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Desenvolvimento de sistema de obtenção de biofilmes in vitro e a avaliação de sua susceptibilidade a biocidas / Development of system for in vitro biofilm formation and evaluation of its susceptibility to biocides

Lucchesi, Eliane Gama 23 June 2006 (has links)
Orientadoesr: Angela Maria Moraes, Silvia Yuko Eguchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-07T08:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucchesi_ElianeGama_M.pdf: 1203175 bytes, checksum: 28d918ad922300d0066ef3f03d052bdd (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Biofilme microbiano é definido como uma associação de células microbianas, fixadas a superfícies, bióticas ou abióticas, envolta por uma complexa matriz extracelular de substâncias poliméricas. Os biofilmes representam mais de 90% dos contaminantes existentes em sistemas aquosos, industriais, clínicos e ambientais. A resistência de microrganismos em biofilmes (sésseis) a biocidas é muito maior que a resistência de células livres (planctônicas), quando se compara seus antibiogramas. A rápida e correta avaliação do efeito de agentes antimicrobianos sobre os microrganismos sésseis é muito importante para a adequada seleção das ações corretivas a serem aplicadas em sistemas industriais contaminados. Atualmente, o sistema in vitro mais indicado para gerar, quantificar e erradicar biofilmes é o dispositivo MBECTM, de alto custo, desenvolvido por pesquisadores canadenses. O presente estudo visou o desenvolvimento de um sistema alternativo que fornecesse resultados análogos ao MBECTM, empregando esferas de vidro como suporte para o crescimento de biofilmes ao invés de placas de poliestíreno. Em amostras de três segmentos industriais diferentes (óleo de corte usado na usinagem de metais, amaciante ,. de roupas e caldo de cana) contaminados com microrganismos formadores de biofilmes, foram testadas sete formulações de biocidas em diversas concentrações, tanto no sistema desenvolvido quanto no dispositivo MBECTM. Os biocidas utilizados foram fomecidos pela IPEL Itibanyl Produtos Especiais Ltda, formulados com os seguintes princípios ativos: 2-bromo-2nitropropano-1 ,3-diol (BNP-115); 2-n-octíl-4isotiazolin-3-ona, 2-tiocianometiltiobenzotiazol, dimetílolurea, 5-cloro-2 metil-4isotiazolin-3-ona, 2-metil-4-isotiazolin-3-ona (FBP-124); 2-n-octil-4 isotiazolin-3-ona, dimetilolurea, 1,2-benzisotiazolin-3-ona (FBP-128); sódio-2-piridinatiol-n-óxido (FBP-140); hexahidro-1,3,5-tris(2-hidroxietil) s-triazina (BP-180); 2-bromo-2nitropropano-1,3-diol, 5cloJo-2metíl-4-isotiazolin-3-ona, 2-metil-4-isotiazolin-3-ona (BP-509);e 2-n-octil-4isotiazolin-3-ona, dimethylolurea, 3-iodo-2-propinil butil carbamato (FBP-417). A concentração inibitória mínima. (MIe) dos biocidas e suas concentrações mínimas de morte (CMM) foram determinadas para as bactérias planctônicas do fluido de corte, e a melhor relação custo/benefício foi observada para o biocida BNP-11,5, que apresentou MIC e CMM de 0,014% (v/v). Quanto às células sésseis, formadas em ambos os dispositivos utilizando-se fluido de corte contaminado como inóculo, o biocida de melhor relação custo/benefício foi o BP180. Nos ensaios com amaciante de roupas e caldo de cana, as melhores relações custo/benefício foram verificadas para os biocidas BNP-115, BP-180 e BP-509. A maturidade do biofilme foi muito importante para avaliar a eficácia dos biocidas. Verificou-se, durante o desenvolvimento. do trabalho, que para a concentração de erradicação (CE) do biofílme formado no dispositivo MBECTM ser semelhante às concentrações determinadas nas esferas de vidro, houve a necessidade de um periodo de incubação maior (72 horas) no MBECTM do que no sistema de esferas (48 horas). Os valores de CE determinados para o dispositivo MBEC TM, com 48 horas e 72 horas de incubação foram, respectivamente, 12 vezes maior que a concentração tradicional recomendada e de 30 a 125 vezes tal concentração, dependendo do biocida testado. Estes resultados evidenciaram que a maturidade do biofilme formado a partir do óleo de corte contaminado é atingida mais rapidarTIente no sistema de esferas de vidro do que no dispositivo MBEC TM, mostrando que é possível gerar um biofilme representativo da