Orientador : Prof. Dr. Paulo Roberto Dalsenter / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 30/06/2017 / Inclui referências : f. 100-111 / Resumo: Nos últimos anos cresceu o número de publicações científicas reforçando a hipótese de que substâncias químicas podem interferir no desenvolvimento normal do sistema nervoso central. Dentre essas substâncias, os agrotóxicos da classe dos organofosforados são suspeitos de induzirem alterações comportamentais como ansiedade e a depressão. No Brasil, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária, por meio do programa de análise de resíduos de agrotóxicos em alimentos, vem demonstrando que diversos compostos químicos são encontrados na forma de resíduos em índices maiores do que o permitido. O organofosforado clorpirifós, largamente utilizado na agricultura brasileira, é um dos principais agentes químicos com índice insatisfatório encontrado em alimentos. O objetivo desse trabalho foi investigar se a exposição ao clorpirifós durante a gestação de ratas Wistar poderia desenvolver alterações comportamentais dos tipos ansiedade e do tipo depressão na prole. As ratas foram expostas por via oral entre os dias 14 e 20 de gestação com doses de 0,01; 0,1; 1 e 10 mg de clorpirifós/kg. As progenitoras foram avaliadas quanto: ao ganho de massa corporal durante a gestação e a lactação, ao número de filhotes, ao tempo de gestação, ao peso dos filhotes ao nascer e ao desmame. A prole foi avaliada quanto ao desenvolvimento corporal com medidas: de peso ao nascer, da distância anogenital, da descida dos testículos à bolsa escrotal e da abertura do canal vaginal; e as massas corporais e relativas dos órgãos foram avaliadas ao final da lactação e no início da fase adulta. Foram também avaliados na prole (dias 21 e 70 de vida) os comportamentos do tipo ansiedade pelo teste de labirinto em cruz elevado e do tipo depressão pelo teste de natação forçada modificado, assim como teste de campo aberto para avaliação da atividade motora. Na prole também foram realizadas a medição dos níveis de atividade da enzima acetilcolinesterase e a histologia morfológica das tiroides. Os principais resultados observados na prole mostraram que o clorpirifós pode induzir alterações comportamentais do tipo ansiedade e do tipo depressão. O comportamento tipo ansiedade foi observado aos 21 dias em ambos os sexos, porém não persistiu na avaliação aos 70 dias. O comportamento do tipo depressivo foi observado apenas aos 21 dias e apenas em fêmeas. Estas observações possivelmente estão relacionadas ao momento precoce da exposição e a neuroplasticidade que acontece durante a gestação e perdura ao longo da vida. Concluímos que a exposição gestacional a baixas doses do organofosforado clorpirifós é capaz de induzir alterações comportamentais na prole na fase inicial de vida. Palavras-chave: gestação, tireoide, clorpirifós, ansiedade, depressão. / Abstract: In recent years grew the number of scientific publications by reinforcing the hypothesis that chemicals can interfere with normal development of the central nervous system. Among these substances, the class of organophosphorus pesticides are suspected to induce behavioral changes such as anxiety and depression. In Brazil, the National Health Surveillance Agency, through the program of analysis of residues of pesticides in food, comes showing that several chemical compounds are found in the form of waste in indexes higher than allowed. The organophosphate chlorpyrifos, widely used in brazilian agriculture, is one of the main chemical agents with unsatisfactory index found in food. The objective of this work was to investigate whether exposure to chlorpyrifos in Wistar rats during pregnancy could develop changes anxiety like and depressive like behavioral in the offspring. The rats were exposed orally between 14 and 20 of gestation at doses of 0.01; 0.1; 1 and 10 of chlorpyrifos mg/kg. Mothers were evaluated: the body mass gain during pregnancy and lactation, the number of pups, gestation time, the weight of the pups at birth and at weaning. The offspring was evaluated for development: measures body weight at birth, anogenital distance, the descent of the testes in the scrotum and the opening of the vaginal canal; and the body and relative organ masses were evaluated at the end of lactation and early adulthood. Were also assessed in the offspring (21 and 70 days of life) the anxiety like behavior by elevated plus-maze test and depression by forced swimming test modified, as well as open field test for assessment of motor activity. In the offspring were also performed the measurement of acetylcholinesterase enzyme activity levels and morphological histology of thyroid. The main results observed in the offspring showed that chlorpyrifos can induce behavioral changes of anxiety like and depression like behavior. The anxiety like behavior was observed to 21 days in both sexes, but not persisted in the evaluation to 70 days. The depressive like behavior was observed only for 21 days and only in females. These remarks possibly relate to the early time of the exhibition and the neuroplasticity that happens during pregnancy and continues throughout life. We conclude that gestational exposure to low doses of the organophosphate chlorpyrifos can induce behavioral changes in the offspring at early stage of life. Key-words: pregnancy, thyroid, chlorpyrifos, anxiety, depression.

