Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-04-18T13:37:34Z No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma é responsável por 4% dos casos. É o mais agressivo, por possuir um alto potencial metastático. Como proposta para um tratamento mais efeciente e que cause menos danos estéticos, foi utilizada a Terapia Fotodinâmica (TFD) como um sistema que proporcionasse uma futura utilização por via tópica. No presente trabalho as micelas de Pluronic® F127 contendo 1, 5 e 10 μg/mL do fotossensibilizante alumínio-cloro-ftalocianina (NP F127/AlClPc), as micelas foram utilizadas para investigar os efeitos da TFD em células de melanoma murino. NP F127/AlClPc foram avaliadas quanto a sua estabilidade e caracterização fotofísica e fotoquímica O diâmetro hidrodinâmico (DH) médio de NP F127/AlClPc com 1 μg/mL de ALCLPc foi de 22 nm ; 42,03 nm para 5 μg/mL e 152,9 nm para 10 μg/mL a ~25 °C. O índice de polidispersão foi 0,43 para 1 μg/mL; 0,68 para 5 μg/mL; 0,37 para 10 μg/mL, e o potencial zeta (PZ) de -2,71mV para 1 μg/mL; -0,11mV para 5 μg/mL e -0,58 mV para 10 μg/mL, mostrando que as micelas são polidispersas. NP F127/AlClPc apresentou máxima absorbância a 670 nm e fluorescencia a 680 nm.Duas linhagens celulares foram utilizadas: B16F10 (melanoma murino) e B16F10FF (melanoma murino modificadas com FireFly Luciferase). Somente a irradiação com a luz LED ou a exposição das células a diferentes concentrações de NP F127/AlClPc não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. Quando aplicada a TFD com fluência de 85,1 J/cm2. Os resultados de citotoxicidade da NP F127/AlClPc, com vários tempos de incubação, mostrou uma maior eficácia em células B16F10 do que em células B16F10FF. A concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL;10 μg/mL mostraram-se mais eficaz no tempo de incubação de 20 e 25 minutos para as células B16F10. Pelo mesmo tempo de exposição de 25 minutos, as células B16F10FF mostraram-se mais resistentes ao tratamento. A citotoxicidade sem irradiação e com irradiação do LED mostrou que as micelas não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. As células expostas à NP F127/AlClPc nas concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL; 10 μg/mL por 15, 20 e 25 minutos e irradiadas com a fluência de 85,1 J/cm2, mostraram que células B16F10 tratadas com a NP F127/AlClPc 10 μg/mL apresentaram viabilidade de 25%, enquanto as células B16F10FF sob as mesmas condições apresentaram viabilidade de 64%. A citotoxicidade nas células B16F10FF foi de 7% para o tempo de incubação de 20 minutos e de 3 a 4% nos tempos de 15 e 25 minutos, quando estas células sofream duas incubações (24-48 horas) e duas aplicações de TFD (24-48 horas). Pode-se concluir então que, a NP F127/AlClPc apresentou características fotofísicas e fotoquímicas favoráveis para o seu uso da TFD. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma accounts for 4% of cases among skin cancer types. But it is the most aggressive with a high metastatic potential. Photodynamic therapy (PDT) was used as an alternative efficient and less damage inducing treatment in comparison to chemotherapy for topical application. In the present work Pluronic® F127 micelles containing 1, 5 and 10 μg /mL of the photosensitizer aluminum-chlorophthalotocyanine (F127/AlClPc). The micelles were used to investigate the effects of PDT on murine melanoma cells. Their stability, photophysical characteristics and photochemistry was evaluated. The hydrodynamic diameter for the micelles carrying 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL was 22nm, 42.04nm and 152.9nm respectively. The poly dispersity index for the micelles with 1mg/mL, 5mg/mL and 10mg/mL were 0.43, 0.68 and 0.37 respectively. The zeta potential for the micelles with 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL F127/AlClPc were -2.7mV,-0.11mV and -0.58mV. The micelles showed maximum absorbance at 670nm and fluorescence at 680nm. Two cell lines were evaluated B16F10 (murine melanoma) and B16F10FF (murine melanoma modified with firefly luciferase). The irradiation of LED with light or with different concentration of F127 / AlClPc did not cause toxicity to both cell lines when the PDT fluent was 85.1 J / cm2. The cytotoxity results of the micelles F127/AlClPc at various incubation times was more prominent with B16F10 than B16F10FF. The concentration of 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL were more effective against B16F10 cells when incubated for 20 minutes and 25 minutes. However, for B16F10FF cells they were resistant to treatment after 25 minutes of incubation. The cytotoxicity with either irradiation or without showed that the micelles did not cause toxicity to both cells. Upon exposure to 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL for 15, 20 and 25 minutes and irradiation of fluency 85.1 J / cm2 B16F10 presented a viability of 25% while B16F10FF had 64%. After incubation of 15, 20 and 25 minutes the cytotoxicity of B16F10FF cells was 3%, 7% and 4% respectively when the cells were incubated (24-48 hours) and PDT was applied twice (24-48 hours). It can be concluded that the micelles with F127 / AlClPc presented photophysical and photochemical characteristics favorable for use in photodynamic therapy.

