La trypanosomiase animale africaine (TAA) est une pathologie qui sévit en Afrique sub-saharienne et qui représente un obstacle majeur à l’élevage du bétail et à la production agricole. Cette pathologie est causée principalement par les parasites T. congolense et T. vivax. Elle affecte le bétail, les animaux domestiques et sauvages, sur un territoire de 10 millions de km2 où ces animaux cohabitent avec l’insecte vecteur, la mouche Tsé-Tsé. L’infection du bétail par ces parasites provoque une anémie sévère pouvant entraîner la mort de l’animal. Dans ce contexte, nous nous sommes intéressés à l’étude des mécanismes impliqués dans le développement de l’anémie lors de l’infection de l’animal par T. vivax. Pour cela, nous avons développé un modèle murin d’infection par T. vivax. Nous avons démontré que l’infection à T. vivax induit d’importantes modifications des acides sialiques présents à la surface des érythrocytes. De plus, nous avons établi un système expérimental « ex-vivo » qui nous a permis de montrer que l’anémie observée au cours de l’infection était dépendante du mécanisme d’érythrophagocytose. Les modifications en acides sialiques des érythrocytes constitueraient un signal de reconnaissance des érythrocytes par les cellules phagocytaires de l’hôte. Par ailleurs, nous avons mis au point des conditions de culture in vitro pour tous les stades parasitaires de T. vivax et T. congolense afin de développer des outils de génomique fonctionnelle. Ces avancées nous ont notamment permis d’identifier des enzymes de type sialidase et trans-sialidase et de détecter les activités enzymatiques correspondantes dans les formes infectieuses de ces parasites. Nous avons exprimé des trans-sialidases recombinantes et démontré qu’elles étaient capables de reproduire in vitro certaines des caractéristiques pathologiques définies in vivo : modifications en acides sialiques des érythrocytes et augmentation de l’érythrophagocytose. Par conséquent, ces travaux ont permis pour la première fois de mettre en évidence un lien entre l’expression des sialidases et trans-sialidases chez le parasite T. vivax et le développement de l’anémie au cours de la TAA. / African animal trypanosomiasis (AAT) is a parasitic disease occurring in sub-Saharan Africa. It impairs livestock development and agricultural production. This disease is mainly caused by T. congolense and T. vivax parasites and is present in livestock, domestic and wild animals, covering an area of over a 10 millions km2, that is known as the Tsé-Tsé fly belt. These infections cause severe anaemia leading to animal death in most cases. In this context, we were interested in unravelling the mechanisms responsible for anaemia caused by T. vivax infection. We developed a murine model for T. vivax infection and our data pointed out important sialic acid modifications of the mouse erythrocyte surface during infection. Additionally, an ex-vivo experimental model was established which proved that anaemia associated with infection depends on erythrophagocytosis. Consequently, we propose that sialic acid modifications associated with infection are involved in the erythrophagocytosis mechanism. Furthermore, in order to develop genetic tools we established in vitro culture conditions for all parasite forms of T. vivax and T. congolense. Parasite cultivation allowed the detection of sialidase and trans-sialidase activity and identifies the presence and function of these proteins in the mammalian form of the parasite. Moreover, trans-sialidase recombinant proteins reproduced some of the T. vivax infection characteristics such as sialic acid modification and increased erythrophagocytosis. Consequently, this work provides the first evidence that links the expression of sialidases and trans-sialidases in T. vivax with the development of anemia during AAT.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:40:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213571.pdf: 3165886 bytes, checksum: 023dbff8900bec900d8d6b2eea6e15b6 (MD5) / O Trypanosoma vivax é um hemoparasita causador de tripanosomose em

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ParmenedesDB_DISSERT.pdf: 4637846 bytes, checksum: 67d41df07b3b4f4e02d12ff7e07e99c3 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax, is a debilitating and often fatal disease in domestic animals, which causes economic losses to cause growth retardation, abortion, decreased productivity, high costs of treatment and even death of the severely affected animals. This study aims avaluate the changes caused by T. vivax on performance and carcass characteristics of sheep, with no racial pattern defined experimentally infected in Mossoró, Rio Grande do Norte, Brazil. We used 10 ovines, male, without defined racial standard (WDRS), adults of average weight 20 kg, during the finishing