterados significativamente, embora o grupo DMT100 para o intervalo QT tenha se mostrado elevado, descartando-se assim, o risco de morte súbita. O segmento ST apresentou infradesnivelamento progressivo, embora não significativo. A onda T mostrou-se positiva e sem alterações significativas, não podendo assim sugerir possibilidade de isquemia miocárdica induzida por deltametrina. As análises bioquímicas mostraram que a deltametrina provocou estresse oxidativo tanto no fígado como no coração. A lipoperoxidação ocorreu nos hepatócitos e não parece ter ocorrido nos miócitos. No fígado, o estresse oxidativo foi confirmado pelo aumento significativo da atividade das enzimas glutationa S-transferase e fosfatase alcalina, aumento da concentração da glutationa reduzida, e significativa redução da atividade das enzimas superóxido dismutase e catalase. Já no coração, o estresse oxidativo foi evidenciado pelo significativo aumento da atividade da catalase e redução significativa da superóxido dismutase e glutationa S-transferase, assim como, pelo aumento da concentração da enzima glutationa reduzida. Em conclusão, este trabalho constatou que a deltametrina, administrada por via oral, diferentes dosagens, em ratos Wistar, causou aumento do estresse oxidativo e este pode ter ocasionado alterações na condução e excitação cardíaca verificadas no presente estudo / Abstract: Cardiovascular diseases are in the first rank among causes of death in the world and, according to researches, they can be associated with oxidative stressimbalance between free radicals productions and antioxidant defenses. The treatment and non-pharmacological prevention of these diseases, advocated by the World Health Organization (WHO), consist in to increase consumption of fruits, vegetables, whole grains and beans, because of their antioxidant properties and the physiological effects of dietary fiber also present on those foods. On the other hand, studies have shown that some xenobiotic substances may be present in food, such as pyrethroid insecticides, increasing the risk of development or aggravation of cardiovascular alterations and, at the same time, destabilizing the antioxidant defenses and producing free radicals which are harmful to cells, endangering human health. There is no doubt about the necessity of the use of pesticides in agricultural production, in public health programs, animal health, as well as in forestry. The non-compliance with the legislation in force has been a troubling reality because it puts in risk the health of workers who handle those substances, the people who consume foods and the ecosystem. Researches that evaluate the harmful effects that pesticides can cause to the human health, contribute to the fulfilling of the specific legislation and, even, in the update of it. This work aims to evaluate the acute oral exposure of deltamethrin, a pyrethroid pesticide, on the excitation system of the heart and on the oxidative stress in adult male Wistar rats, by means of electrocardiographic parameters, and antioxidant enzymes in liver and heart tissues, respectively. The work consisted on the acute administration, by gavagem, of deltamethrin (DMT), to animals distributed in 4 groups, containing 10 animals each, as follows: 1) Control Group (5 mL of corn oil); 2) DMT10 Group [10% of the LD50 value of deltamethrin (3,2mg/5mL corn oil)]; 3) DMT25 Group [25% of the LD50 value of deltamethrin (8 mg/5mL corn oil)]; 4) DMT100 Group [100% of the LD50 value of deltamethrin (32mg/mL corn oil)]. At the beginning of the assay, it was introduced in the rats a probe of gavagem. Soon after, the animals were subjected to anesthesia for conduction of the electrocardiogram (EGC). After 5 minutes of the beginning of the ECG record, the deltamethrin was administered via gavagem, accordingly to the experimental planning of each group, and the ECG recorded for additional 30 minutes. Upon completion of the ECG recording, the rats were killed by deepening of anesthesia. The liver and heart were withdrawn to measure the activity of the enzymes: catalase, superoxide dismutase, glutathione transferase, alkaline phosphatase, as well as of the quantification of the malondialdehyde biomarker and reduced glutathione. Deltamethrin was capable of changing the electrical conductivity of heart. The electrocardiogram showed significant reduction of the heart rate and increase of the RR interval, indicating bradycardia. It was also found to increase of the duration QRS complex and reduction of the R wave amplitude, which means that there were alterations in ventricular excitation. The P amplitude was not