De acordo com o manejo tradicionalmente empregado na pecuária leiteira, a descorna de bezerros é um procedimento rotineiro e de destaque na atividade. Tal procedimento é normalmente realizado por meio da cauterização térmica e apresenta-se, portanto, como um dos principais fatores da ocorrência de queimaduras em bezerros. O tratamento das lesões baseia-se na aplicação tópica de substâncias cicatrizantes, antimicrobianas e repelentes, sendo que, na Medicina Veterinária, o elemento mais utilizado e presente em produtos tópicos comerciais com finalidade de melhorar o tempo de cicatrização é o óxido de zinco. Como alternativa ao uso de antibióticos e melhora da cicatrização de feridas, a fototerapia de baixa intensidade bem como a terapia fotodinâmica se apresentam como opções terapêuticas no tratamento para reparação tecidual e contra infecções locais em feridas por queimaduras. O objetivo deste estudo foi avaliar os resultados do emprego da fototerapia no tratamento de lesões de queimaduras induzidas por meio da descorna cauterizante em bezerros, caracterizando a evolução macroscópica e histológica da cicatrização das lesões e a recuperação clínica do animal quando comparada com o tratamento tradicional preconizado com pomada à base de óxido de zinco. Desta forma, foram utilizados 30 bezerros, divididos em cinco grupos avaliados: G1 - grupo controle; G2- grupo laser vermelho (LV), λ=660nm/20s de irradiação (70J/cm2); G3 - laser infravermelho (IV), λ=810nm/20s de irradiação (70J/cm2); G3 - LED vermelho (LED), λ=660nm/40s de irradiação (10,8J/cm2) e G4 grupo terapia fotodinâmica (PDT), azul de metileno a 0,01% associado ao LED vermelho, λ=660nm/40s de irradiação (10,8J/cm2). Os resultados demonstraram que não houve diferença estatística entre os grupos quanto ao tempo de regressão das lesões bem como quanto à deposição de colágeno tipo III. Pode-se concluir que as fototerapias, nos parâmetros de irradiação propostos, mostraram-se tão eficazes quanto à aplicação de unguento com óxido de zinco na cicatrização de queimaduras em bezerros / According to the traditionally management used in dairy cattle, disbudding calves is a highly important routine procedure. Disbudding is usually performed by heat cauterization and presents itself as the main factor that leads to burns injuries in calves. The treatment of the lesions is based on the topical application of antimicrobial and repellents healing products, and in Veterinary Medicine, the most frequent used and present in commercial products, in order to improve the healing time, is zinc oxide. As an alternative to antibiotics and to improve wound healing, low level phototherapy and photodynamic therapy are presented as therapeutic options for tissue repair and against local infections in burn wounds. The aim of this study was to evaluate the results of phototherapy in the treatment of burn injuries induced by disbudding in calves, by macroscopic and histological features of the lesions, and the clinical recovery of the animals, and to compare with the traditional treatment with zinc oxide ointment. Thus, 30 calves were divided into five study groups: G1 control; G2 - red laser (RL), λ = 660 nm / 20 seconds of irradiation (70J / cm2), G3 - infrared laser (IR), λ = 810nm / 20 seconds of irradiation (70J / cm2); G4 - red LED (LED), λ = 660 nm / 40 seconds of irradiation (10,8J / cm2) and G5 - photodynamic therapy (PDT), methylene blue 0.01% associated with the red LED λ = 660 nm / 40 seconds of irradiation ( 10,8J / cm2). The results showed no statistical differences among the groups according to wound healing time, and to the type III collagen deposition. It was possible to conclude that phototherapies, in the proposed irradiation parameters, were efficient as zinc oxide ointment in the burn wound healing in calves

Fotossensibilizadores são moléculas capazes de interagir com a luz de modo a gerar espécies altamente reativas de oxigênio como o oxigênio singlete e outras formas radicalares. Esta propriedade pode ser utilizada para o tratamento de câncer, remoção de contaminantes ambientais, inativação de agentes patogênicos no sangue e hemoderivados, bem como na esterilização alimentos. A técnica que utiliza o efeito fotodinâmico para o tratamento de câncer recebe o de nome Terapia Fotodinâmica (do termo em inglês: Photodynamic Therapy - PDT).Photofrin®, Photogem® e Photosan® são fármacos de primeira geração, derivados da hematoporfirina, que constituem o principal grupo de medicamentos com aplicação clínica em PDT. Photodithazine® é um fármaco de 2ª geração, derivado de clorina-e-6, que encontra-se em fase de testes clínicos e apresenta resultados promissores como fotossensibilizador (FS). Este trabalho tem o objetivo de investigar a eficiência fotodinâmica destes fármacos através de experimentos que envolvem a