A insuficiência hepática aguda é resultante da perda das funções vitais do fígado em consequência da disfunção maciça do tecido hepático. Em muitos casos, o transplante de fígado é o tratamento definitivo, apesar da capacidade regenerativa do fígado. Os mecanismos da regeneração envolvem intricadas vias de regulação, com ativação de fatores de crescimento e citocinas. A terapia celular com células tronco da medula óssea tem sido proposta como alternativa terapêutica, mas seu emprego permanece no campo experimental. O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos parácrinos da terapia com células em microcápsulas semipermeáveis, em modelos de insuficiência hepática aguda. Em uma primeira etapa animais submetidos a hepatectomia parcial de 90% foram transplantados com células da medula óssea (CMO) encapsuladas ou cápsulas vazias. Os resultados demonstraram um aumento na sobrevida em 10 dias nos animais tratados com CMO encapsuladas. Estudos em tempos iniciais da regeneração (em até 72 horas) demonstraram que as CMO reduziram a expressão de genes que favorecem a regeneração hepática e aumentaram a expressão de reguladores negativos da regeneração. Como consequência, houve uma diminuição da taxa de regeneração nos animais tratados. Este efeito ocorreu através de mecanismos parácrinos. Na segunda etapa avaliamos a capacidade de diferenciação das células da fração mononuclear da medula óssea (CFMMO) encapsuladas in vivo e in vitro. Animais submetidos a uma lesão por Tetracloreto de Carbono (CCl4) foram transplantados com CFMMO encapsuladas. Animais sem lesão hepática foram utilizados como controle. Observou-se que, 48 horas após o transplante as CFMMO passaram a expressar genes característicos de hepatócitos. A fim de estudar melhor os mecanismos envolvidos nesta diferenciação, utilizamos CFMM encapsuladas em um modelo in vitro que replicasse as características do modelo in vivo. Assim empregamos um sistema de co-cultivo, onde as CFMMO encapsuladas eram mantidas em contato com o meio de hepatócitos com ou sem lesão por CCl4. Nossos resultados demonstraram que em apenas 6 horas de co-cultivo in vitro as CFMMO encapsuladas expressaram marcadores hepáticos. Estes resultados sugerem a ocorrência de diferenciação das CFMMO em tempos muito precoces por mecanismos parácrinos. Em conjunto, os resultados apresentados nos permitem concluir que a microencapsulação celular se mostrou uma ferramenta adequada para avaliar os processos que ocorrem na lesão hepática aguda de maneira bidirecional. Sendo assim, pudemos observar o efeito que as células da medula óssea (total ou fração mononuclear) exercem sobre o tecido hepático lesado, bem como o efeito que substâncias secretadas por este tecido têm sobre essas células. / Acute liver failure results from loss of the liver’s vital functions due to major dysfunction of hepatic tissue. In several cases, liver transplantation is the definitive treatment, despite the liver’s regenerative capacity. Regeneration mechanisms involve intricate regulatory pathways, with activation of growth factors and cytokines. Cell therapy with bone marrow stem cells has been proposed as a therapeutic alternative. However, its use remains in the experimental field. The objective of this study was to investigate paracrine effects of cell therapy in models of acute liver failure with the use semipermeable microcapsules. First, animals undergoing 90% partial hepatectomy were transplanted with encapsulated bone marrow cells (BMC) or empty capsules. Results showed an increase in 10-day survival in treated animals treated with encapsulated BMC. Studies performed at earlier steps (within 72 hours) demonstrated that BMC reduced expression of genes that promote liver regeneration and increased the expression of its negative regulators. As a consequence, there was a decrease in the rate of liver regeneration in treated animals, and this effect occurred through paracrine mechanisms. In the second study we evaluated the differentiation ability of encapsulated bone marrow mononuclear cells (BMMC) in vivo and in vitro. Animals submitted to carbon tetrachloride (CCl4) induced acute liver injury were transplanted with encapsulated BMMC. Animals without liver injury were used as a control group. It was observed that 48 hours after transplantation, BMMC began to express hepatocyte-specific genes. In order to better understand the mechanisms involved in this differentiation, we used encapsulated BMMC in an in vitro model that replicates the characteristics of the in vivo model. So, we employed a co-culture system, where encapsulated BMMC were kept in contact with medium from hepatocytes with or without injury by CCl4. Our results showed that in just 6 hours of in vitro co-culture the encapsulated BMMC expressed hepatic markers. These results suggest the occurrence of BMMC differentiation at very early steps by paracrine mechanisms. Taken together, results shown here allow us to conclude that cellular microencapsulation proved to be a suitable tool to assess the processes that occur in acute liver injury in a bidirectional manner. Thus, we were able to observe the effect that bone marrow cells (both total and mononuclear fraction) exert on the injured liver tissue, as well as the effect that substances secreted by this tissue have on these cells.

