O gênero Psychotria destaca-se na família RUBIACEAE pela produção de alcalóides bioativos e por sua taxonomia complexa, sendo muitas vezes relacionado aos gêneros Palicourea, Cephaelis, Calycodendron e Calycosia. A divisão de Psychotria nos subgêneros Psychotria, Tetramerae e Heteropsychotria foi proposta com o objetivo de auxiliar a classificação quimiotaxonômica do gênero. Estudos demonstram que o subgênero Psychotria (espécies pantropicais) produz alcalóides poliméricos, formados por duas ou mais unidades de triptamina; enquanto o subgênero Heteropsychotria parece estar envolvido com a produção de alcalóides indol monoterpênicos, de acordo com pesquisas realizadas com diferentes espécies coletadas no Sul do Brasil. O isolamento e purificação dos alcalóides estrictosamida, ácido estrictosidínico e miriantosina, a partir de Psychotria myriantha, corroboram com esta hipótese, permitindo a inclusão da espécie no subgênero Heteropsychotria. A literatura descreve várias atividades para extratos e alcalóides isolados de espécies de Psychotria, como antimicrobiana e analgésica, por exemplo. Neste trabalho, o extrato n-butanólico de alcalóides de P. myriantha, além de seus alcalóides isolados, apresentaram atividade inibidora da migração de leucócitos, sugerindo um efeito antiinflamatório, e capacidade de inibir a ação da enzima acetilcolinesterase. Extratos e alcalóides isolados da espécie foram avaliados quanto à atividade antioxidante em CCD, frente ao DPPH, apresentando resultado negativo. O extrato EBA e o alcalóide ácido estrictosidínico aumentaram o tempo de latência no teste da retirada da cauda frente ao estímulo térmico, indicando uma atividade analgésica do tipo opióide. A influência do ácido estrictosidínico, alcalóide isolado em maior quantidade em massa, sobre os níveis de DA, DOPAC, 3-MT, HVA, 5-HT e 5-HIAA em estruturas cerebrais de ratos foi verificada. Hipocampos de animais que receberam injeção intra-hipocampal bilateral de ácido estrictosidínico (20 μg/μL) apresentaram redução de 83,4 % nos níveis de serotonina, em comparação ao grupo controle, enquanto os córtices desses animais apresentaram redução nos níveis de DOPAC (35,9%), 3-MT (24,7%) e 5-HIAA (9%). Hipocampos e estriados de ratos tratados com injeção i.p. de ácido estrictosidínico (10 mg/kg) demonstraram diminuição de 63,4 e 28,7% nos níveis de 5-HT, respectivamente. As alterações nos níveis de aminas biogênicas nas estruturas avaliadas, além das atividades analgésica e inibidora da acetilcolinesterase, indicam que P. myriantha e espécies do subgênero Heteropsychotria constituem uma potencial fonte de substâncias bioativas no tratamento de distúrbios do sistema nervoso central. / Psychotria genus is an important in RUBIACEAE due to bioactive alkaloids production and complex taxonomy, being related to Palicourea, Cephaelis, Calycodendron and Calycosia genera. The division of Psychotria in Psychotria, Tetramerae and Heteropsychotria subgenera was proposed with the aim of aiding the genus chemotaxonomic classification. Studies demonstrate that Psychotria subgenus produce polyindoline alkaloids formed by two or more triptamine units; whereas Heteropsychotria subgenus seems to be involved with indole monoterpene alkaloids production, according to researches with different species collected in Southern Brazil. Isolation and purification of strictosamide, strictosidinic acid and miriantosine from Psychotria myriantha corroborated this hypothesis, allowing its inclusion into Heteropsychotria subgenus. The scientific literature describes several activities to Psychotria extracts and alkaloids, such as antimicrobial and analgesic, for example. In this work, P. myriantha n-butanolic alkaloid extract and isolated compounds inhibited the leukocyte migration, suggesting an antiinflammatory activity, and a weak ability to inhibit the action of acetylcholinesterase enzyme. Alkaloids and extracts from P. myriantha were evaluated as regards their antioxidant activity using DPPH, with no positive results. EBA and strictosidinic acid increased the latency in the tail flick model, indicating an opioid analgesic activity. The influence of strictosidinic acid on the levels of DA, DOPAC, 3-MT, HVA, 5-HT and 5-HIAA in brain structures of rats was verified. Hippocampus with intra-hippocampal injection of strictosidinic acid (20 μg/μL) displayed a decrease of 83.4% in serotonin levels, in comparison with control group; whereas the cortex showed a decrease in the levels of DOPAC (35.9%), 3-MT (24.7%) and 5-HIAA (9%). Hippocampus and striatum that received intraperitoneal injection of strictosidinic acid (10 mg/kg) showed 5-HT levels reduction of 63.4 e 28.7%, respectively. The biogenic amine levels alterations in the studied structures, associated with the analgesic and acetylcholinesterase inhibitor activities, suggest that P. myriantha and species from the Heteropsychotria subgenus constitute a font of bioactive compounds in the treatment of central nervous system disturbs.

