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Química y farmacología del veneno de serpientes. (I parte)Zavaleta Martínez-Vargas, Alfonso 25 September 2017 (has links)
A multidisciplinary revision of snake venom includes its chemical, pharmacological and toxicological aspects. In the first part, the chemical composition of venoms, and local effects, with special atenttion to the venom of Lachesis muta muta snake are revisited. The acute toxic effects, citotoxicity, miotoxicity and the chemical basis for the production of edema, hemorrhagic and myonecrotic effects are discussed. KEYWORDS: SNAKE VENOM, CHEMISTRY, PHARMACOLOGY, ACUTE TOXICITY, CITOTOXICITY, HAEMORHAGE, MYONECROSIS, OEDEMA
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Atividade antifosfolipásica A2 da harpalicina 2, uma isoflavona isolada de Harpalyce brasiliana Benth / Phospholipase A2 of harpalycina 2 activity, an isoflavone isolated of Harpalyce brasiliana BenthXimenes, Rafael Matos January 2012 (has links)
XIMENES, Rafael Matos. Atividade antifosfolipásica A2 da harpalicina 2, uma isoflavona isolada de Harpalyce brasiliana Benth. 2012. 134 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-11-01T16:05:00Z
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Previous issue date: 2012 / Secretory phospholipases A2 (sPLA2, EC 3.1.1.4) hydrolyses the sn-2 ester bond of phospholipids, releasing fatty acids and lysophospholipids. The expression of these enzymes is found to be elevated in many pathological conditions, such as rheumatoid arthritis, sepsis, atherosclerosis, and cancer. Moreover, sPLA2s are the main toxic components of some snake venoms, being the mainly responsible for the local tissue damage. Harpalycin 2 is an isoflavona isolated from the leaves of Harpalyce brasiliana Benth., a snakeroot used in folk medicine to treat snake bites and inflammation in Northeast of Brazil. The aim of this study was evaluate the effect of harpalycin 2 in the enzymatic, edematogenic, and myotoxic activities of sPLA2s isolated from Bothrops pirajai (PrTX-III), Crotalus durissus terrificus (Cdt F15), Apis mellifera (Apis), and Naja naja (Naja) venoms. Futher, the effect on the platelet aggregation induced by PrTX-III as a result of the treatment with harpalycin 2 was also evaluated. Harpalycin 2 inhibited all sPLA2s tested, with inhibition percentages of 58.7, 78.8, 87.7, and 88.1 % for PrTX-III, Cdt F15, Apis, and Naja, respectively. The early phase of the edema induced by sPLA2s administration was also inhibited by harpalycin 2, as well as the myotoxicity. When assayed specifically with the PrTX-III, in comparison with two standard sPLA2 inhibitor, aristolochic acid (Aris Ac) and p-bromophenacyl bromide (p-BPB), the IC50 of harpalycin 2 on the enzymatic activity was 11.34 ± 0.28 μg/mL. Conformational changes as a slightly unfolding and the transition from the dimeric to the monomeric form were also observed after treatment with the harpalycin 2, with no changes in the molecular mass of the protein. In the platelet aggregation assays, the harpalycin 2 incubated with the PrTX-III inhibited the aggregation when compared to the untreated protein. The inhibitory effect of Aris Ac and p-BPB were lower than that of harpalycin 2, which also inhibited the aggregation induced by arachidonic acid. The docking results, using the crystallographic structures of the sPLA2s taken from the Protein Data Bank, showed a trend between the GOLD scores and the percentages of catalytic activity and platelet aggregation inhibition, showing the formation of hydrogen bonds between harpalycin 2 and important residues in the active site of the sPLA2s, as His48. In conclusion, these results showed the inhibitory effect of harpalycin 2 on the enzymatic and toxic activities of sPLA2s, corroborating, at least in part, the use of H. brasiliana in folk medicine. / As fosfolipases A2 secretórias (sPLA2, EC 3.1.1.4) hidrolisam a ligação éster sn-2 dos fosfolipídios, liberando ácidos graxos e lisofosfolipídios. A expressão destas enzimas esta elevada em diversas condições patológicas como, artrite reumatóide, sepse, aterosclerose e câncer. Além disto, as sPLA2s são os principais componentes tóxicos dos venenos de algumas serpentes, sendo os principais responsáveis pelo dano tecidual local. A harpalicina 2 é uma isoflavona isolada das folhas de Harpalyce brasiliana Benth., uma raiz-de-cobra utilizada na medicina popular do Nordeste para tratar envenenamentos por serpentes e condições inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da harpalicina 2 nas atividades enzimática, edematogênica e miotóxica de sPLA2s isoladas dos venenos de Bothrops pirajai (PrTX-III), Crotalus durissus terrificus (Cdt F15), Apis mellifera (Apis) e Naja naja (Naja). Além disso, o efeito sobre agregação plaquetária induzida pela piratoxina-III (PrTX-III) em decorrência do tratamento com a harpalicina 2 também foi avaliado. A harpalicina 2 inibiu todas as sPLA2s testadas, com percentuais de inibição de 58,7, 78,8, 87,7 e 88,1 % para PrTX-III, Cdt F15, Apis e Naja, respectivamente. A primeira fase da atividade edematogênica induzida pela administração das sPLA2s também foi inibida pela harpalicina 2, assim como a miotoxicidade. Quando avaliada especificamente sobre a PrTX-III, em comparação com os inibidores padrão, ácido aristolóchico (Aris Ac) e brometo de p-bromofenacila (p-BPB), a IC50 da harpalicina 2 sobre a atividade enzimática foi de 11,34 ± 0,28 μg/mL. Alterações conformacionais como um leve desenovelamento e a transição da forma dimérica para monomérica também foram observadas após o tratamento com a harpalicina 2, sem contudo alterar a massa da proteína. Nos experimentos de agregação plaquetária, a harpalicina 2 incubada previamente com a PrTX-III inibiu a agregação quando comparada a proteína não tratada. O efeito inibitório do ácido aristolóchico e do p-BPB foram menores do que os da harpalicina 2, que também inibiu a agregação induzida pelo ácido araquidônico. Os resultados de docking, obtidos utilizando as estruturas cristalográficas das sPLA2s oriundas do Protein Data Bank, revelaram uma tendência entre os valores dos GOLD scores e os percentuais de inibição da atividade enzimática e de agregação plaquetária, apontando a formação de ligações de hidrogênio entre a harpalicina 2 e resíduos importantes do sítio ativo das sPLA2s, como a histidina-48. Em conclusão, estes resultados mostraram o efeito inibitório da harpalicina 2 sobre as atividades enzimáticas e tóxicas das sPLA2s, corroborando, em parte, o uso da H. brasiliana na medicina popular.
