Orientador: Caio Antonio Carbonari / Coorientador: Anderson Luis Cavenaghi / Banca: Elza Alves Correa / Resumo: As cultivares de algodão Liberty Link ® são aquelas que resistem à aplicação do amônio glufosinate a uma dose que normalmente seria recomendada para os demais biótipos da espécie. Estas cultivares de algodão são constituídas geneticamente com um gene que codifica a produção da enzima fosfinotric ina acetil transferase (PAT), responsável pela acetilação do amônio glufosinate, inativando - o na planta. A cultivar de algodão FiberMax ® 975 WideStrike por também apresentar em seu DNA o gene PAT apresentaria o comportamento de seu metabolismo intermediário às cultivares convencional e Liberty Link ® . O objetivo do trabalho foi avaliar as alterações metabólicas e a intoxicação das plantas de algodão Wide Strike ® comparadas a plantas Liberty Link ® e convencionais, quando submetidos ao herbicida amônio glufosinate. Os es tudos foram conduzidos em casa de vegetação n a Faculdade de Ciências Agronômicas - FCA / UNESP - Campus de Botucatu (SP). Dois experimentos foram instalad os simultaneamente utilizand o cultivares as cultivares transgênicas e convencional , sendo o primeiro para avaliar a intoxicação e alterações na fotossíntese e o segundo para quantificar compostos relacionados a rota de ação do herbicida amônio glufosinate . Foram semeadas 5 sementes p or vaso de três cultivares de algodão FM 993 (convencional), FM 975WS ® (transgênica) e IMACD 6001LL ® (transgênica) e, aos 15 dias após a emergência (DAE) foi realizado o desbaste das plantas, mantendo duas plantas por vaso. Quando as plantas apresentaram 2 folhas verdadeiras (25 dias após emergência) realizou - se a primeira aplicação dos ... / Abstract: The Liberty Link cotton cultivars are those that resist a dose of ammonium glufosinate application that normally would be recommended for other biotypes species .These cotton plants are constitute genetically with gene that encodes the production of enzyme phosphinothricin acetyl transferase (PAT) responsible for the acetylation of glufosinate ammonium, inactivating it in the plant. The cotton cultivar FiberMax® 975 WideStrike has present in i ts DNA the gene PAT and present intermediate metabolism to conve ntional cultivars and Liberty Link ®. The purpose of the study was to evaluate the metabolic changes and the intoxication of WideStrike®cotton plants compared with Liberty Link ® and conventional plants, when treated to ammonium glufosinate herbicide. The studies were carried out in a greenhouse at the Faculty of Agricultural Sciences, "Júlio de MesquitaFilho" State University - Botucatu Campus (SP). Were conducted two experiments simultaneously using the transgenic and conventional cultivars, the first one to evaluate the toxicity and changes in photosynthesis and the secondto quantify compounds related to the herbicide ammonium glufosinate action route. Five seeds were sown of each cultivar per pot of the three cotton cultivars FM 993 (non - genetically modi fied), FM 975WS® (genetically modified) and IMACD 6001LL® (genetically modified) and at 15 days after emergence (DAE) was performed thinning of the plants, keeping two plants per pot. When the plants had two true leaves (25 days after emergence) held the ... / Mestre

Orientadora: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Banca: Geraldo Stachetti Rodrigues / Banca: Thaís Cristina Casimiro Fernandes / Resumo: O herbicida seletivo de maior destaque, desenvolvido na década de 1940, é o ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), uma auxina sintética cujo modo de ação é semelhante ao das auxinas naturais, porém com maior estabilidade na planta e por isso, mais eficaz que o hormônio natural. O uso constante e indiscriminado desta classe de agroquímicos tem causado sérios danos ao meio ambiente. Diante do exposto o presente trabalho objetivou investigar a toxicidade do herbicida 2,4-D comercial DMA 806 BR® utilizando os organismos testes Allium cepa e Tradescantia pallida. Foi intuito ainda comparar os resultados aqui obtidos investigando a formulação comercial com os dados já constantes na literatura que investigaram o princípio ativo do ácido 2,4-diclofenoxiacético para verificar se há interação aditiva e/ou sinérgica entre o ingrediente e as demais substâncias que compõem o produto comercial. Para avaliar a ação do herbicida 2,4-D comercial foram testadas três concentrações, a utilizada em campo, metade e um quarto. Cem sementes de A. cepa foram submetidas à germinação de forma contínua para avaliação da toxicidade, citotoxicidade e genotoxicidade das três concentrações do herbicida testadas. O controle positivo foi feito com o herbicida Trifluralina® (0.95 μL mL-1) e o negativo com água destilada. O ensaio foi conduzido em triplicata. Para avaliar genotoxicidade por meio do teste de micronúcleo com T. pallida, 10 hastes florais jovens com botões fechados, foram coletadas e expostas as três concentrações do 2,4-D comercial por 8 horas, seguidas de 24 horas de recuperação