Resumo: O 13-cis-ácido retinóico (isotretinoína) é eficaz no tratamento da acne. Sua utilização de forma terapêutica pode apresentar manisfestações metabólicas e nos diferentes órgãos e sistemas, como pele, ossos, fígado e alterações no metabolismo dos lípides. Na pele e mucosas podem ocorrer ressecamento e descamação. No osso ocorre aumento de atividade osteoclástica, com provável afinamento ósseo e hipercalcemia e no fígado ocorre acúmulo de vitamina A nas células estreladas, com hiperplasia e hipertrofia dessas células e fibrose perisinusoidal. Podem ocorrer aumento do colesterol total (CT), triglicériedes (TG) e diminuição da lipoproteína de alta densidade (HDL). A influência da vitamina A sobre o coração é bastante relevante, ocorrendo durante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: 13-cis-retinoic acid (isotretinoin) is effective in acne treatments. its therapeutic use may present manifestations in metabolism as well as in different organs and systems, such as the skin, bones and liver. It may also show alterations in lipid metabolism. Overdrying and scaling may occur in the skin and mucosas. Increased osteoclastic activity occurs in bones, and bone thinning and hypercalcemia are likely. Vitamin-A accumulation occurs in liver star cells, leading... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Sergio Alberto Rupp Paiva / Coorientador: Beatriz Bojikian Matsubara / Banca: Júlio Sérgio Marchini / Banca: Carlos Alberto Nogueira de Almeida / Banca: Hélio Miot / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-12-03T14:47:15Z No. of bitstreams: 1 2012_AndreLuizFerreiradosSantos.pdf: 4911079 bytes, checksum: 3de355020ca0b30af6880d0533548130 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-12-04T11:21:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AndreLuizFerreiradosSantos.pdf: 4911079 bytes, checksum: 3de355020ca0b30af6880d0533548130 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-04T11:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AndreLuizFerreiradosSantos.pdf: 4911079 bytes, checksum: 3de355020ca0b30af6880d0533548130 (MD5) / Microesferas de quitosana foram produzidas, e as vitaminas ácido retinóico (A) e ?-tocoferol (E) foram ancoradas na superfície do biopolímero. As quantidades imobilizadas foram 19,3 ± 0,5 e 13,4 ± 0,4 mg de ácido retinóico e de ?-tocoferol por grama de microesferas, respectivamente. As interações foram acompanhadas por calorimetria, cujas entalpias entre as vitaminas e as microesferas foram exotérmicas: -18,59 ± 0,34 e -15,17 ± 0,50 kJ mol-1, para o ácido retinóico e para o ?-tocoferol, respectivamente. A determinação das energias de Gibbs mostrou que os ancoramentos em ambos os casos foram espontâneos, além de entropicamente favoráveis. As microesferas modificadas com tocoferol foram aplicadas em um sistema de liberação controlada em um complexo gastrointestinal mimetizado. Quantidades baixas de tocoferol foram liberadas em pH 1,2, enquanto a liberação cresceu com o aumento de pH, alcançando a estabilidade em pH 7,4. Microesferas modificadas com ?-tocoferol e retinil palmitato foram usadas para fortificar três dos principais cremes hidratantes do mercado brasileiro. As microesferas de quitosana modificadas com ?-tocoferol e com retinil palmitato liberaram essas vitaminas mais lentamente do que os cremes fortificados com ?-tocoferol e retinil palmitato puros. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chitosan microspheres were developed and retinoic (A) acid and a-tocopherol (E) vitamins were anchored onto chitosan microspheres. The immobilized amounts of retinoic acid and a-tocopherol, respectively, were 19.3 ± 0.5 and 13.4 ± 0.4 mg per gram of chitosan microspheres. The interactions in solid/liquid interface were calorimetrically followed and gave exothermic values: -18.59 ± 0.34 and -15.17 ± 0.50 kJ mol"1, for retinoic acid and tocopherol, respectively. Both Gibbs energy values were negative. Adsorption processes were accompanied by an increase in the system's entropy. The microspheres modified with a-tocopherol were applied in a-tocopherol controlled release in a simulated gastrointestinal system. Low amounts of tocopherol were released at pH 1.2, whereas the release increased with heightening pH value, reaching the controlled release stability in pH 7.4. Microspheres modified with a-tocopherol and retinyl palmitate were spiked in 3 distinct commercial moisturizing creams. Chitosan microspheres modified with a-tocopherol and retinyl palmitate released those vitamins slower than each cream spiked with pure a-tocopherol and retinyl palmitate.

