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Prospecção gênica e atividade antimicrobiana de b-defensina-símiles em viperídeos. / Gene survey and antimicrobial activity of beta-defensin-like in viperid.

Corrêa, Poliana Garcia 30 October 2013 (has links)
As b-defensinas são pequenos peptídeos catiônicos com estrutura rica em folhas b pregueadas e seis cisteínas conservadas. São bastante estudadas em mamíferos, mas pouco em serpentes. Utilizando a PCR foram descritos 13 genes b-defensina-símiles em serpentes do gênero Bothrops e Lachesis . Eles se organizam em três éxons e dois íntrons; há alta similaridade no éxon1, íntron 1 e 2, mas os éxons 2 e 3 estão sob evolução acelerada. A análise filogenética por máxima parcimônia revelou que o gene ancestral de b-defensina-símile pode ter três éxons em vertebrados e sua evolução ocorreu de acordo com o modelo de nascimento-e-morte. Peptídeos b-defensina-símiles reduzidos, testados por ensaio de inibição de crescimento em meio líquido, apresentaram atividade inibitória contra Escherichia coli, Citrobacter freundii, Micrococcus luteus e Staphylococcus aureus. A crotamina reduzida foi mais ativa que a forma nativa. Os resultados indicam que a carga líquida era a característica bioquímica mais importante na atividade antibiótica dos peptídeos b-defensina-símiles. / b-defensins are small basic cationic peptides with b-sheet-rich fold plus six conserved cysteines. They are fully studied in mammals, but scarce in snakes. Using a PCR approach, we described 13 b-defensin-like sequences in Bothrops and Lachesis snakes. They are organized in three exons and two introns; they show high similarities in exon 1, intron 1 and intron 2, but exons 2 and 3 have undergone accelerated evolution. Phylogenetic analysis was done using maximum parsimony indicate that the ancestral b-defensin-like gene may have three exons in vertebrates and that their evolution occurred according to a birth-and-death model. Reduced b-defensin-like peptides were tested by microbroth dilution assay, showed inhibitory activity against Escherichia coli, Citrobacter freundii, Micrococcus luteus e Staphylococcus aureus. The reduced form of crotamine was more active than native. The results indicate that the positive net charge is the most important biochemical characteristic of b-defensin-like peptides to antibiotic activity.
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Aspectos hematológicos, bioquímicos, morfológicos e citoquímicos de células sangüíneas em Viperídeos neotropicais dos gêneros Bothrops e Crotalus mantidos em cativeiro / Hematological, biochemical, morphological and cytochemical aspects of blood cells in neotropical Viperidae from Bothrops and Crotalus genus mantained in captivity

Luciana Carla Rameh-de-Albuquerque Zanotti 09 March 2007 (has links)
Este estudo apresenta um painel de dados hematológicos, bioquímicos, morfológicos e citoquímicos para um grupo de serpentes dos gêneros Bothrops e Crotalus mantidas em cativeiro no Instituto Butantan. Para tanto, amostras de sangue foram colhidas da veia coccígea ventral e processadas de acordo com métodos padronizados. Os resultados alcançados foram analisados para determinar diferenças interespecíficas e sexuais. A avaliação citoquímica incluiu Sudan Black B (SBB), Ácido Periódico de Schiff (PAS) e Benzidina Peroxidase (BP). Os resultados hematológicos e bioquímicos mais relevantes indicaram um número significativamente mais alto de basófilos em B. jararaca e níveis mais altos de cálcio nas fêmeas da maioria das espécies. Os azurófilos marcaram positivamente para todas as colorações. A diferenciação entre trombócitos e linfócitos foi facilmente obtida com PAS. Os basófilos marcaram positivamente apenas com PAS em Bothrops alternatus. A marcação em heterófilos variou consideravelmente entre as espécies. Ultra-estruturalmente, os leucócitos foram semelhantes ao já descrito em literatura com algumas variações no tipo dos grânulos dos basófilos e heterófilos. Os grânulos dos basófilos apresentaram-se redondos em sua maioria, com tamanho e densidade variadas, enquanto que os nos heterófilos foram heterogêneos em forma, tamanho e densidade. / This study reports a panel for hematological, biochemical, morphological and cytochemical data for a group of captive snakes belonging to the genus Bothrops and Crotalus mantained at Instituto Butantan, São Paulo, Brazil. Blood samples were collected from ventral coccigeal vein and were processed according to standard protocols. Cytochemical staining including Sudan Black B (SBB), Periodic Acid-Schiff (PAS) and Benzidine peroxidase (BP) were conducted. Blood values were evaluated to determine interspecific and sex differences. We found a significant increase of basophils in Bothrops jararaca and higher levels of calcium in females. Azurophils stained positively for all stains and a differentiation between lymphocytes and thrombocytes was easily obtained with PAS stain. Basophils stained positively only with PAS in Bothrops alternatus. Heterophils staining varied between species. The ultrastructure of leucocytes were similar within described in literature, with some variations on granules of basophils and heterophils. Basophils granules were round, with heterogeneous size and density; whereas, heterphils granules were heterogeneous in shape, size and density.
