Os glicocorticóides são muito utilizados na clínica veterinária por serem potentes inibidores da resposta inflamatória. São encontrados em muitas preparações tópicas, sozinhos ou combinados com outros medicamentos e estão presentes, principalmente, em produtos destinados ao uso otológico. Mesmo quando aplicados topicamente, sabe-se que existe certo grau de absorção. Com a disponibilidade de novos glicocorticóides sintéticos mais potentes, vem sendo sugerido recentemente, a ocorrência de hiperadrenocorticismo iatrogênico em pequenos animais. Com a finalidade de se testar a hipótese que a utilização de preparações otológicas contendo glicocorticóides podem ocorrer em efeitos sistêmicos, o presente estudo avaliou três antiinflamatórios esteroidais comumente utilizados no tratamento de otite em cães e gatos, quais sejam a hidrocortisona, a betametasona e a triancinolona. Para tanto, ratos foram tratados tópicamente, via auricular, a cada 12 horas, durante 7, 14 e 21 dias, com os fármacos descritos acima. Utilizamos o edema de pata induzido pela injeção de carragenina como forma de avaliar a existência de níveis efetivos de antiinflamatórios circulantes. Ainda, foram avaliados vários parâmetros tais como variação de peso corpóreo, peso relativo de baço e adrenais, hemograma completo, índice de proliferação de linfócitos e fagocitose e burst oxidativo realizados por neutrófilos circulantes. Além disso, foi avaliado o nível de corticosterona plasmática nos animais tratados com glicocorticóides tópicos. O tratamento tópico com antiinflamatórios esteroidais levou a redução no volume de edema inflamatório, mais evidente com a triancinolona. De forma geral, houve queda no ganho, ou mesmo perda de peso corpóreo durante o tratamento tópico com os antiinflamatórios esteroidais empregados. Em alguns casos, essa redução de peso corpóreo foi acompanhada de diminuição do peso relativo do baço e adrenais, particularmente com a betametasona. A principal alteração observada no hemograma foi leucopenia, mais evidente com a triancinolona. Houve redução dos níveis plasmáticos de corticosterona, mais duradoura com a betametasona. Os tratamentos tópicos causaram discreta redução na intensidade e percentual de fagocitose realizada por neutrófilos circulantes, bem como na produção de espécies reativas de oxigênio. O estudo aponta que glicocorticóides tópicos comumente empregados na terapêutica veterinária podem ser absorvidos, na dependência da molécula empregada e de seu tempo de utilização, causando alterações sistêmicas relevantes já após 7 dias de tratamento. Sugerimos uma maior cautela e acompanhamento veterinário dos pacientes nos casos que haja necessidade de emprego de tais medicamentos por períodos prolongados. / Glucocorticoids are commonly employed in veterinary practice because they are potent inhibitors of the inflammatory response. They are present in many topical formulations, alone or combined with other active compounds, particularly in otic ointments. Even when applied topically, certain degree of absortion is known to occur. Following the availability of novel, more potent synthetic steroidal anti-inflammatory drugs, cases of iatrogenic hyperadrenocorticism have been suggested. Aiming on testing the hypothesis that glucocorticoid-containing otic ointments may lead to systemic effects, we employed three different synthetic glucocorticoids widely used for the treatment of otitis in small animals (hydrocortisone, betamethasone, and triamcinolone) our study Rats were treated topically on their ears, every 12 hours, for 7, 14, or 21 days with the drugs described above. We first employed carrageenan-induced paw edema in order to evaluate the presence of effective levels of circulating anti-inflammatory drugs. We also evaluated several parameters such as change in body weight, relative weight of spleen and adrenal glands, complete hemogram, proliferation index of lymphocytes, and phagocytosis and oxidative burst performed by circulating neutrophils. Moreover, we assessed the plasmatic levels of corticosterone in rats treated topically with anti-inflammatory steroids. Topical treatment led to a reduction on the volume of the inflammatory edema induced by carrageenan, more evident following triamcinolone. Altogether, rats treated with these molecules ceased to gain, or lost weight on the course of the experiment. In some cases, such reduction was accompanied by a decrease on the relative weight of the spleen and adrenal glands, particularly after betamethasone. The most commonly observed change in the hemogram was leucopenia, evident following triamcinolone. We found reduced levels of circulating corticosterone, more persistent after betamethasone. Topically applied glucocorticoids caused a discrete reduction in the intensity and percentage of phagocytosis by circulating neutrophils, and a reduction on the oxidative burst performed by these cells. This study shows that topical steroidal anti-inflammatory drugs, so commonly employed in veterinary practice, can be absorbed, depending on the molecule and duration of treatment, leading to systemic effects, which are already relevant after 7 days. Based on our findings, we suggest caution and a close follow-up by a qualified veterinarian whenever a long-term therapy based on these molecules and route of administration is required.

