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Les fonctions et rôles régulateurs de l'acétylation dans le maintien de l'intégrité du génome

Billon, Pierre 23 April 2018 (has links)
Au cours de la réplication et de la réparation des dommages à l’ADN, un certain nombre de protéines sont acétylées. L’acétylation des protéines est un moyen élégant de modifier de manière transitoire les propriétés des protéines cibles, notamment en changeant les interactions protéine-acide nucléique par la neutralisation de la charge positive. Or, le rôle fonctionnel de l’acétylation de la grande majorité des protéines est majoritairement inconnu. PCNA, le facteur de processivité des ADN polymérases, coordonne les mécanismes de réplication et de tolérance des dommages afin d’assurer une réplication fidèle et efficace. Il adopte une structure trimérique en forme d’anneau qui encercle l’ADN et stimule la processivité de distinctes ADN poymérases en agissant comme une pince glissante sur l’ADN. Les travaux de cette thèse décrivent qu’une acétylation dynamique sur les résidus lysines localisés au niveau de sa surface de glissement joue un rôle crucial dans la maintenance de l’intégrité du génome. De multiples acétylations sont requises pour la résistance des cellules aux dommages à l’ADN suggérant un contrôle précis de la dynamique d’interaction avec les phosphates de l’ADN. L’acétyltransférase des cohésines Eco1 cible la lysine 20 de la surface interne de l’anneau à la fois in vitro et in vivo en réponse aux dommages. Mimer l’acétylation constitutive de ce résidu, réduit la processivité de la polymérase δ à la fois in vivo et in vitro. De plus, des analyses génétiques démontrent l’importance cruciale de l’acétylation de PCNA dans la suppression des voies de tolérance des dommages. Cela se produit par l’inhibition spécifique de la synthèse translésionnelle, favorisant la recombinaison homologue médiée par la cohésion, connectant l’acétylation aux autres modifications post-traductionnelles de PCNA. Finalement, nous démontrons que les lysines à l’intérieur de l’anneau ont un rôle spécifique pour l’activité des polymérases translésionnelles suggérant l’existence de mécanismes contrôlant la processivité de ces enzymes mutagènes. Cette thèse éclaircit le rôle de PCNA pour contrôler distinctivement l’activité des différentes classes d’ADN polymérases, impliquant une régulation directe de la surface de glissement afin de promouvoir la stabilité du génome. / During DNA replication and repair, a large number of proteins are acetylated. Protein acetylation is an elegant mean to transiently regulate their functions, in particular by changing the interactions between proteins and nucleic acids through the neutralization of the positive charge. However, the functional role of acetylation for most proteins is unknown. The Proliferating Cell Nuclear Antigen coordinates the mechanisms of replication and tolerance of DNA damage in order to ensure an accurate and efficient replication. PCNA adopts a ring-shaped structure that encircles DNA to stimulate polymerases processivity by acting as a sliding clamp for distinct polymerases. The work presented in this thesis describes that dynamic acetylation of lysine residues at the sliding surface of the ring plays a crucial role in the maintenance of genome integrity. Multiple acetylations are required for resistance of cells to DNA damage, suggesting a precise and dynamic control of the interaction with the phosphate backbone of the DNA. Cohesin acetyltransferase Eco1 targets lysine 20 at the inner ring both in vitro and in vivo in response to DNA damage. Mimicking constitutive acetylation on K20 reduces polymerase δ processivity both in vitro and in vivo. Furthermore, using genetic analyses, we demonstrate the crucial importance of PCNA acetylation to robustly suppress DNA damage tolerance pathways. This occurs through the specific inhibition of the translesion synthesis pathway, favouring cohesion mediated homologous recombination and connecting acetylation with other well-known modifications of PCNA. Finally, we demonstrate that lysines at the inner ring have a specific role to control translesional polymerase processivity, suggesting the existence of a mechanism to control these mutagenic enzymes. This thesis sheds light on how PCNA distinctively controls the activity of different classes of DNA polymerases, implicating direct regulation of PCNA sliding surface to promote genome stability.