stage, arranged in two treatments: control group and the group infected with strain of T. vivax originating from the outbreak of Paraíba with inoculum of 1,3 x 105 viable tripomastigostas. The animals were kept in two in sheds covered for 70 days in the same management conditions and feeding. Clinical symptoms, temperature and parasitemia were monitored daily. Weekly blood tests were performed, serum biochemistry, evaluation of feed intake and weight measurements, and calculation of feed efficiency ratio and feed every 15 days. At the end of the experiment, was the sacrifice of animals for evaluation of performance and carcass traits. There was a negative effect of T. vivax in feed conversion and feed efficiency ratio (P <0.05). The average weekly weight gain of the infected group was always lower when compared to the control group. Inherent in the feed intake was observed that there was no difference (P> 0.05) in total feed consumed weekly. Only the beef ribs and ham cuts showed a significant difference (P <0.05). But it is noteworthy that the infected group showed weight of the palette, neck, back and saw, 9%, 16%, 24% and 25% lower compared to the control group. There was a negative effect on fat deposition surface (P <0.05) and longissimus muscle area (P <0.05). Trypanosomiasis caused by T. vivax can cause direct losses in animal performance of 19,72% and resulting in economic losses for rural producers of up to 45,86% when deaths occur in the herd / Tripanossomíase provocada pelo Trypanosoma vivax, é uma enfermidade debilitante e comumente fatal nos animais domésticos, que acarreta perdas econômicas por provocar crescimento retardado, aborto, queda na produtividade, altos custos de tratamento e até morte dos animais severamente afetados. O presente trabalho tem por objetivo avaliar as alterações causadas pelo T. vivax sobre o desempenho e características da carcaça de ovinos, sem padrão racial definido (SPRD), infectados experimentalmente, em Mossoró, Rio Grande do Norte, Brasil. Foram utilizados 10 ovinos machos, SPRD, adultos de peso médio 20kg, na fase de acabamento, dispostos em dois tratamentos, grupo controle e grupo infectado com cepa de T. vivax oriundo do surto da Paraíba, com inóculo de 1,3 x 105 tripomastigostas viáveis. Os animais foram mantidos em duas baias teladas, por 70 dias, em iguais condições de manejo e alimentação. Diariamente realizou-se acompanhamento de temperatura, parasitemia e sinais clínicos. Semanalmente, foram realizados exames hematológicos, bioquímico sérico, avaliação do consumo de ração e pesagens, além cálculo de conversão alimentar e índice de eficiência alimentar a cada 15 dias. Ao final do período experimental, foi realizado o sacrifício dos animais para avaliação do desempenho e das características da carcaça. Houve efeito negativo do T. vivax na conversão alimentar e no índice de eficiência alimentar (P<0,05). O ganho médio de peso semanal do grupo infectado sempre foi inferior quando comparado ao grupo controle. Inerente ao consumo de ração foi observado que não houve diferença (P>0,05) no total de ração consumida semanalmente. Somente os cortes cárneos costilhar e pernil mostraram diferença significativa (P<0,05). Contudo vale ressaltar que o grupo infectado apresentou peso da paleta, pescoço, lombo e serrote, 9%, 16%, 24% e 25% inferiores em relação ao grupo controle. Houve um efeito negativo na deposição de gordura superficial (P<0,05) e área de olho de lombo (P<0,05). A tripanossomíase causada pelo T. vivax pode causar perdas no diretamente no desempenho animal de 19,72% e resultando em perdas econômicas para o produtor de até 45.86% quando ocorre óbitos no rebanho.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ErikaSP_DISSERT.pdf: 1538043 bytes, checksum: c1e9ee9d8ad94de102cf9059d099dad1 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / This research has considered Trypanosome s outbreaks by T. vivax that occurred in four groups of little ruminants in three towns of Alto Sertão da Paraíba in 2008 and recreated the disease experimentally in caprines and ovines, in order to relate the cardiac and central nervous system injuries with the parasite. For the statistics analyses the Test of Tukey (SAS) and the Qui-square (Epi Info 6.0) were done. The natural infection evaluation was done in the first outbreak (outbreak 1) and second (outbreak 2) semester of 2008, when the clinic signs were registered, parasitemia, rectal temperature, PCV and body score. 