Os glicocorticóides são muito utilizados na clínica veterinária por serem potentes inibidores da resposta inflamatória. São encontrados em muitas preparações tópicas, sozinhos ou combinados com outros medicamentos e estão presentes, principalmente, em produtos destinados ao uso otológico. Mesmo quando aplicados topicamente, sabe-se que existe certo grau de absorção. Com a disponibilidade de novos glicocorticóides sintéticos mais potentes, vem sendo sugerido recentemente, a ocorrência de hiperadrenocorticismo iatrogênico em pequenos animais. Com a finalidade de se testar a hipótese que a utilização de preparações otológicas contendo glicocorticóides podem ocorrer em efeitos sistêmicos, o presente estudo avaliou três antiinflamatórios esteroidais comumente utilizados no tratamento de otite em cães e gatos, quais sejam a hidrocortisona, a betametasona e a triancinolona. Para tanto, ratos foram tratados tópicamente, via auricular, a cada 12 horas, durante 7, 14 e 21 dias, com os fármacos descritos acima. Utilizamos o edema de pata induzido pela injeção de carragenina como forma de avaliar a existência de níveis efetivos de antiinflamatórios circulantes. Ainda, foram avaliados vários parâmetros tais como variação de peso corpóreo, peso relativo de baço e adrenais, hemograma completo, índice de proliferação de linfócitos e fagocitose e burst oxidativo realizados por neutrófilos circulantes. Além disso, foi avaliado o nível de corticosterona plasmática nos animais tratados com glicocorticóides tópicos. O tratamento tópico com antiinflamatórios esteroidais levou a redução no volume de edema inflamatório, mais evidente com a triancinolona. De forma geral, houve queda no ganho, ou mesmo perda de peso corpóreo durante o tratamento tópico com os antiinflamatórios esteroidais empregados. Em alguns casos, essa redução de peso corpóreo foi acompanhada de diminuição do peso relativo do baço e adrenais, particularmente com a betametasona. A principal alteração observada no hemograma foi leucopenia, mais evidente com a triancinolona. Houve redução dos níveis plasmáticos de corticosterona, mais duradoura com a betametasona. Os tratamentos tópicos causaram discreta redução na intensidade e percentual de fagocitose realizada por neutrófilos circulantes, bem como na produção de espécies reativas de oxigênio. O estudo aponta que glicocorticóides tópicos comumente empregados na terapêutica veterinária podem ser absorvidos, na dependência da molécula empregada e de seu tempo de utilização, causando alterações sistêmicas relevantes já após 7 dias de tratamento. Sugerimos uma maior cautela e acompanhamento veterinário dos pacientes nos casos que haja necessidade de emprego de tais medicamentos por períodos prolongados. / Glucocorticoids are commonly employed in veterinary practice because they are potent inhibitors of the inflammatory response. They are present in many topical formulations, alone or combined with other active compounds, particularly in otic ointments. Even when applied topically, certain degree of absortion is known to occur. Following the availability of novel, more potent synthetic steroidal anti-inflammatory drugs, cases of iatrogenic hyperadrenocorticism have been suggested. Aiming on testing the hypothesis that glucocorticoid-containing otic ointments may lead to systemic effects, we employed three different synthetic glucocorticoids widely used for the treatment of otitis in small animals (hydrocortisone, betamethasone, and triamcinolone) our study Rats were treated topically on their ears, every 12 hours, for 7, 14, or 21 days with the drugs described above. We first employed carrageenan-induced paw edema in order to evaluate the presence of effective levels of circulating anti-inflammatory drugs. We also evaluated several parameters such as change in body weight, relative weight of spleen and adrenal glands, complete hemogram, proliferation index of lymphocytes, and phagocytosis and oxidative burst performed by circulating neutrophils. Moreover, we assessed the plasmatic levels of corticosterone in rats treated topically with anti-inflammatory steroids. Topical treatment led to a reduction on the volume of the inflammatory edema induced by carrageenan, more evident following triamcinolone. Altogether, rats treated with these molecules ceased to gain, or lost weight on the course of the experiment. In some cases, such reduction was accompanied by a decrease on the relative weight of the spleen and adrenal glands, particularly after betamethasone. The most commonly observed change in the hemogram was leucopenia, evident following triamcinolone. We found reduced levels of circulating corticosterone, more persistent after betamethasone. Topically applied glucocorticoids caused a discrete reduction in the intensity and percentage of phagocytosis by circulating neutrophils, and a reduction on the oxidative burst performed by these cells. This study shows that topical steroidal anti-inflammatory drugs, so commonly employed in veterinary practice, can be absorbed, depending on the molecule and duration of treatment, leading to systemic effects, which are already relevant after 7 days. Based on our findings, we suggest caution and a close follow-up by a qualified veterinarian whenever a long-term therapy based on these molecules and route of administration is required.

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A co-reticula??o da quitosana com sulfato de s?dio e genipina para forma??o de sistemas particulados ? capaz de tornar estes mais resistentes ao pH ?cido e modificar a cin?tica de libera??o de f?rmacos para a via oral. A triancinolona ? um glicocortic?ide de ampla aplica??o terap?utica por suas a??es antiinflamat?ria e imunossupressora. Os sistemas particulados foram preparados por co-reticula??o e caracterizadas quanto ao tamanho de part?cula, PDI, potencial zeta, grau de reticula??o, taxa de encapsula??o, MEV, espectroscopia de infravermelho, an?lise t?rmica, cin?tica de libera??o e estudo em c?lulas tumorais. Inicialmente foram preparadas nanopart?culas com sulfato de s?dio, sem genipina, contendo triancinolona, avaliando a propor??o do volume das fases f?rmaco/pol?mero, concentra??o de sulfato de s?dio e polissorbato 80, tempo e modo de imers?o das fases. O sistema definido para a reticula??o com a genipina apresentou tamanho de 312,20 ? 