Atualmente, a quantidade de pacientes que são diagnosticados com alguma forma de depressão, entre elas, o transtorno depressivo maior, aumenta consideravelmente, quer seja em razão de diagnósticos mais precisos ou pela própria epidemiologia da doença. Acresça-se o fato de que muitos pacientes, apesar da quantidade de tipos de antidepressivos atualmente disponíveis para a terapêutica, são refratários ao tratamento prescrito, em razão dos efeitos adversos apresentados ou ainda em razão de simplesmente não se observar melhora com a prescrição. Em razão disso, novos tratamentos farmacológicos são disponibilizados. Para auxiliar na máxima eficácia em sua utilização, esse trabalho propôs o desenvolvimento de metodologia analítica para a determinação simultânea de antidepressivos tricíclicos e não tricíclicos, a saber: moclobemida, venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina, amitriptilina e sertralina em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), para posteriormente ser aplicada na monitorização de pacientes depressivos. O método consistiu na extração líquido-líquido com recuperação entre 73% a 86%, exceto para a moclobemida (55%). A separação foi obtida usando uma coluna em fase reversa LiChrospher® 60 RP-select B em LichroCART 250mm x 4mm, 5 ?m de diâmetro interno, Merck sob condições isocráticas com detecção em UV em 230 nm, com fase móvel composta por 35% de uma mistura de acetonitrila/metanol 55/5 v/v e 65% de tampão acetato 0,25M pH 4,4. As curvas padrão foram lineares em uma faixa de trabalho de 2,5-1000 ng/mL para moclobemida, 5-2000 ng/mL para venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina e amitriptilina, 10-2000 ng/mL para sertralina. A precisão intra e interensaios foi efetuada em 3 concentrações (50, 200 e 500 ng/mL). Os coeficientes de variação para a precisão intraensaio foram menores que 8,8% para todos os compostos e os coeficientes de variação para a precisão interensaios foram menores que 8,6%. Os limites de quantificação foram de 2,5 ng/mL para a moclobemida, 5 ng/mL para venlafaxina, citalopram, duloxetina, agomelatina, amitriptilina e 10 ng/mL para sertralina com a etidocaína como padrão interno. Não se observou qualquer interferência das drogas normalmente associadas com antidepressivos. O método desenvolvido foi aplicado na monitorização de 79 pacientes em tratamento prolongado com amitriptilina, sertralina e venlafaxina. Paralelamente, foram avaliadas as concentrações plasmáticas de pacientes voluntários sadios submetidos a tratamento em dose única com agomelatina. A monitorização terapêutica se faz necessária para monitorar adesão ao tratamento já que a depressão está entre as principais causas mundiais de morbidade por incapacitação social e estimativa de prevalência crescente até 2030; caracterizando-se como um dos maiores e mais onerosos problemas de saúde pública. / Currently, the number of patients who are diagnosed with some form of depression, among them, major depressive disorder, increases considerably, either because of more accurate diagnosis or by the epidemiology of the disease. One should add the fact that many patients, despite the amount of types of antidepressants currently available for therapy are refractory to the treatment prescribed, because of the adverse effects appear, or their toxic effects, or by simply not observed improvement then the prescription. Therefore, new pharmacological treatments are available. To assist in maximum effectiveness in its use, this paper presents a methodology on HPLC for simultaneous determination of seven antidepressants, tricyclic and non-tricyclic, moclobemide, venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine, amitriptyline and sertraline in human plasma, later to be applied in monitoring depressed patients. The simple and accurate method of sample preparation consists of the liquid-liquid extraction with recovery between 73% to 86% (except for moclobemide, 55%). Separation was achieved using a reverse phase column Lichrospher® 60 RP-select B LiChroCART 4mm x 250mm, 5?m internal diameter, Merck, under isocratic conditions, with UV detection at 230nm, with a mobile phase consisting of a mixture of 35% acetonitrile:methanol 55/5 (v/v) and 65% 0.25M acetate buffer, pH 4.4. The standard curves were linear in the working range of 2,5-1000 ng/mL for moclobemide, 5-2000 ng/mL to venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine and amitriptyline and 10-2000ng/mL to sertraline. The intra and interassay precisions were performed at three concentrations (50, 200 and 500 ng/mL). The coefficients of variation for intra-assay precision were less than 8.6% for all compounds and the coefficients of variation for interassay precision were lower than 8.5%. The limits of quantification were 2.5 ng/mL for moclobemide, 5 ng/mL for venlafaxine, citalopram, duloxetine, agomelatine, amitriptyline and 10 ng/mL for sertraline. No interference of drugs normally associated with antidepressants was observed. The developed method was applied to the monitoring of 79 patients receiving prolonged treatment with amitriptyline, sertraline and venlafaxine. And, the plasma concentrations of healthy volunteer patients undergoing single dose agomelatine were evaluated. Therapeutic drug monitoring, is to ensure maximum clinical efficacy coupled with minimal adverse effects in patients undergoing long-term therapy is needed and to monitor adherence to treatment since depression is among the major causes of morbidity and social disability increasing prevalence estimate of 2030; characterized as one of the largest and most costly public health problems

