Esta dissertação de mestrado descreve os resultados obtidos acerca da aplicação de reações de acoplamento entre aldeídos, aminas e alquinos (A3) visando a síntese de alcalóides indolizidínicos de ocorrência natural, como a desoxicastanospermina e a swainsonina. A reação de acoplamento-A3 é uma poderosa ferramenta de construção de ligação carbono-carbono e carbono-heteroátomo, permitindo a preparação de propargilaminas que podem ser exploradas como intermediários de grande potencial sintético. A proposta está baseada na reação de acoplamento de um reagente organometálico, gerado in situ a partir de um alquino e um sal ou complexo metálico, e um eletrófilo nitrogenado, que consiste em uma imina ou sal de imínio também gerado in situ a partir de uma amina e um aldeído. Hidroxialdeídos apropriados foram preparados e empregados no acoplamento-A3 juntamente com alquinóis não-protegidos, de modo que a propargilamina resultante contivesse funcionalizações estrategicamente posicionadas visando permitir duas ciclizações via nitrogênio e a conseqüente formação de esqueletos indolizidínicos. Para este mesmo fim, diversas aminas foram testadas no acoplamento, de forma que fosse possível uma N-desproteção compatível com os demais grupos funcionais necessários à síntese dos alcalóides. Dentre estas, dibenzilamina e dialilamina levaram a bons resultados no acoplamento, utilizando um α-hidroxialdeído O-protegido ou um δ-hidroxialdeído livre. Tal metodologia possibilitou a síntese de três propargilaminas a serem utilizadas como intermediários sintéticos na síntese de alcalóides indolizidínicos hidroxilados: 5-(dibenzilamino)-6-((2-metoxietoxi)metoxi)-8- ((tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)oct-3-in-1-ol, 4-(dibenzilamino)oct-2-ino-1,8-diol e 4- (dialilamino)oct-2-ino-1,8-diol; em rendimentos globais de 39% (6 etapas reacionais), 68% (2 etapas) e 57% (2 etapas), respectivamente. Entretanto, no caso específico da propargilamina derivada da dibenzilamina, não obteve-se sucesso nas tentativas de desproteção do nitrogênio e concomitante redução seletiva da ligação tripla à dupla por hidrogenação. / This Masters thesis concerns the results obtained toward the application of amine-aldehyde- akyne coupling reactions (A3) aiming at the synthesis of naturally occurring indolizidine alkaloids, such as deoxycastanospermine and swainsonine. The A3- coupling reaction is a powerful tool for the construction of carbon-carbon and carbon-heteroatom bonds, allowing the preparation of functionalized propargylamines that may be explored as synthetically useful intermediates. The proposal is centered on the coupling reaction between an organometallic reagent, generated in situ from an alkyne and a metallic salt or complex, and a nitrogenated electrofile, consisting of an imine or imminium salt that is also generated in situ from an amine and an aldehyde. Appropriate hydroxyaldehydes were prepared and used in the A3-coupling along with unprotected alkynols, so that the resulting propargylamine contained strategically placed functionalizations aiming to allow two annulations to occur via the nitrogen atom and the consequent formation of indolizidine skeletons. For the same end, several amines were tested in the coupling reaction, so that a N-deprotection compatible with the other funcional groups necessary to the synthesis of the alkaloids would be possible. Among these, dibenzylamine and diallylamine led to satisfactory results in the coupling reaction, using either a O-protected α-hydroxyaldehyde or an unprotected δ-hydroxyaldehyde. This methodology led to the preparation of three propargylamines to be used as synthetic intermediates in the synthesis of hydroxylated indolizidine alkaloids: 5-(dibenzylamine)-6-((2- methoxyethoxy)methoxy)-8-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)oct-3-yn-1-ol, 4- (dibenzylamine)oct-2-yne-1,8-diol and 4-(diallylamine)oct-2-yne-1,8-diol; in overall yields of 39% (6 synthetic steps), 68% (2 steps) and 57% (2 steps), respectively. However, in the particular case of the dibenzylamine-derived propargylamine, no success was achieved in the attempts of nitrogen deprotection and concomitant selective reduction of the triple to double bond via hydrogenation.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:02:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joelma Moreira.pdf: 4509931 bytes, checksum: bba95bccb3eff996782f9bce07ed8f0a (MD5) Previous issue date: 2009-10-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The Amazon is one of the largest possessors of plant biodiversity on the planet. The constituents of the flora have enormous potential in the pharmaceutical, cosmetics, perfumes and essences, among others. This study aimed to search for Amazonian species of the Lauraceae potentially useful both therapeutically and commercially, holding alkaloidal composition or aromatic potential. The selected species were collected in Adolpho Ducke Forest Reserve, for this study were: Aniba panurensis, Aniba rosaeodora, Dicypellium manausense, Endlicheria chalisea, Licaria cannella angustata, Licaria martiniana, Mezilaurus duckei, Mezilaurus itauba, Ocotea nigrescens, Ocotea splendens, Rhodostemonodaphne negrensis, Rhodostemonodaphne parvifolia, Pleurothyrium vasquezii e Sextonia rubra. Of the species selected the ones with some chemical study are A. rosaeodora, A. panurensis and M. itauba. The essential oils were obtained by hydrodistillation and analyzed for their chemical composition (GC-FID, GC-MS and 1H NMR), where the -caryophyllene was the major constituent of most oils: leaves of A. panurensis (33.5%), D. manausense (39.5%), M. itauba (51.8%), O. nigrescens (37.9%) and O. splendens (51.0%); leaves and