Resumo: A conexão pele-tireoide tornou-se uma fronteira de interesse da dermatoendocrinologia. Neste contexto, a relação entre urticária crônica idiopática (UCI) e autoimunidade tireóidea tem sido estudada nos seus diferentes aspectos. Além disso, de 30% a 40% dos casos de UCI apresentam etiologia autoimune. A tireoidite de Hashimoto (TH) representa a mais prevalente doença autoimune da tireoide (DAT), acarretando, frequentemente, hipotireoidismo. Os indícios que o quadro de UCI é mais grave e menos responsivo aos tratamentos convencionais quando associado à DAT, sugerem um papel da tireotrofina (TSH) no desenvolvimento das lesões urticariformes. O teste do soro autólogo da pele (TSSA) é um teste intradérmico in vivo utilizado para avaliar a autorreatividade, a presença de autoanticorpos funcionais ou de urticária de etiologia autoimune. Apesar dos indícios de associação entre DAT e UCI, os relatos são controversos. Os objetivos do presente estudo foram avaliar: a associação entre UCI e autoimunidade tireóidea; a frequência de alterações tireóideas em pacientes com UCI, com ênfase nas de origem autoimune; a frequência de angioedema em relação às alterações tireóideas; a associação entre TH, em pacientes com UCI, e positividade do TSSA; a expressão gênica do receptor de TSH (RTSH) na pele sã e na pápula do TSSA, de pacientes com UCI, com e sem TH. O estudo foi dividido em dois capítulos. No Capítulo 1, foi realizada uma análise retrospectiva dos prontuários médicos de 223 pacientes com urticária crônica (UC), acompanhados no ambulatório de alergia dermatológica do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu. Foram selecionados 115 casos com UCI que dispunham dos resultados das dosagens plasmáticas de TSH, tiroxina livre (T4-L) e anticorpos antitireoperoxidase (antiTPO) e antitireoglobulina (antiTG). Tratava-se de 91 mulheres (79,1%) e ... (Resumo completo, clicar acessso eletrônico abaixo) / Abstract: The thyroid-skin connection has become a hot frontier in dermatoendocrinology. In that context, the relation between chronic idiopathic urticaria (CIU) and thyroid autoimmunity has been studied in its different aspects. Besides, from 30% to 40% of CIU cases present autoimmune etiology. Hashimoto's thyroiditis (HT) represents the most prevalent autoimmune thyroid disease (ATD), frequently causing hypothyroidism. The signs that the CIU picture is more severe and less responsive to conventional treatments when associated with ATD suggest a role of thyrotropin (TSH) in developing urticariform lesions. The autologous serum skin test (ASST) is an in vivo intradermal test to evaluate autoreactivity, presence of functional antibodies or urticaria from autoimmune etiology. Despite the signs of association between ATD and CIU, reports are controversial. The present study aimed to evaluate: the association between CIU and thyroid autoimmunity; the frequency of thyroid alterations in patients with CIU emphasizing on the autoimmune originated ones; the frequency of angioedema in relation to thyroid alterations; the association between HT, in patients with CIU, and the ASST positivity; the TSH receptor (RTSH) gene expression in healthy skin and in the papules of ASST, of patients with CIU, with or without HT. The study was divided into two chapters. In Chapter 1, a retrospective analysis was performed in the medical report of 223 patients with chronic urticaria (CU), assisted at the outpatient of dermatologic allergy of the Clinic Hospital of the Botucatu Medical School. One hundred fifteen cases with CIU and available results of plasmatic dosage of TSH, free thyroxine (FT4), and antithyroperoxidase (antiTPO) and antithyroglobulin (antiTG) antibodies were selected. There were 91 women (79.1%) and 24 men (20.9%), mean age 36.5 years, who started the follow-up between 1984 and 2006. These case ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Gláucia Maria Ferreira da Silva Mazeto / Coorientador: Célia Regina Nogueira / Banca: Luciana Patricia Fernandes Abbade / Banca: Paula de Oliveira Montandon Hokama / Banca: Laura Sterian Ward / Banca: José Antonio Sanches Junior / Doutor

