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Análise quantitativa das células de Langerhans em mucosa bucal de pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico com doença enxerto contra hospedeiro crônica / Quantitative analysis of Langerhans cells in oral mucosa of patients treated with allogeneic bone marrow transplantation with chronic graft versus host disease

Orti-Raduan, Érika Sinara Lenharo 20 June 2007 (has links)
A doença enxerto contra hospedeiro é uma complicação comum nos pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico. Com o objetivo de contribuir para o esclarecimento da participação das células de Langerhans na doença enxerto contra hospedeiro crônica (GVHDc) quando de sua ocorrência na mucosa bucal, foram analisados 40 pacientes oncohematológicos e hematológicos submetidos ao transplante de medula óssea alogênico no Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP. Cortes microscópicos de 3µm de espessura da mucosa jugal com padrão de normalidade (controle - 20 pacientes) e de pacientes transplantados com e sem GVHDc, foram avaliados em hematoxilina e eosina e pela técnica imuno-histoquímica padrão da estreptavidina-biotina-peroxidase utilizando-se o anticorpo monoclonal anti- CD1a. As células de Langerhans imunomarcadas foram quantificadas no epitélio da mucosa jugal, sendo o número médio destas células estatisticamente comparado entre os pacientes controle e os pacientes transplantados com e sem GVHDc. Os resultados demonstraram um maior número de células de Langerhans na mucosa jugal dos pacientes com GVHDc quando comparado aqueles sem GVHDc e ao grupo controle (p=0,001). Foi observado também, a presença de intenso infiltrado inflamatório crônico, justaepitelial, com desorganização das células da camada basal do epitélio, com vacuolização celular, satelitose, corpúsculos acidofílicos e ocorrência de clivagem entre e o epitélio e o tecido conjuntivo nos pacientes que desenvolveram GVHDc. Estes resultados sugerem que a células de Langerhans participa da doença enxerto contra hospedeiro crônica na mucosa jugal dos pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico, sendo provavelmente recrutadas pelo processo inflamatório e imunopatológico que caracteriza esta doença. / The graft versus host disease (GVHD) is a common complication in patients submited to alogeneic bone marrow transplantation. To understand the role of Langerhans cells in chronic GVHD (cGVHD) in oral mucosa, we analyzed 40 oncohematological or hematological patients who received alogeneic bone marrow transplantation at Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP. Slices of 3µm from normal oral mucosa (control - 20 patients) and transplanted patients with and without cGVHD were analyzed by hematoxylin-eosin technique and conventional immunohistochemistry of streptavidin-biotin peroxidase technique for monoclonal antibody anti-CD1a. The immunomarked Langerhans cells were quantified in the epithelium of oral mucosa; the average number of these cells was statistically significant when compared to the control group and patients with and without cGVHD. The results showed higher number of Langerhans cells in oral mucosa of cGVHD when we compared the control group and the group of patients with and without cGVHD (p=0,001). We also observed the presence of chronic juxtaepithelial inflammatory infiltrate, with basal layer epithelium desorganization, vacuolization, satellitosis, acidophilic bodies and presence of gap between epithelium and connective tissue of patients with cGVHD. These results suggest that Langerhans cells may have a role in cGVHD of oral mucosa in patients submited to alogeneic bone marrow transplantation, and they may be recruited by inflammatory and immunopathologic process that are characteristic in this disease.
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Análise quantitativa das células de Langerhans em mucosa bucal de pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico com doença enxerto contra hospedeiro crônica / Quantitative analysis of Langerhans cells in oral mucosa of patients treated with allogeneic bone marrow transplantation with chronic graft versus host disease

Érika Sinara Lenharo Orti-Raduan 20 June 2007 (has links)
A doença enxerto contra hospedeiro é uma complicação comum nos pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico. Com o objetivo de contribuir para o esclarecimento da participação das células de Langerhans na doença enxerto contra hospedeiro crônica (GVHDc) quando de sua ocorrência na mucosa bucal, foram analisados 40 pacientes oncohematológicos e hematológicos submetidos ao transplante de medula óssea alogênico no Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP. Cortes microscópicos de 3µm de espessura da mucosa jugal com padrão de normalidade (controle - 20 pacientes) e de pacientes transplantados com e sem GVHDc, foram avaliados em hematoxilina e eosina e pela técnica imuno-histoquímica padrão da estreptavidina-biotina-peroxidase utilizando-se o anticorpo monoclonal anti- CD1a. As células de Langerhans imunomarcadas foram quantificadas no epitélio da mucosa jugal, sendo o número médio destas células estatisticamente comparado entre os pacientes controle e os pacientes transplantados com e sem GVHDc. Os resultados demonstraram um maior número de células de Langerhans na mucosa jugal dos pacientes com GVHDc quando comparado aqueles sem GVHDc e ao grupo controle (p=0,001). Foi observado também, a presença de intenso infiltrado inflamatório crônico, justaepitelial, com desorganização das células da camada basal do epitélio, com vacuolização celular, satelitose, corpúsculos acidofílicos e ocorrência de clivagem entre e o epitélio e o tecido conjuntivo nos pacientes que desenvolveram GVHDc. Estes resultados sugerem que a células de Langerhans participa da doença enxerto contra hospedeiro crônica na mucosa jugal dos pacientes submetidos ao transplante de medula óssea alogênico, sendo provavelmente recrutadas pelo processo inflamatório e imunopatológico que caracteriza esta doença. / The graft versus host disease (GVHD) is a common complication in patients submited to alogeneic bone marrow transplantation. To understand the role of Langerhans cells in chronic GVHD (cGVHD) in oral mucosa, we analyzed 40 oncohematological or hematological patients who received alogeneic bone marrow transplantation at Hospital Amaral Carvalho, Jaú - SP. Slices of 3µm from normal oral mucosa (control - 20 patients) and transplanted patients with and without cGVHD were analyzed by hematoxylin-eosin technique and conventional immunohistochemistry of streptavidin-biotin peroxidase technique for monoclonal antibody anti-CD1a. The immunomarked Langerhans cells were quantified in the epithelium of oral mucosa; the average number of these cells was statistically significant when compared to the control group and patients with and without cGVHD. The results showed higher number of Langerhans cells in oral mucosa of cGVHD when we compared the control group and the group of patients with and without cGVHD (p=0,001). We also observed the presence of chronic juxtaepithelial inflammatory infiltrate, with basal layer epithelium desorganization, vacuolization, satellitosis, acidophilic bodies and presence of gap between epithelium and connective tissue of patients with cGVHD. These results suggest that Langerhans cells may have a role in cGVHD of oral mucosa in patients submited to alogeneic bone marrow transplantation, and they may be recruited by inflammatory and immunopathologic process that are characteristic in this disease.
