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Riboflavin analgs from Streptomyces davawensisas antiinfectives: mode of action, mechanism of resistance of the producer and metabolization by humans

Pedrolli, Danielle Biscaro [UNESP] 14 May 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-14Bitstream added on 2014-06-13T20:44:16Z : No. of bitstreams: 1 pedrolli_db_dr_rcla.pdf: 4403922 bytes, checksum: cff32aaf3ddb331abc9c2e138fcfeefb (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Nas bactérias Gram-positivas Streptomyces davawensis e Streptomyces coelicolor a transcrição dos genes responsáveis pela biossíntese de riboflavina (RF; vitamin B2) ribBMAH é iniciada a partir do promoter da riboflavina (Prib). Nas duas espécies um ribB FMN riboswitch está presente imediatamente à montante em relação a Prib, regulando a expressão gênica ao nível traducional. S. davawensis produz o atibiótico roseoflavina (RoF), um análogo de riboflavina, o qual é convertido a roseoflavina 5´-mononucleotídeo (RoFMN) no citoplasma das células alvo. S. davawensis é resistente a RoF, enquanto que S. coelicolor é sensível a RoF. Através de experimentos de transcrição/tradução in vitro foi demonstrado que o ribB FMN riboswitch de S. coelicolor é desligado na presença de RoFMN. Em contraste, o ribB FMN riboswitch de S. davawensis mostrou-se mais ativo na presença de RoFMN. Compatível com esse resultado, a atividade enzimática correspondente ao produto do primeiro gene (ribB) do cluster ribBMAH foi fortemente reduzida em S. coelicolor, mas não em S. davawensis, quando ambas foram cultivadas em meio acrescido de RoF. Através de mutagênese sítio-dirigida foi identificado um único nucleotideo (A61) na estrutura do ribB FMN riboswitch de S. davawensis como sendo responsável pela resposta diferencial a RoFMN. A introdução do ribB FMN riboswitch de S. davawensis em S. coelicolor gerou uma linhagem resistente a RoF. O presente trabalho apresenta evidências de que o ribB FMN riboswitch de S. coelicolor é controlado termodinamicamente, enquanto que o ribB FMN riboswitch de S. davawensis é controlado cineticamente. Os últimos resultados muito provavelmente explicam as diferentes respostas com relação a RoFMN observada para os dois ribB FMN riboswitches quase idênticos. Em resumo, os... / In the Gram-positive soil bacterium Streptomyces davawensis and in the closely related Streptomyces coelicolor transcription of the riboflavin (RF; vitamin B2) biosynthetic genes ribBMAH originates from the riboflavin promoter (Prib). In both species a ribB (ribo)flavin mononucleotide (FMN) binding riboswitch is present immediately downstream of Prib regulating gene expression at the translational level. S. davawensis produces the antibiotic roseoflavin (RoF), a RF analog, which is converted to roseoflavin mononucleotide (RoFMN) within the cytoplasm of target cells. S. davawensis is RoF resistant, whereas S. coelicolor is RoF sensitive. In vitro transcription/translation experiments revealed that the S. coelicolor ribB FMN riboswitch was turned off in the presence of RoFMN. In contrast, the S. davawensis ribB FMN riboswitch was found to be more active in the presence of RoFMN. In line with this finding was that the activity of the product of the first gene (ribB) of the ribBMAH cluster was strongly reduced in S. coelicolor, but not in S. davawensis, when cells were grown in the presence of RoF. Sequence alignments and site directed mutagenesis experiments identified a single nucleotide (A61) within the S. davawensis ribB FMN riboswitch which is responsible for its specific response to RoFMN. Introduction of the S. davawensis ribB FMN riboswitch to S. coelicolor produced a RoF resistant S. coelicolor strain. The present work gives evidence that the ribB FMN riboswitch of S. coelicolor is thermodynamically controlled whereas the S. davawensis ribB FMN riboswitch is kinetically controlled. The latter finding most likely explains the different response of the two almost identical ribB FMN riboswitches with respect to RoFMN. Altogether, the present results show that a highly specialized FMN riboswitch confers RoF resistance to... (Complete abstract click electronic access below)
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Efeito inibitório de drogas antituberculose frente à Histoplasma capsulatum var. capsulatum e Cryptococcus spp. : síntese de análogos químicos, atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação / Inhibitory effect of antituberculosis drugs against H. capsulatum var. capsulatum and Cryptococcus spp. : synthesis of chemical analogues, antifungal activity in vitro and mechanism of action.