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Influência da paisagem na dieta de Bothrops atrox na Amazônia oriental / Landscape influence on Bothrops atrox diet in the eastern Amazon

Melissa Gaste Martinez 04 December 2015 (has links)
No Brasil, 90% dos 26 mil acidentes ofídicos são ocasionados pelo gênero Bothrops, sendo a espécie Bothrops atrox a predominante na região amazônica brasileira. A região de Santarém (PA) está relacionada com 92% dos acidentes ofídicos, dos quais 20% foram considerados graves. Essa alta incidência pode estar relacionada à diversidade dos cenários florísticos da região, possibilitando a existência de uma amplitude deste gênero. Através do uso da metodologia dos isótopos estáveis do carbono (13C) e do nitrogênio (15N), verificou-se se as variações dos hábitos e fontes alimentares existentes nos diferentes ambientes e usos de solo na Amazônia, neste caso, ambientes de floresta, savana e pastagem, influenciaram na composição isotópica dos tecidos coletados das B. atrox encontradas nestes ambientes. Para a captura das B. atrox e de suas presas em potencial, utilizou-se três métodos de coleta, como encontro ocasional, busca ativa e armadilhas de interceptação e queda (Pit fall traps). Após as capturas, essas serpentes foram mantidas no biotério da FIT e retiradas amostras de tecidos periodicamente. Os tecidos das B. atrox e suas fontes alimentares foram analisados isotopicamente por espectrometria de massas para ?13C e ?15N. As diferentes fontes alimentares das B. atrox, foram isotopicamente distintas nos três ambientes, assim como a incorporação em seus tecidos analisados. Para as B. atrox mantidas no biotério, assim como o alimento de biotério oferecido, obteve-se o turnover de alguns tecidos independentemente do ambiente em que foram coletadas inicialmente. Após algum tempo no biotério, esses animais passaram a ter o sinal isotópico da nova alimentação oferecida, sendo que em alguns tecidos, essa troca refletia rapidamente e em outros tecidos mais lentamente. Este estudo contribuiu para o conhecimento da ecologia da serpente e seu uso dos ambientes, ainda pouco relatados e para o entendimento de turnover em tecidos animais / In Brazil, 90% of 26,000 snakebites are caused by the genus Bothrops, and the Bothrops atrox the predominant species in the Brazilian Amazon. The region of Santarém (PA) is related to 92% of snake bites, of which 20% were considered severe. This high incidence may be related to floristic diversity of scenarios in the region, enabling the existence of an amplitude of this genus. By using the methodology of carbon stable isotope (13 C) and nitrogen (15N), it was found that the changes in eating habits and sources existing in different environments and land use in the Amazon, in this case, forest environments, savannah and pasture, influenced the isotopic composition of the collected tissues of B. atrox found in these environments. To catch the B. atrox and its potential prey, we used three methods of collection, as chance meeting, active surveillance and interception traps and falling (Pit fall traps). After capture, these snakes were kept in the vivarium of the FIT and tissue samples taken periodically. The tissues of B. atrox and their food sources were analyzed isotopically by mass spectrometry for ?13C and ?15N. The different food sources of B. atrox were isotopically different in the three environments as well as its incorporation into tissues analyzed. For B. atrox kept in a vivarium, as well as the vivarium food offered was obtained turnover of some tissues regardless of the environment in which they were originally collected. After some time in the vivarium, these animals now have the isotopic signal of the new offered food, and in some tissues, this change reflected quickly and others more slowly tissues. This study contributed to the knowledge of the ecology of the snake and its use environments, poorly reported and for understanding turnover in animal tissues
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Prospecção gênica e atividade antimicrobiana de b-defensina-símiles em viperídeos. / Gene survey and antimicrobial activity of beta-defensin-like in viperid.