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Ação antibacteriana antifúngica e antiparasitária de veneno de serpentes do gênero Bothrops e suas frações fosfolipase A2 e L-Aminoácido oxidase / Antibacterial, antifungal and antiparasitary action of Bothrops venoms and their fractions phospholipase A2 and L-aminoacid oxidaseTorres, Alba Fabiola Costa January 2009 (has links)
TORRES, Alba Fabiola Costa. Ação antibacteriana antifúngica e antiparasitária de veneno de serpentes do gênero Bothrops e suas frações fosfolipase A2 e L-Aminoácido oxidase. 2009. 101 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-12-14T14:38:42Z
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Previous issue date: 2009 / Snakes venoms contain biologically active substances primarily consisting of proteins (90-95%). Some of these present enzymatic activities, such as phospholipases A2 and the L-amino acid oxidases. In this study we verify the action of Bothrops leucurus (BleuTV) and Bothrops marajoensis (BmarTV) venoms, and fractions PLA2 (BleuPLA2 and BmarPLA2) and LAAO (BleuLAAO and BmarLAAO) on strains of bacteria, yeast, Leishmania sp and T. cruzi. The susceptibility of bacterial and yeast strains was analyzed through disc-diffusion assay, for determination of antimicrobial potential; and the microdilution method, for determination of MIC and MLC, with modifications. The antiparasitic activity was evaluated through of the culture treatment of parasites with different concentrations of venoms or their fractions. The forms promastigotes of Leishmania sp. had been cultived, during 72h, in NNN/Schneider media, 28ºC; and the forms epimastigotes of T. cruzi had been cultived in LIT media, during 5d, 28ºC. The macrophages were cultured in RPMI 1640 media, during 24h, 37ºC and 5% of CO2, with different concentrations of venoms or fractions. After, they were analyzed by MTT method. The results was statistically analyzed with t test or ANOVA followed the Bonferroni’s test, when appropriated, with p<0.05. The BmarLAAO was able to inhibit the growth of gram negative P. aeruginosa, of yeast C. albicans and of gram positive S. aureus; and the BleuTV inhibited the growth of S. aureus, being the inhibitions dose-dependent. The order of susceptibility of microorganisms tested against BmarLAAO was S. aureus > C. albicans > P. aeruginosa. On the other hand the BmarTV, BmarPLA2, BleuPLA2 and BleuLAAO had not provided any degree of inhibition on strains in study. The inhibitory effect was more significant on S. aureus presenting CIM= 50µg/mL and CLM=200µg/mL for BmarLAAO, and CIM=CLM=25µg/mL for the BleuTV. In concentrations greater than 1.56µg/mL BmarLAAO was able to inhibit the growth of promastigotes forms of L. chagasi and L.amazonensis, after 72h of culture. The IC50 values were 2.55µg/mL for L. amazonenis, and 2.86 µg/mL for L. chagasi. BmarTV and BleuTV also provided significant inhibition of the parasitic growth, with an IC50 value of 86.56 µg/mL for L. amazonensis and 79.02 µg/mL for L. chagasi, when treated with BmarTV; and 5.49µg/mL for L. amazonensis and 1.94µg/mL for L. chagasi, when treated with BleuTV. The venoms and BmarLAAO showed inhibitory effect on epimastigotes forms of T. cruzi. The IC50 value for BleuTV, BmarTV and BmarLAAO where, respectively 1.14µg/mL, 24.19µg/mL and 0.89µg/mL.This effects presented behavior dose-dependent. The fractions BmarPLA2, BleuPLA2 and BleuLAAO had not been capable to promote any inhibition on the growth of these parasites. The BmarLAAO, BmarTV and BleuTV presented low toxicity in studied concentrations. In conclusion, the whole venoms as well as the L-amino acid oxidase from Bothrops marajoensis showed to be capable to interfere in the growth of several microorganisms as S.aureus, Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Leishmania sp. and T. cruzi. / Os venenos de serpentes contem substâncias biologicamente ativas, primariamente consistindo de proteínas (90-95%). Algumas delas apresentam atividade enzimática como as fosfolipases A2 e L-aminoácido oxidase. O presente estudo verificou a ação dos venenos de Bothrops leucurus (BleuVT) e Bothrops marajoensis (BmarVT), e suas frações PLA2 (BleuPLA2 e BmarPLA2) e LAAO (BleuLAAO e BmarLAAO) sobre cepas de bactéria, C. albicans, Leishmania sp e T. cruzi, bem com sua toxicidade sobre macrófagos murinos. A susceptibilidade das cepas bacterianas e fúngica foi analisada através do método de difusão em ágar, para determinação do potencial antimicrobiano; e microdiluição em caldo, para determinação da CIM e CLM, com modificações. A atividade antiparasitária foi avaliada através do tratamento das culturas de parasitos com diferentes concentrações dos venenos ou de suas frações. As formas promastigotas de Leishmania sp. foram cultivadas, durante 72h, em meio NNN/Schneider a 28ºC; e as formas epimastigotas de T. cruzi foram cultivadas em meio LIT, durante 5 dias, a 28ºC. Os macrófagos foram cultivados em meio RPMI 1640, em presença de diferentes concentrações dos venenos e frações, durante 24h, e submetidos ao ensaio com MTT. Os resultados foram estatisticamente analisados através do teste t ou ANOVA seguida do teste Bonferroni, quando apropriado, com p<0.05. A BmarLAAO foi capaz de inibir o crescimento bacteriano do Gram-negativo P. aeruginosa, da levedura C. albicans e do Gram-positivo S. aureus; e o BleuTV inibiu o crescimento de S. aureus, sendo a inibição dose-dependente. A ordem de susceptibilidade dos microorganismos testados com BmarLAAO foi S. aureus > C. albicans > P. aeruginosa. Por outro lado o BmarTV, BmarPLA2, BleuPLA2 e BleuLAAO não apresentaram nenhum grau de inibição sobre as cepas em estudo. O potencial inibitório foi mais significante sobre S. aureus apresentando CIM= 50µg/mL e CLM=200µg/mL para BmarLAAO, e CIM=CLM=25µg/mL para BleuTV. Em concentrações maiores que 1.56µg/mL a BmarLAAO foi capaz de inibir o crescimento de formas promastigotas de L. chagasi e L.amazonensis, sendo os valores de IC50, após 72h de cultivo, para L. amazonenis, 2.55µg/mL e 2.86 µg/mL para L. chagasi. BmarTV e BleuTV também apresentaram significante inibição sobre o crescimento parasitário, sendo os valores de IC50 86.56 µg/mL para L. amazonensis e 79.02µg/mL para L. chagasi, quando tratado com BmarTV; e 5.49µg/mL para L. amazonensis e 1.94µg/mL para L. chagasi, quando tratado com BleuTV. Os venenos e BmarLAAO mostraram efeito inibitório sobre formas epimastigotas de T. cruzi. Os valores de IC50 para BleuTV, BmarTV e BmarLAAO foram, respectivamente, 1.14µg/mL, 24.19µg/mL e 0.89µg/mL. As frações BmarPLA2, BleuPLA2 e BleuLAAO não foram capazes de promover nenhum efeito inibitório sobre os parasitos em estudo. O BmarLAAO , BmarTV e BleuTV apresentaram baixa toxicidade sobre macrófagos nas concentrações estudadas. Em conclusão, os veneno de B. leucurus e de B. marajoensis, bem como a L-aminoácido oxidase de Bothrops marajoensis mostraram ser capazes de interferir no crescimento de diferentes microorganismos como S.aureus, C. albicans, P. aeruginosa, Leishmania sp. e T. cruzi.
