Resumo:O florfenicol é um antibiótico utilizado para o tratamento de doença respiratória em bovinos. Estudar e compreender a sua farmacocinética são ferramentas importantes para o controle eficaz e adequado dessas enfermidades, minimizando assim o aparecimento de cepas bacterianas resistentes. Por isso, este estudo teve por objetivo determinar o perfil farmacocinético do florfenicol em plasma bovino após aplicação intramuscular de duas doses e avaliar a sua eficácia contra bactérias sensíveis. No estudo, foram utilizados 8 bovinos que receberam duas aplicações de florfenicol por via intramuscular e na posologia de 20 mg/Kg com intervalo de 48 horas. A concentração plasmática foi determinada por cromatografia líquida de alta performance acoplada a um espectrofotômetro de massa. A concentração inibitória mínima foi realizada em um laboratório veterinário seguindo os padrões internacionais do Clinical and Laboratory Standard Institute. Os parâmetros farmacocinéticos calculados foram: Cmax = 1,21 ± 0,25 µg/mL, Tmax = 3,43 ± 2,23 h, AUC0-t = 34,16 ± 4,50 h.µg/mL, T½ = 63,46 ± 23,76 h; e Cmax = 1,17 ± 0,20 µg/mL; Tmax = 6,00 ± 0,00 h; AUC0-t = 52,37 ± 5,50 h.µg/mL; T½ = 77,74 ± 43,65 h, respectivamente para a primeira e segunda aplicação. Os níveis de florfenicol no plasma mantiveram-se acima da concentração inibitória mínima para as bactérias: Mannheimia haemolytica (0,75 µg/mL), Pasteurella multocida tipo capsular A (0,75 µg/mL) e Histophilus sommus (0,30 µg/mL). Estes resultados comprovam a eficácia do florfenicol contra bactérias que causam a doença respiratória dos bovinos / Abstract:The florfenicol is an antibiotic used for the treatment of respiratory disease in cattle. Study and understand its pharmacokinetics are important tools for effective control of these diseases and appropriate, thereby minimizing the appearance of resistant bacterial strains. Therefore, this study aimed to determine the pharmacokinetic profile of florfenicol in bovine plasma after intramuscular injection of two doses and evaluate their effectiveness against susceptible bacteria. In the study, we used eight cattle that received two applications of florfenicol and intramuscularly at a dose of 20 mg/kg at intervals of 48 hours. The plasma concentration was determined by high performance liquid chromatography coupled to a mass spectrometer. The minimum inhibitory concentration was performed in a veterinary laboratory following the international standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Pharmacokinetic parameters were calculated: Cmax = 1.21 ± 0.25 µg/mL, Tmax = 3.43 ± 2.23 h, AUC0-t = 34.16 ± 4.50 h.µg/mL, T½ = 63.46 ± 23.76 h, and Cmax = 1.17 ± 0.20 µg/mL, Tmax = 6.00 ± 0.00 h, AUC0-t = 52.37 ± 5.50 h.µg/mL, T½ = 77.74 ± 43.65 h, respectively for the first and second application. The florfenicol levels in plasma remained above the minimum inhibitory concentration for bacteria: Mannheimia haemolytica (0.75 µg/mL), Pasteurella multocida capsular type A (0.75 µg/mL) and Histophilus sommus (0.30 µg/mL). These results indicate the effectiveness of florfenicol against bacteria that cause respiratory disease of cattle / Orientador:Luiz Cláudio Nogueira Mendes / Banca:Sérgio Diniz Garcia / Banca:Antonio de Queiroz Neto / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Antonio Olavo cardoso Jorge / Banca: Elizabete Brasil dos Santos / Banca: José Roberto Cortelli / Banca: Rocha, Rosilene Fernandes da / RESUMO: Staphylococcus não são usualmente estudados na cavidade bucal. Quando presentes são considerados pertencentes à microbiota transitória. Indivíduos que apresentam doença periodontal representam possíveis reservatórios dessas bactérias oportunistas na cavidade bucal. O uso de antibióticos, quer seja para tratamento da doença periodontal, ou em consequência de infecções hospitalares, pode predispor o aumento do número de Staphylococcusspp. naboca, pois estes adquirem facilmente resistência aos antibióticos, podendo resultar em super-infecção. Participaram deste estudo 88 pacientes, com no mínimo 25 anos de idade e apresentando periodontite crônica, com pelo menos dois sítios com profundidade de sondagem maior ou igual a 5mm. Após anamnese e exame clínico periodontal foram feitas coletas de material da bolsa periodontal com cones de