branches of L. martiniana (41.7% and 21.4%, respectively) and R. parvifolia (41.3% and 16.2%, respectively). For the other major oils constituents were caryophyllene epoxide, santalenone, -eudesmol, -pinene, germacrene D, p-cymene, -elemene, -copaene and linalool (89.4%) which is the main substance found in species A. rosaeodora. When testing inhibitory activity of free radicals, all essential oils showed inhibition of free radical DPPH qualitatively. However, quantitative analyses of active concentrations were very high, exceeding 700 g/mL. Only the essential oils of branches of L. martiniana and leaves of M. duckei and R. parvifolia showed inhibitory activity of acetylcholinesterase. Tests of platelet inhibition resulted in little potential antiplatelet agent with inhibition below 20%. Extracts of the genus Aniba, Licaria, Mezilaurus, Ocotea and Rhodostemonodaphne obtained by extraction with ethanol 100%, were subjected to phytochemical screening in which the presence of phenols, tannins, flavanones, saponins, steroids and alkaloids were shown to be frequent. The ethanol extracts of the species of A. panurensis, S. rubra and L. martiniana showed the highest antioxidant activity against DPPH free radical. The acetylcholinesterase inhibitory activity was higher in extracts of the Aniba and Licaria genus. Extracts of the Licaria genus were showed better activities against tumor cells SF-295 (human glioblastoma), HCT-8 (human colon) and MDAMB-435 (human breast). And for the bioassays against Leishmania amazonensis and Trypanosoma cruzi extract of leaves of A. panurensis showed the best activity (67 g/mL e 79 g/mL, respectively). The extracts that showed better biological activities should be fractionated for the isolation of active principles and retested / A Amazônia é uma das maiores detentora da biodiversidade vegetal do planeta. Os constituintes de sua flora apresentam enorme potencial nas indústrias farmacêuticas, de cosméticos, perfumes e essências, dentre outras. O presente trabalho teve por objetivo a pesquisa de espécies amazônicas da família Lauraceae potencialmente úteis tanto terapeuticamente quanto comercialmente, que possuam composição alcaloídica ou potencial aromático. As espécies selecionadas, coletadas na Reserva Florestal Adolpho Ducke, para este estudo foram: Aniba panurensis, Aniba rosaeodora, Dicypellium manausense, Endlicheria chalisea, Licaria cannella angustata, Licaria martiniana, Mezilaurus duckei, Mezilaurus itauba, Ocotea nigrescens, Ocotea splendens, Rhodostemonodaphne negrensis, Rhodostemonodaphne parvifolia, Pleurothyrium vasquezii e Sextonia rubra. Das espécies selecionadas as únicas que possuem algum estudo químico são A. rosaeodora, A. panurensis e M. itauba. Os óleos essenciais foram obtidos através de hidrodestilação e analisados quanto suas composições químicas (CG-DIC, CG-EM e RMN de 1H), em que o -cariofileno foi o constituinte majoritário da maioria dos óleos: folhas de A. panurensis (33,5%), D. manausense (39,5%), M. itauba (51,8%), O. nigrescens (37,9%) e O. splendens (51,0%); folhas e galhos de L. martiniana (41,7% e 21,4%, respectivamente) e R. parvifolia (41,3% e 16,2%, respectivamente). Para os demais óleos os principais constituintes foram epóxido de cariofileno, santalenona, -eudesmol, -pineno, germacreno D, p-cimeno, -elemeno, -copaeno, e o linalol (89,4%) que é a principal substância encontrada na espécie A. rosaeodora. Nos ensaios de atividade inibidora de radicais livres, todos os óleos essenciais apresentaram inibição do radical livre DPPH qualitativamente. Entretanto, na análise quantitativa as concentrações ativas foram muito altas, superiores a 700 g/mL. Apenas os óleos essenciais dos galhos de L. martiniana e das folhas de M. duckei e R. parvifolia apresentaram atividade inibidora de acetilcolinesterase. Os ensaios de inibição plaquetária resultaram em pouco potencial antiagregante plaquetário, com inibição inferior a 20%. Os extratos brutos, dos gêneros Aniba, Licaria, Mezilaurus, Ocotea e Rhodostemonodaphne, obtidos por extração com etanol 100%, foram submetidos a uma triagem fitoquímica na qual a presença de fenóis, taninos condensados, flavanonas, saponinas, esteróides e alcalóides mostraram-se frequente. Os extratos etanólicos das espécies de A. panurensis, S. rubra e L. martiniana foram os que mostraram maior atividade antioxidante frente ao radical livre DPPH. A atividade inibidora de acetilcolinesterase foi maior nos extratos dos gêneros Aniba e Licaria. Os extratos do gênero Licaria foram os que apresentaram melhores atividades contras as células tumorais SF-295 (glioblastoma humano), HCT-8 (cólon humano) e MDAMB-435 (mama humana). E para os bioensaios contra Leishmania amazonensis e Trypanosoma cruzi o extrato das folhas de A. panurensis foi o que apresentou melhor atividade (67 g/mL e 79 g/mL, respectivamente). Os extratos que apresentaram melhores atividades biológicas deverão ser fracionados para o isolamento dos princípios ativos e novamente testados