Este trabalho descreve o desenvolvimento de seletivas fases extratoras para técnicas de microextração empregadas para a determinação de fármacos e endocanabinóide em amostras de plasma por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em Tandem (LC-MS/MS). O capítulo I descreve o desenvolvimento e aplicação da fase extratora de material de acesso restrito (RAM) para a extração em ponteiras descartáveis (DPX) de dezesseis fármacos psicotrópicos em amostras de plasma de pacientes esquizofrênicos. Em virtude da complexidade de sintomas associados à esquizofrenia, a politerapia tem sido uma prática clínica cada vez mais comum. A maioria destes fármacos possui estreito índice terapêutico, o que requer acompanhamento adequado por meio de estudos de monitorização terapêutica. Tais estudos visam otimizar as doses terapêuticas, minimizar os efeitos adversos e avaliar a anuência do paciente ao regime de dosagens. O emprego da fase seletiva, RAM, permitiu a exclusão das macromoléculas, simultaneamente, a pré-concentração dos analitos de forma rápida e eficiente. A otimização das variáveis DPX favoreceu a sensibilidade e seletividade do método, empregando pequenos volumes de amostra biológica e de solvente orgânico. O método DPX/LC-MS/MS, desenvolvido e validado, apresentou linearidade adequada com limite inferior de quantificação na faixa de concentração de 0,5-20,0 ng mL-1, precisão inter e intra-ensaio com coeficientes de variação inferiores a 15% e exatidão com valores de EPRs variando de -12% a 11%. O método proposto foi aplicado com êxito na determinação destes fármacos em amostras de plasma de pacientes esquizofrênicos. As variações encontradas nas concentrações plasmáticas de alguns pacientes podem ser atribuídas a interações farmacocinéticas ou a variações inerentes ao paciente. No capítulo II, um polímero molecularmente impresso foi sintetizado in situ, no interior de um capilar de sílica fundida, para microextração em fase sólida no capilar (in-tube SPME) do endocanabinóide, anandamida (AEA), em amostras de plasma de pacientes com Doença de Parkinson (DP). A DP é caracterizada pela neurodegeneração dos neurônios dopaminérgicos. Estudos demonstram correlação entre os sistemas endocanabinóide e dopaminérgico, ligados ao controle motor. O processo de impressão molecular (não-covalente) do MIP, bem como os reagentes de síntese empregados, originaram sítios seletivos, complementares, em forma e tamanho à AEA. Micrografias eletrônicas de varredura (MEV) e espectros de infravermelho (FTIR) ilustraram as modificações físicas e químicas da superfície do capilar impresso e não impresso (NIP), após a polimerização. A otimização das variáveis in-tube SPME, favoreceu a eficiência das extrações. O método in-tube SPME/LC-MS/MS apresentou intervalo linear de 5 ng mL-1 (LOQ) a 20 ng mL-1; os ensaios de precisão apresentaram CV variando de 1,2 a 13% e exatidão com valores de EPRs variando de -3,6 a 7,5 %. Amostras de plasma de pacientes com DP foram analisadas pelo método de adição de padrão, e a concentração plasmática média de AEA de 0,2 ng mL-1, está em concordância com os valores da literatura, demonstrando a aplicabilidade do método in-tube SPME/LC-MS/MS na área clínica. / This work describes the development of highly selective sorbents for use in microextraction techniques for determination of drugs and endocannabinoid in plasma samples by liquid chromatography coupled to Tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Chapter I describes the development and application of a restricted access material (RAM-BSA) for use as extractive phase in DPX technique (\"Disposable pipette extraction\") for determination of 16 psychotropic drugs in plasma samples obtained from schizophrenic patients. Polytherapy has been increasingly common in clinical practice associated with schizophrenia due the complexity of its symptoms. Most of these drugs have narrow therapeutic index, wherefore requires adequate follow-up through therapeutic monitoring studies. This monitoring aims to optimizing therapy, to minimize adverse effects and verify patient adherence to treatment. By using a selective phase, RAM, we were able to exclude the macromolecules and to pre-concentrate the analytes quickly and efficiently. Optimization of the DPX variables improved the sensitivity and selectivity of the method, which demanded only small volumes of sample and organic solvent. The DPX/LC-MS/MS method developed and validated presented adequate linearity; the lower limit of quantification ranged from 0.5 to 20.0 ng mL-1. The inter- and intra-assay precision tests provided coefficients of variation (CV) lower than 15%; and the relative standard error (RSD) values, of the accuracy tests, varied from -12% to 11%. We successfully applied the proposed method to determine drugs in plasma samples from schizophrenic patients. Variations in the plasma concentrations of drugs in some patients may result from pharmacokinetic interactions or variations inherent in the patient. Chapter II details the \"in situ\" synthesis of a molecularly imprinted polymer within a fused silica capillary for capillary solid phase (in-tube SPME) of the endocannabinoid, anandamide (AEA), in plasma samples obtained from patients with Parkinson\'s Disease (PD), which is characterized by neurodegeneration of dopaminergic neurons. Studies have demonstrated a relationship between this endocannabinoid and dopaminergic systems, which are linked to motor control. The molecular imprinting