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Estudo sobre o processo de incorporação de enxertos ósseos na mandíbula de coelhos

Andrade, Miguel Gustavo Setúbal 05 June 2007 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-04-25T13:49:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T13:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) / CAPES;FAPESB / A enxertia dos maxilares com osso córtico-medular aposicionado condiciona o rebordo para receber implantes de titânio. O osso alógeno congelado tem conquistado espaço por eliminar a necessidade de área doadora. Clinicamente, os enxertos aposicionados sofrem absorção, e o plasma rico em plaquetas (PRP) poderia minimizar esse fenômeno. Nesta tese, foram realizadas três pesquisas. A principal delas estudou a incorporação de enxertos autógenos e alógenos aposicionados à mandíbula de coelho em associação ou não com PRP. As alterações que o congelamento promoveu no osso e o processo de preparação do PRP também foram investigados. Utilizaram-se 54 coelhos. Enxertos córtico-medulares foram removidos do osso ilíaco e aposicionados bilateralmente à cortical externa da mandíbula. Parte dos animais recebeu osso autógeno fresco e outra parte recebeu osso alógeno congelado a -70°C por 120 dias. Em um lado da mandíbula, foi colocado PRP. A eutanásia ocorreu após 3, 7, 14, 28 e 56 dias. A diferença entre os grupos foi ponderada pelo teste de Bonferroni. O osso alógeno foi menos absorvido, mais osteogênico e fibrogênico que o osso autógeno. Sua cortical estava mais espessa e ele induziu maior quimiotaxia de macrófagos e osteoclastos. O PRP, apesar de melhorar, não interferiu significativamente nessas variáveis. Não houve reação de células T e B contra os enxertos. O efeito da criopreservação foi analisado no osso congelado a -20°C e -70°C por 30, 60, 90 e 120 dias e foi comparado ao osso fresco. A diferença foi estimada pelo teste de Tukey. O congelamento aumentou a área das células e dos núcleos na medular e diminuiu a área dos núcleos da cortical. O colágeno da cortical desnaturou com a diminuição da temperatura e o aumento do tempo de congelamento. Essas alterações só comprometeram a morfologia do tecido após 90 ou 120 dias na temperatura de -70°C. O sangue total e o PRP foram comparados pelo teste de correlação de Pearson. A plaquetometria do PRP não dependeu dos eritrócitos e do plasma pobre em plaquetas removidos, mas do hematócrito e da plaquetometria do sangue total. O hematócrito do PRP não interferiu na sua plaquetometria e leucometria, que foi dependente da leucometria inicial. Concluiu-se que o osso alógeno congelado foi bom material para enxertia aposicionada dos maxilares e não induz uma rejeição imunológica. O PRP apresentou apenas uma tendência em melhorar o reparo de enxertos aposicionados, e o congelamento foi eficaz em diminuir a antigenicidade do osso.
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Efeito aditivo do transplante de células-troncos adultas sobre a perfusão cardíaca pós-infarto em porcos tratados com beta-bloqueador e inibidor da enzima conversora de angiotensiva / Additive effect of transplantation of adult stem cells post-infarction on the cardiac perfusion in pigs treated with beta-blocker and angiotensin-converting enzyme inhibitor

Dariolli, Rafael 23 March 2015 (has links)
Os efeitos benéficos associados à injeção intramiocárdica de células-tronco adultas, obtidos em roedores, não tem sido reproduzidos de modo consistente em modelos animais de grande porte e seres humanos. Neste trabalho testamos a hipótese que o transplante de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo de porcos (pASC) aumenta a perfusão tecidual cardíaca em animais infartados e humanizados pelo tratamento com um inibidor da enzima conversora de angiotensina (iECA) e um ?-bloqueador. Os animais foram submetidos a oclusão da artéria coronária circunflexa esquerda (ACX) e 4 semanas após o IM, 4 grupos foram randomizados para receber injeção intramiocárdica de pASC nas doses de 1, 2 ou 4x10^6 pASC/Kg de massa corporal ou placebo. A análise de perfusão miocárdica foi realizada através da ecocardiografia com perfusão miocárdica em tempo real (ECMTR) utilizando contraste de microbolhas comercialmente disponível antes da injeção de pASC e 4 semanas após o tratamento com as células. Avaliações anatomopatológicas foram realizadas para medir a área de IM e o remodelamento de VE. Oito semanas após o IM, os porcos tratados com a maior dose de pASC mostraram um aumento significativo do fluxo sanguíneo do miocárdio, tanto em áreas remotas (3,9 vezes) como na área de borda do infarto (3,7 vezes) vs. os outros grupos estudados. Neste mesmo grupo, um aumento significativo no número de vasos (cerca de 54 e 56%, área remota e de borda respectivamente) foi observado (p> 0,05 vs. outros grupos). Curiosamente, a área de tecido não perfundido foi menor (em até 38%), enquanto que a razão de afinamento da parede (25%) e a percentagem de fibras de colágeno imaturas (verde/finas) foram maiores no grupo 4 que recebeu 4x10^6 pASC/Kg em comparação com os demais. Além disso, a dose mais elevada de pASCs alogênicas testadas não induziu um aumento da resposta inflamatória celular no VE. Deste modo, os resultados mostram que a injeção intramiocárdica de pASCs alogênicas pós-IM promove aumento da perfusão miocárdica e no número de vaso sanguíneos no VE na ausência de resposta inflamatória celular que podem contribuir para atenuar o remodelamento cardíaco adverso de VE 2 meses após o IM na presença de terapêutica farmacológica padrão / The beneficial effects associated with intramyocardial injection of adult stem cells in rodents have not been consistently reproduced in larger animals and humans. We evaluated the dose of porcine adipose-tissue derived mesenchymal stem cells (pASC) to increase cardiac tissue perfusion in pigs treated with ace-inhibitors and ?