Espécies reativas de oxigênio (ROS) têm sido descritas como potenciais causadoras de doenças como aterosclerose, artrite e câncer. Falhas na regulação das metaloproteinases de matriz (MMP), uma família de proteases que degradam matriz extracelular, parecem estar intimamente relacionadas com essas mesmas doenças. Além disso, autores sugerem uma relação entre a atividade das MMPs e ROS. Em trabalhos anteriores, nosso grupo de pesquisa demonstrou que o tratamento com retinol 7 μM foi capaz de induzir mudanças no metabolismo de células de Sertoli cultivadas, como o aumento da atividade de enzimas antioxidantes, aumento do dano oxidativo a biomoléculas, ativação de ERK1/2 MAPK, alteração do ciclo celular e transformação pré-neoplásica, ligando o tratamento com retinol ao estresse oxidativo. No presente trabalho, nós utilizamos a técnica de zimografia para verificar a atividade da MMP-2 em células de Sertoli tratadas com retinol e ácido retinóico. Nós encontramos que tanto o tratamento por 24 horas com retinol 7 μM, quanto o tratamento por 24 horas com ácido retinóico 1 nM, aumentaram a atividade da MMP-2 em células de Sertoli cultivadas. O cotratamento com diferentes antioxidantes reverteu o aumento da atividade da MMP-2 induzido por retinol, mas não por ácido retinóico. Além disso, o tratamento com retinol, mas não com ácido retinóico, foi capaz de aumentar a produção de ROS quantificada pela oxidação de DCFH-DA. Nós encontramos também que tanto o tratamento com retinol quanto com ácido retinóico foram capazes de aumentar a fosforilação de ERK1/2. Entretanto, somente o aumento da atividade da MMP-2 induzido por tratamento com retinol foi inibido por co-tratamento com UO126, um potente inibidor de fosforização de ERK1/2. Nossos resultados sugerem que o aumento da atividade da MMP-2 induzido por retinol, mas não por ácido retinóico, está relacionado com a fosforilação de ERK1/2 e com a geração de ERO. / Reactive oxygen species (ROS) have been hypothesized to play a causative role in numerous diseases such as atherosclerosis, arthritis and cancer. Failures in the regulation of the matrix metalloproteinases (MMP), a family of extracellular matrixdegrading proteases, appear to be intimately involved in these diseases. In addition, authors suggest a relationship between MPP activity and ROS. In early reports our research group has demonstrated that 7 μM retinol was able to induce changes in Sertoli cell metabolism, such as up-regulation of antioxidant enzyme activities, increase in oxidative damage to biomolecules, activation of ERK1/2 MAPK, cell-cycle alteration and pre-neoplasic transformation, linking retinol treatment and oxidative stress. Here, we verify the MMP activity in cultured Sertoli cells treated with vitamin A using gelatin zymography. We found that both retinol (7 μM by 24 hours) and retinoic acid (1 nM by 24 hours) treatments induces MMP-2 activity in cultured Sertoli cells. Antioxidants cotreatment reversed retinol-induced but not retinoic acid-induced MMP-2 activity. Moreover, retinol but not retinoic acid treatment increased ROS production quantified by DCFH-DA oxidation. We found that both retinol and retinoic acid treatment induced ERK1/2 phosphorylation. However, only retinol-increased MMP-2 activity was inhibited by UO126, a potent ERK1/2 phosphorylation inhibitor. Our results suggested that the increase on MMP- 2 activity induced by retinol, but not by retinoic acid, was related to ERK1/2 phosphorylation and ROS production.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bianca_franca_ioc_dout_2015.pdf: 11028145 bytes, checksum: e8f2a4ece5e213dd7f7e288656fd0f9d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A produção aumentada de eosinófilos pela medula óssea sustenta a inflamação crônica na asma, compensando a apoptose de eosinófilos maduros nos sítios inflamados. Outros trabalhos mostraram que a eosinopoiese poderia ser suprimida pela prostaglandina E2 (PgE2) por uma via iNOS-CD95L dependente. Sendo a PgE2 um ativador da produção de AMPc intracelular, testamos uma série de agentes capazes de mimetizar este aumento de AMPc. Foram realizadas culturas de medula óssea em meio líquido ou semi-sólido para a análise da eosinopoiese e neutropoiese a partir de camundongos mutantes e seus respectivos controles de tipo selvagem (WT), dos backgrounds BALB/c, C57BL/6. Todos os agentes testados, incluindo isoproterenol, mimetizaram os efeitos de PgE2, suprimindo a eosinopoiese pela mesma via utilizada para supressão pela PgE2. Outros agentes como a IL-17A, uma citocina pró-inflamatória, e a a- galactosilceramida (\03B1-GalCer), um glicolipídeo que ativa células iNKT de forma restrita por CD1d, também suprimiram a eosinopoiese pela via de iNOS-CD95L, mas cada agente utilizou um ponto de atuação e um mecanismo de ação próprio. Por outro lado, o ácido retinóico all-trans (ATRA) também suprimiu a eosinopoiese de forma dependente de CD95L, mas um papel para a iNOS só foi evidenciado, até o momento, para a supressão de formação de colônias pelo ATRA na presença de GM-CSF. Também evidenciamos uma interrelação entre a via da cicloxigenase (COX), a via da 5-lipoxigenase (5-LO) e a ação dos glicocorticóides (GC) na regulação da eosinopoiese Dados anteriores do laboratório mostram que: a) na ausência de 5-LO, a medula óssea estimulada por IL-5 não responde aos inibidores da