papel e da cavidade bucal por meio de bochechos. Do total de pacientes 37,50% apresentaram Staphylocaccusspp. na bolsa periodontal e 61,36% na cavidade bucal, sendo que 27,27% apresentaram a bactéria nos 2 sítios, não sendo necessariamente a mesma espécie. S. epidermidisfoi a espécie mais prevalente para bolsa periodontal (15,9%) e cavidade bucal (27,27%). Foram positivos para S. aureus na bolsa periodontal, 4,5% e para cavidade bucal 25%, sendo 3,4% positivos para os dois sítios. Não houve diferença estatística significante quanto à presença desses microrganismos entre as faixas etárias, hábito de fumar e aumento da profundidade de sondagem. A maioria das cepas de Staphylococcus isoladas mostrou resistência aos antibióticos testados, indicando que a utilização sistêmica destas drogas, como adjunto à terapia periodontal. deve ser vista com cautela / ABSTRACT: "Staphylococcus" are not usually studied in the oral cavity, when this happens, they are considered to belong to transitory microflora. Individuals that present periodontal disease represent possibles reservoirs of these opportunist bacteria in the oral cavity. The use of antibiotics whether for treatment of periodontal disease or due to hospital infections, may predispose the increase of the "Staphylococcus" spp. in the oral cavity because they easily become resistant to antibiotics, resulting in superinfection. The study was made with 88 patients, minimum age- 25 years old, presenting chronical periodontitis, with, at least, two sites having a probing pocket bigger or equal to 5mm. After anamnese and clinical periodontal examination samples were taken from the periodontal pocket using paper cones and from the oral cavity using mouth rinse. Of the total patients 37,50% presented "Staphylococcus" spp. in the periodontal pocket and 61,36% in lhe oral cavity; 27,27% presented bacteria in the two sites, not necessarily of the same specie. "S. epidermidis" was the most prevailing specie in periodontal pocket (15,9%) and oral cavity (27,27%). Positive for "S. aureus" in the periodontal pocket were 4,5% and for the oral cavity 25%, and 3,4% were positive for the two sites. There was not found significative statistical difference referring to the presence of the microorganisms as to age, smoking habit and increase of the probing depth. The majority of the isolated "Staphylococcus" samples showed resistance to the tested antibiotics, indicating that the drugs as an adjunct to periodontal therapy, must be seen with caution / Doutor

Orientador: Cristiane Duque / Coorientador: Célio Percinoto / Banca: Sandra Maria Herondina Coelho Avila de Aguiar / Banca: Denise Pedrini Ostini / Banca: Solange de Paula Ramos / Banca: Cássia Cilene Dezan Garbelini / Resumo: O sistema imune tem diversas formas de defesa contra microrganismos patogênicos. As membranas da mucosa são uma fonte de peptídeos catiônicos antimicrobianos contra uma ampla variedade de bactérias, fungos e vírus encapsulados. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e atividade antimicrobiana em condições planctônicas e de biofilme de fragmentos derivados de peptídeos catiônicos (PC): LL-37 (originário de hCAP-18), D6-17 e D1-23 (originários de ortólogo da β-defensina-3 humana) contra bactérias cariogênicas. Para análise citotóxica, duas linhagens de células epiteliais foram expostas a diluições seriadas de fragmentos de PC. Ensaios de MTT e coloração de DAPI foram realizados para avaliar o metabolismo e a morfologia celular, respectivamente. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para fragmentos de PC e controle (digluconato de clorexidina - CHX) contra Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum e Actinomyces israelii. A concentração inibitória fracionada (FIC) foi obtida pelas combinações de fragmentos de CP para S. mutans. O ensaio de biofilme foi conduzido com CHX e o melhor fragmento de CP contra cepas de S. mutans. Microscopia confocal a laser foi realizada para avaliar a quantidade de células mortas em relação as células vivas e também a espessura do biofilme. Os resultados indicaram que ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The immune system has several forms of defense against pathogenic microorganisms. The mucous membranes are a source of potent antimicrobial cationic peptides against a broad range of bacteria, fungi and envelope d viruses. The aim of study was evaluated the cytotoxicity and antimicrobial activity under planktonic and biofilm conditions of fragments derived from cationic peptides (CP): LL-37 (from hCAP-18), D6-17 and D1-23 (from β -defensin-3 derivative) against cariogenic bacteria. For cytotoxicity analysis, two lines of epithelial cells were exposed to serial dilutions of the CP fragments. MTT assays and DAPI staining were perfor med to evaluate cell metabolism and morphology, respectively. