O aciclovir, nucleosídeo sintético análogo da 2’-desoxiguanosina, é um dos mais efetivos e seletivos fármacos antivirais. No entanto, tem sido sugerido que a terapia tópica com aciclovir possui baixa eficácia devido a uma falta de penetração de quantidades suficientes do fármaco até a camada basal da epiderme, local de instalação do vírus herpes simples. As nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) são sistemas de liberação de fármacos que reúnem as principais vantagens encontradas nos sistemas lipossomais e nas micro e nanopartículas poliméricas. Diversas propriedades como adesão ao estrato córneo, formação de filme oclusivo, aumento da hidratação e da penetração cutânea de ativos tornam esse sistema extremamente promissor para a liberação tópica de fármacos. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar NLS contendo o fármaco antiviral aciclovir, além de avaliar o potencial deste sistema carreador para a liberação tópica. NLS-neutras e NLS-negativas, preparadas através do método da microemulsão, apresentaram diâmetro médio de 285,33 ± 40,22 nm e 220,75 ± 12,84 nm, bem como potenciais zeta de 6,68 ± 15,27 mV e -42,02 ± 7,04 mV, respectivamente. Os estudos de permeação cutânea in vitro apresentaram uma permeação de ACV, através da pele de orelha de porco em 24 horas, significativamente maior a partir das NLS-negativas do que a partir do controle e das NLS-neutras. Além disso, os ensaios de retenção cutânea in vitro revelaram também, uma quantidade de ACV depositada no estrato córneo e na epiderme viável, significantemente maior na pele tratada com NLS-negativas do que nas peles tratadas com o controle e NLS- neutras. Portanto, pode ser concluído que as NLS-negativas representam um promissor sistema de liberação tópica para o tratamento das lesões cutâneas causadas pelo vírus do herpes simples. / Acyclovir, a synthetic analogue of 2’- deoxiguanosine, is one of the most effective and selective agents against viruses of the Herpes group. Nevertheless, it has been suggested that the topical therapy with acyclovir has low efficacy due to the lack of penetration of a sufficient amount of drug to the basal epidermis, target site of herpes simplex virus. Solid lipid nanoparticles (SLN) represent an alternative carrier system to traditional colloidal carriers, such as emulsions, lipossomes and polymeric micro- and nanoparticles. Several properties such as adhesion to the stratum corneum, occlusive film formation and increase in hydration as well as in percutaneous penetration of active drugs make this system highly promising for the topical delivery. The aim of the present study was to develop and to characterize acyclovir loaded SLN, as well as to evaluate the potential of this carrier system for topical delivery. Neutral-SLN and negative-SLN, prepared by the microemulsion method, showed average diameters of 285.33 ± 40.22 nm and 220.75 ± 12.84 nm, as well as zeta potentials of 6.68 ± 15.27 mV and -42.02 ± 7.04 mV, respectively. The in vitro percutaneous permeation studies showed a significantly higher amount of ACV, permeated through the pig-ear skin in 24 hours, from negative-SLN than neutral-SLN. Moreover, the skin uptake behavior revealed a significantly higher amount of ACV deposited in stratum corneum and viable epidermis after treating with the negative-SLN. Therefore, it can be concluded from our study that negative-SLN may be a promising carrier for topical delivery of ACV. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Nos últimos anos tem aumentado o interesse em estudos sobre a influência exercida pelo tipo de matriz sobre os fragmentos florestais. Anfíbios terrestres são bons bioindicadores para esse tipo de estudo por apresentarem baixa vagilidade e alta filopatria. Este estudo comparou riqueza, abundância e composição de espécies de anfíbios terrestres através de armadilhas de interceptação e queda em três conjuntos de fragmentos de Floresta Estacional Semidecidual no sudeste do Brasil, de acordo com a matriz predominante no entorno (cana-de-açúcar, café e pasto). Não foram observadas diferenças na riqueza, mas fragmentos com predomínio de cana tiveram a menor abundância de indivíduos. Fragmentos com predomínio de pastagens apresentaram a maior abundância. Essa matriz e a de café indicaram maior permeabilidade que a de cana. A espécie mais abundante, Rhinella ornata, não mostrou diferenças biométricas entre os grupos de fragmentos, mas assim como vários outros anfíbios amostrados, apresentou quantidades muito reduzidas de indivíduos nos fragmentos dominados por canaviais. / In recent years there has been increasing interest in studies on a matrix-type influence on forest