-blockers to mimic human management post-MI. Animals were subjected to LCx occlusion and 4 weeks after MI blinded randomized in 4 groups to receive intramyocardial injection of pASC (1, 2 and 4x10^6 pASC/Kg bw) or placebo. Real time myocardial perfusion echocardiography (RTMPE) was conducted using commercial microbubbles before injection and 4 weeks after treatment with pASC. Anatomopathological assessments were performed to evaluated MI area, LV remodeling. Eight weeks after MI, the pigs treated with the highest dose of pASC showed a significant increase of myocardial blood flow in both remote (3.9 times) and border zone (3.7 times) versus the other groups, which was also in agreement with the increase in vessel numbers (about 54 and 56%, respectively) compared to the other groups (p > 0.05). Interestingly, the non-perfused area was reduced (up to 38%) and the thinning ratio was higher (25%) in the 4x10 ^ 6 pASC/Kg.bw group compared with placebo or the other cell groups. In addition, the percentage of immature (thin/green) collagen fibers was greater in group 4 than in the placebo animals. The highest dose of allogeneic pASCs did not elicit an increased cellular inflammatory response in LV. Altogether, we provide evidence that intramyocardial injection of allogeneic pASC post-MI did not elicit cellular inflammatory response and also it increased cardiac perfusion and vessel number when in highest dose, which may have contributed to attenuate the LV adverse remodeling 2 months after the MI
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Efeito aditivo do transplante de células-troncos adultas sobre a perfusão cardíaca pós-infarto em porcos tratados com beta-bloqueador e inibidor da enzima conversora de angiotensiva / Additive effect of transplantation of adult stem cells post-infarction on the cardiac perfusion in pigs treated with beta-blocker and angiotensin-converting enzyme inhibitor

Rafael Dariolli 23 March 2015 (has links)
Os efeitos benéficos associados à injeção intramiocárdica de células-tronco adultas, obtidos em roedores, não tem sido reproduzidos de modo consistente em modelos animais de grande porte e seres humanos. Neste trabalho testamos a hipótese que o transplante de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo de porcos (pASC) aumenta a perfusão tecidual cardíaca em animais infartados e humanizados pelo tratamento com um inibidor da enzima conversora de angiotensina (iECA) e um ?-bloqueador. Os animais foram submetidos a oclusão da artéria coronária circunflexa esquerda (ACX) e 4 semanas após o IM, 4 grupos foram randomizados para receber injeção intramiocárdica de pASC nas doses de 1, 2 ou 4x10^6 pASC/Kg de massa corporal ou placebo. A análise de perfusão miocárdica foi realizada através da ecocardiografia com perfusão miocárdica em tempo real (ECMTR) utilizando contraste de microbolhas comercialmente disponível antes da injeção de pASC e 4 semanas após o tratamento com as células. Avaliações anatomopatológicas foram realizadas para medir a área de IM e o remodelamento de VE. Oito semanas após o IM, os porcos tratados com a maior dose de pASC mostraram um aumento significativo do fluxo sanguíneo do miocárdio, tanto em áreas remotas (3,9 vezes) como na área de borda do infarto (3,7 vezes) vs. os outros grupos estudados. Neste mesmo grupo, um aumento significativo no número de vasos (cerca de 54 e 56%, área remota e de borda respectivamente) foi observado (p> 0,05 vs. outros grupos). Curiosamente, a área de tecido não perfundido foi menor (em até 38%), enquanto que a razão de afinamento da parede (25%) e a percentagem de fibras de colágeno imaturas (verde/finas) foram maiores no grupo 4 que recebeu 4x10^6 pASC/Kg em comparação com os demais. Além disso, a dose mais elevada de pASCs alogênicas testadas não induziu um aumento da resposta inflamatória celular no VE. Deste modo, os resultados mostram que a injeção intramiocárdica de pASCs alogênicas pós-IM promove aumento da perfusão miocárdica e no número de vaso sanguíneos no VE na ausência de resposta inflamatória celular que podem contribuir para atenuar o remodelamento cardíaco adverso de VE 2 meses após o IM na presença de terapêutica farmacológica padrão / The beneficial effects associated with intramyocardial injection of adult stem cells in rodents have not been consistently reproduced in larger animals and humans. We evaluated the dose of porcine adipose-tissue derived mesenchymal stem cells (pASC) to increase cardiac tissue perfusion in pigs treated with ace-inhibitors and ?-blockers to mimic human management post-MI. Animals were subjected to LCx occlusion and 4 weeks after MI blinded randomized in 4 groups to receive intramyocardial injection of pASC (1, 2 and 4x10^6 pASC/Kg bw) or placebo. Real time myocardial perfusion echocardiography (RTMPE) was conducted using commercial microbubbles before injection and 4 weeks after treatment with pASC. Anatomopathological assessments were performed to evaluated MI area, LV remodeling. Eight weeks after MI, the pigs treated with the highest dose of pASC showed a significant increase of myocardial blood flow in both remote (3.9 times) and border zone (3.7 times) versus the other groups, which was also in agreement with the increase in vessel numbers (about 54 and 56%, respectively) compared to the other groups (p > 0.05). Interestingly, the non-perfused area was reduced (up to 38%) and the thinning ratio was higher (25%) in the 4x10 ^ 6 pASC/Kg.bw group compared with placebo or the other cell groups. In addition, the percentage of immature (thin/green) collagen fibers was greater in group 4 than in the placebo animals. The highest dose of allogeneic pASCs did not elicit an increased cellular inflammatory response in LV. Altogether, we provide evidence that intramyocardial injection of allogeneic pASC post-MI did not elicit cellular inflammatory response and also it increased cardiac perfusion and vessel number when in highest dose, which may have contributed to attenuate the LV adverse remodeling 2 months after the MI