Marques, Francisca Jakelyne de Farias January 2013 (has links)
MARQUES, Francisca Jakelyne de Farias. Efeito inibitório de drogas antituberculose frente à Histoplasma capsulatum var. capsulatum e Cryptococcus spp. : síntese de análogos químicos, atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação. 2013. 116 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:29:35Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:48:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-08T13:48:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) Previous issue date: 2013
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Detecção de integrons e genes cassetes relacionados com a resistência a antimicrobianos em Vibrio spp. isolados de hemolinfa de camarões Litopenaeus vannamei (BONNE, 1931)

Carvalho, Edirsana Maria Ribeiro de January 2013 (has links)
CARVALHO, E. M. R. de. Detecção de integrons e genes cassetes relacionados com a resistência a antimicrobianos em Vibrio spp. isolados de hemolinfa de camarões Litopenaeus vannamei (BONNE, 1931). 2013. 136 f. Tese (doutorado) - Universidade Federal do Ceará, Instituto de Ciências do Mar, Programa de Pós-Graduação em Ciências Marinhas Tropicais, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Nadsa Cid (nadsa@ufc.br) on 2014-07-21T16:54:31Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_emrdecarvalho.pdf: 2633826 bytes, checksum: ba52c175c608828ed8d0b10b3f3bac09 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2014-07-21T17:26:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_emrdecarvalho.pdf: 2633826 bytes, checksum: ba52c175c608828ed8d0b10b3f3bac09 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-21T17:26:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_emrdecarvalho.pdf: 2633826 bytes, checksum: ba52c175c608828ed8d0b10b3f3bac09 (MD5) Previous issue date: 2013 / The objective of this study was to evaluate the resistance profile and the presence of resistance gene cassettes in vibrios isolated from shrimp hemolymph. Shrimp (n=80) were collected from four farms in Acaraú (A and B) and Aracati (C and D), Northeastern Brazil. The hemolymph was evaluated quantitatively for vibrios by spread plating. In the samples from Farms A and B, vibrio counts ranged from <10 to 3.4 x 106 CFU/mL and from <10 to 3.5 x 10³ CFU/mL, respectively. The corresponding figures for Farms C and D were <10 to 8.5 x 10³ CFU/mL and <10 to 1.6 x 10³ CFU/mL. All but one of the isolates from Acaraú (81/82) were identified down to the species: V. alginolyticus, V. coralliilyticus, V. harveyi, V. parahaemolyticus and V. mimicus. In the samples from Aracati, 41 isolates were identified, predominantly V. coralliilyticus, V. cholerae, V. mimicus and V. parahaemolyticus. Approximately 28% of the strains were resistant to at least one of the antibiotics tested. The antibiotics GEN, NAL, NIT, SUT, CIP, CLO and FLF were efficient. The drugs to which resistance was observed included AMP, CFL, ERI, TET and OTC. A considerable number of strains (87.9%) displayed intermediate levels of resistance while multiresistance was observed for 52 strains (41.6%). The MAR index of strains resistant to two or more antibiotics ranged from 0.2 to 0.26. The minimum inhibitory concentration of the isolates was 80-160 µg/L (AMP), 32-512 µg/L (CFL), 64-512 µg/L, 64-256 µg/L (ERI) and 128 µg/L (OTC). Following plasmidial curing, 52% (n=13) of the isolates displayed unchanged resistance profiles, while 48% changed to intermediate levels. In 32%, the gene intI1 was detected, while the gene was present in 100% of the plasmids, along with the cassettes blaP1 and ereA2. The finding of resistance to clinical antibiotics (AMP and CFL) suggests such drugs may have been released into the environment. The high level of intermediate resistance may be the result of survival-driven mutagenic processes. The observed resistance was of chromosomal origin or related to stable mobile elements. The presence of class 1 integrons in the chromosome and plasmids of vibrios isolated from shrimp hemolymph may pose a threat to the aquatic environment since integrons can be transferred between microorganisms. / O objetivo da pesquisa foi estabelecer perfis de resistência a diferentes antimicrobianos e detectar integrons e genes cassetes em Vibrio spp. da hemolinfa de camarões. Foram realizadas duas coletas em quatro fazendas, localizadas nos municipios de Acaraú (A e B) e Aracati (C e D). Em cada coleta foram utilizados 10 exemplares, totalizando 80 camarões. Nas amostras de hemolinfa dos camarões originários de Acaraú, as contagens de Vibrio spp. variaram de <10 a 3,4 x 106 UFC/mL , em B foram de <10 a 3,5 x 10³ UFC/mL. Em Aracati, as contagens foram < 10 a 8,5 x 10³ UFC/mL (fazenda C) e de <10 a 1,6 x 10³ UFC/mL (fazenda D). As 82 estirpes isoladas das amostras originadas das fazendas A e B foram identificadas até espécie, sendo as mais frequentes: V. alginolyticus; V. coralliilyticus; V. harveyi; V. parahaemolyticus e V. mimicus. A partir das amostras das fazendas C e D, 41isolados foram identificados, sendo que as espécies de maior frequência foram: V. coralliilyticus; V. cholerae, V. mimicus; V. parahaemolyticus. Vinte e oito por cento dos isolados apresentaram resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados. Os fármacos para os quais os micro-organismos apresentaram resistência foram: AMP, CFL, ERI, TET e OTC. Os antimicrobianos GEN, NAL, NIT, SUT, CIP, CLO e FLF foram eficazes contra as estirpes testadas. Observou-se que 87,9% das estirpes foram resistentes intermediárias e constatou-se multirresistência em 41,6%. O índice MRA entre as resistentes, variou de 0,2 a 0,26. Os valores de CIM para os isolados foram: para AMP de 80 a 160 µg/L; para CFL de 64 a 512 µg/L; para ERI de 64 a 256 µg/L e para OTC, de 128 µg/L. Entre os isolados que não apresentaram alteração na resistência após a “cura” foram de 52%, porém, 48% passaram a ser intermediárias. As 25 estirpes de Vibrio com resistência múltipla foram selecionadas para testes de biologia molecular, sendo que 32% delas apresentaram o gene intI1. Nos plasmídios, esse percentual foi de 100%, com presença de genes cassetes blaP1 e ereA2. Conclui-se pela presença de estirpes resistentes a fármacos clínicos (AMP e CFL), que resíduos dessas drogas podem estar no ambiente. O alto percentual de intermediários pode estar relacionado a alguma mutação que os isolados estejam sofrendo para sobreviver no ambiente. A origem genética da resistência pode estar relacionada ao cromossomo ou a elementos móveis estáveis. Os integrons detectados no cromossomo e em plasmídios no genoma dos víbrios é uma variável importante para o entendimento da dinâmica de transferência de resistência no ambiente aquático.