em água destilada sob constante aeração. O mesmo foi feito com controle positivo metil metano sulfonato (7.7 x 10-3 μL ml-1) e controle negativo em água destilada. Foram contabilizadas 3.000 tétrades por tratamento. A distribuição dos dados em relação a normalidade foi realizada com o teste Shapiro-Wilk, o teste paramétrico... / Abstract: The most prominent selective herbicide, developed in the 1940s, is the 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), with an auxin whose mode of action is similar to the natural auxin, but with greater stability in plant and therefore, more effective than the natural hormone. The constant and indiscriminate use of this agrochemical class has caused serious damage to the environment. Given the above the present study aimed to investigate the toxicity of the commercial 2,4-D herbicide DMA 806 BR®, using the Allium cepa and Tradescantia pallida as models. It was still aimed to compare the results obtained by investigating a commercial formulation with data already constants in the literature that investigated the active ingredient (2,4-diclofenoxiacético acid) to check for additive interaction and/or synergic ingredient and other substances contained in the commercial product. Three concentrations of commercial 2,4-D herbicide were tested to assess the toxic potential effects: field concentration, half and a quarter of field concentration. One hundred seeds of A. cepa were subjected to continuously germination for evaluating the toxicity, cytotoxicity and genotoxicity of the three tested concentrations. The positive control was performed with the herbicide Trifluralin® (0.95 μL mL-1) and negative control with distilled water. The experiment was conducted in triplicate. To assess genotoxicity by means of the micronucleus test with T. pallida, 10 young flowers stems with closed buds were collected and exposed to three different concentrations of 2,4-D Commercial for 8 hours, followed by 24 hours recovery in distilled water under constant aeration. The positive control was performed with methyl methane sulfonate positive control (7.7 x 10-3 μL ml-1) and negative control in distilled water. Three thousand tetrads were counted per treatment. Data distribution for normality was performed with the Shapiro-Wilk test, the parametric test was performed... / Mestre

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Coorientador: / Banca: Alaor Aparecido Almeida / Banca: Iraceles Aparecida Laura / Banca: Luis Fernando Barbisan / Banca: Yuri Sinzato / Resumo: O procloraz (PCZ) é um fungicida antagonista do receptor de andrógeno amplamente utilizado na agricultura. A exposição pré e peri-natal durante a diferenciação sexual é deletéria para a prole masculina, resultando em malformações de órgãos genitais, redução do peso dos órgãos reprodutores e maior retenção de mamilos em adultos. Considerando-se que a literatura sobre a ação do PCZ sobre o epidídimo é escassa e que é neste órgão que acontece o processo de maturação dos espermatozoides, justifica-se a realização do presente estudo, que pretendeu investigar se a exposição a baixas doses de PCZ, durante durante o período de trânsito dos espermatozoides no epidídimo, pode alterar a morfofisiologia deste órgão e a qualidade espermática em ratos adultos. Para tanto, foram utilizados 40 ratos da linhagem Wistar, com idade inicial de 90 dias divididos em quatro grupos experimentais (10 ratos cada): 0 (veículo), 10, 15 e 30mg/Kg/dia de PCZ diluído em óleo de milho (1mL/Kg) e administrado oralmente (gavage) durante quatro dias. Foram avaliados parâmetros morfofuncionais do trato genital masculino, dosagens hormonais, avaliações espermáticas, além de análises histopatológicas do testículo e epidídimo. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos controle e tratados em relação aos parâmetros avaliados. Os resultados indicam que a exposição a baixas doses de PCZ, nestas condições experimentais, não compromete a morfofisiologia do epidídimo e a qualidade espermática em ratos adultos / Abstract: Prochloraz (PCZ) is a fungicide and androgen-receptor antagonist that is used worldwide in horticulture and agriculture. Pre- and perinatal exposure to this pesticide during sexual differentiation is deleterious for the male offspring, resulting in genital organ malformation, reduced reproductive organ weights and increased nipple retention in adults. Given that the literature on the effects of PCZ on the epididymis is scarce and that sperm maturation takes place in this organ, the present investigation aimed to determine whether low PCZ doses, administered during the sperm transit through the epididymis, can alter the morphophysiology of this organ and sperm quality in rats. For this, adult male Wistar rats, 90 days old, were assigned into four different groups (10 rats each): 0 (vehicle), 10, 15 and 30mg/Kg/day of PCZ diluted in corn oil (1mL/Kg) administered orally for four days. Morphofunctional parameters of the male reproductive tract, hormonal levels, sperm evaluations, and histopathologic analysis of testis and epididymis were assessed. There were no statistically significant differences between the treated and control groups in relation to the evaluated parameters. The results reported herein show that PCZ exposure, in these experimental conditions, does not compromise epididymal morphophysiology or sperm quality in the adult rat / Mestre