process (non-covalent) and the synthesis reagents used to obtain the MIP gave rise to complementary, selective sites with the same shape and size as AEA. Scanning electron micrographs (SEM) and infrared spectra (FTIR) helped to illustrate the physical and chemical modification of the printed and non-printed capillary surface (NIP) after polymerization. Optimization of in-tube SPME variables favored the extraction process efficiency. The \"in tube\" SPME/LC-MS/MS method showed a linear range from 5 ng mL-1 (LOQ) to 20 ng mL-1. The precision tests presented CV that varied from 1.2 to 13%; and the RSD accuracy ranged from -3.6 to 7.5%. We analyzed plasma samples from patients with PD by the standard addition method. The mean plasmatic concentration was 0.2 ng mL-1, in agreement with the literature. This resut suggested that the \"in tube\" SPME/LC-MS/MS employing the MIP extractive phase is suitable to determine AEA in plasma samples

Atualmente, a quantidade de pacientes que são diagnosticados com alguma forma de depressão, entre elas, o transtorno depressivo maior, aumenta consideravelmente, quer seja em razão de diagnósticos mais precisos ou pela própria epidemiologia da doença. Acresça-se o fato de que muitos pacientes, apesar da quantidade de tipos de antidepressivos atualmente disponíveis para a terapêutica, são refratários ao tratamento prescrito, em razão dos efeitos adversos apresentados, ou de seus efeitos tóxicos, ou ainda por simplesmente não se observar melhora com a prescrição seguida. Portanto, novos tratamentos farmacológicos são disponibilizados, e entre eles, a duloxetina, um duplo inibidor de recaptação de serotonina e norepinefrina. Para auxiliar na máxima eficácia em sua utilização, esse trabalho apresenta metodologia em HPLC para determinação simultânea de sete antidepressivos, tricíclicos e não tricíclicos, moclobemida, venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina, amitriptilina e sertralina, em plasma humano, para posteriormente ser aplicada na monitorização de pacientes depressivos. O simples e preciso método de preparo da amostra consiste na extração líquido-líquido, com recuperação entre 73% a 86% (exceto para moclobemida, de 55%), e para a duloxetina, de aproximadamente 73%. A separação foi obtida usando uma coluna em fase reversa Lichrospher® 60 RP-select B em LichroCART 250mm x 4mm, 5?m de diâmetro interno, Merck, sob condições isocráticas, com detecção em UV em 230nm, com fase móvel composta por 35% de uma mistura de acetonitrila:metanol 55/5 (v/v) e 65% de tampão acetato 0,25M, pH 4,4. As curvas padrões foram lineares em uma faixa de trabalho de 2,5-1000ng/mL para moclobemida, 5-2000ng/mL para venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina e amitriptilina, e 10-2000ng/mL para sertralina. As precisões intra e interensaios foram efetuadas em três concentrações (50, 200 e 500ng/mL). Os coeficientes de variação para a precisão intraensaio foram menores que 8,6% para todos os compostos e os coeficientes de variação para a precisão interensaio foram menores que 8,5%. Os limites de quantificação foram de 2,5ng/mL para a moclobemida, 5ng/mL para venlafaxina, citalopram, duloxetina, agomelatina, amitriptilina e 10ng/mL para sertralina. Não se observou qualquer interferência das drogas normalmente associadas aos antidepressivos. / Currently, the number of patients who are diagnosed with some form of depression, among them, major depressive disorder, increases considerably, either because of more accurate diagnosis or by the epidemiology of the disease. One should add the fact that many patients, despite the amount of types of antidepressants currently available for therapy are refractory to the treatment prescribed, because of the adverse effects appear, or their toxic effects, or by simply not observed improvement then the prescription. Therefore, new pharmacological treatments are available, and among them, duloxetine, a dual reuptake inhibitor of serotonin and norepinephrine. To assist in maximum effectiveness in its use, this paper presents a methodology on HPLC for simultaneous determination of seven antidepressants, tricyclic and non-tricyclic, moclobemide, venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine, amitriptyline and sertraline in human plasma, later to be applied in monitoring depressed patients. The simple and accurate method of sample preparation consists of the liquid-liquid extraction with recovery between 73% to 86% (except for moclobemide, 55%), and duloxetine, of approximately 73%. Separation was achieved using a reverse phase column Lichrospher® 60 RP-select B LiChroCART 4mm x 250mm, 5?m internal diameter, Merck, under isocratic conditions, with UV detection at 230nm, with a mobile phase consisting of a mixture of 35% acetonitrile:methanol 55/5 (v/v) and 65% 0.25M acetate buffer, pH 4.4. The standard curves were linear in the working range of 2,5-1000ng/mL for moclobemide, 5-2000ng/mL to venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine and amitriptyline and 10-2000ng/mL to sertraline. The intra and interassay precisions were performed at three concentrations (50, 200 and 500ng/mL). The coefficients of variation for intra-assay precision were less than 8.6% for all compounds and the coefficients of variation for interassay precision were lower than 8.5%. The limits of quantification were 2.5ng/mL for moclobemide, 5ng/mL for venlafaxine, citalopram, duloxetine, agomelatine, amitriptyline and 10ng/mL for sertraline. No interference of drugs normally associated with antidepressants was observed.

