O presente estudo teve como objetivo avaliar a associação entre o polimorfismo da β-lactoglobulina e as características físico-químicas (pH, acidez e crioscopia), de composição (gordura, sólidos totais, uréia, proteína bruta, proteína verdadeira, nitrogênio não-protéico e caseína), e de estabilidade do leite. Para tanto, 11 rebanhos leiteiros foram selecionados, 5 da raça Holandesa e 6 da raça Girolanda, dos quais foram coletadas 4 amostras de leite de 164 vacas da raça Holandesa e 74 da raça Girolanda, sendo duas coletas realizadas na estação das secas e 2 na estação das chuvas. Cada amostra foi submetida à análise de composição e de características físico-químicas. Para a identificação do genótipo para β-lactoglobulina, foram coletadas amostras de sangue de cada vaca, as quais foram submetidas à reação de polimerase em cadeia (PCR), determinando-se as freqüências alélicas e genotípicas dos animais. A estabilidade do leite foi avaliada pelo teste de estabilidade ao etanol, nas seguintes concentrações alcoólicas: 70, 76, 80 e 84ºGL. As freqüências genotípicas foram 0,28, 0,30 e 0,41 para os genótipos AA, AB e BB, respectivamente. A freqüência do alelo B foi maior que do alelo A, 0,52 e 0,47, para a raça Holandesa, e 0,58 e 0,41, para a raça Girolanda, respectivamente. Não houve efeito do polimorfismo da β-lactoglobulina (AA, AB e BB), entre os animais das raças, avaliadas sobre as propriedades físico-químicas e a composição do leite. Observou-se efeito de raça (Holandesa e Girolanda, respectivamente) sobre a acidez titulável (16,16 e 17,07°D) e pH (6,78 e 6,75), e de composição do leite quanto as variáveis gordura (3,31 e 3,20%), NUL (16,62 e 14,45mg/dL) e PB (3,13 e 3,04%). Houve efeito da estação (chuvosa e seca, respectivamente) sobre as características físico-químicas de acidez titulável (16,62 e 16,34°D), pH (6,76 e 6,79) e crioscopia (-0,5411 e -0,5376°H), e de composição do leite quanto as variáveis lactose (4,34 e 4,50%), sólidos totais (11,65 e 11,90%), LogCCS (2,44 e 2,34), PB (3,08 e 3,14%), PV (2,84 e 2,91%), caseína (2,01 e 2,13%) e relação caseína:proteína verdadeira (0,70 e 0,72). Verificou-se também efeito da raça e estação do ano sobre a estabilidade do leite, sendo que o leite foi mais instável para raça Girolanda e durante a estação seca, mas não se observou efeito do polimorfismo da β-lactoglobulina sobre esta característica. / The objective of this study was to evaluate the association between beta-lactogobulin polymorphism and physico-chemical characteristics, composition (fat, total solids, urea, crude protein, true protein, non protein nitrogen and casein), and stability of milk. For this aim, 11 dairy herds were selected, six of them composed of crossbred Holstein-Zebu (H-Z) cows and five from Holstein cows. Milk samples were taken four times (twice in dry season and twice in rainy season), from 278 Holstein and 156 crossbred Holstein-Zebu cows. Individual milk samples were analyzed for milk composition and physico-chemical properties. For β-lactoglobulin polymorphism analysis, 10 mL of blood samples were ollected from each cow and then submitted to polymerase chain reaction (PCR). Following β-lactoglobulin protein variants detection, genotype and allele frequencies for the 11 herds were analyzed. Heat stability of milk was determined by the alcohol-induced precipitation test, using the following ethanol concentrations 70, 76, 80 and 84ºGL. The genotype frequencies were 0.28, 0.30 and 0.41 for AA, AB and BB, respectively. Allele B frequency was higher than A, 0.52 and 0.47, for Holstein cows, 0.58 and 0.41, for Holstein-Zebu, respectively. Genetic variants of β-lactoglobulin (AA, AB and BB) had no effect on physico-chemical (acidity, pH and crioscopy), and compositional characteristics (fat, total solids, urea, crude protein, non-protein nitrogen, true protein and casein percentages), either among milk from Holstein cows, or from crossbred Holstein-Zebu. Breed effect for Holstein and H-Z on titrable acidity (16,16 and 17,07°D, respectively), pH (6,78 and 6,75, respectively), fat (3,31e 3,20%, respectively), milk urea nitrogen (16,62 e 14,45mg/dL, respectively) and crude protein (3,13 e 3,04%, respectively) could be observed. Effect of seasonality between rainy and dry seasons was also observed on physico-chemical variables of titrable acidity (16,62 and 16,34°D, respectively), pH (6,76 and 6,79, respectively) and freezing point (-0,5411and -0,5376°H, respectively), and on composition characteristics of lactose (4,34 and 4,50%, respectively), total solids (11,65 and 11,90%, respectively), LogCCS (2,44 and 2,34, respectively), crude protein (3,08 and 3,14%, respectively), true protein (2,84 and 2,91%, respectively), casein content (2,01 and 2,13%, respectively) and casein:true protein ratio (0,70 and 0,72, respectively). Effect of breed and seasonality on milk ethanol stability test was observed. Holstein-Zebu milk was ethanol-unstable on dry season. No effect of β-lactoglobulin on milk stability was observed.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nitric oxide (NO) is an important regulator of ovarian activity, and is produced by a family of nitric oxide synthases (NOS), being inducible (iNOS) and endothelial (eNOS) isoforms present in the ovaries of several species. In cows, even though NO production had been demonstrated in follicular fluid and by granulosa cells (GC) cultured in vitro, it is not known which enzyme is responsible for NO synthesis or how expression is regulated during follicular development. The objectives of the present study were to determine the abundance of iNOS and eNOS mRNAs in dominant and subordinate follicles in vivo, to determine the regulation of iNOS expression by FSH, growth factors and estradiol (E2) in vitro, to stimulate NO production in bovine CG and to determine the action of iNOS on bovine granulosa cell health/apoptosis. The two largest follicles on days 1 to 5 of the first follicular wave of the cycle were collected from each pair of ovaries from six cows. Dominant follicles presented higher levels of mRNA for iNOS compared to subordinate follicles (P<0.01). GC cultures were performed with ovaries collected at abattoir. FSH (P<0.05) and IGF1 (P<0.01) stimulated E2 secretion and upregulated iNOS mRNA abundance in a dose-dependent manner. Moreover, both FGF2 (P<0.05) and EGF (P<0.01) decreased iNOS expression and E2 secretion in FSH and IGF-treated cells, respectively. Graded doses of FSH in the presence of a non-aromatizable androgen (DHT) did not stimulate iNOS mRNA level. In addition, both FSH and IGF1 in the presence of an estrogen receptor antagonist were not able to upregulate iNOS mRNA abundance, whereas E2 alone stimulated NO production in vitro. In terms of cell health/apoptosis, the treatment with an iNOS-selective inhibitor increased the pro-apoptotic factor FasL mRNA levels and the percentage of dead cells (P<0.05). In conclusion, bovine granulosa cells express predominantly iNOS, and increased iNOS mRNA levels are associated with emergence of the dominant follicle. FSH and IGF1 stimulate iNOS mRNA levels through increased E2 secretion, and physiological levels of NOS activity may contribute to growth and survival of bovine granulosa cells. / O óxido nítrico (NO) é um importante regulador da atividade ovariana que é produzido a partir da ação de uma família de enzimas denominadas sintases do óxido nítrico (NOS). As isoformas induzível (iNOS) e endotelial (eNOS) estão presentes nos ovários de diversas espécies. Em vacas, embora a produção de NO já tenha sido detectada no fluído folicular e também no meio de cultivo de células da granulosa (CG), não se sabe qual enzima é responsável pela síntese de NO nem como ocorre a regulação de sua expressão ao longo do desenvolvimento folicular. Os objetivos do presente estudo foram determinar a abundância de RNAm para iNOS e eNOS em CG provenientes de folículos dominantes e subordinados in vivo; determinar a regulação da expressão da iNOS por FSH, fatores de crescimento e estradiol (E2) in vitro; estimular a produção de NO e determinar a ação da iNOS na relação entre saúde e apoptose das CG bovina. Foram coletados os dois maiores folículos presentes em cada par de ovários de seis vacas entre os dias 1 e 5 da primeira onda folicular do ciclo estral. Folículos dominantes apresentaram níveis mais elevados de RNAm para iNOS comparados aos folículos subordinados (P<0.01). Cultivos de CG foram realizados com ovários coletados em abatedouro. Ambos FSH (P<0.05) e IGF1 (P<0.01) estimularam a secreção de E2 e a expressão de iNOS de maneira dose-dependente. Além disso, tanto FGF2 (P<0.05) como EGF (P<0.01) diminuiram a expressão de iNOS e a secreção de E2 em células tratadas com FSH e IGF1, respectivamente. Utilizando diferentes doses de FSH na presença de um andrógeno não-aromatizável (DHT), não foi possível estimular a expressão de iNOS. Ainda, tanto o FSH como o IGF1 não foram capazes de elevar a abundância de RNAm para iNOS na presença de um antagonista não seletivo dos receptores de E2, enquanto que, E2 sozinho estimulou a produção de NO em CG in vitro. No que diz respeito à relação saúde/apoptose das CG, o tratamento com um inibidor seletivo da iNOS aumentou os níveis de RNAm para o fator pró-apoptótico FasL e o percentual de células mortas (P<0.05). Concluindo, células da granulosa bovina expressam predominantemente iNOS, sendo que o aumento da expressão dessa isoforma está associado com a emergência do folículo dominante. FSH e IGF1 promovem o aumento dos níveis de RNAm para a iNOS através do estímulo da secreção de E2 e, níveis fisiológicos da atividade das NOS podem contribuir para o crescimento e sobrevivência das células da granulosa bovina.

Foram utilizados 263.390 registros de produção de leite do dia do controle (PDC) de 32.448 primeiras lactações de vacas da raça Holandesa obtidas no período de 1991 a 2001 para estimar componentes de variância e parâmetros genéticos, usando diferentes modelos estatísticos e a metodologia REML. Compararam-se as estimativas de valores genético (EVG) dos modelos de repetibilidade (MR) e de regressão aleatória (MRA) com às do modelo para as produções da lactação (P305). Nos MRA utilizaram-se duas curvas para descrever a trajetória da lactação: a polinomial logarítmica de Ali e Schaeffer (AS) e a exponencial de Wilmink (W), sob duas formas: a padrão e com uma modificação para reduzir a amplitude das covariáveis e contornar problemas de convergência (W Ú ). No ajuste da curva AS considerou-se heterogeneidade de variâncias residuais (VR) entre classes de dias em lactação (cDEL). A estimativa de herdabilidade para as P305 (0,27) foi menor do que àquelas para as PDC obtidas com MR, incluindo ou não a curva AS como sub modelo (0,30 e 0,43, repectivamente). As herdabilidades para as PDC por análises uni-caráter (0,22-0,36) e bi-caráter (0,23-0,33) foram menores no início e fim da lactação. As correlações genéticas entre produções de controles consecutivos foram superiores às estimadas entre controles do ínicio e do fim da lactação. As estimativas de herdabilidade por MRA com as curva AS (0,29-0,42) e W Ú (0,33-0,40) foram semelhantes, mas aquelas estimadas com a curva W (0,25-0,65) foram maiores do que as estimadas com as outras curvas pricipalmente no fim da lactação. Com os MRA as correlações genéticas foram próximas da unidade entre produções de controles consecutivos, mas reduziram com o aumento do intervalo entre controles. As estimativas de VR entre cDEL foram muito semelhantes variando de 4,15 a 5,11 para a curvas AS. Os desvios padrão (DP) para as EVG para produção de leite dos touros foram semelhantes entre os modelos AS, W Ú e MR. Entretando, os DP para as EVG foram maiores nos modelos para PDC do que no modelo a P305. As correlações entre as EVG para touros com o modelo P305 e os demais modelos aumentaram com o aumento no número de filhas e variaram de 0,66 (P305-W) a 0,92 (P305-AS e P305- W Ú ). As estimativas de tendência genética foram maiores para os MRA e menores para o MR se comparadas à estimativa obtida pelo modelo para P305. As estimativas de herdabilidade superiores para as PDC e as altas correlações (0,86-0,99) entre estas e a P305 indicam um potêncial de uso das PDC nas avaliações genéticas. Correlações genéticas heterogêneas (0,64-1,00) entre as PDC, medidas ao longo da lactação, não confimam a suposição de que elas são medidas repetidas do mesmo caráter. O MRA com a curva AS e VR homogênea foi o de melhor ajuste entre os avaliados, mas o modelo W Ú resultou em estimativas de herdabilidade mais estáveis ao longo da lactação. Na comparação dos resultados dos modelos conclui-se que o MRA com a curva AS e homonogeneidade de VR é a melhor alternativa, dentre as estudadas, para avaliação genética para produção de leite de gado Holandês no Brasil. / Covariance components and genetic parameters for milk yield from 263,390 test-day records of 32,448 first lactation Holstein cows were estimated using animal models by REML. Test-day repeatability (RM) and