5,70 nm, PDI 0,342 ? 0,013 e potencial zeta 20,18 ? 2,28 mV. A genipina foi introduzida no sistema em diferentes concentra??es (0,5; 1,0 e 2,0 mM) e tempos de reticula??o (3, 6, 12 e 24 h). Na an?lise do tempo de reticula??o com genipina 0,5 mM, os sistemas obtiveram tamanho de 235,1 a 334,4 nm, PDI de 0,321 a 0,392 e potencial zeta de 20,92 a 30,39 mV, com grau de reticula??o que variou de 14 a 30 %. As nanopart?culas sem genipina, 6 h e 24 h de reticula??o foram escolhidas para a secagem por spray-drying, formando micropart?culas de nanopart?culas. A an?lise por micrografia eletr?nica de varredura revelou que as micropart?culas apresentaram morfologia esf?rica. A taxa de encapsula??o foi de 75 ? 2,3% usando metodologia CLAE validada. A caracteriza??o dos sistemas por infravermelho evidenciou as intera??es entre os componentes da formula??o. A an?lise t?rmica mostrou que os sistemas com maior grau de reticula??o, apresentaram uma maior estabilidade t?rmica. Na cin?tica de libera??o, o aumento do grau de reticula??o foi capaz de diminuir a velocidade de libera??o da triancinolona. Nos estudos com c?lulas HepG2 e HT-29 os sistemas microparticulados contendo triancinolona e genipina com tempo de reticula??o de 24 h apresentaram um potencial para atividade antitumoral nas c?lulas de linhagem hep?ticas HepG2. Com isso, um novo sistema de libera??o a base de quitosana obtido por co-reticula??o com sulfato de s?dio e genipina contendo triancinolona foi obtido com potencial antitumoral hep?tico. / Chitosan is a polymer biocompatibility and biodegradability widely used in drug delivery systems. The co-crosslinking of chitosan with sodium sulfate and genipin, to form particulate systems is related of making them more resistant to acidic pH and to modulate the release kinetics for the oral route. Triamcinolone is a glucocorticoid with anti-inflammatory and immunosuppressive actions. The nanoparticles were prepared by co-crosslinking and characterized for particle size, PDI, zeta potential, crosslinking degree, encapsulation rate, morphology, infrared spectroscopy, thermal analysis, release kinetics and cells studies. The nanoparticles were prepared initially without genipin with sodium sulphate and the particles parameters were monitored in function of different ratio of drug / polymer, different concentrations of sodium sulfate and polysorbate 80 and the drip mode of crosslinkers on polymers. After optimizing conditions, the chosen system parameters without genipin included mean diameter of 312.20 ? 5.70 nm, PDI 0.342 ? 0.013 and zeta potential of 20.18 ? 2.28 mV. The genipin was introduced into the system analyzing different concentrations (0.5, 1.0 and 2.0 mM) and crosslinking times (3, 6, 12 and 24 h). Evaluating crosslinking time with genipin (0.5 mM) it was showed that varying the genipin reaction time the systems size ranged from 235.1 to 334.4 nm, the PDI from 0.321 to 0.392 and zeta potential 20.92 to 30.39 mV. The crosslinking degree that coud vary from 14 to 30 %. Nanoparticles without genipina, 6 h and 24 h crosslinking time were dried by spray-drying method. Analysis by scanning electron micrograph (SEM) revealed that the microparticles showed spherical morphology. The encapsulation rate was 75 ? 2.3 % using validated HPLC methodology. The infrared analysis showed chemical interactions between the components of the formulation. Thermal analysis showed that systems with a higher degree of crosslinking had a higher thermal stability. On release kinetics, increasing the degree of crosslinking was able to decrease the concentration and rate of release of triamcinolone. In studies with liver cancer cells (HepG2) and colon (HT-29), the microparticulate prepared with triamcinolone and 24 h of crosslinking with genipin showed a potential for antitumor activity in hepatic cell line HepG2. Therefore, a new delivery system for triamcinolone on polymeric nanoparticles of chitosan cocrosslinked with genipin and sodium sulfate was obtained with hepatic antitumor potential.

INTRODUÇÃO: Injeções intravítreas de acetato de triancinolona são utilizadas no tratamento de uma série de doenças retinianas. Estudos in vitro demonstram toxicidade, mas não está ainda claro se está relacionada ao preservativo ácido benzílico. Recentemente, uma formulação sem preservativo (Triesence®) foi aprovada nos Estados Unidos da América para uso intraocular. Entretanto, não existem estudos avaliando os efeitos in vitro e in vivo desta formulação. OBJETIVOS: Avaliar os efeitos do Triesence® em culturas de células retinianas e em um modelo experimental animal. MÉTODOS: As culturas de células ARPE-­-19 e R28 foram tratadas por 24 horas com Triesence® em cristais (TRIc) nas doses de 1000, 500, 200 ou 100 g/mL, ou solubilizado (TRIs) nas doses de 1000, 500 ou 200 ?g/mL. O Triesence® foi solubilizado após a centrifugação da droga, descarte do sobrenadante contendo o veículo, e em seguida ressuspensão da droga em quantidade equivalente de dimetilsulfóxido (DMSO). A porcentagem de viabilidade celular (VC) foi avaliada em ensaio de exclusão com azul de tripan. O potencial de membrana mitocondrial, foi analisado com o ensaio JC1. A atividade da caspase-­-3/7 foi mensurada por ensaio com fluoróforos. Trinta coelhos borboletas (Oryctolagus Cuniculum) foram divididos em três grupos e receberam 3 quantidades diferentes de Triesence® intravítreo: 1, 4, ou 8 mg. Após a anestesia, o olho direito (OD) recebeu a droga, enquanto o olho esquerdo (OE) recebeu o mesmo volume de solução salina balanceada. Ao final de 30 dias, o eletrorretinograma (ERG) foi registrado. Após realização do ERG, os animais foram sacrificados e os olhos coletados para análise morfológica. Doze outros coelhos foram submetidos somente a análise morfológica após 7 dias da aplicação. OS ERGs foram registrados com o sistema RETIport (Roland Consult, Alemanha), com um estimulador Ganzfeld Q450 SC. O teste de postos com sinais de Wilcoxon foi utilizado para comparar as amostras relacionadas. Para estímulos escotópicos, o valor logarítmico das amplitudes médias da onda b foi relacionado ao valor logarítmico da intensidade luminosa de cada estímulo, e a amplitude máxima da onda b (Vmax), a intensidade luminosa necessária para se atingir 50% do valor do Vmax (k), e