Atualmente, a quantidade de pacientes que são diagnosticados com alguma forma de depressão, entre elas, o transtorno depressivo maior, aumenta consideravelmente, quer seja em razão de diagnósticos mais precisos ou pela própria epidemiologia da doença. Acresça-se o fato de que muitos pacientes, apesar da quantidade de tipos de antidepressivos atualmente disponíveis para a terapêutica, são refratários ao tratamento prescrito, em razão dos efeitos adversos apresentados ou ainda em razão de simplesmente não se observar melhora com a prescrição. Em razão disso, novos tratamentos farmacológicos são disponibilizados. Para auxiliar na máxima eficácia em sua utilização, esse trabalho propôs o desenvolvimento de metodologia analítica para a determinação simultânea de antidepressivos tricíclicos e não tricíclicos, a saber: moclobemida, venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina, amitriptilina e sertralina em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), para posteriormente ser aplicada na monitorização de pacientes depressivos. O método consistiu na extração líquido-líquido com recuperação entre 73% a 86%, exceto para a moclobemida (55%). A separação foi obtida usando uma coluna em fase reversa LiChrospher® 60 RP-select B em LichroCART 250mm x 4mm, 5 ?m de diâmetro interno, Merck sob condições isocráticas com detecção em UV em 230 nm, com fase móvel composta por 35% de uma mistura de acetonitrila/metanol 55/5 v/v e 65% de tampão acetato 0,25M pH 4,4. As curvas padrão foram lineares em uma faixa de trabalho de 2,5-1000 ng/mL para moclobemida, 5-2000 ng/mL para venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina e amitriptilina, 10-2000 ng/mL para sertralina. A precisão intra e interensaios foi efetuada em 3 concentrações (50, 200 e 500 ng/mL). Os coeficientes de variação para a precisão intraensaio foram menores que 8,8% para todos os compostos e os coeficientes de variação para a precisão interensaios foram menores que 8,6%. Os limites de quantificação foram de 2,5 ng/mL para a moclobemida, 5 ng/mL para venlafaxina, citalopram, duloxetina, agomelatina, amitriptilina e 10 ng/mL para sertralina com a etidocaína como padrão interno. Não se observou qualquer interferência das drogas normalmente associadas com antidepressivos. O método desenvolvido foi aplicado na monitorização de 79 pacientes em tratamento prolongado com amitriptilina, sertralina e venlafaxina. Paralelamente, foram avaliadas as concentrações plasmáticas de pacientes voluntários sadios submetidos a tratamento em dose única com agomelatina. A monitorização terapêutica se faz necessária para monitorar adesão ao tratamento já que a depressão está entre as principais causas mundiais de morbidade por incapacitação social e estimativa de prevalência crescente até 2030; caracterizando-se como um dos maiores e mais onerosos problemas de saúde pública. / Currently, the number of patients who are diagnosed with some form of depression, among them, major depressive disorder, increases considerably, either because of more accurate diagnosis or by the epidemiology of the disease. One should add the fact that many patients, despite the amount of types of antidepressants currently available for therapy are refractory to the treatment prescribed, because of the adverse effects appear, or their toxic effects, or by simply not observed improvement then the prescription. Therefore, new pharmacological treatments are available. To assist in maximum effectiveness in its use, this paper presents a methodology on HPLC for simultaneous determination of seven antidepressants, tricyclic and non-tricyclic, moclobemide, venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine, amitriptyline and sertraline in human plasma, later to be applied in monitoring depressed patients. The simple and accurate method of sample preparation consists of the liquid-liquid extraction with recovery between 73% to 86% (except for moclobemide, 55%). Separation was achieved using a reverse phase column Lichrospher® 60 RP-select B LiChroCART 4mm x 250mm, 5?m internal diameter, Merck, under isocratic conditions, with UV detection at 230nm, with a mobile phase consisting of a mixture of 35% acetonitrile:methanol 55/5 (v/v) and 65% 0.25M acetate buffer, pH 4.4. The standard curves were linear in the working range of 2,5-1000 ng/mL for moclobemide, 5-2000 ng/mL to venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine and amitriptyline and 10-2000ng/mL to sertraline. The intra and interassay precisions were performed at three concentrations (50, 200 and 500 ng/mL). The coefficients of variation for intra-assay precision were less than 8.6% for all compounds and the coefficients of variation for interassay precision were lower than 8.5%. The limits of quantification were 2.5 ng/mL for moclobemide, 5 ng/mL for venlafaxine, citalopram, duloxetine, agomelatine, amitriptyline and 10 ng/mL for sertraline. No interference of drugs normally associated with antidepressants was observed. The developed method was applied to the monitoring of 79 patients receiving prolonged treatment with amitriptyline, sertraline and venlafaxine. And, the plasma concentrations of healthy volunteer patients undergoing single dose agomelatine were evaluated. Therapeutic drug monitoring, is to ensure maximum clinical efficacy coupled with minimal adverse effects in patients undergoing long-term therapy is needed and to monitor adherence to treatment since depression is among the major causes of morbidity and social disability increasing prevalence estimate of 2030; characterized as one of the largest and most costly public health problems

Atualmente, a quantidade de pacientes que são diagnosticados com alguma forma de depressão, entre elas, o transtorno depressivo maior, aumenta consideravelmente, quer seja em razão de diagnósticos mais precisos ou pela própria epidemiologia da doença. Acresça-se o fato de que muitos pacientes, apesar da quantidade de tipos de antidepressivos atualmente disponíveis para a terapêutica, são refratários ao tratamento prescrito, em razão dos efeitos adversos apresentados, ou de seus efeitos tóxicos, ou ainda por simplesmente não se observar melhora com a prescrição seguida. Portanto, novos tratamentos farmacológicos são disponibilizados, e entre eles, a duloxetina, um duplo inibidor de recaptação de serotonina e norepinefrina. Para auxiliar na máxima eficácia em sua utilização, esse trabalho apresenta metodologia em HPLC para determinação simultânea de sete antidepressivos, tricíclicos e não tricíclicos, moclobemida, venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina, amitriptilina e sertralina, em plasma humano, para posteriormente ser aplicada na monitorização de pacientes depressivos. O simples e preciso método de preparo da amostra consiste na extração líquido-líquido, com recuperação entre 73% a 86% (exceto para moclobemida, de 55%), e para a duloxetina, de aproximadamente 73%. A separação foi obtida usando uma coluna em fase reversa Lichrospher® 60 RP-select B em LichroCART 250mm x 4mm, 5?m de diâmetro interno, Merck, sob condições isocráticas, com detecção em UV em 230nm, com fase móvel composta por 35% de uma mistura de acetonitrila:metanol 55/5 (v/v) e 65% de tampão acetato 0,25M, pH 4,4. As curvas padrões foram lineares em uma faixa de