Apesar do grande avanço da laringologia nas últimas décadas, o tratamento da rigidez da prega vocal continua sendo um desafio. A rigidez da prega vocal pode estar associada a alterações estruturais mínimas como no sulco vocal profundo ou decorrente da fibrose cicatricial como nos casos de cicatriz pós-operatória. Em ambos os casos, há perda dos elementos da matriz extracelular da camada superficial da lâmina própria (Espaço de Reinke) que se encontra substituída por tecido cicatricial. O objetivo do tratamento é recuperar a deficiência volumétrica e restabelecer a microarquitetura histológica da prega vocal. O tecido areolar perifascial constitui uma excelente alternativa por suas propriedades viscoelásticas semelhantes à da camada superficial da lâmina própria, por sua fácil obtenção e baixo custo. O objetivo deste estudo foi avaliar as alterações histológicas que ocorrem no enxerto e na prega vocal enxertada e comparar os resultados encontrados com a prega vocal contralateral, submetida apenas à manipulação cirúrgica. Trinta coelhos foram submetidos ao procedimento cirúrgico que consistiu na confecção de um bolsão na lâmina própria de ambas as pregas vocais. O enxerto foi colocado na prega vocal direita e a prega esquerda utilizada como controle. Os animais foram divididos randomicamente em três grupos diferindo no tempo da análise histológica: 15 dias (Grupo I), três meses (Grupo II) e seis meses (Grupo III). As lâminas foram coradas com hematoxicilina-eosina e pelo Sírius-red, uma coloração específica para fibras colágenas. Observou-se uma mudança gradual do enxerto com aumento progressivo da densidade das fibras colágenas no interior do enxerto e uma mudança progressiva do padrão de birrefringência das mesmas, de um predomínio de fibras colágenas amarelo-esverdeadas para um predomínio de fibras laranja-avermelhadas. A laplicação do teste estatístico Anova one-way mostrou um aumento estatisticamente significativo da densidade de colágeno total no interior do enxerto entre os animais dos Grupos I e II (p=0,004) e um aumento significativo da porcentagem de fibras laranja-avermelhadas entre o Grupo II e III (p=0,011). A densidade do colágeno na região adjacente ao enxerto na prega vocal enxertada foi estatisticamente maior que a densidade de colágeno na incisão cirúrgica na prega vocal controle em todos os grupos de estudo (p 0,001). A aplicação do Teste de Fisher na análise semiquantitativa do processo inflamatório não evidenciou diferença estatisticamente significativa entre a prega vocal enxertada e a prega vocal controle em nenhum dos tempos estudados. Entretanto, quando avaliamos o processo inflamatório temporalmente para cada prega vocal evidenciamos uma diminuição significativa do processo inflamatório entre os animais do grupo de 15 dias e três meses (p=0,032 para o grupo enxertado e p=0,035 para o grupo controle). Nossos achados sugerem que o tecido areolar perifascial apresenta baixa tendência a promover reação inflamatória e permanece na prega vocal do coelho por pelo menos seis meses. Entretanto, há uma importante mudança da composição do colágeno dentro do enxerto e no tecido ao redor deste sugerindo não ser um tecido ideal para substituir a lâmina própria. Outros estudos devem ser realizados para avaliar o seu papel no tratamento da rigidez da prega vocal. / Besides the great development of phonosurgery over the previous decades, vocal fold stiffness is a difficult disease that remains a therapeutic challenge. It may be either caused by cicatricial fibrosis or be associated with minor structural alterations of the vocal fold mucosa, mainly represented by deep sulcus vocalis. In both cases, there is loss and disorganization of extracellular matrix components of the superficial layer of the lamina propria (Reinkes Space), which is replaced by fibrotic tissue. The treatment goal is to re-establish the physical volume and the microarchitecture of the vocal folds. The perifascial tissue consists of a loose areolar tissue with viscoelasticity properties close to those of the superficial layer of the lamina propria. Thus, the aim of this experiment was to evaluate the histological changes of the graft and in the host tissue after placing a strip of this tissue into rabbits vocal folds. Thirty rabbits were operated. The graft was implanted in pockets surgically created in the right vocal fold. The left vocal fold was used as control. The animals were randomically divided in three groups for evaluation at 15 days (Group I), 3 months (Group II) and 6 months (Group III) and their larynx reviewed histologically. Histological sections underwent hematoxylin-eosin and specific staining method to quantify collagen fibers (Picrosirius-polarization method). Histological changes of the graft were observed since 15 days post-operatively and were characterized by a progressive increase of the density of collagen fibers and decrease of vascularization. Examination of Picrosirius-red stained section with polarizing microscopy revealed a gradual change of collagen fibers pattern with a predominance of greenish-yellow range observed in the original tissue and in Group I and mostly redish-orange range in the grafts of Group II and III. Statistical analysis (Anova one-way) showed a significant increase of the liitotal collagen density in the graft between Group I and II (p=0.004) and a significant predominance of redish-orange pattern between Groups II e III (p=0.011). The collagen density of the surrounding area of the graft in the implanted vocal fold was significantly increased when compared to control in all periods (p 0.001). The inflammatory process was not statistically different between the implanted vocal folds and controls according to Fisher´s test for any of the studied groups. Nonetheless, when the inflammatory process of each vocal fold was individually assessed on a long-term basis, a significant decrease of the inflammatory process was seen in the host (p=0.032) and control vocal fold (p=0.035) between Group I and II. Our findings suggest that the PAT has some advantages as a substance for vocal fold augmentation: it has low tendency to promote inflammatory response and low rate of absorption since it remains in the vocal fold for at least six months. However, the histological changes that take place in the graft and in the host tissue suggest that the PAT is not an ideal material as a substitute for the lamina propria and new studies are needed to determine its role on the treatment of vocal fold scarring.

Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-08-13T16:22:35Z No. of bitstreams: 1 WASHINGTON CÉSAR DE ALMEIDA COSTA - TESE PPGEE 2012..pdf: 6463355 bytes, checksum: 40d8703ef8a6dd3ef05acde3025cf628 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-13T16:22:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WASHINGTON CÉSAR DE ALMEIDA COSTA - TESE PPGEE 2012..pdf: 6463355 bytes, checksum: 40d8703ef8a6dd3ef05acde3025cf628 (MD5) Previous issue date: 2012-11-09 / Patologias na laringe podem afetar a qualidade vocal, prejudicando a comunicação humana. As técnicas objetivas tradicionais para o diagnóstico dessas patologias fazem uso de exames considerados invasivos, causando certo desconforto ao paciente. Análise acústica, utilizando técnicas de processamento digital de sinais de voz, pode ser utilizada para o desenvolvimento de ferramentas não invasivas de auxílio ao diagnóstico de patologias laríngeas. A precisão do diagnóstico, contudo, depende da escolha das características e parâmetros da fala que melhor representem a desordem vocal provocada por uma determinada patologia. Este trabalho trata da caracterização e da classificação de sinais de vozes saudáveis e vozes afetadas por diferentes patologias laríngeas (edema, paralisia e nódulos nas pregas vocais), por meio da análise dinâmica não linear (e teoria do caos), como também por meio da análise de quantificação de recorrência. No processo de caracterização é investigado, por meio de testes estatísticos, o potencial de cada característica em discriminar os tipos de sinais de voz considerados. Para a classificação é empregada a técnica de análise discriminante com as funções linear ou quadrática, com validação cruzada, sendo considerado um intervalo de confiança de 95% para as médias das taxas de acuraria do classificador. A partir da combinação de características dos conjuntos das medidas de análise não linear (MNL) e das medidas de quantificação de recorrência (MQR), as médias da taxa de acurácia obtidas variaram nos intervalos de confiança: [95,44%; 100%) para a classificação entre vozes saudáveis e patológicas; [94,75%; 100%] entre vozes saudáveis e afetadas por edema, e entre saudáveis e nódulos. Para a classificação entre saudável e paralisia, obteve-se uma acurácia de 100% . Também são avaliados os efeitos do uso de vetores híbridos formados por características MNL, MQR e coeficientes extraídos da análise preditiva linear (LPC). Neste caso. as taxas de acurácia variaram nos intervalos de confiança: [95,02%; 97,62%] na discriminação entre vozes afetadas por paralisia e edema; [98,29%; 99,93%] para paralisia versus nódulos e [97,98%; 99,84%] para edema versus nódulos. Os resultados encontrados indicam que o método utilizado é promissor, podendo ser empregado no desenvolvimento de uma ferramenta computacional para apoio ao diagnóstico de patologias laríngeas. / Laryngeal pathologies may affect the voice quality, harniing human communication. The traditional objective techniques for diagnosing these pathologies make use of exams, considered invasive, causing discomfort to the patient. Acoustic analysis, using digital speech signal processing techniques. can be used for the development of non-invasive tools in order to aid laryngeal diseases diagnosis. The accuracy of diagnosis, however. depends on the choice of parameters and the speech characteristics diat better represent the voice disorder caused by a given pathology. This work deals with the characterization and classification of healthy voice signals and voices affecied by different laryngeal diseases (edema, paralysis and vocal fold nodules), by means of nonlinear dynamic analysis (and chãos theory) as well as recurrence quantification analysis. In the characterization process, the potential of each feature is investigated to discriminate the types of voice signals considered, by means of statistical tests. For the classification, the technique of discriminam analysis is employed with linear or quadratic functions, with cross-validation. A 95% confidence levei was considered for the average of accuracy rates of the classifier performance. From the feature combination of the set of nonlinear analysis measures (MNL) and the quantification recurrence measures (MQR). the average of accuracy rates varied in the following confidence intervals: [95.44%; 100%] for healthy and pathologícal classification: [94.75%; 100%] between healdiy and edema voices, and also between healthy and nodules. The accuracy rate was 100% between healthy and paralysis. We also evaluated the effects of using hybrid vectors formed by MNL, MQR and linear predictive coding (LPC) coefficients. In this case, the accuracy rates ranged in the confidence intervals: [95.02%; 97.62%] in the paralysis versus edema voices discrimination; [98.29%; 99.93%] for paralysis versus nodules and [97.98%; 99.84%] for edema versus nodules. Obtained results indicate that the used method is promising and it can even be used to develop a computational tool to support diagnosis of laryngeal diseases.