a inclinação da curva (n) foram analisados utilizando-­-se os testes estatísticos ANOVA e t de Student pareado bicaudal. Resumo RESULTADOS: TRIc causa diminuição significativa na viabilidade celular em todas as concentrações e linhagens testadas, o que é minimizado pela solubilização da droga. Mesmo o TRIs demonstrou aumento da regulação da caspase 3/7, indicativo de apoptose in vitro, mas não houve aumento da atividade no ensaio JC1. O ERG escotópico evidenciou uma queda estatisticamente significativa de aproximadamente 7% no Vmax no grupo recebendo 8 mg a droga, mas não houve alteração significativa nos parâmetros k ou n em nenhuma concentração testada. O ERG fotópico evidenciou amplitudes de onda b significativamente reduzidas nos grupos que receberam 4 ou 8 mg, mas não no que recebeu 1 mg. Observou-­-se redução na amplitude do flicker para 24 ou 30 Hertz (Hz) no grupo que recebeu 8 mg, e para 30 Hz no grupo que recebeu 4 mg. Não foram notadas diferenças nos ensaios Hematoxilina-­-Eosina (H&E), Tunnel, Fluoro-­-Jade B ou GFAP (proteína glial fibrilar ácida) entre retinas tratadas e controle após 30 dias. Entretanto, após 7 dias, observou-­-se marcação positiva para proteína glial fibrilar ácida nas células de Müller. CONCLUSÃO: TRIc causa uma diminuição significativa na viabilidade celular em culturas de células retinianas. Após solubilizada, a droga não causa este efeito ou tampouco altera-o. Mesmo o TRIs causa aumento dos níveis de caspase 3/7, sugerindo apoptose. No modelo experimental em coelhos, foram observadas alterações morfológicas e eletrorretinográficas após a injeção intravítrea de Triesence®. Células de Müller apresentaram expressão de GFAP após 7 dias, mas não após 30 dias, sugerindo ativação transitória deste tipo celular. Não foram encontrados sinais de necrose ou apoptose, mesmo nas doses mais elevadas. Os resultados do ERG sugerem toxicidade retiniana após aplicação intravítrea de 4 ou 8 mg de Triesence® (4 a 8 vezes a dose clínica terapêutica) / INTRODUCTION: Intravitreous triancinolone acetonide is used to treat various retinal disorders. In vitro studies show toxicity, but it is not clear if that is related to the preservative benzyl alcohol. Recently, a formulation without preservative (Triesence®) was approved for intraocular use. However, no in vitro or in vivo studies with this formulation have been reported in literature so far. OBJECTIVES: To evaluate the effects of the exposure of Triesence® on retinal cells in culture and on an in-­-vivo rabbit model. METHODS: ARPE-­-19 and R28 cell cultures were treated for 24 hours with 1000, 500, 200 or 100 ?g/mL of crystalline (TRIc) or 1000, 500 or 200 g/mL of solubilized (TRIs) Triesence®. The drug was solubilized by centrifuging it, discarding the supernatant containing the vehicle and then resuspending the pellet in an equivalent amount of Dimethyl sulfoxide (DMSO). Percentage of cell viability (VC) was evaluated by a trypan blue dye-­-exclusion assay. The mitochondrial membrane potential was analyzed with the JC-­-1 assay. The caspase-­-3/7 activity was measured by a fluorochrome assay. Thirty pigmented rabbits (Oryctolagus Cuniculum) were assigned to 3 different intravitreal drug concentrations of Triesence®: 1, 4 or 8 mg. The animals were anesthetized and the right eye (OD) received drug, while the left eye (OS) received balanced salt solution. After 30 days, electroretinogram (ERG) was recorded. ERGs were recorded with the RETIport system (Roland Consult, Germany) with a Ganzfeld Q450 SC stimulator. Wilcoxon signed rank test was used to compare related samples. After the ERG, the animals were euthanized and the eyes were collected for morphological analysis. Twelve other rabbits had histology only analysis after 7 days of injection. Dark-­-adapted b-­-wave mean amplitudes were plotted as log response versus log light intensity curves, and the maximum The mitochondrial membrane potential was analyzed with the JC-­-1 assay. The caspase-­-3/7 activity was measured by a fluorochrome assay. Thirty pigmented rabbits (Oryctolagus Cuniculum) were assigned to 3 different intravitreal drug concentrations of Triesence®: 1, 4 or 8 mg. The animals were anesthetized and the right eye (OD) received drug, while the left eye (OS) received balanced salt solution. After 30 days, electroretinogram (ERG) was recorded. ERGs were recorded with the RETIport system (Roland Consult, Germany) with a Ganzfeld Q450 SC stimulator. Wilcoxon signed rank test was used to compare related samples. After the ERG, the animals were euthanized and the eyes were collected for morphological analysis. Twelve other rabbits had histology only analysis after 7 days of injection. Dark-­-adapted b-­-wave mean amplitudes were plotted as log response versus log light intensity curves, and the maximum

INTRODUÇÃO: Injeções intravítreas de acetato de triancinolona são utilizadas no tratamento de uma série de doenças retinianas. Estudos in vitro demonstram toxicidade, mas não está ainda claro se está relacionada ao preservativo ácido benzílico. Recentemente, uma formulação sem preservativo (Triesence®) foi aprovada nos Estados Unidos da América para uso intraocular. Entretanto, não existem estudos avaliando os efeitos in vitro e in vivo desta formulação. OBJETIVOS: Avaliar os efeitos do Triesence® em culturas de células retinianas e em um modelo experimental animal. MÉTODOS: As culturas de células ARPE-­-19 e R28 foram tratadas por 24 horas com Triesence® em cristais (TRIc) nas doses de 1000, 500, 200 ou 100 g/mL, ou solubilizado (TRIs) nas doses de 1000, 500 ou 200 ?g/mL. O Triesence® foi solubilizado após a centrifugação da droga, descarte do sobrenadante contendo o veículo, e em seguida ressuspensão da droga em quantidade equivalente de dimetilsulfóxido (DMSO). A porcentagem de viabilidade celular (VC) foi avaliada em ensaio de exclusão com azul de tripan. O potencial de membrana mitocondrial, foi analisado com o ensaio JC1. A atividade da caspase-­-3/7 foi mensurada por ensaio com fluoróforos. Trinta coelhos borboletas (Oryctolagus Cuniculum) foram divididos em três grupos e receberam 3 quantidades diferentes de Triesence® intravítreo: 1, 4, ou 8 mg. Após a anestesia, o olho direito (OD) recebeu a droga, enquanto o olho esquerdo (OE) recebeu o mesmo volume de solução salina