Submitted by Diana Leocata de Queiroz null (diana_leocata@hotmail.com) on 2017-12-04T13:26:05Z No. of bitstreams: 1 TRANSPLANTE INTRATECAL DE CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES EM EQUINOS ATRAVÉS DO ESPAÇO INTERVERTEBRAL C1-C2 finalf.pdf: 1646738 bytes, checksum: b542c7fc14354a10598a5cdea4680f6b (MD5) / Submitted by Diana Leocata de Queiroz null (diana_leocata@hotmail.com) on 2017-12-04T14:43:24Z No. of bitstreams: 1 TRANSPLANTE INTRATECAL DE CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES EM EQUINOS ATRAVÉS DO ESPAÇO INTERVERTEBRAL C1-C2 finalf.pdf: 1646738 bytes, checksum: b542c7fc14354a10598a5cdea4680f6b (MD5) / Submitted by Diana Leocata de Queiroz null (diana_leocata@hotmail.com) on 2017-12-05T14:11:15Z No. of bitstreams: 1 TRANSPLANTE INTRATECAL DE CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES EM EQUINOS ATRAVÉS DO ESPAÇO INTERVERTEBRAL C1-C2 finalf.pdf: 1646738 bytes, checksum: b542c7fc14354a10598a5cdea4680f6b (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2017-12-06T16:45:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 queiroz_dl_me_bot.pdf: 1646738 bytes, checksum: b542c7fc14354a10598a5cdea4680f6b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-06T16:45:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 queiroz_dl_me_bot.pdf: 1646738 bytes, checksum: b542c7fc14354a10598a5cdea4680f6b (MD5) Previous issue date: 2017-11-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudos demonstram o grande potencial do uso das células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) como terapia celular. Seu uso em lesões neurológicas, que usualmente apresentam difícil regeneração, tem sido estudado pelo fato das MSCs apresentarem baixa imunogenicidade efeitos imunomoduladores e neuroregenerativos. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a viabilidade e a segurança do transplante de MSCs alogênicas provenientes do tecido adiposo, medula óssea e cordão umbilical de equinos, pela via intratecal através do espaço intervertebral C1-C2, por meio de exame neurológico seriado, análises hematológicas e determinação dos níveis séricos de proteínas de fase aguda. Foram utilizados 16 equinos saudáveis, divididos em quatro grupos: grupo SHAM (SHAM) que recebeu o transplante de salina tamponada com fosfato (PBS); grupo tecido adiposo (GTA), recebeu MSCs de origem do tecido adiposo; grupo medula óssea (GMO), recebeu MSCs de origem da medula óssea; e grupo cordão umbilical (GCU), recebeu células de origem da matriz do cordão umbilical. Foram realizadas três aplicações com intervalo de 30 dias em cada grupo, e coletou-se amostras de sangue, nos momentos que antecederam os transplantes, M0, M30 e M60 e 24 horas, após o transplante, M1, M31, M61. E por último foi realizada uma coleta 30 dias após M60, caracterizando M90. Não foram observadas alterações do exame clinico, hematológico e nas proteínas de fase aguda relacionadas aos sucessivos transplantes intratecais de MSCs, tampouco observou-se alterações que contra indicassem o uso de qualquer uma das fontes celulares, demonstrando que o protocolo utilizado, bem como qualquer uma das fontes celulares é viável e seguro. / Studies demonstrate the great potential of using multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) as cell therapy. Its use in neurological lesions, which usually present difficult regeneration, has been studied because MSCs have low immunogenicity and immunoregulatory and neuroregenerative effects. In this context, the present study evaluated the viability and safety of transplantation of allogeneic MSCs from the adipose tissue, bone marrow and umbilical cord of horses, through the intrathecal route through the C1-C2 intervertebral space, through serial neurological examination, hematological analyzes and determination of serum levels of acute phase proteins. Sixteen healthy horses were used, divided into four groups: SHAM group (SHAM) that received phosphate buffered saline (PBS) transplantation; adipose tissue group (GTA), received adipose tissue MSCs; bone marrow group (GMO), received MSCs from bone marrow origin; and umbilical cord (UGC) group, received cells from the umbilical cord array. M0, M30 and M60 were collected at the time of the transplantation, M1, M31 and M61 and 24 hours after transplantation. And finally a collection was performed 30 days after M60, characterizing M90. There were no changes in the clinical, hematological and acute phase-related proteins related to successive intrathecal transplantations of MSCs, nor were there alterations that contra indicated the use of any of the cellular sources, demonstrating that the protocol used, as well as any of cellular sources is viable and safe.