O presente estudo visou avaliar os possiveis efeitos imunotóxicos e imunoteratogênicos da integerrimina N-óxido presente no resíduo butanólico (RB) do ,Senecio brasiliensis, uma planta hepatotóxica que contém alcalóides pirrolizidínicos (APs). Tem sido relatado o uso de APs como fitoterápicos em todo o mundo e também como contaminantes de pastagens e alimentos, sendo assim responsáveis por intoxicações em animais de produção e humanos; porém, até o momento, não há relatos de sua ação sobre o sistema imune. Assim, após a extração da planta, quantificou-se no RB de Senecio brasiliensis, por meio de análise elementar e de espectro (1H e 13C), cerca de 70% de integerrimina N-óxido. O RB foi administrado a ratos Wistar machos adultos, nas doses de 3, 6 e 9 mg/kg, por gavagem, durante 28 dias. Foram avaliados o ganho de peso, o consumo de alimento, os órgãos linfóides e a fenotipagem de sua células, a atividade de fagócitos, as respostas imunes humoral e celular e atividade proliferativa de linfócitos. Já ratas gestantes, receberam as mesmas doses do RB do 6º ao 20º dia de gestação. No final da gestação, parte das fêmeas foi destinada à cesariana e as restantes prosseguiram à termo até o nascimento, para a análise das proles aos 60 dias de idade. Os fetos provenientes da cesariana foram avaliados quanto ao tamanho, peso, viabilidade e malformações externas e também submetidos à análise óssea. As mães tiveram seu desempenho reprodutivo avaliado. Naquelas proles avaliadas até 60 dias de idade, procedeu-se a avaliação dos órgãos linfóides e dos parâmetros hematológicos. O presente estudo revelou que integerrimina N-óxido promoveu diminuição no ganho de peso corporal de ratos machos adultos, redução na atividade proliferativa das células T e interfência na contagem de células sanguíneas destes animais. Por outro lado, esses mesmos animais não apresentaram diferenças na atividade de fagócitos, na fenotipagem de linfócitos e nas respostas imunes estudadas. Em ratas gestantes, o RB causou hepatotoxidade, diminuição do ganho de peso materno, diminuição no tamanho das placentas. A análise fetal revelou menor ossificação. Quando da avaliação da prole aos 60 dias de idade, não foram observados efeitos no ganho de peso atribuídos ao RB, nos órgãos linfóides, e também parâmetros hematológicos e bioquímicos. Concluindo, os estudos aqui realizados permitem sugerir que as doses baixas de integerrimina N-óxido ora empregadas, não promovem efeitos imunotóxicos significantes, bem como não apresentaram potencial teratogênico, seja por meio das avaliações clássicas de teratologia quanto naqueles protocolos de imunoteratogenicidade. / The aim of this study was to evaluate the possible immunotoxic and immunoteratogenic effects of integerrimine N-oxide content in the butanolic residue (BR) of Senecio brasiliensis, a hepatotoxic plant that contained pyrrolizidine alkaloids (PAs). PAs have been reported as a pasture and food contaminant and as herbal medicine used worldwide and are related to promote poisoning events in livestock and human beings. After the plant extraction, BR residue from Senecio brasiliensis was submitted to elemental and spectral analyses (1H and 13C ) and was found to contain approximately 70% of integerrimine N-oxide by, which was administered to adult male Wistar rats at doses of 3, 6 and 9 mg/kg for 28 days, by gavage. Body weight gain, food consumption, lymphoid organs and their cell phenotype, phagocyte analysis, humoural and cellular immune responses, and lymphocyte proliferation were evaluated. In addition, pregnant rats received the same doses of BR from the 6th to the 20th gestational day. In late pregnancy, some of the dams were destined for cesarean section and the other females followed the pregnancy until the birth for offspring analysis at 60 days old. Fetuses from cesarean section were evaluated for size, weight, viability and external malformations and also subjected to bone analysis. The reproductive performance of females were performed. The present study showed that integerrimine N-oxide could promote in adult male Wistar rats, body weight gain impairment, interference with blood cell counts and a reducing T cell proliferative; however, no differences in phagocyte activities, lymphocytes phenotyping and immune responses here evaluated were observed. In pregnant rats, BR caused hepatotoxicity, decreased body weight gain and reduced placental size. Fetus analysis showed lower ossification. When 60-days old offspring were it was not observed any toxic effects resulted from BR exposition in body weight gain, lymphoid organs, haematological and biochemical parameters of these rats. It is concluded that low doses of integerrimine N-oxide here employed did not produce marked immunotoxic effects and seems to be a teratogenic signs by both methods, the classical evaluations or by immunoteratological protocols.

O uso de substâncias alucinógenas há muito tempo é alvo de discussões, em virtude do grande número de adeptos que possui e das conseqüências que pode acarretar ao indivíduo e ao complexo contexto social no qual ele se enquadra na sociedade. Dentro desse panorama vem se destacando à utilização de uma bebida denominada ayahuasca, preparada pela infusão de plantas nativas da região da Bacia Amazônia, originariamente utilizada por indígenas em rituais xamânicos. A ayahuasca combina a ação alucinogênica da dimetiltriptamina (DMT), um agonista serotoninérgico de receptores 5-HT2A/2C com β-carbolinas, que são inibidoras da monoaminoxidase-A (MAO-A). Com o aumento do consumo dessa bebida em cerimônias de alguns movimentos sincréticos religiosos do Brasil como o Santo Daime e a União do Vegetal (UDV), recentemente teve seu uso para esse fim regulamentado e aprovado pela legislação brasileira. Nos últimos anos, esses grupos religiosos têm se espalhado na Europa e Estados Unidos, chamando a atenção de pesquisadores internacionais quanto aos efeitos da ayahuasca. Entretanto, relativamente poucas investigações tem sido realizadas, inclusive dos aspectos básicos como os estudos farmacocinéticos de seus princípios ativos em humanos. Da mesma forma, métodos analíticos para determinação dos principais alcalóides na bebida e em amostras biológicas também são escassos na literatura científica. No presente trabalho, será realizado um estudo farmacocinético dos alcalóides da ayahuasca. Para tanto, um método utilizando cromatografia em fase gasosa com detector