trabalho de 2,5-1000ng/mL para moclobemida, 5-2000ng/mL para venlafaxina, citalopram, agomelatina, duloxetina e amitriptilina, e 10-2000ng/mL para sertralina. As precisões intra e interensaios foram efetuadas em três concentrações (50, 200 e 500ng/mL). Os coeficientes de variação para a precisão intraensaio foram menores que 8,6% para todos os compostos e os coeficientes de variação para a precisão interensaio foram menores que 8,5%. Os limites de quantificação foram de 2,5ng/mL para a moclobemida, 5ng/mL para venlafaxina, citalopram, duloxetina, agomelatina, amitriptilina e 10ng/mL para sertralina. Não se observou qualquer interferência das drogas normalmente associadas aos antidepressivos. / Currently, the number of patients who are diagnosed with some form of depression, among them, major depressive disorder, increases considerably, either because of more accurate diagnosis or by the epidemiology of the disease. One should add the fact that many patients, despite the amount of types of antidepressants currently available for therapy are refractory to the treatment prescribed, because of the adverse effects appear, or their toxic effects, or by simply not observed improvement then the prescription. Therefore, new pharmacological treatments are available, and among them, duloxetine, a dual reuptake inhibitor of serotonin and norepinephrine. To assist in maximum effectiveness in its use, this paper presents a methodology on HPLC for simultaneous determination of seven antidepressants, tricyclic and non-tricyclic, moclobemide, venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine, amitriptyline and sertraline in human plasma, later to be applied in monitoring depressed patients. The simple and accurate method of sample preparation consists of the liquid-liquid extraction with recovery between 73% to 86% (except for moclobemide, 55%), and duloxetine, of approximately 73%. Separation was achieved using a reverse phase column Lichrospher® 60 RP-select B LiChroCART 4mm x 250mm, 5?m internal diameter, Merck, under isocratic conditions, with UV detection at 230nm, with a mobile phase consisting of a mixture of 35% acetonitrile:methanol 55/5 (v/v) and 65% 0.25M acetate buffer, pH 4.4. The standard curves were linear in the working range of 2,5-1000ng/mL for moclobemide, 5-2000ng/mL to venlafaxine, citalopram, agomelatine, duloxetine and amitriptyline and 10-2000ng/mL to sertraline. The intra and interassay precisions were performed at three concentrations (50, 200 and 500ng/mL). The coefficients of variation for intra-assay precision were less than 8.6% for all compounds and the coefficients of variation for interassay precision were lower than 8.5%. The limits of quantification were 2.5ng/mL for moclobemide, 5ng/mL for venlafaxine, citalopram, duloxetine, agomelatine, amitriptyline and 10ng/mL for sertraline. No interference of drugs normally associated with antidepressants was observed.

La polyneuropathie amyloïde familiale à transthyrétine (FAP-TTR) est une maladie rare héréditaire à transmission autosomique dominante liée à la production de formes mutantes de la transthyrétine (TTR). Ces mutations sont à l’origine d’un changement de conformation de la protéine qui, in vivo, se présente sous forme de tétramère. Celui-ci est alors déstabilisé et évolue vers la formation de fibrilles amyloïdes qui s'accumulent au niveau du système nerveux autonome, des nerfs périphériques et des organes. Ces dépôts sont responsables de la pathologie. Dans le but d’évaluer l’efficacité des thérapies pouvant être mises en œuvre, nous avons développé des stratégies analytiques visant à concevoir un système « point of care » à usage hospitalier permettant de quantifier les formes mutante et native circulantes de la TTR. La méthodologie développée consiste à réaliser la séparation électrocinétique de fragments ciblés de la TTR, obtenus par digestion enzymatique de la protéine. Cette approche analytique a été développée en se focalisant sur une mutation fréquente en France : la TTR Thr49Ala où une thréonine est remplacée par une alanine en position 49. Au cours de cette thèse, deux types de microréacteurs enzymatiques ont été étudiés, i.e. (i) un lit fluidisé contenant des particules magnétiques fonctionnalisées par des molécules de trypsine et (ii) une puce monolithique à base de thiol-ène fonctionnalisée également par la trypsine. Le pouvoir catalytique de ces microsystèmes a été comparé en mesurant l’efficacité de digestion du BApNA (substrat modèle) et de la TTR à l’aide de méthodes analytiques telles que la spectrophotométrie d’absorption UV-Visible, l’électrophorèse capillaire couplée à une détection UV (EC-UV) et la chromatographie liquide couplée à la détection par spectrométrie de masse (UHPLC-SM). Les résultats obtenus ont montré que le microréacteur enzymatique monolithique à base de thiol-ène était le plus performant pour digérer la TTR. Par ailleurs, nous avons réalisé, au cours de cette étude, l’optimisation d’une méthode EC-UV, adaptée à l’analyse des digestats recueillis en sortie de microréacteur. Elle a permis de séparer et de quantifier les peptides d’intérêt pour déterminer le rapport de TTR mutante (Thr49Ala) sur TTR native. / Transthyretin familial amyloid polyneuropathy (TTR-FAP) is a hereditary rare disease with an autosomal dominant transmission, related to the production of mutant forms of transthyretin (TTR). These mutations lead to a conformational change of the protein whose in vivo form is a tetramer. As a consequence, this tetramer is destabilized and evolves towards the formation of amyloid fibrils that aggregate on the autonomic nervous system, peripheral nerves, and organs. These deposits are responsible for the pathology. In order to evaluate the efficiency of possible therapies, we developed analytical strategies aiming at designing a “point of care” system for hospital use, which would enable the quantification of circulating mutant and native forms of TTR. The methodology that we developed consists in undertaking the electrokinetic separation of targeted TTR fragments obtained through the enzymatic digestion of the protein. This analytical approach has been developed while focusing on a frequent mutation in France: the TTR Thr49Ala mutation in which a threonine is substituted by an alanine in position 49. In this thesis, two types of enzymatic microreactors have been studied, i.e. (i) a fluidized bed containing magnetic particles functionalized by trypsin molecules and (ii) a thiol-ene-based monolithic chip also functionalized by trypsin. The catalytic power of these microsystems has been compared by measuring the digestion efficiency of BApNA (model substrate) and TTR through analytical methods such as UV-visible absorption spectrophotometry, capillary electrophoresis with UV detection (CE-UV), and liquid chromatography with mass spectrometry detection (UHPLC-MS). The results showed that the thiol-ene-based monolithic enzymatic microreactor was the most efficient system to digest TTR. Besides, during this study, we undertook the optimization of a CE-UV method which is adapted to the analysis of digested sample collected directly out of the microreactor. This allowed us to isolate and quantify the peptides of interest to measure the ratio of mutant TTR (Thr49Ala) versus the wild one.