contaminação industrial em 48 horas no sistema alternativo desenvolvido, agilizando as ações corretivas e evitando ou minimizando principalmente os custos com o descarte das emulsões / Abstract: A microbial biofilm is defined as an association of microbial cells adhered to surfaces, biotic or abiotic, wrapped up in a complex extracellular polymeric matrix. Biofilms represent more than 90% of the existent contaminants in aqueous, industrial, and clinical systems, as well as in the environment. The resistance to biocides of microorganisms in biofilms (sessile cells) is much larger than that observed for cells in suspension (planktonic) when their antibiograms are compared. The fast and correct evaluation of the effect of antimicrobial agents on sessile microorganisms is very important for the appropriate selection of the corrective adions to be applied in contaminated industrial systems. Nowadays, the most indicated system to generate, quantify and eradicate biofilms is the MBECTM device, developed by Canadian researchers. The present study seeked the development of an altemative system to supply results similar to those obtained with the MBEC TM device, employing glass spheres as a support for biofilm growth instead of polystyrene plates. In samples of three different industrial segments (metal working cutting fluid, liquid fabric softener and sugar cane extract), seven commercial biocide formulations were tested in several concentrations, on "'rboth the developed system using glass spheres as support, and on the MBECTM device. The biocides employed were provided by IPEL ltibanyl Produtos Especiais Ltda, and were formulated with the following active agents: 2-brome-2nitropropane-1,3-diol (BNP-115); 2-n-octil-4isotiazolin-3-0ne, 2-tiocianometiltiobenzotiazol, dimethyilolurea, 5cloro-2metil-4-isotiazolin-3-one, 2-metil-4-isotiazolin-3-one (FBP-124); 2-n-octil-4 isotiazolin-3-0ne, dimethylolurea, 1,2-benzisotiazolin-3-0ne (FBP-128); sodium-2piridinatiol-n-oxide (FBP-140); hexahidro-1,3,5-tris(2-hidroxietil) s-triazine (BP-180); 2brome-2nitropropane-1 ,3-diol, 5-cloro-2metil-4-isotiazolin-3-one, 2-metil-4-isotiazolin-3-0ne (BP-509);e 2-n-octil-4-isotiazolin-3-0ne, dimethylolurea, 3-iodo-2-propinil butil carbamate (FBP-417). . The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum concentration of death (CMM) of the different biocides were determined for the cutting fluid planktonic bacteria and the best costlbenefit ratio was observed for BNP-115 biocide, which presented MIC and CMM values equal to 0,014% (v/v). Referring to sessile cells formed on both systems, when the contaminated cutting fluid was used as inoculum, the biocide presenting the best costlbenefit ratio was BP-180. In the tests with liquid fabric softener and sugar cane extract, the best costlbenefit ratios were verified when using BNP-115, BP-180 and BP-509 biocides. The maturity of the biofilm was very important to evaluate the effectiveness of the biocides. It was verified, during the development of the work, that for the eradication concentration (CE) of the biofilm formed in the MBEC TM device to be similar to the concentrations determined in the glass spheres, a larger incubation period was required (72 hours) in MBECTM than in the system constituted of spheres (48 hours). The determined values of CE using the MBECTM device, after incubation periods of 48 hours and 72 hours, were, respedively, 12 times higher than the traditional recommended concentration and from 30 to 125 times such concentration, depending on the tested biocide. These results evidenced that the biofilm formed trom the cutting oil reached its maturity more quickly in the glass spheres system than in the MBEC TM device, showing that it is possible to generate a representative biofilm starting from an industrial contaminated sample in 48 hours in the developed system, accelerating the proper corrective actions and avoiding or minimizing mainly the costs related to emulsion disposal / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química
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Avaliação da atividade de biocidas em biofilmes formados a partir de fluido de corte utilizado na usinagem de metais / Evaluation of biocide activity on biofilms formed in cutting fluid employed in metal working industry