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Pesquisa de bocavírus humano em pacientes submetidos a transplante alogênico de células progenitoras hematopoiéticas / Human bocavirus in recipients of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Costa, Brunno Câmara Lopes 17 August 2018 (has links)
Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-09-25T12:22:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Brunno Câmara Lopes Costa - 2018.pdf: 3761382 bytes, checksum: 9df697870cea1a53a75ea6dad69c9e91 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-09-26T11:34:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Brunno Câmara Lopes Costa - 2018.pdf: 3761382 bytes, checksum: 9df697870cea1a53a75ea6dad69c9e91 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-26T11:34:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Brunno Câmara Lopes Costa - 2018.pdf: 3761382 bytes, checksum: 9df697870cea1a53a75ea6dad69c9e91 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Human Bocavirus (HBoVs) are classified in the Parvoviridae family and are associated with respiratory and gastrointestinal symptoms. Viral infections are an important cause of morbimortality in immunocompromised patients such as allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) recipients. The aim of the present study was to evaluate the positivity rate and loads of HBoVs in clinical samples (feces and sera) of patients who were subjected to allo-HSCT at a reference center for bone marrow transplantation in Goiânia, Goiás. A total of 105 fecal samples and 145 sera samples were collected from 21 consecutive patients, during October 2012 to October 2014. Samples were screened by qPCR TaqMan assay, with specific probe and primers targeting all HBoVs genotypes (HBoV-1 to -4), and viral loads were determined using serial dilutions of a recombinant plasmid, targeting the NP1 gene. The results showed that 53.4% (11/21) of the patients were male, aged between four and 61 years-old (mean 35 years). The most observed hematologic malignancy was myeloid leukemia (acute or chronic), accounting for 57.1% (12/21) of the cases. The HBoVs were detected in 42.9% (9/21) of the patients and 77.7% (7/9) were positive in both fecal and serum samples. The viral load in fecal samples were higher than in the sera samples and a prolonged fecal shedding were observed, with two patterns: one intermittent and another continuous. Of all HBoV positive patients, six (66.6%) had the first positive sample before the transplantation, and a rise of the viral loads after the allo-HSCT occurred when comparing to the loads before the allo-HSCT. Furthermore, on most cases the highest viral loads were detected during the first 100 days after the allo-HSCT. Considering the symptoms presented by the patients, 66.6% (6/9) had diarrhea at the same period of the viral genome detection in feces, but no statistical significance was observed. Three fecal samples were characterized as being HBoV-1, with more than 99% of nucleotide identity among them. The present data shows a high occurrence and loads of HBoVs in allo-HSCT recipients, with first positivity in fecal samples and later viral detection in sera. These results suggest that fecal samples could be the sample of choice in HBoV monitoring of these patients both before and after the transplant. / Os Bocavírus humanos (HBoVs) pertencem à família Parvoviridae e têm sido associados a sintomas respiratórios e gastroentéricos. As infecções virais são uma importante causa de morbimortalidade em pacientes imunocomprometidos, como os pacientes submetidos a transplante alogênico de células progenitoras hematopoiéticas (TACPH). Dados sobre a ocorrência de HBoV nesses pacientes ainda são escassos. Os objetivos deste estudo foram avaliar a frequência e a carga de HBoVs em amostras clínicas (fezes e soro) de pacientes submetidos a TACPH e avaliar as características gerais e sintomas apresentados, e caracterizar as amostras positivas. Foram incluídos no estudo 21 pacientes consecutivos, dos quais foram coletadas 105 amostras fecais e 145 amostras de soro, em um centro de transplante de medula óssea em Goiânia, Goiás, durante o período de outubro de 2012 a outubro de 2014. As amostras foram testadas por qPCR TaqMan®, com sonda e iniciadores específicos para todos os genótipos de HBoVs (HBoV-1 a -4), e a carga viral nas amostras foi determinada pela construção de uma curva padrão de diluições seriadas de um plasmídeo recombinante, contendo como inserto a região NP1. Os resultados mostraram que 53,4% (11/21) dos pacientes eram do sexo masculino, com idade entre quatro e 61 anos de idade (mediana 35 anos). A neoplasia hematológica mais observada foi a leucemia mieloide (aguda e crônica), totalizando 57,1% (12/21) dos casos. Os HBoVs foram detectados em 42,9% (9/21) dos pacientes, sendo que em 77,7% (7/9) desses houve positividade em ambas amostras de soro e fezes. A carga de HBoV nas amostras fecais foi significativamente maior do que nas amostras séricas, sendo observado dois padrões principais de excreção nas fezes, um intermitente e outro contínuo. Dos nove pacientes, seis (66,6%) tiveram a primeira amostra positiva antes de serem submetidos ao transplante, sendo observado aumento nas cargas de HBoV pós-TACPH em comparação às cargas pré-TACPH e, na maioria dos casos, os picos da carga viral foram detectados durante os 100 primeiros dias após o TACPH. Considerando os sintomas apresentados pelos pacientes, 66,6% (6/9) desses apresentavam diarreia no mesmo período da detecção de HBoV nas amostras fecais, porém não houve significância estatística entre a positividade e os sintomas gastroentéricos. Três amostras fecais foram caracterizadas como sendo o genótipo HBoV-1, com mais de 99% de identidade nucleotídica entre elas. Os dados apresentados mostram uma alta ocorrência e elevada carga de HBoVs nos pacientes submetidos ao TACPH, além de detecção inicial nas fezes com posterior positividade no soro. Esses resultados sugerem que as fezes poderiam ser a amostra clínica de escolha para o monitoramento desses pacientes, tanto antes quanto após o transplante.