Orientadora: Maria José Tavares Ranzani de Paiva / Coorientador: Julio Vicente Lombardi / Banca: Margarida Maria Barros Ferreira Lima / Banca: Nelsy Fenerich Verani / Resumo: Este trabalho teve como objetivo avaliar se as duas formas de selênio (selenito de sódio - Se4+ e selenato de sódio- Se6+) têm efeito antagônico à ação tóxica do cloreto de mercúrio (HgCl2) através da toxicidade aguda (96h) e crônica (14 dias), utilizando a tilápia, Oreochromis niloticus como organismo teste. Para os dois tipos de testes os tratamentos consistiram na seguinte composição: I) grupo controle; II) somente Hg; III) somente Se4+; IV) somente Se6+; V) Se4+ + Hg e VI) Se6+ + Hg. Para o teste de toxicidade aguda, foram utilizados alevinos submetidos à concentração de 0,4 mg Hg . L-1 (considerada concentração letal média - CL50) e à concentração de 1,0 mg Se . L-1 (considerada concentração de efeito letal não observado - CELNO) para o selenito de sódio (NaSe4+O3) e o selenato de sódio (NaSe6+O3). O teste de toxicidade crônica foi conduzido por 14 dias com a utilização de jovens de tilápia expostos às seguintes concentrações: 0,08 mg Hg . L-1, 0,4 mg Se4+ . L-1 e 1,4 mg Se6+ . L-1. A avaliação dos efeitos crônicos sub-letais foi realizada através dos parâmetros hematológicos: número de eritrócitos (Er), taxa de hemoglobina (Hb), hematócrito (Ht) e dos índices hematimétricos (VCM, HCM e CHCM). No teste de toxicidade aguda não ocorreu diferença significativa (P>0,05) nos índices de mortalidade observados entre os tratamentos de mercúrio e nas associações (Hg + Se4+ e Hg + Se6+). Nas análises hematológicas verificou-se diferença significativa (P<0,05) para CHCM da concentração de associação do mercúrio + selenato de sódio (Hg + Se6+) no décimo dia de coleta. Os resultados demonstraram que as duas formas de selênio utilizadas no teste agudo não foram eficientes para minimizar os efeitos tóxicos do mercúrio. No teste de toxicidade crônica o tratamento de associação mercúrio + selenato de sódio provocou alterações no... / Abstract: This work had as objective to evaluate if the two forms of selenium (sodium selenite - Se4+ and sodium selenate - Se6+) have antagonistic effect to the toxic action of mercury chloride (HgCl2) through the acute toxicity (96h) and chronic (14 days), using the tilapia, Oreochromis niloticus. For the two types of tests the treatments had consisted of: I) control group; II) only Hg; III) only Se4+; IV) only Se6+; V) Se4+ + Hg and VI) Se6+ + Hg. For the test of acute toxicity, was used juveniles submitted to the concentration of 0.4 mg Hg . L-1 (considered mean lethal concentration - CL50) and in the concentration of 1.0 mg Se . L-1 (considered concentration of non observed effect of lethality - NOEL) for the sodium selenite (NaSe4+O3) and the sodium selenate (NaSe6+O3). The test period of chronic toxicity was 14 days with young tilapia in the following concentrations: 0.08 mg Hg . L-1, 0.4 mg Se4+. L-1 and 1.4 mg Se6+. L-1. The evaluation of the sub-lethal chronic effect had been carried through the hematological parameters: erytrocyte count (Er), hemoglobin level (Hb), hematocrit (Ht) and for the hematimetric indices (MCV, MCH and MCHC). In the test of acute toxicity significant difference (P>0.05) in the mortality indices between the mercury treatments and in the associations did not occurs (Hg + Se4+ and Hg + Se6+). In the hematological analyses significant difference (P<0.05) for MCHC of the concentration of association of mercury + selenate of sodium (Hg + Se6+) in the tenth day was verified. The results had demonstrated that the two used forms of selenium in the acute test were not efficient to minimize the mercury toxicity. In the test of chronic toxicity the treatment of association mercury + selenate of sodium provoked alterations in the blood of the tilápia / Mestre

Orientador: Joaquim Gonçalves Machado Neto / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Antonio de Queiroz Neto / Resumo: Os objetivos desse trabalho foram avaliar a toxicidade aguda e os efeitos subagudos hematológicos, hormonal, bioquímicos e biométricos do inseticida methyl parathion em pacu. Os testes de avaliação da toxicidade aguda de methyl parathion foram realizados com alevinos de pacu, Piaractus mesopotamicus expostos em dois substratos: água mole e água de uma represa de cultivo de peixes do CAUNESP, em Jaboticabal. Os efeitos subagudos foram avaliados em peixes com peso corpóreo entre 200 a 300 g. O methyl parathion foi aplicado nas concentrações 0,0; 0,5; 1,0 e 2,0 mg/L de água de abastecimento em quatro caixas de 500 L de água por concentração em exposição de 24 horas com interrupção do fluxo de ar de 