COX, que potencializam a eosinopoiese em controles WT (Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008); b) a ação supressiva da PgE2 é antagonizada pelos cisteinil-leucotrienos, produtos da 5-LO, e também pelos glicocorticóides (Gaspar-Elsas et al., 2009). Neste trabalho, mostramos que controles WT e mutantes WASP-KO (deficientes na proteína do Síndrome de Wiskott-Aldrich, que é um elemento importante na motilidade e função de defesa de várias células hematopoiéticas, por sua função no controle do citoesqueleto) respondem normalmente aos inibidores da COX na presença de 5-LO. Mutantes WASP-KO apresentaram menor celularidade da medula óssea recém-coletada, com um déficit significativo na população granulocítica, e não apresentaram resposta eosinopoiética a GC, nem in vivo nem in vitro, com respostas normais à PgE2. Os bloqueadores da COX reconstituíram a eosinopoiese in vitro na medula óssea mutante de forma dependente de 5-LO e leucotrienos. Portanto, WASP mostrou-se relevante tanto para a celularidade da medula óssea in vivo quanto para a sinalização da resposta ao GC. Essas observações reforçam o interesse de estudar a influência dos GC sobre a produção de granulócitos in vivo, e permitem distinguir com base em critério bioquímico (WASPdependência), a via de atuação dos GC daquela via utilizada pelos produtos da 5-LO para bloquear a eosinopoiese iNOS/CD95L-dependente / Increased eosinophil production by bone-marrow sustains chronic inflammation in asthma, by replacing mature eosinophils which undergo apoptosis in inflammatory sites. Other studies have shown that eosinopoiesis could be suppressed by prostaglandin E2 (PgE2) in vitro. Because PgE2 increases intracellular cAMP levels, we tested a panel of agents capable of induction or mimesis of intracellular cAMP rises. We established bone-marrow cultures, in liquid or semisolid media, to examine eosinopoiesis and neutropoiesis, from mutant mice and their respective wild-type (WT) controls of the BALB/c and C57BL/6 backgrounds. All these agents, including isoproterenol, duplicated the effects of PgE2, suppressing eosinopoiesis by the same biochemical pathway previously characterized for PgE2. Other agents such as IL-17 A, a proinflammatory cytokine. and a-galactosilceramide (\03B1-GalCer), a CD1d-restricted glycolipid which activates iNKT cells, also supressed eosinopoiesis through the iNOS-CD95L pathway, but each agent entered the sequence at a distinctive point and used a distinctive mechanism of action. By contrast, all-trans Retinoic Acid (ATRA) also suppressed eosinopoiesis in a CD95L-dependent manner, but a role for iNOS was so far only demonstrated in suppression of colony-formation by ATRA in the presence of GM-CSF. We also demonstrated the three-way connectivity between the cyclooxygenase (COX) pathway, the 5-lipoxygenase (5-LO) pathway and glucocorticoid (GC) regulatory effects on eosinopoiesis. Our group previously reported that: a) in the absence of 5-LO, IL-5-stimulated bone-marrow did not respond to COX inhibitors, which enhance eosinopoiesis in WT bone-marrow; b) the supressive effects of PgE2 are antagonized by cysteinilleukotrienes, produced by 5-LO, and by GC (Elsas et al., 2008) Here we show that WT controls and WASP-KO mutants (lacking the Wiskott-Aldrich Syndrome Protein, a critical element in motility and immunological function of various hemopoietic cell types, due to its role in cytoskeleton regulation) respond normally to COX inhibitors in the presence of 5-LO. WASPKO mutants present lower cellularity in freshly harvested bone-marrow, with significantly decreased granulocyte numbers, and lack an eosinopoietic response to GC, in vitro and in vivo, but show normal responsivess to PgE2. COX inhibitors reconstituted eosinopoiesis in mutant bone-marrow in vitro in a 5-LO- and cysteinyl-leukotriene-dependent manner. Hence, WASP is relevant to bone-marrow cellularity in vivo, as well as to GC signaling. This highlights the interest of further studying the influence of GC on in vivo granulocyte production, and enables us to distinguish, based on a biochemical criterion (WASP-dependency), the targets of GC from the pathway used by cysteinyl-leukotrienes to prevent iNOS-CD95L-mediated suppression of eosinopoiesis / 2100-04-28

Orientador: Nelson Eduardo Durán Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-18T16:38:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ridolfi_DanielaMissiani_M.pdf: 1638152 bytes, checksum: e0dcd5884432b022ba79cd8e69b9512f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Tretinoína (ácido todo-trans-retinóico) é empregado no tratamento tópico de várias doenças de pele, no entanto sua utilização é fortemente limitada pelos efeitos colaterais que apresenta e pela sua alta instabilidade química. Neste trabalho tretinoína foi encapsulada em nanopartículas lipídicas sólidas (NLS-TRE) e em NLS recobertas com quitosana (NLS-Quitosana-TRE). Ambas as partículas apresentaram alta eficiência de encapsulação, alta estabilidade física e morfologia esférica. As NLS-Quitosana-TRE apresentaram menor cristalinidade em relação às NLS sem quitosana. A capacidade de transporte das nanopartículas foi limitada pela baixa taxa de solubilização da tretinoína no lipídio fundido, nas condições de preparação. A adição de etanol na preparação das nanopartículas aumentou a capacidade de transporte, no