fragments. Terrestrial amphibians are good bioindicators for this kind of study because of low vagility and high philopatry. This study compared richness, abundance and species composition of terrestrial amphibians through pitfall traps in three sets of semi-deciduous seasonal forest fragments in southeastern Brazil, according to the predominant surrounding matrix (sugar cane, coffee and pasture). There were no differences in richness, but fragments surrounded by sugar cane had the lowest abundance of amphibians, whereas fragments surrounded by pastures had a greater abundance. This matrix and coffee showed higher permeability than sugar cane. The most abundant species, Rhinella ornata, showed no biometric differences between fragment groups, but like many other amphibians sampled, showed very low numbers of individuals in fragments dominated by sugar cane fields. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Com a ampla disseminação da AIDS, uma grande gama de microrganismos tem aparecido como patógenos emergentes, causando importantes infecções em pacientes imunocomprometidos. Por exemplo, Rhodococcus equi, um agente incomum de infecções em humanos, tem sido isolado em pacientes imunocomprometidos. A presença deste microrganismo oportunista em produtos farmacêuticos não tem tido considerável atenção. No presente trabalho, o método de reação em cadeia da polimerase (PCR) foi comparado com métodos convencionais para rápida detecção de três espécies bacterianas em amostras de cremes tópicos contaminadas artificialmente. As amostras foram incubadas por 24 horas a 37ºC. Depois da incubação em caldo com 10% de tween 20, amostras foram semeadas em meio para crescimento seletivo. Identificação bioquímica de Bacillus cereus e Rhodococus equi foram feitas utilizando o sistemas de identificação API 20E® e API Coryne®, respectivamente. Para identificação de Micrococcus luteus foram utilizados os testes de catalase, oxidase, morfologias das colônias e o sistema Gram. O DNA foi extraído usando o método do fenol-clorofórmio. Os iniciadores utilizados contendo a seqüência específica foram para B. cereus (BC1 e BC2), R. equi (COX-F e COX-R) e para M. luteus (ML-ISR-R e ML-ISR-F) foram utilizados na reação de PCR. Para validação da metodologia molecular, as seqüências dos produtos de PCR foram determinadas e analizadas utilizando-se os programas Blastn e Blastx. Foi observado uma alta similaridade (E .value 0,0) e uma alta identidade ( > 99%) para as bactérias utilizadas neste estudo. Os métodos convencional e de PCR detectaram B. cereus, R. equi e M. luteus em todas as amostras contaminadas artificialmente. O tempo para completar o método de PCR incluindo o preparo de amostras e a amplificação específica do DNA bacteriano foi de 27 horas. Para o método convencional foi necessário de 72 a 96 horas para o isolamento e identificação bioquímica dos microrganismos pesquisados. A rápida detecção de PCR para B. cereus, R. equi e M. luteus mostrada neste trabalho sugerem o uso desta metodologia em controle de qualidade microbiológica de produtos tópicos não estéreis, especialmente utilizados por pacientes imunocomprometidos. / With the ample dissemination of the AIDS, a wide range microorganisms has blunted as emergent pathogens, causing important infection in immunocompromised patients. For example, Rhodococcus equi, an unusual cause of infection in humans, has been isolated from HIV-infected patients. The presence of these opportunistic microorganisms in pharmaceutical products has not receiv considerable attention. In the present work PCR assay were compared with standard microbiological methods for rapid detection of three bacterial species from artificially contaminated sample of topical creams. Artificially contaminated samples were incubated for 24 horas at 37º C. After incubation in broth with 10% tween 20, samples were streaked on seletive growth media. Biochemical identification of Bacillus cereus and R. equi was performed using API 20E® and API Coryne® identification systems, respectivelly. For Micrococcus luteus identification, colony an Gram-stained morphology of the bacterium and the biochemical tests of catalase and oxidase were used.DNA was extracted using phenol-chloroform method. DNA primers containing the specific sequences of the BC1 and BC2 for B. cereus, COX-R and COX-F for R. equi and ML-ISR-F and ML-ISR-F for M. luteus were used for detection in the PCR reaction. In order to validate this methodology, DNA sequences of the products were determined. The sequences of the cloned PCR products were analysed using Blastn and Blastx programs. It was observed a marked similarity (E.value 0,0) and a high identity (> 99%) to the bacteria used in the study. Both the PCR and the standard enrichment tests method detected B. cereus, R. equi and M. luteus in all of the deliberately contaminated samples. The time to complete the PCR assay including sample preparation and PCR amplification of the specific DNA bacterial targets was 27 h. Standard plating methods required 72-96 h for the bacteria to be isolated, purified and biochemecally identified. Rapid PCR detection of B. cereus, R. equi and M. luteus showed in this work suggests the use of this methodology in the microbiology control of non-sterile topical products, specially intended for use with immunocompromised patients.