400 ml/min.. Foi realizado um exame histopatológico de fragmentos de brânquias de exemplares deste mesmo lote de pacu onde foi verificado a presença dos parasitas Henneguya sp e Ichthyophthirius mutifilis. Aos 3, 8 e 15 dias após a exposição ao inseticida foram coletados sangue dos peixes e realizou-se a contagem dos números de eritrócitos, leucócitos, trombócitos, hemoglobina, hematócrito, e quantificação de cortisol, índices hepatossomáticos e volumes corpusculares. O methyl parathion foi mais tóxico para o pacu em água mole do que em água de represa, cujos valores de CL50-96h calculados foram de 4,06 mg/L em água mole e 5,15 mg/L em água de represa. Não houve efeitos significativos das concentrações do inseticida nos parâmetros hematológicos e bioquímicos avaliados nos peixes. Ocorreu aumento significativo do nível de cortisol, devido ao efeito estressor do methyl parathion, inibindo determinadas quantidades da enzima acetilcolinesterase. Os aumentos significativos nas contagens dos eritrócitos e hemoglobina e a diminuição do VCM no sangue do pacu estão diretamente relacionado com a ação dos glicocorticoides produzidos pela elevação das... / Abstract: The acute toxicity of methyl parathion in pacu fingerlings (Piaractus mesopotamicus) subjected to soft and dam water was tested. The experiment was conducted in a controlled system according to IBAMA standards (1987) and CETESB tests (1979) of acute toxicity to fish, with some modifications. We verified a linear increase in pacu mortality with the increase of the insecticide dose in water. Methyl parathion was more toxic to pacu in soft than in dam water. The estimated values of methyl parathion Cl50, to pacu in soft and dam water were 4,06 mg/L and 5,15 mg/L, respectively / Mestre

Orientador: Mariana Gobbo Braz / Coorientador: José Reinaldo Cerqueira Braz / Banca: Yara Marcondes Machado Castiglia / Banca: Maria Angela Tardelli / Banca: João Paulo Marcondes / Banca: Clarissa Scolastici / Resumo: Apesar da eficácia e segurança demonstradas no uso clínico dos anestésicos inalatórios, existem ainda algumas questões a serem respondidas sobre genotoxicidade e efeitos no equilíbrio redox celular. Poucos estudos têm avaliado os danos no material genético ou o estresse oxidativo em pacientes submetidos a procedimento cirúrgico sob uso do anestésico sevoflurano. Para melhor entender os possíveis efeitos tóxicos deste agente, o presente estudo objetivou avaliar os danos oxidativo no DNA, a peroxidação lipídica e a defesa antioxidante plasmática durante e após a anestesia geral balanceada mantida com sevoflurano, em 15 pacientes adultos sem comorbidades, os quais foram submetidos a cirurgias eletivas de pequeno porte. As amostras de sangue venoso foram coletadas antes da anestesia; após a indução anestésica e imediatamente antes da cirurgia; 2 horas após o início da anestesia e no dia seguinte a cirurgia. Os danos no DNA foram avaliados em linfócitos periféricos utilizando o teste do cometa com as enzimas formamidopirimidina-DNA glicosilase (fpg) e endonuclease III (endo III) para detecção de lesões em purinas e pirimidinas oxidadas, respectivamente. O malonaldeído (MDA) e a defesa antioxidante plasmática foram detectados por fluorescência. Os resultados mostraram que não houve aumento nos danos do DNA ou oxidação de bases entre os momentos avaliados. A anestesia balanceada com sevoflurano não alterou os níveis de MDA e a defesa antioxidante do plasma manteve-se inalterada durante e após a anestesia. Em conclusão, o presente estudo demonstrou, pela primeira vez, que o sevoflurano não leva à oxidação de material genético ou de lipídios e não altera a capacidade antioxidante do plasma durante e após a anestesia balanceada em pacientes sem comorbidades submetidos a cirurgias minimamente invasivas / Abstract: Despite of the anesthetics effectiveness and safety in clinical use, there are some questions to be answered concerning their genotoxicity and effects on cellular redox balance. Only a few studies have evaluated DNA damage or oxidative stress in patients during surgical procedure with the volatile anesthetic sevoflurane. To further understand the possible toxic effects of this agent, the current study aimed to evaluate oxidative DNA damage, lipid peroxidation and plasma antioxidant defense during and after general balanced anesthesia maintained with sevoflurane in 15 adult patients without comorbidities who underwent elective minor surgery. The venous blood samples were collected at baseline-before anesthesia; after anesthesia induction and immediately before surgery; 2 h after the beginning of anesthesia; and on the day following surgery. DNA damage was detected in peripheral lymphocytes using the comet assay, and the enzymes formamidopyrimidine-DNA glycosylase (fpg) and endonuclease III (endo III) were used to recognize oxidized purine and pyrimidine lesions, respectively. Plasma malondialdehyde (MDA) and antioxidant defense were detected by fluorescence. The results showed no increase in DNA damage or base