de nitrogênio-fósforo (GC-NPD) para determinação simultânea de DMT e β-carbolinas em ayahuasca foi desenvolvido e validado. O método para quantificação em plasma é de fundamental importância para determinação das concentrações dos alcalóides nessa matriz e comparação dos níveis no plasma e os efeitos observados nos voluntários que ingeriram a bebida. / The use of hallucinogenic substances has long been a matter of debate, due to the large number of supporters and has consequences that can result in the individual and the complex social context in which it fits into society. In this view has been increasing the use of a drink called ayahuasca, prepared by the infusion of plants native to the Amazon Basin region, originally used by indigenous people in shamanic rituals. Ayahuasca combines the action of hallucinogenic dimethyltryptamine (DMT), a serotonin receptor agonist 5-HT2A/2C with β-carbolines, which are inhibitors of monoamine oxidase A (MAO-A). With the increased consumption of this drink in ceremonies of some syncretic religious movements in Brazil and the Santo Daime and Uniao do Vegetal (UDV), recently had its use for that purpose is regulated and approved by the Brazilian legislation. In recent years, these religious groups have spread in Europe and the United States, calling the attention of international researchers on the effects of ayahuasca. However, relatively little research has been carried out, including the basics such as pharmacokinetic studies of its active compounds in humans. Similarly, analytical methods for determination of major alkaloids in drink and in biological samples are also rare in the literature. In this work, a detailed pharmacokinetic study of ayahuasca alkaloids. Therefore, a method using gas chromatography with nitrogen detector-phosphorus (GC-NPD) for the simultaneous determination of DMT and β-carbolines in ayahuasca was developed and validated. The method for quantification in plasma is of fundamental importance for determining the concentrations of alkaloids in the array and comparing the levels in plasma and the effects observed in volunteers who ingested the drink.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-04-22T11:59:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EspectrometriaRamanUV.pdf: 2381148 bytes, checksum: 8b683a780d3a45cc6d3327997b3f30d9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-06-10T13:11:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EspectrometriaRamanUV.pdf: 2381148 bytes, checksum: 8b683a780d3a45cc6d3327997b3f30d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-10T13:11:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EspectrometriaRamanUV.pdf: 2381148 bytes, checksum: 8b683a780d3a45cc6d3327997b3f30d9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Esta dissertação aborda a análise espectroscópica de algumas estruturas moleculares presentes no tabaco (Nicotiana glauca), matéria-prima do cigarro, e suas interações com a molécula de DNA. De acordo com sua importância, dentre a grande variedade presentes no cigarro, às moléculas estudadas foram as derivadas do ácido nicotínico: ácido nicotínico (niacina/vitamina B3), nicotinamida, trigonelina, nicotina, nornicotina e anabasina. As otimizações dessas estruturas foram inicialmente obtidas no software computacional Hyperchem 8.0, baseadas na teoria da mecânica molecular. Em seguida, elas foram otimizadas, utilizando-se o método de Teoria do Funcional da Densidade, na base B3LYP/ 6-311++G(d,p), simulado no software Gaussian 03. Uma vez as estruturas otimizadas, obtivemos os espectros de absorção UV, Raman, Infravermelho, Dicroísmo Circular e Densidade de Estados para caracterizar as mesmas utilizando método de Teoria do Funcional da Densidade Dependente do Tempo, também simulados no mesmo software. Ao final desse processo, foi também simulado via mecânica molecular, as interações dessas estruturas com a molécula de DNA com o intuito de verificar a potencialidade cancerígena, ou não, dessas substâncias. / This work is about spectroscopic analysis of some molecular structures present in tobacco (Nicotiana glauca), the base for cigarette, and their interactions with the DNA molecule. According to its importance, among the variety present in the cigarette, the molecules studied were derived from nicotinic acid, nicotinic acid (niacin / vitamin B3), nicotinamide, trigonelline, nicotine, nornicotine and anabasine. The optimizations of these structures were initially obtained in the Hyperchem 7.5 computational software based on the theory of molecular mechanics. Then, they were optimized using the method Density Functional Theory, on the basis B3LYP/ 6-311 + + G (d, p), simulated in software Gaussian 03. Once the optimized structures, we obtained the UV absorption, Raman, Infrared, Circular Dichroism and Density of States spectra using Time-Dependent Density Functional Theory also simulated the in the same software. At the end of this process was also simulated, via molecular mechanics, the interactions of these structures with the DNA molecule in order to verify the potential carcinogenic or not these substances.