entanto a estabilidade das dispersões foi alterada (as NLS sem quitosana permaneceram estáveis por apenas um mês e as NLS com quitosana se desestabilizaram logo após a preparação). Ambas as partículas não apresentaram potencial citotóxico em células de fibroblastos e queratinócitos. A encapsulação de tretinoína em NLS reduziu de forma significativa sua fototoxidade, o que evidencia o efeito protetor da matriz lipídica. As NLS-Quitosana-TRE apresentaram alta atividade antibacteriana contra as principais bactérias envolvidas na acne (S. epidermidis e P. acnes) e contra a S. aureus, também envolvida em infecções de pele. Os resultados obtidos neste trabalho permitem concluir que as NLS, com e sem recobrimento com quitosana, possuem um grande potencial para encapsulação de tretinoína em aplicações dérmicas. O recobrimento com quitosana pode melhorar ainda mais as propriedades das NLS como sistema carreador de tretinoína, uma vez que as NLS-Quitosana-TRE apresentaram atividade antibacteriana contra bactérias envolvidas em infecções de pele e desta forma podem aumentar a eficácia terapêutica no tratamento tópico da acne e de outras doenças de pele / Abstract: Tretinoin (all-trans retinoic acid) is employed in the topical treatment of various skin diseases, however, its uses is strongly limited by their side effects and high chemical instability. In this work tretinoin was encapsulated in solid lipid nanoparticles (SLN-TRE) and SLN coated with chitosan (SLN-Chitosan-TRE). Both particles exhibited high entrapment efficiency, high physical stability and spherical morphology. The SLN-chitosan-TRE presented lower crystallinity compared to SLN without chitosan. The loading capacity of nanoparticles was limited by the low solubilization rate of tretinoin in the melted lipid at the preparation's conditions. The addition of ethanol in the nanoparticles preparation increased the loading capacity, however the dispersion stability was altered (the SLN without chitosan remained stable by only one month and the SLN with chitosan destabilized after preparation). Both particles were not cytotoxic to either fibroblasts or keratinocytes cells. The tretinoin encapsulation in SLN decreased significantly its phototoxicity, which shows a protector effect by the lipid matrix. The SLN-Chitosan-TRE exhibited high antibacterial activity against the main bacteria involved in the acne (S. epidermidis and P. acnes) and against the S. aureus which is involved in skin infections. The results obtained in this work allows us to conclude that the SLN, with and without coating with chitosan, have a great potential for encapsulation of tretinoin in dermal application. The coating with chitosan can improve the SLN properties as carrier for tretinoin because the SLN-Chitosan-TRE exhibited antibacterial activity against bacteria involved in skin infections and therefore can improve the therapeutic efficacy in the topical treatment of acne and other skin diseases / Mestrado / Físico-Química / Mestre em Química

Orientadores: Sérgio Luis Felisbino, Francisco Eduardo Martinez / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T11:21:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fontanelli_BeatrizAparecidaFioruci_D.pdf: 2932311 bytes, checksum: fc7d79d2b10d42488acf176230c43c39 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Pesquisadores têm mostrado que o consumo crônico de etanol altera a concentração do ácido retinóico, metabólito ativo da vitamina A, em muitos órgãos, incluindo a próstata. O ácido retinóico é essencial para o desenvolvimento normal da próstata e para a manutenção de sua homeostase. Alterações na concentração e no metabolismo do ácido retinóico estão relacionadas com o desenvolvimento de lesão na próstata. Adicionalmente, a atividade de metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs), também está relacionada com o desenvolvimento de alterações na próstata. Assim, o presente trabalho teve por objetivo descrever os efeitos dos consumos, baixo e alto, de etanol sobre as proteínas envolvidas na síntese e no catabolismo do ácido retinóico (artigo I), bem como, sobre a atividade enzimática das MMPs (artigo II) nos lobos dorsais e laterais da próstata.Vinte ratos adultos (~ 90 dias de idade) de cada variedade, UChA e UChB, foram divididos nos grupos (n=10/grupo): UChA (consumo baixo de etanol, 0,2-2 g/kg/dia), UChAC (ratos que não consumiram etanol); UChB (consumo alto de etanol, > 2g/kg/dia), UChBC (ratos que não consumiram etanol).Após o período experimental (~ 150 dias de idade), os ratos foram eutanasiados por decapitação e os lobos dorsais e laterais das próstatas foram coletados e dissecados: (1) para avaliar os níveis e a localização das proteínas ALDH1A1, ALDH1A2, ALDH1A3, CYP26A1, CYP26B1, CYP2E1, através de western blot e imuno-histoquímica, bem como, a atividade catabólica das CYP26A1, CYP26B1, CYP2E1 por ensaio bioquímico e quantificação por HPLC-MS/MS; (2) e para avaliar a atividade da MMP-2 e da MMP-9, e os níveis dos inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMP-1/ TIMP-2), através de zimografia e Elisa, respectivamente. No grupo UChA, a ALDH1A3 aumentou na próstata dorsal, enquanto as proteínas ALDH1A1 e ALDH1A2 diminuíram na próstata lateral. No grupo UChB, as proteínas ALDH1A1, ALDH1A2, e ALDH1A3 aumentaram na próstata dorsal, enquanto a ALDH1A3 diminuiu