oxidation among the time points evaluated. Balanced anesthesia with sevoflurane did not alter MDA levels, and plasma antioxidant defense was unchanged during or after anesthesia. In conclusion, this study showed, for the first time, that sevoflurane does not lead to oxidation in genetic material or lipids, and does not alter the antioxidant status during or after balanced anesthesia in patients without comorbidities undergoing minimally invasive surgeries / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-15Bitstream added on 2014-06-13T19:00:31Z : No. of bitstreams: 1 demant_car_dr_botfca.pdf: 567683 bytes, checksum: 020907ed10052d4741c5f2e1c5861dfb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mamona pode ser utilizada para mais de 700 finalidades diferentes, porém a sua toxidez é o limitante principalmente para o uso restrito da torta originada após a extração do óleo. Para as análises utilizou-se um organismo com o modo de reação a medicamentos e toxinas semelhante ao ser humano, o nematóide Caenorhabditis elegans, o qual tem sido amplamente utilizado pela indústria farmacêutica. O trabalho teve inicio com ensaios preliminares os quais se utilizaram culturas de C. elegans. Estas foram expostas às toxinas que foram colocadas em pequenas cavidades no meio de cultura, porém, devido à falta de praticidade do método, à difícil leitura e sua degradação pela E. coli, passou-se a realizar os testes em placas de 24 poços transparentes contendo apenas água, o nematóide e a toxina. Os resultados mostraram que o teste utilizando placas de 24 poços para exposição do nematóide, e a extração feita através da homogeneização, seguida por banho-maria seguida por centrifugação se mostrou eficiente para medir a ricina sendo semelhantes aos obtidos pelos testes de radioimunodifusão e Elisa, testes bastante específicos, porém de custo mais elevado. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um bioensaio para quantificar a ricina tóxica da mamona, pois a relação entre as análises realizadas por diferentes métodos de quantificação existentes, nem sempre refletem a toxidez real, podendo ocorrer que sementes analisadas por estes métodos, apresentem menor teor de ricina, embora sejam mais tóxicas do que outras sementes que tenham maior teor de ricina quando analisada pelo método. Isto se deve aos métodos empregados que medem além da ricina o RCA Ricinus Communis Aglutimina, um composto menos tóxico do que a ricina pura. / The castor oil can be used to 700 different products but its toxicity limits mainly the use of the castor bean cake, the product you have after extract the oil. The present reseach developed a bioassay to quantify the ricin content on castor bean seed because the relationship between the analyses performed by different quantifying methods not always reflect the actual toxicity, witch can occur that seeds analysed by these methods have lower ricin levels although are more toxic than other seeds, because when it test not only the ricin but also the complex ricin + RCA Ricinus Communis Algutimin is measured and the RCA is less toxic than the pure ricin. That is why it was used an organism that has similarities in the way the human body reacts to drugs and toxin, choosing to use the Caenorhabditis elegans that has been used to the pharmaceutical industry. This assay started with preliminary assays using C. elegans colonies that were exposed to the toxins placed in small holes did in the media , but it was hard to read and the E. coli degradation, the method changed to the 24 well plates with water, nematode and the ricin. The results showed the method is efficient to measure ricin and very similar to the radio-imuno-diffusion and the Elisa, very specific tests, but expensive with some operational problems.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Botânica, Programa de Pós-Graduação em Botânica, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-06-25T15:48:04Z No. of bitstreams: 1 2013_JulianeLanerToledo.pdf: 2609389 bytes, checksum: d5b19dc989390a2ba9b048c1b3ae0dd9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-07-01T20:31:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_JulianeLanerToledo.pdf: 2609389 bytes, checksum: d5b19dc989390a2ba9b048c1b3ae0dd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-01T20:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_JulianeLanerToledo.pdf: 2609389 bytes, checksum: d5b19dc989390a2ba9b048c1b3ae0dd9 (MD5) / Alguns genes estão sempre expressos nas células, como é o caso dos genes constitutivos, outros estão sujeitos à regulação e são ativados somente quando a célula requisita seus produtos. A introdução de genes em plantas ou células vegetais permite a alteração dos níveis de expressão de genes envolvidos nas rotas metabólicas que se deseja estudar. Além disso, as alterações nos níveis de expressão gênica permitem estudar funcionalidade de genes, bem como obter um maior entendimento das vias biossintéticas em seus aspectos regulatórios. Assim, o presente trabalho teve como objetivo