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-06-10T14:20:01Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-06-11T18:30:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-06-11T19:08:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-11T19:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Tatiana Amaral Pires de Almeida.pdf: 3233406 bytes, checksum: e04eb0576f711f1ed5bbe73ae78b4932 (MD5) Previous issue date: 2010-08-20 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The Herpes Simplex Virus type 2 (HSV-2) is a widespread, incurable agent that establishes latency in nervous cells and is responsible for the majority of genital herpes cases. The UL23 is a polymorphic gene, which encodes the viral thymidine kinase (TK) of the Herpes virus. TK has six conserved regions, including two active sites, which plays an important role in acyclovir (ACV) metabolism. Therefore, some mutations in UL23 are implicated with ACV resistance phenoty pe. In this work, we analyzed 67 samples collected between Ap ril 2008 and September 2009 at the STI/STD clinic of “Alfredo da Matta” Foundation, in Manaus, Amazonas, Brazil obtained from HSV-2 genital ulcer patients. In order to characterize polymorphisms, all sp ecimens were processed for total nucleic acid isolation, submitted to PCR amplification targeting the complete ORF of UL23 gene followed by automated nucleotide sequencing with dideoxy chain terminators. Sequences analysis shown that 45 sequences were 100% similar to the reference strain “HG52”. The remaining 22 sequences (32.8%) showed at least one nucleotide substitution; none insertions or deletions were found. Amino acids substitutions were detected in 19 out of 22. The mutation Gly39Glu was the most frequently detected (16/19), followed by Asn78Asp (5/19); Gly39Glu and Asn78Asp were simultaneously found in four samples. Deduced amino acids sequences were aligned with 66 available on GenBank from African and American continents. A total of 23 variable sites were identified and, once more, Gly39Glu mutation was the most frequent found (74/133). Substitutions previously associated with ACV resistance were not detected, however, Gly39Glu was recently described as a probable resistant mutation. Another four mutations observed: His4Tyr, Met70Arg, Asn245Ser and Ala366Val had not been previously described. The theoretical models of TK’s structure built for seven samples showed that amino acids substitutions were found away from the conserved and/or catalytic sites of TK, with the exception of Arg338Gln which was nearly from ATP-binding site. Mutations associated with ACV resistance were not detected. However one of the mutations found, Gly39Glu, was p reviously associated with this resistance phenoty pe. Another four mutations found in his work: His4Tyr, Met70Arg, Asn245Ser and Ala366Val had not been previously described elsewere. To our knowledge, this is the first study on UL23 polymorphisms on Brazilian HSV-2 samples, a research field considered as a priority by WHO HIV/STI program. / latência em células nervosas sendo responsável pela maioria dos casos de herpes genital. O UL23 é um gene polimórfico que codifica a timidinaquinase viral (TK) do Herpesvírus. A TK possui seis regiões conservadas, incluindo dois sítios ativos; esta enzima desempenha um papel importante no metabolismo do aciclovir (ACV). Consequentemente, algumas mutações no gene UL23 estão relacionadas a fenótipos de resistência ao ACV. Nesta dissertação, analisamos 67 amostras coletadas entre Abril de 2008 e Setembro de 2009 na clínica de DST/IST da Fundação “Alfredo da Matta”, em Manaus, Amazonas, Brasil, obtidas de pacientes com úlceras genitais por HSV-2. Com o objetivo de se caracterizar polimorfismos, todos os espécimes foram processados para extração total de ácido nucleico e submetidos à amplificação da CDS do gene UL23 pela técnica de PCR, seguida de sequenciamento nucleotídico automatizado utilizando-se terminadores dideóxi. As análises de sequências mostraram que 45 delas foram 100% similares