significantly different, showing that arousal and atrial electrical conduction was not impaired. Similarly, the QT and QTc intervals were not altered significantly, although has been shown high of the group DMT100, discarding the risk of sudden death. The ST segment depression showed a progressive, though not significant. The T wave was positive and no significant changes and therefore can not suggest the possibility of myocardial ischemia induced by deltamethrin. Biochemical analysis showed that deltamethrin causes oxidative stress in both liver and heart. Lipid peroxidation occurred in hepatocytes and not observed in myocytes and this is confirmed by checking the increased activity of the alkaline phosphatase, glutathione s-transferase and reduced activity of the superoxide dismutase and catalase and increased of concentration of the reduced glutathione in the liver. In the heart, oxidative stress has been shown by increased activity of the catalase, increased concentration of the glutathione reduced and reduced activity of the superoxide dismutase and glutathione s-transferase. In conclusion, this study found that deltamethrin administered orally at different doses in rats, caused increased oxidative stress and this may have caused changes in cardiac excitation conduction and verified / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Vitamin C is used in the diets in order to improve growth, resistance to stress and disease, as well as the survival of fish. It can also be effective in the conservation of fish during processing and storage, inhibiting the degradation of lipids by oxidation. This study evaluated the stocking density and the effects of supplementation of vitamin C in the final quality of the fillet tilapia (Oreochromis nilotius, Linneaus, 1875). We used one hundred and twenty fingerlings for each trial, the study of fish stocking density had an initial weight of 4.0 g and evaluation of supplementation with vitamin C, 11.0 g. Both studies had a randomized design, comprising four treatments of different stocking densities (50, 75, 100 and 125 fish/m3) with five replications. Already working with vitamin C (ascorbic acid 2 - sulfate acid - protected form) was carried out in four treatments with six replicates, characterized by four levels of supplementation of vitamin C in the diets (250, 500 and 750 mg/kg diet) and control group (zero mg/kg diet) with two different stocking densities (50 and 100 fish/m3). The ration given to the first study contained 36% crude protein and 3100 kcal/DE/kg feed and the second was 28% crude protein and 3400 kcal/DE/kg. After ninety days, the fish were slaughtered and evaluated the growth performance parameters for the study of stocking density, chemical composition, cholesterol content, fatty acid profile, quality of lipid fraction in both studies. The liver of fish from the second stage of labor was frozen at - 80°C for lipid peroxidation analysis and determination of enzyme activity of oxidative stress (catalase and superoxide dismutase). It follows that for the study of stoking significant difference ρ <0.05 between the final average weight and total weight gain between the different densities tested, the highest weight was found in the group density of 75 fish/m3. The body composition analysis, differences were observed ρ <0.05 between the densities on moisture, total lipid content, protein, calories and cholesterol. The ratio polyunsaturated / saturated was higher in density of 11.76 for 100 fish/m3, since the density of 50 fish/m3 presented a sum of 6.85 for the levels of EPA + DHA. In assessing the nutritional quality of lipids, the densities studied showed the contents of n-6/n-3, hypocholesterolemic/hypercholesterolemic index of polyunsaturated fatty acids of atherogenicity and index of thrombogenicity as favorable for consumption. Fish reared at a density of 50 fish/m3 can be seen as a good food from a nutritional standpoint, they presented a good level of fatty acids, especially omega-3 fatty acid and its value in hypocholesterolemic/hypercholesterolemic. Regarding the second stage of labor was observed difference ρ<0.05 between the levels of vitamin C supplementation levels in total lipid content, crude protein, calories and cholesterol. The ratio polyunsaturated/saturated was higher in the supplementation level of 250 mg of vitamin C (1.26), since the level of 500 mg of vitamin C showed a sum of 6.48 for the levels of EPA + DHA. In assessing the nutritional quality of lipids, the levels of vitamin C study showed rates of n-6/n-3, hypocholesterolemic / hypercholesterolemic index of atherogenicity