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Estratégias de estocagem de sporothrix spp. e análise da sensibilidade das cepas ante aos derivados terpênicos farnesol e terpinen-4-ol in vitro / Porotrichosis is a subcutaneous mycosis that affects humans and animals caused by the dimorphic fungi of the genus Sporothrix

Silva, Natalya Fechine January 2014 (has links)
SILVA, Natalya Fechine. Estratégias de estocagem de sporothrix spp. e análise da sensibilidade das cepas ante aos derivados terpênicos farnesol e terpinen-4-ol in vitro. 2014. 62 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-04-29T13:40:44Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_nfsilva.pdf: 1031976 bytes, checksum: f1b00a7bbed02907d8e918295451ee8e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-04-29T13:45:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_nfsilva.pdf: 1031976 bytes, checksum: f1b00a7bbed02907d8e918295451ee8e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-29T13:45:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_nfsilva.pdf: 1031976 bytes, checksum: f1b00a7bbed02907d8e918295451ee8e (MD5) Previous issue date: 2014 / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis that affects humans and animals caused by the dimorphic fungi of the genus Sporothrix. The storage of such microorganisms in culture collections is necessary to monitor the strains of Sporothrix spp. over the years. Despite the existence of effective antifungal therapies against this disease the search for new drugs for the treatment is necessary. Compounds such as farnesol and terpinen-4-ol have been tested against yeasts and filamentous fungi and have shown a broad antifungal spectrum. Thus, the present study aimed to seek new strategies for the preservation of biological and genetic patrimony of the genus Sporothrix, evaluate the in vitro inhibitory activity of farnesol and terpinen-4-ol against strains of Sporothrix spp., as well as evaluating the mechanisms of action of these compounds. Regarding the storage, 20 Sporothrix spp. strains were used and stocked under the following conditions: saline (0.9% NaCl) at 4 °C, 10% glycerol plus 10% lactose and 10% glycerol plus 10% sucrose maintained at -20 °C and -80 °C, stocked in intervals of 3, 6 and 9 months. The viability of the strains was evaluated by the macro and micromorphological aspects. For this purpose, the samples were subcultured in potato agar for seven days at 28 °C and evaluated for texture and pigmentation of the strains. For the micromorphological analysis, conidia count was performed using the ranges of 0-10, 10-50, 50-100 and >150 conidia as reference ranges. 40 Sporothrix spp. strains in the filamentous phase were used for the analysis of the inhibitory activity of the terpenes. The study was conducted using broth microdilution assay, described in M38-A2 document, standardized by CLSI. 16 Sporothrix spp. strains were used for the investigation of the mechanism of action of the terpenes in relation to the cell membrane permeability and readings were performed in a spectrophotometer at a wavelength of λ=260 nm, in order to verify the amount of nucleic acid and at λ=280 nm, in order to verify the amount of protein released into the medium. Sporothrix spp. strains showed 100% viability for growth on potato agar in all stock conditions tested, while in relation to the conidia count the stock methods that showed better results were saline at 4 °C, glycerol plus lactose and glycerol plus sucrose kept at -20 °C. The terpenes farnesol and terpinen-4-ol inhibited all Sporothrix spp. isolates tested with MIC values ranging from 0.015 to 1.0 mM for farnesol (geometric mean of 0.09) and 0.57 to 9.27 mM for terpinen-4-ol (geometric mean of 2.35). CFM values ranged between 0.125 to 4.0 mM and 1.15 to 37.1 mM for farnesol and terpinen-4-ol, respectively. Farnesol was the most active compound for all Sporothrix strains. There was no significant loss of intracellular material after treatment of fungal cells with concentrations of MIC and MIC/2 of terpenes tested when compared to the corresponding untreated samples. Therefore, it was observed that the terpenes showed no ability to lyse the Sporothrix cells, suggesting that its main mechanism of action is not associated with irreversible damage to the cell membrane structure. Thus, further studies are needed to better understand the mechanisms involved in the antifungal activity of the terpenes evaluated. / A esporotricose é uma micose subcutânea que acomete humanos e animais, causada pelos fungos dimórficos do gênero Sporothrix. A estocagem de tais micro-organismos em coleções de culturas se faz necessária para o monitoramento das cepas de Sporothrix spp. ao longo dos anos. Apesar da existência de terapias antifúngicas eficazes contra esta doença, a busca por novas drogas para o tratamento se faz necessária. Compostos como farnesol e terpinen-4-ol foram testados frente a leveduras e fungos filamentosos e têm demonstrado um amplo espectro antifúngico. Desta maneira, o presente trabalho teve por objetivo buscar novas estratégias de preservação do patrimônio biológico e genético de espécies do gênero Sporothrix, avaliar a atividade inibitória in vitro de farnesol e terpinen-4-ol frente a cepas de Sporothrix spp., bem como avaliar os mecanismos de ação desses compostos. Em relação à estocagem foram utilizadas 20 cepas de Sporothrix spp. nas seguintes condições: em solução salina (NaCl a 0,9%) à 4 °C, glicerol 10% acrescido de lactose 10% e glicerol 10% acrescido de sacarose 10% mantidas nas temperaturas de -20 °C e -80 °C, estocadas nos intervalos de tempo de 3, 6 e 9 meses. A viabilidade das cepas foi avaliada através dos aspectos macro e micromorfológicos. Para tanto, as amostras foram repicadas em ágar batata e, após sete dias de incubação a 28 °C foram avaliados quanto à textura e pigmentação das cepas. Para a análise micromorfológica foi feita a contagem de conídios, tendo como referência os seguintes intervalos de 0-10, 10-50, 50-100 e >150 conídios. Para a análise da atividade inibitória dos compostos foram utilizadas 40 cepas de Sporothrix spp. na fase filamentosa. O estudo foi desenvolvido utilizando ensaio de microdiluição em caldo, descrito no documento M38-A2, padronizado pelo CLSI. Para a investigação do mecanismo de ação das drogas em relação à permeabilidade da membrana celular, foram utilizadas 16 cepas de Sporothrix spp. e realizadas leituras em espectrofotômetro nos comprimentos de onda de λ = 