random regression (RR) models were compared to a 305-d lactation model (P305) to estimate breeding values. Random regression involved the five-parameter logarithmic Ali and Schaeffer function (AS) and the three-parameter exponential Wilmink function in standard (W) and modified (W*, to reduce the range of covariates and avoid convergence problems) form to model the shape of the lactation curve. Heterogeneous error variance (EV) for classes of days in milk (cDIM) was considered in adjusting the AS function. Heritability for milk yield by P305 (0.27) was smaller than those estimated for daily milk yield by RM including or not including a logarithmic sub-model (0.30 and 0.43, respectively). Heritability estimates for univariate (0.22-0.36) and bivariate models (0.23-0.33) for test-day milk yields were smallest during early and late lactation. Genetic correlations were higher for daily milk yield between consecutive test-days than between test-days at the beginning and end of lactation. Heritability estimates for AS (0.29-0.42) and W* (0.33-0.40) RR models were similar, but heritability estimates obtained for W (0.25-0.65) were higher than those estimated by other functions, particularly at the end of lactation. Genetic correlations between daily milk yield on consecutive test-days were close to unity, but they decreased with an increase of the interval between test-days. Estimates of EV for cDIM were quite similar, rating from 4.15 to 5.11 for the AS function. Standard deviations (SD) of bulls’s EBVs for milk yield were similar for AS, W* models and RM. However, SD of EBVs for bulls and cows were larger for test-day models than for P305 and for bulls they differed by -33.64 to 321.95 from the P305 depending on progeny number. SD of EBVs for bulls and cows for the W model were the largest ones. Correlation between EBVs among P305 and the other models for bulls increased as progeny number increased and ranged from 0.66 (W-P305) to 0.92 (AS-P305, W*-P305). Genetic trends were larger for RR models and smaller for RM than for P305. Larger heritability estimates for test-day models and large genetic correlations between test-day and lactation milk yields (0.86-0.99) indicated a potential use of test-day records in genetic evaluations. Heterogeneous genetic correlations (0.64-1.00) for test-day milk yields across lactation did not support the assumption that test-day records are repeated measures of the same trait. The AS homogeneous EV model was the most parsimonious and the best fit among those evaluated, but the W* model resulted in more stable heritability estimates for daily milk yield across lactation. RR models provide more information than the RM and describe the shape of the lactation curve from which EBVs for persistency can be derived. These results indicated AS as an alternative model for genetic evaluation for milk yield using test-day records of Holstein cattle in Brazil.

El control de residuos de sustancias antimicrobianas en productos de origen animal, entre los que se encuentra la leche, es de gran importancia, ya que pueden ocasionar problemas al consumidor (alergias, trastornos digestivos, resistencias a medicamentos, etc.) y, además, causar interferencias en la fabricación de productos lácteos ocasionando graves pérdidas económicas en la industria láctea. Por ello, resulta conveniente establecer un adecuado sistema de control de la presencia de residuos de aquellos antimicrobianos más utilizados en el ganado vacuno lechero, mediante métodos eficaces y prácticos que pueden ser utilizados en las explotaciones ganaderas y centros lácteos, y así evitar su llegada al consumidor. Devido a la diversidad de métodos analíticos disponibles en el mercado para la detección de antibióticos se planteó el estudio de la selectividad y sensibilidad de los métodos microbiológicos y específicos más utilizados en la etapa de cribado. En el estudio de selectividad se emplearon 14 métodos (7 microbiológicos y 7 específicos) y se analizaron, por triplicado, 100 muestras de leche procedentes de animales no tratados con ningún medicamento. La selectividad obtenida para los métodos microbiológicos fué muy elevada: BRT AiM (99%), Blue Yellow (100%) Delvotest MCS Accelerator (98%), Delvotest SP-NT (98%), Eclipse 50 (99%) y Eclipse 100 (99%) y no presentó diferencias significativas entre los métodos. También la sellectividad calculada para los métodos específicos alcanzó valores elevados: Beta Star (97%), Delvo XP (99%), Rosa MRL BL (100%), Rosa TET (99%), Snap BL y Snap TET (100%) y Twinsensor (98%) que no presentaron diferencias significativas (p<0,05), mientras que el método Penzym fue el único en el que la selectividad resultó más baja (82%) con un elevado porcentaje de resultados dudosos y estadísticamente fue diferente al resto de métodos específicos. En cuanto a la sensibilidad se calculó utilizando muestras de leche, procedentes de la mezcla de 30 / Borràs Llopis, M. (2011). Evaluación de los métodos de cribado para el control de la presencia de antibióticos en la leche cruda de vaca [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/14011 / Palancia

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A bactÃria Helicobacter pylori, à um agente etiolÃgico bem estabelecido para o desenvolvimento de lesÃes gÃstricas como gastrite, Ãlcera pÃptica, metaplasia e doenÃas malignas, com alta incidÃncia de infecÃÃo em todo mundo, porÃm cerca de 80% dos indivÃduos infectados permanecem assintomÃticos e apenas uma minoria desenvolve doenÃas a ela relacionadas. Estudos tÃm sido realizados na tentativa de identificar a relaÃÃo de genes determinantes da patogenicidade de H. pylori, entretanto, atà o momento apenas os genes cagA e o alelo de vacA s1m1 sÃo considerados marcadores de virulÃncia para o desenvolvimento de lesÃes gÃstricas mais graves. A bactÃria H. pylori possui uma alta variabilidade genÃtica, sendo que um dos mecanismos propostos para o desenvolvimento de lesÃo seria atravÃs da inflamaÃÃo. DiferenÃas na intensidade de respostas inflamatÃrias poderiam ser decorrentes do perfil genotÃpico da cepa infectante. Recentes trabalhos apontam a importÃncia dos genes cagE, virB11 de H. pylori, em cÃncer gÃstrico. Entretanto, estudos em lesÃes gÃstricas sÃo restritos. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil genotÃpico das cepas de H. pylori quanto a presenÃa dos genes de virulÃncia cagA, cagE, virB11, vacA e flaA, circulantes no estado do Cearà em 201 casos de lesÃes gÃstricas de diferentes gravidades, coletadas de pacientes dispÃpticos atendidos em trÃs hospitais de Fortaleza-CE. A detecÃÃo de H. pylori foi feita atravÃs da amplificaÃÃo do gene ureC, os genes estudados por amplificaÃÃo de fragmentos especÃficos, usando a tÃcnica de PCR, foram observados em gel de agarose 1% e poliacrilamida a 6% e 8%. Neste estudo houve um predomÃnio do sexo feminino 59% (119/201), principalmente na faixa etÃria (15-44) 30% (61/201), alta taxa de infecÃÃo por H. pylori 97,5% (196/201). A gastrite crÃnica ativa (GCA) foi a lesÃo gÃstrica mais frequente (55,7%;112/201), associada a pacientes na faixa etÃria de 15-44 (36,6% : 41/112) opondo-se à metaplasia intestinal em que, a frequÃncia dos casos aumentou com a idade sendo maior em pacientes mais velhos 46% (16/35), o que concorda com a literatura. O Ãnico caso de displasia ocorreu numa paciente > 65 anos. As lesÃes gÃstricas foram predominantemente localizadas no antro. O gene cagA foi mais frequente na gastrite crÃnica ativa (GCA), estando tambÃm em alta frequÃncia na gastrite atrÃfica (GA) e metaplasia intestinal (MI). Na GCA foi observado tambÃm alta frequÃncia dos genes cagE, virB11, vacAm1 e flaA, com diferenÃa estatÃstica, quando comparada com a gastrite crÃnica inativa (GCI) (cagA - p=0,007 cagE- p=0,000, virB11 - p=0,005, vacAm1- p=0,047 e flaA - p=0,001), sendo que os genes virB11 e flaA foram mais frequentes na GCA do que na Ãlcera. Os alelos s1 e m1 de vacA , bem como a combinaÃÃo s1m1 foram os mais frequentes nas lesÃes gÃstricas. Os casos H. pylori positivos foram agrupados de acordo com a presenÃa dos genes estudados, levando em consideraÃÃo a presenÃa do alelo s1 e os genes da ilha. Nessas anÃlises foi observada maior frequÃncia de cepas contendo os genes vacA s1 e [Ia (cagA+, cagE+ e virB11+ ) + Ib (cagA+ e virB11+; cagE+ e virB11+) ; 47,7% ] na gastrite crÃnica ativa em relaÃÃo a gastrite crÃnica inativa (GCI), esta com maior frequÃncia de cepas dos grupos [Ic (cagA+ ou cagE+ ou virB11+ ou cagA+ e cagE+) +Id (ureC+); 62%]. Adicionalmente, maior frequÃncia de cepas pertencentes aos grupos Ia e Ib foi observada na metaplasia intestinal incompleta, (59%), enquanto que na metaplasia intestinal completa uma maior frequencia de cepas pertencentes aos grupos Ic + Id, (78%) (p=0,027). Todos os casos de gastrite atrÃfica e Ãlcera eram do grupo I, e um Ãnico caso de displasia pertencia ao grupo Ia. Esses dados evidenciam uma associaÃÃo de cepas com genÃtipos mais virulentos em lesÃes com potencialidade de malignizaÃÃo. / A bactÃria Helicobacter pylori à um agente etiolÃgico bem estabelecido para o desenvolvimento de lesÃes gÃstricas como gastrite, Ãlcera pÃptica, metaplasia e doenÃas malignas, com alta incidÃncia de infecÃÃo todo mundo, porÃm cerca de 80% dos indivÃduos infectados permanecem assintomÃticos e apenas uma minoria desenvolve doenÃas a ela relacionadas. Estudos tem sido realizados na tentativa de identificar a relaÃÃo de genes determinantes da patogenicidade de H. pylori, entretanto, atà o momento apenas os genes cagA e o alelo de vacA s1m1 sÃo considerados marcadores de virulÃncia para o desenvolvimento de lesÃes gÃstricas mais graves. A bactÃria H. pylori possui uma alta variabilidade genÃtica sendo que um dos mecanismos propostos para o desenvolvimento de lesÃo seria atravÃs da inflamaÃÃo. DiferenÃas na intensidade de respostas inflamatÃrias poderiam ser decorrentes do perfil genotÃpico da cepa infectante. Recentes estudos apontam a importÃncia dos genes cagE, virB11 de H. pylori, em cÃncer gÃstrico. Entretanto, estudos em lesÃes gÃstricas sÃo restritos. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar o perfil genotÃpico das cepas de H. pylori quanto a presenÃa dos genes de virulÃncia cagA, cagE, virB11, vacA e flaA, circulantes no estado do Cearà em 201 casos de lesÃes gÃstricas de diferentes gravidades, coletadas de pacientes dispÃpticos atendidos em trÃs hospitais de Fortaleza-CE. A detecÃÃo de H. pylori foi feita atravÃs da amplificaÃÃo do gene ureC, e os genes estudados por amplificaÃÃo de fragmentos especÃficos, usando a tÃcnica de PCR, e foram observados em gel de agarose 1% e poliacrilamida a 6% e 8%. Nesse estudo houve um predomÃnio do sexo feminino 59% (119/201), principalmente na faixa etÃria (15-44) 30% (61/201), e alta taxa de infecÃÃo por H. pylori 97,5% (196/201). A gastrite crÃnica ativa (GCA), foi a lesÃo gÃstrica mais frequente (55,7%;112/201), associada a pacientes na faixa etÃria de 15-44 (36,6% : 41/112) opondo-se à metaplasia intestinal onde a frequÃncia dos casos aumentou com a idade sendo maior em pacientes mais velhos 46% (16/35), o que concorda com a literatura. O Ãnico caso de displasia ocorreu numa paciente > 65 anos. As lesÃes gÃstricas foram predominantemente localizadas no antro. O gene cagA foi mais frequente na gastrite crÃnica ativa (GCA), estando tambÃm em alta frequÃncia na gastrite atrÃfica (GA) e metaplasia intestinal (MI). Na GCA foi observado tambÃm alta freqÃÃncias dos genes cagE, virB11, vacAm1 e flaA com diferenÃa estatÃstica quando comparada com a gastrite crÃnica inativa (GCI) (cagA - p=0,007 cagE- p=0,000, virB11 - p=0,005, vacAm1- p=0,047 e flaA - p=0,001), sendo que os genes virB11 e flaA foram mais frequentes na GCA que na Ãlcera. Os alelos s1 e m1 de vacA , bem como a combinaÃÃo s1m1 foram os mais frequentes nas lesÃes gÃstricas. Os casos H. pylori positivos foram agrupados de acordo com a presenÃa dos genes estudados, levando em consideraÃÃo a presenÃa do alelo s1 e os genes da ilha. Nestas anÃlises foi observada maior frequÃncia de cepas contendo os genes vacA s1 e [Ia (cagA+, cagE+ e virB11+ ) + Ib (cagA+ e virB11+; cagE+ e virB11+) ; 47,7% ] na gastrite crÃnica ativa em relaÃÃo a gastrite crÃnica inativa (GCI), esta Ãltima com maior frequÃncia de cepas dos grupos [Ic (cagA+ ou cagE+ ou virB11+ ou cagA+ e cagE+) +Id (ureC+); 62%]. Adicionalmente, maior frequÃncia de cepas pertencentes aos grupos Ia e Ib foi observada na metaplasia intestinal incompleta, (59%), enquanto que na metaplasia intestinal completa uma maior frequencia de cepas pertencentes aos grupos Ic + Id, (78%) (p=0,027). Todos os casos de gastrite atrÃfica e Ãlcera eram do grupo I, e o Ãnico caso de displasia pertencia ao grupo Ia. Esses dados evidenciam uma associaÃÃo de cepas com genÃtipos mais virulentos em lesÃes com potencialidade de malignizaÃÃo. / The bacterium Helicobacter pylori is a well-established etiological factor in the development of gastric lesions such as gastritis, peptic ulcers, metaplasia and malignancy. The incidence