Capelletti, Raquel Vannucci, 1978- 23 May 2006 (has links)
Orientador: Angela Maria Moraes, Silvia Yuko Eguchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-07T08:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Capelletti_RaquelVannucci_M.pdf: 647054 bytes, checksum: c35c09b03ca4ad293e07ecb39071b2b4 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Biofilmes são associações de espécies microbianas interdependentes, funcionando de forma complexa e coordenada como mecanismo de colonização de superfícies. Quando indesejavelmente instalados em uma planta industrial, os biofilmes contribuem para a contaminação de muitas áreas de processo, pois representam fontes de liberação e disseminação de microrganismos que podem deteriorar produtos, causando prejuízos financeiros e retrabalho, situação esta que pode ser prevenida e/ou controlada. No entanto, sua remoção representa um desafio, principalmente no que diz respeito à determinação do tipo e da dosagem adequada de biocida para este fim. Freqüentemente, a abordagem para a resolução deste problema é empírica. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um protocolo reprodutível para a formação de biofilmes em laboratório a partir de consórcios microbianos e a avaliação de sua susceptibilidade aos biocidas mais recomendados. Foram utilizados como inóculo microrganismos presentes em fluido de corte proveniente da indústria de usinagem de metais, por ser este um dos principais segmentos industriais sujeitos à formação de biofilmes. A metodologia adotada foi a recomendada para a utilização do dispositivo MBEC¿, um aparato amplamente empregado nas áreas médica e odontológica para o estudo de patógenos isolados, enfocando-se no estudo a influência de variáveis como tipo e concentração do inóculo, tempo e temperatura de incubação para a obtenção do biofilme e tempo de sonicação para desagregação do biofilme. Os resultados obtidos mostraram que o procedimento estabelecido para a obtenção in vitro de biofilmes foi plenamente satisfatório utilizando o inóculo constituído do fluido contaminado, e que tais biofilmes foram eficientemente erradicados na presença de biocidas não-oxidantes em concentrações 12 vezes superiores às normalmente empregadas. A temperatura de 25 ou 35°C e período de 48 h de incubação devem ser empregados para o desenvolvimento do biofilme e, para sua desagregação, recomenda-se efetuar a sonicação por 30 minutos. O isolamento das culturas puras a partir do consórcio microbiano original da amostra de fluido de corte, e o estudo dos biofilmes formados a partir das cepas isoladas não resultou na formação de biofilmes com número suficiente de células aderidas, indicando a ocorrência de seleção de cepas sem grande capacidade de adesão e de cepas fastidiosas e até mesmo não-cultiváveis, que requerem condições especiais de cultivo e que são essenciais para corresponder à flora original da amostra na formação do biofilme / Abstract: Biofilms are complex structures consisting of interdependent microbial species associations acting as surface colonization mechanism. Once undesirably installed at an industrial plant, biofilms contribute to contaminate many process areas, because they represent sources of microbial release and dissemination, which can deteriorate products, causing financial damages and work rebdoing, undesirable situations that can be controlled and/or prevented. However, biofilm removal represents a challenge, mainly referring to biocide type and dosage selection. Frequently, empiric approaches are used to solve this problem. The aim of the present work was to develop an in vitro experimental protocol for biofilm formation employing microbial consortia and to evaluate its susceptibility to recommended biocides. Microrganisms contaminating cutting fluid used in metalworking industry were employed as inoculum, since this is one of the main industrial segments subject to frequent biofilm formation. The adopted methodology was the recommended for the use of the MBEC¿ device thoroughly employed in the medical and dentistry areas for the study of isolated pathogenic microorganisms, and the study of the influence of variables such as inoculum