A nifedipina atua como bloqueador de canais de cálcio inibindo o fluxo transmembrânico de ions Ca2+ no interior das células do músculo cardíaco e células do músculo liso vascular, o qual induz ao relaxamento do músculo liso e diminuição da resistência vascular periférica. É utilizado no Brasil no tratamento de hipertensão arterial sistêmica (HAS), faz parte da Relação Nacional de Medicamentos Essenciais do Ministério da Saúde e vem sendo distribuída pela Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo. Uma vez que a determinação plasmática do fármaco contribui para maior segurança de seu uso, o objetivo deste trabalho se prendeu em padronizar e validar um método analítico em cromatografia em fase gasosa com detecção por captura de elétrons, sensível, específico e reprodutível para a quantificação das concentrações plasmáticas com a finalidade de avaliar a relação entre a dose diária de 60mg e a concentração plasmática versus a resposta da pressão arterial sistêmica, observando a ocorrência de possíveis reações adversas, alterações bioquímicas e hematológicas, em pacientes portadores de HAS, submetidos à farmacoterapia. O método apresentou linearidade na faixa de 10 a 200 ng.mL-1 , com coeficiente de correlação (r) igual a 0,9977. Coeficientes de variação de precisão intra e interensaio menor que 10% e recuperação absoluta da nifedipina de 74,47 a 75,97%. Os limites de detecção e quantificação do método foram de 1,0 e 2,0 ng.mL-1, respectivamente e o fármaco demonstrou ser estável por 90 dias quando armazenado a -70°C ao abrigo da luz. Os dados observados no presente estudo permitiram evidenciar que os pacientes apresentaram concentrações plasmáticas no intervalo terapêutico preconizado, as quais foram efetivas na redução da pressão arterial sistólica e diastólica. Estas concentrações não acarretaram efeitos adversos em nível do sistema hematológico e bioquímico estatisticamente significativos e em relação às reações adversas relacionadas ao medicamento, tais como: cefaléia, edema periférico vascular, tontura, hipotensão arterial, rubor, tosse e cãibras, apesar de relatadas de forma significativa pelos pacientes no inicio do tratamento, foram ao longo do mesmo minimizadas e pouco relatadas. / Nifedipine, a compound of dihydropyridine class, is a calcium-channel antagonists drug that inhibits the transmembrane influx of Ca+2 into cardiac muscle cells and vasculas smooth muscle cells throught specific ion channels. It induces smooth muscle relaxation and decreases peripheral vascular resistance. It is widely used for the treatment of high blood pressure, and is considered as a essencial medicine by the Brazilian government. In Sao Paulo state, this drug has been distributed to hypertensive patients in treatment. Since the drug quantification in plasma contributes for a drug safety use, the objective of the present study was to develop and validate a accurate, specific and reproducible method for the determination of nifedipine in plasma by gas chromatography with eletron capture detection. The validated method was applied in samples of hipertensive patients on 60 mg daily dose of nifedipine with the purpose to evaluate the relation between drug plasma concentration and it\'s daily dose versus the hemodymamic effects, possible side effects and biochemical and hematologic alterations. The method was linear over a concentration range of 10 -200 ng.mL-1 (r2>0,99). The coefficient of variation of intra- and inter-assay precision less than 10% and the recovery was higher than 74%. The limit of detection and quantification were 1,0 and 2,0 ng.mL-1, respectively. Nifedipine was found to be stable in samples stored at -70ºC for 90 days and protect from light. The result showed that patients with drug plasma concentration within therapeutics levels also showed systolic and diastolic blood pressure succesfully controled. Therefore, these patients do not manifested any adverse effects specially in biochemical and hematologic systems. Other adverse efects of nifedipine such as headache, peripheral edema, hypotension, redness, cramp and cough reported by the patients at the beggining of thetreatment, were gradually diminishing and rarely related.