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Veneno da serpente Bothrops jararacussu induz uma resposta inflamatória local dependente de protanóides e da migração de neutrófilosWanderley, Carlos Wagner de Souza January 2014 (has links)
WANDERLEY, Carlos Wagner de Souza. Veneno da serpente Bothrops jararacussu induz uma resposta inflamatória local dependente de protanóides e da migração de neutrófilos. 2014. 93 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-27T13:12:18Z
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Previous issue date: 2014 / Local tissue reactions provoked by Bothrops venoms are characterized by edema, hemorrhage, pain, and inflammation; however, the mechanisms of tissue damage vary depending upon the species of snake. This mechanistic variability reduces the efficacy of antivenom treatment. Considering the diversity of intraspecific pathophysiological responses, we investigated the mechanisms and mediators involved in the local inflammatory response induced by the Bothrops jararacussu venom (VBjsu). Female Swiss mice were injected with either saline or VBjsu (0.125-8 µg/paw). In a subset of VBjsu-treated mice, loratadine (an H1 receptor antagonist), compound 48/80 (for mast cell depletion), capsaicin (for C-fiber desensitization), infliximab (an anti-TNF-α antibody), indomethacin (a non-specific COX inhibitor), celecoxib (a selective COX-2 inhibitor) or fucoidan (a P- and L-selectins modulator) were administered before VBjsu treatment. Paw edema was measured by plethysmography. In addition, paw tissues were collected for the measurement of myeloperoxidase (MPO) activity, TNF-α and IL-1 levels, and COX-2 immunoexpression. The direct chemotactic effect of VBjsu was also studied using a Boyden chamber assay, and the in vitro calcium dynamic in neutrophils was investigated using confocal microscopy. VBjsu caused concentration- and time-dependent edematogenic responses and increased the local production of TNF-α and IL-1β as well as COX-2 expression vs. saline group (P<0.05). Both edema and neutrophil migration were prevented by pretreatment with cyclooxygenase inhibitors (indomethacin or celecoxib) or by the P- and L-selectins modulator, fucoidan vs. VBjsu (P<0.05). Furthermore, VBjsu induced a direct in vitro neutrophil chemotaxis by increasing intracellular calcium vs. RPMI (P<0.05). Therefore, VBjsu induces an early onset edema dependent upon prostanoid production and neutrophil migration. / Os efeitos locais provocados por venenos botrópicos são caracterizados por edema, hemorragia e dor local. No entanto, os mecanismos fisiopatológicos relacionados a esses venenos podem variar de acordo com a espécie. Esta característica espécie-específica pode prejudicar a eficácia da soroterapia. Desta forma, considerando a diversidade da resposta fisiopatológica dos venenos, investigamos os mecanismos e mediadores envolvidos na resposta inflamatória local induzida pelo veneno da Bothrops jararacussu (VBjsu). Camundongos Swiss fêmeas foram submetidos à injeção intraplantar de solução salina ou VBjsu (0,125-8 µg/pata). Para o estudo dos mecanismos e mediadores envolvidos, diferentes sub-grupos de animais foram submetidas ao pré-tratamento com loratadina (um antagonista do receptor H1), composto 48/80 (para induzir a depleção dos mastócitos), capsaicina (para promover a dessensibilização das fibras C), infliximabe (um anticorpo anti-TNF-α), indometacina (um inibidor não-específico da COX), celecoxibe (um inibidor seletivo da COX-2) ou fucoidina (um modulador de P- e L-selectinas) administrados antes do VBjsu. O edema da pata foi medido por pletismografia. Além disso, os tecidos da pata foram recolhidos para determinação da atividade da mieloperoxidase (MPO), dosagem dos níveis de TNF-α, IL-1 e da imunoexpressão da COX-2. O efeito quimiotático direto do VBjsu também foi estudado por meio do ensaio da câmara de Boyden, e o estado de ativação dos neutrófilos humanos foi avaliado através da dinâmica intracelular de cálcio em neutrófilos realizado in vitro com auxilio da microscopia confocal. O VBjsu causou uma resposta edematogênica concentração e tempo dependentes com aumento da produção local de TNF-α, IL-1β e da imunoexpressão da COX-2 nos tecidos quando comparado ao grupo salina (P<0,05). Ambos, edema e migração de neutrófilos foram impedidos pelos inibidores da COX (indometacina ou celecoxibe), ou pelo modulador de P - e L-selectinas (fucoidina) vs. VBjsu (P<0,05). O exame histopatológico revelou que o VBjsu induz uma precoce migração de neutrófilos para o local da lesão vs. o grupo salina (P<0,05). Além disso, o VBjsu induz a quimiotaxia e ativa neutrófilos in vitro aumentando diretamente a dinâmica de cálcio intracelular quando comparado ao RPMI (P<0,05). Portanto, o VBjsu induz uma resposta edematogênica precoce dependente da produção de prostanoides e da migração de neutrófilos.