20% of adult caprine and ovine from each flock were chosen. It was noticed that in the first outbreak, the parasitemia was significantly bigger than in the second outbreak for both species, suggesting an acute and chronic stage of the disease. There was also a significant relation between the parasitemia, the temperature, the PCV and the body score in caprines and ovines. The anemia is a more evident clinical signal of the disease, followed by weight loss. At the PCR checkup, it was noticed that all the animals checked had the parasite in the blood. To evaluate the relation between the cardiac injuries with the T. vivax, 14 male ovines were used, SRD, disposed in 3 groups, being G1 the animals evaluated up to the 20th dpi (day pos infection), the G2, animals evaluated up to the 90th dpi and the G3 which is the control group, corresponding to the days of the groups treated. The isolated from T. vivax was from the outbreak occurred from Paraiba, being inoculated 1 ml containing 107 tripomastigotes. Clinical exams were done, hematological and anatomic-pathological. The animals presented hyperthermia, hydrothorax, ascites and hidropericardium. To the necropsy, the heart from an ovine from G2 presented evidences of cardiac failure. In the histological exam, hyaline necrosis was noticed, miocarditis with infiltrated inflammatory, besides fibrosis, suggestive of cardiac failure. In the evaluation of the injuries at the SNC related to T. vivax 12 male caprines were used, SRD, also disposed in three groups: G1 (animals evaluated in the acute stage of the disease), G2 (animals evaluated at the chronic stage of the disease) and G3 (control group). The isolated from T. vivax was due to an outbreak from ovines in Paraíba, being inoculated 1 ml containing 1.25 x 105 tripomastigotes. Within this study, besides the clinical exams, hematological and anatomic-pathological exams, the biochemical exam of the LCR were also done. The animals presented tetany, bruxism, opisthotonos and severe hyperthermia. In the exam of the LCR, there was a significant increase of the proteins in general and cellularity, as well as glicorrhachia and tubidez LCR. In the histological exam, meningoencephalitis was noticed, characterized by the presence of infiltrated inflammatory, besides morules cells (cells of Mott). / Este trabalho avaliou surtos de tripanossomíase por T. vivax que ocorreu em quatro rebanhos de pequenos ruminantes em três municípios do alto sertão da Paraíba em 2008 e reproduziu a doença experimentalmente em caprinos e ovinos, a fim de relacionar as lesões cardíacas e do sistema nervoso central com o parasita. Para análise estatística foi realizado o teste de Tukey (SAS) e o Qui-quadrado (Epi Info 6.0). A avaliação da infecção natural foi realizada no primeiro (surto 1) e segundo (surto 2) semestre de 2008, quando foram registrados os sinais clínicos, parasitemia, temperatura retal, hematócrito e escore corporal. Foram escolhidos 20% de caprinos e ovinos adultos de cada rebanho. Foi observado que no surto 1, a parasitemia foi significativamente maior que no surto 2 para ambas as espécies, sugerindo uma fase aguda e crônica da doença. Houve também uma relação significativa entre a parasitemia, a temperatura, o hematócrito e o escore corporal em caprinos e ovinos. A anemia é o sinal clínico mais evidente na enfermidade, seguida da perda de peso. Ao exame da PCR, foram verificados que todos os animais avaliados possuíam o parasita no sangue. Para avaliar a relação das lesões cardíacas com o T. vivax foram utilizados 14 ovinos machos, SRD, dispostos em 3 grupos, sendo G1 os animais avaliados até o 20o dpi (dias pós-infecção), o G2, animais avaliados até o 90o dpi e o G3 que é o grupo controle, correspondente aos dias dos grupos tratados. O isolado do T. vivax foi proveniente do surto ocorrido na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 107 tripomastigotas. Foram realizados exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos. Os animais apresentaram hipertermia, hidrotórax, ascite e hidropericárdio. À necropsia, o coração de um ovino do G2 apresentou evidências de insuficiência cardíaca. No exame histológico, observou-se necrose hialina, miocardite com infiltrado inflamatório, além de fibrose, sugestivo de insuficiência cardíaca. Na avaliação das lesões no SNC relacionadas ao T. vivax foram utilizados 12 caprinos machos, SRD, também dispostos em três grupos: G1 (animais avaliados na fase aguda da doença), G2 (animais avaliados na fase crônica da doença) e G3 (grupo controle). O isolado do T. vivax foi decorrente de um surto em bovinos na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 1,25 x 105 tripomastigotas. Neste estudo, além dos exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos foram realizados também o exame bioquímico do LCR. Os animais apresentaram tetania, bruxismo, opistótono e hipermetria acentuada. No exame do LCR, houve um aumento significativo das proteínas totais e celularidade, bem como glicorraquia e tubidez do líquor. No exame histológico foi verificada meningoencefalite, caracterizada pela presença de infiltrado inflamatório, além de células morulares (células de Mott).