à cepa-referência “HG52”. As 22 sequências restantes (32,8%) mostraram pelo menos uma substituição de nucleotídeo; nenhuma inserção ou deleção foi encontrada. Substituições de aminoácidos foram detectadas em 19 dessas 22 sequências. A mutação Gly39Glu foi a mais frequente (16/19), seguida pela Asn78Asp (5/19); Gly39Glu e Asn78Asp foram encontradas simultaneamente em quatro amostras. Sequências deduzidas de aminoácidos foram alinhadas com 66 sequências Africanas e Americanas disponíveis no GenBank. Um total de 23 sítios variáveis foram identificados e, mais uma vez, a mutação Gly39Glu foi a mais frequente (74/133). Substituições previamente associadas à resistência ao ACV não foram detectadas, entretanto, a Gly39Glu foi recentemente descrita como uma provável mutação de resistência. Outras quatro mutações observadas, His4Tyr, Met70Arg, Asn245Ser e Ala366Val, foram descritas pela primeira vez por este trabalho. Nos modelos teóricos da estrutura da TK, construídos para sete amostras, foi possível visualizar que as substituições de aminoácidos estavam situadas longe dos sítios ativos/conservados desta enzima, com exceção da mutação Arg338Gln que apresentou maior proximidade com o sítio de ligação de ATP. Não foram detectadas mutações sugestivas de resistência ao ACV. Ao nosso conhecimento, este é o primeiro estudo de polimorfismos do gene UL23 do HSV-2 em amostras brasileiras, um campo considerado prioridade pelo Programa de HIV/IST da OM S.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2001. / Bibliogr.: f. 86-96. Publié aussi en version électronique.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:36:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Maria Thiago de Souza.pdf: 2094696 bytes, checksum: 273c11aa7e66f79b17b1b157ad199bc4 (MD5) Previous issue date: 2013-02-22 / The nanotechnology research progressed significantly over the past 30 years, allowing for the development of new materials with applications that meet the interests of various sectors. In health, the pharmaceutical industry has used nanostructured materials to develop the release of drugs. Application of the nanoparticles offers numerous advantages compared to conventional release, such as progressive and controlled release of drugs from the matrix degradation, effective plasma levels with less fluctuation over time, less risk of toxicity, biological penetration through the barriers and targeting to specific tissue targets. In this study, the material used in drug delivery is pseudoboehmite. This is an oxyhydroxide of aluminum and consists of a structure similar to boehmite. With its production by sol-gel process, starting from high purity reagents, it is possible to obtain high-purity pseudoboehmite with high specific area and with total absence of contaminants, making it therefore promising for applications in controlled release of drugs. In view of the possible use of pseudoboehmite as carriers for controlled drug delivery, this study aimed to determine its acute (50mg/kg, 300mg/kg and 2000mg/kg) and. subacute toxicity (1000mg/kg) in male rats (Wistar rats). The methodology consisted of toxicity tests from the evaluations and analyzes of the biochemical and histopathological parameters resulting from its administration. Finally, the pseudoboehmite was tested in vivo as possible releasing controlled drug acyclovir. In both tests, the administration has not determined mortality in groups and histopathological evaluation of the livers of the animals were not observed any changes in tissue integrity. These readings showed there to absorption of the acyclovir systemic circulation in animals receiving the pseudoboehmite. The readings were taken with a high performance liquid chromatography showed that there was absorption of acyclovir systemic circulation in animals receiving the pseudoboehmite with acyclovir. Acyclovir administered with pseudoboehmite was absorbed from the gastrointestinal tract. The results showed that the pseudoboehmite has low toxicity at high doses of short and falls under the category of nontoxic; the absence of aluminum in the plasma samples emphasizes the absence of aluminum absorption into the systemic circulation and acyclovir present in the plasma of rats allowed confirm that this is present in the systemic circulation of animals even after the steps of the desorption of pseudoboehmite. / As pesquisas em nanotecnologia avançaram consideravelmente nos últimos 30 anos, possibilitando o aparecimento de novos materiais com aplicações que atendem aos interesses de diversos setores. Na área da saúde, a indústria farmacêutica tem utilizado os materiais nanoestruturados para desenvolver novos medicamentos e veiculadores