Acredita-se que nos humanos, o ligamento vocal se desenvolva após o nascimento. No entanto, não há consenso na literatura sobre qual a faixa etária de seu aparecimento. Muitos estudos indicam que no neonato, a lâmina própria da prega vocal apresenta-se com algumas fibras esparsas sem uma organização particular. O principal objetivo deste estudo foi obter informação a respeito das fibras colagênicas e do sistema elástico (sob a luz dos conhecimentos atuais sobre a matriz extracelular), na lâmina própria de pregas vocais de fetos no período perinatal. Laringes obtidas por autópsia de fetos entre sete a nove meses foram estudadas através de microscopia de luz e eletrônica de transmissão. Fibras contendo colágeno foram identificadas através do Método da Picrossírius-polarização, fibras do sistema elástico foram descritas utilizando-se o método de Resorcina-fucsina de Weigert após oxidação com oxona. Os resultados histoquímicos coincidem com as observações da microscopia eletrônica, evidenciando populações de fibras de colágeno segregadas em diferentes compartimentos na lâmina própria. Assim, em sua região central as fibras de colágeno se mostraram finas, fracamente birrefringentes de coloração esverdeada, enquanto que as regiões superficiais e profundas apresentaram fibras grossas de colágeno com forte birrefringência de cor vermelho-amarelada, quando estudadas através do método da Picrossírius-polarização. Estas características sugerem que as fibras finas da região central são compostas principalmente por colágeno tipo III, enquanto o colágeno tipo I predomina nas regiões superficial e profunda, em concordância com as observações da literatura relacionada com o estudo da prega vocal de adultos. Assim como o componente colagênico, as fibras do sistema elástico mostraram uma distribuição diferencial ao longo da lâmina própria. Em certo sentido, esta distribuição é complementar àquela das fibras de colágeno: a região central, na qual fibras colagênicas eram escassas e finas, apresentou maior densidade de fibras do sistema elástico, em comparação às regiões superficial e profunda. Assim, a presença de um padrão de distribuição diferencial das fibras da matriz extracelular na prega vocal humana fetal equivalente à descrição clássica do ligamento vocal adulto nos permitiu concluir que o ligamento vocal já está presente ao nascimento. As implicações funcionais destes achados foram discutidas. O conceito corrente de que os estímulos externos, como a fonação, são essenciais para a determinação da estrutura em camadas da lâmina própria, faz com que nossos resultados sejam surpreendentes ao evidenciar a presença de uma distribuição complexa e organizada dos componentes do tecido conjuntivo na lâmina própria de pregas vocais de fetos no período perinatal. A idéia de que a contribuição genética poderia desempenhar um papel importante na organização destas camadas, independentemente do estímulo mecânico, poderia explicar melhor a presença das estruturas observadas já ao nascimento, uma vez que o mecanismo genético pode agir antes de qualquer estímulo mecânico externo, como a fonação. / It is currently believed that, in humans, the vocal ligament develops after birth. However, there is no consensus in the literature about the age of its surge. Most papers describe that in the newborn, the lamina propria shows the presence of some sparse fibers without any particular organization. The main purpose of this study was to obtain information regarding collagenous and elastic system fibers (in the light of the current knowledge on extracellular matrix) in the lamina propria of fetal vocal fold. Larynges obtained from autopsy of human fetuses aged seven to nine months were studied by means of light and electron microscopy. Collagen containing fibers were assessed by the Picrosirius-polarization method, elastic system fibers were described using Weigert\'s resorcin-fuchsin with previous oxidation with oxone. The histochemical results coincide with the electron microscope observations in showing collagen populations segregated into different compartments of the lamina propria. Thus, in its central region the collagen shows up as thin, weakly birefringent, greenish fibers while the superficial and deep regions consist of thick collagen fibers which display a strong birefringence of red or yellow color when studied with the aid of the Picrosirius-polarization method. These characteristics strongly suggest that the thin fibers in the central region are composed mainly of type-III collagen, whereas type-I collagen predominates in the superficial and deep regions, in agreement with the observations in the literature pertaining to studies of adult vocal folds. As well as collagen, the elastic system fibers show a differential distribution throughout the lamina propria. This distribution is complementary, in a sense, to that of the collagen fibers: the central region, with thin collagenous fibers, presents the greatest density of elastic system fibers in comparison to the superficial and deep regions. Thus, the presence of a differential distribution of the extracellular matrix fibers in the fetal vocal fold equivalent to the classical description of the adult vocal ligament allowed the conclusion that a vocal ligament is already present in the newborn. The functional implications of the foregoing findings are discussed. Current ideas sustaining that stimuli like phonation are essential to the determination of the layered structure of the lamina propria would make it surprising that a newborn baby could present a complex and organized distribution of connective tissue components as our results show to be the case. The idea that genetic contrivance instead should play a role in the organization of these layers seems to explain better the observed structures once it would act before any mechanical stimulus similar to phonation could take place.