Poliana Garcia Corrêa 30 October 2013 (has links)
As b-defensinas são pequenos peptídeos catiônicos com estrutura rica em folhas b pregueadas e seis cisteínas conservadas. São bastante estudadas em mamíferos, mas pouco em serpentes. Utilizando a PCR foram descritos 13 genes b-defensina-símiles em serpentes do gênero Bothrops e Lachesis . Eles se organizam em três éxons e dois íntrons; há alta similaridade no éxon1, íntron 1 e 2, mas os éxons 2 e 3 estão sob evolução acelerada. A análise filogenética por máxima parcimônia revelou que o gene ancestral de b-defensina-símile pode ter três éxons em vertebrados e sua evolução ocorreu de acordo com o modelo de nascimento-e-morte. Peptídeos b-defensina-símiles reduzidos, testados por ensaio de inibição de crescimento em meio líquido, apresentaram atividade inibitória contra Escherichia coli, Citrobacter freundii, Micrococcus luteus e Staphylococcus aureus. A crotamina reduzida foi mais ativa que a forma nativa. Os resultados indicam que a carga líquida era a característica bioquímica mais importante na atividade antibiótica dos peptídeos b-defensina-símiles. / b-defensins are small basic cationic peptides with b-sheet-rich fold plus six conserved cysteines. They are fully studied in mammals, but scarce in snakes. Using a PCR approach, we described 13 b-defensin-like sequences in Bothrops and Lachesis snakes. They are organized in three exons and two introns; they show high similarities in exon 1, intron 1 and intron 2, but exons 2 and 3 have undergone accelerated evolution. Phylogenetic analysis was done using maximum parsimony indicate that the ancestral b-defensin-like gene may have three exons in vertebrates and that their evolution occurred according to a birth-and-death model. Reduced b-defensin-like peptides were tested by microbroth dilution assay, showed inhibitory activity against Escherichia coli, Citrobacter freundii, Micrococcus luteus e Staphylococcus aureus. The reduced form of crotamine was more active than native. The results indicate that the positive net charge is the most important biochemical characteristic of b-defensin-like peptides to antibiotic activity.
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Influência da paisagem na dieta de Bothrops atrox na Amazônia oriental / Landscape influence on Bothrops atrox diet in the eastern Amazon

Martinez, Melissa Gaste 04 December 2015 (has links)
No Brasil, 90% dos 26 mil acidentes ofídicos são ocasionados pelo gênero Bothrops, sendo a espécie Bothrops atrox a predominante na região amazônica brasileira. A região de Santarém (PA) está relacionada com 92% dos acidentes ofídicos, dos quais 20% foram considerados graves. Essa alta incidência pode estar relacionada à diversidade dos cenários florísticos da região, possibilitando a existência de uma amplitude deste gênero. Através do uso da metodologia dos isótopos estáveis do carbono (13C) e do nitrogênio (15N), verificou-se se as variações dos hábitos e fontes alimentares existentes nos diferentes ambientes e usos de solo na Amazônia, neste caso, ambientes de floresta, savana e pastagem, influenciaram na composição isotópica dos tecidos coletados das B. atrox encontradas nestes ambientes. Para a captura das B. atrox e de suas presas em potencial, utilizou-se três métodos de coleta, como encontro ocasional, busca ativa e armadilhas de interceptação e queda (Pit fall traps). Após as capturas, essas serpentes foram mantidas no biotério da FIT e retiradas amostras de tecidos periodicamente. Os tecidos das B. atrox e suas fontes alimentares foram analisados isotopicamente por espectrometria de massas para ?13C e ?15N. As diferentes fontes alimentares das B. atrox, foram isotopicamente distintas nos três ambientes, assim como a incorporação em seus tecidos analisados. Para as B. atrox mantidas no biotério, assim como o alimento de biotério oferecido, obteve-se o turnover de alguns tecidos independentemente do ambiente em que foram coletadas inicialmente. Após algum tempo no biotério, esses animais passaram a ter o sinal isotópico da nova alimentação oferecida, sendo que em alguns tecidos, essa troca refletia rapidamente e em outros tecidos mais lentamente. Este estudo contribuiu para o conhecimento da ecologia da serpente e seu uso dos ambientes, ainda