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Monitoramento e caracterização molecular de adenovírus humanos em amostras provenientes de pacientes submetidos ao transplante de células progenitoras hematopoiéticas / Monitoring and molecular characterization of human adenovirus in samples from patients undergone allogeneic stem cell transplantation

Santos, Hugo César Pereira 19 March 2015 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T11:10:52Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo César Pereira Santos - 2015.pdf: 3535564 bytes, checksum: 4fc7d88b1da6008bc42c01f46e4f8d7a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T11:20:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo César Pereira Santos - 2015.pdf: 3535564 bytes, checksum: 4fc7d88b1da6008bc42c01f46e4f8d7a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T11:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hugo César Pereira Santos - 2015.pdf: 3535564 bytes, checksum: 4fc7d88b1da6008bc42c01f46e4f8d7a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The human adenoviruses (HAdV) infect people of all ages worldwide, causing a wide range of clinical syndromes, depending on the viral type. In immunocompromised hosts, as transplanted patients, HAdV infection can result in a bad prognosis. Some aspects of viral pathogenesis, such as the association between viremia and/or viral load with disseminated disease and the optimal moment to start the therapy, are still not well established in adult patients that have undergone allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (ASCT). Therefore, the main objective of this study was to monitor ASCT recipients for HAdV occurrence, and also correlate viral positivity, viral load and molecular variant with clinical symptoms and patients’ prognosis. For this, stool and serum from 21 patients were monitored in a 2 years period (from October/2012 to October/2014). Serum and fecal samples were screened by Nested-PCR, using primers targeting a partial region of the hexon gene (143bp). Fecal samples were further screened by a commercial enzyme immunoassay (EIA). In total, 57% of the patients had at least one positive sample (serum or stool) for HAdV. Patients presented high viral load (varying from 7,7x103 to 2x108 copies/mL), with a higher viral load in stool when compared to serum. Positive samples were submitted to genomic sequencing, revealing the occurrence of HAdV from C, D and F species. The main clinical symptom presented by infected patients was diarrhea, and graft-versus-host disease was the main intercurrence; however it was not possible to directly associate viral positivity to cause of death. We hope to contribute for a better understanding of the HAdV infection pattern in patients submitted to ASCT. Our data highlights the importance of the inclusion of HAdV testing in the routine laboratory exams of this group of patients. / Os adenovírus humanos (HAdV) podem infectar pessoas de todas as idades, causando uma ampla gama de quadros clínicos. Em pacientes imunocomprometidos, como os indivíduos que receberam transplante, a infecção por esses vírus pode resultar em pior prognóstico para o paciente. Determinados aspectos da patogenia viral, como a associação entre viremia e/ou carga viral com a doença disseminada, bem como o melhor momento para o início da terapia, não estão ainda bem esclarecidos em pacientes que foram submetidos ao transplante de células progenitoras hematopoiéticas (TACPH), principalmente em indivíduos adultos. Dessa forma, o principal objetivo deste estudo foi realizar o monitoramento da infecção por HAdV e a caracterização molecular das variantes virais em pacientes submetidos ao TACPH, bem como determinar a carga viral e correlacionar a infecção com o quadro clínico e prognóstico dos pacientes. Foram analisadas amostras de soro e fezes de 21 pacientes submetidos ao TACPH no período de dois anos (de outubro/2012 a outubro/2014). As amostras de fezes foram triadas por ensaio imunoenzimático e por Nested-PCR, enquanto as amostras de soro foram triadas somente por Nested-PCR de uma região parcial do gene hexon (produto esperado de 143 pb). Foram detectadas amostras positivas de soro e/ou fezes de 57% dos pacientes. De forma geral, os pacientes do presente estudo apresentaram elevadas cargas virais (variando de 7,7x103 à 2x108 CG/mL), que foram mais elevadas nas fezes. As amostras positivas foram submetidas ao sequenciamento genômico e resultados revelaram a ocorrência de adenovírus das espécies C, D e F. O principal quadro clínico apresentado pelos pacientes foi a diarreia e a principal intercorrência observada, a doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Dez pacientes foram a óbito durante o período de estudo, entretanto, não foi possível associar a infecção por HAdV diretamente à causa mortis. Esperamos que os dados obtidos possam auxiliar no melhor entendimento do padrão da infecção dos HAdVs em pacientes submetidos ao TACPH, de forma a contribuir para que a pesquisa de adenovírus seja incluída na rotina de exames desses pacientes.