260 nm, com intuito de verificar a quantidade de ácido nucleico e λ = 280 nm, com intuito de verificar a quantidade de proteína liberada no meio. As cepas de Sporothrix spp. apresentaram viabilidade de 100% para o crescimento em ágar batata em todas as condições de estoque testadas, enquanto que em relação à contagem de conídios os métodos de estoque que apresentaram melhor resultado foram a solução salina a 4°C, glicerol acrescido de lactose e glicerol acrescido de sacarose mantidos a -20°C. Os derivados terpênicos farnesol e terpinen-4-ol inibiram todos os isolados de Sporothrix spp. testados com valores de CIM variando de 0,015 a 1,0 μM para o farnesol (média geométrica de 0,09) e de 0,57 a 9,27 mM para terpinen-4-ol (média geométrica de 2,35). Os valores CFM variaram entre de 0,125 a 4,0 μM e de 1,15 a 37,1 mM para farnesol e terpinen-4-ol, respectivamente. Farnesol foi o composto mais ativo para as todas as cepas de Sporothrix. Não houve perda significativa de material intracelular após tratamento das células fúngicas com concentrações de CIM e CIM/2 dos terpenos testados quando comparados com as correspondentes amostras não tratadas. Dessa forma, foi possível observar que os terpenos não apresentaram capacidade de lise frente às células de Sporothrix, o que sugere que seu principal mecanismo de ação não está relacionado com danos irreversíveis na estrutura da membrana celular. Assim, novos estudos são necessários para melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na atividade antifúngica dos terpenos avaliados.
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Histoplasmose em indivíduos HIV positivos no estado do Ceará : estudo clínico epidemiológico e teste de sensibilidade antimicrobiana de cepas de Histoplasma capsulatum var. Capsulatum / Histoplasmosis in HIV-positive individuals in the state of Ceará : clinical epidemiological study and antimicrobial susceptibility testing Histoplasma capsulatum strains var. capsulatum

Fechine, Maria Auxiliadora Bezerra January 2011 (has links)
FECHINE, Maria Auxiliadora Bezerra. Histoplasmose em indivíduos HIV positivos no estado do Ceará : estudo clínico epidemiológico e teste de sensibilidade antimicrobiana de cepas de Histoplasma capsulatum var. Capsulatum. 2011. 145 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T16:39:36Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T16:40:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T16:40:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) Previous issue date: 2011 / Histoplasmosis, caused by the fungus Histoplasma capsulatum, is the most prevalent of the systemic mycoses and a marker disease for acquired immune deficiency syndrome (AIDS). A descriptive analysis was carried out of 254 cases of patients suffering from histoplasmosis and AIDS between 2006 and 2010 in the state of Ceará, northeastern Brazil, noting the epidemiological, clinical, laboratory and therapeutic aspects. Additionally, the in vitro sensitivity profile of strains of H. capsulatum in the filamentous and yeast phases was tested by the microdilution method against the antifungals amphotericin B, fluconazole, itraconazole, voriconazole and caspofungin and the combined antimicrobial sulfametoxazol-trimetoprim, according to protocol M-27A2 from the CLSI. The results were compared with those of strains obtained from southeastern Brazil. In 39.37% of the cases, histoplasmosis was the first event indicating AIDS and in 80.4% of the patients the CD4 cell count was under 100 cells/ml. The levels of lactate dehydrogenase were high in all the patients evaluated, with impaired hepatic and renal function evolving to death being observed in 41.7% of the cases. The in vitro sensitivity profile demonstrated there was no antifungal resistance in the strains analyzed and all the strains were sensitive to sulfametoxazol-trimetoprim. The MFC levels of caspofungin, itraconazole, voriconazole and sulfametoxazol-trimetoprim were higher for the strains from the Northeast than those from the Southeast. In recent years there has been a significant increase in the number of histoplasmosis cases in HIV-positive individuals in the state of Ceará, but the results showed no resistance among the strains of H. capsulatum tested. These showed sensitivity of sulfametoxazol-trimetoprim, but there was a difference in sensitivity between the strains from the northeastern and southeastern regions of Brazil / A histoplasmose, causada pelo fungo Histoplasma capsulatum, é a mais prevalente das micoses sistêmicas e doença marcadora da síndrome de imunodeficiência adquirida (AIDS). Foi realizada análise descritiva de 254 casos de histoplasmose em pacientes com AIDS, no período de 2006 a 2010, no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil, descrevendo os aspectos epidemiológicos, clínicos, laboratoriais e terapêuticos. Adicionalmente, buscou-se determinar o perfil de sensibilidade in vitro de cepas de H.capsulatum. O teste de sensibilidade in vitro foi realizado, pelo método da microdiluição, segundo protocolo M-27A2 do CLSI, em cepas de H. capsulatum nas fases filamentosa e leveduriforme, frente os antifúngicos anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol e caspofungina, e o antimicrobiano sulfametoxazol-trimetoprim, comparando-se cepas obtidas dos casos do período analisado e cepas clínicas oriundas de pacientes do Sudeste do Brasil. Em 39,37% dos casos, a histoplasmose foi o primeiro evento definidor de SIDA e em 80,4% dos pacientes a contagem de células CD4 era menor do que 100 cells/ml. Os níveis de lactato desidrogenase estavam elevados em todos os pacientes avaliados, observando-se comprometimento da função hepática e renal, com evolução para óbito em 41,7% dos casos. O perfil de sensibilidade in vitro demonstrou que não há fenômeno de resistência antifúngica entre as cepas avaliadas, e todas as cepas foram sensíveis ao sulfametoxazol-trimetoprim. A CFM das drogas caspofungina, itraconazol, voriconazol e sulfametoxazol-trimetoprim foi mais elevada para as cepas oriundas do Nordeste em relação às cepas do Sudeste do Brasil. Existe aumento significativo no número de casos de histoplasmose em indivíduos HIV positivos no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil, em relação a estudos anteriores, mas não há fenômeno de resistência entre as cepas de H. capsulatum, e estas demonstram sensibilidade ao sulfametoxazol-trimetoprim, com diferença no perfil de sensibilidade entre as cepas do Nordeste e Sudeste do Brasil.