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-13T18:29:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Beltrao, MFS_Tese_25Fev2015 BC.compressed.pdf: 3247617 bytes, checksum: b0d4526070b692dcc91263360b816b1e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T18:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Beltrao, MFS_Tese_25Fev2015 BC.compressed.pdf: 3247617 bytes, checksum: b0d4526070b692dcc91263360b816b1e (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / FACEPE / BRAF é conhecido como um proto-oncogene que apresenta diversas mutações, sendo a V600E a mais comumente encontrada em neoplasias humanas. A proteína BRAF quinase oncogênica tornou-se um alvo para terapia específica em oncologia por fazer parte de vias importantes como a Ras-MEK-ERK. A mutação BRAFV600E tem sido encontrada em pacientes com melanoma, câncer de tireóide, colorretal e neoplasias hematológicas. No entanto, a importância dessa molécula em carcinoma tireoidiano papilar e Histiocitose das células de Langerhans ainda não é muito clara. Para isso, modelos murinos para essas doenças foram desenvolvidos para testar a hipótese de que a mutação V600E do gene BRAF em camundongos é suficiente para induzir características fenotípicas semelhantes a observadas em pacientes com câncer tireoidiano papilifero (PTC) e Histiocitose das células de langerhnas (LCH). Nos modelos de PTC e LCH, o gene BRAF mutado é expresso nas células foliculares da tireóide (animal chamado TCB) e nas células do compartimento mielóide CX3CR1+ (animal chamado FRBRAF), respectivamente. Após 90 dias de administração de tamoxifeno para induzir a mutação, histologicamente, os animais TCB apresentam tireóide com hiperplasia folicular, protusões papilares e recrutamento leucocítico; enquanto os animais FRBRAF apresentam hepatoesplenomegalia com infiltrados inflamatórios no fígado, pulmão e baço. Análise de citometria de fluxo demonstrou aumento no número de linfócitos T predominantemente T CD4+ com presença de células Tregs Foxp3+ e Th17 na tireóide transformada em camundongos TCB. Mesma analises, em camundongos FRBRAF revelou a expansão do compartimento mielóide. Expressão de citocinas e quimiocinas são características comuns aos dois modelos animais como é o caso de CCL2, 5, 6, 8, 9/10, 17, 22 CXCL-1, 2 na tireóide de camundongos TCB e TNFα, IL- 1α, M-CSF, IL-7, CCL17 no fígado de animais FRBRAF. Com destaque, observamos que no modelo de LCH, células CD11b+MHCII+Langerin+, marcador comum da lesão em humanos, também foram encontradas no fígado desses animais. Dessa forma, concluímos que a expressão de BRAFV600E em camundongos é capaz de gerar fenótipo semelhante ao de pacientes com câncer tireoidiano papilifero com infiltrado inflamatório e Histiocitose das células de langerhnas no figado. Esses resultados implicam diretamente na importância de BRAF nesses doenças. / BRAF is known as a proto-oncogene that has multiple mutations, V600E is commonly found in human cancers. The oncogenic protein kinase BRAF has become a target for specific therapy in oncology because of their involvemnt in the Ras-MEK-ERK pathway. The BRAFV600E mutation has been found in patients with melanoma, thyroid, colorectal cancer and hematologic malignancies. However, the importance of this molecule in papillary thryoid cancer and Langerhans cell histiocytosis is still not very clear. For this, murine models for these diseases have been developed to test the hypothesis that the BRAF V600E mutation in mice is sufficient to induce a similar phenotypic characteristics observed in patients with papillar thyroid cancer (PTC) and langerhnas cell histiocytosis (LCH). In these murine models of PTC and LCH, BRAF activacted is expressed in the thyroid follicular cells (TCB mouse), and in the myeloid cells CX3CR1+ (FRBRAF mouse), respectively. After 90 days of administration of tamoxifen to induce mutation, histologically, TCB thyroid had follicular hyperplasia, papillary protrusions and leukocyte recruitment; while FRBRAF mice had hepatosplenomegaly with inflammatory infiltrates in the liver, lung and spleen. Flow cytometric analysis demonstrated an increase in the number of T lymphocytes CD4+ predominantly Foxp3+ regulatory T cells and Th17 cells inside the TCB thyroid. Similar analyse in FRBRAF mice showed an expansion of the myeloid compartment. Expression of cytokines and chemokines are common features in two models such as CCL2, 5, 6, 8, 9/10, 17, 22 CXCL-1, 2, in TCB thyroid and TNF, IL-1α, M-CSF, IL-7, CCL17 in FRBRAF liver. Remarkably, CD11b+MHCII+ Langerin+ cells, typically found within LCH lesions in humans, were also present in the liver infiltrates. Thus, we conclude that the expression of BRAFV600E in mice is able to resemble human PTC and LCH. These results directly implicate BRAFV600E in both diseases.