pouco relatados e para o entendimento de turnover em tecidos animais / In Brazil, 90% of 26,000 snakebites are caused by the genus Bothrops, and the Bothrops atrox the predominant species in the Brazilian Amazon. The region of Santarém (PA) is related to 92% of snake bites, of which 20% were considered severe. This high incidence may be related to floristic diversity of scenarios in the region, enabling the existence of an amplitude of this genus. By using the methodology of carbon stable isotope (13 C) and nitrogen (15N), it was found that the changes in eating habits and sources existing in different environments and land use in the Amazon, in this case, forest environments, savannah and pasture, influenced the isotopic composition of the collected tissues of B. atrox found in these environments. To catch the B. atrox and its potential prey, we used three methods of collection, as chance meeting, active surveillance and interception traps and falling (Pit fall traps). After capture, these snakes were kept in the vivarium of the FIT and tissue samples taken periodically. The tissues of B. atrox and their food sources were analyzed isotopically by mass spectrometry for ?13C and ?15N. The different food sources of B. atrox were isotopically different in the three environments as well as its incorporation into tissues analyzed. For B. atrox kept in a vivarium, as well as the vivarium food offered was obtained turnover of some tissues regardless of the environment in which they were originally collected. After some time in the vivarium, these animals now have the isotopic signal of the new offered food, and in some tissues, this change reflected quickly and others more slowly tissues. This study contributed to the knowledge of the ecology of the snake and its use environments, poorly reported and for understanding turnover in animal tissues
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História natural das serpentes das região de Munhoz, sul de Minas Gerais, Serra da Mantiqueira. / Natural history of the snakes from the Munhoz region, south of Minas Gerais, Serra da Mantiqueira.

Cardoso, Silvia Regina Travaglia 04 November 2011 (has links)
Estudando uma comunidade de serpentes da Serra da Mantiqueira, foram encontradas 11 espécies de serpentes, e constatada a superioridade numérica de indivíduos da família Viperidae. As áreas abertas foram as mais freqüentadas, além de mostrar maior riqueza de espécies. A maioria das espécies encontradas apresenta a viviparidade como modo reprodutivo. A altitude mostrou influenciar a distribuição e abundância das espécies. As três espécies mais abundantes foram B. neuwiedi, B. jararaca e C. durissus, e são apresentadas informações de sua história natural. As fêmeas são maiores e mais robustas do que os machos. Entre filhotes, o dimorfismo sexual não ocorre ou é restrito. Fêmeas são mais ativas na primavera e no verão, e machos no outono. As fêmeas parecem ser mais agressivas. As três espécies alimentam-se preferencialmente de pequenos mamíferos. A espermatogênese e a vitelogênese são sazonais, e machos e fêmeas estocam espermatozóides no trato genital a fim de harmonizarem seus ciclos. O nascimento dos filhotes ocorre no verão. / This study was conducted in the Serra da Mantiqueira, and show biological and ecological aspects within a community of snakes. Eleven species were found. The snakes was mostly found in open areas, and open areas also showed a greater richness of species. A significant percentage of the species reproduced by viviparity. Altitude influenced the abundance and distribution of the species. The three dominant species of snakes was B. neuwiedi, B jararaca and C. durissus. Females are bigger and stronger then the males. Among the young, sexual dimorphism does not happen or it is restricted. Females also showed increased activity during the spring and summer, whiles males had increased activity levels during the autumn months. Females were more aggressive. These three species feed primarily on small mammals. Spermatogenesis and vitellogenesis are seasonal, and males and females show sperm storage in the genital tract so their cycles are harmonized. B. jararaca is bigger and stronger than B. neuwiedi, and female B. jararaca have larger and heavier litters.