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Efeitos biológicos e caracterização inicial da peçonha da serpente Philodryas nattereri steindachner 1870 / Biological effects and initial characterization of snake venom Philodryas nattereri steindachner 1870Nery, Marinetes Dantas de Aquino January 2012 (has links)
NERY, Marinetes Dantas de Aquino. Efeitos biológicos e caracterização inicial da peçonha da serpente Philodryas nattereri steindachner 1870. 2012. 206 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-06T13:10:33Z
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Previous issue date: 2012 / A peçonha da serpente Philodryas nattereri é uma mistura de proteínas e peptídeos tóxicos com diversas ações locais e sistêmicas importantes, similares às que ocorrem nos acidentes botrópicos. Os mecanismos envolvidos nas ações locais e sistêmicas desta peçonha são pouco conhecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos renais, cardiovasculares, citotóxicos e a identificação molecular da peçonha bruta. O teor proteíco total da peçonha foi de 85-90% de proteínas. Foram utilizados ratos Wistar nos experimentos de perfusão de rim isolado, em que o orgão foi perfundido com a peçonha da serpente Philodryas nattereri em diversas concentracões para se determinar as possíveis alterações em parâmetros funcionais, além de alterações vasculares em anel de aorta e pressão arterial. A peçonha foi utilizada em células epiteliais de túbulos renais de cachorro (MDCK) e macrófago peritonial de rato (RAW) e mensurada por pletismografia. O edema de pata, as contorções abdominais e a injeção intramuscular foram realizados em camundongos Swiss. A peçonha foi testada em cepas de bactérias Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleraesuis subsp, Staphylococcus aureus e as culturas foram diluidas 100x. Para a determinação do número de cromossomos da serpente Philodryas nattereri e Philodryas olfersil, utilizou-se uma cultura temporária de leucócitos. Da glândula de Duvernoy construiu-se uma Biblioteca de cDNA com o objetivo de identificar seus genes. A peçonha bruta foi submetida a RMN (Ressonância Magnética Nuclear). Os resultados encontrados demonstraram que a peçonha da Philodryas nattereri promoveu alterações em todos os parâmetros renais estudados, principalmente na diminuição da pressão renal (PP) e da resistência vascular renal (RVR), assim como um aumento do fluxo urinário (FU) e do ritmo de filtração glomerular (RFG). O resultado mais relevante é que essa peçonha é altamente lesiva aos túbulos renais, sendo tal fato comprovado com a redução do percentual de transporte dos eletrólitos de sódio (Na+), (K+) e cloreto (CI¯) nas concentrações estudadas, independente da redução da PP. O clearance osmótico e as alterações nos glomérulos e túbulos com material proteíco e hemorrágico. As lesões foram observadas por análise histológica, mediante indícios de apoptose/ necrose e verificadas na cultura das células MDCK. A redução da pressão arterial e da frequência cardiaca parecem estar relacionadas ao relaxamento de vasos renais, cujos efeitos vasodilatadores foram comprovados nos protocolos de anel de aorta. A peçonha da Philodryas nattereri parece comprometer os túbulos renais, independentemente das ações vasculares. O edema de pata causado pela peçonha atingiu o máximo 2 horas após a inoculação e foi inibido pelo dexametasona e o soro anti-bothrops já a indometacina não foi capaz de interferir significativamente no edema. A injeção intramuscular de 50μg da peçonha produziu efeitos de desorganização das fibrilas musculares, hemorragia interfibrilar, edema infiltrado inflamatório e mionecrose dos tipos coagulativa e miolítica. Verificou-se que estas alterações diminuiram com o passar do tempo. As contorções abdominais causadas pela peçonha parecem ser tão agressivas quanto o acido acético quando comparado ao controle salino. A atividade da peçonha em cultura de bactérias foi significante para as culturas S. aureus, P. aeruginosa e Salmomela entretanto não apresentou significância para E. Coli. As serpentes Philodryas nattereri e Philodryas olfersii possuem um número de cromossomos 2n = 36. Da extração do RNAtotal da glândula da peçonha, junto com a enzima transcriptase reversa in vitro produziu-se RNAm transcrito a partir de vários genes diferentes. Assim, os DNAc clonados constituem uma biblioteca de cDNA com uma coleção de genes. Os resultados espectrofotômétrico de RMN da peçonha bruta da serpente Philodryas nattereri revelaram na identificação da presença de acoplamentos 13C, !H por comprimento de onda de rádio.
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Estudo da atividade enzimática e dos efeitos do veneno da serpente Bothropoides insularis sobre macrófagos RAW 264.7 in vitroMenezes, Ramon Róseo Paula Pessoa Bezerra de January 2013 (has links)
MENEZES, Ramon Róseo Paula Pessoa Bezerra de. Estudo da atividade enzimática e dos efeitos do veneno da serpente Bothropoides insularis sobre macrófagos RAW 264.7 in vitro. 2013. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T12:55:11Z
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Previous issue date: 2013 / Around the world, there are recorded over 3 million accident involving bites of venomous animals per year, of which 125 to 150 thousand culminate in death. In Brazil, most cases occur with snakes from Bothrops and Bothropoides genus, causing several local and systemic complications, such myotoxicity, disseminated intravascular coagulation, cytotoxicity, acute renal failure and sepsis. Bothropoides insularis is a snake from Queimada Grande Island, whose venom shows pronounced toxicity. However, its effect over cells with defense function remains unclear, as well as how these effects can influence the toxicity observed in vivo. The present study aimed to investigate the cellular changes induced by Bothropoides insularis whole venom (BinsVT) over murine macrophage from RAW 264.7 lineage. In this context, colorimetric tests were performed to determine proteolytic activity and the production of hydrogen peroxide in vitro. The results showed high catalytic activity in both tests, suggesting that the biological effects of this venom may be related to the presence of enzymes such metalloproteinases (svMPs) and L-amino acid oxidases (LAAOs) at concentrations relevant in these experimental conditions. The determination of the cytotoxic potential was conducted by MTT reduction assay, a method of assessing redox metabolism, after 2, 6, 12 and 24 hours of incubation. It was observed cytotoxic effect at high concentrations in a time-dependent way, with cell death more evident at 200 and 100 µg/mL after 12 and 24 hours of treatment. In lower concentrations, there was a gradual increase in cell viability, reaching around 200% of cell viability in groups treated for 24 hours. This result suggests that BinsVT possess proliferative effect over these cells. Then, lactate dehydrogenase (LDH) activity was determined in culture supernatants from experimental groups for investigation of cell lysis induced by BinsVT. It was observed a significant increase in enzymatic activity in all groups, suggesting the coexistence of fractions with cytotoxic and proliferative effect and that concentration and exposure time determine its outcomes. For morphological evaluation of RAW 264.7 cells after exposure to BinsVT, the experiments were performed on the surface of coverslips for staining with May-Grunwald Giemsa method. The experimental groups were analyzed by optical microscopy and the most representative morphological characteristics were photographed. Various morphological changes were observed, such as appearance of cellular debris and bare nuclei, vacuolated cells, reduced cell volume and increased cytoplasmic projections. Finally, the mechanism of cell death induced by BinsVT was assessed by flow cytometry, by staining with propidium iodide (PI) and annexin V-FITC. The analysis revealed the presence of apoptosis and necrosis, and the appearance of doubly