utilização da albumina de soro bovino (BSA) e o ácido úrico (AU) como dosímetros químicos; eritrócitos como modelo de membrana celular e a determinação do coeficiente de partição (P ou Log P) para se investigar lipofilicidade e a interação dos FS com as membranas celulares. Soluções contendo BSA e FS, preparadas em tampão fosfato, foram iluminadas com LED (630nm) e o decréscimo na fluorescência do BSA em 340nm foi utilizado para se calcular constante da velocidade de fotoxidação (kC, min-1). No teste do AU, a mistura AU e FS foi iluminada com LED e o coeficiente de atividade fotodinâmica (AF, m2.J-1) foi determinado através do decréscimo da banda do AU em 293nm. Os resultados convergem para a seguinte ordem de eficiência fotodinâmica: Photodithazine® >> Photogem® > Photofrin® > Photosan®, baseada nos valores de kC (14,8±0,3); (9,8±0,5); (3,2±0,7) e (2,9±0,5)min-1 e AF (64±14), (37±9), (9±2) e (4±1)m2J-1, respectivamente. Com objetivo de determinar o tempo necessário para causar 50% de hemólise (t50), amostras de eritrócitos (hematócrito=2%) foram irradiadas por 10 minutos e o dano causado à membrana pelo efeito fotodinâmico foi monitorado através da variação na absorbância característica da oxihemoglobina em 540 e 577nm. O mecanismo preferencial envolvido na fotoxidação da membrana celular foi investigado por meio de experimentos que avaliaram a influência de água deuterada, azida de sódio e manitol na velocidade de fotoxidação dos eritrócitos. Os resultados dos experimentos de hemólise apontam para a seguinte ordem de eficiência fotodinâmica: Photodithazine® >> Photofrin® > Photogem® > Photosan®, baseada nos valores de t50 : (1,2±0,3), (3,4±0,1), (3,8±0,2), (5,2±0,1)min e logP (0,21); (0,15); (0,11); (-0,21); respectivamente. A hemólise com Photogem® em meio deuterado foi cerca de 25% mais rápida e a presença de azida de sódio causou diminuição na hemólise, expressa pela diminuição dos valores de porcentagem máxima de hemólise (%HMÁX) e aumento nos valores de t50.. A presença de manitol nos ensaios de hemólise não apresentou influência nos valores de t50 e %HMÁX, indicando que a hemólise não ocorre via mecanismo radicalar, mas aponta para o mecanismo do tipo II, via oxigênio singlete, como sendo o mecanismo predominante na fotoxidação da membrana plasmática dos eritrócitos pelos fotossensibilizadores estudados. As diferenças encontradas entre os fármacos HpD são atribuídas as suas diferentes constituições, uma vez que tratam-se de misturas de monômeros, dímeros e oligomeros em diferentes frações. Experimentos realizados em solução homogênea, tais como os experimentos de fotoxidação de BSA e o teste do ácido úrico, fornecem importantes informações a respeito da estrutura-atividade dos fármacos, mas negligenciam os efeitos de interação dos FS com o meio biológico. Em ambiente biológico, os FS participam de inúmeras interações adicionais, constituindo sistemas únicos, com diferentes propriedades fotofísicas e fotoquímicas. Estudos anteriores, realizados no nosso grupo de pesquisa, envolvendo a determinação da citotoxicidade destes FS em culturas de células normais e tumorais, bem como estudos de separação cromatográfica dos constituintes de fármacos HpD estão de acordo com os resultados apresentados neste trabalho. / Photodynamic Therapy (PDT) is a developing technology that has been used for cancer treatment and recognized to have a huge potential for microorganisms inactivation and detoxication. It is based on light irradiation of a photosensitizer (PS) in order to produce reactive oxygen species. Many kinds of compounds are known to have photosensitizing properties. Photofrin®, Photogem® and Photosan® consist of mixtures of monomers, dimmers, and oligomers from hematoporphyrin treated chemically being the most clinically used PS. Photodithazine® is a water soluble clorin-e6-derivative, a second-generation drug. The present work provides a comparative study between these PS, using bovine serum albumin (BSA) and uric acid (UA) as chemical dosimeters as well as human red blood cells (RBC) as a cell membrane model and octanol/phosphate buffer partition coefficient (logP) to access the lipophilicity of the compounds. BSA and PS solutions in phosphate buffer were illuminated with LED ( =630nm) and the decrease in the BSA fluorescence at 340nm was used to calculate the photoxidation rate constant (kC, min-1). In UA test, a mixture of UA and photosensitizer was illuminated with LED ( =630nm) and the photodynamic activity coefficient (PA, m2.J-1) was determined by the decrease in the 293nm absorbance of UA. The results from these methodologies suggest that the photodynamic efficiency order is: Photodithazine® > Photogem® > Photofrin® > Photosan®, based on PA values (64±14), (37±9), (9±2) and (4±1)m2J-1 and kC values (14.8±0.3); (9.8±0.5); (3.2±0.7) and (2.9±0.5)min-1, respectively. In order to determine the t50 (time for 50% of hemolysis) the samples of RBC (hematocrit=2,0%) were irradiated for 10min and the absorbance characteristic of oxyhemoglobin (540 e 577nm) released due to the damage and consequent membrane lysis by the action of the PS was obtained. The mechanism involved in the photoxidation of the membrane was also studied determining how sodium azide, deuterium oxide and manitol affect the t50 values. The hemolysis experiments and logP values suggest the following order: Photodithazine® > Photofrin® > Photogem® > Photosan®, based on t50 values (1.2±0.3), (3.4±0.1), (3.8±0.2), (5.2±0.1)min and logP (0.21); x (0.15); (0.11); (-0.21), respectively. The rate of the hemolysis is increased about 25% in the deuterium oxide presence, and decreased in the sodium azide presence. Moreover, the experiments performed in the manitol presence not show any diference on t50 values. These results showed that the preponderant mechanism in the photohemolisys is of the type II. The differences in the photoxidative action of the HpD should be due to the diverse content of monomers, dimmers and oligomers of the PS components. The results of hemolysis experiments suggest that these differences should result in singular interactions of HpD with the membrane constituents. Photofrin seems to be the more effective HpD concerning the hemolysis of erythrocytes and logP values. Therefore the results of all used methodologies suggest that clorin-e6-derivative seems to be a much more efficient PS, followed by the three HpD. Photooxidation experiments performed in simple solution provide valuable information on structure-activity relationships, but neglect the effects due to of membrane interactions; the PS molecule can bind with the membrane of RBC and this PS-RBC complex is a unique system with different photophysical and photochemical properties. These results have been confirmed in our group by cytotoxic studies with tumor and non-tumor cells as well as by chromatographic separation of the HpDs showing that the correlation between the parameters still holds.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-25Bitstream added on 2014-06-13T18:56:12Z : No. of bitstreams: 1 costa_acbp_me_sjc.pdf: 3713548 bytes, checksum: 5d63f9c051b3f55b3f5296a1362fb144 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ação antifúngica da Terapia Fotodinâmica (TFD) em culturas planctônicas e biofilmes de Candida albicans formados in vitro e em modelo de candidose experimental em camundongos, bem como sua interferência na aderência de C. albicans às células epiteliais bucais humanas in vitro. Foi utilizada cepa padrão de C. albicans (ATCC 18804) para os ensaios. Como fonte de luz foi utilizado o Diodo Emissor de Luz (LED) com emissão de luz verde (532±10 nm) com potência de 90 mW e fotossensibilizador eritrosina nas concentrações variando de 200 a 0,39 μM para os ensaios em cultura plactônica. O biofilme foi formado em placas de 96 poços e tratado com o fotossensibilizador eritrosina na concentração de 400 μM e luz LED. 56 camundongos machos e adultos foram imunossuprimidos e inoculados com suspensões contendo 108 células/mL de C. albicans. Os animais foram submetidos a TFD mediada pelo corante eritrosina (400 μM) e irradiados por LED. Antes e após os tratamentos, foram recuperadas leveduras da cavidade bucal dos animais. As leveduras recuperadas após a TFD e grupo controle foram avaliadas quanto a interferência da TFD na aderência de C. albicans às células do epitélio bucal humano. Em seguida, os animais foram sacrificados e as línguas retiradas para análise macroscópica e histológica. Os biofilmes, línguas e lâminas de aderência foram também analisados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A análise dos dados foi feita por ANOVA e Teste de Tukey, teste t de Student e Kruskal-Wallis (P < 0,05). A TFD aplicada à cultura planctônica de C. albicans foi dose-dependente com redução significativa a partir da menor concentração testada (0,39 μM) e 100% de morte das células a partir de 3,12 μM. A TFD em biofilme formado in vitro reduziu 0,74 log10 de C. albicans com redução de leveduras e hifas... / The aims of the present study were evaluate the antifungal action of Photodynamic Therapy (PDT) on Candida albicans planktonic cultures and biofilms formed in vitro and experimental candidosis model in mice, as well as its interference on C. albicans adherence on humans buccal epithelial cells in vitro. Standard strain of C. albicans (ATCC 18804) was used for assays. Green Light Emitting Diode (LED- 532 ± 10 nm) was used as light source with an output power of 90 mW and erythrosine photosensitizer at concentrations range from 200 to 0.39 μM for the assays on plaktonic cultures. The biofilm was formed on plates of 96- wells and treated with the erythrosine photosensitizer at a concentration of 400 μM and LED light. 