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Níveis séricos de biomarcadores de inflamação, ativação endotelial e plaquetária e imunomodulação em pacientes com doença falciforme submetidos a diferentes modalidades terapêuticas / Serum levels of biomarkers of inflammation, endothelial and platelet activation and immunomodulation in patients with sickle cell disease submitted to different therapeutic modalities

Lima, Keli Cristina de 11 October 2018 (has links)
A doença falciforme constitui um grupo de hemoglobinopatias hereditárias caracterizadas por uma mutação de ponto na cadeia da globina ?, que resulta em uma hemoglobina anormal denominada HbS. Apesar de sua importância para a saúde pública mundial e seu grande impacto social, a doença falciforme ainda apresenta muitas questões fisiopatológicas não esclarecidas e desafios terapêuticos. Paralelamente, existe a necessidade da descoberta de novos biomarcadores fisiopatológicos da doença falciforme e de biomarcadores de resposta terapêutica. O objetivo desse trabalho foi quantificar, em amostras de soro de indivíduos sadios (N=19) e de pacientes com doença falciforme sem tratamento (N=14) ou tratados com hidroxiuréia (N=15), transfusão crônica (N=15) ou transplante alogênico de células-tronco hematopoéticas (N=21), biomarcadores de ativação endotelial (VCAM-1, ICAM-1, E-selectina, P-selectina, HGF, FGF, VEGF-A, endothelina-1, CXCL4/PF4, TGF-? e óxido nítrico), biomarcadores de ativação plaquetária (von Willebrand e trombomodulina), biomarcadores de inflamação (IL-1?, pentraxina-3, IL-18, IL-6, IL-8, IL-2, IL-17A, TNF-?, INF-?, CCL2/MCP-1, CCL4/MIP-1?, IL-12p70, IL-33, IL-27, GM-CSF, CD163, osteopontina, BAFF, APRIL e heme) e biomarcadores relacionados à imunomodulação (arginase-1 e IL-10). De acordo com os resultados obtidos e as análises de correlação, os pacientes com doença falciforme sem tratamento, tratados com transfusão crônica ou transplante apresentaram perfis mais inflamatórios que os pacientes tratados com hidroxiuréia. Os tratamentos com transfusão crônica e transplante não foram capazes de diminuir os níveis séricos dos biomarcadores de inflamação, de ativação endotelial e plaquetária para níveis similares aos dos indivíduos sadios. Os pacientes tratados com transfusão crônica apresentaram o perfil mais inflamatório de todos os grupos analisados. Apesar dos pacientes tratados com hidroxiuréia apresentarem os menores níveis séricos de biomarcadores de inflamação e de ativação endotelial e plaquetária, estes continuaram apresentando níveis séricos elevados de heme e da citocina pró-inflamatória IL-18. Os pacientes transplantados apresentaram perfil inflamatório intenso, com níveis elevados de P-selectina, trombomodulina e IL-8 (relacionados à ativação endotelial, ativação plaquetária e inflamação, respectivamente) em comparação com todos os grupos analisados. Porém, os pacientes transplantados apresentaram níveis séricos de IL-18 significativamente menores que os pacientes com doença falciforme sem tratamento. Os pacientes transplantados apresentaram níveis séricos da citocina anti-inflamatória IL-10 similares aos de indivíduos sadios, porém, significativamente maiores que os pacientes tratados com hidroxiuréia. Os resultados obtidos nesse trabalho podem direcionar estudos futuros para o monitoramento laboratorial de respostas terapêuticas aos diferentes tratamentos atualmente utilizados para doença falciforme e para o desenvolvimento de novos tratamentos ou de terapias complementares às que estão atualmente disponíveis. / Sickle cell disease is a group of hereditary hemoglobinopathies characterized by a point mutation in the ? globin chain, which results in an abnormal hemoglobin named HbS. Despite its importance for global public health and its great social impact, sickle cell disease still presents many unclarified pathophysiological issues and therapeutic challenges. In parallel, there is a need for the discovery of new pathophysiological biomarkers of sickle diseases and biomarkers of therapeutic response. The aim of this study was to quantify serum samples from healthy subjects (N = 19) and patients with sickle cell disease (N = 14) or treated with hydroxyurea (N = 15), chronic transfusion (N = 15) or allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (N = 21) endothelial activation biomarkers (VCAM-1, ICAM-1, E-selectin, P-selectin, HGF, FGF, VEGF-A, endothelin-1, CXCL4 / PF4, TGF-? and nitric oxide), platelet activation biomarkers (von Willebrand and thrombomodulin), inflammatory biomarkers (IL-1?, pentraxin-3, IL-18, IL-6, IL-8, IL-2, IL-17A, TNF-?, INF-?, CCL2/MCP-1, CCL4/MIP-1?, IL-12p70, IL-33, IL-27, GM-CSF, CD163, osteopontin, BAFF, APRIL and heme) and immunomodulatory biomarkers (arginase-1 and IL-10). According to the obtained results and correlation analyzes, patients with sickle disease without treatment, treated with chronic transfusion or transplantation presented more high inflammatory profiles than patients treated with hydroxyurea. Patients treated with chronic transfusion and transplantation were not able to decrease the elevated serum biomarkers of inflammation and endothelial and platelet activation similar to healthy subjects levels. Patients treated with chronic transfusion presented the most inflammatory profile of all groups analyzed. Although patients treated with hydroxyurea had the lowest serum levels of inflammatory and endothelial/platelet activation biomarkers, they continued to have high serum levels of heme and proinflammatory cytokine IL-18. Transplanted patients presented a high inflammatory profile, with elevated levels of P-selectin, thrombomodulin and IL-8 (related to endothelial activation, platelet activation and inflammation, respectively) compared to all groups analyzed. However, transplant patients had significantly lower serum IL-18 levels than patients with untreated sickle cell disease. Notably, transplanted patients had levels of the anti-inflammatory cytokine IL-10 similar to those of healthy subjects, but significantly higher than patients treated with hydroxyurea. The results obtained in this study may pave the way for future studies for the laboratory monitoring of therapeutic responses to different sickle cell disease treatments and for the development of new or complementary treatments to the currently available therapies.