A incompetência glótica ainda representa um desafio para a laringologia. Implantes de biomateriais no espaço de Reinke ou no espaço paraglótico estão entre as opções de tratamento, e suturas e confecção de bolsões subepiteliais são normalmente utilizados para fixação desses implantes. Alternativamente, a cola biológica pode ser usada como adesivo nesses casos. A cola de fibrina (CF) é produto da reação de dois componentes do sistema de coagulação: o fibrinogênio e a trombina, que formam uma rede de fibrina, responsável, entre outros, pela adesão dos tecidos. Entretanto, além do efeito adesivo, a CF e seus componentes podem interferir no processo cicatricial, atuando sobre citocinas como o fator de crescimento transformador-beta (TGF-beta). O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da cola de fibrina na deposição de colágeno após enxertia de fáscia em pregas vocais de coelhos. Dezoito coelhos foram submetidos a enxerto de fáscia em ambas as pregas vocais, sendo o lado esquerdo fixado com CF. Os coelhos foram sacrificados após 7, 30 e 90 dias. As laringes foram removidas e as pregas vocais preparadas para estudo histomorfométrico através da coloração picrossirius, a fim de avaliar a deposição de colágeno total em torno do enxerto. Foi observado um aumento estatisticamente significativo na densidade de colágeno em torno dos enxertos de fáscia nas pregas vocais que receberam a CF (p=0,0102) após 90 dias, em comparação com as pregas vocais controles. A aplicação da CF interferiu na deposição de colágeno em torno dos enxertos de fáscia, resultando em um aumento significativo na densidade de colágeno após 90 dias, possivelmente em decorrência da interação de seus componentes com citocinas e células envolvidas no processo de cicatrização / The glottal incompetence is still a challenge in Laryngology. Implants of biomaterials in Reinkes space or paraglottic space are among the treatment options, and sutures and pockets dissections are usually used to set these implants. Alternatively, biological glue can be used as adhesive in these cases. Fibrin glue (FG) is the product reaction of two components of the coagulation system: the fibrinogen and thrombin that form a fibrin net, responsible for the tissues adhesion, among other functions. However, the FG and its components may interfere in wound healing, interacting with cytokines as the transforming growth factor-beta (TGF-beta). The objective is to study the effect of fibrin glue on collagen deposition after fascia grafting on the rabbits vocal folds. Eighteen rabbits were submitted to the fascia graft on both vocal folds, being the left side fixed with FG. The rabbits were sacrificed after 7, 30 and 90 days. The larynx were removed and vocal folds prepared for histomorphometric study through Picrosirius Red stain, in order to evaluate the collagen deposition around the graft. There was a significant increase in collagen density around the grafts on the vocal folds that received FG (p=0.0102) after 90 days, compared with the control. FG application interfered in collagen deposition around fascia grafts, resulting in a significantly increase of collagen density after 90 days, which possibly resulted from the interaction of FG and its components with the cytokines and cells involved in the wound healing

A disfunção das pregas vocais (DPV) é caracterizada por movimento paradoxal de fechamento das pregas vocais, ocorrendo de forma episódica e involuntária durante a inspiração, levando à obstrução das vias aéreas. Os pacientes que apresentam DPV costumam não responder ao tratamento indicado para asma, levando ao uso inapropriado de corticóides sistêmicos com efeitos colaterais, freqüentes passagens em setores de emergência, hospitalizações por vezes desnecessárias e, com menos freqüência, intubação e traqueostomia. O objetivo principal deste estudo foi o de investigar a relação desta problemática com a economia psíquica destes pacientes, no que diz respeito à psicogênese e as possibilidades de tratamento por meio do método clínico de investigação e tratamento psicanalíticos. Para isto, foram incluídos 5 pacientes do sexo feminino, com idades entre 30 e 55 anos, que foram acompanhadas em tratamento psicanalítico no ambulatório do Serviço de Imunologia Clínica e Alergia do Instituto Central do HCFMUSP. Constatamos que a DPV aparece de maneira singular na vida de cada paciente investigada, porém com características peculiares que indicam uma localização psíquica capaz de operar como uma satisfação inconsciente frente a um conflito anterior. A princípio, abordar a paciente como se esta não possuísse asma pode levar a uma reação negativa, interpretada por elas como um fingimento ou uma estratégia consciente de obter ganhos primários. A interlocução entre o psicanalista e os demais profissionais da equipe mostra-se de significativa importância / Vocal fold dysfunction (VFD) is characterized by paradoxical movement of closing of the vocal folds, occurring of irregularly and involuntary form during the inspiration, leading to the blockage of the aerial ways. The patients who present VFD do not answer to the treatment indicated for asthma, leading to the unnecessary use of systemic steroids with collateral effect, frequent visits in emergency sectors, hospitalizations and, sometimes, intubations and tracheotomies. The main objective of this study was to investigate the relation of this problematic and the psychic economy of these patients, in whom it says respect to psychogenic explanation and the possibilities of psychoanalytical treatment. For this, 5 patients of the feminine sex had been enclosed, with ages between 30 and 55 years, that had been followed in psychoanalytical treatment in the clinic of the Service of Clinical Imunologia and Allergy of the Central Institute of the HCFMUSP. We evidence that the VFD appears in singular way in the life of each investigated patient, however with peculiar characteristics that indicate a psychic localization capable to operate as an unconscious satisfaction to a previous conflict. To approach the patient as if this did not possess asthma can lead to a negative reaction, interpreted for them as a deceit or a conscientious strategy to get primary profits. The interlocution between the psychoanalyst and the members of the team reveals of significant importance