de fármacos. A aplicação das nanopartículas oferece inúmeras vantagens comparativamente ao sistema convencional de liberação, tais como: liberação controlada e progressiva dos fármacos a partir da degradação da matriz, nível plasmático efetivo com menor flutuação ao longo do tempo, menor risco de toxicidade, maior penetração pelas barreiras biológicas e direcionamento específico aos alvos teciduais. Neste trabalho, o material utilizado como liberador de fármaco foi a pseudoboemita. Esta é um oxi-hidróxido de alumínio e consiste em uma estrutura similar a boemita. Com sua produção via processo sol-gel, a partir de reagentes de alta pureza, foi possível obter pseudoboemita de pureza elevada, com área específica elevada e com total ausência de contaminantes, tornando-a, portanto, promissora para aplicações na liberação controlada de fármacos. Em vista da possível utilização da pseudoboemita como excipiente para liberação controlada de fármacos, este trabalho teve como objetivo determinar a sua toxicidade aguda (50mg/kg, 300mg/kg e 2000mg/kg) e. subaguda (1000mg/kg) em ratos machos (Wistar rats). A metodologia consistiu em testes de toxicidade a partir das avaliações e análises dos parâmetros bioquímicos e histopatológicos resultantes de sua administração. Para finalizar, a pseudoboemita foi testada in vivo como possível liberador controlado do fármaco aciclovir. Em ambos os testes, a administração não determinou mortalidade nos grupos e na avaliação histopatológica dos fígados dos animais também não foram observadas qualquer alterações na integridade tecidual. As leituras realizadas com cromatografia líquida de alta eficiência mostraram que ocorreu absorção do aciclovir para circulação sistêmica nos animais que receberam a pseudoboemita com aciclovir. O aciclovir administrado com a pseudoboemita foi absorvido pelo trato gastrointestinal. Os resultados demonstraram que a pseudoboemita tem baixa toxicidade em altas doses em curto prazo e se enquadra na categoria de atóxico; a ausência de alumínio nas amostras de plasma enfatiza a ausência de absorção do alumínio para a circulação sistêmica e o aciclovir presente no plasma dos ratos permitiu confirmar que este está presente na circulação sistêmica dos animais mesmo após as dessorções da pseudoboemita.

O aciclovir é um anti-viral usado mundialmente para o tratamento de herpes (do tipo HSV-1 e HSV-2). Acredita-se que o vírus da herpes está presente em cerca de 90% das pessoas em estado de latência. O tratamento principal em casos onde a doença se manifesta, lesões nos lábios e mucosas, é o aciclovir. No Brasil, para renovar ou fazer um novo registro de medicamento, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) exige testes que expõem o fármaco a ambientes extremos (ácido, base, luz, calor, umidade, oxidação) para gerar produtos de degradação que dependendo da concentração no produto acabado, devem ser submetidos a ensaios toxicológicos. O estudo de degradação forçada também permite elucidar a estabilidade intrínseca do fármaco, contribuindo para o entendimento do mecanismo de degradação da substância, o que, posteriormente, ajuda a compreender quais fatores físicos e químicos devem ser controlados para manutenção da estabilidade. Este trabalho tem objetivo de validar um método de análise para quantificação do aciclovir e seus produtos de degradação por cromatografia líquida de interação hidrofílica (Hydrophilic interaction chromatography - HILIC) com detecção por arranjo de diodos (DAD) como também degradar a amostra em diferentes ambientes. / Acyclovir is an anti-viral used worlwide for herpes treatment (HSV-1 and HSV-2 types). It is estimated that herpes virus is present in almost 90% of people in his latent state. Acylcovir is the main treatment in cases where virus expresses itself. In Brazil, to renew or to make a new registration of medicines, National Agency of Sanitary Surveillance (ANVISA) demands tests to expose the medicine to extreme conditions (acid, basic, light, heat, humidity, oxidation) in order to generate degradation products that, depending on the concentration of the row product, will undergoes toxicological assays. The forced degradation study also allow to elucidate the intrinsic stability of medicine, contributing to understand the degradation mechanism of the substance leading to help the understanding of which physical and chemical factors must be controlled to keep stability. The main objective of this work is to validate a method of analysis to quantify acyclovir and his degradation products using Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) based on Diode Array detection as well as to degraded the sample in different conditions.