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Étude des mécanismes de régulation de l'activité du complexe acétyltransférase NuA4

Rossetto, Dorine 18 April 2018 (has links)
La chromatine, dont l’unité de base est le nucléosome, est une structure nucléoprotéique dynamique qui nécessite un remodelage au cours de divers processus nucléaires ayant besoin d’un accès direct à l’ADN tels que la réplication, la transcription ou la réparation des lésions. Plusieurs facteurs capables de moduler la structure de la chromatine ont été caractérisés et regroupent les chaperons d’histones, les complexes de remodelage ATP-dépendants, les variants d’histone et les enzymes modifiant les histones de façon post-traductionnelle. Le complexe acéyltransférase NuA4 responsable de l’acétylation des histones H4 et H2A participe activement à la dynamique de la chromatine au cours de ces processus. Il favorise sa relaxation lors de l’activation de la transcription et de la réparation de l’ADN. Il est le seul complexe acétyltransférase dont l’activité est essentielle chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Le but de mon projet de doctorat était de mieux comprendre les mécanismes capables de réguler son activité. Nous avons mis en évidence trois niveaux de régulation de son activité, via (i) son auto-acétylation, (ii) son ciblage à la chromatine de façon spécifique et (iii) directement par son substrat histone. Alors que l’acétylation de la sous-unité Yng2 de NuA4 par le complexe lui-même est importante pour le maintien de l’intégrité du complexe et de son activité, nous avons découvert que NuA4 est capable de s’auto-acétyler in vivo et in vitro sur plusieurs de ces sous-unités et que l’acétylation d’un seule lysine dans le domaine MYST de sa sous-unité catalytique Esa1 est essentielle à l’activité du complexe, sans influencer son intégrité. D’autre part, nous avons caractérisé par des techniques de purification un sous-module de NuA4 composé des facteurs Eaf5, Eaf7 et de la protéine à chromodomaine Eaf3 capable de reconnaître les lysines méthylées, qui serait impliqué dans le ciblage de NuA4 à la chromatine. Ce complexe trimérique est également présent indépendant de NuA4 dans la cellule, et serait localisé de façon préférentielle sur la région codante des gènes. Enfin, les travaux du laboratoire ont montré que les modifications post-traductionnelles présentes sur la queue N-ter de H4 peuvent réguler l’activité de NuA4. La phosphorylation de H4 sur sa sérine 1 inhibe son acétylation sur les lysines adjacentes par NuA4. Alors que nous montrons que cette marque est spécifiquement induite sur la région codante de gènes activés, nos résultats indiquent que cette phosphorylation serait impliquée dans la dynamique de la chromatine au cours de l’élongation de la transcription. / Chromatin, which basic unit is the nucleosome, is a very dynamic structure that requires remodeling during nuclear processes that need to access the DNA such as replication, transcription and DNA damage repair. A number of remodeling factors have been characterized and include histone chaperone, ATP-dependent remodelers, histone variants and post-translational histone modifiers. The NuA4 acetyltransferase complex, responsible for H4 and H2A acetylation, participates in chromatin and nucleosome dynamics associated to these nuclear processes. It was shown to promote chromatin relaxation during transcription activation and DNA repair. NuA4 is the only acetyltransferase complex essential for viability in the yeast Saccharomyces cerevisiae. The objective of my Ph.D. project was to understand the mechanisms that regulate NuA4’s activity. We brought to the forefront tree different ways to control NuA4’s activity, via its auto-acetylation, its specific targeting to the chromatin and via its histone substrate. While acetylation of the Yng2 subunit of NuA4 by NuA4 itself is important for maintenance of the integrity and activity of the complex, we discovered that NuA4 is capable of in vivo and in vitro auto-acetylation of several of its subunits. In addition, we showed that the acetylation of a single lysine residue located in the MYST domain of the catalytic subunit Esa1 is essential for the activity of the complex and has no effect on its integrity. On another hand, we have characterized a sub-complex of NuA4 composed by the Eaf5, Eaf7 and the chromodomain-containing Eaf3 proteins that are implicated in NuA4 targeting to the chromatin. This trimeric complex is also found in the cell independent of NuA4 and preferentially associated to gene coding region. Finally, published works from our laboratory showed that post-translational modifications of H4 N-ter tail can regulate NuA4 activity. Phosphorylation of H4 serine1 inhibits its acetylation on adjacent lysines by NuA4. We demonstrated that this mark is specifically induced on coding region of active genes and that this phosphorylation would be implicated in chromatin dynamics associated with the transcription elongation process.