Made available in DSpace on 2016-04-28T18:23:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Glaucia Lais Salomao.pdf: 2740028 bytes, checksum: c0cdc35e66facbaed2788e65a7a799ed (MD5) Previous issue date: 2008-11-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The purpose of this study was to investigate the relationship between the production and the perception of the modal and falsetto s registers in tones sang by male choir singers.104 tones were analyzed, 52 sand in modal register, 52 sang in falsetto register. The data for the analyses of the vocal registers production were obtained by means of inverse filtering of the sound irradiated from the mouth and by means of the electroglottography. The following measures were extracted: Fundamental Frequency (F0), duration of the Closed Phase, Maximum Flow Declination Rate, and Amplitude of the Alternating Current. Also, the following measures were calculated: Closed Quotient, Normalized Amplitude Quotient and level difference between the two lowest partials in the glottal source spectrum (H1 H2). The results showed clear differences between the modal and the falsetto registers. The values found for the Closed Quotient, the Maximum Flow Declination Rate and the Alternating Current Amplitude were predominantly greater in the modal than in the falsetto register. The Maximum Flow Declination Rate and H1 H2 values, on the other hand, were greater in the falsetto register than in the modal. The correlation analysis of the acoustical parameters showed a clear covariation between the Closed Quotient, the H1 H2 values, the Normalized Amplitude Quotient and Maximum Flow Declination Rate. The data for the analyses of the vocal registers perception were obtained from a forced choice test. The number of votes for modal was compared with the voice source parameters values. The results showed that tones with high values of Closed Quotient and low values of H1 H2 and of Normalized Quotient Amplitude were typically associated with higher number of votes to the modal register, and vice-versa. Our results suggest that the acoustic manifestations of the phonatory dimension related to the vocal registers are gradient and its perceived characteristics are as much distinct as they are wider apart in the continuous / O objetivo desta pesquisa foi o de investigar as relações entre a produção e a percepção dos registros vocais modal e de falsete em emissões de cantores de coral do sexo masculino. Foram analisadas 104 emissões, 52 cantadas no registro modal e 52 cantadas no registro de falsete. Os dados para análise da produção dos registros vocais foram obtidos por meio da filtragem inversa do sinal acústico e da eletroglotografia. As seguintes medidas foram extraídas: Freqüência Fundamental (F0), duração da Fase Fechada, Velocidade Máxima do Declínio do Fluxo de Ar e Amplitude da Corrente Alternada. Foram também calculados: o Quociente Fechado, o Quociente da Amplitude Normalizada e a diferença entre os níveis de intensidade dos dois primeiros harmônicos no espectro da fonte glótica (H1 H2). Os resultados obtidos mostraram diferenças claras e sistemáticas entre os registros modal e de falsete. Os valores obtidos para o Quociente Fechado, para a Velocidade Máxima do Declínio do Fluxo de Ar e para a Amplitude do Corrente Alternada foram predominantemente maiores no registro modal do que no registro de falsete. Os valores de H1 H2 e do Quociente da Amplitude Normalizada, por outro lado, foram maiores no registro de falsete do que no registro modal. Os dados para análise da percepção dos registros vocais foram obtidos a partir de um teste perceptivo de escolha forçada. O número de votos para o registro modal foi comparado com os valores obtidos para os parâmetros acústicos glotais. Os resultados mostraram que tons com valores maiores de Quociente Fechado, e valores menores de H1 H2 e de Quociente da Amplitude Normalizada foram tipicamente associados com maior número de votos para o registro de modal, e vice-versa. Os resultados sugerem a existência de uma gradiência sonora na dimensão das manifestações acústicas relacionadas aos registros vocais com características percebidas como tanto mais diferenciadas quanto mais distanciadas nesse contínuo

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-08-02T12:28:04Z No. of bitstreams: 1 TES_MARCIO_REPENNING_COMPLETO.pdf: 10220262 bytes, checksum: 19e12d3a7582bdaa17aa7e1fc81542d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-02T12:28:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_MARCIO_REPENNING_COMPLETO.pdf: 10220262 bytes, checksum: 19e12d3a7582bdaa17aa7e1fc81542d5 (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / This work reveals the diversity of cryptic forms within the most emblematic birds from the Neotropical grasslands, the Seedeaters, Sporophila, a group with rapid diversification rate with evidence of ongoing speciation. The background question of the study is how this biological diversity is generated and maintained in this genus of birds, which are characterized by the great capacity of dispersion and low susceptibility to geographic isolation by physic brakes. Using multiple analytical tools, morphological, vocalization, biogeographic and molecular characteristics were studied to explain the extent of intra and interspecific variations and how lineages can be formed. As study model, two Sporophila superspecies with wide and concordant geographic distribution inner South America were sampled throughout of whole range, the Plumbeous Seedeater and Capuchinos. The results show marked dichotomy between the more general patterns of