Uncaria tomentosa (Willd) DC. é uma liana tropical nativa da Amazônia brasileira e peruana. A espécie é reconhecida pelas suas propriedades antiinflamatória imunoestimulante, antiviral e antitumoral, geralmente atribuídas aos polifenóis e, principalmente, à fração de alcaloides oxindólicos pentacíclicos. No âmbito tecnológico, visando o desenvolvimento de produtos derivados com maior valor agregado, são poucos os subsídios encontrados na literatura científica, afora alguns relatos atrelados a patentes e registros de produtos. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou a obtenção e caracterização de frações enriquecidas de alcaloides, saponinas e polifenóis a partir das cascas de U. tomentosa, mediante o emprego de técnicas de separação em fase sólida e de métodos analíticos validados. A matéria prima foi extraída por maceração em EtOH a 40%, por quatro dias. Depois de filtrado e concentrado, o extrato bruto foi liofilizado (EBL). Para fins analíticos, o EBL foi reconstituído em EtOH a 40% e caracterizado quanto a presença de alcaloides oxindólicos, saponinas triterpênicas e polifenóis. Os quatro principais picos relativos aos alcaloides oxindólicos presentes no EBL foram quantificados por CLAE-UV e o teor total, expresso em mitrafilina, foi de 1,48 g%. Os principais picos atribuídos às saponinas foram analisados por CLAE-DAD e o teor total, expresso em α-hederina, foi de 18,37 g%. O teor de polifenóis totais, determinado pelo método colorimétrico de Folin-Ciocalteu, foi estimado em 31,93 g%. Para a separação da fração polifenólica, o emprego de PVPP mostrou ser mais eficiente do que bentonita, carvão ativado ou caseína. A fração enriquecida de alcaloides oxindólicos foi obtida por separação em resina fortemente aniônica. O teor de alcaloides totais corresponde por cerca de 90% (m/m) desta fração. A fração de saponinas triterpênicas foi obtida mediante separação em resina fortemente catiônica, com teor aproximado de 78% (m/m), considerando o somatório das áreas dos picos de interesse. A proposta de uma técnica comparativa, fazendo uso de resina hidrofóbica, resultou em uma fração saponosídica enriquecida com um rendimento superior, porém com um menor teor de saponinas totais, em torno de 75% (m/m). / Uncaria tomentosa is a tropical liana native form Brazilian and Peruvian rain forests. The specie is recognized by its immune stimulant, anti-viral, anti- inflammatory and anti-cancer properties often attributed to the polyphenolic fraction and manly to the peculiar pentaciclic oxindole alkaloidal fraction. On the technological field, aiming the transformation of the raw material into standardized and high aggregate value products a few efforts can be encountered in the literature, excepting a couple of patents and product registration related information. In this context the present work aimed to the obtainment and characterization of enriched fractions of alkaloids, saponins and polyphenols from the stem barks of U. tomentosa, through solid phase separations techniques and validated analytical methods. The raw material extraction was extracted by a four days maceration in a 40% hydroethanolic solution. After the filtration and concentration, the crude extract was lyophilized (EBL). For analytical purposes the EBL was resuspended in a 40% hydroethanolic solution and characterized for the presence of oxindole alkaloids, triterpenic saponins and polyphenols. The four main peaks attributed to the oxindole alkaloids in EBL were quantified by UV-HPLC and the total content, expressed as mitraphiline, was about 1.48 g%. The main peaks attributed to the saponins were analysed by DAD-HPLC and the total content, expressed as α-hederin, was about 18.37 g%. The total polyphenolic content, determined by the Folin-Ciocalteu colorimetric assay, was estimated at 31.93 g%. For the polyphenols separation the use of PVPP showed to be more efficient than bentonite, active carbon or casein treatment. The enriched fractions of the oxindole alkaloids was obtained through a strongly anionic resin separation. The total alkaloid content of this fraction was about 90% (w/w). The saponin enriched fraction was obtained through a strongly cationic resin separation and the total saponin content was about 78% (w/w). The suggestion of a comparative technique employing a hydrophobic resin resulted on a saponosidic enriched fraction with higher yield but a lower saponin content of about 75% (w/w).

No presente trabalho desenvolveu-se uma rota sintética em fase sólida para obter de forma rápida o esqueleto da hiacintacina 110 utilizando-se L-Boc-prolina 101 como bloco de construção. Não há relatos na literatura, até o momento, do uso da Lprolina como material de partida para a síntese de núcleos pirrolizidínicos, entretanto o estudo desta rota é uma alternativa interessante porque possibilita a síntese destes biciclos em apenas 4 etapas. A síntese iniciou com o acoplamento entre a L-Bocprolina 101 e a resina Merifield 41 em condições clássicas. Após a retirada do grupamento protetor com ácido cloridríco por 40 minutos em temperatura ambiente, procedeu-se à adição de Michael do produto 103 ao propiolato de etila 116 gerando o enaminodiéster 104. Na última etapa usou-se DBU sob irradição de microondas por 10 minutos, obtendo-se o azabiciclo 110 com redimento de 37%. Em solução, através da adição de Michael entre a L-prolina O-protegida 95 e alcinos e alceno ativados obtevese adutos cuja estereoquímica das olefinas foi sempre E, com bons rendimentos (60- 95%). Os enaminodiésteres 97 e 118 foram facilmente convertidos nos seus correspondentes aminodiésteres 124 e 126 com NaBH(OAc)3 com redimento de 65%. Na etapa da ciclização de Dieckmann obteve-se sucesso utilizando Na/THF/3h sob refluxo gerando o azabiciclo[3.3.0]octano desejado com rendimento de 