Ingeniero en Biotecnología Molecular / Las células madre mesenquimales (MSC) son un grupo heterogéneo de células multipotentes que han adquirido gran importancia en el último tiempo debido a su potencial aplicación en el desarrollo de terapias celulares. La principal limitante para estos tratamientos ha resultado ser la dificultad para el aislamiento de un número suficiente de células para los procedimientos propuestos. Recientemente, se ha identificado una población de estas células en el fluido menstrual, lo que permitiría superar esta dificultad. Las células madre aisladas desde fluido menstrual (MenSC) son una población de MSC cuyo aislamiento poco invasivo y regularidad de obtención las ubican en una posición ideal para el desarrollo de terapias celulares. Entre las características más destacadas de este tipo celular se encuentran una alta tasa proliferativa, una alta estabilidad cariotípica y buenas propiedades pro-angiogénicas y migratorias. Sin embargo, aún se desconocen gran parte de las propiedades y funciones de las MenSC, especialmente las relacionadas al nicho en donde se encuentran. Con respecto a este nicho, es posible hipotetisar que uno de los procesos en el cual las MenSC podrían tener un rol regulatorio correspondería a la implantación embrionaria, que a su vez está regulada por los cambios hormonales del ciclo menstrual que generan un endometrio receptivo, capaz de interactuar con el embrión y permitir la implantación. Por lo tanto, se investigaron los efectos de los cambios hormonales del ciclo menstrual sobre las MenSC aisladas de pacientes sanas, con el fin de evaluar cambios fenotípicos, especialmente los referidos (directa o indirectamente) al proceso de la implantación embrionaria. Para esto se cultivaron MenSC en condiciones que imitan el contexto hormonal que ocurre durante el ciclo menstrual, es decir, las concentraciones de Estrógeno y Progesterona tanto de la ovulación como del periodo de máxima 2 receptividad uterina, conocido como “ventana de implantación”. Los primeros genes analizados fueron aquellos que han sido reportados repetidamente como importantes para la ventana de implantación, tal es el caso del factor inhibidor de leucemia (LIF), Factor de Crecimiento Vascular Endotelial A (VEGFa), Factor de Crecimiento Transformante beta 1 (TGF-β), y Homeobox A-10 (HOXA-10). De los cuatro marcadores investigados solo LIF presentó diferencias significativas respecto al control al tratar a las MenSC con las concentraciones de Progesterona y Estradiol que imitan la ovulación y la ventana de implantación. Las segundas características evaluadas, fueron las propiedades pro-migratorias y pro-angiogénicas de las MenSC en respuesta a las hormonas del ciclo menstrual. Las MenSC estimuladas con las diferentes concentraciones de hormonas no presentaron diferencias significativas en su capacidad migratoria independientemente del tratamiento realizado. Por el contrario, tanto la capacidad de las MenSC de inducir la generación túbulos en células endoteliales de cordón umbilical, como la expresión de los marcadores pro-angiogénicos Endoglina (CD105) y Factor de Crecimiento de Fibroblastos 2 (FGF-2) presentaron diferencias significativas respecto al control al tratar a las MenSC con las concentraciones de Progesterona y Estradiol que se suceden desde la ovulación hasta la ventana de receptividad del ciclo menstrual. Estos resultados apoyan la posibilidad de que las MenSC podrían estar participando en procesos relevantes para la implantación del embrión como son los procesos de angiogenesis. Este conocimiento podría ser importante para entender de mejor manera el rol de las MenSC en la regulación del proceso fisiológico de la implantación, como su participación en los procesos fisiopatológicos relacionados con ella, abriendo la puerta a potenciales usos como marcadores de enfermedades relacionadas a la implantación o a la generación de terapias celulares basadas en sus propiedades. / Mesenchymal stem cells (MSCs) are a heterogeneous group of multipotent cells that have acquired great importance in recent years due to their potential application in the development of cellular therapies. The main limitation for these treatments has been the difficulty in isolating enough cells for the proposed procedures. Recently, a population of these cells has been identified in the menstrual fluid, which would allow to overcome this difficulty. Stem cells isolated from menstrual fluid (MenSC) are a population of MSCs whose minimally invasive isolation and regularity of collection place them in an ideal position for the development of cellular therapies. Among the most outstanding features of this cell type are a high proliferative rate, high karyotype stability and good proangiogenic and migratory properties. However, much of the