radiation or divergence of the lineages in each of the groups. Plumbeous Seedeeater represent a small cluster of incipient species with adaptive radiation, whereas the radiation in Capuchinos does not involve morphological adaptations. Lineages of Capuchinos diverge in allopatric/peripatric from their breeding populations and changes in vocalizations without the formation of local dialects covariate to changes in the color of the breeding plumage of males. In both groups, it was possible to detect a cryptic diagnosable diversity beyond the traditionally current known species. Divergent or differentiated lineages ongoing were corroborated by neutral genetic signals at different sorting levels. Contact of these lineages/taxa was simulated experimentally to test their skill to discriminate heterospecific closely related species provide assortative mate predisposition. The results are confronted with the knowledge about the mechanisms of speciation in birds in a natural and sexual selection scenario among populations that may have diversified after geographic isolation or via ecological speciation. Finally, a taxonomic classification useful to represent the biological diversification in the studied Sporophila is suggested. / Esta tese revela a diversidade de formas biol?gicas cr?pticas dentro de um dos g?neros mais caracter?sticos de p?ssaros de paisagens abertas da regi?o Neotropical, os papa-capins, Sporophila, grupo que apresenta uma riqueza de esp?cies expressiva dentre os Thraupidae, e com evid?ncias de que processos de especia??o ainda possam estar em curso. A quest?o que guia o estudo ? como essa diversidade biol?gica ? gerada e mantida nesse g?nero de p?ssaros, caracterizados pela grande capacidade de dispers?o e baixa propens?o ao isolamento geogr?fico por barreiras f?sicas. Utilizando m?ltiplas ferramentas anal?ticas, foram estudadas caracter?sticas morfol?gicas, de vocaliza??o, biogeogr?ficas e moleculares para descrever a extens?o das varia??es intra e interespec?ficas e como linhagens podem ser formadas. Como modelo de estudo dois complexos de esp?cies de Sporophila com ampla e concordante distribui??o geogr?fica na Am?rica do Sul foram amostrados ao longo de toda sua regi?o de ocorr?ncia, as patativas (Sporophila plumbea/beltoni) e os caboclinhos (Sporophila bouvreuil/pileata/nigrorufa). Os resultados mostram diferen?as entre os padr?es de radia??o ou diverg?ncia das linhagens em cada um dos complexos. Patativas representam um pequeno conjunto de esp?cies incipientes com radia??o adaptativa, enquanto que a radia??o nos caboclinhos n?o envolve adapta??es morfol?gicas. Linhagens de caboclinhos divergem em alopatria de suas popula??es reprodutivas e mudan?as nas vocaliza??es sem a forma??o de dialetos locais s?o acompanhadas por mudan?as no colorido da plumagem nupcial dos machos. Em ambos os grupos foi poss?vel detectar uma diversidade cr?ptica com diagnose al?m das esp?cies tradicionalmente propostas. Linhagens divergentes ou em franco processo de diferencia??o foram corroboradas por marcadores gen?ticos em diferentes n?veis de organiza??o. Experimentalmente, foi simulado o contato secund?rio das popula??es redefinidas resultando em evid?ncias quantitativas sobre o desenvolvimento de mecanismo de isolamento pr?-reprodutivo. Os resultados s?o confrontados com o conhecimento descrito sobre mecanismos de especia??o em aves num cen?rio de sele??o natural e sexual atuante em popula??es que podem ter se diversificado ap?s isolamento geogr?fico ou via especia??o ecol?gica. Por fim, sugere-se uma classifica??o taxon?mica ?til para representar a diversidade de t?xons nos Sporophila estudados.

A matriz extracelular apresenta importante papel na fisiologia da fonação sendo necessário o conhecimento de seus componentes. Poucos estudos sobre os componentes da matriz em fetos e a ausência de relatos do versican nesta faixa etária, bem como a necessidade de aprofundar os conhecimentos sobre os componentes da matriz em adultos, resultaram na elaboração deste estudo. Analisar a presença e distribuição do colágeno tipo I, colágeno tipo III e proteoglicano versican na lâmina própria da prega vocal de laringes fetais e adultas é o objetivo do estudo. No grupo fetal foram estudadas 7 laringes obtidas de cadáveres variando de 28 a 36 semanas de idade gestacional. No grupo adulto foram estudadas 20 laringes, 10 do sexo masculino, com média de idade de 66 anos, e 10 do sexo feminino com média de idade de 70 anos, com idades pareadas. Utilizou-se método imunoistoquímico para avaliar a expressão do versican no grupo fetal e adulto. Para a avaliação das fibras colágenas utilizou-se o método da Picrosirius polarização no grupo fetal e imunoistoquímico no grupo adulto. A quantificação das fibras colágenas e do versican foi realizada por meio de análise digital de imagens. Os resultados do grupo fetal mostraram uma distribuição homogênea das fibras colágenas formando uma estrutura monolaminar com um entrelaçamento entre as fibras denominado arranjo em cesta de vime; em relação ao versican, este apresentou uma densidade maior na camada superficial e intermediária da lâmina própria. Os resultados do grupo adulto mostraram uma menor densidade de colágeno tipo I na camada intermediária quando comparado à camada superficial (p<0.001) e camada profunda (p=0.005). O colágeno tipo III apresentou distribuição mais homogênea nas camadas da lâmina própria, com uma densidade estatisticamente menor na camada intermediária quando comparada à camada profunda (p=0.001), mas sem diferença estatística na camada superficial. O versican apresentou densidade menor na camada superficial quando comparado à camada intermediária (p=0.036) e camada profunda (p=0.013). Houve menor densidade de versican nas mulheres quando comparado aos homens, percebida apenas na camada superficial. Quando todas as camadas foram consideradas conjuntamente houve uma correlação positiva entre a densidade de versican e colágeno tipo III (r=0.57; p=0.010). Este