Nucleotídeos extracelulares (ATP, ADP, AMP) e seu derivado adenosina são conhecidos sinalizadores do sistema cardiovascular podendo mediar vários processos fisiológicos entre eles a proliferação celular, agregação plaquetária, inflamação e o tônus vascular. Os níveis destas substâncias, localmente e na circulação sanguínea, são controlados pelas ecto-NTPDases em conjunto com a ecto-5’nucleotidase (ecto-5’-NT) que realizam a degradação completa do ATP até adenosina. Os hormônios tireoideanos tiroxina (T4) e triiodotironina (T3) e o hormônio esteróide sexual estradiol (E2) atuam ativamente no sistema vascular promovendo vasodilatação. Nosso objetivo foi investigar quais enzimas da família das NTPDases estão presente em células musculares lisas vasculares (CMLVs) e se a atividade destas enzimas pode ser influenciada pela ação desses hormônios, uma vez que seus substratos e produtos podem sinalizar processos de relaxamento/contração muscular. Para tanto, as CMLVs foram extraídas da artéria aorta de ratos Wistar adultos e cultivadas em meio de cultura DMEM. Após atingirem a confluência, as células foram tratadas com 50 nM de T3 ou T4 ou 1M de 17-estradiol por 72 horas. As atividades enzimáticas foram medidas pela liberação de fosfato inorgânico enquanto que a expressão das ectonucleotidases foi verificada por imunocitoquímica (proteína) e RT-PCR (RNAm). Os resultados deste trabalho mostram que as CMLVs expressam as NTPDases 1, 2, 3, 5 e 6 e a ecto-5’-NT, responsáveis pelo controle dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. O tratamento com os hormônios T3, T4 e E2 nestas células mostrou que a atividade da ecto-5’-NT foi aumentada pelos três hormônios. A análise do RT-PCR demonstrou que os tratamentos foram capazes de aumentar também a quantidade de RNAm da ecto-5’NT, indicando mecanismos de ação genômica dos hormônios estudados. Por outro lado, O tratamento com os hormônios tireoideos não alterou as atividades ATPásica e ADPásica, somente o estradiol foi capaz de aumentar a atividade ATPásica. Estes resultados também sugerem que, pela hidrólise aumentada do AMP, disponibilizem-se níveis maiores de adenosina, com importante potencial vasodilatador local. Entretanto, o fato de o estradiol ter aumentado a hidrólise de ATP, mas não a de ADP, nos permite pensar que o ADP, agregador plaquetário bem estabelecido, possa estar acumulando extracelularmente, contribuindo para o desenvolvimento de problemas circulatórios.

Nucleotídeos extracelulares (ATP, ADP, AMP) e seu derivado adenosina são conhecidos sinalizadores do sistema cardiovascular podendo mediar vários processos fisiológicos entre eles a proliferação celular, agregação plaquetária, inflamação e o tônus vascular. Os níveis destas substâncias, localmente e na circulação sanguínea, são controlados pelas ecto-NTPDases em conjunto com a ecto-5’nucleotidase (ecto-5’-NT) que realizam a degradação completa do ATP até adenosina. Os hormônios tireoideanos tiroxina (T4) e triiodotironina (T3) e o hormônio esteróide sexual estradiol (E2) atuam ativamente no sistema vascular promovendo vasodilatação. Nosso objetivo foi investigar quais enzimas da família das NTPDases estão presente em células musculares lisas vasculares (CMLVs) e se a atividade destas enzimas pode ser influenciada pela ação desses hormônios, uma vez que seus substratos e produtos podem sinalizar processos de relaxamento/contração muscular. Para tanto, as CMLVs foram extraídas da artéria aorta de ratos Wistar adultos e cultivadas em meio de cultura DMEM. Após atingirem a confluência, as células foram tratadas com 50 nM de T3 ou T4 ou 1M de 17-estradiol por 72 horas. As atividades enzimáticas foram medidas pela liberação de fosfato inorgânico enquanto que a expressão das ectonucleotidases foi verificada por imunocitoquímica (proteína) e RT-PCR (RNAm). Os resultados deste trabalho mostram que as CMLVs expressam as NTPDases 1, 2, 3, 5 e 6 e a ecto-5’-NT, responsáveis pelo controle dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. O tratamento com os hormônios T3, T4 e E2 nestas células mostrou que a atividade da ecto-5’-NT foi aumentada pelos três hormônios. A análise do RT-PCR demonstrou que os tratamentos foram capazes de aumentar também a quantidade de RNAm da ecto-5’NT, indicando mecanismos de ação genômica dos hormônios estudados. Por outro lado, O tratamento com os hormônios tireoideos não alterou as atividades ATPásica e ADPásica, somente o estradiol foi capaz de aumentar a atividade ATPásica. Estes resultados também sugerem que, pela hidrólise aumentada do AMP, disponibilizem-se níveis maiores de adenosina, com importante potencial vasodilatador local. Entretanto, o fato de o estradiol ter aumentado a hidrólise de ATP, mas não a de ADP, nos permite pensar que o ADP, agregador plaquetário bem estabelecido, possa estar acumulando extracelularmente, contribuindo para o desenvolvimento de problemas circulatórios.