of infection by this pathogen is high worldwide, but about 80% of infected individuals remain asymptomatic, and only a minority develops related diseases. Many studies have been conducted in an attempt to identify the involvement of genes in determining the pathogenicity of H. pylori, but so far, only the genes cagA and vacA allele s1m1 are considered virulence markers for the development of the more severe gastric lesions. H. pylori bacteria have a high genetic variability and one of the proposed mechanisms for lesion development is through inflammation. Differences in the intensity of inflammatory responses could be due to the genotypic profile of the infecting strain. Recent studies indicate the importance of the genes cagE and virB11, but mostly involving gastric cancer, while their role in gastric lesions is limited. The objective of this study was to determine the genetic subtypes of H. pylori strains and the presence of the virulence genes cagA, cagE, virB11 and flaA genes and vacA alleles, circulating in Ceara state, Brazil. Samples were collected from 201 cases of gastric lesions of varying severity, in dyspeptic patients treated at three hospitals in Fortaleza, Ceara State. The detection of H. pylori was performed using ureC gene amplification by PCR, and the detection of the genes studied was carried out by amplification of gene-specific fragments separated in 1% agarose gels. The sample was predominantly female (59%, 119/201) and mainly in the age group 15-44 years old (30%, 61/201), and had a high rate of H. pylori infection (97.5%, 196/201). Active chronic gastritis (ACG) was the most common gastric lesion (55.7%, 112/201), associated with patients aged 15-44 (36.6%, 41/112), unlike intestinal metaplasia, in which the frequency of cases increased with age, being higher in older patients (46%, 16/35), which agrees with the literature. A single case of dysplasia occurred in a patient > 65 years. The lesions were predominantly located in the gastric antrum and 30% of the cases had lesions located in the body and antrum simultaneously. The cagA gene was more frequent in ACG, showing a statistically significant correlation (r = 0.220, p = 0.007); it also showed a high frequency in atrophic gastritis and in intestinal metaplasia. In ACG, a high frequency of the genes cagE, virB11, flaA and vacAm1 was also statistically associated when compared to chronic inactive gastritis (ICG) (cagA - p = 0.007, cagE - p = 0.000, virB11 - p = 0.005, vacAm1 p = 0.047 and flaA - p = 0.001), and the genes virB11 and flaA were more frequent in ACG than in ulcer. The vacA alleles s1 and m1, and the combination s1m1, were the most frequent ones in gastric lesions. Considering the genotypes of H. pylori grouped by the presence of the genes studied, we observed a higher frequency of the most virulent strains in the ACG group (Ia + Ib, 47.7%) when compared to ICG, the latter showing a higher frequency of less virulent strains (Ic + Id, 62%). Additionally, a higher frequency of more virulent strains, belonging to groups Ia and Ib, was observed in incomplete intestinal metaplasia (59%), while in complete intestinal metaplasia an increased frequency of less virulent strains, belonging to the groups Ic + Id (78%) (p = 0.027), was found. All cases of atrophic gastritis and ulcer were in group I, and the single case of dysplasia belonged to group Ia (high virulence). These data indicate the important role of more virulent strains in potential malignant lesions.

Geólogo / Los centros eruptivos menores holocenos del sector de Cayutué (Centro Eruptivo Pichilaguna, Centro Eruptivo Cayutué y Centro Eruptivo Cabeza de Vaca) están ubicados entre el brazo sur del Lago Todos los Santos y la bahía de Ralún (41°10-20 S, 72°16 O). Sus productos son de composición basáltica a andesítico-basáltica y de afinidad calco-alcalina, exhibiendo significativas diferencias en términos de elementos mayores y traza, a pesar de su acotada distribución espacial. Lo anterior es expuesto, en el presente trabajo, gracias a un muestreo de alta resolución nunca antes realizado en el área. El análisis geoquímico, en roca total, de elementos mayores y traza, revela que la variabilidad geoquímica, a escala de estos centros eruptivos, se podría explicar por magmas generados desde una fuente variablemente metasomatizada, donde un mayor input de fluidos, aportados por la deshidratación del slab subductado, causaría mayores grados de fusión parcial y centros de mayor volumen en superficie. La fusión comenzaría en el manto, dentro del campo de estabilidad de la espinela (<80 km), donde una lherzolita, con un bajo contenido de anfíbola (1%), generaría distintos magmas debido a diferentes grados de fusión parcial (3,8-5,9%). Después de la generación de los fundidos, pequeños tiempos de residencia se producirían en la parte baja de la corteza, donde solo el olivino presentaría fraccionamiento. El ascenso posterior en la corteza sería más rápido y estaría asociado a la Zona de Falla Liquiñe-Ofqui, la cual causaría un mínimo efecto en la asimilación cortical y la cristalización fraccionada de minerales de más baja temperatura. Dicho ascenso ocurriría mediante diques, los cuales permiten que los fundidos, provenientes de distintos sectores del manto, no tengan la posibilidad de homogeneizarse en una cámara magmática común, y así conserven las diferencias geoquímicas observadas en los elementos mayores y trazas. Los centros eruptivos menores, a diferencia de lo que se pensaba anteriormente, no fueron generados de manera simultánea, en breves periodos de tiempo dentro del Holoceno (años). En efecto, las evidencias morfológicas y cronológicas sugieren que algunos centros fueron gestados cerca del comienzo de dicho periodo (Pichilaguna), simultáneo al incipiente llenado del lago Todos los Santos, y otros, comenzaron su actividad eruptiva hace no más de 450 años atrás (Cabeza de Vaca). Para el Centro Eruptivo Cayutué, la actividad parece haber comenzado previo al último ascenso del lago Todos los Santos (11-4 ka) y cesó hace aproximadamente 1220 años, con anterioridad a esa edad, en la porción norte, y más tarde, por el sur. Evidencias, geoquímicas y vulcanológicas, muestran que las erupciones asociadas a la formación y desarrollo de los centros eruptivos menores serían composicionalmente poligenéticas; esto pone en tela de juicio el concepto de monogenético, que aparentemente, solo sería aplicable al considerar los centros eruptivos dentro de una larga escala de tiempo geológico.