no lobo lateral. A concentração do ácido retinóico aumentou, indicando diminuição da atividade da CYP2E1, e diminuiu quando se avaliou a CYP26, indicando aumento de sua atividade na próstata dorsal do UChB. Além disso, o ácido retinóico diminuiu quando se avaliou a atividade de CYP total nos grupos experimentais, sendo somente aumentado na próstata lateral do UChA. O consumo baixo de etanol (grupo UChA) diminuiu a atividade das MMP-2 e MMP-9 e o nível das TIMP-2 e TIMP-1 na próstata lateral, enquanto que na próstata dorsal o etanol diminuiu a atividade de MMP-2 e o nível de TIMP-1. Por outro lado, no grupo UChB, o etanol diminuiu somente a atividade da MMP-9 na próstata lateral e não alterou os níveis de TIMP-1 e TIMP-2.Nossos resultados indicam que o etanol modula a síntese e o catabolismo do ácido retinóico na próstata do rato de modo dependente de sua concentração. Além disso, o consumo crônico e baixo de etanol diminui a atividade das metaloproteinases -2 e -9, sendo a próstata lateral o lobo afetado e, portanto, mais susceptível a estas alterações, do que o lobo prostático dorsal. / Abstract: Researchers have shown that chronic ethanol consumption alters the retinoic acid concentration, an active metabolite of vitamin A, in many organs including the prostate. The retinoic acid is essential for the normal development of prostate and for maintaining its glandular homeostasis. Changes in concentration and metabolism of retinoic acid are related to lesion development in the prostate. Additionally, the activity of matrix metalloproteinases (MMPs), also relates to development of alterations in prostate. Thus, this study aimed to describe the effects of low and high doses of ethanol consumption, on the proteins involved in the synthesis and catabolism of retinoic acid (Article I), as well as on the enzymatic activity of MMPs (Article II) the dorsal and lateral lobes of the prostate. Twenty adult rats (~ 90 days old) of each variety, UChA and UChB, were divided into groups (n = 10 / group): UChA (low ethanol consumption, 0.2-2 g /kg / day), UChAC (rats not consumed ethanol); UChB (high ethanol consumption, > 2 g/ kg/ day), UChBC (rats not consumed ethanol). After the experimental period (~ 150 days old), the rats were euthanized by decapitation and dorsal and lateral lobes of the prostates were collected and dissected: (1) for evaluate the levels and location of the proteins ALDH1A1, ALDH1A2, ALDH1A3, CYP26A1, CYP26B1, CYP2E1, by western blot and immunohistochemistry, as well as, catabolic activity of CYP26A1, CYP26B1, CYP2E1 by biochemical assay and quantification by HPLC¿MS/MS; (2) and to evaluate the activity of MMP-2 and MMP-9, and the levels of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP-1 / TIMP-2) using zymography and ELISA, respectively. In the UChA group, ALDH1A3 increased in dorsal prostate, while the proteins ALDH1A2 and ALDH1A1 decreased in the lateral prostate. In the UChB group, the proteins ALDH1A1, ALDH1A2 and ALDH1A3 increased in the dorsal prostate, while ALDH1A3 decreased in the lateral lobe. The concentration of retinoic acid increased, indicating a decrease in the CYP2E1 activity, and decreased when evaluated CYP26, indicating increased of CYP26 activity in the UChB dorsal prostate. Furthermore, the retinoic acid decreased when assessing the CYP total activity in the experimental groups, but only increased in the lateral prostate of UChA. The low ethanol consumption (UChA group) reduced the activities of MMP-2 and MMP-9 and the levels of TIMP-2 and TIMP-1 in the lateral prostate, while dorsal prostate the ethanol decreased the MMP-2 activity and the level of TIMP-1. On the other hand, in the UChB group, ethanol only decreased the activity of MMP-9 in the lateral prostate and did not alter the levels of TIMP-1 and TIMP-2. Our results indicate that ethanol modulates the synthesis and catabolism of retinoic acid in the rat prostate in a concentration-dependent manner. In addition, the chronic and low consumption of ethanol decreases the activity of metalloproteinases -2 and -9 in the lateral lobe prostate, showing that this organ is more susceptible to these changes than dorsal lobe prostate / Doutorado / Anatomia / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:45Z : No. of bitstreams: 1 000864208.pdf: 1009596 bytes, checksum: 236e34d501bf07249ee138ddcf4beeec (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O processo de remodelação cardíaca pode ser influenciado por diversos fatores, dentre eles: mecânicos, genéticos e bioquímicos, no qual se destaca a relevância do ácido retinóico (AR). Evidencias sugerem que o AR é essencial no período embrionário e, no período pós-embrionário, pode desencadear/modular a hipertrofia cardíaca. No entanto, não está claro se a hipertrofia cardíaca induzida pelo AR é fisiológica ou patológica. O objetivo principal do estudo foi verificar a participação da via mTOR por meio do estudo da Akt, NFκB, S6K e PI3K em suas formas totais e fosforiladas. Os objetivos secundários foram avaliar a participação das MAPKs (JNK/ERK) e as consequências no metabolismo energético e estresse oxidativo, de ratos suplementados com ácido retinóico. Para isso foram utilizados 80 ratos divididos em 4 grupos: grupo controle (C, n=20) recebeu dieta padrão; AR1 (n=20), AR2 (n=20) e AR3 (n=20) que receberam 0,3 ; 5 e 10 mg de AR/kg de