Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

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Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

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L'ARN d'interférence (ARNi) est un mécanisme de régulation du gène qui permet un ciblage spécifique d'ARNmessager (ARNm) par reconnaissance de séquence. Les effecteurs de l'ARNi sont de petites molécules d'ARN non codants (siARN, microARN et piARN). Evoluant dans le contexte de l'ARNi, les virus de différentes familles ont adopté des stratégies afin utiliser l'ARNipour leur propre bénéfice. Le principal objectif de ma thèse a été d'étudier la fonction de l' ARNmiRTAR, un miARN viral dérivé de l'extrémité 3 'de l'ARN VIH-1 TAR dans la réplication du VIH-1. Nous avons constaté que miRTAR réguleà la fois l'activité basale et la transactivation induite par Tat du promoteur du VIH-1. L'effet de miRTAR ne nécessite pas de sa liaison à l'ARN TAR. miRTAR agit en augmentant l'activité de NF-kB, un facteur important pour la transcription du promoteur du VIH-1. En effet, la mutation des sites NF-kB, mais pas des sites Sp1 dans le LTR, abroge l'amélioration miRTARmédiée par la transcription. De plus, l'inhibition de l'expression de NF-kBpardes siARNspécifiquesdes les sous-unités p50 et p65, entraîne une perte d'activité dumiRTAR. Bien que nous n'avons pas pu identifier le(s) gène(s) cellulaire(s) ciblé par miRTAR, sa surexpression conduit à l'activation de la voie NF-kB. Mutation de l'extrémité 3 'du VIH-1 dans les résultats TAR réduction spectaculaire de la réplication virale Tat sans affecter médiée par la transcription, en raison de la perte de production de miRTARsauvage. Enfin, la surexpression de miRTARrestaure la réplication de ce virus contenant une mutation au niveau de la séquence TAR. En conclusion, nos résultats démontrent clairement que lemiRTARencodé par le VIH-1 joue un rôle clé dans la réplication du virus. Sur la base de ces résultats, nous proposons le modèle suivant pour la fonction de miRTAR. La transcription du LTR du VIH-1 conduit à la production de courts ARN dénommés TAR contenant une structure en épingle à cheveux. TAR est « processé » pour générer le miARN miRTAR. L'ARN miRTAR est ensuite chargé dans le complexe RISC et régule l'expression de plusieurs gènes cellulaires impliqués dans la régulation négative de NF-kB. miRTARmédiée par l'activation de NF-kB résultats dans la régulation de gènes viraux et par conséquent augmente la production de virus. L'ensemble de nos résultats montrent que le VIH-1 utilise la voie de l'ARNiinterférence pour optimiser l'environnement intracellulaire requis pour une réplication optimale. / RNA interference (RNAi) is a gene regulatory mechanism that offers a sequence specific targeting of mRNA. Evolving in the context of RNAi, viruses of different families adopted strategies to use RNAi for their benefit. The main objective of my thesis was to understand the function of miRTAR, a viral miRNA derived from 3' end of the HIV-1 TAR RNA, in HIV-1 replication. We found that miRTAR regulates both basal and Tat-mediated transactivation of HIV-1 promoter. The effect of miRTAR does not require its binding to TAR RNA. miRTAR acts by inducing NF-κB transcription factor important for the LTR activity. Indeed, mutation of NF-κB sites but not Sp1 sites within the LTR abrogate miRTAR-mediated enhancement of transcription from the LTR. Additionally, Inhibition of NF-κB using specific siRNA directed against p50 and p65 subunits results in loss of miRTAR activity. Although, we were unable to identify the cellular gene(s) targeted by miRTAR, its overexpression lead to the activation of NF-κB pathway. Mutation of the 3' end of HIV-1 TAR results in dramatic reduction of viral replication without affecting Tat-mediated transcription. Importantly, overexpression of miRTAR rescued the replication of miRTAR HIV-1 mutant virus.In conclusion, our results strongly demonstrate that the HIV-1 encoded miRTAR plays a key role in virus replication. On the basis of these findings, we propose the following model for the function of miRTAR. Transcription of the HIV-1 LTR leads to production of short, TAR containing, RNA hairpin sequences. TAR is processed to generate miRNA, miRTAR. miRTAR is then loaded into the RISC complex and regulates the expression of several cellular genes involved in the negative regulation of NF-κB. miRTAR-mediated activation of NF-κB results in up regulation of viral genes and consequently enhances virus production. Taken together, our results demonstrate that HIV-1 uses RNAi pathway to optimize the intracellular environment for optimal replication.