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História natural das serpentes das região de Munhoz, sul de Minas Gerais, Serra da Mantiqueira. / Natural history of the snakes from the Munhoz region, south of Minas Gerais, Serra da Mantiqueira.

Silvia Regina Travaglia Cardoso 04 November 2011 (has links)
Estudando uma comunidade de serpentes da Serra da Mantiqueira, foram encontradas 11 espécies de serpentes, e constatada a superioridade numérica de indivíduos da família Viperidae. As áreas abertas foram as mais freqüentadas, além de mostrar maior riqueza de espécies. A maioria das espécies encontradas apresenta a viviparidade como modo reprodutivo. A altitude mostrou influenciar a distribuição e abundância das espécies. As três espécies mais abundantes foram B. neuwiedi, B. jararaca e C. durissus, e são apresentadas informações de sua história natural. As fêmeas são maiores e mais robustas do que os machos. Entre filhotes, o dimorfismo sexual não ocorre ou é restrito. Fêmeas são mais ativas na primavera e no verão, e machos no outono. As fêmeas parecem ser mais agressivas. As três espécies alimentam-se preferencialmente de pequenos mamíferos. A espermatogênese e a vitelogênese são sazonais, e machos e fêmeas estocam espermatozóides no trato genital a fim de harmonizarem seus ciclos. O nascimento dos filhotes ocorre no verão. / This study was conducted in the Serra da Mantiqueira, and show biological and ecological aspects within a community of snakes. Eleven species were found. The snakes was mostly found in open areas, and open areas also showed a greater richness of species. A significant percentage of the species reproduced by viviparity. Altitude influenced the abundance and distribution of the species. The three dominant species of snakes was B. neuwiedi, B jararaca and C. durissus. Females are bigger and stronger then the males. Among the young, sexual dimorphism does not happen or it is restricted. Females also showed increased activity during the spring and summer, whiles males had increased activity levels during the autumn months. Females were more aggressive. These three species feed primarily on small mammals. Spermatogenesis and vitellogenesis are seasonal, and males and females show sperm storage in the genital tract so their cycles are harmonized. B. jararaca is bigger and stronger than B. neuwiedi, and female B. jararaca have larger and heavier litters.
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Caracterização bioquímica, estrutural e funcional de uma L-aminoácido oxidase isolada de peçonha de Lachesis muta (Serpentes, Viperidae) / Purification, biochemistry and functional characterization of a new L-amino acid oxidase from Lachesis muta venom.

Silva, Cristiane Bregge da 31 October 2011 (has links)
As peçonhas de serpentes contêm uma mistura complexa de substâncias farmacologicamente ativas, como metaloproteases, fosfolipases A2, serino-proteases, L-aminoácido oxidase (LAAO), além de outros importantes compostos sem ação enzimática. LAAOs são flavoproteínas que catalisam a desaminação oxidativa de L-aminoácidos e produzem o -cetoácido correspondente, com a concomitante liberação de amônia e peróxido de hidrogênio. A peçonha de Lachesis muta (L. muta) contém L-aminoácido oxidase, a qual pode contribuir com o envenenamento. Portanto, o objetivo deste trabalho é a purificação da L-amino acido oxidase de peçonha de Lachesis muta (LmLAAO) e a sua caracterização bioquímica, estrutural e funcional. Para isso, foram desenvolvidos dois protocolos distintos de purificação, os quais forneceram LmLAAO com grande pureza. No primeiro protocolo, 20 mg de peçonha bruta de L. muta foram submetidos a uma gel filtração em Sephacryl S100®. Das dez frações obtidas, a primeira fração apresentou atividade L-aminoácido oxidase e foi submetida a mais um passo cromatográfico em Mono Q®. A homogeneidade da fração com atividade L-aminoácido oxidase após a troca iônica foi comprovada por presença de banda única com 60,2 kDa em SDS-PAGE. O segundo protocolo de purificação foi uma sequência de três passos cromatográficos, na qual 200 mg de peçonha bruta de L. muta foram submetidos a gel filtração em Sephacryl S200®, seguido por