superexpressar e estudar a associação dos genes da geranil geranil difosfato sintase (GGPS), responsável pela síntese do precursor de terpenóides, com compostos alelopáticos em Arabidopsis thaliana L. Os terpenóides constituem umas das classes mais diversificadas de metabólitos secundários e desempenham funções na planta como reguladores do crescimento e desenvolvimento vegetal, além de estarem associados em interações da planta com o ambiente. Adicionalmente, os terpenos também têm sido encontrados em compostos alelopáticos. Em arabidopsis, o gene GGPS possui múltiplas cópias, entre elas, GGR, GGPS2 e GGPS6. Neste estudo, os vetores foram adquiridos através de um banco de genes de A. thaliana. Esses plasmídeos foram transferidos para Agrobacterium tumefaciens, e subsequentemente os genes da GGPS introduzidos em arabidopsis. Plantas de arabidopsis transgênicas foram selecionadas em meio MS com gentamicina. Foi possível selecionar plantas transgênicas apenas do gene GGR, cuja confirmação nessas plantas foi feita através de uma qPCR com primers específicos. Os efeitos da superexpressão do gene GGR no crescimento e desenvolvimento de plântulas de gergelim (Sesamum indicum L.), utilizada como planta alvo, foram analisados através de bioensaios com extrato aquoso de plantas de arabidopsis transgênicos e selvagens. Os resultados mostraram que o extrato de A. thaliana selvagem inibiu significativamente o crescimento de plântulas de gergelim. Além disso, os testes também mostraram que as plantas contendo o transgene GGR apresentaram efeito fitotóxico aproximadamente duas vezes maior que aquelas não transformadas. As análises de PCR em tempo foram utilizadas para comparar o número de cópias do gene GGR entre o DNA plasmidial e plantas transgênicas. Adicionalmente, o fato das plantas transgênicas terem apresentado toxicidade mais elevada do que aquelas não transformadas, foi possível estabelecer uma associação direta entre a síntese de terpenos e os compostos alelopáticos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Some genes are expressed at all times; others are subject to regulation and activated only when the cells require their products. The introduction of genes into plants or plant cells allows the modification of expression levels of genes involved in metabolic pathways that have been targeted to be studied. In addition, changes in gene expression levels allow to investigate gene functionality, as well as to obtain a better understanding of regulatory aspects of biosynthetic routes. Thus, this work aimed to overexpress and study the association between geranyl geranyl diphosphate synthase genes (GGPS), which are responsible for the synthesis of terpenoid precursors, and allelopathic compounds in Arabidopsis thaliana L. Terpenoids are one of the most diverse classes of secondary metabolites in plants and perform several roles such as growth regulators, as well as have been associated with plant/environment interactions. Moreover, terpenes have also been found as components of allelopathic compounds. In arabidopsis, GGPS gene has multiple copies: among which are GGR, GGPS2 and GGPS6. For this study, the vectors containing each of these genes were acquired from an arabidopsis gene bank. These genes were transferred to Agrobacterium tumefaciens and subsequently introduced in arabidopsis plants. Transgenic arabidopsis plants were selected in MS medium with gentamicin. The only transgenic arabidopsis plants selected contained the GGR gene, whose presence was confirmed by a qPCR with specific primers. The effects of GGR overexpression on the growth and development of sesame seedlings (Sesamum indicum L.) were analyzed through bioassays with aqueous leaf extracts of arabidopsis transgenic plants in comparison with WT plants. The results showed that wild type (WT) arabidopsis inhibited the growth of sesame seedlings. Moreover, plants with GGR transgene showed twice the inhibition observed with WT. Real-time PCR analysis compared the number of GGR copies in plasmidial DNA with transformed plants. Moreover, as arabidopsis plants containing GGR transgene showed higher phytotoxicity than those non-transformed, a direct association between terpene syntheses and allelopathic compounds has been established.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Nanociências e Nanobiotecnologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-05T19:19:17Z No. of bitstreams: 1 2014_AnaPauladeOliveiraRicaldideCastilho.pdf: 4670064 bytes, checksum: c3bbaf5f40e72fd1501ab28dcd2a73ec (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-10T17:07:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AnaPauladeOliveiraRicaldideCastilho.pdf: 4670064 bytes, checksum: c3bbaf5f40e72fd1501ab28dcd2a73ec (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T17:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AnaPauladeOliveiraRicaldideCastilho.pdf: 4670064 bytes, checksum: c3bbaf5f40e72fd1501ab28dcd2a73ec (MD5) / O objetivo deste trabalho é a fabricação de novas nanoestruturas de