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-06-21T13:48:12Z No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-06-22T11:39:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-06-22T11:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T11:42:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Agência Nacional do Petróleo / Whereas some species of trypanosomatids are capable of being transmitted by sexual intercourse and colostrum, these ways of transmission have not been proved yet through the trypanosomiasis caused by trypanosoma vivax. The actual study aimed to research trough the polymerase chain reaction (PCR) the presence of DNA of T. vivax on semen from goats infected by experiments and in the colostrum of infected goats at the last trimester of gestation. It also investigates the possibility of transmission in goats from the parasite through sexual intercourse between the male and female infected goats to those proles by breastfeeding six male goats were used in the experiment to test sexual transmission, which were intravenously infected with 0.5 ml of blood containing approximately 1.25 × 10⁵ trypomastigotes of T. vivax and 6 male goats that were not infected for being a group control. It was collected some samples of semen to the T. Vivax DNA analysis through a polymerase chain reaction (PCR). Six not infected goats by T. vivax, the ones of the Saanen breed, were mated with infected males. In order to analyze the transmission of T. vivax through sexual intercourse, after mating, the goats were submitted to parasitological (blood smear) and molecular (PCR) tests. At the experiment to test the transmission by colostrum were used twelve goats of the Saanen breed were assessed at the trial transmission by colostrum. from this analysis, six goats were infected and the other six ones were analyzed as control to observe the presence of the parasite DNA in the colostrum collected after calving, and later, this colostrum was ministered to newborns from others healthy goats. Then, the same ones were submitted to parasitological and molecular tests. The detection of T. vivax DNA (TviCatL-PCR) on samples of semen by the PCR technique proved to be effective in all those animals and periods of observations. It was also observed the presence of the parasite DNA in some colostrum samples from goats. However, the results for the transmission trials on goats of the first experiment and on newborns breastfeed of the second experiment were negative. Despite the negatives results on transmission, we cannot eliminate the possibility of transmission by sexual intercourse and colostrum since others factors may be involved / Considerando que algumas espécies de tripanossomatídeos são capazes de serem transmitidas por via sexual e pelo colostro. Estas vias de transmissão ainda não foram comprovadas na tripanossomose provocado por Trypanosoma vivax, o presente estudo teve como objetivos, pesquisar através da reação em cadeia da polimerase (PCR) a presença do DNA do T. vivax no sêmen de caprinos infectados experimentalmente, no colostro de cabras infectadas no terço final da gestação, investigar a possibilidade da transmissão em caprinos do parasita pela via sexual do macho para a fêmea e das cabras infectadas para bezerros saudáveis através da amamentação. No experimento para testar a transmissão sexual foram utilizados seis caprinos machos, os quais foram infectadas por via intravenosa com 0,5 ml de sangue contendo aproximadamente 1,25 × 105 tripomastigotas de T. vivax e seis caprinos machos que não foram infectados para serem um grupo controle. Foram coletadass de amostras de sêmen, para a pesquisa do DNA do T. vivax no sêmen através da realização do exame de reação em cadeia da polimerase (PCR). Seis cabras da raça saanen não infectadas por T. vivax foram acasaladas com os machos infectados. Para avaliar a transmissão do T. vivax pela via sexual, após o acasalamento as cabras foram submetidas a exames parasitológicos (esfregaço sanguíneo) e moleculares (PCR). No experimento para testar a transmissão pelo colostro foram usadas doze cabras da raça saanen, onde seis foram infectadas e seis foram usadas como controle, para observar a presença do DNA do parasita no colostro coletado após o parto, posteriormente o colostro foi ministrado para filhotes recém-nascidos de outras cabras saudáveis, depois os mesmos foram submetidos a exames parasitológicos e moleculares. A detecção do DNA de T. vivax (TviCatL-PCR) em amostras de sêmen pela técnica de PCR revelaram-se positivas em todos os animais e em todos períodos de observação. Também foi observado a presença do DNA do parasita em algumas amostras de colostro das cabras. Porém os resultados para as possibilidades da transmissão mostraram negativas tanto nas cabras cobertas do primeiro experimento como dos filhotes amamentados do segundo experimento. Apesar dos resultados negativos na transmissão, não podemos anular a possibilidade de transmissão sexual e pelo colostro já que outros fatores podem estar envolvidos / 2017-06-19