interação hidrofóbica em Phenyl Sepharose® e Affi- gel Blue Gel®. Da mesma forma, a pureza da enzima obtida depois desses passos cromatográficos foi comprovada por presença de banda única com 64 kDa em SDS-PAGE. Em ambos os protocolos de purificação, LmLAAO manteve sua atividade enzimática. A massa molar de LmLAAO foi determinada por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e apresentou valor de 60,85 kDa. Além disso, foi determinado o valor do ponto isoelétrico da LmLAAO como 5,1. A LmLAAO mostrou preferência catalítica por aminoácidos hidrofóbicos (L-Metionina L-Leucina e L-Fenilalanina) e apresentou perda de atividade catalítica quando submetida à altos valores de pH ou de temperatura. Os parâmetros cinéticos foram determinados e a constante de Michaelis-Menten para o substrato L-Leucina foi de 0,9737 mmol/L e a velocidade máxima de reação foi de 0,06345 mol peróxido de hidrogênio/min. A sequência N-terminal dos 40 primeiros resíduos da LmLAAO purificada foi determinada por degração de Edman e a sua estrutura primária completa foi deduzida da sequência do cDNA obtido da glândula de peçonha. Verificou-se uma grande identidade entre as sequências em aminoácidos da LAAO de L. muta e as de outros viperídeos. A estrutura da LmLAAO foi resolvida por substituição molecular usando as coordenadas atômicas da LAAO de Agkistrodon halys pallas (PDB 1REO). As atividades farmacológicas da LmLAAO foram determinadas in vivo e in vitro. A injeção da enzima (10 µg) não induziu edema de pata em camundongos, nem hemorragia (50 µg) e nem toxicidade sistêmica (100 µg). No entanto, provocou uma leve mionecrose (100 µg) e edema em músculo quadríceps de camundongo, aumentando a creatina quinase plasmática. In vitro, foram testadas as atividades citotóxicas da LmLAAO em células de carcinoma. Os dados obtidos mostram IC50 de 22,70 µg/mL, para linhagem AGS (carcinoma de estômago), e IC50 de 1,41 µg/mL linhagem MCF-7 (carcinoma de mama). Para a atividade antiparasitária, foi determinada uma IC50 de 2,22 µg/mL para a forma promastigota de Leishmania brasiliensis. No entanto, a LmLAAO (32 µg/mL) não apresentou toxicidade relevante para a forma tripomastigota de Tripanosoma cruzi. Concluindo, este trabalho descreve o isolamento e a caracterização estrutural e funtional de uma nova LAAO da peçonha de L. muta. A enzima mostrou efeitos antitumorais e leishmanicida, sem toxicidade sistêmica relevante, mas apresentou significativa ação edematogênica e miotóxica local. Este estudo é relevante não apenas por contribuir para uma melhor compreensão do papel da LAAO no envenenamento, mas também por demonstrar seu potencial biotecnológico como agente terapêutico. / Snake venoms comprise a complex mixture of pharmacologically active substances, such as metalloproteases, phospholipase A2, serine proteases and L-amino acid oxidases (LAAOs) other compounds showing no enzymatic activity. LAAOs are flavoproteins catalyzing the oxidative deamination of L-amino acids to produce the corresponding -keto acid with the concomitant release of ammonia and hydrogen peroxide. Lachesis muta (L. muta) venom contains L-amino acid oxidase which may contribute to the envenomation. The aim of this study is the purification of an L-amino acid oxidase from Lachesis muta venom (LmLAAO) and its structural and functional characterization. For that, two purification protocols were performed and both provided highly pure LmLAAO. In the first protocol, 20 mg of crude venom of L. muta were submitted to a gel filtration on Sephacryl S100® and yielded ten fractions, whose were tested for L-amino acid oxidase activity. The first fraction showed L-amino acid oxidase activity and it was submitted to a further chromatographic step on Mono Q®. The homogeneity of the fraction showing L-amino acid oxidase activity after ion exchange was confirmed by the presence of a single band corresponding to 60.2 kDa by SDS-PAGE. The second purification protocol was a sequence of three chromatographic steps, where 200 mg of crude L. muta venom were submitted to gel filtration on Sephacryl S200, followed by hydrophobic interaction on Phenyl Sepharose® and Affi-gel-Blue Gel. For the second protocol, the purity of LmLAAO