50-60%. Os análogos das hiacintacinas foram sintetizados a partir da redução dos produtos 109, 132 e 133 com LiAlH4/THF e rendimentos de 52%. Os produtos 109, 132, 133, 135, 136 e 137 foram testados para atividades antiparasitárias e apresentaram bons resultados para a ação carrapaticida com doses até 0,625μg/ml em ovos e 1,25μg/ml em larvas. / We present here an original solid-phase approach to synthesize rapidly the hyacinthacine core 110 using L-proline N-Boc 101 as building block. There is no reference in the literature wich uses L-proline as building block to synthesize this pirrolizidine skeleton. The study of this possibility would be extremely interesting because it could be used to prepare structural systems related to hyacinthacine in only four steps. The synthesis initiates with the coupling of L-Boc-proline 101 to Merrifield resin 41 under classical conditions. The protection group was removed with hidrogen chloride and the Michael addition was proveeded with adduct 103 and ethyl propiolate 116, afording 104 in satisfactory yields. At least, the azabicycle 110 was obtained by reacting 98 using DBU as catalyst at MW irradiation for 10 min, in good yields (37 %). In solution, we have proceed to Michael addition of L-proline O-protected 95 to activated alkynoates/alkenes conducing to aducts where the stereochemistry of the olefins was always E, with excellent yield (60-95%). Enaminoesters 97 and 118 could be easily converted into the corresponding aminodiesters 124 and 126 by NaBH(OAc)3 in 65% yield. In the step of the Diekmann cyclization of aminodiesters the sistem Na/THF/3h at reflux afforded the derived azabicyclo[3.3.0]octanes in 50- 60% yield. The analogs of the hyacinthacines were synthesized with reduction of 109, 132 and 133 with LiAlH4/THF in 52% yield with the stereochemistry to be determined. The products 109, 132, 133, 135, 136 and 137 were tested for parasitic activity and showed good results. Compounds 109, 132, 135 and 136 killed 100% of the larvae at the concentrations of 5 μg/ml and 2.5 μg/ml being not toxic at the lower concentrations. Compounds 133 and 137 were more toxic being lethal to the larvae at concentrations of 1.25 μg/ml but did not case death at the lower concentrations.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao tiago oliveira.pdf: 60590 bytes, checksum: 2becac23a5f99abe922b4af561c0a7d1 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / In the last years the treatment with medicines made from medicinal plants has increased. A concern about the useful of these natural products is the quality control pharmacobotanical, phytochemical and purity tests, which make up the technical specifications of a particular plant species. Moreover, pharmacological and toxicological studies must be conducted in order to effectiveness and safety. This study aimed to carry out the assessment pharmacognostic, acute toxicity and evaluation of antimicrobial and leishmanicidal of the ethanol extract of the leaves, fruit, stem bark and root bark of R. elaeocarpum Reissek. Samples of R. elaeocarpum were collected in the municipality of Campestre-GO, a description of the macroscopic aspects of the leaves, stem bark and root bark was carried to the naked eye by observing the macroscopic general of vegetal drugs; the microscopical analysis was performed by observing the histological stained. The qualitative analysis of the major classes of secondary metabolites present in the sprayed sample. The tests for water content, total ashes and acid insoluble ashes had been carried through according to the brazilian pharmacopoeia IV. The rude ethanol extract was obtained by maceration and the fractions were obtained by partition, liquid-liquid, successive with hexane, dichloromethane and ethyl acetate. Minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by agar dilution. The procedure was performed according to NCCLS standards 2004 (M7-A7). The evaluation of acute toxicity of ethanol extracts had reference to the Guidelines of 423 Organization for Economic Co-Operation and Development (OECD). The leishmanicidal activity was tested for the promastigotes forms of Leishmania (L) chagasi. Most of the morphological and anatomical characteristics observed are consistent with the typical family. In phytochemical screening of leaf, root bark, stem bark and fruit of R. elaeocarpum verified the presence of flavonoids and alkaloids. It was also the presence of heterosides saponins and tannins in leaf, root bark, stem bark and is absent in the fruit. The extracts and fractions that had obtained the lowest value of minimum inhibitory concentration (0,390 mg.mL-1) against microorganisms tested showed moderate inhibitory activity. None of the extracts and fractions showed good inhibitory activity. As is said about the toxicological research, throughout the period of observation of animals during the evaluation of acute toxicity was not death. Through behavioral observations made through the hippocratic screening is assigned a zero score for all evaluated items. The necropsy of the animals did not evidence any macroscopic alterations to justify the histopathology of the organs (kidney, spleen and liver) selected for analysis. This study demonstrated that the use of rude extract and fractions of leaves of R. elaeocarpum induced death of promastigotes forms of L. (L) chagasi in vitro. The presented results open perspectives for the future isolation, purification and identification of bioactive substances of R. elaeocarpum / Nos últimos anos o tratamento com medicamentos à base de plantas medicinais tem aumentado. Uma preocupação em relação à utilização desses produtos naturais consiste no controle de qualidade farmacobotânico, fitoquímico e ensaios de pureza, que compõem as especificações técnicas de uma determinada espécie