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Bornavirus, neurones et épigénétique : un "ménage à trois" mutuellement salutaire ? / Bornavirus, neurons and epigenetics : a fruitful "ménage à trois"?

Bonnaud, Emilie 15 October 2015 (has links)
Analyser les modalités de l'interaction des virus neurotropes avec leurs cellules cibles représente un défi majeur, cela pourrait favoriser notre compréhension de la physiopathologie de certains troubles neurologiques dont l'origine virale est parfois suspectée. Le Bornavirus (BDV), un virus neurotrope, représente un modèle idéal pour analyser les mécanismes moléculaires de la persistance virale dans les neurones et en étudier les conséquences sur l'homéostasie neuronale. Au cours de ma thèse, nous avons découvert une nouvelle forme d'interaction virus/cellule dans laquelle une protéine du BDV perturbe la signalisation épigénétique associée à l'acétylation des histones. Cette perturbation de l'acétylation des histones cellulaires est accompagnée d'une modulation de la réplication virale qui permettrait de favoriser la persistance du BDV dans les neurones tout en limitant les dommages cellulaires associés, démontrant ainsi la parfaite adaptation du BDV à sa cellule hôte. / In response to various environmental stimuli, neurons undertake specific cognitive functions, such as learning and memory. Many studies have shown that epigenetics, notably histone acetylation, is crucial for the regulation of gene expression involved in these processes. Moreover, dysregulation of signaling pathways that regulate epigenetics is clearly recognized as a main actor in the pathogenesis of several neurological disorders. Even if the origin of these disorders is sometimes genetic, their etiology remains elusive and environmental factors are also suspected. In particular, infectious agents are considered as serious candidates, notably for viruses that persist in the central nervous system (CNS). The Bornavirus (BDV) constitutes an interesting model to assess the impact of viral infection on neuronal epigenetics. This non-cytolytic RNA virus infects neurons of the CNS and causes various cognitive disorders in animals. It has the remarkable property to replicate in the nucleus, in close association with chromatin, thus leading to our working hypothesis that it may modify the epigenetics of infected neurons. During my Ph.D., we used primary cultures of cortical neurons to demonstrate that BDV infection decreases H2B and H4 acetylation levels on selected lysine residues, through inhibition of histone acetyltransferase (HAT) activities. We also showed that the viral phosphoprotein was responsible for this perturbation, acting on histone acetylation and HAT activities in a protein kinase C dependent manner. Finally, using pharmacological agents, we observed that histone acetylation levels were correlated with replication of BDV. Thus, BDV action on histone acetylation pathway may represent an original mechanism to control viral replication, thereby favoring long-term persistence in neurons. I am currently examining the consequences of this virus-mediated perturbation on H2B/H4 acetylation at the genome scale, using ChIP-sequencing experiments.