was confirmed by the presence of a single band with 64 kDa as determined by SDS-PAGE. In both purification protocols LmLAAO kept its enzymatic activity. The molar mass of LmLAAO was determined by mass spectrometry (MALDI-TOF) and showed a value of 60.85 kDa. Moreover, the isoelectric point was 5.1. In addition, LmLAAO showed a catalytic preference for hydrophobic amino acids (L-methionine, L-leucina and L-phenylalanine) and lost its catalytic activity when subjected to high pH or temperature. The kinetic parameters for LAAO were determined and the Michaelis-Menten constant for the substrate L-leucine was 0.9737 mmol/L, and the maximum reaction velocity was 0.06345µmol hydrogen peroxide/min. Furthermore, the sequence of the first forty residues was determined by Edman degradation and the complete sequence of LmLAAO was resolved by cloning cDNA obtained from the venom glands. The amino acid sequence of LmLAAO showed a great identity with sequences of LAAOs from other viper snakes. The LmLAAO structure was solved by molecular replacement using the the atomic coordinates of the LAAO from Agkistrodon halys pallas (PDB 1REO). In addiction, LmLAAO pharmacological activities were determined in vivo and in vitro. Thus, LmLAAO (10 µg) did not induce paw edema in mice, neither hemorrhage (50 µg) nor systemic toxicity (100 µg). However, it caused a mild myonecrosis (100 µg) and edema in the quadriceps muscles of mice, increasing plasma creatine kinase. In vitro activities of LmLAAO in carcinoma cells was assayed. The IC50 of LmLAAO on AGS cell line (stomach cancer) was 22.70 µg / mL, and the IC50 of LmLAAO on MCF-7 cell line (breast carcinoma) was 1.41 µg/mL. Moreover, antiparasitic activity of LmLAAO was determined on promastigote of Leishmania brasiliensis and an IC50 of 2.22 µg/mL was found, whereas on trypomastigote form Trypanosoma cruzi LmLAAO showed no toxicity at doses of 32 µg/mL. In conclusion, this work reports the isolation and the structural and funtional characterization of a new LAAO from L. muta snake venom. The enzyme showed antitumoral and leishmanicidal effects, without relevant systemic toxicity, but presented a significant local edema inducing and myotoxic action. This study is relevant not only for contributing to a better understanding of LAAO role in envenomation, but also for demonstrating its biotechnological potential as a therapeutic agent.
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Description of Cranial Elements and Ontogenetic Change within Tropidolaemus wagleri (Serpentes: Crotalinae).

Hill, Nicolette L 01 May 2016 (has links)
Tropidolaemus wagleri is a species of Asian pitviper with a geographic range including Thailand, Vietnam, Malaysia, Singapore, Bruniei, parts of Indonesia, and the hilippines. Tropidolaemus is a member of the Crotalinae subfamily, within Viperidae. The genus Tropidolaemus includes five species, and was once included within the genus Trimeresurus. While some osteologic characteristics have been noted a comprehensive description of cranial elements has not been produced for T. wagleri. An in-depth description of the cranial skeleton of Tropidolaemus wagleri lays the foundation for future projects to compare and contrast other taxa within Crotalinae and Viperidae. The chosen reference specimen was compared to the presumed younger specimens to note any variation in ontogeny. The study here provides a comprehensive description of isolated cranial elements as well as a description of ontogenetic change within the specimens observed. This study contributes to the knowledge of osteological characters in T. wagleri and provides a foundation for a long term project to identify isolated elements in the fossil record.
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Les envenimations par vipéridés en République de Djibouti d'octobre 1994 à mai 2006 étude prospective dans le service de réanimation du groupement médico-chirurgical Bouffard /

Larreche, Sébastien Mion, Georges January 2007 (has links) (PDF)
Thèse d'exercice : Médecine. Médecine générale : Paris 12 : 2007. / Titre provenant de l'écran-titre. 173 f. ill. Bibliogr. f. 161-172.

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