properties and functions of the MenSC, especially those related to the niche in which they are found, are still unknown. Regarding this niche, it is possible to hypothesize that one of the processes in which the MenSC could have a regulatory role would correspond to the embryonic implantation, which in turn is regulated by the hormonal changes of the menstrual cycle that generate a receptive endometrium, capable of interacting with the embryo and allowing implantation. Hence, the effects of the hormonal changes of the menstrual cycle on the MenSC isolated from healthy patients were investigated to evaluate for phenotypic changes, especially those referred (directly or indirectly) to the process of embryo implantation. For this, MenSC were cultured in conditions that mimic the hormonal context that occurs during the menstrual cycle, i.e. the estrogen and progesterone concentrations of both the ovulation and the period of maximum uterine receptivity, known as the "implantation window". The first genes analyzed were those that have been repeatedly reported as important for the implantation window, such as Leukemia 4 Inhibitory Factor (LIF), Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGFa), Transforming Growth Factor beta 1 (TGF -β) and Homeobox A-10 (HOXA-10). Of the four markers investigated, only LIF showed significant differences compared to the control when treating the MenSC with the concentrations of Progesterone and Estradiol that mimic the ovulation and the implantation window. The following characteristics evaluated were the pro-migratory and pro-angiogenic properties of MenSC in response to menstrual cycle hormones. MenSC stimulated with the different concentrations of hormones did not present significant differences in their migratory capacity regardless of the treatment performed. In contrast, both the ability of MenSC to induce tubule generation in umbilical cord endothelial cells (HUVEC) and the expression of the pro-angiogenic markers Endoglin (CD105) and Fibroblast Growth Factor 2 (FGF-2) showed significant differences in respect of the control when treating the MenSC with the concentrations of Progesterone and Estradiol that transpire since the ovulation to the window of receptivity of the menstrual cycle. These results support the possibility that the MenSC could be involved in processes relevant to the implantation of the embryo such as the process of angiogenesis. This knowledge could be important to better understand the role of the MenSC in the regulation of the physiological process of implantation, as well as its participation in the pathophysiological processes related to it, opening the door to potential uses as markers of diseases related to implantation or the generation of cellular therapies based on their properties.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim-Alvarenga / Resumo: As células-tronco mesenquimais extraídas da medula óssea ou tecido adiposo são utilizadas em abordagens terapêuticas, em vista das suas propriedades anti-inflamatórias, imunomoduladoras e regenerativas. Estas células são consideradas uma nova alternativa para o tratamento de enfermidades em diversas espécies, incluindo as dos equinos. Dessa forma, com o intuito de investigar a possível utilização das células estromais de mini-horses em tratamentos de cavalos, nesse estudo foi realizada a colheita, isolamento, expansão, caracterização imunofenotípica e diferenciação em duas linhagens mesenquimais: osteogênica e adipogênica de células estromais de mini-horses (Equus ferus caballus), objetivando a formação de um banco celular. Foi ainda realizada a análise transcricional comparativa dessas células, com as células estromais oriundas de cavalos (Equus caballus), produzidas e caracterizadas nas mesmas condições. Os parâmetros analisados foram o perfil de genes relacionados à angiogênese, regulação negativa da proliferação de células T, regulação negativa da ativação de células T, proliferação negativa de linfócitos reguladores, regulação negativa da proliferação de células mononucleares, regulação negativa da adesão célula-célula de leucócitos, regulação negativa da proliferação de leucócitos, regulação negativa da adesão célula-leucócito, regulação negativa da ativação de linfócitos. Também foram pesquisados os principais genes up e down regulados comparando mini-horses aos cavalo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesenchymal stem cells extracted from bone marrow or adipose tissue are used in therapeutic approaches in view of their anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative properties. These cells are considered a new alternative for the treatment of diseases in several species. In order to investigate the possible use of mini-horses stromal cells in horse treatments, in this study was