Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Tiazolidinadionas são agentes sensibilizadores de insulina que atuam ligando-se à PPAR-&#947;, que levam a alterações na expressão de reguladores chave da homeostase lipídica e resistência à insulina. Neste estudo, foi avaliado o efeito do tratamento com novos derivados de benzilideno tiazolidinadionas (BTZDs): 5-(4-cloro-benzilideno)-3- (4-metil-benzil)-tiazolidina-2,4-diona (GQ2), 5-(4-metoxi-benzilideno)-3-(4-metil-benzil)- tiazolidina-2,4-diona (GQ5), 5-(2,4-dimetoxi-benzilideno)-3-(4-metil-benzil)-tiazolidina- 2,4-diona (GQ6), 5-(4-dimetilamino-benzilideno)-3-(4-metil-benzil)-tiazolidina-2,4-diona (GQ10) na resistência à insulina associada à hiperinsulinemia, hiperglicemia e hiperlipidemia, em camundongos, induzidas por dieta. Primeiramente, os camundongos foram submetidos a dois regimes dietéticos com dieta padrão ou dieta hiperlipídica, pelo período de 75 dias. Depois, os camundongos foram divididos aleatoriamente em 7 grupos (n=6). O grupo normal (NC), e o grupo controle submetido à dieta hiperlipídica (HFD-C), receberam veículo (carboximetilcelulose) e os outros grupos de camundongos receberam GQ2, GQ5, GQ6, G10 e Rosiglitazona (todos 30 mg/Kg/dia), respectivamente, uma vez por dia, diariamente, por via oral durante 15 dias. Todos os grupos de camundongos, com exceção do NC, foram submetidos à dieta hiperlipídica durante o período de tratamento. Os níveis de peso corporal, triglicerídeos, colesterol total, aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), glicose de jejum (FSG) e insulina de jejum (FSI) foram analisados. O índice de resistência à insulina foi calculado usando o homeostasis model assesment (HOMA-IR). Nenhum dos tratamentos causou alterações significativas no peso corporal. Os níveis elevados de triglicerídeos, colesterol total, FSG e FSI dos grupos submetidos à dieta hiperlipídica foram reduzidos significantemente (P<0,01) pelas BTZDs e pela rosiglitazona em comparação com o grupo HFD-C. GQ5 foi 34% mais potente do que Rosiglitazona em termos de diminuição dos níveis de insulina (P<0,05). Os índices HOMA-IR dos grupos tratados com BTZDs e com Rosiglitazona foram significativamente melhores do que aqueles do grupo HFD-C. Além disso, somente GQ2 e GQ5 reduziram os níveis de AST quando comparados ao grupo HFD-C. Este estudo sugere que os derivados BTZDs não somente reduzem a resistência à insulina em camundongos sob dieta hiperlipídica, mas também a hiperinsulinemia, hiperglicemia e hiperlipidemia. Adicionalmente, nenhum deles exerceu algum efeito adverso no fígado ou no peso corporal

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-09T15:51:33Z No. of bitstreams: 1 2016_CamilaGreiceChrist.pdf: 2550701 bytes, checksum: 5650ad88b979d9f6192a93b25609fbd3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-07-30T11:20:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CamilaGreiceChrist.pdf: 2550701 bytes, checksum: 5650ad88b979d9f6192a93b25609fbd3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-30T11:20:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CamilaGreiceChrist.pdf: 2550701 bytes, checksum: 5650ad88b979d9f6192a93b25609fbd3 (MD5) / A prevalência da obesidade está em ascensão mundial e associa-se ao desenvolvimento de resistência insulínica e diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Tiazolidinadionas (TZD) melhoram a sensibilidade à insulina e a homeostase da glicose em humanos e modelos animais. Os efeitos benéficos são, em grande parte, devidos à ativação do receptor gama ativado por proliferadores peroxissomais (PPAR). A utilização clínica das TZD, no entanto, é limitada devido a efeitos adversos de ganho ponderal e adipogênese, retenção hídrica, perda de massa óssea e aumento do risco cardiovascular. A ativação parcial e específica do PPAR, assim como a modulação seletiva de sua atividade em determinados tecidos, apresenta capacidade de sensibilização insulínica sem indução de ganho ponderal associado à ativação completa e não seletiva pelas TZD. Ativação total de PPARpelas TZD está associada também à indução de perfil de expressão gênica relacionado à termogênese no tecido adiposo branco (TAB), aumento da expressão da proteína desacopladora 1 (UCP1) na membrana mitocondrial interna