vegetal. Além disso, estudos farmacológicos e toxicológicos devem ser realizados, visando a sua eficácia e segurança. Este trabalho teve por objetivo realizar a avaliação farmacognóstica, toxicidade aguda e avaliação das atividades antimicrobiana e leishmanicida do extrato etanólico das folhas, frutos, cascas do caule e cascas da raiz de R. elaeocarpum Reissek. Amostras da R. elaeocarpum foram coletadas no município de Campestre-GO, a descrição dos aspectos macroscópicos das folhas, casca do caule e casca da raiz foi realizada à vista desarmada observando as características macroscópicas gerais de drogas vegetais; a análise microscópica foi realizada através da observação de cortes histológicos submetidos à coloração. A análise qualitativa das principais classes de metabólitos secundários presentes foi realizada na amostra pulverizada. Os ensaios para determinação do teor de água, cinzas totais e cinzas insolúveis em ácido foram realizados segundo a Farmacopéia Brasileira IV. O extrato etanólico bruto foi obtido por maceração e as frações foram obtidas por partições, líquido-líquido, sucessivas com hexano, diclorometano e acetato de etila. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pelo método de diluição em ágar. O procedimento foi realizado segundo normas do NCCLS 2004 (M7-A7). A avaliação da toxicidade aguda dos extratos etanólico brutos teve como referência as Diretrizes 423 da Organisation for Economic Co-Operation and Development (OECD). A atividade leishmanicida foi testada para as formas promastigotas de Leishmania (L) chagasi. A maior parte das características morfoanatômicas observadas está de acordo com o padrão típico da família. Na prospecção fitoquímica da folha, cascas da raiz, cascas do caule e fruto de R. elaeocarpum verificou-se a presença de flavonóides e alcalóides. Verificou-se, também, a presença de heterosídeos saponínicos e taninos na folha, cascas da raiz, cascas do caule sendo ausente no fruto. Os extratos e as frações que obtiveram o menor valor de Concentração Inibitória Mínima (0,390 mg.mL-1) frente aos microrganismos testados apresentaram atividade inibitória moderada. Nenhum dos extratos e frações apresentou boa atividade inibitória. No que se diz a respeito à investigação toxicológica, durante todo o período de observação dos animais durante a avaliação de toxicidade aguda não ocorreu morte. Através das observações comportamentais feitas por meio do screening hipocrático atribuiu-se pontuação zero para todos os itens avaliados. A necropsia dos animais não evidenciou nenhuma alteração macroscópica que justificasse o estudo histopatológico dos órgãos (rins, baço e fígado) selecionados para análise. Neste estudo foi demonstrado ainda que a utilização do extrato bruto e as frações de folhas de R. elaeocarpum induziu a morte das formas promastigotas de L. (L) chagasi in vitro. Os resultados apresentados abrem perspectivas para o futuro isolamento, purificação e identificação das substâncias bioativas de R. elaeocarpum

Pilocarpus pennatifolius Lemmaire (Rutaceae) é uma espécie nativa que ocorre nas regiões Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do Brasil, e é popularmente conhecida por jaborandi. Essa e outras espécies de Pilocarpus encontram-se em risco de extinção devido ao extrativismo (uso como planta medicinal) e ao desmatamento. O cultivo in vitro de P. pennatifolius foi realizado como uma alternativa para a produção de pilocarpina (princípio ativo do jaborandi). A cultura de células foi obtida em meio MS semi-sólido, suplementado com sacarose, como fonte de carbono, e tendo como reguladores de crescimento BAP, IAA e NAA. O tempo de duplicação da cultura de calos foi de 22 dias. A concentração do alcalóide, determinada por técnicas cromatográficas, foi de aproximadamente 0,1 µg/ mg de biomassa. Os ensaios enzimáticos referentes à biossíntese da pilocarpina tiveram como objetivo elucidar a etapa inicial de formação do anel imidazólico, além da localização desta reação na planta. Os experimentos realizados indicaram a presença da enzima histidina amino-transferase (HAT, EC 2.6.1.38) cuja atividade catalítica foi de 46,09 nKat/ mg de proteína, apenas no extrato protéico das raízes de P. pennatifolius. A determinação da composição do óleo essencial por CG e CG/EM indicou como constituintes majoritários os hidrocarbonetos tridecano (56,8 %) e pentadecano (25,5 %). Os sesquiterpenos não oxigenados constituíram cerca de 15 % do óleo obtido. / Pilocarpus pennatifolius Lemmaire (Rutaceae) is a native Brazilian species which is commonly known as jaborandi. This species is endangered due to its exploitation as medicinal plant and the increasingly deforestation. A callus culture of P. pennatifolius was established as an alternative source for pilocarpine production (the active compound of jaborandi). The cell culture was obtained in a semi-solid media, supplemented with sucrose as carbon source and as growth regulators, BAP, IAA e NAA. The doubling time for the callus culture was determined as 22 days. The concentration of the alkaloid, obtained by chromatographic techniques was ca. 0.1 µg/ mg dry weight. The enzymatic assays related to pilocarpine biosynthesis were carried out with the aim to elucidate the imidazole ring formation beyond identify the site were this reaction takes place. The results indicated the presence of the enzyme histidine ammonia transferase (HAT, EC 2.6.1.38) only in the protein extract obtained from the roots of P. pennatifolius. The catalytic activity for this enzyme was 46.09 nKat/ mg protein. Volatile constituents from the leaves were analyzed by GC and GC/MS and the major compounds were determined as the hydrocarbons tridecane (56.8 %) and pentadecane (25.5 %). Almost 15 % of the total composition was constituted of non-oxygenated sesquiterpenes.