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Investigação de bacterias associadas ao insucesso do tratamento endodontico

Pinheiro, Ericka Tavares 27 March 2001 (has links)
Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-27T11:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_ErickaTavares_M.pdf: 4998114 bytes, checksum: d72d3e9a21d2f1287e4ac3eb48078f98 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Vários fatores estão envolvidos no insucesso do tratamento endodôntico, entretanto as bactérias são os principais agentes etiológicos. Tais microrganismos podem ter sobrevivido ao tratamento endodôntico anterior ou reinfectado o canal através das microinfiltrações. Estudos revelam que a microbiota do canal radicular do dente tratado endodonticamente associado à lesão periapical persistente difere substancialmente da microbiota de dentes com polpas necrosadas e não tratados. A microbiota dos canais com insucesso endodôntico é composta por um número bastante limitado de espécies bacterianas, que se apresentam mais resistentes aos métodos de combate à infecção utilizados na Endodontia. O objetivo deste trabalho foi estudar a microbiota de 30 dentes com insucesso do tratamento endodôntico e realizar testes de sensibilidade antimicrobiana das bactérias isoladas. Foram utilizados meios de transporte, cultura e incubação que propiciam o crescimento de bactérias anaeróbias estritas. Microrganismos viáveis estavam presentes em 80% dos casos, sendo que a maioria dos canais apresentava somente 1 ou 2 espécies bacterianas. Do total de 55 espécies bacterianas isoladas, 58% eram bactérias anaeróbias facultativas, 42% anaeróbias estritas, 80% Grani-positivas e 20% Gram-negativas. Os gêneros bacterianos mais freqüentemente isolados dos canais radiculares foram: Enterococcus (36,7%), Streptococcus (33,3%), Peptostreptococcus (23,3%), Actinomyces (13,3%), Prevotella (10%), Staphylococcus (10%), Gemella (10%), Fusobacterium (6,7%), Veil/onella (6,7%), Lactobacil/us (6,7%), Propionibacterium (3,3%) e Haemophilus (3,3%). Espécies dos gêneros Enterococcus e Peptostreptococcus foram testadas quanto à suscetibilidade antimicrobiana através do método do E-test, utilizando as seguintes substâncias: benzilpenicilina, amoxicilina, amoxicilina + ácido clavulânico, eritromicina, azitromicina e clindamicina. Enterococcus faecalis e Peptostreptococcus spp. Foram sensíveis a benzilpenicilina, amoxicilina e amoxicilina + ácido clavulânico. Entretanto, 20% dos Enterococcus faecalis foram resistentes a eritromicina e 60% a azitromicina. Concluímos que a microbiota dos canais de dentes com insucesso do tratamento endodôntico é composta em sua maioria por bactérias anaeróbias facultativas, predominantemente Gram-positivas. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana revelaram a presença de resistência bacteriana entre espécies de Enterococcus faecalis spp. aos antibióticos eritromicina e azitromicina / Abstract: Although many failure cases of endodontic therapy are caused by technical problems during treatment, the cause is generally believed to be intracanal infection resisting treatment or microorganisms invading the canal via coronal leakage of the root filling. Studies of the microbiota from the canaIs ofteeth with failure of endodontic therapy have revealed that the flora differ markedly ftom that of untreated necrotic dental pulps. It appears to be a very limited assortment of microorganisms, and studies have indicated difficulties in the elimination of this microbiota during endodontic retreatments. This study aimed to evaluate the microbiota of 30 teeth with failed endodontic treatment and to test the sensivity of this microbiota to antibiotics. Microbial samples, isolation and speciation were done using advanced microbiologic techniques for anaerobic species. Microorganisms were recovered from 80% of the examined teeth. In most of the cases, one or two strains per canal were found. From the 55 microbial species isolated, 58 % were facultative anaerobe species, 42 % strict anaerobes, 80% Gram-positive organisms and 20 % Gram-negatives. The most ftequently bacterial genera recovered ftom the root canaIs were Enterococcus (36,7%), Streptococcus (33,3%), Peptostreptococcus (23,3%), Actinornyces (13,3%), Prevotella (10%), Staphylococcus (10%), Gernella (10%), Fusobacteriurn (6,7%), Veillonella (6,7%), Lactobacillus (6,7%), Propionibacteriurn (3,3%) and Haernophilus (3,3%). Antibiotic sensivity of Enterococcus and Peptostreptococcus species was accomplished with the E-test System. These bacterial isolates were tested for their susceptibility/resistance to benzylpenicilin, amoxicilin, amoxicilin combined with clavulanate, erythromycin, azithromycin, and clindamycin. Enterococcus spp. and Peptostreptococcus spp. Were susceptible to benzylpenicilin, amoxicilin, amoxicilin combined with clavulanate. However, 20% of the Enterococcus spp. isolates were resistant to erytromycin and 60% of these isolates were resistant to azitromycin. It was cocluded that microbial flora in canaIs after failure of the endodontic therapy comprised predominantly facultative anaerobic species and Gram-positive organisms. Antibiotic susceptibility results showed erythromicin and azithromycin resistance among Enterococcus sp / Mestrado / Endodontia / Mestre em Clínica Odontológica
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Obtenção de duas populações precoces de Eimeria maxima Tyzzer, 1929 e sua caracterização

Moretti, Maria Eliane Boock 01 December 1997 (has links)