Orientador: Fabiano Antonio Cadioli / Coorientador: Luiz Carlos Marques / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Letícia Andreza Yonezawa / Resumo: Infecções pelo hemoprotozoário T. vivax causam grandes prejuízos à pecuária da África e Américas Central e do Sul. Surtos devido a este protozoário têm ocorrido com frequência cada vez maior no Brasil. O conhecimento das alterações que ocorrem durante a evolução desta enfermidade podem ser de grande valia. Para tanto foram estudados os sinais clínicos, parasitemia, alterações hematológicas, bioquímicas, sorológicas e anatomopatológicas de três bovinos naturalmente infectados (grupo N) e outros três experimentalmente infectados (grupo E) pelo T. vivax. com média de peso de 500 kg e 548 kg, respectivamente. O período pré-patente foi de dois a três dias (grupo E). Animais do grupo N apresentaram perda de peso intensa (140 Kg). No grupo E observou-se constante diminuição da contagem global de eritrócitos, teor de hemoglobina e volume globular (VG). O leucograma revelou alterações mais evidentes para o grupo E, com leucopenia por neutropenia e linfopenia durante a fase aguda da enfermidade. O grupo N apresentou um quadro de leucocitose por neutrofilia. Foram observados diminuição do colesterol total, colesterol ligado ao HDL, albumina, aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e aumento da glicose, globulinas, proteínas e fosfatase alcalina (FA) para o grupo E. Os animais do grupo E mostraram-se positivos tanto para Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) quanto para o ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA), fato que não ocorreu no grupo N, sendo este positivo para RIFI e alternando entre períodos positivos e negativos frente ao ELISA. No proteinograma, os bovinos do grupo E apresentaram inicialmente um incremento de ceruloplasmina, com posterior redução; valores elevados de transferrina praticamente por todo o período experimental; e um aumento inicial de haptoglobina com posterior redução. O grupo N apresentou valores baixos de ceruloplasmina, transferrina e ... / Abstract: Infections by T. vivax cause great losses to livestock in Africa and Central and South America. Outbreaks due to this parasite have been occurred with increasing frequency in Brazil. Knowledge of changes that occur during the development of disease can be of great value. In order to evaluate clinical signs, parasitemia, hematologic, biochemical, serological and pathological changes caused by T. vivax, three naturally (group N) and three experimentally (group E) infected bovines by T. vivax, with an average weight of 500 and 548 kg, respectively, were studied. The observed prepatent period was two to three days (group E). Animals of group N showed severe weight loss (140 kg). Reduction of erythrocyte numbers, hemoglobin concentration and PCV were observed in group E. WBC showed pronounced changes for group E, such as severe neutropenia and lymphopenia during the acute phase of the illness. Group N showed leukocytosis by neutrophilia. Decrease in total cholesterol, HDL cholesterol, albumin, aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH), and increased in glucose, globulin, protein, and alkaline phosphatase (ALP) were observed in group E. Animals from group E were positive for both Immunofluorescence Assay (IFA) and for the Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), which did not occur in group N that was positive in IFAT and alternating between positive and negative periods in ELISA. Proteinogram of group E showed initially an increase of ceruloplasmin, which was later reduced, high values of transferrin almost the entire experimental period. On the hand, haptoglobin showed an initial increase with subsequent reduction in group E. In group N, low levels of ceruloplasmin, transferrin and haptoglobin were observed. Histopathological examination showed alterations mainly in were liver, spleen, heart, lung, lymph node, kidney and central nervous system. Changes mainly consisted in mononuclear inflammatory infiltrate in liver ... / Mestre