Orientador: Prof. Dr. Gisah Amaral de Carvalho / Co-orientadora: Profa. Dra. Tereza Cristina Cavalcanti / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Médica. Defesa: Curitiba, 11/03/2005 / Bibliografia: fls. 45-52 / Resumo: A injeção percutânea de etanol em nódulos tireoidianos benignos é uma modalidade de tratamento bastante aceita nos dias de hoje por ser realizada em ambiente ambulatorial, de maneira eficaz, segura e com baixo custo. O objetivo deste estudo foi reavaliar os nódulos que já foram tratados com etanol após um período de 6 meses ou mais, em relação aos aspectos clínico e citológico. Quarenta pacientes que já haviam sido tratados com etanol após um período médio de 18 meses (DP=11,75) foram reavaliados com ultra-sonografia, exames de função tireoidiana e, principalmente, nova punção aspirativa. A maioria dos pacientes, 56,41%, tinham nódulos sólidos; 38,46%, sólido-císticos e 5,13% tinham nódulos completamente císticos. Nódulo com função normal foi observado em 76,9% dos pacientes e 23,08% tinham nódulos tóxicos. Na avaliação atual, somente 7,69% dos nódulos permaneciam tóxicos. Houve uma redução significativa do tamanho dos nódulos se for considerado o período do início ao final do tratamento (p< 0,001). O tempo médio de tratamento foi 2,35 meses (DP=3,39). Não houve uma alteração significativa do tamanho dos nódulos se levar-se em consideração o período do final do tratamento até esta avaliação, o que indica que não houve aumento ou redução do tamanho do nódulo no seguimento de 18 meses. Quanto ao diagnóstico pela citologia, antes do tratamento houve um predomínio de bócio colóide (92,5%), isto é, a presença de células foliculares benignas e colóide abundante ou escasso. Já após o tratamento esse diagnóstico não foi tão prevalente (54,05%), tendo sido encontrados também nódulos com citologia normal (21,62%), com folículos bem definidos e inconclusivos (18,92%) nos quais não foi identificado número suficiente de células. Conclui-se que a diminuição do tamanho do nódulo com o tratamento é indiscutível e ela persiste por um longo período. Os nódulos podem voltar a ter citologia normal após o tratamento, porém ainda há o predomínio de bócio colóide. Destaca-se a alta prevalência de diagnóstico inconclusivo, provavelmente devido à dificuldade de punção pela presença de material denso e homogêneo após o tratamento. / Abstract: The percutaneous ethanol injection in benign thyroid nodules is currently a quite accepted low cost. The main purposes of this study were to re-evaluate the nodules that had already been treated with ethanol after a period of 6 months or more, in relation to the clinical and cytological aspect. Forty patients who had already been treated with ethanol after an average period of 18 months (DP=11,75) were re-evaluated with ultrasonography, thyroid exam and a new aspiratory puncture. The majority of the patients, 56.41 % had solid nodules, 38.46% solid-cystic nodules and 13% had fully cystic nodules. 76,9% of the patients had nodules with normal function and 23.08% had toxic nodules. In the current evaluation, only 7.69% of the nodules remained toxic. There was a significant reduction of the size of the nodules considering the beginning and the end of the treatment (p< 0.001). The average period of treatment was 2,35 months (PD=3,39). No significant alteration of the size of the nodules was verified, as regards the period of the end of the treatment until this evaluation, indicating that there was no increase or reduction of the size of the nodule in the 18- month period. Concerning the diagnosis by cytology before the treatment, there was a predominance of colloidal goiter (92,5%), that is, the presence of benign follicular cells and abundant or scarce colloid. Yet, after the treatment this diagnosis was not so prevalent (54,05%), having been also found nodules with normal cytology (21,62%), with well definite follicles but not conclusive (18,92%) in which enough cells were not identified. It can be concluded that the reduction of the size of the nodule with the treatment is unquestionable and it continues for a long period. The nodules can start having normal cytology after the treatment, however there is stillpredominance of colloidal goiter. The high prevalence of non-conclusive diagnosis became evident, probably due to difficulties of puncture considering the presence of dense and homogeneous material after the treatment.