performed the collection, isolation, expansion, immunophenotypic characterization and differentiation in two mesenchymal lines were performed: osteogenic and adipogenic stromal cell mini-horses (Equus ferus caballus), aiming the formation of a cellular bank. We also performed the comparative transcriptional analysis of these cells, with stromal cells from horses (Equus caballus), produced and characterized under the same conditions. The parameters analyzed were the profile of genes related to angiogenesis, negative regulation of T cell proliferation, negative regulation of T cell activation, negative proliferation of regulatory lymphocytes, negative regulation of mononuclear cell proliferation, negative regulation of cell-cell adhesion leukocytes, negative regulation of leukocyte proliferation, negative regulation of cell-leukocyte adhesion, negative regulation of lymphocyte activation. We also searched the top 10 genes up and down regulated comparing mini-horses to horses. For cell bank formation tests were performed that demonstrated the characteristics of stromal cells in the cells obtained ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Luis Laus / Coorientador; Marcela Aldrovani Rodrigues / Banca: João Antonio Tadeu Pigatto / Banca: Bruno Watanabe Minto / Banca: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Annelise Carla Camplesi dos Santos / Resumo: Visando ao estudo de técnicas para a expansão "ex-vivo" de células destinadas à reconstrução de superfícies oculares com deficiência de células tronco limbais (LSCD), explantes superficiais obtidos do limbo de coelhos foram cultivados sobre membrana amniótica (MA) humana. Dois grupos, diferindo quanto à configuração do sistema de cultivo celular, foram concebidos: G-mono, contendo células epiteliais expandidas sobre a face de uma camada de MA (sistema de cultivo bidimensional), e G-Sand, composto por células "ensanduichadas" entre duas MAs (sistema de cultivo tridimensional). Seis culturas celulares de cada grupo foram avaliadas por imuno-histoquímica quanto à presença de células progenitoras ou indiferenciadas e a de células em proliferação (avaliação pré-transplante), enquanto 21 foram transplantadas para olhos de coelhos com LSCD (n=10). Os olhos receptores de células cultivadas foram clinicamente avaliados, por até 63 dias. A terapia limbal adotada na pesquisa foi autógena. Após avaliações clínicas, os coelhos foram aleatoriamente distribuídos em parcelas e submetidos à eutanásia, para colheita de córneas (dias 14 e 63 após o transplante) que foram avaliadas quanto à morfometria tecidual e à expressão quali-quantitativa de imunomarcadores de indiferenciação celular (fator de transcrição nuclear delta p63), de proliferação celular (antígeno nuclear da proliferação celular, PCNA) e de apoptose (teste de TUNEL). Diferenças com P < 0.05 foram consideradas significativas. As c... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / In order to study techniques for the ex vivo expansion of cells for the reconstruction ocular surfaces with limbal stem cell deficiency (LSCD), superficial explants obtained from rabbit limbus were cultured on human amniotic membrane (MA). Two groups, differing in the configuration of the cell culture system, were designed: G-mono, containing expanded epithelial cells on an MA layer (two-dimensional culture system), and G-Sand, composed of cells "sandwiched" between two MAs (three-dimensional culture system). Six cell cultures of each group were processed by immunohistochemistry to identify the presence of progenitor or undifferentiated cells and for proliferating cells (pre-transplant evaluation), and 21 constructs were transplanted onto rabbit eyes with LSCD. The limbal therapy adopted in the research was autogenous and the transplanted eyes were clinically evaluated for up to 63 days. After clinical evaluations, the rabbits were randomly distributed into subgroups and submitted to euthanasia, to harvest corneas (days 14 and 63 post-transplant) that were evaluated for tissue morphometry and the qualitative-quantitative expression of imunnomarkers of indiferentiated cells (delta-p63 transcriptional factor), proliferative cells (proliferating cell nuclear antigen, PCNA) and apoptosis (TUNEL assay). Differences with P <0.05 were considered significant. G-Sand... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Antônio Carlos Guastaldi / Coorientador: Gildásio de Cerqueira Daltro / Banca: Ademario Galvão Spínola / Banca: Luis Schiper / Resumo: O termo Doença Falciforme (DF) é utilizado para definir hemoglobinopatias nas quais pelo menos uma hemoglobina (Hb) anormal é a hemoglobina S (HbS). Essa alteração provoca distorção dos eritrócitos, fazendo-os tomar a forma de "f c " ou " - ". No Brasil, cerca de 700 a 1.000 pessoas portadoras de DF nascem anualmente e na Bahia uma em cada 650 crianças nascidas vivas apresentam a patologia. A DF cursa com complicações ósteo-articular em 80% dos casos e uma das mais frequentes e graves é a osteonecrose. Os métodos de tratamento atualmente disponíveis não são capazes de garantir bons resultados clínicos para este grupo de pacientes. Além disso, a evolução natural da doença em pacientes não tratados é de piora progressiva. Diante disso, traçou-se como objetivo avaliar o resultado clínico e radiológico do tratamento com implante autólogo de células mononucleares da medula óssea em pacientes com osteonecrose da cabeça umeral secundária a Doença Falciforme. Foi realizado um estudo prospectivo, experimental, com avaliação antes e após o implante das células mononucleares na cabeça umeral; participaram deste estudo 6 pacientes adultos, portadores sintomáticos de necrose avascular. Os resultados do estudo demonstraram que os resultados do implante autólogo de células mononucleares foram excelentes, promovendo melhora da mobilidade, dor e função articular. A amplitude de todos os movimentos avaliados apresentou melhora em relação ao pré operatório com ganho estatisticamente significant... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The term sickle cell disease (SCD) is used to define hemoglobinopathies in which the at least one hemoglobin (Hb) is abnormal hemoglobin S (HbS). This relationship causes distortion of the erythrocytes, making it take a form of "sickle" or "half-moon". In Brazil, about 700 to 1,000 people with SCD are born annually and in Bahia one out of every 650 communities born alive have a pathology. SCD is complicated with osteoarticular disease in 80% of cases and one of the most frequent is osteonecrosis. The treatment available are not able to promote good clinical results for this group of patients. Moreover, the natural evolution of the disease is characterized by progressive worsening. Therefore, the objective is to evaluate the clinical and radiological results of the treatment with autologous bone marrow mononuclear cell implantation in patients with osteonecrosis of the humeral head secondary to Sickle Cell Disease. We developed a prospective, experimental study with evaluation and post-implantation of mononuclear cells in the humeral head; 6 adult patients, symptomatic carriers of avascular necrosis, participated in the study. The results of the study demonstrated that the results of autologous mononuclear cell implantation were excellent, promoting improved mobility, pain and functional function. The breadth of all efforts is improved in terms of performance with the statistically significant gain in terms of flexibility, stretch and external velocity. In addition, the Index ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Milton Artur Ruiz / Banca: Flavia Cristina Rodrigues Lisoni / Banca: Rubens Camargo Siqueira / Resumo: O transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH) constitui uma importante opção terapêutica para pacientes com doenças onco-hematológicas, autoimunes e alguns tumores sólidos; caracteriza-se pela infusão intravenosa de células progenitoras hematopoéticas com o objetivo de restabelecer a função medular e imunológica. No entanto, esse procedimento requer imunossupressão o que favorece o desenvolvimento de complicações, principalmente infecciosas, as quais frequentemente se manifestam ou se originam na cavidade bucal podendo ser causadora de infecções sistêmicas. O estado de saúde bucal do paciente submetido ao TCTH tem sido considerado como um fator que interfere diretamente no grau de morbimortalidade. A mucosite representa o principal fator de risco para as infecções sistêmicas e está entre as complicações de maior relevância. Uma vez que existe uma relação direta entre inflamação crônica e muitas doenças emergentes, tem se destacado o estudo da melatonina (MEL), um hormônio fabricado pela glândula pineal, que pode ser capaz de proteger não somente a cavidade bucal, mas todo o organismo dos radicais livres produzidos por processos inflamatórios e infecciosos. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores de risco desencadeadores das infecções odontogênicas, lesões da mucosa oral, estabelecendo um índice de complicações orais (ICO-TCTH) e sua relação com a concentração de melatonina extraída da saliva dos pacientes, doenças de base e tipo de transplante;... / Abstract: Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is an important therapeutic option for patients with onco-hematological, autoimmune and some solid tumors; It is characterized by the intravenous infusion of hematopoietic progenitor cells with the objective of restoring the medullary and immunological function. However, this procedure requires an effect of complications, mainly infectious, how