A nifedipina atua como bloqueador de canais de cálcio inibindo o fluxo transmembrânico de ions Ca2+ no interior das células do músculo cardíaco e células do músculo liso vascular, o qual induz ao relaxamento do músculo liso e diminuição da resistência vascular periférica. É utilizado no Brasil no tratamento de hipertensão arterial sistêmica (HAS), faz parte da Relação Nacional de Medicamentos Essenciais do Ministério da Saúde e vem sendo distribuída pela Secretaria da Saúde do Estado de São Paulo. Uma vez que a determinação plasmática do fármaco contribui para maior segurança de seu uso, o objetivo deste trabalho se prendeu em padronizar e validar um método analítico em cromatografia em fase gasosa com detecção por captura de elétrons, sensível, específico e reprodutível para a quantificação das concentrações plasmáticas com a finalidade de avaliar a relação entre a dose diária de 60mg e a concentração plasmática versus a resposta da pressão arterial sistêmica, observando a ocorrência de possíveis reações adversas, alterações bioquímicas e hematológicas, em pacientes portadores de HAS, submetidos à farmacoterapia. O método apresentou linearidade na faixa de 10 a 200 ng.mL-1 , com coeficiente de correlação (r) igual a 0,9977. Coeficientes de variação de precisão intra e interensaio menor que 10% e recuperação absoluta da nifedipina de 74,47 a 75,97%. Os limites de detecção e quantificação do método foram de 1,0 e 2,0 ng.mL-1, respectivamente e o fármaco demonstrou ser estável por 90 dias quando armazenado a -70°C ao abrigo da luz. Os dados observados no presente estudo permitiram evidenciar que os pacientes apresentaram concentrações plasmáticas no intervalo terapêutico preconizado, as quais foram efetivas na redução da pressão arterial sistólica e diastólica. Estas concentrações não acarretaram efeitos adversos em nível do sistema hematológico e bioquímico estatisticamente significativos e em relação às reações adversas relacionadas ao medicamento, tais como: cefaléia, edema periférico vascular, tontura, hipotensão arterial, rubor, tosse e cãibras, apesar de relatadas de forma significativa pelos pacientes no inicio do tratamento, foram ao longo do mesmo minimizadas e pouco relatadas. / Nifedipine, a compound of dihydropyridine class, is a calcium-channel antagonists drug that inhibits the transmembrane influx of Ca+2 into cardiac muscle cells and vasculas smooth muscle cells throught specific ion channels. It induces smooth muscle relaxation and decreases peripheral vascular resistance. It is widely used for the treatment of high blood pressure, and is considered as a essencial medicine by the Brazilian government. In Sao Paulo state, this drug has been distributed to hypertensive patients in treatment. Since the drug quantification in plasma contributes for a drug safety use, the objective of the present study was to develop and validate a accurate, specific and reproducible method for the determination of nifedipine in plasma by gas chromatography with eletron capture detection. The validated method was applied in samples of hipertensive patients on 60 mg daily dose of nifedipine with the purpose to evaluate the relation between drug plasma concentration and it\'s daily dose versus the hemodymamic effects, possible side effects and biochemical and hematologic alterations. The method was linear over a concentration range of 10 -200 ng.mL-1 (r2>0,99). The coefficient of variation of intra- and inter-assay precision less than 10% and the recovery was higher than 74%. The limit of detection and quantification were 1,0 and 2,0 ng.mL-1, respectively. Nifedipine was found to be stable in samples stored at -70ºC for 90 days and protect from light. The result showed that patients with drug plasma concentration within therapeutics levels also showed systolic and diastolic blood pressure succesfully controled. Therefore, these patients do not manifested any adverse effects specially in biochemical and hematologic systems. Other adverse efects of nifedipine such as headache, peripheral edema, hypotension, redness, cramp and cough reported by the patients at the beggining of thetreatment, were gradually diminishing and rarely related.

Esta dissertação objetivou, de forma geral, analisar a ação do psicólogo clínico no processo de preparação e acompanhamento psicológico das pessoas que se submetem à cirurgia bariátrica. De forma específica pretendeu-se identificar os elementos que podem interferir positivamente e/ou negativamente, na relação terapeuta - paciente; analisar as ressonâncias que o acompanhamento terapêutico exerce sobre os pacientes que se submetem à cirurgia bariátrica. Para tanto buscou as contribuições teóricas a respeito do corpo na filosofia de Merleau Ponty e na psicanálise de Winnicott. Sobretudo, abordou o relacionamento terapeuta paciente pela abordagem winnicottiana e dentro do contexto dos psicólogos que trabalham com o tema da obesidade. Trata-se de uma pesquisa qualitativa, que tem como participantes sete psicólogas clínicas que desenvolvem atividades na área de cirurgia bariátrica, tanto no setor privado como público e duas pacientes compreendidas na faixa etária de 33 e 56 anos, que se submeteram à cirurgia e continuam em acompanhamento psicológico. Utilizamos a entrevista semidirigida tanto para as psicólogas como para as pacientes, através de uma questão disparadora diferenciada. A análise das narrativas foi feita a partir da análise temática, que permitiu identificar eixos temáticos ligados à questão da prática profissional e às concepções teóricas utilizadas pelas psicólogas, destacando-se eixos como a natureza do vinculo estabelecido na relação terapeuta e paciente, a importância da família na participação do processo e, sobretudo, a imagem corporal vivida pelo paciente antes, durante e depois do procedimento cirúrgico. O cuidado que o psicólogo deve ter para levar em consideração no seu relacionamento terapêutico, a promoção do autoconhecimento e a compreensão a respeito de um corpo vivido pelo paciente e, portanto, um corpo sujeito, não coisificado; constituíram-se como elementos de fundamental importância, lembrando-nos que, atitudes explicativas diretivas são necessárias, mas não suficientes para o sucesso do tratamento. Por essas razões, apontamos que questões intrapsíquicas e os recursos internos do paciente sejam suficientemente trabalhados, evitando, assim, que o mesmo substitua o sintoma da obesidade por outro sintoma de compulsão.