estudo mostrou as diferenças na distribuição dos componentes da matriz nas camadas da lâmina própria em dois grupos etários proporcionando uma discussão sobre as implicações destes achados na fisiologia vocal e sugerindo que as estruturas glóticas já estariam preparadas para a vocalização ao nascimento / Extracellular matrix has an important rule in the vocal fold physiology and the knowledge about your components is necessary. Fewer studies about matrix extracellular and no studies about versican in fetuses, and the necessity to improve the knowledge about extracellular matrix components in adults group came us to the elaboration of this study that has the objective to analyze the presence and distribution of collagen type I, type III and versican in human vocal fold lamina propria of fetal and adult larynges. Seven fetal larynges obtained from 28- to 36- week-old cadaveric fetuses were studied. Twenty larynges were obtained from adults (10 males and 10 females). Mean age of males was 66 and 70 from females, without significant statistical difference between groups. For the analysis of versican expression, immunohistochemical reactions were carried out in fetal and adult group. The larynges were analyzed through Picrosirius polarization method and immunohistochemistry to visualize the collagen fibers, in fetal and adult group respectively. Collagen fibers and proteoglycan were quantified using a digital image analysis system. In fetuses, the collagen fibers system exhibited homogeneous distribution pattern in a monolaminar layer and spatial arrangement as in a wicker basket; predominance of versican distribution was found out on the superficial and intermediate layer of vocal fold lamina propria. In adult group, there was a lower collagen type I density in the intermediate layer when compared to the superficial (p<0.001) and the deep layers (p=0.005). Collagen type III presented a lower density in the intermediate layer when compared to the deep layer (p=0.001) but without differences in the superficial layer. There was a lower versican density in the superficial layer when compared to the intermediate layer (p=0.036) and deep layer (p=0.013). There was a lower versican density in the lamina propria of females when compared with males. The difference was noted in the superficial layer only. When all layers are considered together there was a positive correlation between versican and collagen type III densities (r=0.57; p=0.010). This study shows the differences in the extracellular matrix components distribution in lamina propria vocal folds in fetal and adult group permitting a discussion about the implications in vocal fold physiology and suggesting that laryngeal structures will be prepared to vocalization at birth

A aproximação cricotireóidea simula a contração do músculo cricotireóideo, aproximando as cartilagens cricóidea e tireóidea anteriormente. Distende e tensiona as pregas vocais, elevando a freqüência fundamental da voz. É indicada em pacientes que apresentam voz grave em conseqüência da paralisia do nervo laríngeo superior ou por doenças endócrinas e reumatológicas no sexo feminino. Com o objetivo de estudar os efeitos da aproximação cricotireóidea sobre a vibração das pregas vocais em ambos sexos, foram avaliadas 30 laringes excisadas de cadáveres humanos frescos pré e pós aproximação cricotireóidea. Esse trabalho experimental permitiu excluir as interferências dos mecanismos compensatórios da fonação presentes em um estudo 'in vivo'. As cartilagens aritenóideas foram aproximadas por sutura, fechando a glote. Um fluxo de ar comprimido umedecido foi injetado no interior da traquéia, e ao passar pela glote promoveu a vibração das pregas vocais. Foi então realizada a aproximação cricotireóidea através de suturas, aproximando as cartilagens tireóidea e cricóidea. O comprimento da porção membranosa das pregas vocais foi obtido através de um paquímetro. A vibração das pregas vocais foi gravada pré e pós a aproximação cricotireóidea utilizando-se uma câmera de videoquimografia. Após digitalização e análise quadro a quadro das imagens documentadas, foram realizadas medidas da freqüência fundamental, da amplitude de vibração das pregas vocais, do ciclo vibratório e suas fases (aberta, fechada, de abertura e fechamento) pré e pós aproximação cricotireóidea. Foram também calculados e analisados índices que correlacionam a duração das diferentes fases do ciclo vibratório, como o quociente de abertura, de fechamento e o quociente de velocidade. Estas variáveis foram analisadas estatisticamente pela técnica multivariada de análise de perfil e correlacionadas entre si. Observamos que houve alongamento significante das pregas vocais após a aproximação cricotireóidea, sendo mais evidente no sexo feminino. Ocorreu elevação significante da freqüência fundamental, mas esta não se correlacionou com o alongamento das pregas vocais. A amplitude de vibração diminuiu de forma significante, assim como a duração do ciclo vibratório e suas fases, correlacionando-se diretamente com o aumento da freqüência fundamental. A redução da fase de abertura foi significantemente maior no sexo masculino. Concluindo, a aproximação cricotireóidea provocou alongamento da prega vocal, redução da amplitude e duração do ciclo vibratório e suas fases, existindo correlação inversa com o aumento da freqüência de vibração. Embora as pregas vocais de laringes femininas tenham apresentado maior alongamento, e as masculinas maior redução da fase de abertura, não houve diferença significante do efeito da aproximação cricotireóidea sobre a freqüência vocal entre os sexos. / The cricothyroid approximation simulates the cricothyroid muscle contraction by approximating the cricoid and thyroid cartilage’s. By this surgery, the vocal folds are lengthened. Consequently, the fundamental frequency of the voice is increased. The main indications for this procedure are patients presenting voice hoarseness due to superior laryngeal nerve