labeled cells with Annexin-FITC and PI, indicating the occurrence of late apoptosis. In conclusion, BinsVT has a cytotoxic effect on RAW 264.7 cell, which necrotic and apoptotic mechanisms, besides stimulatory effect on these cells in dose-and time-dependent ways. These effects may be related to the enzymatic activities found in vitro. / Em todo o mundo, são registrados mais de 3 milhões de acidentes envolvendo picadas de animais peçonhentos por ano, das quais 125 a 150 mil culminam em óbito. No Brasil, a maioria dos casos ocorre com serpentes dos gêneros Bothrops e Bothropoides, provocando uma grande variedade de complicações locais e sistêmicas, dentre os quais se destacam efeito mionecrótico, coagulação intravascular disseminada, citotoxicidade, insuficiência renal aguda e sepse. A serpente Bothropoides insularis é uma espécie nativa da Ilha de Queimada Grande, cujo veneno apresenta efeito tóxico acentuado em diversos modelos experimentais. Entretanto, pouco é conhecido a respeito do efeito dessa peçonha sobre células com função de defesa, nem o quanto esse efeito pode influenciar na toxicidade observada in vivo. O presente trabalho teve como objetivo investigar as alterações celulares induzidas pelo veneno total da serpente Bothropoides insularis (BinsVT) sobre macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7. Nesse contexto, foi realizada a determinação da atividade proteolítica e da produção de peróxido de hidrogênio in vitro de BinsVT através de reações colorimétricas. Os resultados demonstraram alta atividade catalítica em ambos os testes, sugerindo que os efeitos biológicos desse veneno podem estar relacionados à presença de enzimas como metaloproteinases (svMPs) e L-aminoácido oxidases (LAAOs) em concentrações relevantes nas condições experimentais adotadas. A determinação do potencial citotóxico foi realizada pelo método de redução do MTT, um teste de avaliação da capacidade oxirredutora das células, após 2, 6, 12 e 24 horas de incubação. Foi observado efeito citotóxico em altas concentrações de forma tempo-dependente, com morte celular mais pronunciada nas concentrações de 200 e 100 µg/mL após 12 e 24 horas de tratamento. Nas menores concentrações estudadas, ocorreu um aumento gradativo da viabilidade celular, com valores percentuais em torno de 200% em relação ao grupo controle nos grupos tratados por 24 horas. Esse resultado sugere a presença de efeito proliferativo de BinsVT sobre essa linhagem celular. Em seguida, a atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH) no sobrenadante de cultivo dos grupos experimentais foi determinado para investigação de lise celular induzida por BinsVT. Foi verificado aumento significativo da atividade dessa enzima em todos os grupos testados, sugerindo a coexistência de frações com efeito proliferativo e citotóxico, e a concentração e o tempo de exposição do veneno determinam qual irá prevalecer. Para avaliação morfológica das células RAW 264.7 após exposição à substância em estudo, os experimentos foram realizados na superfície de lamínulas, para coloração com May-Grunwald Giemsa. Os grupos experimentais foram analisados por microscopia óptica e as características morfológicas mais representativas foram fotomicrografadas. Foram observadas diversas alterações morfológicas, tais como aparecimento de fragmentos celulares e núcleos desnudos, células vacuolizadas, redução do volume celular e aumento de projeções citoplasmáticas. Por fim, o mecanismo de morte celular induzida por BinsVT foi avaliado por citometria de fluxo, pela marcação com o iodeto de propídio (PI) e a anexina V-FITC. A análise revelou a presença de envolvimento necrótico e apoptótico no efeito citotóxico da substância, além do aparecimento de células marcadas duplamente com PI e anexina-FITC, indicando a ocorrência de apoptose tardia. Em conclusão, BinsVT apresenta efeito citotóxico sobre macrófagos RAW 264.7, com aparente envolvimento de necrose e apoptose, além de provável efeito estimulatório sobre essas células, de forma concentração- e tempo-dependente. Esses efeitos podem estar relacionados às atividades enzimáticas encontradas in vitro.
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27 |
Venômica e antivenômica de Bothrops erythromelas : estudo da variação intraespecífica / Venomics and antivenomics of the Bothrops erythromelas : study of intraspecific variationJorge, Roberta Jeane Bezerra January 2015 (has links)
JORGE, Roberta Jeane Bezerra. Venômica e antivenômica de Bothrops erythromelas : estudo da variação intraespecífica. 2015. 131 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-06T13:00:26Z
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Previous issue date: 2015 / ABSTRACT
Bothrops erythromelas
snake is a species of medical importance responsible for snakebites,
predominantly in the Northeast of B
razil. This study aimed to conduct a comparative
proteomic study of venoms pool of this species from five geographical regions of the
Northeast: Ceará, Pernambuco, Juazeiro, Paraíba and Itaparica Island. In addition, we
investigated the ability of
Bothrops
antivenom (SAB) of the Vital Brazil Institute and
polyspecific serum (BCL) of Costa Rica to neutralize the venoms from these populations
(antivenomics) and the ability to neutralize the
in vivo
haemorrhagic activity of venom. Two
-
dimensional electrophores
is (2DE) showed similar patterns of protein distributed in the range
of 14
-
95 kDa molecular mass and isoelectric points ranging from 4 to 8.5. Thirty to forty
fractions were collected by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography (RP
-
HPLC). Each
chromatographic fraction collected manually were analyzed by polyacrylamide
gel electrophoresis
-
SDS (SDS
-
PAGE) and protein bands were excised and subjected to
venomic analysis resulting in the identification of approximately 65 proteins and 8 species of
peptides belonging to 12 protein families (Bradykinin
-
Potentiating Peptides (BPPs), Snake
Venom Vascular Endothelial Growth Factor (svVEGF), Phospholipase A
2
, Serine Preotease,
Metalloproteases class I and class III (PI and PIII
-
Symp), Disintegrins and
Disintegrin
-
like
and Rich in Cysteine domains, C
-
type Lectins, Nucleotidases (5'
-
nucleotidase; 5'NT and
Phosphodiesterase; PDE), Secretory Proteins rich in Cysteine (CRISP) and snake venoms
Phospholipase B. Through this work it was shown that the proteomes
of venoms of B.
erythromelas of different regions of Northeast are similar and seem to be quite kept according
to their geographical distribution, although they contain peculiar differences such as the
presence of CRISP detected only in the venoms of Pern
ambuco and 5 'NT in the population
of
Juazeiro; and PDEs only in proteomes of populations of Ceará and Pernambuco and PLB in
Ceará, Juazeiro and Itaparica Island. The antivenomics results showed that SAB pentavalent
serum immunoreactivity is similar across
the five populations and more efficient compared to
the polyvalent BCL. However, it can be seen that especially low molecular weight fractions
are not efficiently recognized by both antivenoms. Although differences were shown in their
neutralization effic
acy, both were
effective in neutralizing antivenom hemorrhagic activity.
Despite the
B.erythromelas
snake inhabit acomprehensivegeographical area
,
the five
populations showed similar composition, displaying a highly conserved profile of
representative venom
protein classes. Therefore, this study assigned all proteins in the venom
of
B. erythromelas
that have been characterized in the literature (BPP, PLA2 Asp49, PIII
-
Symp and svVEGF) and provided additional information to the presence of Serine Proteases
and
C
-
type Lectins and other minor or specific components (PDE, 5'NT, PLB, CRISP). / UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ
FACULDADE DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA
PÓS
-
GRADUAÇÃO EM FARMACOLOGIA
ROBERTA JEANE BEZERRA JORGE
VENÔMICA E ANTIVENÔMICA DE
Bothro
p
s
eryth
r
omelas
: ESTUDO DA VARIAÇÃO
INTRAESPECÍ
FICA
.