e aumento da biogênese mitocondrial. Estas ações, contudo, não resultam em aumento do gasto energético e redução ponderal. O desenvolvimento de ligantes com atividade agonista parcial/moduladora seletiva e capazes de induzir a termogênese no TAB poderia representar estratégia para tratamento simultâneo da obesidade e resistência insulínica. Com objetivo de investigar o composto derivado de TZD, GQ-02, sobre variáveis metabólicas e a expressão de Ucp1 no adipócito branco, foram realizados ensaios em cultura de células e in vivo, com camundongos C57Bl/6 alimentados com dieta hiperlipídica (DHL). O GQ-02 apresentou efeito adipogênico fraco em pré-adipócitos 3T3-L1 induzidos a se diferenciar em cultura de células com meio contendo inibidor de fosfodiesterase, dexametasona e insulina. In vivo, o tratamento com GQ-02 (20 mg/kg/dia), durante 21 dias, apresentou efeito antidiabético semelhante ao da TZD clássica rosiglitazona e, ainda, perda de peso e redução da eficiência metabólica nos camundongos alimentados com DHL. Foi observado, ainda, em resposta ao tratamento com GQ-02, redução da massa do tecido adiposo branco visceral e do tamanho dos adipócitos, acompanhado de tendência ao aumento do consumo de oxigênio e aumento significativo da expressão do gene que codifica Ucp1 neste depósito de TAB. No tecido adiposo marrom, foi observado redução do conteúdo lipídico intracelular e tendência ao aumento da expressão de Ucp1 nos camundongos tratados com GQ-02. Não foram observadas diferenças nas características histológicas do TAB subcutâneo e, no fígado, foi observado melhora da esteatose hepática em resposta ao tratamento com o GQ-02. Estes resultados sugerem efeitos metabólicos favoráveis do GQ-02 em modelo de obesidade e DM2, que incluem seu possível potencial termogênico. _____________________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The prevalence of obesity is on the rise worldwide and is associated with the development of insulin resistance and type 2 diabetes mellitus (T2D). Thiazolidinediones (TZD) enhance insulin sensitivity and glucose homeostasis in humans and animal models. The beneficial effects are largely due to the activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR). The clinical use of TZDs, however, is limited due to side effects of weight gain and adipogenesis, fluid retention, loss of bone mass and increased cardiovascular risk. The partial and specific activation of PPAR, as well as the selective modulation of its activity in certain tissues, results in improved insulin sensitivity without inducing weight gain associated with the full and non-selective activation by TZDs. Full activation of PPAR by TZDs is also associated with induction of gene expression profile related to thermogenesis in white adipose tissue (WAT), increased expression of uncoupling protein 1 (UCP1) in the inner mitochondrial membrane and increased mitochondrial biogenesis. These actions, however, do not result in increased energy expenditure and weight loss. The development of PPAR ligands with partial agonist / selective modulator activity capable of inducing thermogenesis in WAT could represent a strategy for the simultaneous treatment of obesity and insulin resistance. In order to investigate the TZD-derivative compound GQ-02 on metabolic variables and UCP1 expression in white adipocytes, assays were performed in cell culture and in vivo with C57BL/6 mice fed with high fat diet (HFD). GQ-02 showed a weak adipogenic effect on preadipocytes 3T3-L1 induced to differentiate in cell culture medium containing phosphodiesterase inhibitor, dexamethasone, and insulin. In vivo, treatment with GQ-02 (20 mg/kg/day) for 21 days showed an antidiabetic effect similar to that of the classical TZD rosiglitazone, in addition to weight loss and decreased metabolic efficiency. GQ-02 treatment also reduced visceral WAT mass and the size of adipocytes, accompanied by a trend torwards increased oxygen consumption and an increased expression of Ucp1 in this fat depot. In brown adipose tissue, there was a decrease in intracellular lipid content and a trend towards increases Ucp1 expression in mice treated with GQ-02. No differences were observed in the histological characteristics of subcutaneous WAT. There was an improvement of hepatic steatosis in response to treatment with GQ-02. These results suggest the favorable metabolic effects of GQ-02 in an obesity and T2D model, including its possible potential thermogenic effect.