palsy or to rheumatoid and endocrinological diseases in women. Thirty fresh cadaver’s larynges were used for the purpose of studying the effects of the cricothyroid approximation on the vocal folds vibration in both genders. Ideally, this experiment would allow exclusion of the diverse phonation compensatory factors that can possible compromise the accuracy of an “in vivo" study. The surgical procedure was performed in the excised larynges. Initially, the arytenoids cartilages were approximated by suturing both together, closing the glottis. Humidified compressed air was injected inside of the tracheal tube, causing vocal folds vibration. The cricothyroid approximation was performed by sutures placed in the cricoid and thyroid cartilages. Calipers were used to measure the length of the membranous portion of the vocal folds. Pre and post cricothyroid approximation. Vocal folds vibration was recorded by a portable camera specific for videokymographic studies. After digitalizing the recorded images, each one of them was carefully evaluated. The fundamental voice frequency, the vocal folds vibratory amplitude, and the vibratory cycle with its phases (opened, closed, opening and closing phases) were measured pre and post operatively. Indexes related to the duration of the different phases of the vibratory cycle, such as open quotient, closed quotient and speed quotient were then calculated and analyzed. Multivariate statistical analysis and profile analysis were used for correlation and understanding of the results. There was a statistically significant lengthen of the vocal folds after cricothyroid approximation, more noticeable in female laryngeal specimens. The fundamental voice frequency was increased, but no relation with the increased length of the vocal cords could be observed. The vibratory amplitude was significantly reduced, as was the vibratory cycle duration. The latter was directly correlated with the increase of fundamental voice frequency. The male laryngeal specimens presented a significant higher reduction of the opening phase of the vibratory cycle. In this study, the cricothyroid approximation caused lengthening of the vocal folds. The vibratory cycle and its phases were also altered, presenting a reduced duration. An inverse correlation between these variables and the increase of the vibratory frequency was noted. Although the female laryngeal specimens had shown a longer length when compared with the male, and the male specimens had a higher decrease of the opening phase of the vibratory cycle, there was no statistically significant difference in the cricothyroid approximation effect on the vocal frequency according to gender.

A incompetência glótica ainda representa um desafio para a laringologia. Implantes de biomateriais no espaço de Reinke ou no espaço paraglótico estão entre as opções de tratamento, e suturas e confecção de bolsões subepiteliais são normalmente utilizados para fixação desses implantes. Alternativamente, a cola biológica pode ser usada como adesivo nesses casos. A cola de fibrina (CF) é produto da reação de dois componentes do sistema de coagulação: o fibrinogênio e a trombina, que formam uma rede de fibrina, responsável, entre outros, pela adesão dos tecidos. Entretanto, além do efeito adesivo, a CF e seus componentes podem interferir no processo cicatricial, atuando sobre citocinas como o fator de crescimento transformador-beta (TGF-beta). O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da cola de fibrina na deposição de colágeno após enxertia de fáscia em pregas vocais de coelhos. Dezoito coelhos foram submetidos a enxerto de fáscia em ambas as pregas vocais, sendo o lado esquerdo fixado com CF. Os coelhos foram sacrificados após 7, 30 e 90 dias. As laringes foram removidas e as pregas vocais preparadas para estudo histomorfométrico através da coloração picrossirius, a fim de avaliar a deposição de colágeno total em torno do enxerto. Foi observado um aumento estatisticamente significativo na densidade de colágeno em torno dos enxertos de fáscia nas pregas vocais que receberam a CF (p=0,0102) após 90 dias, em comparação com as pregas vocais controles. A aplicação da CF interferiu na deposição de colágeno em torno dos enxertos de fáscia, resultando em um aumento significativo na densidade de colágeno após 90 dias, possivelmente em decorrência da interação de seus componentes com citocinas e células envolvidas no processo de cicatrização / The glottal incompetence is still a challenge in Laryngology. Implants of biomaterials in Reinkes space or paraglottic space are among the treatment options, and sutures and pockets dissections are usually used to set these implants. Alternatively, biological glue can be used as adhesive in these cases. Fibrin glue (FG) is the product reaction of two components of the coagulation system: the fibrinogen and thrombin that form a fibrin net, responsible for the tissues adhesion, among other functions. However, the FG and its components may interfere in wound healing, interacting with cytokines as the transforming growth factor-beta (TGF-beta). The objective is to study the effect of fibrin glue on collagen deposition after fascia grafting on the rabbits vocal folds. Eighteen rabbits were submitted to the fascia graft on both vocal folds, being the left side fixed with FG. The rabbits were sacrificed after 7, 30 and 90 days. The larynx were removed and vocal folds prepared for histomorphometric study through Picrosirius Red stain, in order to evaluate the collagen deposition around the graft. There was a significant increase in collagen density around the grafts on the vocal folds that received FG (p=0.0102) after 90 days, compared with the control. FG application interfered in collagen deposition around fascia grafts, resulting in a significantly increase of collagen density after 90 days, which possibly resulted from the interaction of FG and its components with the cytokines and cells involved in the wound healing