Orientador: Marcos Rogério André / Resumo: Micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas) são bactérias Gram-negativas que parasitam a superfície de eritrócitos de uma ampla variedade de mamíferos. Mycoplasma wenyonii e ‘Candidatus Mycoplasma haemobos’ são espécies de hemoplasmas relatadas em bovinos, podendo causar anemia hemolítica e redução na produção de carne e leite e, consequentemente, prejuízos econômicos. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de hemoplasmas em bovinos de corte no Pantanal brasileiro, área endêmica para tripanossomíase bovina na América do Sul. Adicionalmente, objetivou-se caracterizar molecularmente os genótipos de hemoplasmas encontrados. Para tal, amostras de sangue e soro de 400 bovinos de corte foram colhidas em cinco propriedades do município de Corumbá, sub-região da Nhecolândia, estado de Mato Grosso do Sul, centro-oeste brasileiro. As amostras de sangue foram submetidas à extração de DNA e a ensaios de PCR convencional para hemoplasmas baseados no gene 16S rRNA. As sequências obtidas foram submetidas a inferências filogenéticas, análises de distância e de diversidade genotípica. O Ensaio Imunoenzimático Indireto (iELISA) mostrou a presença de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em 89,75% dos animais amostrados, confirmando a endemicidade para o referido agente na região sob estudo. Dentre as 400 amostras de sangue de bovinos testadas, 2,25% (9/400) mostraram-se positivas na cPCR para hemoplasmas. A análise filogenética das sequências obtidas confirmou a presença de DN... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Hemotrophic mycoplasmas (haemoplasmas) are Gram-negative bacteria that parasitize the surface of erythrocytes of a wide variety of mammals. Mycoplasma wenyonii and 'Candidatus Mycoplasma haemobos' are hemoplasma species reported in cattle, which can cause hemolytic anemia and reduction in meat and milk production and, consequently, economic losses. The present study aimed to investigate the occurrence of haemoplasmas in beef cattle in the Brazilian Pantanal, an area endemic for bovine trypanosomiasis in South America. In addition, the work aimed to characterize molecularly the genotypes of haemoplasmas found. For this purpose, blood and serum samples of 400 beef cattle were collected from five properties in the municipality of Corumbá, sub-region of Nhecolândia, in the state of Mato Grosso do Sul, central-western Brazil. Blood samples were subjected to DNA extraction and cPCR assays for haemoplasmas based on 16S rRNA gene. The sequences obtained were submitted to phylogenetic inferences, distance analysis and genotype diversity. The Indirect Immunoenzymatic Assay (iELISA) showed the presence of anti-Trypanosoma vivax IgG antibodies in 89.75% of the animals sampled, confirming the endemicity for this agent in the studied region. Among the 400 bovine blood samples tested, 2.25% (9/400) were positive in cPCR for haemoplasmas. Phylogenetic analysis of the sequences obtained confirmed the presence of DNA 'C. M. haemobos' and M. wenyonii in 0.5% (2/400) and 1.75% (7/400) animals, r... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-14Bitstream added on 2015-04-09T12:48:09Z : No. of bitstreams: 1 000814014.pdf: 1627484 bytes, checksum: ce0b86b09943b35b985a7f8be30c27d6 (MD5) / Infecções pelo hemoprotozoário T. vivax causam grandes prejuízos à pecuária da África e Américas Central e do Sul. Surtos devido a este protozoário têm ocorrido com frequência cada vez maior no Brasil. O conhecimento das alterações que ocorrem durante a evolução desta enfermidade podem ser de grande valia. Para tanto foram estudados os sinais clínicos, parasitemia, alterações hematológicas, bioquímicas, sorológicas e anatomopatológicas de três bovinos naturalmente infectados (grupo N) e outros três experimentalmente infectados (grupo E) pelo T. vivax. com média de peso de 500 kg e 548 kg, respectivamente. O período pré-patente foi de dois a três dias (grupo E). Animais do grupo N apresentaram perda de peso intensa (140 Kg). No grupo E observou-se constante diminuição da contagem global de eritrócitos, teor de hemoglobina e volume globular (VG). O leucograma revelou alterações mais evidentes para o grupo E, com leucopenia por neutropenia e linfopenia durante a fase aguda da enfermidade. O grupo N apresentou um quadro de leucocitose por neutrofilia. Foram observados diminuição do colesterol total, colesterol ligado ao HDL, albumina, aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e aumento da glicose, globulinas, proteínas e fosfatase alcalina (FA) para o grupo E. Os animais do grupo E mostraram-se positivos tanto para Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) quanto para o ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA), fato