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-18T14:16:10Z No. of bitstreams: 2 TESE Maria Juliana de Paula.pdf: 1534626 bytes, checksum: 94d56eaaaef23ea5b32a9931c5edcf2a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-18T14:16:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Maria Juliana de Paula.pdf: 1534626 bytes, checksum: 94d56eaaaef23ea5b32a9931c5edcf2a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / A síndrome metabólica consiste na associação entre sobrepeso, elevação da pressão arterial, dislipidemia aterogênica e uma alteração no metabolismo da glicose e insulina, e tem como base a resistência à ação da insulina. A sua prevalência tem sido atribuído ao consumo de dietas ricas em gordura. Em nosso trabalho nos propomos a avaliar o papel de um novo derivado tiazolidínico LPSF/GQ-130 sobre parâmetros cardiovasculares e metabólicos de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) alimentados com dieta hiperlipídica (DH, 57,8% de gordura) durante 14 semanas a partir de dois meses de idade. A pioglitazona (PIO) foi utilizada como padrão positivo. A introdução do tratamento com o LPSF/GQ-130 na 13º semana levou a uma melhora no quadro de intolerância à glicose e a insulina induzidos pela DH, e reduziu os níveis plasmáticos de PCR. A DH não alterou os níveis pressóricos, porém durante o estudo da reatividade vascular, tanto os anéis aórticos dos animais do grupo DH, quanto os do grupo controle apresentaram claro comprometimento no relaxamento vascular mediado por acetilcolina, contudo o LPSF/GQ-130 desencadeou uma melhora na resposta vasorrelaxante à Ach, ademais através das análises histológicas, observamos uma diminuição significativa (p < 0,01) da medida da espessura das camadas íntima e média da artéria aorta após o tratamento com as TZD. Esta melhora pode ser associada à diminuição da RI e da PCR implicando uma atenuação da inflamação vascular. Estes dados são indicadores de que o novo derivado tiazolidínico, GQ-130, é um candidato promissor para o tratamento de distúrbios relacionados à RI, melhorando a resposta vascular.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo119_1.pdf: 1590970 bytes, checksum: 5bafa5f456122e0b83c4284d6a51d6cf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / O diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica que ocorre quando o pâncreas não secreta insulina suficiente (DM tipo 1) ou quando o organismo não utiliza adequadamente a insulina que produz (DM tipo 2). Nos últimos vinte anos, avanços importantes foram efetuados no controle da hiperglicemia, das dislipidemias e no tratamento da hipertensão arterial. Apesar disso, as doenças cardiovasculares continuam sendo a principal causa da morbidade e mortalidade em pacientes com DM. No DM tipo 2, a terapêutica é baseada em medicamentos que diminuem a resistência à insulina (metformina e tiazolidinadionas TZDs) e naqueles que estimulam a secreção de insulina (sulfoniluréias e glinidas). Um dos mecanismos de ação das TZDs se dá por meio da ativação de receptores nucleares denominados PPAR ("Receptor Ativado por Proliferadores de Peroxissoma Gama "). Os ativadores da isoforma PPAR&#947; diminuem os fatores produzidos pelo tecido adiposo, como o TNF&#945;. No presente estudo foi sintetizado um nova tiazolidinadiona, a 5-(3-indol)-benzilideno-3-(4-metilbenzil)-tiazolidina-2-4-diona (LPSF/GQ-11) para avaliação dos efeitos hipoglicemiante e hipolipidêmico. Para tanto, utilizou-se ratos Wistar com diabetes induzida por estreptozotocina, em baixa dose (42 mg/Kg). O composto LPSF/GQ-11 foi sintetizado a partir de uma reação de N-alquilação da tiazolidina com haletos de alquila, seguida de Adição de Michael com intermediário de Cope. O composto foi estruturalmente caracterizado por métodos espectrofotométricos, tais como infravermelho, ressonância magnética nuclear de hidrogênios e espectrometria de massas. O tratamento dos animais com o LPSF/GQ-11 +Insulina, durante 14 dias, revelou um melhor resultado hipoglicêmico. O grupo tratado com LPSF/GQ-11 10mg/Kg, mostrou um melhor resultado (79%) para o controle da glicose plasmática, quando comparado com o fármaco padrão, rosiglitazona. Não foi observado perda de peso corporal nos animais tratados com o LPSF/GQ-11 na dose 10mg/Kg/dia, com ou sem associação com insulina, quando comparados com o grupo controle normoglicêmico. O tratamento com o derivado LPSF/GQ-11 apresentou uma melhora no perfil lipídico, o que pode ser sugestivo de melhoria no risco cardiovascular