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Estudo prospectivo de infecção por calicivírus (norovírus e sapovírus) em pacientes submetidos a transplante alogênico de células progenitoras hematopoiéticas / Prospective study of calicivirus infection (norovirus and sapovirus) in patients undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Lemes, Lucianna Gonçalves Nepomuceno 20 December 2013 (has links)
Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-09-25T17:34:38Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Lucianna G. N. Lemes.pdf: 2661301 bytes, checksum: c0238e41dfbe2adbd10e5ddcff7a139e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-26T11:31:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_Lucianna G. N. Lemes.pdf: 2661301 bytes, checksum: c0238e41dfbe2adbd10e5ddcff7a139e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-26T11:31:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Lucianna G. N. Lemes.pdf: 2661301 bytes, checksum: c0238e41dfbe2adbd10e5ddcff7a139e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-12-20 / The calicivirus (norovirus and sapovirus) are important etiologic agents of acute gastroenteritis. Recent studies show that in immunocompromised patients such as those undergoing allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), norovirus infection can lead to worsening of symptoms and be confused with clinical symptoms of graft versus host disease (GVHD). However, calicivirus screening is not performed, routinely, as part of the patients’ follow-up laboratory exams. The main objective of this study was to evaluate the occurrence of norovirus (NoV) and sapovirus (SaV) in patients who underwent HSCT, and to conduct the molecular characterization of the samples positive for these viruses. Fecal samples were collected weekly, and serum samples were obtained every two weeks of ten patients who underwent HSCT, for a minimum period of five months and a maximum of one year. The secretor status was determined by an enzyme immunoassay and the detection of calicivirus was performed by RT-PCR using primers specific for a partial region of the gene encoding the NoV genogroup I and II (GI and GII) and SaV capsid protein. The genomic sequencing was performed for positive samples. The results showed that from ten patients participating in the study, eight had diarrhea. Among these, six (60%) had positive samples for NoV, and all of them had a secretor phenotype. The duration of NoV excretion in feces ranged from five to 143 days. Viral RNA was also detected in serum specimens, ranging from 29 to 36 days in the five patients infected with NoV. Three of the six patients had acute intestinal GVHD. Through genomic sequencing and phylogenetic analysis all NoV-positive samples were characterized as genotype GI.3, and because they had a high nucleotide identity, they were all characterized as a single haplotype. The data highlight the urgent need of the inclusion of calicivirus screening in the routine testing performed before transplantation and during follow-up of these patients. This is the first report of the occurrence of NoV in patients undergoing HSCT in Brazil. / Os calicivírus (norovírus e sapovírus) são importantes agentes etiológicos da gastroenterite aguda. Estudos recentes mostram que em pacientes imunocomprometidos, como os submetidos a transplante alogênico de células progenitoras hematopoiéticas (TACPH), a infecção por norovírus pode levar ao agravamento dos sintomas e ser confundida com quadro clínico da doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Entretanto, a triagem para calicivírus não é realizada, rotineiramente, como parte dos exames laboratoriais de acompanhamento destes pacientes. O principal objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de norovírus (NoV) e sapovírus (SaV) em pacientes que foram submetidos ao TACPH e proceder à caracterização molecular das amostras positivas para estes vírus. Foram obtidas amostras de fezes, coletadas semanalmente, e de soro, a cada quinze dias, de dez pacientes que realizaram o TACPH, por um período mínimo de cinco meses e máximo de um ano. O fenótipo secretor dos pacientes foi determinado utilizando um teste imunoenzimático e a pesquisa de calicivírus foi realizada pela RT-PCR, utilizando-se iniciadores específicos para uma região parcial do gene codificante para a proteína dos capsídeos dos NoV do genogrupo I e II (GI e GII) e dos SaV. Os amplicons das amostras positivas foram submetidos ao sequenciamento genômico e análise filogenética. Os resultados obtidos revelaram que de dez pacientes participantes do estudo, oito apresentaram diarreia e vômito. Dentre esses, seis (60%) apresentaram amostras positivas para NoV, sendo que todos foram identificados como secretores. O período de excreção de NoV nas fezes variou de cinco a 143 dias. Foi também detectado RNA viral nas amostras de soro, variando de 29 a 36 dias, em cinco pacientes infectados por NoV. Três, dos seis pacientes, apresentaram DECH aguda intestinal. Através do sequenciamento genômico e análise filogenética, todas as amostras positivas para NoV, de todos os pacientes, foram caracterizadas como genótipo GI.3 dos NoV, e como foi comprovada elevada identidade nucleotídica entre elas, foram caracterizadas como um único haplótipo. Os dados obtidos ressaltam a urgente necessidade da inclusão da pesquisa de calicivírus na rotina de exames realizados antes do transplante, bem como durante o acompanhamento destes pacientes. Este é o primeiro relato da ocorrência de NoV em pacientes submetidos ao TACPH no Brasil.