ração respectivamente. Após dois meses os animais foram submetidos ao estudo ecocardiográfico, estudo de coração isolado e eutanasiados para coleta de material biológico. As variáveis avaliadas foram a porcentagem de colágeno, área seccional dos miócitos, diâmetro transverso dos miócitos, proteínas por western blot, estresse oxidativo e enzimas do metabolismo energético. Para análise estatística foi realizado ANOVA de 1 via complementada por testes recomendados. Para avaliar a resposta dose-dependente foi utilizado o test for linear trend. Em nosso estudo observamos que houve efeito dose-dependente para o diâmetro do átrio esquerdo, sendo maior no grupo C e menor no grupo AR3; hipertrofia dos cardiomiócitos sem acúmulo de colágeno; ativação das MAPKs através do aumento da expressão da JNK; diminuição da piruvato desidrogenase; da β-hidroxiacil-CoA desidrogenase, da ATP sintase, do complexo I e complexo II quando comparados ao grupo C; e aumento no... / The process of cardiac remodeling can be influenced by several factors including mechanical, genetics and biochemical, that emphasize the importance of retinoic acid (RA). Evidence suggests that the RA is essential in the embryonic period and in the post embryonic development, it can trigger/modulate cardiac hypertrophy. However it is unclear whether the cardiac hypertrophy induced by RA is physiological or pathological. The main objective of the study was to investigate the involvement of mTOR pathway through the study of Akt, NFκB, S6K and PI3K in its total and phosphorylated forms. Secondary objectives were to evaluate the involvement of MAPKs (JNK / ERK) and the consequences of energy metabolism and oxidative stress in rats supplemented with RA. For this we used 80 rats divided into 4 groups: the control group (C, n = 20) received standard diet; AR1 (n = 20), AR2 (n = 20) and AR3 (n = 20) received 0.3; 5 and 10mg AR/kg diet respectively. After two months the animals were submitted to echocardiographic study, study of isolated heart and euthanized for collection of biological material. The variables evaluated were the percentage of collagen, sectional area of myocytes, transverse diameter of myocytes, protein by western blot, oxidative stress and enzymes of energy metabolism. Statistical analysis was performed through 1- way ANOVA complemented by recommended tests. To assess the doseresponse, a test for linear trend was used. In our study we observed that there was a dose-dependent effect on the diameter of the left atrium, being higher in group C and lower group AR3; cardiomyocyte hypertrophy without collagen accumulation; activation of MAPKs by increasing the expression of JNK; reduction of pyruvate dehydrogenase; the β-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase, ATP synthase, complex I and complex II compared to group C; and an increase in lipid hydroperoxide and catalase also when compared to group C. Thus it can be concluded that the ... / FAPESP: 12/21186-2

Orientador: Leonardo Antonio Mamede Zornoff / Coorientador: Marcos Ferreira Minicucci / Banca: Daniella de Rezende Duarte / Banca: Bertha Furlan Poligato / Resumo: O processo de remodelação cardíaca pode ser influenciado por diversos fatores, dentre eles: mecânicos, genéticos e bioquímicos, no qual se destaca a relevância do ácido retinóico (AR). Evidencias sugerem que o AR é essencial no período embrionário e, no período pós-embrionário, pode desencadear/modular a hipertrofia cardíaca. No entanto, não está claro se a hipertrofia cardíaca induzida pelo AR é fisiológica ou patológica. O objetivo principal do estudo foi verificar a participação da via mTOR por meio do estudo da Akt, NFκB, S6K e PI3K em suas formas totais e fosforiladas. Os objetivos secundários foram avaliar a participação das MAPKs (JNK/ERK) e as consequências no metabolismo energético e estresse oxidativo, de ratos suplementados com ácido retinóico. Para isso foram utilizados 80 ratos divididos em 4 grupos: grupo controle (C, n=20) recebeu dieta padrão; AR1 (n=20), AR2 (n=20) e AR3 (n=20) que receberam 0,3 ; 5 e 10 mg de AR/kg de ração respectivamente. Após dois meses os animais foram submetidos ao estudo ecocardiográfico, estudo de coração isolado e eutanasiados para coleta de material biológico. As variáveis avaliadas foram a porcentagem de colágeno, área seccional dos miócitos, diâmetro transverso dos miócitos, proteínas por western blot, estresse oxidativo e enzimas do metabolismo energético. Para análise estatística foi realizado ANOVA de 1 via complementada por testes recomendados. Para avaliar a resposta dose-dependente foi utilizado o test for linear trend. Em nosso estudo observamos que houve efeito dose-dependente para o diâmetro do átrio esquerdo, sendo maior no grupo C e menor no grupo AR3; hipertrofia dos cardiomiócitos sem acúmulo de colágeno; ativação das MAPKs através do aumento da expressão da JNK; diminuição da piruvato desidrogenase; da β-hidroxiacil-CoA desidrogenase, da ATP sintase, do complexo I e complexo II quando comparados ao grupo C; e aumento no... / Abstract: The process of cardiac remodeling can be influenced by several factors including mechanical, genetics and biochemical, that emphasize the importance of retinoic acid (RA). Evidence suggests that the RA is essential in the embryonic period and in the post embryonic development, it can trigger/modulate cardiac