Os sais derivados de alcalóides da Cinchona têm sido muito utilizados como catalisadores de transferência de fase, em reações assimétricas. No entanto, sua performance como agentes de discriminação quiral tem sido pouco explorada. Com o objetivo de melhor compreender as bases moleculares que comandam o reconhecimento quiral dos isômeros ópticos de compostos carbonílicos e carboxílicos, quando em mistura com a quinina ou com sais de alcalóides da Cinchona, foi realizada uma série de experimentos, utilizando a técnica da RMN de 1H. A atribuição dos deslocamentos químicos aos solvatos de cada enantiômero foi feita pelo registro do espectro de RMN de 1H de misturas dos agentes de discriminação quiral com amostras enantiopuras ou enantiomericamente enriquecidas dos substratos. A estabilidade relativa dos solvatos foi estimada utilizando-se modelos moleculares, nos quais foi possível identificar a existência de interações do tipo π-π e de ligações de hidrogênio. As conclusões baseadas nos experimentos de RMN de 1H foram concordantes com as resultantes da análise dos modelos moleculares, construídos para cada par substrato/agente de discriminação quiral / Salts of Cinchone alcaloids are common chiral catalysts for asymmetric phase-transfer reactions. However, studies on their performance as chiral discriminating are still scarce. In order to investigate the molecular basis of chiral recognition for such compounds, the 1H NMR spectra of admixtures of quinine or Cinchone alkaloids salts with carbonyl and carboxyl derivatives were recorded and analyzed. The relative stabilities of the solvated complexes were estimated on the basis of preferential π-π and hydrogen bonding interactions between substrates and the chiral discriminating agent. Conclusions based on results of the 1H NMR experiments were in line with those arising from the analysis of molecular models for the substrate/chiral discriminating agent pairs

Os alcalóides ergolínicos são uma categoria de compostos que possuem um esqueleto tetracíclico [6,5,6,6] derivados da ergolina. Do ponto de vista farmacológico, estes compostos são uma classe de produtos naturais importantes, já que exibem uma grande variedade de atividade biológica. Estas moléculas têm sido alvos sintéticos devido ao seu complexo esqueleto tetracíclico e as propriedades supracitadas, o que resultou no desenvolvimento de sínteses totais ao longo do tempo. O ácido lisérgico é o representante notável da família dos alcaloides ergolínicos, uma vez que desde o ano de 1956 até 2013 foram desenvolvidas treze sínteses totais do mesmo. Por isso, o nosso grupo de pesquisa propõe uma rota sintética para a construção de um intermediário indólico-piperidinico, que será usado para realizar a síntese total estereosseletiva do ácido lisérgico em um trabalho de pesquisa futuro. A estratégia para a síntese do intermediário baseia-se na reação de Horner-Wadsworth-Emmons (HWE) e na reação de inserção N-H intramolecular a partir de um aminoaldeído derivado do L-triptofano. A rota sintética inicia-se a partir da elaboração do reagente de olefinação de HWE em três etapas: reação de Michaelis Becker, hidrogenólise catalítica e formação do diazofosfonato. A construção do aminoaldeído requer cinco etapas: esterificação, proteção com Boc, desproteção seletiva, redução do éster e oxidação de Swern. O reagente de olefinação e o aminoaldeído reagem através da reação HWE, fornecendo a diazocetona α, β -insaturada com configuração preferencial Z (Z:E=10:1). Finalmente a olefina Z reage mediante a reação de inserção N-H intramolecular, para fornecer o intermediário indólico-piperidínico. Adicionalmente, desenvolveu-se outra rota para construir o intermediário mencionado através da construção de um derivado de 4-nitroindol, porém esta não foi reprodutível. A síntese do intermediário indólico-piperidínico foi feita em sete etapas, partindo do L-triptofano com rendimento global de 14.9 %. / The ergot alkaloids are a class of compounds which have the tetracyclic skeleton [6,5,6,6] found in the ergoline molecule. These compounds are an important class of natural products that have wide biological activities. They have also been important synthetic targets due to their challenging tetracyclic skeleton as well as due to the previously mentioned biological properties. Lysergic acid is the main representative of the family of ergot alkaloids. Since 1956, thirteen total syntheses have been developed for this alkaloid. Considering the importance of lysergic acid and of the ergot alkaloids, our research group decided to propose a synthetic route to construct an advanced indole-piperidinic intermediate, which may be used to perform the total synthesis of lysergic acid and derivatives in a future work. The strategy to the synthesis of this advanced intermediate is based on the Horner-Wadsworth-Emmons reaction (HWE) and the intramolecular N-H insertion reaction, starting from a L-tryptophan aminoaldehyde derivative. The synthetic route started with the elaboration of the HWE olefination reagent in three steps: Michaelis Becker reaction, hydrogenolysis and diazophosphonate formation. In continuation, the construction of the aminoaldehyde required five steps: esterification, Boc protection, selective deprotection, ester reduction and Swern oxidation. The olefination reagent and the aminoaldehyde reacted by the HWE reaction furnishing an α, β -unsaturated diazoketone with Z configuration (Z:E = 10:1). Finally the Z isomer reacted by means of an intramolecular N-H insertion reaction to provide the indole-piperidine intermediate. Additionally, we developed another route to construct a 4-nitro-indole intermediate, but this was not reproducible. The synthesis of the indole-piperidine intermediate was carried out in seven steps starting from L-tryptophan, with an overall yield of 14.9%.