Nucleotídeos extracelulares (ATP, ADP, AMP) e seu derivado adenosina são conhecidos sinalizadores do sistema cardiovascular podendo mediar vários processos fisiológicos entre eles a proliferação celular, agregação plaquetária, inflamação e o tônus vascular. Os níveis destas substâncias, localmente e na circulação sanguínea, são controlados pelas ecto-NTPDases em conjunto com a ecto-5’nucleotidase (ecto-5’-NT) que realizam a degradação completa do ATP até adenosina. Os hormônios tireoideanos tiroxina (T4) e triiodotironina (T3) e o hormônio esteróide sexual estradiol (E2) atuam ativamente no sistema vascular promovendo vasodilatação. Nosso objetivo foi investigar quais enzimas da família das NTPDases estão presente em células musculares lisas vasculares (CMLVs) e se a atividade destas enzimas pode ser influenciada pela ação desses hormônios, uma vez que seus substratos e produtos podem sinalizar processos de relaxamento/contração muscular. Para tanto, as CMLVs foram extraídas da artéria aorta de ratos Wistar adultos e cultivadas em meio de cultura DMEM. Após atingirem a confluência, as células foram tratadas com 50 nM de T3 ou T4 ou 1M de 17-estradiol por 72 horas. As atividades enzimáticas foram medidas pela liberação de fosfato inorgânico enquanto que a expressão das ectonucleotidases foi verificada por imunocitoquímica (proteína) e RT-PCR (RNAm). Os resultados deste trabalho mostram que as CMLVs expressam as NTPDases 1, 2, 3, 5 e 6 e a ecto-5’-NT, responsáveis pelo controle dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. O tratamento com os hormônios T3, T4 e E2 nestas células mostrou que a atividade da ecto-5’-NT foi aumentada pelos três hormônios. A análise do RT-PCR demonstrou que os tratamentos foram capazes de aumentar também a quantidade de RNAm da ecto-5’NT, indicando mecanismos de ação genômica dos hormônios estudados. Por outro lado, O tratamento com os hormônios tireoideos não alterou as atividades ATPásica e ADPásica, somente o estradiol foi capaz de aumentar a atividade ATPásica. Estes resultados também sugerem que, pela hidrólise aumentada do AMP, disponibilizem-se níveis maiores de adenosina, com importante potencial vasodilatador local. Entretanto, o fato de o estradiol ter aumentado a hidrólise de ATP, mas não a de ADP, nos permite pensar que o ADP, agregador plaquetário bem estabelecido, possa estar acumulando extracelularmente, contribuindo para o desenvolvimento de problemas circulatórios.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-29T22:44:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Karina Brizeno Ferreira Lopes.pdf: 26868482 bytes, checksum: 12ac82c1bdbd13a260185b7222810e89 (MD5) / Rejected by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br), reason: on 2018-09-10T19:05:56Z (GMT) / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-11T17:31:23Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Karina Brizeno Ferreira Lopes.pdf: 3019279 bytes, checksum: 10bac9d318bcbb0618f8a68d57520276 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-11T18:46:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Karina Brizeno Ferreira Lopes.pdf: 3019279 bytes, checksum: 10bac9d318bcbb0618f8a68d57520276 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-11T18:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ana Karina Brizeno Ferreira Lopes.pdf: 3019279 bytes, checksum: 10bac9d318bcbb0618f8a68d57520276 (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Patologias da tireoide sob a forma de nódulos são frequentes na população. Apesar da maioria ser benigno, os nódulos malignos exigem tratamento preciso, visando melhorar a sobrevida e diminuir as morbidades relacionadas a doença e a seu tratamento. Os principais métodos diagnósticos não cirúrgicos para o estudo desta patologia são a ultrassonografia e a punção aspirativa com agulha fina (PAAF), porém estes ainda apresentam limitações. Portanto, estudos