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-12-10T00:12:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoFitoquimicoAtividade.pdf: 2445711 bytes, checksum: 3a6673c71aabe192cc664cb74e214829 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-12-12T14:47:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoFitoquimicoAtividade.pdf: 2445711 bytes, checksum: 3a6673c71aabe192cc664cb74e214829 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-12T14:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoFitoquimicoAtividade.pdf: 2445711 bytes, checksum: 3a6673c71aabe192cc664cb74e214829 (MD5) Previous issue date: 2014 / O presente trabalho descreve a análise fitoquímica e avaliação da atividade antiplasmódica em Plasmodium falciparum (W2) de Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson. O extrato etanólico (EEHS) obtido por percolação do pó das cascas, após concentração, forneceu um precipitado (EEHSP) e um resíduo pastoso que foi submetido a liofilização (EEHS). Fracionou-se este por: re-extração sob refluxo, partição ácido-base e coluna cromatográfica de sílica gel. Além disso, submeteu-se o pó das cascas a extração com ácido clorídrico 1 N para separação de alcalóides. A prospecção fitoquímica, em CCD, foi realizada com EEHS e EEHSP, enquanto que EEHS, frações (FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS e FrMeOH EEHS) e FAHS2 DCM foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a DAD (arranjo de diiodo-CLAE-DAD). FrAcOET EEHS foi fracioanda por coluna cromatográfica fornecendo uma substância isolada (S1). Analisou-se o EEHS, a fração majoritária obtida na coluna cromatográfica (F71), FAHS2 DCM e S1 por cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas (CL-EM). O espectro no infravermelho foi obtido para F71 e S1. A estrutura química de S1 foi definida como sendo o plumierídeo por ressonância magnética nuclear. A avaliação de atividade antiplasmódica foi realizada com EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, FAHS1 DCM, FAHS2 DCM, FAEEHS, FNEEHS, FNHS DCM e S1 pelo método da lactato desidrogenase parasitária (pLDH). Na prospecção fitoquímica, EEHS e EEHSP apresentaram resultados positivos para polifenóis e taninos, saponinas, triterpenos e esteroides, alcaloides e geninas flavônicas. EEHS e frações analisadas por CLAE-DAD mostraram os picos mais intensos sugestivos de iridoides, comprovados por CL-EM de EEHS que mostrou como substância majoritária o iridóide plumierídeo, coerente com o espectro no IV de F71 e S1 que revelou absorções de grupos funcionais presentes em iridóides. Nas análises destas por CL-EM, observou-se um pico a m/z 471 (M+H), atribuído ao íon pseudomolecular do plumierídeo e/ou isoplumierídeo. S1 foi identificada como plumierídeo. Até o presente momento não foi relatada a presença de alcaloides para a espécie, porém nas frações alcaloídicas (FAHS1 DCM, FAHS2 DCM, FAEEHS) e de neutros (FNEEHS e FNHS DCM) em análise por CCD revelada com reagente Dragendorff observaram-se manchas sugestivas de alcalóides, coerente com análise por CLAE-DAD de FAHS2 DCM, a qual mostrou pico majoritário com cromóforo sugestivo de alcaloide β-carbolínico. Em análises por CL-EM de FAHS2 DCM observou-se pico majoritário sugestivo do alcalóide 10-hidroxi-antirina-N-óxido com massa molecular 328 u. Os ensaios de atividade antiplasmódica foram negativos para EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, S1, FAEEHS, FAHS1 DCM, FNEEHS, FNHS DCM e moderadamente ativo (CI50 22,89 μg/mL) para FAHS2 DCM. Estes resultados indicam que a atividade antiplasmódica da planta pode se atribuída aos alcaloides, cuja presença em H. articulatus é descrita pela primeira vez. / The present master thesis describes the phytochemical study and the antiplasmodial activity against Plasmodium falciparum (W2) of Himatanthus articulatus (Vahl) Woodson. The ethanol extract (EEHS) obtained by percolation of the bark powder, gave, after concentration, a precipitate (EEHSP) and a pasty residue that was submitted to lyophilization (EEHS). Fractionation of EEHS was carried out by successively re-extraction with DCM, AcOEt and MeOH under reflux, by acid-base partitioning for separation of alkaloids and by chromatography over silica gel column. Furthermore, the bark powder was extracted with 1 N HCl for the separation of alkaloids. TLC prospection of EEHS and EEHSP was carried out while EEHS, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS and FAHS2 DCM were also analyzed by HPLC - DAD. Column chromatography of FrAcOET EEHS afforded a substance (S1). EEHS, the major fraction obtained in its chromatographic column (F71), DCM FAHS2 and S1 were analysed by UPLC-PDA-MS/ESI. Spectroscopic analyses of S1 (IR, UV, MS/ESI, 1H and 13CNMR) allowed its identification as plumieride. Antiplasmodial activity against P. falciparum (W2) was evaluated for EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, FAHS1 DCM, DCM FAHS2, FAEEHS, FNEEHS, FNHS DCM and S1 by the parasite lactate dehydrogenase (pLDH) method. In the TLC prospection, EEHS and EEHSP showed positive results for polyphenols and tannins, saponins, triterpenes and steroids, alkaloids and flavonoids. EEHS fractions were analyzed by HPLC-DAD showing suggestive peaks of iridoids. Analyses by UPLC-PDA-MS/ESI showed that EEHS contains plumieride as the major substance whose psedomolecular peak was observed at m/z 471 (M + H). S1 was identified as plumeride. Until now it was not reported the presence of alkaloids for the species but spots suggestive of alkaloids were observed on TLC with Dragendorff reagent of FAHS1 DCM, DCM FAHS2, FAEEHS, FNEEHS and FNHS DCM were observed. UV spectra registered online by HPLC-DAD for FAHS2 showed that the major peak is suggestive of a β-carboline alkaloid. UPLC-PDA-MS/ESI analysis of FAHS2 DCM showed an intense peak corresondng to a pseudomolecular ion 329 u that could be possibly attributed to the alkaloid 10-hydroxy-antirine-N-oxide (MM 328 u). The antiplasmodial assays were negative for EEHS, EEHSP, FrDCM EEHS, FrAcOET EEHS, FrMeOH EEHS, S1, FAEEHS, FAHS1 DCM, FNEEHS, FNHS DCM and moderately active (CI50 22,89 μg/mL) for FAHS2 DCM. These results indicate that the antiplasmodial activity might be attributed to the plant alkaloids whose presence in H. articulatus is reported here by the firist time.