A Annona crassiflora Mart. é uma espécie frutífera nativa do cerrado que possui alto potencial de uso e ampla distribuição. O presente trabalho tem os seguintes objetivos: identificar e quantificar aminoácidos livres, carboidratos solúveis e ácidos graxos da polpa e das sementes, visando ampliar os conhecimentos sobre potencial econômico de A. crassiflora; avaliar qual o nível de variações quantitativas e qualitativas de alcalóides de A. crassiflora de amostras provenientes de diferentes regiões do cerrado; avaliar qual a magnitude da diversidade genética entre diferentes populações de A. crassiflora, utilizando marcadores isoenzimáticos. Com relação às propriedades nutricionais, as análises de aminoácidos livres, carboidratos e lipídeos foram feitas por CLAE/F, por CLAE/CTI - DPA e por CG/EM, respectivamente. O teor total de aminoácidos livres na polpa variou de 1101,99 g/g a 1975,7 g/g de massa seca, enquanto nas sementes variou de 636,3 μg/g a 17.445,83 μg/g de massa seca. A glutamina foi majoritária em todas as amostras. O teor total dos carboidratos solúveis da polpa variou de 11,5 g/100g a 17,03 g/100g e das sementes variou de 13,69 g/100g a 40,47 g/100g de matéria seca. Foram detectadas a frutose, a glicose e a sacarose em todas as amostras de polpa e de sementes. A quantidade de lipídeos totais da polpa variou de 7g/100g a 16,2 g/100g de massa seca e das sementes variou de 34,36 g/100g a 35,98 g/100g de massa seca. O ácido oléico e/ou petroselínico (18:1) foram majoritários em todas as amostras de polpa e de sementes de diferentes origens geográficas. Certamente os dados obtidos permitiram ampliar os conhecimentos sobre potencial de aproveitamento dessa espécie. Para avaliar a magnitude da variação dos alcalóides das folhas de A. crassiflora, a quantificação e identificação dos alcalóides foram feitas, respectivamente, por CG/FID e CG/EM. Foi verificado que o teor total de alcalóides variou de 221,1 ± 17,14 μg/g a 2986,89 ± 367,1 μg/g de massa seca. Foram identificados os alcalóides anonaína, anoretina, romucosina e xilopina que mostraram diferenças entre as regiões. Essa variação na concentração e no perfil alcaloídico das populações de A. crassiflora sugere ampla plasticidade fenotípica desses metabólitos em resposta a fatores bióticos e/ou abióticos, além de alta variabilidade genética relacionada à expressão dos genes envolvidos na biossíntese desses metabólitos. A avaliação da estrutura genética foi feita através da análise isoenzimática. Os dados isoenzimáticos mostraram baixa variabilidade genética. Duas hipóteses são apontadas para explicar o baixo nível de polimorfismos verificado em A. crassiflora, uma delas relacionada à técnica e outra relacionada ao próprio processo de degradação do ambiente. Diante do exposto, os dados obtidos no presente trabalho sugerem formas de agregar mais valor econômico e ecológico à A. crassiflora e podem proporcionar uma base para o uso mais eficiente e racional dos recursos dessa espécie, contribuindo para exploração sustentável do cerrado, o que permite também o desenvolvimento de comunidades locais. / Annona crassiflora Mart. is a native fruit tree species from the cerrado, possessing high use potential and a wide distribution. The proposed aims were to identify and quantify free amino acids, free sugars and fatty acids in the pulp and seeds of this plant, with a view to widening knowledge on economical potentiality, as well as to evaluate the level of alkaloid quantitative and qualitative variation in samples coming from different regions of the cerrado, and finally define the size of genetic diversity among these different populations by using isoenzymatic markers. As to nutritional properties, analyses of free amino acids, free sugars and fatty acids were undertaken with, respectively, CLAE/F, CLAE/CTI DPA and CG/MS. The total rate of free amino acids in the pulp varied from 1101,99 ug/g to 1975,7 ug/g of dry mass, whereas in the seeds this variation was from 636,3 μg/g to 17.445,83 μg/g. Glutamin was preponderant in all the samples. Total free sugar rate in pulp varied from 11,5 g/100g to 17,03 g/100g and in seeds from 13,69 g/100g to 40,47 g/100g of dry matter. Fructose, glucose and sacarose was detected in all samples. The amount of total lipids in pulp varied from 7 g/100g to 16,2 g/100g of dry weight and in seeds from 34,36 g/100g to 35,98 g/100g. Oleic and/or petroselinic acids (18:1) were the most abundant in all pulp and seed samples from the different geographic regions. The obtained results certainly permit widening knowledge on the potentiality for use of this plant species. In order to evaluate the size of alkaloid variation in A. crassiflora leaves, alkaloid quantification and identification was done with, respectively, CG/FID and and CG/EIMS. It was noted that the total alkaloid rate varied from 221,1 ± 17,14 ug/g to 2986,89 ± 367,1 μg/g of dry mass. The alkaloids anonain, anoretin, romucosin and xilopin were identified, these showing differences among regions. This variation in alkaloid concentration and profile in A. crassiflora populations suggests the wide phenotypic plasticity of these metabolites in response to biotic and/or abiotic factors, besides high genetic variability related to gene expression of those involved in their biosythesis. Genetic structure evaluation was done through isoenzymatic analysis. Isoenzymatic data revealed low genetic variability. Two hypotheses may be raised to explain this low polymorphism level. The first points to inefficient isoenzymatic techniques in reckoning species genetic diversity, whereas the second takes into consideration that excessive homozygosis (indicated by the low level of isoenzymatic variability) could be an indication of the process of species genetic erosion, possibly related to habitat (cerrado) degradation. In view of this, data obtained in the present study suggest forms of aggregating additional economical and ecological value to A. crassiflora, and could furnish a base for the more efficient and rational use of resources from this species, thus contributing to sustainable exploitation of the cerrado, and also allowing for local community development.