balanceada. Ao final de 30 dias, o eletrorretinograma (ERG) foi registrado. Após realização do ERG, os animais foram sacrificados e os olhos coletados para análise morfológica. Doze outros coelhos foram submetidos somente a análise morfológica após 7 dias da aplicação. OS ERGs foram registrados com o sistema RETIport (Roland Consult, Alemanha), com um estimulador Ganzfeld Q450 SC. O teste de postos com sinais de Wilcoxon foi utilizado para comparar as amostras relacionadas. Para estímulos escotópicos, o valor logarítmico das amplitudes médias da onda b foi relacionado ao valor logarítmico da intensidade luminosa de cada estímulo, e a amplitude máxima da onda b (Vmax), a intensidade luminosa necessária para se atingir 50% do valor do Vmax (k), e a inclinação da curva (n) foram analisados utilizando-­-se os testes estatísticos ANOVA e t de Student pareado bicaudal. Resumo RESULTADOS: TRIc causa diminuição significativa na viabilidade celular em todas as concentrações e linhagens testadas, o que é minimizado pela solubilização da droga. Mesmo o TRIs demonstrou aumento da regulação da caspase 3/7, indicativo de apoptose in vitro, mas não houve aumento da atividade no ensaio JC1. O ERG escotópico evidenciou uma queda estatisticamente significativa de aproximadamente 7% no Vmax no grupo recebendo 8 mg a droga, mas não houve alteração significativa nos parâmetros k ou n em nenhuma concentração testada. O ERG fotópico evidenciou amplitudes de onda b significativamente reduzidas nos grupos que receberam 4 ou 8 mg, mas não no que recebeu 1 mg. Observou-­-se redução na amplitude do flicker para 24 ou 30 Hertz (Hz) no grupo que recebeu 8 mg, e para 30 Hz no grupo que recebeu 4 mg. Não foram notadas diferenças nos ensaios Hematoxilina-­-Eosina (H&E), Tunnel, Fluoro-­-Jade B ou GFAP (proteína glial fibrilar ácida) entre retinas tratadas e controle após 30 dias. Entretanto, após 7 dias, observou-­-se marcação positiva para proteína glial fibrilar ácida nas células de Müller. CONCLUSÃO: TRIc causa uma diminuição significativa na viabilidade celular em culturas de células retinianas. Após solubilizada, a droga não causa este efeito ou tampouco altera-o. Mesmo o TRIs causa aumento dos níveis de caspase 3/7, sugerindo apoptose. No modelo experimental em coelhos, foram observadas alterações morfológicas e eletrorretinográficas após a injeção intravítrea de Triesence®. Células de Müller apresentaram expressão de GFAP após 7 dias, mas não após 30 dias, sugerindo ativação transitória deste tipo celular. Não foram encontrados sinais de necrose ou apoptose, mesmo nas doses mais elevadas. Os resultados do ERG sugerem toxicidade retiniana após aplicação intravítrea de 4 ou 8 mg de Triesence® (4 a 8 vezes a dose clínica terapêutica) / INTRODUCTION: Intravitreous triancinolone acetonide is used to treat various retinal disorders. In vitro studies show toxicity, but it is not clear if that is related to the preservative benzyl alcohol. Recently, a formulation without preservative (Triesence®) was approved for intraocular use. However, no in vitro or in vivo studies with this formulation have been reported in literature so far. OBJECTIVES: To evaluate the effects of the exposure of Triesence® on retinal cells in culture and on an in-­-vivo rabbit model. METHODS: ARPE-­-19 and R28 cell cultures were treated for 24 hours with 1000, 500, 200 or 100 ?g/mL of crystalline (TRIc) or 1000, 500 or 200 g/mL of solubilized (TRIs) Triesence®. The drug was solubilized by centrifuging it, discarding the supernatant containing the vehicle and then resuspending the pellet in an equivalent amount of Dimethyl sulfoxide (DMSO). Percentage of cell viability (VC) was evaluated by a trypan blue dye-­-exclusion assay. The mitochondrial membrane potential was analyzed with the JC-­-1 assay. The caspase-­-3/7 activity was measured by a fluorochrome assay. Thirty pigmented rabbits (Oryctolagus Cuniculum) were assigned to 3 different intravitreal drug concentrations of Triesence®: 1, 4 or 8 mg. The animals were anesthetized and the right eye (OD) received drug, while the left eye (OS) received balanced salt solution. After 30 days, electroretinogram (ERG) was recorded. ERGs were recorded with the RETIport system (Roland Consult, Germany) with a Ganzfeld Q450 SC stimulator. Wilcoxon signed rank test was used to compare related samples. After the ERG, the animals were euthanized and the eyes were collected for morphological analysis. Twelve other rabbits had histology only analysis after 7 days of injection. Dark-­-adapted b-­-wave mean amplitudes were plotted as log response versus log light intensity curves, and the maximum The mitochondrial membrane potential was analyzed with the JC-­-1 assay. The caspase-­-3/7 activity was measured by a fluorochrome assay. Thirty pigmented rabbits (Oryctolagus Cuniculum) were assigned to 3 different intravitreal drug concentrations of Triesence®: 1, 4 or 8 mg. The animals were anesthetized and the right eye (OD) received drug, while the left eye (OS) received balanced salt solution. After 30 days, electroretinogram (ERG) was recorded. ERGs were recorded with the RETIport system (Roland Consult, Germany) with a Ganzfeld Q450 SC stimulator. Wilcoxon signed rank test was used to compare related samples. After the ERG, the animals were euthanized and the eyes were collected for morphological analysis. Twelve other rabbits had histology only analysis after 7 days of injection. Dark-­-adapted b-­-wave mean amplitudes were plotted as log response versus log light intensity curves, and the maximum