56 adults and males mice were immunosuppressed and inoculated with suspensions containing 108 cells/ mL of C. albicans. The animals were submitted to erythrosine dye- mediated PDT (400 μM) and irradiated by LED. Before and after the treatments, yeasts from the animals´ oral cavities were recovered. The yeasts recovered after PDT and control group were evaluated for interference of PDT on C. albicans adherence to humans buccal epithelial cells. Following, the animals were sacrified and their tongues taken away for macroscopic and histological analysis. The biofilms, tongues and adherence slices were also analized by Scanning Electron Microscopy (SEM). The analysis of the dates were done by ANOVA and Tukey test, Student t test and Kruskal-Wallis (P < 0.05). PDT applied on C. albicans planktonic culture was concentrationdependent with significant reduction from minor concentration tested (0.39 μM) and 100% of cells death from 3.12 μM. C. albicans biofilm formed in vitro was reduced 0.74 log10 by PDT with reduction of yeasts and hyphaes verified by SEM. In vivo, 0.73 log10 of C. albicans and 35% adherence on buccal epithelial cells were reduced, but there was not... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3807.pdf: 2911104 bytes, checksum: 2c7ae1e3c12f5cd9fa989ae4f5ece3f6 (MD5) Previous issue date: 2011-07-26 / Universidade Federal de Sao Carlos / The Photodynamic Antimicrobial Chemotherapy (PACT) has shown that is a promising alternative for buccal disinfection. The objective of this in situ work is to investigate the antimicrobial effect of photodynamic therapy over biofilms by the use of curcumine and Photogem® presented in a solution. In this research 18 volunteers were selected randomly from both sexes, with age over than 18 years. These patients wore a removable palatine device that contained six enamel/dentin specimens of 5 square millimeters by 2 millimeters of thickness. Those patients wore those devices during the period of four days, after that the biofilm created over the specimens were treated using different PACT protocols. The effect of the PACT treatments was evaluated by the microbial reduction of the Streptococcus mutans by UFC counting. This study compared a control group with the curcumine group that didn't received light irradiation with another group that was treated with the PACT protocol using curcumine solution, and other group that used the photosensitizer presented in solution with Photogem®. The obtained results of this investigation showed the reduction of the amount of the S. mutans UFC. The highest reduction (p=0.02) was observed when the PACT is applied with solution using Photogem as the photosensitizer. In conclusion, this study suggests that there is a antimicrobial effect of photodynamic therapy over biofilms by the use of curcumine (1.500&#956;g/mL) and Photogem® (1.000&#956;g/mL) followed by LED system irradiation (&#955;=640±5nm). / A Terapia Fotodinâmica (TFD) antimicrobiana tem se mostrado uma promissora alternativa para a desinfecção bucal. Os objetivos deste trabalho in situ foram de investigar o efeito antimicrobiano em biofilme dental por meio da TFD, utilizando-se bochecho e aerosol contendo, respectivamente, curcumina e Photogem®. Nesta pesquisa, foram selecionados 18 voluntários de ambos os sexos, com idade acima de 18 anos e de forma aleatória na população. Esses voluntários usaram uma placa contendo blocos de esmalte bovino, durante 4 dias. Após a formação de biofilme dental sobre a superfície dos blocos, as amostras foram submetidas ao tratamento com TFD. O efeito da TFD foi avaliado pela redução de Streptococcus mutans em meio de cultura Mitis Salivarius com Bacitracina e sacarose. Os grupos experimentais investigados foram, Grupo II: tratado com solução de curcumina (1.500&#956;g/mL); Grupo III: tratado com TFD (&#955;=450±5nm) e solução de curcumina (1.500&#956;g/mL); Grupo IV: que recebeu TFD (&#955;=640±5nm) com solução contendo Photogen® (1.000&#956;g/mL) comparados com o grupo controle(Grupo I), o qual não recebeu tratamento. Os dados resultantes obtidos foram submetidos ao teste de análise estatística ANOVA a nível de 5% (p<0,05). A análise estatística mostrou que houve redução significativa na quantidade de S. mutans no grupo tratado com a curcumina + luz (p=0,04) e no grupo com Photogen® + luz (p=0,02). Ocorreu redução de S. mutans quando comparamos o Grupo I com os demais grupos experimentais, nas seguintes proporções: 8% para o Grupo II, 15% para o Grupo III e 18% para o Grupo IV. Em conclusão, sugere-se que há efeito antimicrobiano em biofilme dental por meio da TFD quando do uso de solução de curcumina (1.500&#956;g/mL) e ou de Photogen® (1.000&#956;g/mL) seguidos da irradiação com sistema LED (&#955;=640±5nm).