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L’histone désacétylase HDAC1 influence la réponse à des stress métaboliques dans les cellules épithéliales intestinales

Gonneaud, Alexis January 2014 (has links)
Introduction : Les histones désacétylases (HDAC) catalysent le retrait d’un groupement acétyl de résidus lysine. Leurs substrats comprennent les histones et des facteurs de transcription comme NF-κB p65 ou des kinases comme AMPK. Les HDACs contrôlent la prolifération, la mort et la différenciation cellulaires. Des propriétés anti-inflammatoires et anti-tumorales ont été attribuées à des inhibiteurs contre les HDAC, notamment dans les cellules épithéliales intestinales (CEI). Nous avons montré que la perte de HDAC1 entraîne une diminution de la croissance et cela, sans augmentation significative des inhibiteurs du cycle cellulaire comme p21 ou p27 (Moore-Gagné, 2012). J’ai alors hypothétisé que l’absence de HDAC1 pouvait mener à des défauts dans les voies de synthèse ou de production d’énergie. Je me suis donc intéressé à l’étude des voies métaboliques qui participent notamment à la production d’acétyl-CoA, le principal donneur de groupement acétyl, groupement nécessaire pour l’acétylation des histones. Des études récentes ont démontré que les voies métaboliques, en modulant les niveaux d’acétyl-CoA, altèrent les patrons d’acétylation. J’ai donc voulu déterminer le rôle de HDAC1 dans la transmission de stress métaboliques dans les CEI. Méthodes : L’expression de HDAC1 a été réduite dans les cellules de cryptes intestinales de rat (IEC-6) par infection lentivirale de shARN contre HDAC1. Les cellules ont été cultivées avec ou sans glucose et sérum, avec plusieurs métabolites du cycle de Krebs, dont l’acétate, le citrate, le fumarate ou avec le peroxyde d’hydrogène pour induire un stress oxydant. L’acétylation des histones H3 et H4 ont été déterminées par immunobuvardage avec des anticorps contre des histones acétylées. La viabilité cellulaire a été mesurée par essai MTT, et les radicaux libres par oxydation du DCFDA. Les protéines différemment exprimées ont été identifiées par incorporation d’isotopes plus lourds d’acides aminés, suivi de spectrométrie de masse (SILAC) et analysé informatiquement (logiciel MaxQuant). Les cibles repérées ont été analysées par RT-PCR semi-quantitatif et par immunobuvardage. Les niveaux de régulateurs métaboliques tels que l’AMPK ou l’acétyl-CoA carboxylase (ACC) ont été déterminés par immunobuvardage. Le nombre de mitochondries a été observé par fluorescence. Résultats : La perte de HDAC1 augmente globalement l’acétylation des histones. L’absence de glucose et de sérum diminue les niveaux d’acétylation des histones. L’absence de HDAC1 augmente la viabilité cellulaire en présence de fumarate et citrate, et en absence de glucose et sérum. Les cellules shHDAC1 montrent une viabilité accrue après un traitement au peroxyde d’hydrogène. Ceci corrèle avec des niveaux de base diminués de radicaux libres et une surexpression de Sod2, une protéine anti-oxydante. Les résultats ont montré que la perte de HDAC1 comme l’addition de certains métabolites modifient le patron d’acétylation cellulaire, suggérant des perturbations dans les niveaux d’acétyl-CoA. L’analyse SILAC a mis en évidence une altération des voies de signalisation liées à différents processus métaboliques, comme la phosphorylation oxydative et la synthèse des protéines. L’activation constante de l’AMPK suggère que les cellules shHDAC1 sont en restriction calorique permanente, ce qui les rend moins sensibles au stress oxydant et métabolique par rapport aux cellules shCtrl. Les cellules shHDAC1 présentent une augmentation de la quantité de mitochondries, suggérant un défaut de génération d’ATP. Un shunt d’acétyl-CoA vers le noyau serait envisageable. Conclusion : En modifiant les voies métaboliques liées à la production d’acétyl-CoA, la perte de HDAC1 protège les CEI des réactions de stress. HDAC1 contrôle la réponse des CEI à des stress métaboliques.