Objetivo: Avaliar a eficiência da Triancinolona Acetonida como agente modulador da resposta inflamatória e cicatricial em coelhos submetidos a cirurgia de músculo extra-ocular. Método: Foi realizado estudo prospectivo, mascarado, em dois estádios. No primeiro estádio, dez coelhos foram submetidos a retrocesso do músculo reto superior em ambos os olhos. Aplicouse, em um deles, 0,15 cc de Triancinolona Acetonida (40mg/cc) nos tecidos circunjacentes ao local de reinserção muscular e, como controle, 0,15cc de solução de cloreto de sódio a 0,9% no local equivalente no olho contra-lateral. Quinze dias após, cinco coelhos foram submetidos a exenteração das órbitas e os restantes dos animais tiveram o mesmo procedimento realizado após trinta dias. O material do sítio de reinserção muscular foi avaliado por meio de análise histopatológica qualitativa e quantitativa (morfometria). No segundo estádio, com incrementação da agressão cirúrgica, dezesseis coelhos foram submetidos aos mesmos procedimentos com exenteração das órbitas após quinze dias, e posterior análise histopatológica dos tecidos. Resultados: Houve efeito inibitório sobre a intensidade da resposta inflamatória nos olhos tratados em comparação com os olhos controle. Conclusão: Nas condições de realização do presente estudo o uso per-operatório da triancinolona acetonida foi efetivo no controle da resposta inflamatória em olhos de coelhos submetidos a cirurgia de músculo extra-ocular. / Purpose: To evaluate the efficiency of triamcinolone acetonide (TRI) in limiting the postoperative inflammatory response and scarring following strabismus surgery. Methods: A prospective, two-stage, masked, controlled trial was conducted. In the first stage, the inflammatory response at the extraocular reattachment site was analyzed following superior rectus recession in ten rabbits. One eye had 0,15 cc of triamcinolone acetonide (40mg/cc) applied around the new insertion site and, similarly, 0,15 cc of isotonic saline solution (0,9%) was applied to the fellow eye following the same procedure, thus serving as a control. Fifteen days later, orbital exenteration was performed in five rabbits and the remaining five were exenterated thirty days later. The reattachment site tissues were submitted to qualitative and quantitative histological examinations. In the second stage 16 rabbits were submitted to amplified surgical trauma, after which the aforementioned steps were also carried out. Granuloma total area at the extraocular muscle reattachment sites of control and treated eyes were compared. Results: There was an inhibitory effect of TRI on the inflammatory response of treated eyes as compared to control eyes. Conclusions: TRI was effective in controlling the postoperative inflammatory response in rabbit eyes submitted to traumatic recession of the superior rectus muscle.

O tratamento farmacológico de patologias bucais é conduzido, geralmente, por via de adminis-tração local. No entanto, devido ao pouco tempo de permanência do fármaco no local de ação, esse tratamento pode ser bastante comprometido. Assim, este trabalho teve por objetivo o de-senvolvimento de formas farmacêuticas que proporcionem a liberação local de triancinolona na cavidade oral. Foram produzidos filmes e comprimidos mucoadesivos a partir de polímeros naturais como gelana e pectina. Os filmes bucais foram preparados por meio de evaporação do solvente (solvent casting) utilizando diferentes quantidades de polímeros. As matérias-primas e os filmes foram caracterizados fisico quimicamente utilizando espectroscopia vibracional (in-fravermelho com transformada de Fourier e Raman) e difração de raios X. As propiedades físicas e mecânicas dos filmes também foram avaliadas. Além disso, realizou-se os ensaios de mucoadesividade e de dissolução do fármaco. Os comprimidos foram preparados por com-pressão direta usando como base os polímeros naturais. Diferentes parâmetros em relação as misturas e as formulações foram avaliados tais como as propriedades de fluxo dos pós consti-tuintes, peso médio, dureza, friabilidade e desintegração. Em relação aos filmes bucais, estes foram obtidos com sucesso através de um método simples, sem a utilização de agentes reticu-lantes, ácidos ou solventes orgânicos. Todos apresentaram bons resultados nas propriedades avaliadas, no entanto as formulações com quantidades intermediarias de polímeros foram as melhores. Dentre as formulações de comprimidos preparadas, apenas 4 apresentaram boas ca-racterísticas, no entanto, os resultados dos ensaios de dissolução mostraram que estas formula-ções têm capacidade de agir como sistema de liberação controlada de fármacos. / Pharmacological treatment of oral pathologies is usually conducted by local administration. However, due to the short time the drug stays in the site of action, this treatment can be quite compromised. Thus, the objective of this work was to develop pharmaceutical forms that pro-vide the local release of triamcinolone in the oral cavity. Mucoadhesive films and tablets were made from natural polymers such as gellan and pectin. The buccal films were prepared by sol-vent casting using different amounts of polymers. The raw materials and films were characte-rized physically chemically using vibrational spectroscopy (FTIR and Raman) and X-ray diffraction. The physical and mechanical properties of the films were also evaluated. In addi-tion, the mucoadhesive and drug dissolution tests were performed. The tablets were prepared by direct pressing with the natural polymers. Different parameters in relation to mixtures and formulations were evaluated such as the flow properties of the constituent powders, average weight, hardness, friability and disintegration. In relation to oral films, these were successfully obtained by a simple method, without the use of crosslinking agents, acids or organic solvents. All presented good results in the evaluated properties, however the formulations with interme-diate amounts of polymers were the best. Among the tablet formulations prepared, only 4 sho-wed good characteristics, however, the dissolution test results showed that these formulations have the ability to act as a controlled drug delivery system.