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Predição de doença do enxerto contra hospedeiro aguda baseada no perfil de expressão gênica. Estudo prospectivo / Acute graft versus host disease prediction based on gene expression profiling

Arantes, Adriano de Moraes [UNIFESP] January 2009 (has links) (PDF)
Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-07-08T18:20:15Z No. of bitstreams: 1 cp124617.pdf: 1851616 bytes, checksum: 98299c340bd6b09b83e3fdf34f6adcf5 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-07-08T18:20:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cp124617.pdf: 1851616 bytes, checksum: 98299c340bd6b09b83e3fdf34f6adcf5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-08T18:20:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cp124617.pdf: 1851616 bytes, checksum: 98299c340bd6b09b83e3fdf34f6adcf5 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Introdução: Transplante alogênico de células tronco hematopoéticas (TCTH) é uma importante terapia para doenças hematológicas, mas o sucesso de uma porção de transplantes é limitado pela doença do enxerto versus hospedeiro(GVHD). Os fatores de risco conhecidos para GVHD agudo (aGVHD) não fornecem uma estimativa precisa do risco individual e não auxiliam na individualização da terapia. Até o momento, não existe método diagnóstico que permita predizer aGVHD. A identificação de pacientes que desenvolverão aGVHD poderia permitir a individualização da terapia para uns e evitaria imunossupressão intensa para outros. Objetivos: Revelar um classificador molecular preditivo de aGVHD. Descobrir genes diferencialmente expressos e analisar eventos precoces que desencadeiam aGVHD. Explorar categorias funcionais e tipos celulares relacionados ao desenvolvimento de aGVHD. Casuística e métodos: Foram isolados, amplificados, marcados e co-hidridados com lâminas de microarray contendo 22.000 sondas, amostras de RNA mensageiro de 89 pacientes submetidos a TCTH HLA-idêntico mieloablativo ou de toxicidade reduzida, obtido de células mononucleares periféricas durante a enxertia medular. Os pacientes foram divididos em grupo treino e grupo teste, um modo utilizado para construir um modelo que discrimine pacientes com e sem aGVHD, e para testar o modelo em amostras independentes. Os genes informativos foram selecionados utilizando recursive feature elimination, seguido de sete diferentes algoritmos de classificação multivariados para estabelecer o classificador molecular no grupo treino. Os genes diferencialmente expressos entre amostras de pacientes com e sem GVHD foram submetidos a análise de enriquecimento das vias funcionais e agrupados de acordo com o perfil de expressão com células e tecidos através do SymAtlas. Resultados: Encontramos um classificador molecular composto de 233 genes nas amostras do grupo treino, que foram selecionados baseados na mais precisa classificação. No grupo teste da amostra, cerca de 80% dos pacientes puderam ser classificados. Para estes pacientes, o classificador mostrou uma acurácia preditiva de 75% (sensibilidade de 71% e especificidade de 78%). Analisando a anotação funcional dos genes diferencialmente expressos, observamos que em pacientes que desenvolveram aGVHD, houve aumento de expressao de genes da resposta antimicrobiana, transporte de gases, metabolismo de hemoglobina, além das alarminas. Nestas amostras também observamos a diminuição da expressão da IL1 e outros genes envolvidos na via do NF-kB. Vários genes super-expressos no periodo precoce do aGVHD foram associados a células precursoras. Conclusões: Nossos resultados mostram que um classificador molecular é capaz de identificar pacientes sob alto risco de desenvolver aGVHD. Estabelecer métodos de diagnóstico preditivo para aGVHD é o primeiro passo para a individualização da estratégia terapêutica após TCTH. Além disso, os resultados da análise de enriquecimento funcional e a expressão de genes em diferentes populações celulares, sugerem que eventos precoces envolvendo múltiplas populações de células precursoras possam predefinir a interação futura entre o enxerto em desenvolvimento e o paciente. / Background: Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation is an important last resort therapy for hematological diseases. Unfortunately, the success of a large proportion of these transplants is limited by graft-versus-host disease (GVHD). Currently known risk factors for acute GVHD (histoincompatibility, sex mismatch, older patients, previous pregnancies) do not provide a precise estimate of individual patient risk and do not help for individualization of the therapy. Early identification of those patients who will develop aGVHD may allow for individualized treatment, and also for the reduction of unnecessary treatment for those patients not at risk. Nowadays, however, there is no diagnostic method that allows prediction of aGVHD. Objectives: The goal of our study was to reveal a gene expression profile that would predict the occurrence of aGVHD. In addition, using enrichment of gene ontology categories, to analyze differentially expressed genes in order to better understand biology of the events preceding aGVHD. Material and methods: we collected blood samples from 89 recipients of myeloablative and reduced conditioning regimen HLA-identical sibling allogeneic hematopoietic stem cell transplants at the time of successful engraftment. We isolated total RNA from the peripheral blood mononuclear cells, amplified it, labeled, and co-hybridized to the microarray slides containing probes for 22,000 genes..The patients were divided into training and test groups, the former used to build a model discriminating patients with and without aGVHD and the latter - to test the model on independent samples. We selected the informative genes using “recursive feature elimination” method followed by seven different multivariate classification algorithms in order to establish a molecular classifier in the training set. Then we validated this new classifier in the test set of patients.. We found differentially expressed genes using T-test and accepted those with estimated false discovery rate below 10%. We have used Biobase Explain to find enrichment of functional groups among differentially expressed genes.Results: We found a molecular classifier comprised by 233 gene probes in the training set of samples which were selected based on the most accurate classification. In the test group of samples, we found that 80% of patients could be classified based on the concordance between classification methods as described above. For these patients, the classifier showed 75% of a predictive accuracy (71% of sensitivity and 78% of specificity). Analysis of functional annotations of differentially expressed genes showed that patients that developed acute GVHD have increased expression of antimicrobial genes, hemaglobin metabolism genes and alarmins. In these samples we also observed decreased expression of IL-1 and other genes involved in NF-kB activation. Several genes up-regulated before aGVHD were associated with multiple types of precursor cells. Conclusion: Our results show that molecular profiling is able to identify patients under high risk of acute GVHD at the time of engraftment. Establishing of a predictive diagnostic method for aGVHD is the first step of individualization of therapeutic strategy after hematopoetic stem cell transplantation. In addition, the results of functional enrichment analysis and expression in different cell populations suggest that early events during engrafment involving precursor cell populations might predefine results of interaction between stem cell allograft and patient body.

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