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were dete rmined for the CP fragments and control (Chlorhexidine digluconate-CHX) against Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidoph ilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum and Actinomyces israelii . Fractional inhibitory concentration (FIC) was obtained for the combinations of CP fragments on S. mutans. Biofilm assays were conducted with CHX and the best antimicrobial CP fragment against S. mutans strains. Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) was used to analyze the Live/Dead cells and biofilm thickness. The results indicated that D6-17 did not affect the metabolism of either cell line. D1-23, LL-37 and CHX were not toxic for both cells, in concentrations below 0.2, 0.02 and 0.01mM, respectively . DAPI-staining cells demonstrated nuclei fragmentation for LL-37 group and cells with the aspect of apoptosis in the CHX group. Cells treated with D1-23 and D6-17 presente d morphology similar to the control group (culture medium). D1-23 presented the best bactericidal activity ... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Cristiane Duque / Banca: Ana Cláudia Okamoto / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Thaís Marchini de Oliveira / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Resumo: O tratamento endodôntico de dentes permanentes jovens representa um grande desafio clínico devido a presença de paredes dentinárias finas, divergentes ou paralelas e ápice aberto, o que dificulta a desinfecção e a execução dos procedimentos convencionais. Terapias de regeneração endodôntica envolvem o uso de materiais capazes de promover uma desinfecção eficaz sem causar citotoxicidade, além de induzir a diferenciação de células-tronco ou bioestimular células remanescentes do tecido pulpar mesmo após a injúria. Nesse contexto, os flavonoides, polifenóis presentes em frutas e vegetais, poderiam ser agentes interessantes para o tratamento endodôntico de dentes imaturos devido a sua amplitude terapêutica. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano, citotóxico e indutor de mineralização de flavonoides com finalidade de aplicação endodôntica. Este trabalho de tese foi dividido em três capítulos. O capítulo 1 avaliou a toxicidade dos flavonoides taxifolina, crisina, pinocembrina e galangina sobre fibroblastos pelo ensaio de MTT, a atividade antimicrobiana pela determinação da concentração inibitória e bactericida mínima, e a ação antibiofilme do flavonoide com melhor efeito antimicrobiano, por meio de ensaios em placas de poliestireno e em dentina radicular bovina por meio da análise por microscopia confocal. Os resultados mostraram que o flavonoide taxifolina não foi tóxico para os fibroblastos em nenhuma das concentrações analisadas, enquanto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The endodontic treatment of young permanent teeth represents a great clinical challenge due to the presence of thin, divergent or parallel dentin walls and the open apex that makes it difficult to disinfect and perform conventional en dodontic procedures. Endodontic regeneration therapies involve the use of materials capable of promoting effective disinfection without causing cytotoxicity, in addition to inducing differentiation of stem cells or biostimulating remaining pulp tissue cell s even after injury. In this context, the flavonoids, polyphenols present in fruits and vegetables, could be interesting agents for the endodontic treatment of immature teeth due to the wide therapeutic use. Thus, the objective of the present study was to evaluate the antimicrobial, cytotoxic effects and capacity of mineralization induction of flavonoids for endodontic application. This thesis was divided into three chapters. The chapter 1 evaluated the toxicity of taxifolin, chrysin, pinocembrin and galang in flavonoids on fibroblasts by the MTT method, antimicrobial activity by determining the minimum inhibitory and bactericidal concentrations and analyzed the antibiofilm action of the flavonoid with the best antimicrobial effect, by means of the biofilm as says in polystyrene plates and in bovine root dentin and confocal microscopy analysis. The results showed that the flavonoid taxifolin was not toxic on fibrobla sts in any tested concentration, while chrysin, pinocembrin and galangin flav... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: (i) avaliar a diversidade genética de amostras de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) no complexo UNIFESP/HSP isolados de hemocultura; (ii) avaliar possíveis fatores de risco associados à bacteremia e mortalidade causada pelo Clone Epidêmico Brasileiro (CEB) e por outros clones de MRSA. Material e Métodos: Estudo retrospectivo de isolados de MRSA do período de 2002 a 2005. Coletou-se dados epidemiológicos nos prontuários dos pacientes e os tipos de SCCmec foram caracterizados pela reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex. Caso fosse pertinente, foi realizada a detecção de produção de leucocidina PantonValentine (PVL). A presença de possíveis clones foi investigada por PFGE (pulsed field gel eletrophoresis). Resultados: Foram avaliados 148 episódios de bacteremia por MRSA. A maioria das infecções foi considerada relacionada à assistência à saúde (92,6%); 77% dos pacientes receberam antibioticoterapia prévia e 74,3% fizeram uso de catater venoso central. O SCCmec tipo III foi encontrado em 87% das amostras e 19 amostras carreavam SCCmec I, II ou IV. Dentre as 10 amostras portadoras de SCCmec IV apenas uma foi produtora de PVL, e quatro foram detectadas em pacientes pediátricos. O dendograma obtido pelo perfil de bandas de PFGE identificou quatro principais clusters dentre as amostras. CEB (SCCmec III) foi relacionado a 128 amostras, e o clone pediátrico (SCCmec IV). Além disso, duas amostras foram relacionadas ao USA300 e USA400. Antibioticoterapia prévia foi considerado fator de risco para aquisição de bacteremia por MRSA SCCmec III. Não houve diferença entre as taxas de sobrevida de acordo com o tipo de SCCmec. Conclusões: O SCCmec tipo III foi o tipo predominante de MRSA causador de bacteremias no HSP. CEB continua a ser o clone predominante apesar da emergência de novas linhagens. Antibioticoterapia prévia foi o único fator de risco relacionado à aquisição de MRSA portador de SCCmec tipo III em nosso meio. / Objectives: (i) to evaluate the genetic diversity among methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates from bloodstream infections (BSIs) from UNIFESP/HSP complex; (ii) to evaluate risk factors and mortality associated with bacteremia caused by Brazilian Epidemic Clone (BEC) and other MRSA lineages. Methods: Retrospective study selecting with MRSA causing BSIs during 2002 to 2005. Patient demographic information was obtained, and SCCmec types were performed by polymerase chain reaction (PCR) multiplex. Detection of Panton Valentine Leukocidin (PVL) was performed when necessary. Genetic relatedness among clinical isolates was assessed by PFGE (pulsed field gel eletrophoresis). Results: A total of 148 MRSA bacteremia episodes were investigated. Most infections were considered nosocomial (92.6%); 77.0% of patients have previously used antimicrobial therapy and 74.3% had a central venous line. SCCmec type III was found in 87.0% (n=129) of isolates and 19 carried either SCCmec I, II, IV. Only one out of 10 samples harboring SCCmec type IV carried PVL, and 4 samples were isolated from pediatric patients. The dendogram based PFGE analysis identified four major MRSA clusters. Most SCCmec III isolates were related to the BEC, (n=128), and seven SCCmec IV isolates were associated to the pediatric clone. Two isolates SCCmec IV were related to USA300 and USA400 clones. Previous antimicrobial therapy was considered a risk factor for SCCmec III MRSA bacteremia. No difference between survival rates was observed according to SCCmec types. Conclusions: SCCmec III was the predominant lineage associated to MRSA bacteremia in HSP. Although BEC continues to be the predominant clone in our nosocomial environment, new lineages of SCCmec were observed in the study period. Previous antimicrobial therapy was the only risk factor associated with acquisition of type III MRSA bacteremia. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 72.pdf: 596399 bytes, checksum: 73031b2896fa6d41d8df381fdbbbe46d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Diversos relatos indicam que queijos Minas Frescal comercializados no Brasil são amplamente contaminados, sendo o gênero Staphylococcus spp. incriminado em diversos surtos de toxinfecção alimentar. Os objetivos deste estudo são a pesquisa de características fenotípicas e genotípicas de resistência a antimicrobianos de Staphylococcus spp. isolados a partir de queijo Minas Frescal, verificando a presença dos genes mecA e qacA/B através da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). Estes isolados, caracterizadas como estafilococos coagulase positiva e estafilococos coagulase negativa por Freitas (2005), neste estudo passaram por verificação de sua pureza, através de características macroscópicas das colônias em crescimento em Triptic Soy Agar, coloração de Gram, prova da catalase e da coagulase. Após a seleção de culturas puras de estafilococos foi realizado teste de suscetibilidade a antimicrobianos (mupirocina, ampicilina, tetraciclina, clindamicina, sulfazotrim, norfloxacina, cefotaxima, piperacilina+tazobactam, meropenem, penicilina G, cefepima, cloranfenicol, gentamicina, eritromicina, oxacilina e cefoxitina), extração de DNA e pesquisa dos genes mecA e qacA/B através da reação em cadeia da polimerase. Os resultados foram que apenas 14 (14,7por cento) dos isolados analisados pelo antibiograma se mostraram sensíveis a todos os antibióticos testados. Encontrou-se 27 (28,4por cento) dos isolados multiresistentes e suscetíveis à meticilina e 15 (15,8por cento) eram multiresistentes e resistentes à meticilina. O gene mecA foi detectado em 21 (22,1por cento) dos 95 isolados pesquisados, e dentre estes, 9 (9,5por cento) apresentaram-se como resistentes pelo teste de suscetibilidade a antimicrobianos (incluindo dois isolados coagulase negativos). Dentre os isolados 74 (77,9por cento) não apresentaram o gene mecA e 6 (6,3por cento) apresentaram-se resistentes à meticilina pelo antibiograma...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-26Bitstream added on 2014-06-13T19:53:38Z : No. of bitstreams: 1 000737512.pdf: 448616 bytes, checksum: ca9cfa4680cedc19ad31f8680f15521b (MD5) / The florfenicol is an antibiotic used for the treatment of respiratory disease in cattle. Study and understand its pharmacokinetics are important tools for effective control of these diseases and appropriate, thereby minimizing the appearance of resistant bacterial strains. Therefore, this study aimed to determine the pharmacokinetic profile of florfenicol in bovine plasma after intramuscular injection of two doses and evaluate their effectiveness against susceptible bacteria. In the study, we used eight cattle that received two applications of florfenicol and intramuscularly at a dose of 20 mg/kg at intervals of 48 hours. The plasma concentration was determined by high performance liquid chromatography coupled to a mass spectrometer. The minimum inhibitory concentration was performed in a veterinary laboratory following the international standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Pharmacokinetic parameters were calculated: Cmax = 1.21 ± 0.25 µg/mL, Tmax = 3.43 ± 2.23 h, AUC0-t = 34.16 ± 4.50 h.µg/mL, T½ = 63.46 ± 23.76 h, and Cmax = 1.17 ± 0.20 µg/mL, Tmax = 6.00 ± 0.00 h, AUC0-t = 52.37 ± 5.50 h.µg/mL, T½ = 77.74 ± 43.65 h, respectively for the first and second application. The florfenicol levels in plasma remained above the minimum inhibitory concentration for bacteria: Mannheimia haemolytica (0.75 µg/mL), Pasteurella multocida capsular type A (0.75 µg/mL) and Histophilus sommus (0.30 µg/mL). These results indicate the effectiveness of florfenicol against bacteria that cause respiratory disease of cattle