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5345.pdf: 1839849 bytes, checksum: 117cb76c1a10deab4b3e8c9df4d797f3 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / In Brazil there was an increase of post-surgical infections by rapidly growing mycobacteria, mainly Mycobacterium massiliense, leading the Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA) to establish standards for the mandatory notification of cases occurring nationwide. In order to deal with a major public health problem, this study aimed to determine the efficiency of using antimicrobial photodynamic inactivation (PDIa) in Mycobacterium massiliense for future use in the treatment of agent infections. The objective was to test in vitro technique the PDI to control Mycobacterium massiliense to determine the best light dose and concentration of each photosensitizer (FS). To accomplish this search were used two FS: Photogem® and salt Curcumin (N-Methyl-D-Glucominato of Curcumin, 31.8%). As a light source for radiating a BioTable ® operated at 630nm (red light) for Photogem ® and 460nm (blue light) to the salt of curcumin. After the standardized inoculum was added to the sample analyzed in triplicate to a 24 well plate which contained 500&#956;l aliquots of the inoculum +500 &#956; l of the FS for the study groups tested, and the control group containing 1 ml of inoculum, and five minutes as time incubation (protected from light). After expiration of the irradiation time in accordance with the previously analyzed fluences of the tested groups and subsequent dilution of the sample to the value of 10-5, 100mL sample were plated in triplicate on 7H10 agar + OADC 10% and maintained at 37 for about 5 days with subsequent counting of colony forming units. Based on the results, they showed that FS Photogem ® until the concentration of 1000 &#956;g/Ml was not effective in reducing the number of CFU of M. massiliense. In contrast, the FS Salt Curcumin was effective at concentrations of 1300 &#956;g/Ml with a light dose 50 J/cm2 compared to controls. Thus, these data suggest that the salt FS Curcumin in photodynamic action is a viable alternative for reducing M massiliense when tested in vitro. / No Brasil houve um crescimento de infecções pós-cirúrgicas por micobactérias de crescimento rápido, principalmente por Mycobacterium massiliense, levando a Agência de Vigilância Sanitária (ANVISA) estabelecer normas de notificação obrigatória dos casos ocorridos em todo território nacional. Tendo em vista de se tratar de um grande problema de saúde pública, o presente trabalho visou determinar a eficiência da atividade antimicrobiana utilizando Inativação Fotodinâmica (IFD) em Mycobacterium massiliense para futura utilização no tratamento de infecções por esse agente. O objetivo foi testar in vitro, a técnica da IFD no controle de Mycobacterium massiliense, para determinar a melhor dose de luz e concentração de cada fotossensibilizador (FS). Para realizar esta pesquisa foram utilizados dois FS: Photogem® e Sal de Curcumina (N-Metil-D-Glucominato de Curcumina, a 31,8%). Como fonte de luz para irradiação, uma BioTable® operou em 630nm (luz vermelha) para o Photogem® e em 460nm (luz azul) para o Sal de Curcumina. Após padronizado o inóculo, a amostra analisada foi adicionada em triplicata a uma placa de 24 poços a qual continha alíquotas de 500&#956;l do inoculo +500&#956;l do FS para os grupos de estudos testados, e o grupo controle contendo 1ml do inoculo, tendo 5 minutos como tempo de incubação (protegido da luz). Após decorrido o tempo de irradiação de acordo com as fluências previamente analisadas dos grupos testados e com posterior diluição da amostra até o valor de 10-5, 100&#956;l da amostra foram semeadas em triplicada em placas contendo Agar 7H10 + OADC 10% e mantidas a 37o por aproximadamente 5 dias com posterior contagem das unidades formadoras de colônias. Com base nos resultados obtidos, estes mostraram que o FS Photogem® até a concentração de 1000&#956;g/ml não foi efetivo na redução do número de UFC de M. massiliense. Em contraponto, o FS Sal de Curcumina foi efetivo a partir da concentração de 1300 &#956;g/ml com dose de luz a 50 J/cm2 comparado ao grupo controle. Assim, estes dados sugerem que o FS Sal de Curcumina sob ação fotodinâmica é uma alternativa viável para a redução de M. massiliense quando testadas in vitro.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A periodontite agressiva é um processo inflamatório de origem bacteriana mediado pelo sistema imunológico do hospedeiro e é provavelmente a forma mais grave de doença periodontal, apresentando destruição das estruturas tanto de proteção quanto de suporte dentário, num período relativamente rápido, normalmente levando a perda prematura dos elementos dentários e, em alguns casos, terapia antimicrobiana adjunta é necessária em adição à terapia mecânica. O objetivo do presente ensaio clínico randomizado controlado foi avaliar o efeito clínico da terapia fotodinâmica como adjunto ao tratamento periodontal não cirúrgico no tratamento da periodontite agressiva Os seguintes parâmetros clínicos foram avaliados: índice de placa visível, sangramento à sondagem, profundidade de bolsa à sondagem, nível de inserção clínica relativo, envolvimento de furca e mobilidade. Foram selecionados dez pacientes com periodontite agressiva, os quais foram examinados no dia zero e após três meses.O desenho do estudo consistiu em um modelo de boca dividida, onde um hemiarco foi tratado com raspagem e alisamento radicular e terapia fotodinâmica (laser diodo) e o outro apenas com raspagem e alisamento radicular. Três meses após o término do tratamento, os grupos terapêuticos apresentaram resultados semelhantes para todos os parâmetros clínicos avaliados: ambas as terapias tiveram sucesso, como redução de profundidade de bolsa, ganho de nível de inserção clínica relativo, redução de índice de placa visível, redução de sangramento à sondagem, diminuição de envolvimento de furca e diminuição de mobilidade, porém sem diferenças estatisticamente significantes entre elas. Dentro das limitações do presente estudo, os resultados sugerem que a terapia fotodinâmica adjuntamente ao tratamento periodontal não cirúrgico mecânico foi tão eficaz quanto o tratamento periodontal não cirúrgico mecânico sozinho. / Aggressive periodontitis is an inflammatory process of bacterial origin mediated by host immune response and is probably the most serious form of periodontal disease, with destruction of the structures of protection and support, with fast course, often leading to premature loss of the teeth and, in some cases, adjunct antimicrobial therapy is need in addition to mechanical therapy. The aim of this randomized controlled trial was to investigate the clinical effect of photodynamic therapy as an adjunct to nonsurgical periodontal treatment in patients with aggressive periodontitis. The following clinical parameters were evaluated: visible plaque index, bleeding on probing, probing pocket depth, relative attachment level, furcation involvement and mobility. We selected ten patients with aggressive periodontitis, which were examined in the baseline to three months. The study design consisted of a split mouth model, where a quadrant was treated with scaling and root planing and photodynamic therapy (diode laser) and the other only with scaling and root planing. Three months after the end of the treatment, the treatment groups showed similar results for all clinical parameters evaluated: both therapies have been successful and showed reduction of pocket depth, gain of relative attachment level, reduction of visible plaque index, reduction of bleeding on probing, decreased furcation involvement and decreased mobility, but without statistically significant differences between them. Within the limitations of the present study the results suggest that photodynamic therapy adjunct to non-surgical periodontal mechanic treatment was as effective as the non-surgical periodontal mechanic treatment alone.