ORIEN
TADORA: HELENA SERRA AZUL MONTEIRO
CO
-
ORIENTADOR
: JUAN JOSÉ CALVETE
CHORNET
Fortaleza
2015
ROBERTA JEANE BEZERRA JORGE
VENÔMICA E ANTIVENÔMICA DE
Bothro
ps
eryth
r
omelas
: ESTUDO DA VARIAÇÃO
INTRAESPECIFICA
.
Tese de Doutorado
apresentada ao
Cur
so
de Pós
-
G
raduação
em Farmacologia da Universidade Federal do
Ce
ará para obtenção do titulo de Doutor
em Farm
a
cologia
ORIENTADORA: HELENA SERRA AZUL MONTEIRO
CO
-
ORIENTADOR
: JUAN JOSÉ CALVETE
CHORNET
Fortaleza
2015
Dados Internacionais de Catalogação na Publicação
Universidade Federal do Ceará
Biblioteca de Ciências da Saúde
J71v
Jorge, Roberta Jeane Bezerra.
Venô
mica e Antivenômica de
Bothrops erythromelas
: estudo da variação
intraespecífi
ca.
/
Roberta Jeane B
ezerra Jorge.
–
2015.
130 f.: il. color., enc.; 30 cm.
Tese (doutorado)
–
Universidade Federal do Ceará, Faculdade de Medicina, Departamento de
Fisiologia e Farmacologia, Programa de Pós
-
Graduação em Farmacologia, Doutorado em
Farmacologia, Fortaleza, 201
5.
Área de Concentração: Farmacologia.
Orientação: Profa. Dra. Helena Serra Azul Monteiro.
Co
-
Orientação: Prof. Dr. Juan José Calvete Chornet.
1. Bothrops. 2. Proteômica. 3. Venenos de Serpente. I. Título.
CDD 615.942
A
os
meus pais Nádja e Roberto e ao meu irmão Júnior.
AGRADECIMENTOS
A
Deus, minha força maior e inexaurível
.
A
os meus pais
pelo que sou hoje.
A todos meus
familiares e
amigos
pelo companheirismo e presteza, seria impossível e a
té
passível de cometer algum esquecimento citar o nome de todos eles, mas cada um sabe o
quanto sou grata e que podem sempre contar comigo
.
Aos que contribuíram diretamente para a realização deste trabalho: M
inha orientadora P
rofa
Dra Helena Serra Azul M
onteiro e ao meu co
-
orientador Prof
.
Dr. Juan José Calvete e
a
sua
equipe do Laboratório de Ve
nômica y Proteinómica Estructural do Instituto de Biomedicina
de Valencia e aos grandes amigos que fiz no período de estágio de doutorado
na Espanha
.
A todos os
colaboradores deste trabalho no Brasil, Espanha e Costa Rica
.
A
todos do
Laboratório de Farmacologia Venenos e Toxina
s (LAFAVET)
, aos companheiros
científicos, em especial aos amigos
que fiz
e
a
Pós
-
graduação em Farmacologia da
Universidade Federal do Cea
rá, os quais me proporcionaram
crescimento profissional e
pessoal.
A
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
(
CAPES
)
pela concessão
da bolsa de
Doutorado
Sanduiche
e
m Valencia
-
Espanha
.
Ao Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq) pelo
apoio financeiro
.
“
Entrega teu caminho ao
S
enhor, confia nele
,
e ele
o fará
”
Salmo
37:5
RESUMO
A serpente
Bothrops erythromelas
é uma espécie de importância médica responsável por
acidentes ofídicos, com predominância no N
ordeste do Brasil. O presente trabalho teve como
objetivo realizar um estudo proteômico comparativo do
pool
de venenos desta espécie
procedentes de cinco regiões geográficas do Nordeste:
Ceará, Pernambuco, Juazeiro, Paraíba
e Ilha de Itaparica.
Além disso,
foi investigada a capacidade do soro antibotrópico (SAB) do
Instituto Vital Brazil e soro poliespecífico (BCL) da Costa Rica em neutralizar os venenos
provenientes dessas populações através da antivenômica e a capacidade de neutralização
frente à atividad
e hemorrágica
in vivo
. A eletroforese bidimensional (2DE) mostrou padrões
similares de proteínas distribuídas no intervalo de 14
-
95 kDa de massa molecular e pontos
isoelétricos variando de 4
-
8,5. Trinta a quarenta frações foram recolhidas por meio de
Cro
matografia Líquida de Alta Eficiência em Fase Reversa (RP
-
HPLC). Cada fração
cromatográfica coletada manualmente foi analisada por
eletroforese em gel de
poliacrilamida
–
SDS
(
SDS
-
PAGE) e
as bandas de proteínas foram excisadas e submetidas à
análise venômi
ca que resultaram na identificação de aproximadamente 65 proteínas e 8
espécies de peptídeos pertencentes a 12 famílias de proteínas de venenos de serpentes:
(Peptídeos Potenciadores de Bradicinina
(BPPs),
Fator de Crescimento Endotelial Vascular de
Veneno
de Serpente
(svVEGF),
Fosfolipase A
2
, Serinoproteases, Metaloproteases da classe I
e da classe III (PI e PIII
–
SVMP), Desintegrinas e Domínios tipo Desintegrina e rico em
Cisteínas, Lectinas do tipo C, Nucleotidases (5'
-
nucleotidase; 5’NT e Fosfodiester
ase; PDE),
Proteínas Secretórias Ricas em Cisteína (CRISP) e Fosfolipase B). Através desse trabalho foi
demonstrado que os proteomas dos venenos das
B. erythromelas
das diferentes regiões do
Nordeste são similares e parecem ser bastante conservados de acor
do com sua distribuição
geográfica, embora contenham diferenças peculiares tais como, a presença de CRISP
detectadas apenas nos venenos de Pernambuco e da 5’ NT na população de Juazeiro; assim
como PDEs apenas nos proteomas das populações do Ceará e Pernam
buco e da PLB no
Ceará, Juazeiro e Ilha de Itaparica. Os resultados da antivenômica mostraram que a
imunorreatividade do soro pentavalente SAB é similar frente às cinco populações e mais
eficiente em relação ao polivalente BCL. No entanto, pode
-
se observar
especialmente que as
frações de baixo peso molecular não são reconhecidas pelos dois antivenenos de forma
eficiente. Embora tenham mostrado diferenças na sua eficácia de neutralização, ambos os
antivenenos foram eficazes na neutralização da atividade hemo
rrágica
in vivo
. Apesar da
serpente de
B. erythromelas
habitar uma abrangente área geográfica, as cinco populações
estudadas apresentaram composição semelhante, exibindo um perfil altamente conservado das
classes das proteínas representativas do veneno. Po
rtanto, este estudo identificou as proteínas
do veneno de
B. erythromelas
já caracterizadas na literatura (BPP, PLA
2
Asp49, PIII
-
SVMP
e svVEGF) e forneceu informações adicionais para a presença de Serinoproteases e Lectinas
do tipo C e de outros component
es minoritários ou específicos (PDE, 5’NT, PLB, CRISP).