hypertrophy. However it is unclear whether the cardiac hypertrophy induced by RA is physiological or pathological. The main objective of the study was to investigate the involvement of mTOR pathway through the study of Akt, NFκB, S6K and PI3K in its total and phosphorylated forms. Secondary objectives were to evaluate the involvement of MAPKs (JNK / ERK) and the consequences of energy metabolism and oxidative stress in rats supplemented with RA. For this we used 80 rats divided into 4 groups: the control group (C, n = 20) received standard diet; AR1 (n = 20), AR2 (n = 20) and AR3 (n = 20) received 0.3; 5 and 10mg AR/kg diet respectively. After two months the animals were submitted to echocardiographic study, study of isolated heart and euthanized for collection of biological material. The variables evaluated were the percentage of collagen, sectional area of myocytes, transverse diameter of myocytes, protein by western blot, oxidative stress and enzymes of energy metabolism. Statistical analysis was performed through 1- way ANOVA complemented by recommended tests. To assess the doseresponse, a test for linear trend was used. In our study we observed that there was a dose-dependent effect on the diameter of the left atrium, being higher in group C and lower group AR3; cardiomyocyte hypertrophy without collagen accumulation; activation of MAPKs by increasing the expression of JNK; reduction of pyruvate dehydrogenase; the β-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase, ATP synthase, complex I and complex II compared to group C; and an increase in lipid hydroperoxide and catalase also when compared to group C. Thus it can be concluded that the ... / Doutor

Este estudo tem como objetivo central avaliar a influência da secagem por aspersão de nanocápsulas de núcleo lipídico contendo tretinoína nos perfis in vitro de liberação e de penetração cutânea deste fármaco a partir de hidrogéis. Esses experimentos foram conduzidos empregando-se células de difusão de Franz, pele de abdome de porcos (fêmeas), regime de aplicação de doses infinitas e meio receptor composto por tampão fosfato pH 7,4 e etanol (70:30). A secagem por aspersão das suspensões de nanocápsulas, utilizando PVP e lactose (1:1, m/m) a 10% como adjuvantes, forneceu produtos com bons perfis de dispersão em água, bons rendimentos (próximos a 70%), baixos teores de substâncias voláteis, e teores do fármaco acima de 92%. O tipo de produto intermediário, suspensão aquosa ou respectivo pó, utilizado na produção de hidrogéis (G-LNC-TTN e G-LNC-TTN-SD, respectivamente) não influenciou no perfil de liberação in vitro da tretinoína, que se ajustou ao modelo de Higuchi. No estrato córneo houve diferenças nas quantidades de tretinoína penetradas a partir das duas formulações. O G-LNC-TTN levou a uma retenção exponencial do fármaco nessa camada, enquanto para o G-LNC-TTN-SD isso não ocorreu. Essa diferença foi associada à forma de organização das nanocápsulas na matriz do gel. Na epiderme e na derme, ambas as formulações permitiram a chegada de pequenas e constantes quantidades de tretinoína. No compartimento receptor da célula de Franz o fármaco não foi detectado. A pequena permeação da tretinoína para as camadas mais profundas da pele e para o meio receptor são indicativos de baixa absorção sistêmica, e também podem contribuir para a diminuição dos efeitos adversos associados à terapia tópica com essa substância. A secagem das suspensões de nanocápsulas de núcleo lipídico, nas condições utilizadas, forneceu um intermediário em potencial para a produção de formas farmacêuticas semissólidas contendo tretinoína. / This study’s central goal is to assess the influence of spray-drying lipid core nanocapsules on tretinoin in vitro release profiles as well as skin penetration/permeation from hydrogels. These experiments were conducted employing Franz diffusion cells, pig abdominal skin (female), infinite doses regimen and receptor medium composed of phosphate buffer pH 7.4 and ethanol (70:30). Spray-drying of the nanocapsules suspensions, using PVP and lactose (1:1, m/m) at 10% (m/v) as drying adjuvant provided powders with good water dispersion profiles, good yields (around 70%), low volatile substances contents, in addition to drug contents above 92%. Interchanging intermediate products, aqueous suspension or respective powder, used in hydrogel formulation (G-LNC-TTN and G-LNC-TTN-SD, respectively) caused no influence on tretinoin in vitro release profile which was adjusted by Higuchi model. In corneum stratum there were differences in tretinoin quantities which penetrated from those formulations. The G-LNC-TTN provided an exponential retention of the drug on this skin’s layer, although G-LNC-TTN-SD did not. This difference was associated with the nanocapsules organization form in hydrogel matrix. In epidermis and dermis both formulations allowed permeation of constant and low tretinoin quantities. Moreover, at receptor fluid the drug was not detected. The low tretinoin permeation for deeper skin layers and for receptor fluid is low systemic absorption indicative, furthermore, may contribute in reducing adverse effects associated with tretinoin topical therapy. In given conditions, spray-drying of lipid core nanocapsules provided a potential intermediate for production of semi solids pharmaceutical forms containing tretinoin.