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-02T14:22:40Z No. of bitstreams: 1 patriciadealmeidamachado.pdf: 2264339 bytes, checksum: daac1876462208aa982df4724ffcd524 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-09-06T14:17:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 patriciadealmeidamachado.pdf: 2264339 bytes, checksum: daac1876462208aa982df4724ffcd524 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-06T14:17:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patriciadealmeidamachado.pdf: 2264339 bytes, checksum: daac1876462208aa982df4724ffcd524 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade leishmanicida de análogos de alcalóides marinhos e bioisósteros do resveratrol em L. amazonensis. Foram testados 12 análogos de alcalóides marinhos 3-alquil piridinas e 7 biosósteros do resveratrol, sendo 4 complexados a ouro, em formas promastigotas de L. amazonensis e em macrófagos peritoneais. Em ambos os casos, a viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico do MTT. Os compostos que apresentaram significante atividade antipromastigota e foram seletivos para o parasito, em comparação com a célula hospedeira, foram testados em amastigotas intracelulares de L. amazonensis, cujo efeito dos compostos foi avaliado pela contagem das formas intracelulares. Além disso, foi coletado o sobrenadante para a dosagem de óxido nítrico (NO), através do método de Griess. A maioria dos compostos testados apresentou efeito antipromastigota, destacando os compostos 4 e 5 do grupo dos análogos de alcalóides marinhos, com CI50 de 1,07 e 1,09 µM, respectivamente. Em relação à série dos bioisósteros do resveratrol, destacam-se aqueles complexados a ouro, sendo o composto 17 o mais ativo (CI50 de 5,18 µM). Todos os compostos que foram testados em amastigotas apresentaram atividade, destacando-se, o composto 10 (CI50 = 0,27 µM), dentre os análogos de alcalóides marinhos, e o composto 19, da série dos bioisósteros do resveratrol complexados a ouro (CI50 = 5,77 µM). A maioria dos análogos de alcalóides marinhos mostrou significante toxicidade em macrófagos peritoneais, enquanto somente dois bioisósteros do resveratrol complexados a ouro foram tóxicos para a célula hospedeira. No entanto, todos os compostos testados em amastigotas apresentaram significante seletividade pelo parasito em seu estágio intracelular. Com relação à especificidade das moléculas, os análogos marinhos foram específicos para amastigotas, sugerindo que o alvo desses compostos é exclusivo desse estágio, já a maioria dos bioisósteros do resveratrol complexados a ouro mostraram efeito semelhante em formas promastigotas e amastigotas de L. amazonensis, sugerindo alvos comuns desses compostos nos dois estágios do parasito. Nenhum dos compostos testados induziu significante produção de NO por macrófagos infectados com L. amazonensis, sugerindo que essa molécula não está diretamente relacionada ao efeito antiparasitário. Em resumo, o trabalho mostrou que os compostos testados possuem significativo potencial leishmanicida e abrem perspectivas para estudos em modelos in vivo, bem como estudo do mecanismo de ação. / The aim of this study was to evaluate the leishmanicidal activity of marine alkaloid analogues and bioisosteres of resveratrol in L. amazonensis. We tested 12 3alkylpyridine marine alkaloid analogues of and 7 bioisosteres of resveratrol, 4 complexed to gold, in promastigotes of L. amazonensis and in peritoneal macrophages. In both cases, the viability of the cells was checked using the MTT colorimetric method. Compounds with significant antipromastigote activity and selectivity by the parasite, when compared to the host cell, were tested on intracellular amastigotes of L. amazonensis, which effect of the compounds was determined by counting the number of intracellular parasites. Supernatant was also collected for measure of the nitric oxide (NO), by the Griess method. Most compounds showed antipromastigote effect, especially compounds 4 and 5 of the marine alkaloid analogues, with IC50 of 1.07 and 1.09 µM, respectively. Regarding the bioisosteres of resveratrol, the gold complex 17 was the most active (IC50 of 5.18 µM). All compounds tested in amastigotes exhibited activity, including the compound 10 (IC50 = 0.27 µM), among marine alkaloid analogues, and the compound 19, among gold complexes with bioisosteres of resveratrol (IC50 = 5.77 µM). Most marine alkaloid analogues showed significant toxicity in peritoneal macrophages, while only two bioisosteres of resveratrol complexed to gold were toxic to host cell. However, all compounds tested in amastigotes showed significant selectivity for intracellular parasite. Regarding the specificity of the molecules, marine analogues were specific to amastigote forms, suggesting that the target of these compounds is unique to this stage, while most of bioisosteres of resveratrol complexed to gold showed similar effect on promastigotes and amastigotes of L. amazonensis, suggesting common targets of these compounds in both stages of the parasite. None of compounds induced significant NO production by L. amazonensis-infected macrophages, suggesting that this molecule is not directly related with the antiparasitic effect. In summary, the study showed that the compounds have significant potential leishmanicidal and encourages in vivo studies, as well as the action mechanism.