Introducción: El SIDA es una enfermedad que se viene presentando de manera alarmante en todo el mundo como una de las enfermedades mortales más relevantes, siendo un problema que trasciende a todas las sociedades. ONUSIDA manifiesta a fines del 2010aproximadamente 34 millones de personas vivían con el VIH en todo el mundo, un 17% más que en 2001. Esto refleja el continuo gran número de nuevas infecciones por el VIH y una expansión significativa del acceso al tratamiento antirretroviral, que ha ayudado a reducir las muertes relacionadas con el SIDA, especialmente en los últimos años. Objetivo: Determinar el cuidado integral de enfermería en los pacientes hospitalizados con VIH/SIDA en el Servicio de Enfermedades Infecciosas y Tropicales del Hospital Nacional Dos de Mayo durante el año 2012. Metodología: Es un estudio descriptivo de corte transversal no experimental, la muestra se seleccionó, mediante el tipo de muestreo no probabilístico, fue constituida por 30 pacientes de ambos sexos. La información fue recolectada a través de una entrevista y como instrumento un cuestionario de 26 preguntas dividido en cuatro dimensiones: Biológica, Psicológica, Espiritual y Social – Familiar, se ejecutó en cuatro periodos. Resultado: El cuidado integral de enfermería según los pacientes hospitalizados con VIH/SIDA en el Hospital Nacional Dos de Mayo es en su mayoría regular con un 53.3% (16), seguido del nivel bueno con un 26.7% (8) y un nivel deficiente con un 20% (6). Se ha considerado los principios éticos de la autonomía, beneficencia, no maleficencia y justicia se respetó el anonimato y la confidencialidad del paciente y no se ocasionó ningún tipo de daño físico o mental. Conclusiones: Se comprobó que el cuidado integral comprendido entre las dimensiones: Biológica, Psicológica, Espiritual y Social-familiar, realizado por el personal de enfermería según los pacientes hospitalizados con VIH/SIDA es regular, por tanto es importante que la enfermera(o) debe brindar un cuidado con un enfoque integral teniendo en cuenta todas las dimensiones para ofrecer calidad de vida y humanizada.

Objetivos: Determinar la frecuencia del Fenómeno de Prozona en la prueba de detección rápida de reaginas plasmáticas (RPR) en individuos con coinfección por VIH y sífilis. Así mismo determinar la seroprevalencia de sífilis en los pacientes con VIH/SIDA atendidos en el Hospital Nacional Dos de Mayo mediante la Estrategia Sanitaria Nacional Prevención y Control de las ITS, VIH y SIDA (ESNITSS). Métodos: Se estudiaron un total de 567 muestras de suero de pacientes con VIH/SIDA atendidos en la ESNITSS del Hospital Nacional Dos de Mayo, a todos se le realizó la prueba cualitativa de RPR, así como la cuantitativa hasta la dilución 1:32 con la finalidad de buscar fenómeno de prozona, para la confirmación serológica de la infección por sífilis, los sueros que resultaron reactivos fueron analizados con la prueba de hemaglutinación pasiva para la detección de anticuerpos específicos de T. pallidum (TPHA). Resultados: Se realizó la búsqueda de fenómeno de prozona en toda muestra no reactiva en la prueba cualitativa del RPR no encontrándose caso alguno (0.0%). De las 567 muestras analizadas se encontraron 114 muestras reactivas en el RPR, de estas 108 resultaron positivas en el TPHA y 6 generaron resultados indeterminados en la misma prueba, la seroprevalencia determinada de sífilis en pacientes VIH positivos atendidos en la ESNITSS del Hospital Nacional Dos de Mayo fue de 20.1%. Conclusiones: No se halló fenómeno de prozona en la población estudiada. La seroprevalencia de sífilis es alta y sería sugestivo de la falta de medidas de protección durante las relaciones sexuales. / --- Objectives: To determine prozone phenomenon frecuencies by RPR test in individuals with HIV and syphilis co-infection. Also, determine the frequency of HIV/syphilis coinfection in patients treated at Health Strategy for Control of STI and HIV/AIDS (ESNITSS) of the National Hospital Dos de Mayo. Methods: A total of 567 serum samples from HIV positive patients attended at Hospital Nacional Dos de Mayo by ESNITSS program were evaluated. All samples underwent qualitative and quantitative RPR testing up to1:32 dilution in order to assess the presence of prozone phenomenon, all positive samples were confirmed for serological confirmation of syphilis infection using TPHA. Results: There were not prozone phenomenon in all samples assessed. Of 567 samples analyzed, 114 samples were reactive for RPR, from these 108 were positive at TPHA and 6 resulted indeterminate. Syphilis seroprevalence in HIV-positive patients treated by ESNITSS of the Hospital Nacional Dos de Mayo was 20.1 %. Conclusions: We did not found any case of prozone phenomenon in evaluated samples. The seroprevalence of syphilis in HIV positive patients treated at the Hospital Nacional Dos de Mayo by the SNITSS program is significantly high and this could indicate that a high percentage of HIV-positive patients do not take prevention measures during intercourse.