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-29T13:21:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Pablo Cardoso 2014.pdf: 3350391 bytes, checksum: 407ec26dd181ec31e5ed50bee8e4f25a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T13:21:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Pablo Cardoso 2014.pdf: 3350391 bytes, checksum: 407ec26dd181ec31e5ed50bee8e4f25a (MD5) Previous issue date: 2014-04-15 / FACEPE / Introdução: A psoríase afeta cerca de 2-3% da população. Esta doença é uma dermatite crônica, recorrente e tem envolvimento inflamatório mediado por células T. A apresentação mais comum da psoríase é o envolvimento da pele com placas eritematosas bem definidas, escamosas, de posição e tamanhos variados. Na placa psoriásica há uma disfunção imunológica que envolve vários tipos celulares e mediadores inflamatórios, como citocinas, tal qual IL -17A. Estuda-se uma atividade imunomoduladora dos derivados tiazolidinadionas (TZD). Esta classe de medicamentos tem uma possível ação anti-inflamatória, e pode ser capaz de reduzir as lesões de psoriásicas. Materiais e Métodos: Portanto, decidiu-se estudar três novos derivados TZD em células mononucleadas do sangue periférico (PBMC) de pacientes com psoríase. Depois da confirmação da estrutura química, os compostos LPSF-SF-33, LPSF-SF-34 e LPSF-SF-35 foram adicionados em cultura de PBMC estimuladas ou não com PMA/Iono. Após 48h os sobrenadantes destas culturas foram utilizados para a avaliação da IL-17A, IL-22 e IL-6. Resultados: O LPSF-SF-33 mostrou uma boa atividade imunomoduladora, reduzindo os níveis de IL - 17A e IL - 22 no sobrenadante de cultura em comparação com a estimulação por PMA/Iono. O LPSF-SF-34 mostrou bons resultados de inibição de IL-17A e IL-22 e ainda em todas as doses foi mais eficaz do que a metilprednisolona, droga padrão, na redução da IL-22. O composto do LPSF-SF-35 diminuiu a produção de IL-17A e IL-22 e também foi capaz de diminuir a produção de IL-6 quando comparado com PMA/Iono. Conclusão: Estes novos derivados tiazolidínicos LPSF-SF-33, LPSF-SF-34 and LPSF-SF-3 são capazes de inibir a produção de IL-17A, IL-22 e IL-6 em doses diferentes e o efeito pode indicar melhoria da inflamação. / Introduction: Psoriasis affects about 2-3% of the population. This is a chronic dermatitis, recurrent and inflammatory disease mediated by T cells. The most common presentation of psoriasis is skin involvement with well-defined and demarcated erythematous plaque, scaly, and random position in the patient's body. In psoriatic plaque, there is an immune dysfunction involving many cell types and inflammatory mediators such as cytokines like IL-17A. There is an immunomodulatory activity of thiazolidinedione derivatives. This class of drugs has a possible anti-inflammatory action, may be able to mitigate the psoriatic lesions. Objectives and Methods: Therefore, we decided to study three new TZD derivatives in PBMC of patients with Pso. After chemical structure confirmation, the thiazolidinedione derivatives LPSF-33, LPSF-34 and LPSF-35 were prepared in culture of PBMC, stimulated or not with PMA / Iono. After that, the supernatant of these cultures were used for IL-17A, IL-22 and IL-6 evaluation. Discussion: The three new TZDs tested were able to reduce the expression of IL-17A and IL-22 at different doses compared to PMA/Iono, but only LPSF-SF-35 was able to reduce a significant IL-6 levels. The compounds differ in their molecular structure that is added by the radical and perhaps the LPSF-SF-35 has been better because in its final structure it features a pyridine. Conclusion: The new thiazolidinedione derivatives LPSF-SF-33, LPSF-SF-34 and LPSF-SF-35 are capable of inhibiting the production of IL-17A, IL-22 and IL-6 at different doses and the effect may indicate improvement in inflammation.