moleculares podem ser uma alternativa para esta avaliação, como a análise das metaloproteinases de matriz (MMP). As MMP são enzimas degradadoras da matriz extracelular e estão fortemente relacionadas com o processo carcinogênico de vários tumores, principalmente os subtipos MMP-2 e MMP-9. Suas atividades podem ser suprimidas pelos inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMP), pois a redução dos valores séricos destes inibidores são observadas em diversos cânceres. Com base nisso, este trabalho objetivou o estudo de 90 pacientes portadores de nódulos tireoideanos, visando demonstrar a relação entre a expressão das MMP e TIMP com os achados citológico através do método de imunocitoquímica, realizado com amostras coletadas por PAAF guiada por ultrassonografia destes nódulos. Além disso, foi realizado uma avaliação sobre o perfil epidemiológico destes pacientes e uma associação dos achados ultrassonográficos ao diagnóstico pós-punção. A análise dos dados mostrou que as proteínas MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 estão superexpressas nas lesões malignas tireoideanas, com resultados respectivamente de 100%, 100% e 81,81%. A imunoreatividade para MMP-9 e TIMP-2 foi útil para distinguir benignidade e malignidade. Observou-se uma tendência a malignidade em pacientes do sexo masculino, com idade superior a 45 anos e submetidos ao iodo radioativo. Quanto aos achados ultrassonográficos foi evidenciado que a composição sólida, hipoecogenicidade, margens não circunscritas, eixo perpendicular e presença de microcalcificação podem ser utilizados como parâmetros para prever suspeição destes nódulos; e a classificação TIRADS deve ser aplicada na prática clínica para indicar quando realizar a PAAF destes nódulos. / Pathologies of the thyroid gland in the form of nodules are quite frequent in the population. Although most are benign, malignant nodules when present require precise treatment to improve survival and decrease disease-related morbidities and treatment. The main current non-surgical diagnostic methods for the study of this pathologist are ultrasonography and fine needle aspiration, but these still have limitations. Therefore, molecular studies may be useful as an alternative to this evaluation; among these alternatives is the analysis of matrix metalloproteinases (MMP). MMPs are extracellular matrix degrading enzymes and are strongly related to the carcinogenesis process of several tumors, mainly the MMP-2 and MMP-9 subtypes. Its activity can be suppressed by the tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP), and the reduction of the serum values of these inhibitors are observed in several cancers. Based on this, this project aimed at the study of 90 patients with thyroid nodules, aiming to demonstrate the relationship between MMP and TIMP expression with the cytological findings of these lesions through the immunocytochemistry method, performed with samples collected by fine-needle aspiration puncture guided by ultrasonography of these nodules. In addition, an evaluation was made on the epidemiological profile of these patients and an association of the ultrasound findings to the post-puncture diagnosis. Data analysis showed that MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 proteins are overexpressed in thyroid malignancies. Immunoreactivity for MMP-9 and TIMP-2 was useful to distinguish benignity and malignancy in lesions of this gland. There was a tendency to malignancy in male patients, aged over 45 years and submitted to radioactive iodine. Regarding the ultrasound findings, it was evidenced that the solid composition, hypoechogenicity, noncircumscribed margins, perpendicular axis and presence of microcalcification can be used as parameters to predict thyroid nodule suspicion; and the TIRADS classification should be applied in clinical practice to indicate when to perform fine-needle aspiration.