Orientador: Urara Kawazoe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T03:19:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moretti_MariaElianeBoock_M.pdf: 6658300 bytes, checksum: 84bc1e43c52f14e0aaf0a4748b6b938e (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Este trabalho teve como objetivos a obtenção de duas populações precoces de Eimeria maxima, sua caracterização quanto a patogenicidade e patologia e o estudo da sensibilidade desses isolados a oito medicamentos anticoccidianos de uso comercial freqüente na indústria avícola. Para a obtenção de isolados precoces, oocistos obtidos no campo (isolados "Cu" e "L") foram inoculados sucessivamente em aves sadias, para a coleta dos primeiros oocistos eliminados. Através desse processo foram feitas 14 passagens para o isolado E. maxima "Cu", obtendo-se a diminuição do período pré-patente para a eliminação dos primeiros oocistos, de 129h 45' para 114h 30'. Para o segundo isolado, foram realizadas 18 passagens, obtendo-se a redução do período pré-patente de 127h para 103h 30'. As gerações parenta I e precoce desses dois isolados foram comparadas quanto a patogenicidade, através da inoculação de oocistos em aves sadias, observando-se o ganho de peso, escore de lesão e produção de oocistos. No isolado "Cu" não foi observada diferença significativa entre as gerações parental e F10 porém, no isolado "L" houve diminuição da patogenicidade entre as gerações parental e F14. O estudo histopatológico não mostrou diferença nas lesões intestinais entre as duas gerações do isolado "Cu", mas houve diminuição das lesões na geração F14 do isolado "L" em relação à geração parenta!. O teste de sensibilidade mostrou que o isolado "Cu" foi sensível a quatro medicamentos e parcialmente resistente a outros quatro, avaliados através do índice anticoccidiano cujos parâmetros usados foram: percentagem de sobrevivência das aves inoculadas, escore de lesão intestinal, ganho de peso e produção de oocistos nas aves. O isolado "L" mostrou-se sensível apenas a um dos medicamentos testados, parcialmente resistente a quatro e resistente a três outros medicamentos. Os oocistos precoces obtidos no presente trabalho, parecem ter atingido uma estabilidade quanto ao período pré-patente no isolado "Cu", ao passo que o isolado "L" parece ainda não ter atingido uma estabilidade. No entanto, ambos os isolados apresentaram uma redução na produção de oocistos, quando comparados às respectivas gerações parentais. A confirmação da atenuação dessas gerações precoces, num estudo futuro, caracterizará os isolados como aceitáveis para o uso como vacinas vivas atenuadas, no controle da coccidiose aviária / Abstract: The objective of the present study was to obtain precocious lines from two field isolates of Eimeria maxima "Cu" and "L" as well as to compare the pathogenicity and pathology between parent and precocious lines of each isolate. Sensitivity tests of these isolates against eight most common anticoccidial drugs were performed to characterise the isolates. The precocious lines were obtained by repeated selection for the first oocysts to appear in the infected chickens. After 14 passages of E. maxima "Cu" oocysts in chickens, the pre-patent period for the first oocysts was reduced from 129h 45' to 114 hours and after 18 passages of E. maxima "L" oocysts in chickens this period was reduced from 127 to 103h 30'. The precocious line F10 was as pathogenic as the parent strain of E. maxima "Cu" while the precocious line F14 was less pathogenic than the parent strain of E. maxima "L" usíng as criteria weight gain, lesion score and oocyst production. The histopathologic observations for both isolates confirmed the degree of patogenicity of the isolates. The evaluation of the sensitivity tests of isolates "Cu" and "L" against eight drugs using the anticoccidial index as a criteria showed that E. maxima "Cu" was sensitive to four drugs and partially resistant to four others while E. maxima "L" was sensitive to one drug, partially resistant to four and resistant to three other drugs. Stability of precocious lines for pre-patent period of first oocysts in chickens seems to be reached for both strains studied by the observation in reduction of oocyst production when compared to the parent strains. The aUenuation of these precocious lines will be studied in future and once this character is confirmed the lines will be used as a vaccine for coccidiosis contraI / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Estudo da atividade de drogas antifungicas atraves de curvas de crescimento de Candida albicans utilizando o sistema automatizado Bio-Cell Tracer

Moreira, Luciana Sarmento 03 August 2018 (has links)
Orientador: Maria Luiza Moretti Branchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_LucianaSarmento_M.pdf: 615387 bytes, checksum: 42dae5da9ccb25a99c7957261e5866ca (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O crescente aumento de casos de candidemia nas últimas décadas vem sendo um fato preocupante devido a diversos fatores, e dentre eles destacam-se a mortalidade, o aumento de casos de espécies não-albicans como causadoras de candidemia, e a crescente emergência da resistência de leveduras aos antifúngicos. Para o tratamento da candidemia, temos como drogas mais usadas a anfotericina B (ANF), o itraconazol (ITZ), o fluconazol (FCZ), a 5-fluorocitosina (5-FC), como também as combinações de ANF com FCZ ou 5-FC que visam favorecer a terapia. Porém, atualmente, ainda pouco se sabe a respeito das respostas clínicas dadas por Candida sp. ás terapias utilizadas quando comparadas com testes de suscetibilidade in vitro. Os testes padronizados para estudar a suscetibilidade de Candida sp. in vitro não avaliam as células individualmente, e sim uma população celular. O sistema automatizado Bio-Cell Tracer ® (BCT®), surge como uma nova ferramenta complementar para o estudo da dinâmica da formação de hifas, pseudo-hifas e germinação de conídios e de respostas quanto a suscetibilidade aos antifúngicos. Neste trabalho, utilizamos o BCT® para avaliar o