type and concentration, incubation time and temperature for biofilm development, and sonication time for disaggregating the biofilms were focused. The achieved results showed that the established procedure for in vitro biofilm development was fully satisfactory when using the inoculum consisting of contaminated cutting fluid and that these biofilms were efficiently eradicated using non-oxidant biocide concentrations twelve times superior to those usually employed. Incubation temperature of 25 or 35°C and 48 h time period should be employed for biofilm development, while a 30 minute sonication period is recommended for disaggregating the biofilm. The isolation of the microorganisms in consortium, in the same cutting fluid, and their use for biofilm formation resulted in insufficient adhered cell numbers, indicating the occurrence of unadherent cells as well as unculturable strains, which require special culture conditions, and are essential for to reflect the original flora in the biofilm formation / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química
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Avaliação da radiopacidade, do pH e da atividade antimicrobiana do MTA, do cimento Portland puro e do cimento Portland adicionado de agentes radiopacificadores

Lima, Marta Judite Nunes 26 February 2016 (has links)
Introduction: The radiopacity is a required property in all dental materials. This characteristic allows this materials be able to be distinguished from the tooth surfaces through the radiography. Portland cement (PC) presents physico-chemical and biological properties similar to mineral trioxide aggregate (MTA), except for radiopacifier. Objective: To evaluate the radiopacity, antimicrobial activity and pH of the MTA, pure PC and PC added different radiopacifiers. Materials and Methods: The radiopacity of MTA, pure PC and PC added the radiopacifying: iodoform, lead oxide, zirconium oxide, bismuth subnitrate, barium sulfate and bismuth oxide in the proportions 15%, 20% and 30% were analyzed. The radiopacity was carried out using a semi-direct digital radiography system (Instrumentarium Kavo EXPRESS®). The PC and cements selected with adequate radiopacity (ANSI/ADA No. 57) were evaluated for their antimicrobial activity and pH. Antimicrobial activity was analyzed by microdilution tests and agar diffusion. The microorganism tested were Enterococcus faecalis, as a standard strain (ATCC 29212) and six clinical strains (LMA 26, LMA 27, LMA 28, LMA 29, LMA 31 and LMA 34). The pH was measured using a digital pH meter (pH Meter Pocket-sized). Statistical analyzes were performed using the Shapiro-Wilk normality test, ANOVA and Tukey with significance level of 5%. Results: Pure PC had the lowest radiopacity. The MTA, PC + iodoform 20% (3.59 mmEq.Al), PC + bismuth oxide 20% (4.79 mmEq.Al), PC + bismuth subnitrate 20% (3.12 mmEq.Al), PC + 20% lead oxide (3.18 mmEq.Al) and PC + 30% zirconium oxide (4.28 mmEq.Al). Regarding the agar diffusion test, the LMA 26 strain was inhibited by PC, PC + Iodoform 20%, PC + 30% Zirconium Oxide, PC + Bismuth subnitrate 20%, and PC + Bismuth Oxide 20%. The LMA 31 strain was inhibited by PC + zirconium oxide 30% and PC + bismuth subnitrate 20% and LMA 27 strain was inhibited by PC + bismuth subnitrate 20%. The other strains were not inhibited. In the microdilution test, most strains was inhibited by tested materials, except the ATCC 29212 strain which was not inhibited by PC + lead oxide 20%. LMA 28 29, 31 and 34 strains were not inhibited by PC + lead oxide 20%and PC + zirconium oxide 30%, in which LMA 28 and 29 strains were not inhibited by PC + bismuth oxide20%. All cements tested showed alkalinity in all experimental periods, in which MTA had the lowest pH. Conclusions: MTA and PC added the radiopacifiers subnitrate bismuth and iodoform in concentrations of 20% by weight, provided satisfactory radiopacity, alkaline medium and promoted bactericidal and bacteriostatic activities against strains of E .faecalis tested. / Introdução: A radiopacidade é uma propriedade obrigatória em todos os materiais odontológicos. Esta característica permite este material seja distinguido das superfícies dentárias através da radiografia. O cimento Portland (CP) apresenta