nanofilmes compostos por nanopartículas de óxidos de ferro e biopolímeros (quitosana ou o álcool polivinílico) por meio da técnica de automontagem camada por camada, assim como estudar o processo de adsorção das NPs de óxidos de ferro e realizar testes toxicológicos das nanoestruturas fabricadas. As NPs de óxidos de ferro (diâmetro  10nm) funcionalizadas com citrato foram sintetizadas por meio da técnica de coprecipitação química em meio aquoso e dispersas para formar suspensões coloidais com pH adequado às aplicações biológicas. Os nanofilmes compostos por NPs de óxidos de ferro e polímero foram depositados em substrato de vidro óptico BK7 ou em celulose bacteriana. O monitoramento do crescimento dos nanofilmes foi realizado por meio da espectroscopia de UV-Vis, enquanto a estrutura e a morfologia foram estudadas por meio das técnicas de espectroscopia Raman, de microscopias eletrônica de transmissão, de varredura e de força atômica. Em adição, foram realizados testes toxicológicos por meio da avaliação da viabilidade celular in vitro em culturas de células de linhagem NIH-3T3, empregando-se o método colorimétrico do brometo de 3(4,5dimetiltiazol-2il)-2,5-difenil-tetrazólio (MTT). Os nanofilmes formados por quitosana e nanopartículas, denotados por (QUI/CIT-MAG), depositados sobre substratos de vidro, apresentaram espessuras na faixa de 5 a 40 nm e crescimento linear, conforme se espera para amostras obtidas com a técnica de automontagem. Por outro lado, os filmes compostos por (PVA/CIT-MAG) apresentaram baixa adsorção de partículas. Os resultados obtidos pelas diversas técnicas de análise de superfície mostraram a uniformidade dos nanofilmes depositados em substratos de vidro ou celulose bacteriana. Os testes de viabilidade celular mostraram que os nanofilmes produzidos não apresentam efeitos citotóxicos, e indicaram o seu potencial para aplicações biomédicas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The objective of this study is the fabrication of new nanofilms comprising iron oxide nanoparticles and biopolymers (chitosan or polyvinyl alcohol) via the layer-by-layer technique, as well as studying the process of adsorption of the iron oxide nanoparticles, and perform toxicity tests of the produced nanostructures. Citrate-coated iron oxide nanoparticles (diameter  10 nm) were synthesized via the chemical co-precipitation route in aqueous medium and dispersed to produce colloidal suspension for biological applications. The nanofilms composed of iron oxide nanoparticles and polymer were deposited onto optic glass BK7 as well as on bacterial cellulose substrates. The growth of the nanofilms was monitored using UV-Vis spectroscopy, while the morphology and structure was studied by Raman spectroscopy, transmission electron microscopy, scanning electron microscopy and atomic force microscopy. In addition, toxicity tests were performed via cell viability in vitro in cultures of NIH-3T3 cells using the colorimetric assay of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). The nanofilms constituted of chitosan and nanoparticles deposited on BK7, presented thickness from 5 up to 40 nm and linear growth. Otherwise, the films constituted of PVA and nanoparticles presented low nanoparticle adsorption. The analysis of the results showed nanofilms deposited on both substrates are uniform. The cell viability assay showed that the produced nanofilms don’t show toxicity effects, indicating their potential for biomedical applications.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-17T20:43:41Z No. of bitstreams: 1 2012_RaphaelCandidoApolinarioPeixoto.pdf: 5217341 bytes, checksum: abc55ca0eb81dff352b06f61e7a07b2d (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-09T12:43:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RaphaelCandidoApolinarioPeixoto.pdf: 5217341 bytes, checksum: abc55ca0eb81dff352b06f61e7a07b2d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-09T12:43:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RaphaelCandidoApolinarioPeixoto.pdf: 5217341 bytes, checksum: abc55ca0eb81dff352b06f61e7a07b2d (MD5) / O Câncer de mama é uma das principais causas de morte entre as mulheres em todo mundo, com estimativa do Instituto Nacional de Câncer de 52.680 novos casos no Brasil em 2012. Agentes antitumorais à base de metal, como a cisplatina, podem induzir respostas favoráveis em tumores sólidos humanos, embora seus efeitos colaterais limitem seu uso na clínica. Portanto, já foi descrito que citrato de ródio (II), um composto metálico análogo à cisplatina, apresentou atividade antitumoral em carcinoma ascítico de Ehrlich. Além disso, o desenvolvimento de técnicas que consigam entregar agentes antitumorais com maior seletividade representa uma das maiores áreas de interesse na pesquisa do câncer. Nanobiotecnologia é um novo campo de pesquisa envolvendo avanços na detecção, diagnóstico e tratamentos de câncer. Nanopartículas envolvem uma variedade de nanosistemas coloidais que podem ser usadas para entrega de drogas. Algumas delas