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The idea of madness is present in our society through association with the different, unusual, improper; any expression that does not suit in the social norms that seem so natural. The idea of madness varied in history according to the changes occurring in every society and times. Madness has always had a social space in human history, and has always had its physical spaces. The association between architecture and madness is generally represented by the emblematic figure of the asylum, although this type is in process of extinction in several countries, among them Brazil. Madness, throughout history, have had various forms of understanding and, therefore, there were also several spaces of madness in gradual process of evolution to the present day. In order to understand the changing character of madness spaces, accompanied by social transformations, ideas about the person called crazy and of the history of architecture, this dissertation discusses, at first, the madness spaces before modernity, where it will seek to show the different understandings about the madness, the spaces that generated such ideas and the changes that were taking them at different times. In a second step, will show the spaces of madness during modernity, addressing how the scientific and technological advances, social, economic and political changes influenced the creation of architectural typology of asylum, which is still imagery icon of a space of madness . In a third time, will show some movements of psychiatric reform of the world, as well as the Centers for Psychosocial Care (CAPS), urban facilities nationals of replacement to the type asylum, contrary to the jail and seeking a return to the community life of madness, coexistence in society and in the urban space. Finally, will be presented two case studies, contemporary brazilians that are evident on the differences with the prevailing models of care in country: the Trilhas AT Group of Uberlândia - MG, which has the situationist dérive as therapeutic experience and city reading; and the TAMTAM Group of Santos - SP, with its inclusion work shares its space constructed from art, culture, community life and especially the theater. The objects of study In-depth in the fourth chapter are understood and termed as dissident experiences, stand out from the model set out in Brazil psychosocial care; seen therefore as relevant references in the current scenario of the relationship between madness, city and contemporary urban culture in the country. Intends to make relations between the spaces studied in different periods, reflecting on the role of architecture in the process of transformation of the concept of madness. Presenting different historical and philosophical moments, the work aims to show that architecture, much more than a silent spectator, it is also agent in the evolutionary process of the idea of madness and its relation to society. / A ideia de loucura se faz presente em nossa sociedade por meio da associação com o diferente, o não usual, impróprio; qualquer manifestação que não se encaixe nas normas sociais que nos parecem tão naturais. O pensamento a respeito da loucura variou muito na história de acordo com as modificações ocorrentes em cada sociedade e época. A loucura sempre teve seu espaço social na história da humanidade, assim como sempre teve seus espaços físicos. A associação entre arquitetura e loucura é, geralmente, representada pela figura emblemática do manicômio, ainda que tal tipologia esteja em processo de extinção em vários países, dentre eles, o Brasil. A loucura, no decorrer da história, já teve diversas formas de entendimento e, por consequência, também existiram vários espaços da loucura, em processo gradual de evolução até os dias atuais. Com o objetivo de se compreender o caráter mutante dos espaços da loucura, associados às transformações sociais, das ideias a respeito dos sujeitos chamados loucos e da própria história da arquitetura, a presente dissertação aborda, em um primeiro momento, os espaços da loucura antes da modernidade, onde se buscará mostrar os diferentes entendimentos a respeito da loucura, os espaços que tais ideias geravam e as transformações que os mesmos foram tendo nas diferentes épocas. Em um segundo momento, serão mostrados os espaços da loucura durante a modernidade, abordando como os avanços científicos e tecnológicos, as transformações sociais, econômicas e políticas influenciaram para a criação da tipologia arquitetônica do manicômio, que ainda é ícone imagético de um espaço da loucura. Em um terceiro momento, serão colocados alguns movimentos de Reforma Psiquiátrica pelo mundo, assim como os Centros de Atenção Psicossocial (CAPS), equipamentos urbanos que são modelos nacionais de substituição à combatida tipologia manicomial, contrários ao cárcere e que buscam um retorno da loucura à vida comunitária, à convivência na sociedade e no espaço urbano. Por fim, serão apresentados dois estudos de caso, contemporâneos, brasileiros, que se evidenciam diante das diferenças com os modelos de atenção predominantes no país: o Grupo Trilhas AT de Uberlândia MG, que tem a deriva situacionista como experiência terapêutica e leitura de cidade; e o Grupo TAMTAM de Santos SP, com suas ações de inclusão em seu espaço construído a partir da arte, da cultura, da vida comunitária e, sobretudo, do teatro. Os objetos de estudo aprofundados no quarto capítulo são entendidos e denominados como experiências dissidentes, por se destacarem do modelo estabelecido no Brasil de atenção psicossocial; vistos, portanto, como relevantes referências no atual cenário da relação entre loucura, cidade e a cultura urbana contemporânea no país. Pretende-se fazer relações entre os espaços estudados em diferentes períodos, refletindo sobre o papel da arquitetura no processo de transformação do conceito de loucura. Apresentando-se diferentes momentos histórico-filosóficos, o trabalho pretende mostrar que a arquitetura, muito mais que uma espectadora silenciosa, é também agente no processo evolutivo da ideia de loucura e sua relação com as sociedades. / Mestre em Arquitetura e Urbanismo