propriedades físicoquímicas e biológicas semelhantes ao Agregado Trióxido Mineral (MTA), exceto pela partícula radiopacificadora. Objetivo: Avaliar a radiopacidade, atividade antimicrobiana e pH do MTA, CP puro e CP adicionado de diferentes radiopacificadores. Materiais e Métodos: Foi analisada a radiopacidade do MTA, CP e CP adicionado dos radiopacificadores: iodofórmio, óxido de chumbo, óxido de zircônio, subnitrato de bismuto, sulfato de bário e óxido de bismuto nas proporções 15%, 20% e 30%. A radiopacidade foi avaliada por meio do sistema de radiografia digital semi-direto (Instrumentarium Kavo EXPRESS®). O CP e os cimentos selecionados com radiopacidade adequada (ANSI/ADA nº 57) foram submetidos à avaliação da atividade antimicrobiana e do pH. A atividade antimicrobiana foi analisada pelos testes de microdiluição e difusão em ágar. O micro-organismo testado foi o Enterococcus faecalis, sendo uma cepa padrão (ATCC 29212) e seis cepas clínicas (LMA 26, LMA 27, LMA 28, LMA 29, LMA 31 e LMA 34). O pH foi aferido com pHmetro digital (pH Meter Pocket-sized). Os testes estatísticos utilizados foram os testes Shapiro-Wilk de normalidade, análise de variância ANOVA e Tukey a nível de significância de 5%. Resultados: O CP puro apresentou o menor valor de radiopacidade, O MTA, CP + iodofórmio 20% (3,59 mmEq.Al), CP + óxido de bismuto 20% (4,79 mmEq.Al), CP + subnitrato de bismuto 20% (3,12 mmEq.Al), CP + óxido de chumbo 20% (3,18 mmEq.Al) e CP + óxido de zircônio 30% (4,28 mmEq.Al). No teste de difusão em ágar, a cepa LMA 26 foi inibida pelo CP, CP + Iodofórmio 20%, CP + Óxido de Zircônio 30%, CP + Subnitrato de Bismuto 20% e CP + Óxido de Bismuto 20%. A cepa LMA 31 foi inibida pelas associações CP + óxido de zircônio 30% e CP + subnitrato de bismuto 20% e a cepa LMA 27 foi inibida pelo CP + subnitrato de bismuto 20%. As demais cepas não foram inibidas. No teste de microdiluição, a maioria das cepas foi inibida pelos materiais-testes, exceto a cepa ATCC 29212 que não foi inibida pelo CP + óxido de chumbo 20%, as cepas LMA 28, 29, 31 e 34 não foram inibidas pelas associações CP + óxido de chumbo 20% e CP + óxido de zircônio 30%, sendo que as cepas LMA 28 e 29 também não foram inibidas pelo CP + óxido de bismuto 20%. Todos os cimentos testados apresentaram alcalinidade em todos os períodos experimentais, sendo que o MTA apresentou os menores valores de pH. Conclusões: O MTA e as concentrações de CP adicionado de 20% do agente radiopacificador subnitrato de bismuto e CP adicionado do agente radiopacificador iodofórmio, 20% em peso, proporcionaram radiopacidade satisfatória, alcalinizaram o meio e promoveram atividades bactericida e bacteriostática contra as cepas de E. faecalis testadas.
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Efeito do diclofenaco sodico sobre a concentração serica e tecidual da amoxicilina e sobre a infecção estafilococica : estudo in vivo, em ratos

Simões, Roberta Pessoa 12 August 2018 (has links)
Orientador: Francisco Carlos Groppo / Dissertação (mestrado) Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T01:52:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_RobertaPessoa_M.pdf: 1951478 bytes, checksum: fa986a3125f61b41fa59a6ea91b73746 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo observar o efeito da amoxicilina, do diclofenaco sódico e da associação de ambos sobre a infecção estafilocócica induzida em tecidos granulomatosos, em ratos. Também foram avaliadas as concentrações sérica e teciduais da amoxicilina, observando o efeito da associação do diclofenaco sódico sobre as mesmas. Trinta animais receberam implantes de quatro esponjas de poliuretana subcutâneamente no dorso e, após 14 dias, dois dos tecidos resultantes (posicionados caudalmente) receberam 0,5mL de um inóculo de 108 ufcjmL de S. aureus ATCC 25923. Dois dias após, os animais foram divididos em grupos de seis, os quais receberam uma dose única de amoxicilina 50mgjkgjvo (grupo 1), amoxicilina 25 mg/kg/vo (grup02), diclofenaco sódico 2,5mg/kg/im (grupo 3), diclofenaco sódico 2,5mg/kg/im + amoxicilina 50mg/kg/vo (grupo 4) e soro fisiológico 1mLjanimal/vo (controle). Após 6h, dois tecidos granulomatosos (posicionados em direção à cabeça) e 10 _L de soro sangüíneo foram obtidos