O aciclovir é um anti-viral usado mundialmente para o tratamento de herpes (do tipo HSV-1 e HSV-2). Acredita-se que o vírus da herpes está presente em cerca de 90% das pessoas em estado de latência. O tratamento principal em casos onde a doença se manifesta, lesões nos lábios e mucosas, é o aciclovir. No Brasil, para renovar ou fazer um novo registro de medicamento, a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) exige testes que expõem o fármaco a ambientes extremos (ácido, base, luz, calor, umidade, oxidação) para gerar produtos de degradação que dependendo da concentração no produto acabado, devem ser submetidos a ensaios toxicológicos. O estudo de degradação forçada também permite elucidar a estabilidade intrínseca do fármaco, contribuindo para o entendimento do mecanismo de degradação da substância, o que, posteriormente, ajuda a compreender quais fatores físicos e químicos devem ser controlados para manutenção da estabilidade. Este trabalho tem objetivo de validar um método de análise para quantificação do aciclovir e seus produtos de degradação por cromatografia líquida de interação hidrofílica (Hydrophilic interaction chromatography - HILIC) com detecção por arranjo de diodos (DAD) como também degradar a amostra em diferentes ambientes. / Acyclovir is an anti-viral used worlwide for herpes treatment (HSV-1 and HSV-2 types). It is estimated that herpes virus is present in almost 90% of people in his latent state. Acylcovir is the main treatment in cases where virus expresses itself. In Brazil, to renew or to make a new registration of medicines, National Agency of Sanitary Surveillance (ANVISA) demands tests to expose the medicine to extreme conditions (acid, basic, light, heat, humidity, oxidation) in order to generate degradation products that, depending on the concentration of the row product, will undergoes toxicological assays. The forced degradation study also allow to elucidate the intrinsic stability of medicine, contributing to understand the degradation mechanism of the substance leading to help the understanding of which physical and chemical factors must be controlled to keep stability. The main objective of this work is to validate a method of analysis to quantify acyclovir and his degradation products using Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) based on Diode Array detection as well as to degraded the sample in different conditions.

INTRODUÇÃO: A administração de aciclovir por via sistêmica é o tratamento de escolha para a necrose aguda de retina. Entretanto, por ser uma doença rapidamente progressiva, a injeção intravítrea de aciclovir ao diagnóstico pode ser utilizada como terapia adjuvante, enquanto o aciclovir sistêmico ainda não alcançou níveis terapêuticos na retina. Os objetivos deste estudo experimental foram determinar a meia-vida do aciclovir no vítreo após injeção intravítrea e determinar os efeitos funcionais e morfológicos do aciclovir na retina de coelhos saudáveis após injeção intravítrea do medicamento em diferentes doses. MÉTODOS: Foram utilizados 32 coelhos albinos da raça New Zealand (estudo farmacológico) e 86 coelhos pigmentados da raça Dutch Belted (30 no estudo eletrofisiológico, 36 no estudo morfológico com microscopia de luz e 20 no estudo morfológico com imuno-histoquímica). Para a determinação da meia-vida do aciclovir no vítreo, os 32 coelhos albinos receberam injeção intravítrea de aciclovir 1 mg e foram sacrificados nos dias 2, 9, 14 e 28. Para a avaliação funcional e microscopia de luz, os 66 coelhos pigmentados receberam três doses intravítreas de aciclovir (0,1; 1 ou 10 mg) no olho direito e soro fisiológico no olho esquerdo. Destes, 30 animais foram submetidos ao eletrorretinograma (ERG) antes da injeção e nos dias 2, 7 e 15 após a injeção. Para a análise histológica (microscopia de luz), 36 animais foram sacrificados 2, 7 e 15 dias após a injeção. Para imuno-histoquímica (apoptose, GFAP, DAPI e vimentina), os 20 coelhos pigmentados receberam injeção intravítrea de 1 e 10 mg de aciclovir e foram sacrificados após cinco dias. RESULTADOS: No estudo da meia-vida do aciclovir no vítreo, as concentrações médias de aciclovir no vítreo foram 0,25, 0,09, 0,06 e 0,08 ?g/ml, respectivamente 2, 9, 14 e 28 dias depois da injeção. Nos estudos eletrofisiológico e de microscopia de luz, os olhos que receberam injeção intravítrea de 0,1 mg de aciclovir não apresentaram alterações funcionais ou histológicas. Os olhos injetados com 1 mg de aciclovir apresentaram redução significativa da amplitude das ondas a e b no ERG e desalinhamento dos fotorreceptores na microscopia de luz. Estes achados regrediram no 15º dia. Os olhos que receberam injeção intravítrea de 10 mg de aciclovir apresentaram as mesmas alterações funcionais, mas que não regrediram após o 15º dia. À microscopia de luz, esses olhos apresentaram destruição da camada de fotorreceptores e desorganização de toda a retina. Na camada de células ganglionares houve áreas com ausência de células da retina interna. A imuno-histoquímica mostrou lesão das células de Müller e apoptose de fotorreceptores apenas nos animais injetados com 10 mg. CONCLUSÕES: A meia-vida do aciclovir no vítreo após injeção intravítrea é muito curta para a sua detecção em dias. Os resultados funcionais e morfológicos sugerem que a injeção intravítrea de aciclovir em coelhos causa alterações tóxicas dose e tempo dependentes nos fotorreceptores e nos neurônios pós-receptorais da retina. A dose de 0,1 mg de aciclovir parece ser segura para injeção intravítrea em coelhos e pode ser utilizada em modelos experimentais de uveíte ou retinite viral / OBJECTIVE: The gold standard for the treatment of acute retinal necrosis is the use of systemic intravenous acyclovir. Nevertheless, as a rapidly progressive disease, use of intravitreal acyclovir injection at the time of diagnosis may be a second therapy until the systemic acyclovir reaches therapeutic levels in the retina. The aim of this experimental study was to determine pharmacological levels of the drug in the vitreous within days and to determine the functional and morphologic effects of acyclovir in the retina of healthy rabbits, after intravitreal injections in different dosages. METHODS: We have used 32 albino New Zealand rabbits for the pharmacologic experiments and 86 pigmented Dutch Belted animals for electrophysiology, immunochemistry and morphology. Thirty rabbits were used for the electrophysiological study, 36 were used for the light microscopy morphology and 20 animals were used for immunochemistry morphology. For the half-life study, the 32 albino rabbits received a 1mg acyclovir intravitreal injection and they were euthanized at 2, 9, 14 and 28 days. For functional and morphologic evaluations, the 66 pigmented animals received one of 3 intravitreal dosages of acyclovir (0,1; 1 or 10 mg) in the right eye and saline in the left eye. For the functional evaluation, 30 pigmented animals underwent electroretinography before the injection and on days 2, 7 and 15 after the procedure. For the histology with light microscopy, 36 animals were euthanized on days 2, 7 and 15 after the injection. Twenty rabbits that received 1 and 10mg of acyclovir were euthanized on day 5 were used for the immunohistochemistry to evaluate apoptosis, with GFAP, DAPI and vimentin. RESULTS: For the pharmacology study, the mean acyclovir concentrations when 1?g/ml was injected into the vitreous were respectively 0,25; 0,09; 0,06 e 0,08?g/ml on days 2, 9, 14 and 28 after injected. The eyes that received 0,1 mg acyclovir showed no functional or histological alterations. The eyes injected with 1 mg acyclovir had significant reduction on a and b waves amplitude and photoreceptor misalignment, which regressed on day 15. The 10mg injected eyes, showed the same electrophysiology changes. The retinas of those animals had photoreceptor layer destruction and total retina disorganization. In the ganglion cell layer, there were areas of absence of internal retinal cells. The immunohistochemistry showed Müller cells lesion and photoreceptor apoptosis in the 10mg animals. CONCLUSIONS: Acyclovir half-life is too short for its detection within days. The functional and morphological results suggest that the intravitreal acyclovir injection in rabbits cause toxic changes that are dose and time dependent on photoreceptors and post-receptor neurons in the retina. The 0,1 mg acyclovir dosage seems to be safe for intravitreal use in rabbits and may be studied in experimental models of viral uveitis or retinitis