Annona hypoglauca Mart. foi coletada em área inundada da Floresta Amazônica, próximo à Manaus (Brasil). Os alcalóides foram obtidos do extrato bruto do caule por partição ácido-base, e a partir do resíduo dessa extração foi realizada a partição com solventes de diferentes polaridades, originando as frações livres de alcalóides. A partir da análise de CG-EM dos alcalóides totais foi possível caracterizar sete alcalóides aporfínicos (actinodafinina, anonaina, glaucina, isoboldina, isodomesticina, nornuciferina e roemerina) e possivelmente duas protoberberinas (esculerina e caseadina). Os alcalóides totais foram fracionados em coluna cromatográfica e posteriormente purificados em placa cromatográfica preparativa permitindo o isolamento de dois alcalóides aporfínicos: actinodafinina e isoboldina. As estruturas desses produtos naturais foram definidos com base em espectros de dados, incluindo 1H RMN, 13C RMN, 13C DEPT e CG-EM. Pela primeira vez a ocorrência da actinodafinina esta sendo reportada em uma espécies de Annona. O extrato bruto, as frações livres de alcalóides, os alcalóides totais e suas frações foram submetidos a avaliação da atividade antibacteriana por microdiluição e atividade citotóxica in vitro frente a células de tumores humanos. Para todos os extratos testados, somente os alcalóides totais e suas frações apresentaram atividade frente a bactérias Gram +. No ensaio de citotoxicidade com linhagens de células de tumores, o extrato bruto foi capaz de inibir o crescimento de todas as linhagens celulares testadas, apresentando efeito letal para a linhagem de Câncer de Cólon (KM-12), enquanto as frações livres de alcalóides demonstraram baixa atividade. Por outro lado, as frações livres de alcalóides apresentaram atividade mais pronunciada para a linhagem de Câncer de Pulmão (NCIH-460) do que os alcalóides. Assim, a atividade citotóxica encontrada no extrato bruto é decorrente do sinergismo ou complementação entre os componentes das frações alcaloídicas e não alcaloídicas, isto é, nenhuma das frações isoladamente é responsável pela atividade observada no extrato bruto. / Annona hypoglauca Mart. was collected in the flooded areas of the Amazonian Forest near Manaus (Brazil). The alkaloids were obtained from the stems crude extract by acid-base partitioning and the remaining alkaloid-free extract was partitioned with organic solvents of different polarity. The GC/MS analysis of the total alkaloids allowed the identification of seven aporphine alkaloids (actinophanine, anonaine, glaucine, isoboldine, isodomesticine, nornuciferine and roemerine) and possibly two proberberine alkaloids (scoulerine and caseadine). The total alkaloids were fractionated by column chromatography and further purified by preparative thin-layer chromatography allowing the isolation of two aporphine alkaloids: actinodaphnine and isoboldine. The structures of these natural products were defined based on their spectral data, including 1H NMR, 13C NMR, 13C DEPT and CG/MS. This is the first report for the occurrence of actinodaphnine in Annona species. The crude extract, alkaloid-free organic extracts, total alkaloids and its fractions were tested for their antibacterial activity by the microdilution broth assay and cytotoxic activity against in vitro tissue culture cells of human. From all the extracts assayed, only the total alkaloids and their fractions showed a relevant antibacterial activity against Gram positive organisms. In the cytotoxicity assay with human tumor cell lines, the crude extract was able to inhibit the growth of all cell lines tested, with a lethal effect for the colon cancer (KM-12) cell line. The evaluation of this activity with the total alkaloid and alkaloid-free fractions indicated selectivity for the different cellular lines. The alkaloid fraction presented high growth inhibition for the colon cancer cell line (KM-12), while the alkaloid-free fractions displayed lower activity. On the other hand, the alkaloid free fractions showed a higher activity for the lung cancer cell line (NCIH-460) than the total alkaloids. Thus, the cytotoxic activity found in the crude extract is the result of the synergism or complementary activity among the components of the alkaloid and alkaloid-free fractions, e.g, none of the fractions separately is responsible for the activity observed in the crude extract.

As espécies Aspidosperma polyneuron Muell. Arg. e Aspidosperma cylindrocarpon Muell. Arg. pertencentes à família Apocynaceae, de ocorrência natural no estado de São Paulo, foram objeto de investigação química e estabelecimento de culturas in vitro. Como não havia relatos da composição dos alcalóides presentes nas folhas de ambas as espécies, nossos estudos foram concentrados nessa parte do vegetal. Adicionalmente, foi analisado a composição dos óleos voláteis destas espécies. Como são descritas diversas atividades biológicas para os alcaloides indólicos, foram analisados as atividades antitumoral, antimicrobiana e antimalárica dos extratos de alcalóides totais. Os alcalóides das folhas de A. polyneuron foram obtidos através de partição ácido-base com solventes orgânicos e foram isolados por técnicas cromatográficas de adsorção, sendo analisadas por CG/MS. Na espécie A. polyneuron foram identificados 5 alcalóides indólicos do tipo aspidospermatano: aspidospermina, desmetil-aspidospermina, desmetóxi-aspidospermina, cilindrocarina e pirifolidina. O estudo químico das folhas de A. cylindrocarpon, através de técnicas cromatográficas e CG/MS permitiu a identificação de alcalóides indólico do tipo aspidospermatano (aspidospermina, N-benzoíl-cilindrocarina, N-benzoíl-20-hidróxi-cilindrocarina, N-cinamoíl-20-hidróxi-cilindrocarina) do tipo erbunano (16-epi-vincamina) e do tipo hetero-ioimbano (tetra-hidro-alstonina). Os óleos voláteis foram obtidos das folhas por destilação por arraste a vapor. O óleo de A. polyneuron apresentou um constituinte majoritário, o diterpeno caureno (73,7%), e aldeídos de cadeia longa. No óleo volátil das folhas de A cylindrocarpon foram identificados 25 constituintes que correspondem a 96,1 % do óleo bruto. Principalmente sesquiterpenos hidrocarbonados (germacreno-D, β-cariofileno) e sesquiterpenos