Tiazolidinadionas (TZDs) são agentes sensibilizadores de insulina que agem por ligação ao receptor gama ativado por proliferador de peroxissomos (PPAR&#947;). Elas têm apresentado efeitos cardioprotetores em humanos e propriedades anti-aterogênicas em modelos animais. Estudos in vitro têm sugerido que esses efeitos anti-aterogênicos da ativação de PPAR&#947; ocorrem por inibição da expressão de genes pro-inflamatórios e por aumentar o efluxo de colesterol via ativação dos receptores LXR-ABCA1. Entretanto, vários efeitos colaterais são associados ao tratamento com as TZDs, tornando necessária a pesquisa por novos compostos desta classe. Neste estudo, 14 novas tiazolidina-2,4- dionas, que são TZDs modificadas por bioisosterismo, foram avaliadas quanto à expressão de fatores aterogênicos e inflamatórios em linhagens de macrófagos J774 e RAW 264.7 e em camundongos com deleção genética para o receptor de LDL (LDLr-/-). Após a avaliação da citotoxicidade em macrófagos, foram eleitas cinco TZDs, denominadas de GQ-11, GQ-97, GQ-177, GQ-145 e LYSO-7. Três destas TZDs (GQ- 145, GQ-177 e LYSO-7) aumentaram significativamente a expressão de RNAm dos fatores de transcrição PPAR&#947;1, PPAR&#947;2 e do receptor CD36, assim como também aumentaram a expressão gênica de ABCA1 em 2.9, 3.5 e 6.7 vezes, respectivamente. Em adição, estas TZDs diminuíram a expressão gênica de iNOS, COX2, VCAM e IL-6 associado a redução na produção de nitritos, mas apenas a LYSO-7 reduziu significativamente a expressão desses genes quando comparada à rosiglitazona (RSG), além de diminuir a expressão da proteína-1 quimiotática para monócitos (MCP-1). No estudo experimental, os camundongos LDLr-/- machos foram alimentados com dieta hipercolesterolêmica por 16 semanas e quatro semanas antes da eutanásia receberam os derivados tiazolidínicos (20 mg/kg/dia) por gavagem. GQ-177 inibiu a progressão da placa aterosclerótica associada à aumento nas concentrações plasmáticas de HDL-C, com elevação na expressão de ABCA1, e redução da via inflamatória CD40-CD40L. LYSO-7 também mostrou inibição da aterogênese associada à redução das concentrações plasmáticas de colesterol total e triacilgliceróis, com diminuição na interação entre CD40-CD40L e expressão de citocinas inflamatórias. A GQ-145 não alterou os níveis plasmáticos dos lipídeos, mas aumentou a expressão de todos os genes pró-aterogênicos e pró-inflamatórios. Adicionalmente, as vias de ativação destas novas TZDs também foram estudadas por ensaio de luciferase, como gene repórter. A GQ-177 induziu ativação de PPAR&#947; e ligação ao seu domínio, enquanto a LYSO-7 estimulou ativação de PPAR&#945; e PPAR&#948;. Portanto, conclui-se que as novas TZDs, especialmente a GQ-177 e a LYSO-7, podem apresentar propriedades ateroprotetoras associadas ao transporte reverso de colesterol e aos efeitos antiinflamatórios, e poderiam ser uma alternativa promissora para o tratamento da aterosclerose. Porém, estudos complementares são requeridos para caracterizar as vias de sinalização intracelular, visto que as duas demonstraram ativar diferentes isotipos do fator de transcrição PPAR. / Thiazolidinediones (TZDs) are insulin-sensitizing agents that act by binding to peroxisome proliferator-activated receptor-&#947; (PPAR&#947;). They have been demonstrated to possess cardioprotective effects in humans and antiatherogenic properties in animal models. In vitro studies have also suggested that these antiatherogenic effects of PPAR&#947; activation occur by inhibiting the inflammatory gene expression and by increasing cholesterol efflux via LXR-ABCA1 activation. However, several side effects are associated with TZDs treatment making necessary the search for new compounds. In this study, 14 new thiazolidine-2,4-diones, modified TZDs by bioisosterism, were tested for aterogenic and inflammtary factors in RAW 264.7 macrophages and in low-density lipoprotein receptor-deficient mice. After the citotoxicity evaluation in RAW 264.7 