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-25T22:57:37Z No. of bitstreams: 1 ArthurSergioAvelinoDeMedeiros_DISSERT.pdf: 3584160 bytes, checksum: 26597e2b07b420ab5217392c2e4409b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-27T22:30:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ArthurSergioAvelinoDeMedeiros_DISSERT.pdf: 3584160 bytes, checksum: 26597e2b07b420ab5217392c2e4409b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T22:30:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ArthurSergioAvelinoDeMedeiros_DISSERT.pdf: 3584160 bytes, checksum: 26597e2b07b420ab5217392c2e4409b8 (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A triancinolona (TRI) ? um importante corticoster?ide utilizado na terap?utica como anti-inflamat?rio e devido ? sua baixa solubilidade em ?gua, ? utilizada principalmente na forma de suspens?es injet?veis. A associa??o da triancinolona com ciclodextrinas e co-solventes foi realizada para solubilizar o f?rmaco e explicar as intera??es envolvidas. Os diagramas de solubilidade de fases mostraram que o f?rmaco foi solubilizado pelas ciclodextrinas atrav?s da forma??o de um complexo incrivelmente est?vel, com os melhores resultados obtidos com a aplica??o da randomil-metil-beta-ciclodextrina (RM?CD) (aumento de solubilidade de 161 vezes). O f?rmaco tamb?m foi solubilizado pelos co-solventes, com incremento de solubilidade de 1,4 e 6,7 vezes (trietanolamina, TEA, e N-metilpirrolidona, NMP, respectivamente). A aplica??o simult?nea dos dois solubilizantes ainda permitiu um aumento de solubilidade consider?vel, por?m diminuiu a quantidade final solubilizada e a afinidade entre f?rmaco e ciclodextrinas, o que permitiu uma maior quantidade de f?rmaco n?o complexado. Os estudos experimentais de resson?ncia magn?tica nuclear 2D-ROESY e te?ricos por modelagem molecular mostraram intera??es da TRI com as CDs por complexo de inclus?o, provavelmente entre a extremidade do anel A do f?rmaco e cavidade das CDs. Os complexos s?lidos bin?rios e tern?rios puderam ser obtidos por spray drying. Evid?ncias de forma??o de complexo em fase s?lida foram ainda mostradas atrav?s de FTIR, difra??o de raios-X e microscopia eletr?nica de varredura. Os estudos de dissolu??o mostraram que associa??es bin?rias e tern?rias apresentaram maior velocidade de dissolu??o em compara??o com o f?rmaco puro. Al?m disso, o complexo tern?rio TRI:RM?CD:TEA apresentou uma maior velocidade de dissolu??o do f?rmaco que o complexo bin?rio TRI:RM?CD. Portanto, devido ? maior solubilidade e velocidade de dissolu??o, os complexos bin?rios e tern?rios se apresentam como novos insumos com grande potencial para a aplica??o farmac?utica da triancinolona. / Triamcinolone is a relevant anti-inflammatory costicosteroid drug, used mainly by injectable suspensions due its poor water solubility. The association of triamcinolone with cyclodextrins and co-solvents (triethanolamine TEA and N-methylpirrolidone NMP) was held to solubilize the drug and explain the involved interactions. Phase-solubility diagrams showed that triamcinolone was solubilized forming incredible stable complexes with cyclodextrins, in which bests results were observed applying randomyl-methylated-beta-cyclodextrin (RM?CD) (161 fold on increased solubility). The co-solvents TEA and NMP also enhanced drug solubility 1.4 and 6.7 fold, respectively. The association of both co-solvents with CDs seems decreased complexation stability, but enables higher amount of uncomplexed drug. Experimental magnetic resonance 2D-ROESY and theoretical molecular modeling studies demonstrated TRI-CDs interactions and elucidated the structure of formed complex, which occurred due to the inclusion of ring A of TRI on CDs cavity. Physicochemical aspects of solid binary and ternary complexes prepared by spray drying were assessed by using FTIR, X-ray diffraction and SEM photographs. Dissolution studies showed that binary and ternary associations presented higher dissolution efficacy in detrimental to pure drug system. In addition, the ternary complex containing TEA and RM?CD allowed drug dissolution faster than binary complex with RM?CD. Therefore, given the higher solubility and drug dissolution rate, binary and ternary complexes are new raw materials with great potential for pharmaceuticals containing triamcinolone.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-04-04T18:40:22Z No. of bitstreams: 1 CamillaCarlaDoNascimentoDantasCardoso_DISSERT.pdf: 1584071 bytes, checksum: f40f4e02e45ed4aae3bbf022f745a170 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-04-12T21:48:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CamillaCarlaDoNascimentoDantasCardoso_DISSERT.pdf: 1584071 bytes, checksum: f40f4e02e45ed4aae3bbf022f745a170 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-12T21:48:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CamillaCarlaDoNascimentoDantasCardoso_DISSERT.pdf: 1584071 bytes, checksum: f40f4e02e45ed4aae3bbf022f745a170 (MD5) Previous issue date: 2016-12-12 / A doen?a inflamat?ria intestinal (DII) engloba um espectro de dist?rbios inflamat?rios cr?nicos e ? classificada em dois subtipos principais: Colite Ulcerativa (UC) e Doen?a de Chron (DC). O tratamento da UC baseia-se no uso de anti-inflamat?rios, mas estes medicamentos na sua forma convencional geram in?meros efeitos adversos, o que estimula o desenvolvimento de pesquisas focadas na busca por novas terapias e tecnologias aplicadas aos f?rmacos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade de micropart?culas revestidas por Biopol?meros de quitosana e goma guar contendo como princ?pio ativo a triancinolona, no intuito de observar a resposta anti-inflamat?ria nos par?metros macro e microsc?picos da mucosa intestinal. Foram utilizados 56 ratos Wistar, divididos em 08 grupos de 7 animais, sendo G1: Controle negativo (aus?ncia de colite), G2: Colite, G3: Sulfassalazina (SSZ 500mg/Kg/dia), G4: Triancinolona (TR) livre 5mg/Kg/dia, G5: TR livre 10mg/Kg/dia, G6: TR livre 15mg/Kg/dia, G7: Micropart?cula de TR (15mg/Kg/dia f?rmaco encapsulado) e o grupo G8: Biopol?meros. Os resultados obtidos quanto ao par?metro de avalia??o macrosc?pica mostraram que o menor grau de les?o, com exce??o do grupo Controle negativo, foi encontrado no grupo dos Biopol?meros e SSZ quando comparado aos demais grupos: Colite, TR 5mg, TR 10mg, TR 15mg e Micropart?cula TR. Na an?lise estat?stica desse par?metro os grupos SSZ 500mg/Kg/dia, TR 15mg/kg/dia, Micropart?cula TR 15mg/Kg/dia e Biopol?meros diferiram estatisticamente quando comparadas ao grupo Colite (p<0,05), sendo esta diferen?a mais significativa no grupo dos Biopol?meros (p<0,01). Na an?lise da perda de peso, o grupo Micropart?cula TR reduziu entre 8 a 12% esse par?metro quando comparado aos grupos da Triancinolona livre, diferindo estatisticamente (p<0,05), evidenciando que a tecnologia empregada foi satisfat?ria quanto a redu??o desse efeito adverso. Na avalia??o histopatol?gica o grupo TR 15mg/kg/dia obteve o menor dano tissular, evidenciando o potencial anti-inflamat?rio do f?rmaco livre. Diante dos resultados sugere-se que a nanotecnologia com o uso das micropart?culas foi capaz de reduzir