crescimento de cepas de Candida albicans frente aos seguintes antifúngicos: FCZ, 5-FC e ANF, além das combinações 5-FC/ANF e FCZ/ANF em adições com tempos simultâneos e seqüenciais. O sistema BCT® consiste de uma base para placas, microscópio, digitalizador de imagem e computador com programa que permitiu o acompanhamento do crescimento automático das extremidades das pseudo-hifas estudadas. Os resultados para Candida albicans obtidos com o teste de resistência ao FCZ, encontrados no BCT® foram correspondentes àqueles utilizando o teste padrão de microdiluição em caldo (NCCLS A27), sugerindo diferentes classes de taxas de inibição que poderiam ser agrupadas como valores associados a suscetibilidade e resistência. Os estudos com drogas combinadas, em tempos seqüenciais, revelou que a cepa (UN 219) apresentou comportamento de antagonismo para a combinação de FCZ/ANF, dado que diferiu do encontrado na microdiluição em caldo. Neste caso, a possibilidade de monitoramento de hifas, pseudo-hifas pode permitir maior versatilidade e induzir respostas biológicas antes não encontradas nos testes in vitro. Este estudo contribuiu com novas informações a respeito de um sistema automatizado para análise de pseudo-hifas e germinação de conídios, que pode vir a ser utilizado no desenvolvimento de novas estratégias para uma rápida determinação de suscetibilidade antifúngica de C. albicans ou de outros fungos patogênicos / Abstract: Candida species are opportunistic fungal pathogens that are often the causative agents of infections in immunocompromised patients. amphotericin B (AMPH), itraconazole (ITCZ), fluconazole (FLCZ) and 5-flucytosine (5-FC) are the principal drugs used on the treatment of candidemic patients. However, in some cases, the clinical responses of Candida are different from those obtained with the in vitro susceptibility tests. Moreover, the standard methods of monitoring the susceptibility of Candida to antifungal agents are unable to evaluate single cells, true hyphae or pseudohyphae forms. Thus, new techniques developed to measure the growth rate of true hyphae or pseudohyphae forms in vitro could contribute to better understand the dynamics of the formation of these invasive structures and the response of the organism to antifungal agents. Here we describe the application of an automated system (Bio-Cell Tracer® - BCT®) to examine the responses of Candida albicans to AMPH, FLCZ, 5-FC, as well as AMPH/FLCZ and AMPH/5-FC combinations, in simultaneous and distinct addiction times. The BCT® consists of a culture vessel, a microscope and a image analyzer with a computer program system that traces the growth of a hyphal tip automatically. The results obtained using the BCT® system were correspondent to those using the standard MIC (NCCLS A27) assay on the detection of susceptibility and resistance in clinical isolates and reference samples. The combinatory studies show an antagonistic pattern on the UN 219 strain, differently from the MIC studies. The possibility of tracing pseudohyphae structures allows a larger versatility and biological responses not found on the other tests. This work contributed with new information about an automated system for analysis of pseudohyphal structures, that may be used on the development of new strategies for a rapid and reliable assessment of antifungal susceptibility in Candida albicans or other infectious species / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica
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Riboflavin analgs from Streptomyces davawensisas antiinfectives : mode of action, mechanism of resistance of the producer and metabolization by humans /

Pedrolli, Danielle Biscaro. January 2012 (has links)
Resumo: Nas bactérias Gram-positivas Streptomyces davawensis e Streptomyces coelicolor a transcrição dos genes responsáveis pela biossíntese de riboflavina (RF; vitamin B2) ribBMAH é iniciada a partir do promoter da riboflavina (Prib). Nas duas espécies um ribB FMN riboswitch está presente imediatamente à montante em relação a Prib, regulando a expressão gênica ao nível traducional. S. davawensis produz o atibiótico roseoflavina (RoF), um análogo de riboflavina, o qual é convertido a roseoflavina 5'-mononucleotídeo (RoFMN) no citoplasma das células alvo. S. davawensis é resistente a RoF, enquanto que S. coelicolor é sensível a RoF. Através de experimentos de transcrição/tradução in vitro foi demonstrado que o ribB FMN riboswitch de S. coelicolor é desligado na presença de RoFMN. Em contraste, o ribB FMN riboswitch de S. davawensis mostrou-se mais ativo na presença de RoFMN. Compatível com esse resultado, a atividade enzimática correspondente ao produto do primeiro gene (ribB) do cluster ribBMAH foi fortemente reduzida em S. coelicolor, mas não em S. davawensis, quando ambas foram cultivadas em meio acrescido de RoF. Através de mutagênese sítio-dirigida foi identificado um único nucleotideo (A61) na estrutura do ribB FMN riboswitch de S. davawensis como sendo responsável pela resposta diferencial a RoFMN. A introdução do ribB FMN riboswitch de S. davawensis em S. coelicolor gerou uma linhagem resistente a RoF. O presente trabalho apresenta evidências de que o ribB FMN riboswitch de S. coelicolor é controlado termodinamicamente, enquanto que o ribB FMN riboswitch de S. davawensis é controlado cineticamente. Os últimos resultados muito provavelmente explicam as diferentes respostas com relação a RoFMN observada para os dois ribB FMN riboswitches quase idênticos. Em resumo, os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the Gram-positive soil bacterium Streptomyces davawensis and in the closely related Streptomyces coelicolor transcription of the riboflavin (RF; vitamin B2) biosynthetic genes ribBMAH originates from the riboflavin promoter (Prib). In both