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Le complexe EPB41L5-NADSYN1-SIRT2 : un mécanisme novateur dans l'étude des fonctions d'EPB41L5

Boutin, Audrey-Anne 18 March 2024 (has links)
NOTICE EN COURS DE TRAITEMENT / La protéine EPB41L5 est exprimée lors de la transition épithélio-mésenchymateuse, qui survient lorsque des cellules épithéliales acquièrent des caractéristiques mésenchymateuses, ce qui joue un rôle majeur dans la progression tumorale. Cette protéine est d'ailleurs surexprimée dans plusieurs cancers, où elle favorise un phénotype agressif via l'invasion cellulaire, le développement de métastases et la résistance aux médicaments. Il n'est donc pas surprenant que l'expression d'EPB41L5 soit associée à un mauvais pronostic chez les patients souffrant du cancer. Cependant, la signalisation entourant EPB41L5 est méconnue. En se basant sur des travaux réalisés chez la drosophile, nous avons émis l'hypothèse qu'EPB41L5 fait partie d'un complexe avec NADSYN1 et la déacétylase SIRT2. Ce complexe permettrait la déacétylation de substrats spécifiques, ce qui induirait la progression tumorale. Cette étude vise à 1) valider les interactions entre les protéines du complexe autant chez la drosophile que chez l'humain, 2) déterminer si et comment EPB41L5 module l'acétylation des cibles de SIRT2 et 3 )vérifier la localisation subcellulaire d'EPB41L5. Nous avons réalisé des immunoprécipitations, des fractionnements cellulaires et des analyses par immunobuvardage. Nos travaux indiquent qu' EPB41L5, NADSYN1 et SIRT2 semblent former un complexe conservé entre la drosophile et l'humain. EPB41L5 module aussi l'acétylation de plusieurs cibles de SIRT2, en favorisant l'interaction entre la déacétylase et ses substrats. Nous avons également découvert qu'EPB41L5, en plus d'être cytoplasmique, est aussi nucléaire, ce qui implique potentiellement la présence d'un mécanisme semblable dans ce compartiment. Ces travaux ouvrent la voie vers la caractérisation d'un mécanisme novateur impliquant EPB41L5 dans la progression tumorale. Une étude plus approfondie du complexe EPB41L5-NADSYN1-SIRT2 pourrait donner des pistes pour établir de nouvelles approches thérapeutiques pour les patients souffrant de cancers agressifs exprimant EPB41L5. / The EPB41L5 protein is expressed during the epithelial-mesenchymal transition, which occurs when epithelial cells acquire mesenchymal characteristics. This plays a major role in tumor progression. EPB41L5 is overexpressed in several cancers, where it promotes an aggressive phenotype via cell invasion, the development of metastases and drug resistance. It is therefore not surprising that EPB41L5 expression is associated with a poor prognosis in cancer patients. However, the signaling pathways downstream of EPB41L5 are poorly understood. Based on previous work done in Drosophila, we hypothesized that EPB41L5 is part of a complex with NADSYN1 and SIRT2 deacetylase. This complex would allow the deacetylation of specific substrates, which would induce tumor progression. This study aims to 1) validate the interactions between proteins in both Drosophila and humans, 2) determine if and how EPB41L5 modulates the acetylation of SIRT2 targets and 3) verify the cellular localization of EPB41L5. We performed immunoprecipitations, cell fractionations and immunoblotting analyses. Our work indicates that EPB41L5, NADSYN1 and SIRT2 appear to form a conserved complex between Drosophila and humans. EPB41L5 also modulates the acetylation of several SIRT2 targets, promoting the interaction between the deacetylase and its substrates. We also discovered that EPB41L5, in addition to being cytoplasmic, is also nuclear, potentially implying the presence of a similar mechanism in this compartment. This work paves the way for the characterization of a novel mechanism involving EPB41L5 in tumor progression. Further study of the EPB41L5-NADSYN1-SIRT2 complex could provide clues to establish new therapeutic approaches for patients suffering from aggressive cancers expressing EPB41L5.
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Implication de TLE3 et KDM5A dans la régulation de la transcription des gènes cibles du récepteur des œstrogènes ERα

Jangal, Maïka January 2016 (has links)
Dans le noyau cellulaire, l’ADN est compacté autour de petites protéines appelées histones formant ainsi le nucléosome, unité de base de la chromatine. Les nucléosomes contrôlent la liaison des facteurs de transcription à l’ADN et sont ainsi responsables de la régulation des processus cellulaires tels que la transcription. Afin de permettre l’expression des gènes, la chromatine est remodelée, c’est-à-dire que les nucléosomes sont repositionnés de manière à ce que la machinerie générale de la transcription puisse atteindre l’ADN afin de produire l’ARN messager. La moindre petite modification dans la fonction des facteurs de transcription ou des enzymes responsables du remodelage de la chromatine entraine des variations d’expression des gènes, et donc des maladies telles que les cancers. Le cancer du sein est le cancer le plus couramment développé chez les femmes. Cette maladie est principalement causée par l’activité du récepteur des œstrogènes ERα et de ses co-régulateurs ayant, pour la plupart, un rôle direct sur le remodelage de la chromatine. Afin de mieux comprendre le développement et la progression du cancer du sein, nous avons décidé d’étudier le rôle de deux co-régulateurs de ERα, TLE3 et KDM5A, impliqués dans le remodelage de la chromatine et dont la fonction dans le cancer du sein est indéterminée. Nous avons démontré que TLE3 est un partenaire d’interaction du facteur pionnier FoxA1, facteur nécessaire à la liaison de ERα sur l’ADN pour la transcription des gènes cibles de ce récepteur. L’interaction de TLE3 avec FoxA1 inhibe la liaison de ERα à l’ADN en absence d’œstrogènes, via le recrutement de HDAC2 qui déacétyle la chromatine, empêchant alors l’activation fortuite de la transcription en absence de signal. Quant à KDM5A, malgré sa réputation de répresseur de la transcription, dans le cancer du sein, cette déméthylase de H3K4me2/3 est un coactivateur de ERα, dû à son rôle direct sur l’expression du récepteur.