This work describes the results obtained from the phytochemical study, chemometric analysis and activity cytotoxic in vitro and in vivo of the leaves Guatteria pogonopus Mart., a species of Annonaceae that occurs in Sergipe. The leaves were subjected to two processes. In the first, the leaves were conducted extraction and the study of the chemical composition of the essential oil, considering the seasonality effect; in the second, the isolation of fixed compounds was performed on order to identify alkaloids. Both studies were evaluated towards the antitumor activity in vitro and in vivo. Yields of essential oils ranged from 0.34 % for the month of October/2012 to 0.10 % for the month of September/2012. This variation can be explained by the climate, which the rainfall was higher in September compared to October. This means that the greater the amount of precipitation, reduced yield. The sesquiterpene hydrocarbons were the main constituents of the oils in the samples, with the highest concentration in the month of July/2012 (71.93 %). They were identified as á- and â-pinene, bicyclogermacrene, germacrene B, ã-patchoulene, spathulenol, á-santalene, (E)-caryophyllene, ã-elemene and globulol. In Principal Component Analysis (PCA), both CP1 and CP2 components can explain 90 % of the total variance. It is remarkable that several compounds have focused on the right of the axis of CP1. This phenomenon explains the regularity of the percentage that appears in each month. The ã-patchouleno, spathulenol and bicyclogermacrene compounds protrude to the left of the axis of CP1. Which are the major compounds of the composition of essential oils predominant in all sampling months. In addition to these one can see (E)-caryophyllene and á-santalene, to a lesser prominence this axis. In Hierarchical Cluster Analysis (HCA) formed groups because of similarities. The results of the in vitro antitumor activity of essential oil showed pronounced cytotoxic activity against NCI-H358M, PC-3M and OVCAR-8 lines. In vivo study oil was able to inhibit tumor growth, thus indicating that the essential oil has a significant antitumor potential. Phytochemical study the alkaloidal sheets from the fraction of methanol extract was possible to date the isolation of six alkaloids encoded as GP-1 (nornuciferine), GP-2 (isocorydine), GP-3 (mixture of the nornuciferine and anonaine), GP-4 (lisycamine) and GP-5 (liriodinene). The identification of the alkaloids was performed by 1D/2D 1H and 13C NMR, MS and GC/MS, and comparison with authentic standards and literature data. The cytotoxicity assay performed with single concentration in the extracts and fractions (50 mg/ml) and basic substances (25 mg/mL) revealed promising results with minimal inhibition of 50 % of at least one tumor cell lines. Among the extracts, fractions and evaluated substance, the alkaloidal fraction and compounds GP-1 were the most active against strains B16-F10 and HepG2. Because the activities presented and in order to obtain the IC50 for these two samples front lines K562, HL-60 cells and PBMC were also evaluated. Both the alkaloidal fraction and the compound GP-1 showed good results. The results indicated that G. pogonopus is a biologically active cytotoxic properties with promising source of compounds. / Este trabalho descreve os resultados do estudo fitoquimico, analise quimiometrica e investigacao citotoxica in vitro e in vivo das folhas de Guatteria pogonopus Mart. uma especie de Annonaceae de ocorrencia em Sergipe. As folhas foram submetidas a dois processos: no primeiro, foi realizada a extracao e o estudo da composicao quimica do oleo essencial, levando em consideracao o efeito da sazonalidade. Enquanto que no segundo, foi realizado o isolamento de compostos fixos visando a identificacao de alcaloides. Ambos estudos foram avaliados frente a atividade antitumoral in vitro e in vivo. Os rendimentos dos oleos essenciais variaram de 0,34% para o mes de outubro/2012 a 0,10% para o mes de setembro/2012. Essa variacao pode ser explicada pelo clima, o qual o indice pluviometrico foi maior para setembro em relacao a outubro. Isso significa, que quanto maior a quantidade de precipitacao, menor o rendimento. Os sesquiterpenos hidrocarbonetos foram os constituintes majoritarios nas amostras dos oleos, com maior concentracao no mes de julho/2012 (71,93%). Os constituintes majoritarios identificados foram Ñ- e £]-pineno, biciclogermacreno, germacreno B, £^-patchouleno, espatulenol, £-santaleno, (E)-cariofileno, £^-elemeno e globulol. Na Analise de Componentes Principais (ACP), as duas componentes CP1 e CP2 conseguem explicar mais de 90% da variancia total dos dados. E possivel notar que varios compostos se concentraram na direita do eixo da CP1. Esse fenomeno explica a regularidade da porcentagem que aparece em cada mes. Os compostos £^-patchouleno, espatulenol e biciclogermacreno se sobressaem para esquerda do eixo da CP1. Os quais sao os compostos majoritarios da composicao dos oleos essenciais predominante em todos os meses de coleta. Na Analise de Agrupamento Hierarquico (AAH) formaram-se grupos devido a semelhancas. Os resultados da atividade antitumoral in vitro do oleo essencial indicaram pronunciada atividade citotoxica contra as linhagens de NCI-H358M, PC-3M e OVCAR-8. No estudo in vivo o oleo foi capaz de inibir o crescimento tumoral, indicando assim, que o oleo essencial apresenta um potencial antitumoral significativo. Do estudo fitoquimico da fracao alcaloidica do extrato metanolico foi possivel ate o momento o isolamento de seis alcaloides codificados como GP-1 (nornuciferina), GP-2 (isocoridina), GP-3 (nornuciferina e anonaina em mistura), GP-4 (lisicamina), GP-5 (liriodenina). A identificacao dos alcaloides foi realizada por RMN de 1H e 13C 1D/2D, EM e CG/EM, bem como comparacao com padroes autenticos e dados da literatura. O ensaio de atividade citotoxica em concentracao unica realizado com os extratos e fracoes (50 £gg/mL) e substancias puras (25 £gg/mL), revelaram resultados promissores com inibicao minima de 50% de pelo menos uma das linhagens tumorais. Entre os extratos, fracoes e substancia avaliadas, a fracao alcaloidica e o composto GP-1 foram os mais ativos contra as linhagens B16-F10 e HepG2. Devido as atividades apresentadas e com o objetivo de se obter a CI50 essas duas amostras tambem foram avaliadas frente as linhagens de celulas K562, HL-60 e PBMC. Tanto a fracao alcaloidica como o composto GP-1 apresentaram bons resultados. Os quais indicaram que G. pogonopus e uma fonte promissora de compostos biologicamente ativos com propriedades citotoxicas.