de cada animal, os quais foram dispostos em diferentes placas com MHA semeado com 108 ufcjmL de S. aureus ATCC 25923. Após incubação, foram medidos os halos de inibição proporcionados pelos tecidos granulomatosos e pelo soro sangüíneo. Dez microlitros, provenientes dos tecidos infectados após dispersão com auxílio de sonicador em tubos de ensaio contendo 10m L de NaCI foram distribuídos em placas contendo ágar salt manitol; permitiram a contagem do número de microrganismos em cada grupo. Os resultados mostraram concentrações teciduais de amoxicilina de 6,6 I-Ig/g para o grupo 1; 2,8I-1g/g para o grupo 2 e 0,8 I-Ig/g para o grupo 4. As concentrações séricas do antimicrobiano encontradas foram 11,6 I-Ig/mL para o grupo 1; 5,4I-1g/mL para o grupo 2 e 1,3I-1g/mL para o grupo 4. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre o número de microrganismos dos grupos 1, 2 e 4. Entretanto, estes foram significativamente diferentes do controle e do grupo 3, os quais foram diferentes entre si. Foi concluído que, embora o diclofenaco sódico (grupo 4) tenha diminuído a concentração tecidual da amoxicilina, a concentração resultante foi suficiente para permitir uma redução do número de microrganismos viáveis similar à observada nos grupos 1 e 2 / Abstract: The aim of this work was to observe the effect of the amoxicillin, sodium diclofenac and amoxicillin plus sodium diclofenac against staphylococcal infection in granulomatous tissues. Four polyurethane sponges placed under the back skin of thirty rats induced these tissues. After 14 days two tissues (tall position) received 0.5 mL of 108 ufc of S. aureus ATCC 25923/mL. Two days after, the animais were divided into five groups of six each. Group 1 received an only dose of amoxicillin 50mgjkgjpo, group 2 received amoxicillin 25mgjkgjpo, group 3 received sodium diclofenac 2.5mgjkgjim, group 4 received sodium diclofenac 2.5mg/kg/im plus amoxicillin 50mg/kg/po, and group 5 (control group) received NaCI 1mLjpo. After six hours of drug administration, two tissues of each animal were removed. Blood was collected from cervical plexus and centrifuged. Then, 10j.JL of serum were placed on paper disks. These disks and tissues were placed on dishes with Mueller Hinton agar inoculated with 108 ufc of Staphylococcus aureus/mL The dishes were incubated over 18 hours, and the inhibition zones were measured. The infected granulomatous tissues were placed in 10mL of NaCI, and dispersed by sonic system. Ten microliters of this suspension were spread on salt manitol agar dishes. The resulting microorganisms were counted after the incubation. Results showed tissue concentrations of amoxicillin of 6.6 ug/g for group 1; 2.8ug/g for group 2, and 0.8 ug/g for group 4. Serum concentration of amoxicillin showed 11.6 ug/mL for group 1; 5.4ug/mL for group 2, and 1.3ug/mL for group 4. Statistically significant differences among the number of microorganisms groups 1, 2, and 4 were not observed. However, these previous groups were statistically different from groups 3 and 5, which were statistically different from each other. It was concluded that, although sodium diclofenac (group 4) reduced amoxicillin concentration in the tissue, the resulting concentration was enough to reduce the count of microorganism. Also, the number of microorganisms of group 4 was similar to the one observed in groups 1 and 2 / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia
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Enterococcus spp. isolado de vegetais: perfil de suscetibilidade a antimicrobianos e formação de biofilme / Enterococcus spp. isolated from vegetables: susceptibility profile to antimicrobials and biofilm formation

Tormen, Silvia Helena 29 January 2016 (has links)