and index of thrombogenicity for subsequent food consumption. Fish reared with diets supplemented with 750 mg of vitamin C in the density of 50 fish/m3 can be seen as a good food from a nutritional standpoint, they presented a good level of fatty acids, especially omega-3 fatty acid and its value in hypocholesterolemic/hypercholesterolemic. In the study of redox balance results showed that there was an increase in lipid peroxidation, suggesting that there may have been damage to the liver of animals and the antioxidant defenses were not sufficient to prevent oxidative stress. Density of 50 fish/m3, the dietary supplementation with vitamin C can be pro-oxidant. Since the density 100 fish/m3, vitamin C supplementation may be an antioxidant. The catalase activity of the enzyme showed low activity, suggesting an impairment in hepatic redox balance for this enzyme in animals receiving diets containing different levels of vitamin C. Since superoxide dismutase activity of the enzyme showed high activity, suggesting a redox balance in protecting liver for this enzyme in animals receiving diets containing different levels of vitamin C. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A vitamina C é usada nas dietas com a finalidade de melhorar o crescimento, a resistência ao estresse e às doenças, assim como a sobrevivência de peixes. Também pode ser eficiente na conservação do pescado durante o processamento e estocagem, inibindo a degradação dos lipídeos pela oxidação. O presente trabalho avaliou a densidade de estocagem e os efeitos da suplementação de vitamina C na qualidade final do filé de Tilápia-do-Nilo (Oreochromis nilotius, Linneaus, 1875). Foram utilizados cento e vinte alevinos para cada estudo, sendo que os peixes do estudo da densidade de estocagem tinham peso inicial de 4,0 g e os da avaliação com a suplementação de vitamina C de 11,0 g. O delineamento inteiramente casualizado foi utilizado em ambos os estudos perfazendo quatro tratamentos de diferentes densidades de estocagem (50, 75, 100 e 125 peixes/m3) com cinco repetições. Já o trabalho com a vitamina C (ácido 2 - sulfato ascórbico - forma protegida) foi realizado em quatro tratamentos com seis repetições, caracterizado pela suplementação de quatro níveis de vitamina C nas rações (250, 500 e 750 mg/kg de ração) e o grupo controle (zero mg/kg de ração) com duas diferentes densidades de estocagem (50 e 100 peixes/m3). A ração fornecida para o primeiro estudo continha 36% de proteína bruta e 3100 kcal/energia digestiva/kg de ração e a segunda tinha 28% de proteína bruta e 3400 kcal/energia digestiva/kg. Após noventa dias, os peixes foram abatidos e foram avaliados os parâmetros de desempenho zootécnico para o estudo de densidade de estocagem, composição centesimal, teor de colesterol, perfil de ácidos graxos, qualidade da fração lipídica para ambos os estudos. O fígado dos peixes da segunda etapa do trabalho foi congelado a – 80ºC para análises de peroxidação lipídica e determinação da atividade das enzimas do estresse oxidativo (catalase e superóxido dismutase). Conclui-se que para o estudo de densidade de estocagem houve diferença significativa ρ<0,05 entre o peso médio final e no ganho de peso total entre as diferentes densidades populacionais testadas; o maior peso foi encontrado no grupo de densidade de 75 peixes/m3. Quanto à análise da composição corporal observou-se diferença ρ<0,05 entre as densidades nos teores de umidade, lipídeos totais, teor de proteína bruta, valor calórico e de colesterol. A relação poliinsaturados/saturados foi mais elevada na densidade de 100 peixes/m3 de 11,76, já a densidade de 50 peixes/m3 apresentou uma somatória de 6,85 para os teores de ácido eicosapentaenóico + ácido docosahexaenóico. Na avaliação da qualidade nutricional dos lipídeos, as densidades estudadas mostraram os índices de n-6/n-3, hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos, índice de ácidos graxos poliinsaturados de aterogenicidade e índice de trombogenicidade como favoráveis para consumo alimentar. Os peixes criados na densidade de 50 peixes/m3 podem ser considerados como um bom alimento do ponto de vista nutricional, pois apresentaram um bom teor de ácidos graxos, principalmente de ácido ômega-3 e pelo seu valor em hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos. Com relação à segunda etapa do trabalho foi observado diferença ρ<0,05 entre os níveis de suplementação da vitamina C nos teores de lipídeos totais; teor de proteína bruta; valor calórico e de colesterol. A relação poliinsaturados/saturados foi mais elevada no nível de suplementação de 250 mg de vitamina C (1,26), já o nível de 500 mg de vitamina C apresentou um somatório de 6,48 para os teores de ácido eicosapentaenóico + ácido docosahexaenóico. Na avaliação da qualidade nutricional dos lipídeos, os níveis de suplementação de vitamina C estudados mostraram os índices de n-6/n-3, hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos, índice de aterogenicidade e índice de trombogenicidade favoráveis quanto ao consumo alimentar. Os peixes criados com ração suplementada com 750 mg de vitamina C na densidade de 50 peixes/m3 podem ser considerados como um bom alimento do ponto de vista nutricional, pois apresentaram um bom teor de ácidos graxos, principalmente de ácido ômega-3 e pelo seu valor em hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos. Já no estudo do balanço redox os resultados mostraram que houve aumento na peroxidação lipídica, sugerindo que podem ter existido danos ao fígado dos animais e as defesas antioxidantes não foram suficientes para evitar o estresse oxidativo. Na densidade de 50 peixes/m3, a ração suplementada com vitamina C pode ser pró-oxidante. Já na densidade 100 peixes/m3, a vitamina C suplementada pode ser antioxidante. A atividade da enzima catalase apresentou uma baixa atividade, sugerindo um comprometimento no balanço redox hepático para esta enzima nos animais submetidos à ração com diferentes níveis de suplementação de vitamina C. Já atividade da enzima superóxido dismutase apresentou elevada atividade, sugerindo uma proteção no balanço redox hepático para esta enzima nos animais submetidos à ração com diferentes níveis de suplementação de vitamina C.

Aldeídos de colesterol (Secosterol A e Secosterol B) têm sido detectados em amostras de cérebro humano e investigados em modelos de doenças neurodegenerativas como possíveis marcadores e intermediários do processo patológico. Estes oxisteróis constituem uma classe de eletrófilos derivados de lipídeos que podem modificar e induzir agregação de proteínas. A esclerose lateral amiotrófica (ELA) é um distúrbio neurodegenerativo associado ao acúmulo de agregados imunorreativos de superóxido dismutase (Cu, Zn-SOD, SOD1). O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de aldeídos de colesterol em ratos modelo ELA e sua capacidade de induzir a formação de agregados de SOD1 in vitro. Aldeídos de colesterol foram analisados no plasma, medula espinhal e córtex motor de ratos ELA. Uma quantidade elevada de Secosterol B foi detectada no córtex motor desses ratos em comparação com animais controle. Adicionalmente, os experimentos in vitro mostraram que Secosterol B e Secosterol A induziram a agregação da SOD1 em uma forma amiloidogênica que se liga à tioflavina T. Esta agregação não foi observada com o colesterol e os seus hidroperóxidos. Usando aldeídos de colesterol marcados com grupo alquinil e um ensaio de click chemistry, foi observado que os agregados de SOD1 estão ligados covalentemente aos aldeídos. A modificação covalente da proteína foi confirmada por análise de MALDI-TOF, que mostrou a adição de até cinco moléculas de aldeídos de colesterol à proteína por base de Schiff. Curiosamente, a análise comparativa com outros eletrófilos derivados de lipídeos (e.g. HHE e HNE) demonstrou que a agregação de SOD1 aumentou proporcionalmente à hidrofobicidade dos aldeídos, observando-se a maioragregação com aldeídos de colesterol. Os sítios de modificação da SOD1 foram caracterizados por nanoLC-MS/MS após digestão da proteína com tripsina, onde foram identificadas lisinas como o principal aminoácido modificado. Em geral, nossos dados mostram que a oxidação do colesterol que leva à produção de aldeídos de colesterol é aumentada no cérebro de ratos ELA e que os aldeídos altamente hidrofóbicos derivados de colesterol podem promover eficientemente modificação e agregação de SOD1. / Secosterol aldehydes (Secosterol B and Secosterol A) have been detected in human brain samples and investigated in models of neurodegenerative diseases as possible markers and intermediates of the pathological process. These oxysterols constitute a class of lipid-derived electrophiles that can modify and induce aggregation of proteins. Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disorder associated with the accumulation of immunoreactive aggregates of superoxide dismutase (Cu, Zn-SOD, SOD1). The objective of this work is to evaluate the presence of secosterol aldehydes in ALS rats and their ability to induce formation of SOD1 aggregates in vitro. Secosterol aldehydes were analyzed in plasma, spinal cord and motor cortex of ALS rats. A higher amount of Secosterol B was detected in the motor cortex of these rats compared to control animals. In addition, in vitro experiments have shown that Secosterol B and Secosterol A induce aggregation of SOD1 into an amyloidogenic form that binds to thioflavin T. This aggregation was not apparent in incubations with cholesterol and its hydroperoxides. Using alkynyl-labeled secosterol aldehydes and a click chemistry assay, it was found that the SOD1 aggregates are covalently linked to the aldehydes. Covalent modification of the protein was confirmed by MALDI-TOF analysis, which showed the addition of up to five molecules of secosterol aldehydes to the protein by Schiff base formation. Interestingly, the comparative analysis with other lipid-derived electrophiles (e.g. HHE and HNE) demonstrated that the aggregation of SOD1 increased according to the hydrophobicity of the aldehydes. Compared to the other electrophiles, a higher SOD1 aggregation was observed with secosterol aldehydes. SOD1 modification sites were characterized by nanoLC-MS/MS afterprotein digestion with trypsin, revealing lysine as the major amino acid modified in these experiments. Collectively, our data show that cholesterol oxidation leads to the production of secosterol aldehydes, which are increased in the brain of ALS rats, and that these highly hydrophobic aldehydes can efficiently promote the modification and aggregation of SOD1.

A emergência rápida e uniforme de plântulas em campo constituem pré-­ requisitos essenciais para o sucesso da produção comercial de sementes de hortaliças. Um dos principais problemas enfrentados por produtores de pimentão refere-­se à germinação lenta e estabelecimento de estande desuniforme, o que ressalta a importância do desenvolvimento de técnicas que visem aprimorar o desempenho de lotes de sementes. Com o objetivo de verificar a eficiência do condicionamento fisiológico de sementes de pimentão associado a biorreguladores sobre o potencial fisiológico das sementes, foi desenvolvida esta pesquisa utilizando dois cultivares, AF-6 e AF-7, representados por três e quatro lotes de sementes, respectivamente. Foram investigados possíveis efeitos do condicionamento com 24- epibrassinolídeo, ácido giberélico ou o bioestimulante Stimulate&reg;. As sementes foram avaliadas quanto à germinação e vigor, incluindo observações de atividade enzimática das sementes e análises de parâmetros de crescimento de plântulas utilizando o software SVIS&reg;. Por fim, o tratamento considerado promissor, condicionamento com 24-epibrassinolídeo na concentração de 10-8 M, foi avaliado quanto ao crescimento radicular das plantas, eficiência pela utilização do condicionamento em sistema de tambor, e comportamento das sementes durante o armazenamento. Diversos benefícios foram verificados após o condicionamento utilizando 24-epibrassinolídeo a 10-8 M, sobretudo a velocidade de germinação das sementes, atividade de enzimas antioxidantes e hidrolíticas, crescimento e uniformidade de desenvolvimento das plântulas. O condicionamento com 24- epibrassinolídeo a 10-8 M também favoreceu o desempenho dos lotes de sementes durante o armazenamento. A inclusão desse biorregulador no condicionamento em sistema de tambor é eficiente para o tratamento comercial de sementes de pimentão. / Rapid and uniform seedling emergence in field are essential for successful commercial production of vegetables. One of the main problems faced by bell pepper growers is the slow germination and uneven stand establishment, which highlights the importance of developing techniques that improve the performance of seed lots. In order to evaluate the efficiency of seed priming with bioregulators on physiological potential of bell pepper seeds, this research was developed using two cultivars, AF-6 and AF-7, represented by three and four seed lots, respectively. Possible effects of seed priming using 24-epibrassinolide were compared to gibberellic acid, and Stimulate&reg;. Germination and vigor evaluations were carried out, including analysis of seed enzymatic activity and parameters of seedlings growth using the SVIS&reg; software. At the end, the most promising treatment, seed priming with 24- epibrassinolide of 10-8 M was evaluated regarding to plant root growth, drum priming and seed performance during storage. Several benefits were verified after seed priming with 24-epibrassinolide, especially on germination speed, antioxidant and hydrolytic enzymes as well as seedling growth and uniformity development. Primed seeds with 24-epibrassinolide also showed better performance during seed storage. This bioregulador can be used during drum priming for commercial bell pepper seed treatment.