oxigenados (espatulenol, epi-globulol e globulol), além de monoterpenos hidrocarbonados (α-pineno) e oxigenado (linalol) e aldeídos de cadeia longa. Na cultura de células in vitro de A. polyneuron, foi possível apenas a indução de calos friávies. A cultura de células da A. cylindrocarpon foi estabelecida desde as células não diferenciadas. Dos calos até as suspensões celulares. As culturas apresentram fase lag com aproximadamente 4 dias, seguida de uma fase de crescimento exponencial e de uma fase com crescimento linear, com duração de 15 dias. Após essa fase as células entram numa fase estacionária de crescimento. Nos ensaios de autobiografia para determinação da atividade antifúngica frente aos fungos Clasdosporium cladosporiodes e Clasdosporium sphaerospermum, ambos extratos de alcalóides totais apresentaram respostas positivas. A atividade antimalárica foi avaliada em cepas mutantes de Saccharomyces cerevisiae deficientes em sistema de reparo do DNA (RS321, Rad 52Y). Neste ensaio, apenas os alcalóides das folhas de A. cylindrocarpon apresentaram atividade. A atividade antitumoral foi determinada in vitro com isolados de Plasmodium falciparum sensíveis a cloroquina (K1) e resistentes (Palo Alto). Como havia relato dessa atividade para A. polyneuron foram feitos testes apenas para A. cylindrocarpon (folhas e ramos). Os extratos alcaloídicos apresentaram uma forte inibição do desenvolvimento dos parasitas. A Cl50 para o isolado K1 foi de 9,0µg/ml para os ramos e folhas 8,0µg/ml e para o isolado Palo Alto, ramos foi de 13,3µg/ml e folhas 10,5µg/ml. / Aspidosperma polyneuron Muell. Arg. and Aspidosperma cylindrocarpon Muell. Arg. belong to Apocynaceae and naturally occur in São Paulo State (Brazil). Both species were chemically investigated and in vitro cultures established. As there were no previous studies concerning the alkaloid composition from the leaves, our studies were focused on this plant part. Moreover, the volatile oil composition was determined for both species. As several biological activities have been described for indole alkaloids, the antimicrobial, antitumor and antimalarial activities were assayed for the total alkaloids. The leaf alkaloids were extracted by acid/base partitioning with organic solvents and isolated by adsorption chromatography techniques. The isolated alkaloids were analysed by GC-MS. A. polyneuron leaves afforded 5 aspidospermatane alkaloids: aspidospermine, demethoxy-aspidospermine, demethylaspidospermine cylindrocarine and pyrifolidine. In A. cylindrocarpon leaves different indole alkaloid skeletons were identified, 4 aspidospermatanes (aspidospermine, N-benzoyl-cylindrocarine, N-benzoyl-20-hydroxy-cylindrocarine, N-cynamoyl-20-hydroxy-cylindrocarine), 1 eburnane (16-epi-vincamine) and 1 heteroyohimbane (tetrahydroalstonine). The volatile oils were extracted from the leaves by steam distillation. A. polyneuron oil consisted of one single major compound, the diterpene kaurene (73,7%), and several long chain aldehydes. On the other hand, from the A. cylindrocarpon oil 25 constituents could be identified corresponding to 96.1 % of the crude oil. The major components were sesquiterpene hydrocarbons (germacreno-D, β-caryophyllene), oxygenated sesquiterpenes (spathulenol, epi-globulol, globulol), a monoterpene hydrocarbon (α-pinene), an oxygenated monoterpene (linalool) and also several long chain aldehydes. For A. polyneuron, callus cultures were induced, while for A. cylindrocarpon was also possible the establishment of cell suspension cultures. A. cylindrocarpon cell suspension cultures showed a lag phase of growth for approximately 4 days. The lag phase was followed by a growth phase for 15 days. After 20 days of culture the cells showed a stationary growth. Alkaloid extract from both species showed a antifungal activity in the bioautography assay with Clasdosporium cladosporiodes and C. sphaerospermum. The antitumor activity was evaluated with mutant Saccharomyces cerevisiae strains deficient in the DNA repair system (RS321 and Rad 52Y). In this assay, only the leaf alkaloids of A. cylindrocarpon presented activity. In vitro antimalarial assay were performed with Plasmodium falciparum chloroquine sensitive (K1) and resistant (Palo Alto). As such an activity was previously reported for A. polyneuron, only A. cylindrocarpon alkaloid extracts from leaves and stems were tested. Both alkaloid extracts showed strong inhibition of the parasite development. The IC50 for the K1 isolate were 9.0 µg/ml for the leaves and 8,0 µg/ml for the stems. The Palo Alto isolated presented a higher IC50, 13,3 µg/ml stems and 10,5 µg/ml.

NOGUEIRA, Patricia Coelho do Nascimento. Estudo Cromatográfico, Espectroscópico e Farmacológico de Alcaloides Plumeranos das Sementes de Aspidosperma pyrifolium Mart. 2014. 256 f. Tese (Doutorado em química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-06-02T20:02:37Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_pcnnogueira.pdf: 13006113 bytes, checksum: bbaa4da45dd7ef891d626003196bbfe3 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-20T20:05:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_pcnnogueira.pdf: 13006113 bytes, checksum: bbaa4da45dd7ef891d626003196bbfe3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T20:05:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_pcnnogueira.pdf: 13006113 bytes, checksum: bbaa4da45dd7ef891d626003196bbfe3 (MD5) Previous issue date: 2014 / This work reports the phytochemical analysis from seeds of Aspidosperma pyrifolium (Apocynaceae), describing the isolation and the structural characterization of a unknown alkaloid with a rearranged plumeran skeleton, the (-)-(3S,7S,21R)-rel-(3αH)-15(14→3)-abeo-2,16,17,20,6,7-hexahydro-15H,8aH,16a,20a-ethano-1H-indolizino[3,1-cd]carbazole, in addition to eleven known compounds, six plumeran alkaloids identified as aspidospermine, demethoxyaspidospermine, pirifoline, 15-demethoxypirifoline, aspidofractinine and N-acetylaspidofractinine; a tetrahydro-β-carboline alkaloid, the N-methylakuammidine; the glycosides of two iridoids, loganic acid and loganin; a salycilic acid derivative, 2-hydroxy-3-O--D-glucopyranosylbenzoic acid; and a methyl