species a ribB (ribo)flavin mononucleotide (FMN) binding riboswitch is present immediately downstream of Prib regulating gene expression at the translational level. S. davawensis produces the antibiotic roseoflavin (RoF), a RF analog, which is converted to roseoflavin mononucleotide (RoFMN) within the cytoplasm of target cells. S. davawensis is RoF resistant, whereas S. coelicolor is RoF sensitive. In vitro transcription/translation experiments revealed that the S. coelicolor ribB FMN riboswitch was turned off in the presence of RoFMN. In contrast, the S. davawensis ribB FMN riboswitch was found to be more active in the presence of RoFMN. In line with this finding was that the activity of the product of the first gene (ribB) of the ribBMAH cluster was strongly reduced in S. coelicolor, but not in S. davawensis, when cells were grown in the presence of RoF. Sequence alignments and site directed mutagenesis experiments identified a single nucleotide (A61) within the S. davawensis ribB FMN riboswitch which is responsible for its specific response to RoFMN. Introduction of the S. davawensis ribB FMN riboswitch to S. coelicolor produced a RoF resistant S. coelicolor strain. The present work gives evidence that the ribB FMN riboswitch of S. coelicolor is thermodynamically controlled whereas the S. davawensis ribB FMN riboswitch is kinetically controlled. The latter finding most likely explains the different response of the two almost identical ribB FMN riboswitches with respect to RoFMN. Altogether, the present results show that a highly specialized FMN riboswitch confers RoF resistance to... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Eleonora Cano Carmona / Coorientador: Matthias Mack / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Maria Celia Bertolini / Banca: Carla Columbano de Oliveira / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Doutor
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Efeito do acréscimo de nano-hidroxiapatita nas propriedades físico-químicas, mecânicas e antibiofilnme do cimento portland com óxido de zircônio

Trindade Junior, Adinael [UNESP] 18 March 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-18Bitstream added on 2015-03-03T12:06:55Z : No. of bitstreams: 1 000806319_20170318.pdf: 286636 bytes, checksum: 64922788f65d60312ba9c1e2cf44d0e1 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-24T12:04:48Z: 000806319_20170318.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-24T12:05:39Z : No. of bitstreams: 1 000806319.pdf: 499928 bytes, checksum: 47cea57d744e94922d90057a76e21d25 (MD5) / A substituição do óxido de bismuto por óxido de zircônio (ZrO2) e o acréscimo de hidroxiapatita nanoparticulada (HAn) podem favorecer propriedades do Cimento Portland (CP). Este estudo objetiva comparar propriedades físico-químicas, mecânicas e antibiofilme do CP com ZrO2, acrescido de HAn. Os materiais avaliados foram: G1 – MTA Angelus; G2 – CP/ZrO2; G3 – CP/ZrO2/HAn10%; G4 – CP/ZrO2/HAn20%. O pH foi analisado em phmetro digital, a solubilidade pela perda de massa e o tempo de presa pelo teste de Gilmore. A resistência à compressão foi avaliada por meio de ensaio mecânico. Amostras dos materiais foram radiografadas com uma escala de alumínio para análise da radiopacidade. Para a avaliação antibiofilme os materiais foram colocados em contato com biofilme de E. faecalis formado em blocos de dentina, e avaliado pela contagem de unidades formadoras de colônias (UFCmL-1). Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey com 5% de significância. G2 e G3 apresentaram pH mais elevado. Maior solubilidade foi observada para G3 e G4. O tempo de presa inicial foi menor para G1 e o tempo de presa final para G3. Todos os materiais apresentaram radiopacidade superior a 3 mm Al. A resistência à compressão foi maior para G2 nos períodos avaliados. Nenhum cimento foi capaz de neutralizar completamente o biofilme bacteriano, mas G3 e G4 proporcionaram maior redução bacteriana. Conclui-se que a associação CP/ZrO2 e CP/ZrO2 com 10% de HAn apresentam propriedades físico-químicas adequadas e que o acréscimo de HAn melhora a atividade antibiofilme de E faecalis. / The bismuth oxide replacement by zirconium oxide (ZrO2) and the addition of hydroxyapatite nanoparticle may improve the Portland Cement (PC) properties. This study aimed evaluate the physicochemical, mechanical and antibiofilm of Enterococcus faecalis properties of Portland Cement (PC) association with zirconium oxide (ZrO2), added with hydroxyapatite nanoparticles (HAn). The analised materials were: G1 –MTA Angelus; G2 – PC/ZrO2; G3 – PC/ZrO2/HAn10%; G4 – PC/ZrO2/HAn20%. The pH was measure with a digital phmeter and the solubility by the weight loss. Setting time was assayed by Gilmore needle. Compressive strength was tested in universal testing machine. Materials samples were radiographed alongside an aluminum (Al) step wedge. For the antibiofilm test, the samples were place in direct contact with E. faecalis biofilm over dentine blocks, and assessed by colony forming units (CFU mL-1). The results were submitted to ANOVA and Tukey’s test at 5% significance. G2 and G3 showed the higher pH in both experimental periods. Bigger solubility was noted for G3 and G4. The initial setting time was shorter for G1, and the final setting time for G3 and G4. All material presented radiopacity greater than 3 mmAl. Compressive strength was better for G2 in both experimental periods. No cement was able to completely neutralize the bacterial biofilm, however G3 and G4 exhibited higher bacteria reduction. The PC/ZrO2 and PC/ZrO2 with HAn 10% association presented the better physicochemical and mechanical properties, and the association with HAn improves the E. faecalis antibiofilm activity.

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