que não ocorreu no grupo N, sendo este positivo para RIFI e alternando entre períodos positivos e negativos frente ao ELISA. No proteinograma, os bovinos do grupo E apresentaram inicialmente um incremento de ceruloplasmina, com posterior redução; valores elevados de transferrina praticamente por todo o período experimental; e um aumento inicial de haptoglobina com posterior redução. O grupo N apresentou valores baixos de ceruloplasmina, transferrina e ... / Infections by T. vivax cause great losses to livestock in Africa and Central and South America. Outbreaks due to this parasite have been occurred with increasing frequency in Brazil. Knowledge of changes that occur during the development of disease can be of great value. In order to evaluate clinical signs, parasitemia, hematologic, biochemical, serological and pathological changes caused by T. vivax, three naturally (group N) and three experimentally (group E) infected bovines by T. vivax, with an average weight of 500 and 548 kg, respectively, were studied. The observed prepatent period was two to three days (group E). Animals of group N showed severe weight loss (140 kg). Reduction of erythrocyte numbers, hemoglobin concentration and PCV were observed in group E. WBC showed pronounced changes for group E, such as severe neutropenia and lymphopenia during the acute phase of the illness. Group N showed leukocytosis by neutrophilia. Decrease in total cholesterol, HDL cholesterol, albumin, aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH), and increased in glucose, globulin, protein, and alkaline phosphatase (ALP) were observed in group E. Animals from group E were positive for both Immunofluorescence Assay (IFA) and for the Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), which did not occur in group N that was positive in IFAT and alternating between positive and negative periods in ELISA. Proteinogram of group E showed initially an increase of ceruloplasmin, which was later reduced, high values of transferrin almost the entire experimental period. On the hand, haptoglobin showed an initial increase with subsequent reduction in group E. In group N, low levels of ceruloplasmin, transferrin and haptoglobin were observed. Histopathological examination showed alterations mainly in were liver, spleen, heart, lung, lymph node, kidney and central nervous system. Changes mainly consisted in mononuclear inflammatory infiltrate in liver ...

Orientador: Fabiano Antonio Cadioli / Resumo: Trypanosoma vivax é hemoparasita que infecta ruminantes e causa grandes perdas econômicas na pecuária, reduzindo os índices produtivos e reprodutivos dos animais. A principal alteração causada pelo parasita é anemia, podendo em alguns casos levar a sinais clínicos neurológicos e eventualmente levar o animal ao óbito. Os sinais clínicos são inespecíficos, fato que dificulta seu diagnóstico. O correto diagnóstico e tratamento são fundamentais para o efetivo controle da doença. Desta forma, o presente trabalho objetivou utilizar a LAMP, cPCR, RIFI e ELISA como ferramentas diagnósticas para verificar a cura parasitológica e soronegativação de caprinos experimentalmente infectados por T. vivax após o tratamento com o diaceturato de diminazeno (DM) ou cloridrato de isometamidium (ISM), além de avaliar as alterações histopatológicas do encéfalo para esclarecer melhor os mecanismos que levam a manifestações neurológicas. No presente trabalho detectamos anemia nos animais experimentalmente infectados por T. vivax e o parasita apresentou resistência a ambos os medicamentos, a qual foi comprovada por métodos sorológicos e moleculares. Também foram detectadas alterações na celularidade do neurópilo de animais infectados, o que pode resultar em danos aos neurônios e no desenvolvimento dos sinais clínicos neurológicos nos animais cronicamente infectados. Concluímos que o isolado testado no experimento foi resistente aos quimioterápicos testados, sendo a melhor forma de diagnóstico a associ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanosoma vivax is a hemoparasite that infects ruminants and causes huge economic losses in livestock, reducing animals productive and reproductive indexes. The main alteration caused by this parasite is anemia and may eventually lead animal to death. The clinical signs are nonspecific which explains the correct diagnosis difficult. Correct diagnosis and treatment are essential for the effective control of this disease. Thus, the goals of this present work was use tools diagnostics molecular (LAMP and PCR) and serological (ELISA and IFAT) to verify the parasitological cure and seronegativation