macrophages the TZDs named GQ-11, GQ-97, GQ-177, GQ-145 e LYSO-7 were selected for this study. Three of these TZDs (GQ-177, GQ-145 and LYSO-7) significantly increased the expression of PPAR&#947;1, PPAR&#947;2 and CD36 mRNA, and enhanced the expression of ABCA1 mRNA in 2.9, 3.5 and 6.7 fold, respectively. Moreover, they also significantly decreased the expression of iNOS, COX2, VCAM and IL-6 mRNA in relation to control, and these results are associated to reduction on nitrits concentration. In addition, LYSO-7 significantly reduced the expression of these genes when compared to rosiglitazone, and decreased expression of MCP1 mRNA. In the experimental study, male LDLr-/- mice were fed an atherogenic diet containing 0.5% cholesterol for 16 weeks, and 4 weeks before euthanasia they received TZDs (20mg/kg/ per day) by gavage. GQ-177 treatment inhibited progression of atherosclerotic plaque associated to increased plasma concentrations of HDL-C, with enhance of ABCA1 expression and reduction on CD40-CD40L interaction. LYSO-7 treatment also showed inhibition of the atherogenesis associated to decreased plasma concentrations of total cholesterol and TAG, with reduction on CD40-CD40L pathway and inflammatory cytokines expression.GQ-145 did not alter the lipid plasma levels and increased the expression of all pro-atherogenic and pro-inflammatory genes. Furthermore, the activation of PPARs has also been studied, by luciferase assay as reporter gene. GQ-177 induced activation of PPAR&#947;, whereas LYSO-7 stimulated activation of PPAR&#945; and PPAR&#946;/&#948;. Altogether, our data suggest that the new TZDs derivatives, specially GQ- 177 and LYSO-7, may have atheroprotective properties associated with the reverse cholesterol transport and anti-inflammatory effects, and could be a promising alternative for the treatment of atherosclerosis. However, further studies are warranted in order to characterize the pathways of intracellular signaling since both have demonstrated to activate different isotypes of PPAR.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T19:21:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Dissertação-RicardoSilva.pdf: 2010474 bytes, checksum: fa5ce1fda4e849fa7743b5d5b4e55481 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T19:21:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2011-Dissertação-RicardoSilva.pdf: 2010474 bytes, checksum: fa5ce1fda4e849fa7743b5d5b4e55481 (MD5) Previous issue date: 2011-05-30 / Dentre vários compostos sintetizados pelo Laboratório de Planejamento e Síntese de Fármacos (LPSF) da Universidade Federal de Pernambuco, o derivado tiazolidínico (3-(2-Bromo-benzil)-5-(5-bromo-2-metoxi-benzilideno)-tiazolidina-2,4-diona) (LPSF/GQ-113B) apresentou importante atividade antiinflamatória em ratos Wistar. Tal resultado despertou nosso interesse no desenvolvimento e validação de um método bioanalítco para determinação do LPSF/GQ-113B em fluídos biológicos. Nesse contexto, um método bioanalítico sensível e seletivo foi desenvolvido e validado utilizando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a um detector ultravioleta (CLAE-UV) para quantificação do LPSF/GQ-113B em plasma de ratos Wistar. O método envolveu precipitação das proteínas plasmática com acetonitrila e, o LPSF/GQ-113B foi separado utilizando uma fase móvel composta por uma mistura de acetonitrila/água e ácido acético (85:14:1 v/v/v) eluida de forma isocrática através de uma coluna analítica Phenomenex® C18 5μ (150mm x 4.6mm) a uma temperatura de 40 ºC. O comprimento de onda para a detecção foi de 254 nm. A curva de calibração foi linear na faixa de 500-16000 ng/ml/L, com coeficientes de determinação (r²) próximos da unidade (0.997-0.999). Os rendimentos de extração para as concentrações de 1500, 7500 e 13.000 ng/ml/L foram 94.2%, 92.2% e 97.3%, respectivamente. O limite de quantificação para o LPSF/GQ-113B foi de 500 ng/mL. A validação do método incluiu a análise dos parâmetros analíticos de exatidão e