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Estudo dos efeitos renais do veneno da serpente Crotalus durissus collilineatus / Study about renal effects of Crotalus durissus collilineatus snake venomAmora, Daniela Nascimento January 2005 (has links)
AMORA, Daniela Nascimento. Estudos dos efeitos renais do veneno da serpente Crotalus durrissus collilineatus. 2005. 100 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-09T16:25:34Z
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Previous issue date: 2005 / Crotalus durissus collilineatus is a snake usually found in semideciduous forest, the Cerrado region and its bites constitutes an important health problem. The most serious systemic change and primary cause of death is acute renal failure although the mecanisms of the damaging effects are not totally understood. We investigated the biological effects promoted by Crotalus durissus collilineatus crude venom and its fractions crotoxin and phopholipase A2. The toxic effects of C d collilineatus crude venom were evaluated by the histopathological analysis of organs such as heart, kidney, brain, lung and liver. Wistar rats were inoculated intraperitoneally with C d collilineatus crude venom. The liver showed steatosis and microvacuolation.The other organs showed normal morphological aspects. Renal effects were evaluated by the isolated perfused rat kidney method.The crude venom used at the lowest dose (10µg) increased perfusion pressure (PP), urinary flow (UF), and glomerular filtration rate (GFR), with maximal effect at 120min (PP: control(120) 110.3+/-3.69; venom(120) 126.8+/-10.2; UF: control(120) 0.19+/-0.03; venom(120) 0.23+/-0.06; GFR: control(120) 0.79+/-0.07; venom(120) 1.17+/-0.4). There was no effect on the percent of sodium tubular transport (%TNa+), the percent of potassium tubular transport (%TK+) and the percent of chloride tubular transport (%TCl-) The highest dose of the crude venom (30µg) caused a significantly decrease in PP (control(120) 110.3±3.69; venom(120) 96.7±8.1), RVR (control(120) 6.42±0.78; venom(120)4.8±0.56), UF (control(120) 0.19±0.03; venom(120) 0.12±0.01) and GFR (control(120) 0.79±0.07; venom(120)0.53±0.09). There was not effect on the percent of electrolytes tubular transport (%TNa+, %TK+ and %TCl-). Crotoxin (10mcg) produced a decrease in GFR (control(120) 0.79±0.07; crotoxin(120) 0.31±0.10), while PP, RVR and UF remained stable. Crotoxin also reduced %TK+ (control(120) 69.94±6.49; crotoxin(120) 33.28±4.78) and %TCl- (control(120) 79.53±2.67; crotoxin (120) 64.62±6.93) with maximal effect at 120min. Kidney perfused with phospholipase A2 (PLA2) showed a decrease in GFR (control(120) 0.79±0.07; PLA2 (120) 0.52±0.07) at 120min, whereas PP, RVR, UF and %TNa+ remained stable. PLA2 also reduced %TK+ (control(120) 69.94±6.49; PLA2 (120) 56.26±6.81) and %TCl- (control(60) 82.25±2.72; PLA2 (60) 75.04±4.26) at 60min. These results altogether indicate that Crotalus durissus collilineatus venom caused significative alterations in the renal parameters as well as hepatic damage. / A serpente Crotalus durissus collilineatus é encontrada na região do Cerrado e o acidente causado por esta espécie constitui um problema de saúde pública. A insuficiência renal aguda é a alteração sistêmica mais séria, apesar dos seus mecanismos não serem completamente esclarecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos biológicos produzidos pelo veneno bruto de Crotalus durissus collilineatus e pelas frações crotoxina e fosfolipase A2. Foi realizado o estudo da toxicidade aguda do veneno bruto de C d collilineatus, através da análise histológica de coração, cérebro, rins, pulmões e fígado de ratos tratados com doses crescente do veneno. Nesse estudo foi observada a presença de alterações hepáticas como microvacualização e esteatose, enquanto os demais órgãos apresentaram aspectos normais. Os efeitos renais foram avaliados através do método de perfusão de rim isolado de rato. O veneno bruto, usado na dose de 10µg, causou um aumento na pressão de perfusão (PP), no fluxo urinário (FU) e no ritmo de filtração glomerular (RFG), com efeito máximo aos 120min (PP: controle(120) 110,3+/-3,69; veneno(120) 126,8+/-10,2;FU: controle(120) 0,19+/-0,03; veneno(120) 0,23+/-0,06; RFG: controle(120) 0,79+/-0,07; veneno(120) 1,17+/-0,4). Essa dose não produziu alterações no transporte tubular de sódio (%TNa+), potássio (%TK+) e de cloreto (%TCl-). A dose mais elevada de veneno bruto (30µg) causou um decréscimo significativo, com efeito máximo, aos 120min, na PP(controle(120) 110,3+/-3,69; veneno(120) 96,7+/-8,1), na RVR (controle(120) 6,42+/-0,78; veneno(120) 4,8+/-0,56), no FU (controle(120) 0,19+/-0,03; veneno(120) 0,12+/-0,01) e no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; veneno(120) 0,53+/-0,09). Não ocorreram alterações no transporte tubular de eletrólitos. A fração crotoxina não produziu alterações no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; crotoxina(120) 0,31+/-0,10). Esta fração também reduziu os %TK+ (controle(120) 69,94+/-6,49; crotoxina(120) 33,28+/-4,78) e %TCl- (controle(120) 79,53+/-2,67, crotoxina(120) 64,62+/-6,93). O grupo perfundido com FLA2 apresentou um decréscimo no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; FLA2 (120) 0,52+/-0,07), enquanto a PP, a RVR, o FU e o %TNa+ permaneceram estáveis. Foram observadas reduções no %TK+ aos 120min (controle(120) 69,94+/-6,49; FLA2(120) 56,26+/-6,81) e aos 60min, no %TCl- (controle(60) 82,25+/-2,72; FLA2(60) 75,04+/-4,26). Foi observada degeneração hidrópico vacuolar e a presença de material proteináceo nos túbulos renais, na análise histológica dos rins perfundidos tanto com veneno bruto quanto com as frações. Estes resultados indicam que o veneno de Crotalus durissus collilineatus causou alterações significativas nos parâmetros renais e nos aspectos morfológicos hepáticos.