often they manifest or originate in the oral cavity and can be the cause of systemic infections. The state of oral health of patients submitted to HSCT has been considered as a factor that directly interferes with the degree of morbidity and mortality. Mucositis represents the main risk factor for systemic infections and is among the most relevant complications. Since there is a direct relationship between chronic inflammation and many emerging diseases, a melatonin (MEL) is a hormone made by the pineal gland, which may be able to protect not only an oral cavity, but the entire body of free radicals produced by processes Inflammatory and infectious.The objective of this study is to evaluate the prevalence and risk factors of odontogenic infections, lesions of the oral mucosa, to meet the oral complications index (ICO-HSCT) and to relate it to the concentration of melatonin extracted from the patient's saliva, Underlying diseases and type of transplant presenting an oral cavity treatment plan that may interfere with no transplant success; One might advocate this hormone as a prognostic ... / Mestre

Orientador: Bruno Watanabe Minto / Banca: Luis Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Banca: Paulo César Jark / Resumo: A cartilagem articular possui capacidade de reparação limitada, aumentado a predisposição ao desenvolvimento de alterações degenerativas, muitas vezes irreversíveis. Diversas formas de tratamento, cirúrgicas ou conservativas, são descritas, entretanto a terapêutica da osteoartrite continua sendo grande desafio ao médico veterinário. Neste contexto, a pesquisa envolvendo células-tronco mesenquimais destaca-se na busca de melhorias e avanços na reparação da cartilagem articular. Objetivou-se, no presente projeto, comparar a regeneração cartilaginosa da articulação coxofemoral de coelhos, com e sem o transplante de células-tronco mesenquimais autólogas, por meio de exames radiográficos e histopatológicos. Dois grupos, com 15 animais da espécie leporina cada, foram submetidos à indução química de osteoartrite com solução de colagenase 2% na articulação coxofemoral direita. No Grupo 1 (Células-tronco) realizou-se a aplicação intra-articular de células-tronco mesenquimais autólogas, enquanto que, o Grupo 2 (Controle) foi constituído por animais submetidos à aplicação intra-articular de solução salina estéril. Foram realizadas avaliações radiográficas e histopatológicas aos 30, 60 e 90 dias após a aplicação. Os resultados histológicos deste ensaio indicam que células-tronco mesenquimais (Grupo 1) melhoraram discretamente a qualidade do tecido de reparo, de acordo com os critérios da escala semi-quantitativa ICRS 1 ("International Cartilage Repair Society"). O Grupo 1 (Células-Tronco... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The articular cartilage has limited repair capacity, leading to an increased risk for degenerative changes, potentially irreversible. Several treatments, surgical or not, are described, however osteoarthritis remains a major challenge for the veterinarian. In this context, research involving mesenchymal stem cells stands out. The aim of this study was to compare cartilage regeneration of the hip in rabbits, with and without the transplantation of autologous mesenchymal stem cells. Radiographic and histopathological evaluation were used. Thirty rabbits were submitted to chemical induction of osteoarthritis with a 2% colagenase in the right hip. They were divided into 2 groups of 15 animals each: Group 1 (intra-articular application of autologous mesenchymal stem cells) and Group 2 (control - intra-articular application of sterile saline solution). Radiographic and histopathological evaluations were performed at 30, 60 and 90 days after application. The mesenchymal stem cells group (Group 1) showed slight improvement of the quality of the repair tissue, according to the semi-quantitative scale criteria ICRS 1 (International Cartilage Repair Society). The Group 1 (Stem Cells) showed superiority in relation to Group 2, specially in the parameters joint surface, extracellular matrix and cellular distribution. / Mestre