Os nódulos de tireoide são frequentemente encontrados na prática clínica e, com o auxílio de ultrassonografia de alta resolução, podem ser identificados em 17 a 67% da população. A alta prevalência desses nódulos causa preocupação frequente aos pacientes e aos clínicos devido ao risco de malignidade, o que, por sua vez, leva a investigações laboratoriais de alto custo, invasivas e, eventualmente, a cirurgias desnecessárias. A punção aspirativa com agulha fina (PAAF) é o método diagnóstico pré-operatório mais preciso para identificação de um nódulo maligno de tireoide, mas não consegue excluir malignidade nos casos de citologia inadequada, nódulos com diagnóstico citológico de lesão folicular ou atipia de significado indeterminado e nas citologias sugestivas de neoplasia folicular. O objetivo deste estudo foi analisar as características clínicas, laboratoriais, ultrassonográficas e citológicas de uma população de pacientes com nódulos de tireoide submetidos a tireoidectomia e a relação entre estes achados e o risco de malignidade. Além disto, em relação aos nódulos malignos, verificar se o valor de TSH esteve associado a um estadiamento mais avançado da doença. Foram avaliados prontuários de 353 pacientes submetidos a tireoidectomia, acompanhados no Hospital das Clínicas da FMUSP de São Paulo, no período de fevereiro de 2002 a abril de 2010. O número total de nódulos nestes pacientes foi 392. As características clínicas e laboratoriais analisadas em cada paciente foram idade, sexo, valores séricos de TSH e T4 livre, presença de anticorpo anti-tireoperoxidase (anti- TPO) e anti-tireoglobulina (anti-TG). Foram avaliadas a presença de características ultrassonográficas sugestivas de benignidade (presença de halo periférico hipoecoico, aparência espongiforme, aspecto isoecóico ou hiperecoico) e de malignidade (nódulo sólido hipoecoico, contornos irregulares, presença de microcalcificações). Baseados nestas características, os nódulos foram classificados em benignos, indeterminados e suspeitos para malignidade. O diagnóstico citológico foi classificado em benigno, indeterminado, suspeito e maligno, e a análise combinada das características ultrassonográficas e citológicas também foi avaliada. Ao exame histopatológico, 200 nódulos eram malignos e 192 nódulos eram benignos. Os nossos resultados mostraram que sexo, idade, valores séricos de TSH e T4 livre e presença de anticorpo anti-TPO e anti-TG não estiveram associados a uma maior chance de malignidade. O valor de TSH sérico também não esteve associado a maior risco de recorrência ou estadiamento mais avançado nos pacientes com câncer Os nódulos maiores estiveram mais associados a benignidade quando avaliamos toda amostra. Na análise multivariada de toda amostra, após regressão logística, apenas a citologia maligna, hipoecogenicidade e presença de microcalcificações foram associados a malignidade. Já, a classificação ultrassonográfica que não se baseia em apenas uma característica mas em um conjunto de características, apresentou um alto valor preditivo de benignidade e foi útil na identificação de nódulos com citologia indeterminada. A classificação ultrassonográfica tem o potencial de reduzir o número de cirurgias para nódulos com citologia indeterminada / Thyroid nodules are often encountered in clinical practice, and with the use of high-resolution ultrasound may be identified in 17 to 67% of the population. The high prevalence of these nodules cause frequent concern to patients and clinicians due to the risk of malignancy, wich in turn leads on costly investigations, use of invasive diagnostic methods and sometimes unnecessary surgeries. Fine needle aspiration biopsy (FNAB) is the most accurate preoperative diagnostic method to identify a malignant thyroid nodule. However, FNAB cannot rule out malignancy in cases of inadequate cytology, follicular lesions, atypia of undetermined significance, and in cytology suggestive of follicular neoplasm. The aim of this study was to analyze clinical, laboratory, ultrasound and cytopathologic characteristics of a group of patients with thyroid nodules undergoing thyroidectomy and the relationship between serum levels of TSH and the risk of malignancy. In nodules found to be malignant in this cohort, we analyzed the association of TSH levels with advanced disease stage and risk of recurrence. We analyzed the records of 353 patients who were followed at Hospital das Clínicas - São Paulo Medical School, between February 2002 and April 2010, and who subsequently underwent thyroidectomy. The total number of nodules in these patients was 392. The clinical and laboratory characteristics included in the analysis were age, gender, serum levels of TSH and free T4, and presence of serum thyroid anti-peroxidase (anti-TPO) and anti-thyroglobulin (anti-TG) antibodies. We evaluated the presence of ultrasonographic features suggestive of benignity (isoechoic or hyperechoic appearance, presence of hypoechoic peripheral halo, spongiform appearance) and malignancy (hypoechoic appearance, irregular border, presence of microcalcifications). Based on these ultrasonographic characteristics, we classified the nodules as benign, indeterminate or suspicious for malignancy. According to the FNAB cytology, we also subdivided the nodules into benign, indeterminate, suspicious and malignant. The combined analysis of ultrasonographic features and cytopathology was also evaluated. On histopathology, 200 nodules were malignant and 192 were benign. Our results showed that gender, age, serum levels of TSH and free T4, as well as the presence of anti-TPO and anti-TG were not associated with increased risk of malignancy. Similarly, serum TSH value was not associated with increased risk of recurrence or more advanced stage in patients with thyroid cancer. A large nodule size was associated with benignity. In multivariate analysis, after logistic regression, only malignant cytology, hypoechoic appearance and presence of microcalcifications were associated with malignancy. Furthermore, the ultrasonographic classification, wich was not based in only one feature but in a set of characteristics, showed a high predictive value for benignity and seems to be useful in identifying nodules with indeterminate cytology at risk for malignancy. The use of ultrassonographic classification has the potential to reduce the number of surgeries for nodules with indeterminate cytology

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