CNPQ; Fundação Araucária / Os enterococos são cocos Gram-positivos que pertencem ao grupo das bactérias ácido láticas (BAL). Podem ser isolados de plantas, solo, água, alimentos e do trato digestório de humanos e outros mamíferos. Alguns isolados são potencialmente patogênicos e resistentes a antimicrobianos, principalmente à vancomicina e demais antimicrobianos clinicamente importantes. Devido a este cenário, alimentos estão sendo sugeridos como reservatórios de enterococos resistentes a antimicrobianos. Contudo, são escassos os estudos que analisam a presença deste microrganismo em vegetais. Portanto, este trabalho teve como objetivo isolar e identificar Enterococcus spp. a partir de amostras de vegetais folhosos, legumes e raízes, e verificar sua suscetibilidade a antimicrobianos e formação de biofilme. Os isolados foram identificados ao nível de gênero/espécie pela reação da polimerase em cadeia (PCR), utilizando os oligonucleotídeos iniciadores das principais espécies. A sensibilidade a antimicrobianos foi determinada pelo método de disco-difusão e a presença dos genes ermB, aac-(6'), tetL, tetM, vanA e vanB pela PCR. A capacidade de formação de biofilme foi determinada, in vitro, por biomassa total. Foram obtidos 85 isolados de Enterococcus distribuídos em 62% das amostras analisadas. As espécies identificadas foram: Enterococcus casseliflavus/flavescens, Enterococcus columbae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii e Enterococcus avium. Dos isolados 64% apresentaram resistência fenotípica a todos os antimicrobianos testados, principalmente à vancomicina, eritromicina, teicoplanina, ampicilina e penicilina. A maioria das espécies apresentou pelo menos um isolado resistente à vancomicina. Dos isolados resistentes 61% apresentaram multirresistência. Os genes detectados foram: tetM (15%), tetL (8%), vanA (5%), vanB (4%) e aac-(6') (2%). Todos os isolados foram capazes de formar biofilme, onde 27% foram classificados como produtor de biofilme fraco, 60% moderado e 13% forte. Os isolados produtores de biofilme moderado foram os que mais apresentaram resistência à vancomicina, teicoplanina, eritromicina e penilicina. De acordo com estes resultados, os vegetais podem atuar como reservatório de enterococos resistentes a diversos antimicrobianos de importância clínica, principalmente à vancomicina. Isso representa um risco para a saúde pública uma vez que a vancomicina é o último recurso terapêutico para o tratamento de infecções enterocócicas graves. / The e enterococci are Gram-positive cocci that belong to the group of lactic acid bacteria (LAB). They can be isolated from plants, soil, water, food and the digestive tract of humans and other mammals. Some strains are potentially pathogenic and resistant to antibiotics, especially vancomycin and other clinically important antibiotics. Due to this scenario, foods are being suggested as reservoirs enterococci resistant to antimicrobials. However, there are few studies that analyze the presence of this organism in food vegetable. Therefore, this study aimed to isolate and identifyenterococci from samples of leafy vegetables, legumen and roots, and verify their susceptibility to antimicrobial and biofilm formation. Isolates were identified to genus / species by polymerase chain reaction (PCR) using the primers of the main species.The antimicrobial susceptibility was determined by disk diffusion method and thepresence of ermB genes, aac (6 '), tetL, tetM, vanA and vanB by PCR. Biofilm formation ability was determined in vitro by the total biomass. 85 were obtainedEnterococcus distributed in 62% of samples. The species identified were:Enterococcus casseliflavus/flavescens, Enterococcus columbae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii and Enterococcus avium. From the isolates showed 64% phenotypic resistance to all tested antibiotics, especially vancomycin, erythromycin, teicoplanin, ampicillin and penicillin. Most species had at least one isolate resistant to vancomycin. 61% of resistant isolates showed multidrug resistance. The genes were detected: tet M (15%), tetL (8%), vanA (5%), vanB (4%)and aac-(6 ') (2%). All isolates were able to form biofilm, where 27 % were classifiedas weak biofilm producer, 60 % moderate and 13 % stronger. Isolated producers of moderate biofilm were the ones who were resistant to vancomycin, teicoplanin, erythromycin and penillicin. According to these results, the vegetables can act as a reservoir of enterococci resistant to several antibiotics of clinical importance, especially vancomycin. This represents a risk to public health since vancomycin is the last therapeutic option for the treatment of severe enterococcal infections.

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