of goats experimentally infected with T. vivax after treatment with diminazene diaceturate (DM) or isometamidium hydrochloride (ISM), besides assess histological alterations in ruminants' brains to elucidate the mechanism that cause neurologic disorders. In our study we detected anemia and, parasitic resistance to both drugs in animals experimentally infected with T. vivax, which was confirmed by serologic and molecular methods. Additionally, we detected alterations in neuropyl cells of infected animals, which may cause injuries in neuron and consequently neurologic signs in chronic infected animals. Therefore, we conclude that the tested T. vivax isolate was resistant to both drugs, being the best way of diagnosis is the association of serologic and molecular methods and T. vivax cause alterations in neuropyl cells. / Doutor

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarlaMFR_DISSERT.pdf: 8952326 bytes, checksum: aa0d56e13b65d722f12ebb158cf3f48d (MD5) Previous issue date: 2014-07-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study aimed to determine the rate of ovarian follicles degeneration and search for the presence of parasite DNA by PCR in ovarian tissue from goats experimentally infected with Trypanosoma vivax. Six goats, females, adults were infected with 1.25 x105 trypomastigotes of T. vivax and four others formed the control group. After 60 days of infection, was collected from the ovaries and performed the pathological examination. Samples of ovaries were taken to perform the polymerase chain reaction (PCR). The parasitemia was observed from the third day post-infection (dpi) with peaks in the 7-14th dpi. Histological analysis showed that the group of infected goats, the average value of follicles was significantly lower (P <0.05) compared to the control group. As the stage of development in the control group, the number of primordial and primary follicles was significantly higher (p <0.05) than the secondary and tertiary. As for integrity, no significant difference in the average value of the follicles degenerate type I between control and infected. The number of follicles degenerate type II was significantly higher (p <0.05) in the infected group than in the control group, and most degenerate type II follicles were primordial and primary. The analysis of T. vivax in ovarian tissues by PCR specific for T. vivax (TviCatL-PCR) showed amplification of a DNA fragment of approximately 177 bp was observed in right and left ovaries of all the goats of the infected group. The result of PCR, however, was negative for all samples in the control group. The follicular degeneration associated with the presence of the parasite in the ovaries, as detected by PCR, suggesting the involvement of the parasite in the etiopathogenic mechanism of reproductive harm / Este estudo teve como objetivo a determinação da taxa de degeneração de folículos ovarianos e pesquisar por PCR a presença do DNA do parasita em tecido ovariano de cabras infectadas experimentalmente com Trypanosoma vivax. Seis cabras, fêmeas, adultas, foram infectadas com 1,25x105 tripomastigotas de T. vivax e outras quatro formaram o grupo controle. Após 60 dias de infecção, foi feita a coleta dos ovários e realizado o exame anatomopatológico. Amostras de ovários foram tomadas para a realização da reação em cadeia da polimerase (PCR). A parasitemia foi observada a partir do 3o dia pós-infecção (dpi) com picos nos 7-14os dpi. A análise histológica mostrou que no grupo de cabras infectadas, o valor médio de folículos, foi significativamente menor (P <0,05) quando comparado ao grupo controle. Quanto ao estágio de desenvolvimento, no grupo controle, o número de folículos primordiais e primários foi significativamente maior (p <0,05) do que o secundário e terciário. Quanto à integridade, não houve diferença significativa no valor médio dos folículos degenerados tipo I entre o controle e infectados. O número de folículos degenerados do tipo II foi significativamente maior (p <0,05) no grupo infectado que no grupo controle, e a maioria dos folículos degenerados tipo II eram primordiais e primários. A análise de T. vivax nos tecidos ovariano pelo PCR específico para T. vivax (TviCatL-PCR) mostrou a amplificação de um fragmento de DNA de aproximadamente 177 pb que foi observado nos ovários direito e esquerdo de todos as cabras do grupo infectado. O resultado do PCR, entretanto, foi negativo para todas as amostras do grupo controle. A degeneração folicular associada à presença do parasita nos ovários, detectada por PCR, sugerem a participação do parasita no mecanismo etiopatogênico de danos reprodutivos