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Dentre o arsenal terapêutico para o tratamento da infecção por HSV destaca-se o aciclovir (ACV). No entanto, este apresenta limitações no seu uso como um tempo de meia-vida curto e uma baixa solubilidade aquosa. A curcumina (CUR) é um composto natural que vem demonstrando diversas atividades terapêuticas, dentre estas a atividade antiviral, porém o seu uso por via oral também é comprometido pela baixa solubilidade em água. A encapsulação em micropartículas poliméricas (MPs) é uma abordagem farmacotécnica que podem superar as dificuldades do uso terapêutico destes dois compostos. Em vista disto, o presente trabalho visou desenvolver e caracterizar MPs pelo método de aspersão compostas por HPMC e Eudragit® RS100 como materiais poliméricos, além de manitol como adjuvante de secagem. Os resultados demonstraram que o método de preparo por aspersão (spray drying) apresentou um rendimento em torno de 50% para todas as formulações desenvolvidas, mostrando um fluxo tecnológico mais vantajoso para as partículas sem manitol. O doseamento demonstrou teores de 82 a 99% e de 81 a 94%, para ACV e CUR, respectivamente. A análise granulométrica mostrou micropartículas de tamanho micrométrico entre 8,7 e 15,3 μm. A análise morfológica evidenciou o formato esférico e confirmou o resultado das análises de tamanho. A espectroscopia na região do infravermelho mostrou uma sobreposição dos espectros obtidos pelos componentes isolados indicando boa compatibilidade entre os materiais. O perfil de liberação in vitro permitiu observar que as MPs foram capazes de controlar a liberação e melhorar a solubilidade dos compostos, destacando-se, neste quesito, as MPs compostas por HPMC. A avaliação preliminar da atividade antiviral in vitro demonstrou que a associação de ACV e CUR possui um efeito sinérgico frente ao vírus BoVH-1, sendo que as MPs foram capazes de potencializar este efeito. Neste contexto, as MPs mostraram-se sistemas promissores para a veiculação de ACV e CUR por via oral, com elevado potencial para constituir um tratamento alternativo para o herpes viral. / The herpes simplex virus (HSV), also known as human herpes virus, infects humans causing mainly genital and labial ulcerations. Among the drugs available for the treatment of HSV infection the acyclovir (ACV) is an effective antiviral drug. However this drug presents limitations in its use due to the short half-life and low water solubility. Curcumin (CUR) has demonstrated several therapeutic activities, including antiviral activity, but the oral administration of this natural compound is also compromised by low solubility. The polymeric microparticles (MP) are a pharmacotechnical approach that modifies the pharmacokinetics of the compounds and offers a possibility to overcome the difficulties of the therapeutic use. In view of this, this study aimed to develop MPs by spray drying method composed of HPMC and Eudragit® RS100 as polymeric materials, and mannitol as drying material. The results showed a yield around 50% for all developed formulations and a better technological flow rate for the particles without mannitol. The assay showed levels 82-99 and 81% to 94%, to ACV and CUR, respectively. The particle size analysis showed microparticles micrometric size between 8.7 and 15.3 micrometers. Morphological analysis showed the spherical shape and confirmed the results of size analysis. Spectroscopy in the infrared showed an overlap of the spectra obtained by the individual components indicating good compatibility between the materials. The in vitro release profile observed that the PMs were able to control the release and improved the solubility of the compounds, especially when composed of HPMC. Besides, an in vitro preliminary assessment of antiviral activity demonstrated that the combination of ACV and CUR presented a synergistic effect against BoVH-1 virus, and the MPs were able to enhance this effect. The MPs showed to be promising systems for the oral administration of ACV and CUR and could be an improved alternative treatment for viral herpes.