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Étude de l'influence du facteur de transcription EKLF sur la régulation épigénétique du locus de la [Bêta]-globine humaine lors de l'hématopoïèse

Aumont, Angélique January 2004 (has links)
Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.
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Régulation du gène "steroidogenic acute regulatory protein" par le cholestérol dans l'ovaire porcin

Deneault, Eric January 2003 (has links)
Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.
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Characterization of the subcellular localization of Sirtuin 2 during infection with Listeria monocytogenes / Caractérisation de la localisation subcellulaire de la Sirtuin 2 pendant l'injection par listeria monocytogenes

Pereira, Jorge 07 December 2017 (has links)
Listeria monocytogenes est l'un des meilleurs organismes modèles pour l'étude des interactions bactérie-hôte. Ce pathogène intracellulaire facultatif peut infecter, survivre et se répliquer dans le cytoplasme des cellules eucaryotes, démontrant la co-évolution étroite de Listeria avec son hôte. Le style de vie intracellulaire de ce pathogène implique la manipulation de divers composants de la cellule hôte, dont l'un est la chromatine. En induisant des modifications de la chromatine au niveau des histones, Listeria peut influencer le programme transcriptionnel de l'hôte. Ce projet de thèse porte sur une modification spécifique des histones, la désacétylation de la lysine 18 de l'histone H3, induite par la désacétylase de l'hôte Sirtuin 2 (SIRT2) lors de sa relocalisation du cytoplasme vers le noyau pendant l'infection. Le détournement de SIRT2 par Listeria fournit un système idéal pour étudier les mécanismes de la localisation subcellulaire de SIRT2, qui est mal comprise, et c'est le but de cette thèse. En utilisant la spectrométrie de masse, nous avons identifié une nouvelle modification posttraductionnelle de SIRT2, la phosphorylation de la sérine 25 (S25), ciblée spécifiquement par l'infection, et essentielle pour l'association de SIRT2 à la chromatine. Nous avons caractérisé le complexe moléculaire impliqué dans la déphosphorylation de SIRT2-S25 et nous montrons que cette modification est essentielle pour contrôler la fonction de SIRT2 en tant que répresseur transcriptionnel, et est nécessaire pour une infection efficace. Notre approche protéomique a aussi permis la caractérisation d'un interactome de SIRT2. De nombreuses protéines ont été identifiées et quelques-unes ont été confirmées et étudiées pour leur rôle dans le transport nucléo-cytoplasmique de SIRT2. De plus, une collaboration au laboratoire a mis au jour un mécanisme de subversion de la réponse aux dommages de l'ADN de l'hôte par Listeria. Dans son ensemble, ce travail a contribué à la compréhension de mécanismes originaux de l’interaction entre les bactéries et la chromatine et a révélé un processus cellulaire contrôlant la localisation subcellulaire et la fonction de la protéine de l’hôte SIRT2. / One of the best model organisms for the study of bacterial-host interactions is Listeria monocytogenes. This facultative intracellular pathogen can infect, survive, and replicate in the cytoplasm of eukaryotic cells, demonstrating the close co-evolution of Listeria with itshost. The intracellular life style of this pathogen involves manipulation of various host cellcomponents, one of which is chromatin. By inducing chromatin modifications at the level of histones, Listeria can influence the transcriptional program of the host. This thesis focuses on one specific histone modification, deacetylation of histone H3 of lysine 18, which is induced by the host deacetylase Sirtuin 2 (SIRT2) upon its relocalization from the cytoplasmto the nucleus during infection. Hijacking of SIRT2 by Listeria provides an ideal system tostudy the mechanisms of SIRT2 subcellular