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:10:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-05-06Bitstream added on 2014-11-10T11:57:21Z : No. of bitstreams: 1 000164631.pdf: 2914434 bytes, checksum: 63a362e437b9653b359c2844495da99f (MD5) / Staphylococcus não são usualmente estudados na cavidade bucal. Quando presentes são considerados pertencentes à microbiota transitória. Indivíduos que apresentam doença periodontal representam possíveis reservatórios dessas bactérias oportunistas na cavidade bucal. O uso de antibióticos, quer seja para tratamento da doença periodontal, ou em consequência de infecções hospitalares, pode predispor o aumento do número de Staphylococcusspp. naboca, pois estes adquirem facilmente resistência aos antibióticos, podendo resultar em super-infecção. Participaram deste estudo 88 pacientes, com no mínimo 25 anos de idade e apresentando periodontite crônica, com pelo menos dois sítios com profundidade de sondagem maior ou igual a 5mm. Após anamnese e exame clínico periodontal foram feitas coletas de material da bolsa periodontal com cones de papel e da cavidade bucal por meio de bochechos. Do total de pacientes 37,50% apresentaram Staphylocaccusspp. na bolsa periodontal e 61,36% na cavidade bucal, sendo que 27,27% apresentaram a bactéria nos 2 sítios, não sendo necessariamente a mesma espécie. S. epidermidisfoi a espécie mais prevalente para bolsa periodontal (15,9%) e cavidade bucal (27,27%). Foram positivos para S. aureus na bolsa periodontal, 4,5% e para cavidade bucal 25%, sendo 3,4% positivos para os dois sítios. Não houve diferença estatística significante quanto à presença desses microrganismos entre as faixas etárias, hábito de fumar e aumento da profundidade de sondagem. A maioria das cepas de Staphylococcus isoladas mostrou resistência aos antibióticos testados, indicando que a utilização sistêmica destas drogas, como adjunto à terapia periodontal. deve ser vista com cautela / Staphylococcus are not usually studied in the oral cavity, when this happens, they are considered to belong to transitory microflora. Individuals that present periodontal disease represent possibles reservoirs of these opportunist bacteria in the oral cavity. The use of antibiotics whether for treatment of periodontal disease or due to hospital infections, may predispose the increase of the Staphylococcus spp. in the oral cavity because they easily become resistant to antibiotics, resulting in superinfection. The study was made with 88 patients, minimum age- 25 years old, presenting chronical periodontitis, with, at least, two sites having a probing pocket bigger or equal to 5mm. After anamnese and clinical periodontal examination samples were taken from the periodontal pocket using paper cones and from the oral cavity using mouth rinse. Of the total patients 37,50% presented Staphylococcus spp. in the periodontal pocket and 61,36% in lhe oral cavity; 27,27% presented bacteria in the two sites, not necessarily of the same specie. S. epidermidis was the most prevailing specie in periodontal pocket (15,9%) and oral cavity (27,27%). Positive for S. aureus in the periodontal pocket were 4,5% and for the oral cavity 25%, and 3,4% were positive for the two sites. There was not found significative statistical difference referring to the presence of the microorganisms as to age, smoking habit and increase of the probing depth. The majority of the isolated Staphylococcus samples showed resistance to the tested antibiotics, indicating that the drugs as an adjunct to periodontal therapy, must be seen with caution

Submitted by PAULA FERNANDA KRELING DOMINGUES null (pfkreling@yahoo.com.br) on 2016-10-24T11:38:23Z No. of bitstreams: 1 tese paula final versão defesa.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-10-31T13:00:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 domingues_pfk_dr_arafo.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-31T13:00:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 domingues_pfk_dr_arafo.pdf: 1294870 bytes, checksum: 4d22aa7bfdd639ed01df314565834ea9 (MD5) Previous issue date: 2016-09-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O sistema imune tem diversas formas de defesa contra microrganismos patogênicos. As membranas da mucosa são uma fonte de peptídeos catiônicos antimicrobianos contra uma ampla variedade de bactérias, fungos e vírus encapsulados. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade e atividade antimicrobiana em condições planctônicas e de biofilme de fragmentos derivados de peptídeos catiônicos (PC): LL-37 (originário de hCAP-18), D6-17 e D1-23 (originários de ortólogo da β-defensina-3 humana) contra bactérias cariogênicas. Para análise citotóxica, duas linhagens de células epiteliais foram expostas a diluições seriadas de fragmentos de PC. Ensaios de MTT e coloração de DAPI foram realizados para avaliar o metabolismo e a morfologia celular, respectivamente. A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) foram determinadas para fragmentos de PC e controle (digluconato de clorexidina - CHX) contra Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum e Actinomyces israelii. A concentração inibitória fracionada (FIC) foi obtida pelas combinações de fragmentos de CP para S. mutans. O ensaio de biofilme foi conduzido com CHX e o melhor fragmento de CP contra cepas de S. mutans. Microscopia confocal a laser foi realizada para avaliar a quantidade de células mortas em relação as células vivas e também a espessura do biofilme. Os resultados indicaram que D6-17 não afetou o metabolismo de nenhuma das linhagens celulares. D1-23, LL-37 e CHX não foram tóxicos para ambas as células utilizadas, quando de concentrações abaixo de 0,2, 0,02 e 0,01mM, respectivamente. Combinações dos PC não mostraram efeito sinérgico contra S. mutans. A coloração DAPI demonstrou fragmentação nucleica para LL-37 e CHX, e aspecto semelhante ao controle (meio de cultura) para D1-23 e D6-17. D1-23 apresentou a melhor atividade bactericida contra S. mutans, S. mitis e S. salivarius. LL-37 apresentou melhor efeito contra espécies de Lactobacillus e Actinomyces. D6-17 mostrou atividade bactericida apenas contra S. mutans, L. brevis e L. fermentum. Combinações de fragmentos de PC não mostraram efeito sinérgico contra S. mutans. D1-23 (10x CBM) apresentou atividade contra biofilme de S. mutans superior a CHX. A microscopia confocal mostrou alta taxa de células mortas em relação a células vivas para D1-23 e CHX quando comparado ao grupo controle (meio de cultura). D1-23 também diminuiu a espessura do biofilme em relação ao grupo controle. Conclui-se que D1-23 mostrou relevante atividade antimicrobiana/antibiofilme contra bactérias cariogênicas e baixa toxicidade em células epiteliais. / The immune system has several forms of defense against pathogenic microorganisms. The mucous membranes are a source of potent antimicrobial cationic peptides against a broad range of bacteria, fungi and enveloped viruses. The aim of study was evaluated the cytotoxicity and antimicrobial activity under planktonic and biofilm conditions of fragments derived from cationic peptides (CP): LL-37 (from hCAP-18), D6-17 and D1-23 (from β-defensin-3 derivative) against cariogenic bacteria. For cytotoxicity analysis, two lines of epithelial cells were exposed to serial dilutions of the CP fragments. MTT assays and DAPI staining were performed to evaluate cell metabolism and morphology, respectively. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) were determined for the CP fragments and control (Chlorhexidine digluconate-CHX) against Streptococcus mutans (Sm), S. mitis, S. oralis, S. salivarius, S. sanguinis, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. brevis, L. fermentum and Actinomyces israelii. Fractional inhibitory concentration (FIC) was obtained for the combinations of CP fragments on S. mutans. Biofilm assays were conducted with CHX and the best antimicrobial CP fragment against S. mutans strains. Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) was used to analyze the Live/Dead cells and biofilm thickness. The results indicated that D6-17 did not affect the metabolism of either cell line. D1-23, LL-37 and CHX were not toxic for both cells, in concentrations below 0.2, 0.02 and 0.01mM, respectively. DAPI-staining cells demonstrated nuclei fragmentation for LL-37 group and cells with the aspect of apoptosis in the CHX group. Cells treated with D1-23 and D6-17 presented morphology similar to the control group (culture medium). D1-23 presented the best bactericidal activity against S. mutans, S. mitis and S. salivarius. LL-37 had a better effect against Lactobacillus and Actinomyces species. D6-17 showed bactericidal activity only against S. mutans, L. brevis and L. fermentum. Combinations of CP fragments did not show a synergic effect against S. mutans. D1-23 (10x MBC) presented a higher effect against S. mutans biofilm compared to CHX. CLSM analysis showed that D1-23 and CHX groups presented higher quantification of dead cells when compared to control (culture medium). The biofilm thickness were lower in the D1-23 group compared to CHX and control groups. We concluded that D1-23 showed a remarkable antimicrobial/anti-biofilm effect against cariogenic bacteria and low toxicity for epithelial cells. / FAPESP: 2013/12285-0