efeitos adversos, como a perda de peso e, al?m disso, obteve resultados com potencial efeito anti-inflamat?rio, apesar da libera??o de apenas 69% dos 15mg da triancinolona encapsulada em 24 horas. Assim, os estudos voltados para aplica??o da nanotecnologia e novos ativos devem crescer e ampliar com intuito de buscar novas terapias e elucidar mecanismos de a??o ainda n?o descobertos. / The inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a spectrum of chronic inflammatory disorders and is classified into two main subtypes: Ulcerative Colitis (UC) and Chron's Disease (CD). The treatment of UC is based on the use of anti-inflammatories, but these drugs in their conventional form generate numerous adverse effects, which stimulates the development of research focused on the search for new therapies and technologies applied to the drugs. The objective of this study was to evaluate the activity of microparticles coated by chitosan and guar gum biopolymers containing as active principle triamcinolone in intention to observe the anti-inflammatory response in the macroscopic and microscopic parameters of the intestinal mucosa. In total, 56 Wistar rats divided into 8 groups in 7 animals, being G1: Negative control (absence of colitis), G2: Colitis, G3: Sulfasalazine (SSZ 500mg/Kg/day), G4: Free triamcinolone (TR) 5mg/Kg/day, G5: Free TR 10mg/Kg/day, G6: Free TR 15mg/Kg/day, G7: Triamcinolone microparticle (15mg/Kg/day), G8: Biopolymers. The results obtained for the macroscopic evaluation showed that the lowest lesion degree, except for the negative control group, was found in the Biopolymer group and SSZ group when compared to the other groups: Colitis, TR 5mg, TR 10mg, TR 15mg and TR microparticle. In the statistical analysis of this parameter, the groups treated with SSZ 500mg/kg/day, TR 15mg/kg/day, TR microparticle 15mg/Kg/day and Biopolymers differed statistically when compared to the Colitis group (p<0.05), this difference being more significant in the Biopolymer group (p<0.01). In the analysis of weight loss, the TR microparticle reduced this parameter between 8 and 12% when compared to the free Triamcinolone groups, differing statistically (p<0.05), suggesting that the technology employed was satisfactory in terms of the reduction of this adverse effect. In the histopathological evaluation, the TR group 15mg/kg/day obtained the lowest tissue damage, evidencing the anti-inflammatory potential of the free drug. In view of the results, it is suggested that nanotechnology with the use of microparticles was able to reduce adverse effects, such as weight loss and, in addition, obtained results with a potential anti-inflammatory effect, despite the release of only 69% of 15mg of encapsulated triamcinolone in 24 hours. Thus, studies aimed at the application of nanotechnology and new assets should grow and expand in order to seek new therapies and elucidate mechanisms of action that have not yet been discovered.

O tratamento farmacológico de patologias bucais é conduzido, geralmente, por via de adminis-tração local. No entanto, devido ao pouco tempo de permanência do fármaco no local de ação, esse tratamento pode ser bastante comprometido. Assim, este trabalho teve por objetivo o de-senvolvimento de formas farmacêuticas que proporcionem a liberação local de triancinolona na cavidade oral. Foram produzidos filmes e comprimidos mucoadesivos a partir de polímeros naturais como gelana e pectina. Os filmes bucais foram preparados por meio de evaporação do solvente (solvent casting) utilizando diferentes quantidades de polímeros. As matérias-primas e os filmes foram caracterizados fisico quimicamente utilizando espectroscopia vibracional (in-fravermelho com transformada de Fourier e Raman) e difração de raios X. As propiedades físicas e mecânicas dos filmes também foram avaliadas. Além disso, realizou-se os ensaios de mucoadesividade e de dissolução do fármaco. Os comprimidos foram preparados por com-pressão direta usando como base os polímeros naturais. Diferentes parâmetros em relação as misturas e as formulações foram avaliados tais como as propriedades de fluxo dos pós consti-tuintes, peso médio, dureza, friabilidade e desintegração. Em relação aos filmes bucais, estes foram obtidos com sucesso através de um método simples, sem a utilização de agentes reticu-lantes, ácidos ou solventes orgânicos. Todos apresentaram bons resultados nas propriedades avaliadas, no entanto as formulações com quantidades intermediarias de polímeros foram as melhores. Dentre as formulações de comprimidos preparadas, apenas 4 apresentaram boas ca-racterísticas, no entanto, os resultados dos ensaios de dissolução mostraram que estas formula-ções têm capacidade de agir como sistema de liberação controlada de fármacos. / Pharmacological treatment of oral pathologies is usually conducted by local administration. However, due to the short time the drug stays in the site of action, this treatment can be quite compromised. Thus, the objective of this work was to develop pharmaceutical forms that pro-vide the local release of triamcinolone in the oral cavity. Mucoadhesive films and tablets were made from natural polymers such as gellan and pectin. The buccal films were prepared by sol-vent casting using different amounts of polymers. The raw materials and films were characte-rized physically chemically using vibrational spectroscopy (FTIR and Raman) and X-ray diffraction. The physical and mechanical properties of the films were also evaluated. In addi-tion, the mucoadhesive and drug dissolution tests were performed. The tablets were prepared by direct pressing with the natural polymers. Different parameters in relation to mixtures and formulations were evaluated such as the flow properties of the constituent powders, average weight, hardness, friability and disintegration. In relation to oral films, these were successfully obtained by a simple method, without the use of crosslinking agents, acids or organic solvents. All presented good results in the evaluated properties, however the formulations with interme-diate amounts of polymers were the best. Among the tablet formulations prepared, only 4 sho-wed good characteristics, however, the dissolution test results showed that these formulations have the ability to act as a controlled drug delivery system.