localization, which is poorly understood, and is the purpose of this thesis. By using mass spectrometry we have identified a novel posttranslational modification of SIRT2, Serine 25 (S25) phosphorylation, specifically targeted byinfection, and essential for SIRT2 chromatin association. We have characterized themolecular complex involved in dephosphorylating SIRT2-S25 and we show that this modification is essential for controlling SIRT2 function as a transcriptional repressor andnecessary for productive infection. Our proteomic approach further allowed the characterization of a SIRT2 interactome. Many proteins were identified and a few wereconfirmed and studied for their role in nucleo-cytoplasmic shuttling of SIRT2. In addition, a laboratory collaboration uncovered a mechanism for subversion of the host DNA DamageResponse by Listeria. As a whole, this work has contributed to the understanding of original mechanisms of chromatin-bacteria cross talk, and has revealed a cellular process controlling subcellular localization and function of the host protein SIRT2.
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Caractérisation de nouvelles fonctions biologiques et modifications post-traductionnelles du facteur d'épissage SC35 dans des modèles cellulaires de carcinomes pulmonaires

Edmond, Valérie 07 September 2010 (has links) (PDF)
La protéine SC35 appartient à la famille des protéines SR (Ser/Arg-rich) connues pour être des régulateurs cruciaux de l'épissage alternatif et constitutif. L'activité de ces protéines est largement régulée par phosphorylation. Alors que plusieurs études ont mis en évidence une dérégulation de l'expression des protéines SR au cours du processus de carcinogenèse, peu de données existent à ce jour concernant les voies de signalisation cellulaire qui contrôlent l'expression et/ou l'activité de ces protéines dans les cellules cancéreuses. Pour la première fois, nous démontrons que SC35 est une protéine acétylée. Cette modification post-traductionnelle met en jeu l'acétyltransférase Tip60 et la déacétylase HDAC6. Nos données mettent aussi en évidence une connexion étroite entre la phosphorylation et l'acétylation de SC35 pour le contrôle de son niveau d'expression et de son activité. Nous démontrons enfin que ces modifications post-traductionnelles de SC35 sont critiques pour l'induction de l'apoptose en réponse aux agents génotoxiques et pour la mise en place d'un phénomène de sénescence en réponse au sodium butyrate, un inhibiteur d'histones déacétylases, dans différentes lignées cellulaires dérivées de carcinomes pulmonaires humains. La protéine E2F1 est un facteur de transcription qui participe au contrôle de la prolifération cellulaire en stimulant le passage des cellules en phase S du cycle cellulaire et est aussi capable d'induire l'apoptose. Au laboratoire, nous avons identifié la protéine SC35 comme une nouvelle cible transcriptionnelle directe de E2F1 et montré que les deux protéines coopèrent pour induire l'apoptose en réponse aux agents génotoxiques. Nous démontrons dans ce travail que SC35 gouverne aussi l'entrée et la progression en phase S en contrôlant certains gènes cibles de E2F1 impliqués dans ce contexte, tels que la cycline E. Nous mettons en évidence que la voie de signalisation cellulaire PI3K/AKT est impliquée dans le contrôle de l'expression de la cycline E médié par les deux protéines E2F1 et SC35, notamment via la phosphorylation de SC35. Finalement, nous décrivons une corrélation directe entre le niveau d'expression protéique de la cycline E et de P-SC35 dans une série de tumeurs pulmonaires neuroendocrines. L'ensemble de ces travaux identifie donc de nouvelles voies de signalisation contrôlant les fonctions cellulaires de SC35 et ouvre des perspectives quant aux conséquences biologiques découlant de la dérégulation de l'expression de SC35 dans les cancers bronchiques.

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