A avaliação das modificações no proteinograma do leite tem sido utilizada como meio de diagnóstico das mamites dos bovinos, pois, em decorrência dos processos inflamatórios na glândula mamária, ocorrem alterações, tanto na concentração dos componentes protéicos do leite, como também, surgimento de compostos protéicos não elaborados no processo de secreção láctea. A técnica de fracionamento protéico por eletroforese em gel de poliacrilamida mostrou-se eficiente na detecção de pequenas quantidades de proteínas em fluídos orgânicos. As características das proteínas do leite de vacas sadias, e a avaliação de possíveis fatores de variabilidade foram determinadas em 139 amostras de leite de vacas. Os animais foram, inicialmente, submetidos a exame clínico geral e do úbere, complementado por exames físico-químicos, celulares e microbiológicos do leite, complementares ao diagnóstico das mamites. Do conjunto das amostras, 97 eram de vacas sadias, em plena lactação, sendo utilizadas para estabelecer valores padrões dos constituintes do leite de vacas sadias e avaliar a influência racial - Jersey e Gir; e do número de lactações - animais em primeira lactação, duas ou três lactações e, quatro ou mais lactações sobre o proteinograma lácteo. Além do mais a amostragem serviu de base para a avaliação da fase da lactação sobre o quadro protéico e, permitiram a formação de grupos experimentais para avaliação da influência do número de células somáticas, do isolamento bacteriano e do estado de saúde do úbere no proteinograma lácteo, obtido por eletroforese em gel de poliacrilamida. Os resultados demonstraram influência significativa de fatores raciais no teor de proteína total do soro lácteo, e de suas frações imunoglobulínica, &alpha;1-antitripsina, &beta;-lactoglobulina, bem como de um conjunto de proteínas do soro lácteo separadas, mas não identificadas; influência do número de lactações no teor de albumina de origem plasmática, imunoglobulinas, &beta;-lactoglobulina e &alpha;-lactoalbumina. A fase da lactação influenciou de forma significativa os teores de proteína total do leite, assim como nas frações protéicas do soro lácteo de vacas sadias, variações evidentes na fase colostral da lactação. O número de células somáticas influenciou o proteinograma do leite, apenas nas amostras com mais de 1.500.000 células somáticas/ml. Não foi demonstrada a influência significativa do isolamento bacteriano no proteinograma lácteo de vacas. Entretanto, observou-se significativa influência da mamite no proteinograma do leite de vacas, agindo, principalmente, nas proteínas não sintetizadas no ciclo fisiológico de secreção da glândula mamária. / The evaluation of the modifications in milk proteinogram is used as a diagnostic tool for bovine mastitis, once the inflammation of the mammary glands leads to changes in the concentration of milk proteic components, as well as the appearance of proteic components that are not elaborated in the milk secretion process. The technique of protein fractioning by electrophoresis in polyacrylamide gel is effective in detecting small amounts of proteins in organic fluids. The features of milk proteins of healthy cows and the evaluation of possible variability factors were determined in 139 cow milk samples. Animals were first submitted to general clinical examination and udder examination, and to physical-chemical, cellular and microbiological milk tests, complementary to mastitis diagnosis. Of the total samples, 97 were from healthy cows in full lactation, used to establish reference values for the components of healthy cow milk and to evaluate the influence of breed - Jersey and Gir, and number of lactations - first, two or three lactations, and four or more lactations on milk proteinogram. Additionally, sampling was useful as a base for the formation of experimental groups for evaluation of the influence of the number of somatic cells, bacterial isolation and health condition of the udder on milk proteinogram obtained by electrophoresis in polyacrylamide gel. Results showed a significant influence of breed related factors on the level of total protein and its fractions immunoglobulinic, &alpha;1-antitripsin, &beta;-lactoglobulin in whey, as well as on the level of a group of separated but not identified whey proteins; influence of the number of lactations on the level of albumin of plasmatic origin, immunoglobulins, &beta;-lactoglobulin and &alpha;-lactoalbumin. The lactation phase influenced the levels of milk serum protein significantly, as well as the proteic fractions of healthy cow milk serum, variation evident in the colostrum phase of lactation. The number of somatic cells influenced milk proteinogram only in samples with more than 1,500,000 somatic cells. No significant influence of bacterial isolation on milk proteinogram was demonstrated. However, a significant influence of mastitis on the proteinogram of cow milk was observed, affecting mostly those proteins not synthetized in the physiologic cycle of mammary gland secretion.