precisão intra-dia e inter-dia que se apresentaram dentro dos limites exigidos pela legislação pertinente. Dessa forma, o método proposto pode ser aplicado para determinação quantitativa do LPSF/GQ-113B em plasma de ratos Wistar em estudos farmacológicos, toxicológicos, farmacocinéticos e de biodisponibilidade. / Among several compounds synthesized by the Laboratory of Planning and Synthesis of Drugs, from Federal University of Pernambuco, the thiazolidine derivative (3 - (2-bromo-benzyl) -5 - (5-bromo-2-methoxy-benzylidene)-thiazolidine -2,4-dione) (LPSF/GQ-113B) showed significant antiinflammatory activity in rats. This result has stimulated our interest in the development and validation of a method for determining LPSF/GQ-113B in biological fluids. In this context a fast, sensitive, and selective detection has been developed and validated for quantifying LPSF/GQ-113B in rat plasma by high-performance liquid chromatography coupled UV detector method . A plasma protein precipitation method was used with acetonitrile and, LPSF/GQ-113B was separated using a mobile phase (acetonitrile/water/acetic acid (85:14:1 v/v/v)) on the analytical column Phenomenex ® C18 5μm ( 150mm x 4.6mm) stored into the oven at 40 ºC temperature. The wavelength selected for detection was 254 nm. Over the range 500-16000 ng/mL, the calibration curve was linear with coefficient of determination (r²) were close to unit (0.997564- 0.999765). The recoveries at concentrations of 500, 7500 and 13000 ng/mL were 94.2%, 92.2% and 97.3%. The lower limit of quantification obtained was 500 ng/mL. Validation of the method included analysis of the analytical parameters of accuracy and within-batch and between-batch were inside the limits required by the competent authorities. Thus, the proposed method can be applied for quantitative determination of LPSF/GQ-113B in plasma of Wistar rats in pharmacological studies, toxicological, pharmacokinetic and bioavailability.

Tiazolidinadionas (TZDs) são agentes sensibilizadores de insulina que agem por ligação ao receptor gama ativado por proliferador de peroxissomos (PPAR&#947;). Elas têm apresentado efeitos cardioprotetores em humanos e propriedades anti-aterogênicas em modelos animais. Estudos in vitro têm sugerido que esses efeitos anti-aterogênicos da ativação de PPAR&#947; ocorrem por inibição da expressão de genes pro-inflamatórios e por aumentar o efluxo de colesterol via ativação dos receptores LXR-ABCA1. Entretanto, vários efeitos colaterais são associados ao tratamento com as TZDs, tornando necessária a pesquisa por novos compostos desta classe. Neste estudo, 14 novas tiazolidina-2,4- dionas, que são TZDs modificadas por bioisosterismo, foram avaliadas quanto à expressão de fatores aterogênicos e inflamatórios em linhagens de macrófagos J774 e RAW 264.7 e em camundongos com deleção genética para o receptor de LDL (LDLr-/-). Após a avaliação da citotoxicidade em macrófagos, foram eleitas cinco TZDs, denominadas de GQ-11, GQ-97, GQ-177, GQ-145 e LYSO-7. Três destas TZDs (GQ- 145, GQ-177 e LYSO-7) aumentaram significativamente a expressão de RNAm dos fatores de transcrição PPAR&#947;1, PPAR&#947;2 e do receptor CD36, assim como também aumentaram a expressão gênica de ABCA1 em 2.9, 3.5 e 6.7 vezes, respectivamente. Em adição, estas TZDs diminuíram a expressão gênica de iNOS, COX2, VCAM e IL-6 associado a redução na produção de nitritos, mas apenas a LYSO-7 reduziu significativamente a expressão desses genes quando comparada à rosiglitazona (RSG), além de diminuir a expressão da proteína-1 quimiotática para monócitos (MCP-1). No estudo experimental, os camundongos LDLr-/- machos foram alimentados com dieta hipercolesterolêmica por 16 semanas e quatro semanas antes da eutanásia receberam os derivados tiazolidínicos (20 mg/kg/dia) por gavagem. GQ-177 inibiu a progressão da placa aterosclerótica associada à aumento nas concentrações plasmáticas de HDL-C, com elevação na expressão de ABCA1, e redução da via