Orientador: Luiz Henrique de Araújo Machado / Resumo: O diabetes mellitus (DM) é uma das doenças que mais tem aumentado sua incidência na última década. As células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (CTMs-TA) possuem características imunomoduladoras e reparadoras, sendo capazes de reverter efeitos sistêmicos da doença. Sendo assim, nosso trabalho teve como objetivo avaliar o impacto do transplante de CTMs-TA pelas vias intravenosa, intrapancreática e intra-capsular renal em ratos diabéticos e comparar a que melhor exerce efeito regenerador. Para o estudo, utilizamos 45 ratos, wistar, fêmeas, divididos em 5 grupos: GCS – controle sadio; GCD – controle diabético; GIV – diabético, via intravenosa; GIP – diabético, via intrapancreática; GIR – diabético, via cápsula renal. Para a indução, utilizamos uma única aplicação intraperitoneal (i.p) de Aloxana (120mg/kg), e após 3 dias, os animais foram submetidos ao transplante com as CTMs-TA (2x106cel/animal). Após 15 dias do transplante, os animais foram eutanasiados. O transplante de CTMs-TA pela cápsula renal foi capaz de reverter a hiperglicemia, além de restaurar o diâmetro das ilhotas e restabelecer a função das massa β-pancreática. Concluímos que a cápsula renal foi a que apresentou melhores resultados na regeneração morfofuncional do pâncreas diabético. As CTMs-TA utilizadas neste estudo foram capazes de exercer um importante efeito parácrino, podendo ser utilizadas como alternativa para a melhoria da qualidade de vida de indivíduos diabéticos. / Mestre

Uma das consequências mais devastadoras do tratamento do câncer na população jovem do sexo feminino é a falência ovariana, que resulta na diminuição do potencial de fertilidade. Nenhum tratamento curativo para a falência ovariana primária é conhecido, no entanto, as células-tronco mesenquimais, através de seu potencial de auto-renovação e de regeneração, vem sendo utilizadas com o intuito de avaliar o seu papel no tratamento da falência ovariana. O objetivo deste estudo foi explorar o impacto das células-tronco adiposo derivadas (ADSC), células de macerado de ovário e células –tronco femininas germinativas mouse vasa homologue positivas (MVH+) na falência ovariana induzida pela cisplatina em camundongos e esclarecer quais tipos celulares promovem melhor recuperação neste modelo. Quarenta e oito camundongas adultas foram injetadas com 7,5 mg/kg de cisplatina para induzir a falência ovariana. Como doadores de células foram utilizadas fêmeas C57BL6 transgênicas para a proteína verde fluorescente (GFP +) . Os animais foram subdivididos em três grupos: grupo controle (que recebeu somente solução salina) grupo ADSC- animais que receberam injeção intra ovariana de células-tronco mesenquimais adiposo derivadas (1x104), grupo ovário - animais que receberam injeção intra ovariana de células obtidas a partir de macerado de ovário (1x104) e grupo FGSC- animais que receberam injeção de células tronco germinativas MVH positivas(1x104). Todos os grupos foram avaliados em dois tempos de eutanásia: 7 e 14 dias após o transplante das células. A partir das análises histológicas, pode-se perceber um aumento significativo (p≤ 0,05) na probabilidade de obtenção de folículos viáveis nos grupos ADSC (43%) e suspensão de células de ovário (48%) quando comparados ao grupo controle (24%) no dia 7 e um amumento significativo na probabilidade de obtenção de folículos viáveis no número no grupo FGSC (71%) quando comparado aos outros grupos. Nos grupos eutanasiados 14 dias pós transplante os animais do grupo MVH apresentaram 72% de probabilidade de folículos viáves em comparação aos grupos: controle (50%), ADSC (58%) e suspensão de ovário (52%) diferença não foi estatisticamente significativa. A dosagem de estradiol não mostrou diferença estatística entre os grupos, nos diferentes tempos de eutanásia. / One of the most devastating consequences of cancer treatment in the young female population is ovarian damage, resulting in diminished fertility potential. No curative treatment is known for primary ovarian failure; however, mesenchymal stem cells, trough self -renewal and regeneration, was tested to evaluate their role in the treatment of ovarian failure. The aim of this study was to explore the impact of adipose derived stem cells (ADSC), ovarian cells macerated and female germline stem cells MVH + (FGSC) in ovarian failure induced by cisplatin in mice and to clarify the mechanism (s) by which the ADSCs exert their action. Methods: Thirty-six adult female mice were injected with 7.5 mg / kg of cisplatin to induce ovarian failure. As donor cells used C57BL6 females GFP +. Animals were divided into three groups: control group (which received only saline), ADSC-group: animals received intra ovarian 1x104 adipose derived stem cells; Ovarian cell group - animals received intra ovarian 1x104 cells obtained from macerated ovarian tissue and FGSC-group: animals received 1x104 female germline stem cells MVH positive. All groups were assessed at two times of euthanasia: 7 and 14 days after cell transplantation. Results: From the histological analysis, one can see a significant increase in the number of viable follicles in groups and MVH ADSC compared to the control group at day 7. On day 14 we also observed a tendency to better recovery in group MVH compared to the control group and the other groups, although this difference was not statistically significant. There was no difference in estradiol serum levels between all groups.