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Efeito renal do veneno da Brothrops erythromelas e bloqueio induzido pelo fator antibotrópico do Didelphis marsupialis / Renal effect of Bothrops erythromelas venom and blockage induced by antibothropic factor from Didelphis marsupialisSousa, Fabiola Carine Monteiro de January 2004 (has links)
SOUSA, Fabíola Carine Monteiro de. Efeito renal do veneno da Bothrops erythomelas e bloqueio induzido pelo fator antibotrópico do Dedelphis marsupialis. 2004. 128 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-22T16:10:34Z
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Previous issue date: 2004 / Some animals present natural resistance to the effects of snake venoms that can be explained by the presence of neutralizing factors in their blood serum. The resistance of South American Didelphis marsupialis, against crotalid venoms, especially of the genus Bothrops, of utmost medical importance in Brazil, has been object of investigation in the last few years. Bothrops erythromelas, known as “jararaca-da-seca” or “jararaca-malha-de-cascavel” is responsible for a great deal of snakebites in Northeastern Brazil. The venom of this snake induces acute renal failure (Wen et al., 1989). In this work, we examined the action of the antibothropic factor isolated from Didelphis marsupialis on the renal effects of B. erythromelas venom in the absence of systemic interactions. Isolated kidneys from Wistar rats, weighing 260 to 300g, were perfused with Krebs-Henseleit solution containing 6g% of bovine serum albumin, Bothrops erythromelas venom (10mg/mL), antibothropic factor from Didelphis marsupialis (10mg/mL), antibothropic factor from Didelphis marsupialis (10mg/mL) incubated with Bothrops erythromelas venom (10mg/mL) and antibothropic factor from Didelphis marsupialis (30mg/mL) incubated with Bothrops erythromelas venom (10mg/mL). The parameters studied included perfusion pressure (PP), renal vascular resistance (RVR), glomerular filtration rate (GFR), urinary flow (UF), percent sodium, potassium and chloride tubular transport (%TNa+, %TK+ and %TCl-), and osmotic clearance (Cosm). The control group perfused with albumin was functionally stable for over 120 min. The administration of antibothropic factor from Didephis marsupialis (10µg/mL) did not modify the functional kidney parameters when compared with control group. The infusion of B. erythromelas venom (10µg/mL) caused a significant decrease (p< 0,05*) in perfusion pressure and renal vascular resistance at 60, 90 and 120 min. with maximum effect at 90 min. (PP→ ct90 = 108.70 ± 5.1 mmHg vs vBE90 = 65.20 ± 5.6* mmHg) and (RVR→ ct90 = 5.76 ± 0.65 mmHg/mL.g-1.min-1. vs vBE90 = 3.10 ± 0.45* mmHg/mL.g-1.min-1). The glomerular filtration rate decreased at 60 min. and increased at 90 and 120 min (ct120 = 0.72 ± 0.10 mL.g-1.min-1. vs vBE120 = 1.24 ± 0.26* mL.g-1.min-1). After administration of the venom, the urinary flow increased at 90 and 120 min when compared with control group (ct120 = 0.14 ± 0.07 mL.g-1.min-1. vs vBE120 = 0.47 ± 0.08* mL.g-1.min-1). Sodium transport percent decreased at 90 and 120 min. (ct90 = 79.18 ± 0.88% vs vBE90 = 58.35 ± 4.86* %). Potassium transport percent decreased at 90 and 120 min. (ct90 = 67.20 ± 4.04% vs vBE90 = 57.32 ± 5.28* %). Chloride transport percent decreased at 60, 90 and 120 min. (ct90 = 77.32 ± 2.22% vs vBE90 = 55.97 ± 5.52* %). The osmotic clearance increased at 90 and 120 min. (ct120 = 0.13 ± 0.01 mL. g-1.min-1 vs vBE120 = 0.42 ± 0.07* mL.g-1.min-1). The antibothropic factor from Didelphis marsupialis (10µg/mL) incubated with B. erythromelas venom (10µg/mL) blocked only the effects promoted by venom in the perfusion pressure and in the renal vascular resistance, whereas the highest concentration of the antibothropic factor from Didelphis marsupialis (30µg/mL) reversed the effects on renal vascular resistance, urinary flow, glomerular filtration rate, percent sodium potassium and chloride tubular transport (%TNa+, %TK+ and %TCl-), and osmotic clearance (Cosm). In conclusion, B. erythromelas venom altered all the renal functional parameters evaluated and the antibothropic factor from D.marsupialis was able to inhibit the effects induced by the venom in rat isolated kidney.
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Estudos das alterações renais e vasculares induzidas pelo veneno da Polybia Paulista / Vascular and renal alterations induced by the polybia paulista wasp venomChagas, Juliana Freire January 2009 (has links)
CHAGAS, Juliana Freire. Estudos das alterações renais e vasculares induzidas pelo veneno da vespa Polybia paulista. 2009. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-12T13:47:23Z
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Previous issue date: 2009 / Peçonhas de Hymenoptera, particularmente das famílias Apidae (abelhas) e Vespidae (vespas), são uma rica fonte de peptídeos e proteínas com atividades biológicas. A espécie Polybia Paulista é uma vespa social neotropical muito agressiva e endêmica no Sudeste do Brasil. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos renais e vasculares induzidos pelo veneno da Polybia paulista (VPp). Foram utilizados ratos (n = 4) machos Wistar pesando entre 250 e 300g, cujos rins foram isolados e perfundidos com Solução de Krebs-Henseleit modificada contendo 6g% de albumina bovina previamente dialisada. A menor concentração (1µg/mL) não apresentou efeito nos parâmetros avaliados. Porém, a concentração de 3µg/mL produziu um aumentou na pressão de perfusão renal (PP), na resistência vascular renal (RVR), no fluxo urinário (FU) e no ritmo de filtração glomerular (RFG). Foi também observada uma redução aos 60’ no percentual de transporte tubular de sódio (% TNa+). Na avaliação histológica do rim perfundido com VPp foi observado depósito de proteínas nos túbulos renais e nos espaços urinários, bem como regiões focais de necrose/apoptose. A citotoxidade do veneno da Polybia paulista em cultura de células MDCK foi analisada através do ensaio colorimétrico com sal de tetrazolium (MTT). O veneno promoveu um efeito citotóxico dependente de concentração com um valor de IC50 de 25.81µg/mL. Também foram mensurados os níveis de lactato desidrogenase (LDH) e observado um aumento significativo nas maiores concentrações estudadas. No estudo em leito mesentérico a pressão de perfusão foi mensurada através de um transdutor de pressão. O efeito vascular do VPp (3µg/mL) não alterou a pressão basal, na concentração de 10µg/mL, foi observado um aumento pressórico discreto e na concentração de 100 µg/mL, foi observado um acentuado aumento na pressão de perfusão basal. O efeito vasoconstritor observado no estudo renal e em leito mesentérico, também foi demonstrado no protocolo de anel de aorta, sendo observado de maneira concentração dependente, um aumento do tônus basal após a infusão do VPp. Em conclusão, o VPp causou nefrotoxidade, sugestivo de uma ação direta com morte celular em células do túbulo renal por necrose. O efeito vascular contrátil que envolve influxo de cálcio através de canais operados por voltagem, provavelmente é mediado pela ativação de receptores alfa adrenégicos.
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