O estresse oxidativo, causado por níveis aumentados de espécies reativas de oxigênio (ROS), pode causar danos celulares. Várias enzimas, como as subunidades da alquil-hidroperóxido redutase (AhpC e AhpF) e as superóxido dismutases (SOD), são responsáveis por remover as ROS. Os mecanismos de regulação da expressão gênica de C. crescentus para os genes ahpC, sodA, sodB e sodC, foram analisados com fusões de transcrição ao gene repórter lacZ, permitindo a quantificação da expressão por ensaios da atividade de b-galactosidase, e RT-PCR quantitativo. As culturas foram cultivadas em meio PYE ou M2 e a expressão de cada gene foi avaliada na presença de peróxido de hidrogênio (H2O2), tert-butil hidroperóxido (tBOOH), paraquat, menadiona, pirogalol, FeSO4 ou DDPi. Em C. crescentus ahpC é induzido por peróxidos e regulado por OxyR. As SODs são induzidas principalmente por superóxidos, sodB e sodC possuem indução de fase na fase estacionária e possivelmente estão sob o controle do sigma J, enquanto o gene sodA é regulado por sigma F e sigma J. / Oxidative stress, caused by increased levels of reactive oxygen species, can lead to damage in all cellular components. Several enzymes, as subunit of alkyl hydroperoxide reductase (AhpC and AhpF) and superoxide dismutases (SOD), are responsible for removing ROS. Mechanisms of gene expression of C. crescentus for genes ahpC, sodA, sodB and sodC, were evaluated with transcription fusions with the lacZ reporter gene were constructed, allowing the quantification of expression by b-galactosidase activity assays, furthermore we analyze of the gene expression by qRT-PCR assay. The cultures were grown in PYE and M2 media, and gene expression was evaluated in the presence of hydrogen peroxide (H2O2), tert-butyl hydroperoxide (tBOOH), paraquat, menadione, pyrogallol, FeSO4 or DPPi. In C. crescentus ahpC is induced by peroxides and is under the control of OxyR. The SODs are mainly induced by superoxide, sodB and sodC are induction in stationary phase and are possibly under the control of sigma J, while the sodA gene is regulated by sigma F and sigma J.

A grande demanda por proteína animal e a importância que a criação bovina exerce sobre a economia nacional, vêm exigindo eficientes sistemas de produção. A preservação e disseminação da genética do rebanho bovino dependem de biotecnologias como a criopreservação espermática, inseminação artificial e fertilização in vitro. No entanto, atualmente muito tem sido discutido sobre o uso da gema de ovo nos diluidores seminais. Pois apresentam variabilidade em sua composição e risco de contaminação microbiológica. Em contrapartida, apesar dos diluidores sintetizados com lecitina de soja não fornecerem esses riscos, seus resultados não são muito satisfatórios na criopreservação espermática bovina. Com base na hipótese de que a suplementação do diluidor seminal à base de lecitina de soja com antioxidantes, preserve as características das células espermáticas de maneira tão eficiente quanto à gema de ovo, o objetivo do presente experimento foi comparar o efeito do diluidor à base de gema de ovo com o diluidor à base de lecitina de soja (com e sem antioxidantes), sobre a manutenção da funcionalidade e fertilidade de amostras espermáticas bovinas criopreservadas. Para tal, foram utilizadas amostras seminais de 20 touros Brangus, cujas colheitas foram realizadas pelo método de eletroejaculação e as amostras foram diluídas em 4 grupos de diluidores: LElecitina de soja (sem a adição de antioxidantes); LAlecitina de soja suplementada com ácido ascórbico (AA, 4,5mM); LS lecitina de soja suplementada com superóxido dismutase (SOD, 60UI/mL) e GOgema de ovo (sem adição de antioxidantes). O sêmen foi então, criopreservado de maneira automatizada. As amostras foram descongeladas e analisadas quanto aos testes laboratoriais de motilidade computadorizada do espermatozóide (CASA); integridade de membrana plasmática (eosina/nigrosina); integridade de membrana acrossomal (fast Green/ rosa bengala); atividade citoquímica mitocondrial (DAB); susceptibilidade do DNA à desnaturação (SCSA); índice de estresse oxidativo