possuem propriedades magnéticas e devido ao seu tamanho reduzido (4-12 nm) permitem maior permeabilidade e retenção no tumor. Assim, a associação de citrato de ródio (II) com nanopartículas magnéticas poderia melhorar o efeito antitumoral, em função da maior especificidade a células e a tecidos específicos. Deste modo, o objetivo deste estudo foi avaliar as respostas toxicológicas e os efeitos antitumorais do tratamento sistêmico com citrato de ródio (II) livre e associado com nanopartículas de maghemita em câncer de mama. Camundongos BALB/c fêmeas foram inoculados com 2 x 104 células de carcinoma mamário 4T1 para o estabelecimento do tumor. Após sete dias, os animais foram tratados com citrato de ródio (II) livre, citrato de ródio (II) associado com nanopartículas de maghemita e citrato associado com nanopartículas de maghemita, por via intravenosa. Os tratamentos foram realizados a cada três dias e os animais foram eutanasiados depois da terceira dose. Os tumores foram removidos cirurgicamente, medidos, pesados e processados para as análises histopatológicas com intuito de avaliar a atividade antitumoral. As imagens foram adquiridas em microscópio de luz Zeiss Axiophot e as áreas de necrose tumoral foram medidas com software Motic Images Plus 2.0. Para as avaliações toxicológicas, amostras de sangue foram analisadas por testes bioquímicos e hematológicos. Não foram observadas diferenças significativas de volume e peso tumoral, embora todos os tratamentos tenham resultado em redução não significativa comparados ao controle. Citrato de ródio (II) livre e associado com nanopartículas promoveram um aumento não significativo da área de necrose em relação ao grupo controle. Além disso, análises bioquímicas e hematológicas de camundongos BALB/c sem implante tumoral não apresentaram efeitos tóxicos relativos aos compostos utilizados. Assim, citrato de ródio (II) livre e associado com nanopartículas de maghemita apresentaram atividade antitumoral em carcinoma mamário 4T1, indicando que, com adequado ajuste da dose, essas composições podem apresentar potencial terapêutico para aplicação em câncer de mama. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Breast cancer is one of the main causes of death among women around the world, with an estimated of National Cancer Institute of 52,680 new cases in Brazil in 2012. Metal-based antitumor drugs like cisplatin can induce favorable response in human solid tumors, however its adverse side effects limit its clinical activity. Therefore, it was described that rhodium (II) citrate, an metal-based compound analog to cisplatin, showed antitumor activity in Ehrlich ascites breast carcinoma. Moreover, the development of techniques that can deliver anticancer agents selectively represents one of the major areas of interest in cancer research. Nanobiotecnology is a new field of research expected to advance in cancer detection, diagnosis, and treatments. Nanoparticles encompass a variety of colloidal nanosystems which can be used for drug delivery. Some metal nanoparticles has magnetic properties and extremely reduced size (4-12 nm), allowing tissue permeability and drug retention into the tumor. Then, the association of rhodium (II) citrate with magnetic nanoparticles could improve the antitumor effect by targeting specific cells or tissues. Hence, the aim of this study was to evaluate the toxicological responses and antitumor activity of systemic treatment with rhodium (II) citrate free and associated with maghemite nanoparticles in breast cancer. Females BALB/c mice were injected with 2 x 104 4T1 mammary carcinoma cells for tumor establishment. After seven days, animals were treated with free rhodium (II) citrate, rhodium (II) citrate loaded maghemite nanoparticles and citrate-loaded maghemite nanoparticles by intravenous administration. Treatments were carried out every three days and animals were euthanized after the third dose administration. Then, tumors were surgically removed, measured, weighted and prepared for histopathological analyses in order to evaluate the antitumor activity. Images were acquired in Zeiss Axiophot light microscopy and tumor necrosis areas were measured by Motic Images Plus 2.0 software. For toxicological investigation, blood samples were analyzed by biochemical and hematological tests. No significant differences were observed for tumor volume and weight, although all treatments resulted in a non-significant reduction compared to control. Free rhodium (II) citrate and rhodium (II) citrate associated with maghemite nanoparticles promoted a non-significant increased in necrosis area compared to control. Furthermore, biochemical and hematological analysis of BALB/c mice without tumor inoculation didn’t show toxic effects of the used compounds. Thus, free rhodium (II) citrate and rhodium (II) citrate loaded maghemite nanoparticles showed antitumor activity on 4T1 mammary carcinoma, indicating that, with adequate adjustment of the dose, this compound can have potential for application in breast cancer.