inositol derivative, the 2-O-methyl-L-chiro-inositol. The compounds were isolated by chromatographic techniques, especially High Performance Liquid Chromatography, and their structures were characterized by 1D and 2D NMR spectroscopy, FT-IR and HRESIMS, and comparison with data from literature. Altough already reported in the literature, five compounds are being reported for the first time for the species, and one is being reported from a natural source. The NMR data, and the correspondent assignments of some alkaloids already reported in the literature, together with a bibliographic survey (from 1973-2013) of the 13C NMR data of plumeran alkaloids isolated from the Apocynaceae family, are presented in this work. The residual aqueous fraction of the liquid-liquid partition of the ethanol extract from seeds of A. pyrifolium, source of most compounds isolated, showed antinociceptive and anti-inflammatory activities in the formalin test, abdominal writhing induced by acetic acid, and paw edema induced by carrageenan. / Este trabalho relata o estudo fitoquímico das sementes de Aspidosperma pyrifolium (Apocinaceae), descrevendo o isolamento e a determinação estrutural de um alcaloide inédito com esqueleto plumerano rearranjado, o (-)-(3S,7S,21R)-rel-(3αH)-15(14→3)-abeo-2,16,17,20,6,7-hexahidro-15H,8aH,16a,20a-etano-1H-indolizino[3,1-cd]carbazol, além de onze compostos conhecidos, seis alcaloides plumeranos identificados como aspidospermina, desmetoxiaspidospermina, pirifolina, 15-desmetoxipirifolina, aspidofractinina e N-acetilaspidofractinina; um alcaloide tetra-hidro-β-carbolínico, a N-metilacuamidina; dois iridoides glicosilados, ácido logânico e loganina; um derivado do ácido salicílico, o ácido 2-hidróxi-3-O-β-D-glicopiranosilbenzóico; e um derivado metilado do inositol, o 2-O-metil-L-quiro-inositol. Os compostos foram isolados por técnicas cromatográficas, principalmente a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, e suas estruturas foram determinadas através de análises por RMN, uni e bidimensionais, IV e EMAR, além da comparação com dados da literatura. Apesar de já descritos na literatura, cinco compostos são relatados pela primeira vez para a espécie, e um está sendo relatado pela primeira vez como produto natural, de origem vegetal. A revisão dos dados de RMN da literatura de alguns alcaloides isolados, e as correspondentes correlações estruturais, juntamente com um levantamento bibliográfico (de 1973 a 2013) dos dados de RMN 13C de alcaloides plumeranos isolados da família Apocinaceae, também são descritos neste trabalho. A fração aquosa resultante da partição líquido-líquido do extrato etanólico das sementes de A. pyrifolium, fonte da maioria dos compostos isolados, apresentou atividades antinociceptiva e anti-inflamatória nos testes de formalina, contorção abdominal induzida pelo ácido acético e edema de pata por carragenina.

Native species of the flora from South Brazil are the aim of the research of the Núcleo de Pesquisa de Produtos Naturais of Federal University of Santa Maria, Brazil. One of the most studied families is the Sterculiaceae and, in that family, there is the Waltheria douradinha Saint Hilaire specie, study purpose of this master degree work. W. douradinha, popularly known as douradinha do campo , is used to treat lung infections, cystitis, chronic ulcer and to wash syphilitic wounds. Secondary metabolites isolated from the bark of the roots from this specie, among the amide (O)-metiltembamide, three known quinolone alkaloids, Antidesmone, Waltherione-A and Waltherione-B, two cyclopeptide alkaloids also known, Waltherine-A and Chamaedrine, and a new quinolone alkaloid VG8. The structures of these substances are determined, principally, by spectroscopics methods, like Nuclear Magnetic Resonance 1H and 13 C (COSY, HMQC e HMBC), mass spectrometry and by the comparison with melting point and literature data. The alkaloids Waltherione-A (WA) and Waltherione-B (WB) are crystallized and analyzed by X-Ray Diffraction to determine their relative stereochemistries. The extracts obtained from several parts of W. douradinha, the fractions obtained from the division of the crude extract of the root and the pure alkaloids, Waltherine-A, VG8, WA, WB and their derivatives were submitted to microbiologic assays (fungus and Gram-positive and Gram-negative bacteria) by bioautography method and by Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The alkaloid VG8 was the most active upon the tested microorganisms, with a positive result of inhibition with 0.5 μg by bioautography assay and with 50 μg mL-1 by MIC assay. / Espécies nativas da flora do Sul do Brasil são alvo de pesquisa do Núcleo de Pesquisa de Produtos Naturais da Universidade Federal de Santa Maria. Uma das famílias mais estudadas é a Sterculiaceae e, dentro desta, encontra-se a espécie Waltheria douradinha Saint Hilaire, objetivo de estudo deste trabalho de mestrado. W. douradinha, conhecida popularmente como douradinha do campo , é utilizada no tratamento de afecções pulmonares, cistite, úlceras crônicas e também para lavar feridas de origem sifilítica. Metabólitos secundários foram isolados da casca da raiz desta espécie, dentre eles a amida (O)-metiltembamida, três alcalóides quinolônicos já conhecidos, Antidesmona, Waltheriona-A e Waltheriona-B, dois alcalóides ciclopeptídicos também já conhecidos, Waltherina-A e Chamaedrina, e um novo alcalóide quinolônico VG8. As estruturas destas substâncias foram determinadas, principalmente, por métodos espectroscópicos, como Ressonância Magnética Nuclear 1H e 13 C (COSY, HMQC e HMBC), espectrometria de massas e através da comparação dos dados obtidos a partir do ponto de fusão e dados da literatura. Os alcalóides Waltheriona-A (WA) e Waltheriona-B (WB) foram cristalizados e analisados por Difração de Raios-X a fim de se confirmar suas estereoquímicas relativas. Os extratos obtidos das várias partes da espécie, as frações obtidas do particionamento do extrato bruto da raiz do material vegetal e os alcalóides puros, Waltherina-A, VG8, WA, WB e seus derivados foram submetidos a ensaios Waltheria douradinha, alcalóides quinolônicos e ciclopeptídicos, atividade antimicrobiana.