induzido (TBARS). Além disso, foram realizados testes para verificar o potencial de fertilidade das amostras espermáticas criopreservadas. A fertilidade in vivo foi realizada pela técnica de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando 450 fêmeas bovinas, seguido de exame ultrassonográfico para avaliação de prenhez. Teste de fertilidade in vitro, foi realizado pela técnica de produção in vitro de embriões (PIV) com o uso de ovários de frigoríficos, a classificação do desenvolvimento embrionário e a avaliação da motilidade espermática foram promovidas no decorrer do processo. Os resultados demonstraram que o diluidor LE apresentou efeito na proteção espermática de maneira semelhante ao diluidor GO. No entanto a suplementação desse primeiro com antioxidantes é uma alternativa para melhorar ainda mais esse processo, já que a taxa de prenhez obtida nos grupos LA e LS é satisfatória em um programa de IATF. Ainda o grupo LS foi o que apresentou melhores resultados no processo de PIV. Concluindo que o diluidor à base de lecitina de soja suplementado com o antioxidante superóxido dismutase seria uma opção para a substituição definitiva dos diluidores sintetizados com gema de ovo. / Due to the great demand for animal protein and the importance that bovine breeding exert on national economy, efficient production systems have been required. Cattle genetics preservation and dissemination depend on reproductive biotechnologies such as sperm cryopreservation, artificial insemination and in vitro fertilization. However, the use of egg yolk-based extender is under discussion nowadays, once there is great variability in its composition and risks of bacteriological contamination. On the other hand, despite soybean lecithin-based extenders do not present these risks, satisfactory results, after bovine sperm cryopreservation, have not been reached yet. Based on the hypothesis that soybean lecithinbased extender supplemented with antioxidants, preserve the sperm cell characteristics so efficient as egg yolk does, the aim of the present experiment was to compare the effects of egg yolk-based extender and soybean lecithin-based extender (with and without antioxidants), on functionality and fertility maintenance of bovine cryopreserved sperm samples. For this, seminal samples from 20 Brangus bulls were used, collects were realized by eletroejaculation method and samples were diluted in 4 extenders group: LE-soybean lecithin-based extender (without antioxidant supplementation); LA- soybean lecithin supplemented with ascorbic acid (AA, 4,5mM); LS- soybean lecithin supplemented with superoxide dismutase (SOD, 60UI/mL) and GO-egg yolk-based extender (without antioxidant supplementation). Then, semen was cryopreserved by automatic method. Samples were thawed and analyzed by laboratorial tests such as computer assisted semen analysis (CASA); plasma membrane integrity (eosin/nigrosin); acrosome membrane integrity (fast green/ rose bengal); mitochondrial cytochemical activity (DAB); susceptibility of chromatin denaturation (SCSA); induced oxidative stress index (TBARS). Furthermore, tests for fertility potential of cryopreserved semen samples were performed. In vivo fertility was accessed by timed artificial insemination (TAI), 450 bovine females were inseminated, and ultrasonographical exam was realized for pregnancy detection. In vitro fertility test was accessed by embryo in vitro production (IVP), ovaries from slaughterhouses were used, embryo development classification and sperm motility were promoted during the process. Results indicate that sperm protection is similar between LE and GO extenders. However the antioxidant supplementation of soybean lecithin-based extender is a great alternative to improve the process of sperm protection, since pregnancy rate of LA and LS groups was satisfactory for a TAI program. Besides, LS group presented the best results on IVP process. In conclusion, soybean lecithin-based extender supplemented with superoxide dismutase would be a better option for a definite replacement of egg yolk-based extender for sperm bovine cryopreservation.