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-08T18:47:28Z No. of bitstreams: 2 TESE Isabelle da Silva Luz.pdf: 2533844 bytes, checksum: ef1a1e69d6d1ea40a549974b8e76af50 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T18:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Isabelle da Silva Luz.pdf: 2533844 bytes, checksum: ef1a1e69d6d1ea40a549974b8e76af50 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / CNPq; FACEPE / A crescente demanda por alimentos saudáveis isentos de conservantes químicos tem estimulado a pesquisa de tecnologias alternativas para a produção de alimentos seguros. Neste cenário, os óleos essenciais surgem como possíveis agentes antimicrobianos para uso em alimentos, em especial aqueles obtidos da espécie Origanum vulgare L. (OEOV). A ação antimicrobiana do OEOV tem sido atribuída aos compostos fenólicos naturalmente presentes em sua constituição, sendo o carvacrol (CAR) frequentemente citado como seu constituinte majoritário. Considerando estes aspectos, este estudo foi desenvolvido com objetivo de investigar a capacidade de adaptação e de desenvolvimento de tolerância ao OEOV e CAR em algumas cepas de bactérias contaminantes de alimentos (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella Typhimurium) e avaliar a ocorrência de injúria e alterações na composição de ácidos graxos da membrana citoplasmática de S. Typhimurium quando exposta a concentrações subletais destes agentes. A determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi realizada por macrodiluição em caldo. Para os ensaios de tolerância direta e cruzada (45oC; pH 5.2; NaCl 5-15 g/100 mL), as cepas foram expostas a concentrações subletais (1/2 CIM e 1/4 CIM) do OEOV ou do CAR em caldo base carne (18 h) e em modelo base carne (72 h). Para os ensaios de verificação de injúria subletal, S. Typhimurium foi exposta a concentrações subletais do OEOV ou CAR e semeadas em meios adicionados de agentes seletivos. O perfil de ácidos graxos da membrana citoplasmática foi determinado por meio de cromatografia gasosa. Os valores da CIM frente às bactérias testadas variaram entre 0.62 μL/mL e 5.0 μL/mL para OEOV e entre 0.62 μL/mL e 2.5 μL/mL para CAR. Ensaios de indução de tolerância direta e cruzada em caldo base carne revelaram ausência do desenvolvimento de tolerância em todas as cepas bacterianas ensaiadas. Resultados semelhantes foram observados para P. aeruginosa em modelo base carne. Ensaios adicionais de indução de tolerância direta nas cepas bacterianas quando em caldo base carne adicionado de concentrações crescentes (1/16 CIM - 2 CIM) dos compostos também não evidenciaram desenvolvimento de tolerância bacteriana. A exposição de S. Typhimurium a concentrações subletais de OEOV ou CAR revelou injúria à membrana citoplasmática e à membrana externa, bem como alterações em sua composição de ácidos graxos, especialmente relacionadas ao aumento da razão ácidos graxos insaturados:ácidos graxos saturados. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a exposição das cepas bacterianas a concentrações subletais do OEOV ou CAR não induziu o desenvolvimento de tolerância bacteriana direta e cruzada quando cultivadas em meio base carne. Ainda, sugeriram que estes compostos podem induzir uma resposta adaptativa em S. Typhimurium, relacionada à mudanças no perfil de ácidos graxos de membrana. Estes achados revelam o potencial antimicrobiano do OEOV e do CAR em sistemas de conservação de alimentos, quando considerada a sua destacável capacidade de inibição do crescimento das cepas utilizadas no estudo, concomitante ao não desenvolvimento de tolerância bacteriana direta e cruzada, considerando avaliações de uso em concentrações subletais.