This work had the aim to assess some biological eects of the Bidens sulphurea (Asterace ) (also know as Cosmos sulphureus), assessed eects were: cytotoxicity, antibiotic and phototoxicity. The phototoxicity was ephasized, since the primary aim of this work was to evaluate if this plant\'s pigments could be used as photosensitizers in the photodynamic therapy, in a non invasive way, using light emitted by LED, for treatment of dermatosis, particularly, onicomicosis. The conclusion of this work is that, of the two Bidens sulphurea varieties studied, the one that bear the greater photodynamic activity, when irradiated with white light, or red light ( 600 nm) and did showed greater antibiotic eect (in the dark) was the orange variety. The orange variety did showed an increase in the toxicidy to the Artemia salina nauplii, when irradiated with red light. / Este trabalho teve por objetivo, avaliar alguns efeitos biologicos do extratos bruto (etanolico) das ores de Bidens sulphurea (Asterace), os efeitos avaliados foram: citotoxicidade, efeito antibiotico e fototoxico. Deu-se ênfase aos efeitos fototoxicos, pois o objetivo primario era avaliar se os pigmentos desta planta poderiam ser utilizados como fotosensitizadores para a terapia fotodinâmica, empregando-se luz emitida por LED, para o tratamento de um modo não invasivo de dermatoses, tais como a onicomicose. Concluiuse que, das duas variedades da planta estudada (variedades laranja e amarela), a que apresenta maior fototoxicidade tanto quando irradiado por luz branca, e vermelha ( 600 nm), quanto efeito antibiotico (no escuro) foi a variedade laranja, a qual tambem mostrou uma grande toxicidade frente aos nauplios de Artemia salina quando irradiada com luz vermelha. / Mestre em Química

Submitted by Ginamara Lima (ginaj@pucrs.br) on 2012-07-12T12:02:20Z No. of bitstreams: 1 439805.pdf: 542604 bytes, checksum: 5c5d56597cb3b5dc318352b30ee763e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-12T12:02:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 439805.pdf: 542604 bytes, checksum: 5c5d56597cb3b5dc318352b30ee763e4 (MD5) / Objetivos: Este estudo tem por objetivo verificar o efeito biomodulatório pelos lasers vermelho e infravermelho interferem no processo cicatricial de ferimentos localizados no ponto de aplicação e a distância deste. Materiais e Métodos:Foram realizados três ferimentos circulares, sendo um na região cranial, um na região medial e um na região caudal em dorso de ratos. Para este estudo experimental foram analisados 45 animais divididos em três grupos, onde 15 animais não foram aplicados nenhum tipo de laser (GrupoI), 15 animais foram aplicados laser infravermelho (Grupo II) e 15 animais laser vermelho(Grupo III). O período de observação foi de três, cinco e sete dias. Assim, cada grupo foi subdividido em três subgrupos (A; B; C), de acordo com período de observação. Para os grupos II e III a dose de energia, durante as irradiações foi de 8J/cm2 após o término da cirurgia e a cada 48 horas, totalizando, na dependência da época da morte do animal (três, cinco ou sete dias), duas, três ou quatro irradiações. Resultados: Houve maior presença de edema e processo inflamatório agudo nos primeiros dias avaliados e quantitativamente não houve diferença estatisticamente significante no percentual de redução das feridas intra e inter-grupos. Conclusões: A fototerapia por laser de baixa potência infravermelha apresentou um efeito biomodulatório positivo nos períodos iniciais de cicatrização e reparo em feridas no dorso de ratos. A fototerapia por laser de baixa potência vermelha apresentou, nos períodos iniciais analisados, maior processo inflamatório agudo, o que pode ser devido ao menor comprimento de onda que atinge as camadas mais superficiais da ferida. / Objectives: This study aims to verify whether the red and infrared lasers can interfere with the healing process of wounds located at the point of application and at distance. Matherials and methods: Three circular wounds were conducted, one in the cranial region, another one in the medial region and a third one in the caudal region on the dorsum of rats. For this experimental study 45 animals, divided into three groups, were investigated: in 15 animals any kind of laser was applied; in 15 animals infrared laser was used; and in 15 animals red laser was used. The observation period was three, five, and seven days. Thus, each group was divided into three subgroups (A, B, C) in accordance with the observation period. For groups II and III the amount of energy during the irradiation was 8J/cm2 after the surgery and every 48 hours, totalizing, depending on the time of death of the animal (three, five or seven days), two, three or four irradiations. Results: We found presence of edema in the early stages and We found no statistical significance when we compared the reduction percentual of the healed wounds. Conclusions: Phototherapy by low power infrared laser showed a positive biomodulatory effect in the early periods of healing and repair of wounds in the back of rats. The therapy by low power red laser presented, in the initial periods analyzed, higher acute inflammation process, which may be due to a shorter wavelength that affects the upper layers of the wound.