A manipulação da dieta constitui uma prática efetiva e rápida de alteração da composição do leite, especialmente do seu teor de gordura. Entretanto, os mecanismos envolvidos não são ainda completamente conhecidos, embora muito se tenha avançado na última década. Sabe-se hoje que certo tipo de ácido graxo (CLA trans-10 cis-12) formado no rúmen sob condições específicas de alimentação é capaz de inibir a síntese de gordura do leite. Entretanto, depressão da gordura do leite (DGL) tem sido observada em casos (e.g. dietas contendo óleo de peixe) onde não há formação deste inibidor. Embora o efeito do CLA sobre a secreção de gordura do leite já esteja bem caracterizado, estudo prévio conduzido pelo nosso grupo mostrou ainda um aumento do teor de proteína do leite em resposta a este tratamento. Dois experimentos foram conduzidos com os seguintes objetivos principais, respectivamente: 1) determinar se um maior suprimento de proteína através da dieta afeta a secreção de proteína do leite de vacas recebendo CLA e 2) Estudar os mecanismos envolvidos na DGL de vacas recebendo dietas contendo óleo de peixe (OP) e níveis distintos de fibra. No primeiro experimento, 48 vacas em lactação receberam os seguintes tratamentos: 1) Dieta controle (DC) + Lac100, 2) DC + CLA, 3) Dieta com alta proteína (DAP) + Lac100 e 4) DAP + CLA. O Lac100 (sais de cálcio de óleo de soja) foi utilizado como placebo. O CLA foi protegido por encapsulação e o produto utilizado continha ~16% de CLA. No segundo experimento, 12 vacas em lactação foram avaliadas em 3 períodos: a) Basal: os animais receberam uma dieta com alto teor de fibra sem OP (dieta basal) por 12 dias; b) Suplementação: 4 vacas/grupo receberam os seguintes tratamentos: 1) Dieta com alta fibra + OP (AF+OP), 2) Dieta com baixa fibra sem OP (BF) e 3) Dieta com baixa fibra + OP (BF+OP); c) Pós-suplementação: todos os animais passaram a receber novamente a dieta basal por 12 dias. Os resultados obtidos no primeiro experimento mostraram que o CLA não foi eficientemente protegido, de forma que a redução da secreção de gordura do leite foi de pequena magnitude em relação a outros trabalhos. Da mesma forma, a proteção dos sais de cálcio de óleo de soja foi pequena, resultando em maior concentração de CLA cis-9 trans-11 (P<0,05) e menor concentração de ácido linoléico (P<0,05) no leite dos animais. Apesar da concentração do CLA trans-10 cis-12 no leite ter aumentado igualmente em resposta ao CLA e ao Lac100, o teor de gordura do leite foi menor (P<0,05) no primeiro tratamento, sugerindo a presença de outros inibidores (ou precursores) no produto utilizado. A concentração de CLA trans-10 cis-12 no leite explicou ~50% da variação da DGL, sugerindo que outros fatores afetaram a síntese de gordura do leite. Os resultados do segundo experimento demostraram, de forma inédita, que o CLA trans-9 cis-11 e o C18:1 cis-11 estão estreitamente relacionados à DGL dos animais que receberam OP. A DGL foi causada por uma ampla redução (P<0,01) da secreção tanto dos ácidos graxos sintetizados de novo quanto dos pré-formados, sugerindo que o mecanismo da DGL pode envolver a inibição de diferentes enzimas lipogênicas. O menor (P<0,01) índice de atividade da enzima &#8710;-9 dessaturase em animais que receberam OP é consistente com a idéia acima. Diferentemente do observado em resposta ao OP, a secreção de gordura do leite não foi afetada pelo tratamento BF (P>0,1). Os teores de proteína e lactose aumentaram na dieta BF e nas dietas contendo OP, respectivamente. / Diet manipulation is an effective and rapid way to change milk composition, mainly for fat content. However, mechanisms are not fully undestood in despite of progress in the area over the last decade. Nowadays, it is known that a molecule of fatty acid (CLA trans-10 cis-12) which is formed in the rumen under specific feeding situations is capable of inhibiting milk fat synthesis. However, milk fat depression (MFD) has been observed even at conditions where there is no formation of trans-10 cis12 CLA (e.g. fish oil-supplemented diets). Although CLA effects on milk fat synthesis are well-established, previous study from our group also showed an increase on milk protein content in cows fed CLA. Two trials were conducted with two main objectives: 1) to determine if an additional supply of diet protein affects milk fat synthesis in cows fed CLA and 2) to study the mechanisms involved in MFD of cows fed diets with fish oil (FO) and different fiber levels. In the first trial, 48 lactating cows received the treatments as follow: 1) Control Diet (CD) + Lac100, 2) CD + CLA, 3) High Protein Diet (HPD) + Lac100 and 4) HPD + CLA. The Lac100 (calcium salts of soybean oil) was used as a placebo. CLA was protected by encapsulation (prills) and the product contained 16% CLA. In the second trial, 12 lactating dairy cows were evaluated in three periods: a) Basal: for 12 days, all cows received a baseline diet (High fiber without FO); b) Suplementation: 4 cows/group received the treatments for 21 days: 1) High fiber diet + FO (HF+FO); 2) Low fiber diet without FO (LF) and 3) Low fiber diet + FO (LF+FO); c) Post-supplementation: cows returned to baseline diet on 12 days. Results from the first trial showed that CLA protection method was innefficient. Thus, milk fat reduction was smaller than in other studies. Protection of calcium salts of soybean oil was also small which resulted in higher cis-9 trans-11 CLA and lower linoleic acid concentrations (P<0.05) in milk from cows fed Lac100. In despite of similar milk trans-10 cis-12 CLA increase in response to CLA and Lac100, milk fat content was lower (P<0.05) in cows fed CLA. It suggests the presence of other fat inhibitors (or precursors) in the product containing CLA isomers. Moreover, concentration of milk trans-10 cis-12 CLA explained ~50% of MFD suggesting others factors influencing milk fat synthesis. Results of the second trial were inedit in showing the close association of milk trans-9 cis-11 CLA and C18:1cis-11 concentrations and FO-induced MFD. MFD resulted from a lower (P<0,01) secretion of both de novo and preformed milk fatty acids. It suggests that mechanisms of FO-induced MFD must involve the inhibition of different lipogenic enzymes. The lower (P<0.01) dessaturase activity index in cows fed FO is consistent with this hypothesis. In contrast to FO, milk fat secretion was unchanged (P>0.1) by LF diet which is consistent with low CLA trans-10 cis-12 and C18:1trans-10 concentrations in milk from cows fed this diet. Contents of milk protein and milk lactose increased (P<0.05) in cows fed LF and FO diets, respectivelly.