Este estudo tem como objetivo central avaliar a influência da secagem por aspersão de nanocápsulas de núcleo lipídico contendo tretinoína nos perfis in vitro de liberação e de penetração cutânea deste fármaco a partir de hidrogéis. Esses experimentos foram conduzidos empregando-se células de difusão de Franz, pele de abdome de porcos (fêmeas), regime de aplicação de doses infinitas e meio receptor composto por tampão fosfato pH 7,4 e etanol (70:30). A secagem por aspersão das suspensões de nanocápsulas, utilizando PVP e lactose (1:1, m/m) a 10% como adjuvantes, forneceu produtos com bons perfis de dispersão em água, bons rendimentos (próximos a 70%), baixos teores de substâncias voláteis, e teores do fármaco acima de 92%. O tipo de produto intermediário, suspensão aquosa ou respectivo pó, utilizado na produção de hidrogéis (G-LNC-TTN e G-LNC-TTN-SD, respectivamente) não influenciou no perfil de liberação in vitro da tretinoína, que se ajustou ao modelo de Higuchi. No estrato córneo houve diferenças nas quantidades de tretinoína penetradas a partir das duas formulações. O G-LNC-TTN levou a uma retenção exponencial do fármaco nessa camada, enquanto para o G-LNC-TTN-SD isso não ocorreu. Essa diferença foi associada à forma de organização das nanocápsulas na matriz do gel. Na epiderme e na derme, ambas as formulações permitiram a chegada de pequenas e constantes quantidades de tretinoína. No compartimento receptor da célula de Franz o fármaco não foi detectado. A pequena permeação da tretinoína para as camadas mais profundas da pele e para o meio receptor são indicativos de baixa absorção sistêmica, e também podem contribuir para a diminuição dos efeitos adversos associados à terapia tópica com essa substância. A secagem das suspensões de nanocápsulas de núcleo lipídico, nas condições utilizadas, forneceu um intermediário em potencial para a produção de formas farmacêuticas semissólidas contendo tretinoína. / This study’s central goal is to assess the influence of spray-drying lipid core nanocapsules on tretinoin in vitro release profiles as well as skin penetration/permeation from hydrogels. These experiments were conducted employing Franz diffusion cells, pig abdominal skin (female), infinite doses regimen and receptor medium composed of phosphate buffer pH 7.4 and ethanol (70:30). Spray-drying of the nanocapsules suspensions, using PVP and lactose (1:1, m/m) at 10% (m/v) as drying adjuvant provided powders with good water dispersion profiles, good yields (around 70%), low volatile substances contents, in addition to drug contents above 92%. Interchanging intermediate products, aqueous suspension or respective powder, used in hydrogel formulation (G-LNC-TTN and G-LNC-TTN-SD, respectively) caused no influence on tretinoin in vitro release profile which was adjusted by Higuchi model. In corneum stratum there were differences in tretinoin quantities which penetrated from those formulations. The G-LNC-TTN provided an exponential retention of the drug on this skin’s layer, although G-LNC-TTN-SD did not. This difference was associated with the nanocapsules organization form in hydrogel matrix. In epidermis and dermis both formulations allowed permeation of constant and low tretinoin quantities. Moreover, at receptor fluid the drug was not detected. The low tretinoin permeation for deeper skin layers and for receptor fluid is low systemic absorption indicative, furthermore, may contribute in reducing adverse effects associated with tretinoin topical therapy. In given conditions, spray-drying of lipid core nanocapsules provided a potential intermediate for production of semi solids pharmaceutical forms containing tretinoin.