O melanoma representa 4% dos tipos de neoplasias cutâneas e causa 79% de morte por doenças de pele no mundo. Um dos grandes problemas relacionados ao tratamento de melanoma advém da sua resistência às terapias convencionais e, assim, a terapia fotodinâmica surgiu como uma alternativa terapêutica promissora, devido ao seu papel no tratamento de diversos tipos de câncer, além de outras doenças de pele. Ela é baseada no acúmulo seletivo de uma molécula fotoativa no tecido alvo, seguida da iluminação por uma fonte de luz, cujo comprimento de onda é específico para a excitação dessa molécula, ocasionando no dano celular. Neste estudo, foram realizados experimentos in vitro investigando a resposta fotodinâmica em melanoma humano, através de um modelo de tumor tridimensional por levitação magnética. Inicialmente, um protocolo de obtenção dos tumores de melanoma foi desenvolvido para avaliação da terapia em diferentes doses de luz e concentrações de fotossensibilizador. Em seguida, ensaios de cinética e quantificação intracelular com dois fotossensibilizadores, Photogem&reg; e Photodithazine&reg;, também foram feitos com o intuito de averiguar a sua distribuição, bem como tempo de internalização nos tumores. Tendo estabelecido que a incubação por 16 horas com Photodithazine&reg; foi o parâmetro experimental mais adequado, a terapia fotodinâmica foi realizada, em sessão única, com irradiação em 660 nm em tumores de duas diferentes espessuras. Logo, testes de citotoxicidade foram utilizados para comparar os resultados de ambas as condições, onde se notou que o aumento na espessura atenuou o dano oxidativo decorrente da terapia. Além disso, foi observado que o acréscimo na dose de luz não acarretou em mudanças muito significativas na morte celular. No entanto, o maior dano celular, de aproximadamente 90% de morte, foi obtido com 100 &mu;g/mL de Photodithazine&reg; e iluminação com 60 J/cm², resultando na desagregação dos tumores, efeitos promissores da terapia no melanoma. Uma possível alternativa sugerida para aprimorar a eficiência fotodinâmica, seria a aplicação de mais sessões de terapia fotodinâmica, uma vez que os experimentos realizados nesse trabalho foram com uma sessão e, esse procedimento, poderia ocasionar em maior morte celular. / Melanoma accounts for 4% of skin cancers and causes 79% of death from skin diseases worldwide. A major problem associated with melanoma treatment is due to its increasingly resistance to conventional therapies. Thus, photodynamic therapy has emerged as a promising alternative modality to several types of cancer and other skin disorders. It generally involves the selective accumulation of a photoactive molecule in target tissue, followed by illumination with light source of an appropriate wavelength, to excite this molecule, resulting in cell damage. This study sought to investigate the photodynamic response in human melanoma, through a three dimensional tumor model by magnetic levitation. Initially, a protocol to obtain melanoma tumors was developed, to evaluate the therapy at different doses of light and photosensitizer concentrations. Posteriorly, kinetic assays and intracellular quantification with two photosensitizers, Photogem&reg; and Photodithazine&reg;, were also carried out in order to ascertain its distribution, as well as time internalization in tumors. Having established that incubation for 16 hours with Photodithazine&reg; was the most suitable experimental parameter, photodynamic therapy was performed in a single session, with irradiation of 660 nm in two tumors, different in thicknesses. Therefore, cytotoxicity tests were used to compare the results of both conditions, where it was noted that the increased tumor depth may attenuate oxidative damage, induced by the therapy. Furthermore, it was observed that the increase in light dose did not result in significant changes in cell death. Nevertheless, the greater cell damage, approximately 90% kill was obtained with 100 ug/mL Photodithazine&reg; and illumination with 60 J / cm², causing tumor breakdown, which is a promising effect in melanoma therapy. An alternative suggested to enhance the photodynamic efficiency, would be to apply more sessions of photodynamic therapy, so this procedure could result in increased cell death.