Objetivou-se estudar a substituição do milho por polpa cítrica peletizada no concentrado de vacas leiteiras em lactação, durante a estação chuvosa do ano, em pastejo de capim-elefante. Os trabalhos foram conduzidos no Departamento de Zootecnia da ESALQ/USP. O delineamento estatístico foi em Quadrado Latino 4 x 4, analisados utilizando-se o Proc GLM (SAS, 1999). Foi utilizada uma área de 7,8 ha de pastagem dividida em 39 piquetes de 0,2 ha cada, adubada com 80 kg N ha mês-1. Experimento I: Foram utilizadas oito vacas Holandesas com média de 82 dias de lactação e 522,9 kg de PV, no início do período experimental. Os tratamentos continham as seguintes proporções de milho e polpa cítrica: 100:0 (T0); 75:25 (T25); 50:50 (T50); 25:75 (T75). As vacas receberam 7,00 kg de concentrado dia-1 (6,3 kg MS), fracionado em duas vezes ao dia. A pastagem foi adubada com 80 kg N ha.mês-1. Não houve diferença (P>0,05) no tempo de pastejo (7h22’), ruminação (8h36’), ócio (5h56’) e taxa de bocados (34,4 movimentos min-1). A temperatura retal (38,74 e 39,64ºC) e freqüência respiratória (47,44 e 61,20 movimentos min-1), mensuradas as 8:00 e as 15:30 horas, respectivamente, não foram afetadas pelos tratamentos (P>0,05). Não houve diferença (P>0,05) na produção de leite corrigida para 3,5% de gordura (18,5 kg vaca dia-1), percentagens de gordura (3,5%), proteína (3,06%), lactose (4,40%), sólidos totais (13,02%), N-uréico (15,01 mg dL-1) e contagem de células somáticas (203.000 mL-1). O peso vivo (536,8 kg), condição corporal (2,51), glicose plasmática (75,90 mg dL-1), N-uréico plasmático (16,96 mg dL-1) e ácidos graxos livres no plasma (456,12 mEq L-1) também não foram afetados pelos tratamentos (P>0,05). Experimento II: Foram utilizadas 11 vacas (7 Holandesas e 4 Jersey), com 427,5 kg de PV e 153,22 dias de lactação, no início do período experimental. Os concentrados continham 21,8% de PB e as respectivas proporções de milho e polpa cítrica: 100:0 (T0); 75:25 (T25); 50:50 (T50); 25:75 (T75). As vacas receberam 6,1 kg de concentrado dia-1 (5,5 kg de MS), fracionado em duas vezes ao dia, fornecido após cada ordenha. A pastagem era adubada com 80 kg N ha mês-1. Não houve diferença (P>0,05) na produção de leite corrigida para 3,5% de gordura (13,7 kg vaca dia-1), percentagens de gordura (3,8%), proteína (3,37%), sólidos totais (13,27%), N uréico (14,34 mg dL-1) e contagem de células somáticas (140.450 mL-1). A percentagem de lactose foi diferente (P<0,05) para a maior dose de substituição. O peso vivo (427,2 kg), condição corporal (2,74), glicose plasmática (74,63 mg dL-1), N uréico plasmático (16,74 mg dL-1), e ácidos graxos livres no plasma (417,81 mEq L-1) não foram afetados pelos tratamentos (P>0,05). Não houve diferença (P>0,05) no tempo de pastejo (7h51’), ruminação (7h59’), ócio (6h) e taxa de bocados (37,91 movimentos min-1). A Temperatura retal (38,76 e 39,61ºC) e freqüência respiratória (53,57 e 71,50 movimentos min-1), mensuradas às 8:00 e às 15:30 horas, respectivamente, não foram afetadas pelos tratamentos (P>0,05). O milho pode ser substituído pela polpa cítrica sem depreciar a produção e composição do leite. / Two experiments were conducted to study the partial substitution of fine ground corn by peleted pulp citric in the concentrate of lactating cows in middle lactation (Experiment I) and in late lactation (Experiment II), grazing elephant - grass pasture. The trials were conducted at the Animal Science Department of ESALQ/USP. In both experiments, the animals were grouped according to milk yield, days in milk and parturition order. The statistical designs were repeated 4 x 4 Latin Square. The data were analysed using the Proc GLM of SAS (1999). Experiment I: Eight Holstein cows (82 DIM and 522.9 kg LBW), at the beginning of the trial were used. The concentrates contained the following corn:peleted citrus pulp proportions: 100:0 (T0); 75:25 (T25); 50:50 (T50); 25:75 (T75). The cows received 7 kg of concentrate day-1 (6.3 kg of DM), fractionated in 2 daily meals. The pasture was fertilized with 80 kg N ha.month-1. The forage offer was of 33,6 kg DM of green leaves cow day-1. There was not difference (P>0.05) in the grazing time (7h22’), rumination time (8h36’), leisure time (5h56’) and biting rate (34.4 movements min-1). The rectal temperature (38.74 and 39.64ºC) and respiratory frequency (47.44 and 61.20 movements min-1), measured at 8:00 AM and at 3:30 PM, respectively, were not affected by treatments (P>0.05). There was not difference (P>0.05) in 3.5 % FCM yield (18.5 kg cow day-1), in the contents of milk fat (3.5%), protein (3.06%), lactose (4.40%) and total solids (13.02%), milk urea-N (15.01 mg dL-1) and of somatic cells (203.000 mL-1) were not affected by treatments (P>0.05). The LBW (536.8 kg), BCS (2.51), plasma glucose (75.90 mg dL-1), plasma urea-N (16.96 mg dL-1) and plasma free fat acids (456.12 mEq L-1) were not affected by treatments (P>0.05). Experiment II: Eleven cows were used, 7 Holstein and 4 Jersey (427.5 kg LBW and 153.22 DIM), at the beginning of the trial. The concentrates were 21.8% of CP (DM bases), and the respective corn:peleted citric pulp ratio were: 100:0 (T0); 75:25 (T25); 50:50 (T50); 25:75 (T75). The cows were fed 6.1 kg day-1 of concentrate (5.5 kg of DM), fractionated in 2 daily meals, after each milking. There was not difference (P>0.05) in 3.5 FCM yield (13.7 kg cow day-1), in the content of milk fat (3.8%), protein (3.37%) and total solids (13.27%), milk urea-N (14.34 mg dL-1) and somatic cells (140,450 mL-1). The lactose content was lower (P<0.05) for the 25:75 diet. The LBW (427.2 kg), BCS (2.74), plasma glucose (74.63 mg dL-1), plasma urea-N (16.74 mg dL-1), and plasma free fat acids (417.81 mEq L-1) were not affected by treatments (P>0.05). There were no difference (P>0.05) in the grazing time (7h51’), rumination time (7h59’), leisure time (6h) and biting rate (37.91 movements min-1). The rectal temperature (38.76 and 39.61ºC) and respiratory frequency (53.57 and 71.50 movements min-1), measured at 8:00 and at 15:30 hours, respectively, were not affected by treatments (P>0.05). The corn can be substituted by the citric pulp without depreciating the milk yield and content.

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