inflamatória CD40-CD40L. LYSO-7 também mostrou inibição da aterogênese associada à redução das concentrações plasmáticas de colesterol total e triacilgliceróis, com diminuição na interação entre CD40-CD40L e expressão de citocinas inflamatórias. A GQ-145 não alterou os níveis plasmáticos dos lipídeos, mas aumentou a expressão de todos os genes pró-aterogênicos e pró-inflamatórios. Adicionalmente, as vias de ativação destas novas TZDs também foram estudadas por ensaio de luciferase, como gene repórter. A GQ-177 induziu ativação de PPAR&#947; e ligação ao seu domínio, enquanto a LYSO-7 estimulou ativação de PPAR&#945; e PPAR&#948;. Portanto, conclui-se que as novas TZDs, especialmente a GQ-177 e a LYSO-7, podem apresentar propriedades ateroprotetoras associadas ao transporte reverso de colesterol e aos efeitos antiinflamatórios, e poderiam ser uma alternativa promissora para o tratamento da aterosclerose. Porém, estudos complementares são requeridos para caracterizar as vias de sinalização intracelular, visto que as duas demonstraram ativar diferentes isotipos do fator de transcrição PPAR. / Thiazolidinediones (TZDs) are insulin-sensitizing agents that act by binding to peroxisome proliferator-activated receptor-&#947; (PPAR&#947;). They have been demonstrated to possess cardioprotective effects in humans and antiatherogenic properties in animal models. In vitro studies have also suggested that these antiatherogenic effects of PPAR&#947; activation occur by inhibiting the inflammatory gene expression and by increasing cholesterol efflux via LXR-ABCA1 activation. However, several side effects are associated with TZDs treatment making necessary the search for new compounds. In this study, 14 new thiazolidine-2,4-diones, modified TZDs by bioisosterism, were tested for aterogenic and inflammtary factors in RAW 264.7 macrophages and in low-density lipoprotein receptor-deficient mice. After the citotoxicity evaluation in RAW 264.7 macrophages the TZDs named GQ-11, GQ-97, GQ-177, GQ-145 e LYSO-7 were selected for this study. Three of these TZDs (GQ-177, GQ-145 and LYSO-7) significantly increased the expression of PPAR&#947;1, PPAR&#947;2 and CD36 mRNA, and enhanced the expression of ABCA1 mRNA in 2.9, 3.5 and 6.7 fold, respectively. Moreover, they also significantly decreased the expression of iNOS, COX2, VCAM and IL-6 mRNA in relation to control, and these results are associated to reduction on nitrits concentration. In addition, LYSO-7 significantly reduced the expression of these genes when compared to rosiglitazone, and decreased expression of MCP1 mRNA. In the experimental study, male LDLr-/- mice were fed an atherogenic diet containing 0.5% cholesterol for 16 weeks, and 4 weeks before euthanasia they received TZDs (20mg/kg/ per day) by gavage. GQ-177 treatment inhibited progression of atherosclerotic plaque associated to increased plasma concentrations of HDL-C, with enhance of ABCA1 expression and reduction on CD40-CD40L interaction. LYSO-7 treatment also showed inhibition of the atherogenesis associated to decreased plasma concentrations of total cholesterol and TAG, with reduction on CD40-CD40L pathway and inflammatory cytokines expression.GQ-145 did not alter the lipid plasma levels and increased the expression of all pro-atherogenic and pro-inflammatory genes. Furthermore, the activation of PPARs has also been studied, by luciferase assay as reporter gene. GQ-177 induced activation of PPAR&#947;, whereas LYSO-7 stimulated activation of PPAR&#945; and PPAR&#946;/&#948;. Altogether, our data suggest that the new TZDs derivatives, specially GQ- 177 and LYSO-7, may have atheroprotective properties associated with the reverse cholesterol transport and anti-inflammatory effects, and could be a promising alternative for the treatment of atherosclerosis. However, further studies are warranted in order to characterize the pathways of intracellular signaling since both have demonstrated to activate different isotypes of PPAR.