Abstract Aims: Due to the emergence of multi-drug resistance, alternatives to conventional antimicrobial therapy are needed. This study aims to investigate the in vitro pharmacological interactions between essential oils (considered valuable as natural therapeutic treatments) and conventional antimicrobials (ciprofloxacin ⁄ amphotericin B) when used in combination. Methods and Results: Interactions of the essential oils (Melaleuca alternifolia, Thymus vulgaris, Mentha piperita and Rosmarinus officinalis) when combined with ciprofloxacin against Staphylococcus aureus indicate mainly antagonistic profiles. When tested against Klebsiella pneumoniae the isobolograms show antagonistic, synergistic and additive interactions depending on the combined ratio. The R. officinalis ⁄ ciprofloxacin combination against K. pneumoniae displayed the most favourable synergistic pattern. The interactions of M. alternifolia (tea tree), T. vulgaris (thyme), M. piperita (peppermint) and R. officinalis (rosemary) essential oils with amphotericin B indicate mainly antagonistic profiles when tested against Candida albicans. Conclusion: While a number of interactions show complete antagonism, others show varied (synergistic, additive and ⁄ or antagonistic) interactions, thus the efficacy is dependent on the ratio in which the two components co-exist. Significance and Impact of the Study: The predominant antagonistic interactions noted here, suggests that some natural therapies containing essential oils should be used with caution when combined with antibiotics.

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Marcia Pinto Alves Mayer / Resumo: O objetivo geral deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar in vitro o efeito do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) sobre as bactérias Streptococcus mutans (S.mutans) e Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) e seu possível efeito citotóxico sobre cultura de queratinócitos (HaCat). Materiais e Métodos: No estudo 1, a análise antimicrobiana foi avaliada em 3 fases: 1. Identificação da CIM e CBM do TTO nas concentrações de 0.25% a 2% sobre os microrganismos na forma planctônica, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo; 2. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em SSB (biofilme monoespécie) e DSB (biofilme multiespécie), formados em placa de cultura celular, tratados com diferentes concentrações de TTO, por meio de ensaio de XTT; 3. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em DSB formado sobre blocos de esmalte e dentina e submetidos às seguintes soluções: TTO 2%, clorexidina 0.12% (controle positivo) ou PBS (controle negativo) pelo tempo de 60 s, por meio de ensaio de XTT e análise das imagens obtidas por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). No estudo 2, a análise citotóxica de diferentes concentrações de TTO foi realizada sobre células HaCat usando diferentes tempos de contato (60 s, 2 h e 60 s, com recuperação de 24 h), por meio do ensaio de MTT para avaliação da atividade metabólica. Os dados obtidos apresentaram distribuição não normal e, portanto, 19 foram utilizados os testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e de Mann-Whitney. Todos os testes estatisticos foram considerados em nível de significância de 5%. Resultados: Na análise antimicrobiana, para ambos, S.mutans e L.acidophillus, os valores de CIM e CBM foram 0.5% e 1 %, respectivamente. Os valores de densidade óptica (DO) referentes ao metabolismo bacteriano... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this research, divided in two studies was to evaluate in vitro the effect of oil of Melaleuca alternifolia (TTO) against bacteria Streptococcus mutans (S. mutans) and Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) and its cytotoxic effect on keratinocyte cells (HaCat). Materials and Methods: In study 1, the antibacterial analysis was evaluated in 3 phases: 1. Identification of MIC and MBC of TTO (0.25% to 2%) on the microorganisms in the planktonic form using the broth microdilution technique; 2. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in SSB (monospecie biofilm) and DSB (multispecies biofilm) formed in cell culture plate and treated with different concentrations of TTO, using XTT assay; 3. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in DSB formed on blocks of enamel and dentin and submitted to the following solutions: 2% TTO, 0.12% chlorhexidine (positive control) or PBS (negative control) for 60 s, using XTT assay. Images obtained by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were analyzed, too.. In study 2, the cytotoxic analysis of different concentrations of TTO was performed on HaCat cells at different contact times (60 s, 2 h, 60 s, with recovery of 24 h) was using the MTT assay to evaluate metabolic activity. The data showed non-normal distribution and therefore were used the nonparametric tests Kruskal-Wallis and Mann-Whitney. All statistical tests were considered at a significance level of 5%. 23 Results: In the antibacterial analysis, for both S. mutans and L. acidophillus, the values of MIC and MBC were 0.5% and 1% respectively. The values of optical density (OD) for the bacterial metabolism, obtained by the XTT assay showed statistically significant for S. mutans SSB, at concentrations of TTO 0.25 to 2%, and for L. acidophillus SSB, at concentration of TTO 2% (p <0.05). However, there was ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-13Bitstream added on 2014-06-13T19:15:17Z : No. of bitstreams: 1 fontana_a_me_arafo.pdf: 741833 bytes, checksum: 2d49c1585d8b888e9a11b16364dea7ad (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo geral deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar in vitro o efeito do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) sobre as bactérias Streptococcus mutans (S.mutans) e Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) e seu possível efeito citotóxico sobre cultura de queratinócitos (HaCat). Materiais e Métodos: No estudo 1, a análise antimicrobiana foi avaliada em 3 fases: 1. Identificação da CIM e CBM do TTO nas concentrações de 0.25% a 2% sobre os microrganismos na forma planctônica, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo; 2. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em SSB (biofilme monoespécie) e DSB (biofilme multiespécie), formados em placa de cultura celular, tratados com diferentes concentrações de TTO, por meio de ensaio de XTT; 3. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em DSB formado sobre blocos de esmalte e dentina e submetidos às seguintes soluções: TTO 2%, clorexidina 0.12% (controle positivo) ou PBS (controle negativo) pelo tempo de 60 s, por meio de ensaio de XTT e análise das imagens obtidas por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). No estudo 2, a análise citotóxica de diferentes concentrações de TTO foi realizada sobre células HaCat usando diferentes tempos de contato (60 s, 2 h e 60 s, com recuperação de 24 h), por meio do ensaio de MTT para avaliação da atividade metabólica. Os dados obtidos apresentaram distribuição não normal e, portanto, 19 foram utilizados os testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e de Mann-Whitney. Todos os testes estatisticos foram considerados em nível de significância de 5%. Resultados: Na análise antimicrobiana, para ambos, S.mutans e L.acidophillus, os valores de CIM e CBM foram 0.5% e 1 %, respectivamente. Os valores de densidade óptica (DO) referentes ao metabolismo bacteriano... / The aim of this research, divided in two studies was to evaluate in vitro the effect of oil of Melaleuca alternifolia (TTO) against bacteria Streptococcus mutans (S. mutans) and Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) and its cytotoxic effect on keratinocyte cells (HaCat). Materials and Methods: In study 1, the antibacterial analysis was evaluated in 3 phases: 1. Identification of MIC and MBC of TTO (0.25% to 2%) on the microorganisms in the planktonic form using the broth microdilution technique; 2. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in SSB (monospecie biofilm) and DSB (multispecies biofilm) formed in cell culture plate and treated with different concentrations of TTO, using XTT assay; 3. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in DSB formed on blocks of enamel and dentin and submitted to the following solutions: 2% TTO, 0.12% chlorhexidine (positive control) or PBS (negative control) for 60 s, using XTT assay. Images obtained by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were analyzed, too.. In study 2, the cytotoxic analysis of different concentrations of TTO was performed on HaCat cells at different contact times (60 s, 2 h, 60 s, with recovery of 24 h) was using the MTT assay to evaluate metabolic activity. The data showed non-normal distribution and therefore were used the nonparametric tests Kruskal-Wallis and Mann-Whitney. All statistical tests were considered at a significance level of 5%. 23 Results: In the antibacterial analysis, for both S. mutans and L. acidophillus, the values of MIC and MBC were 0.5% and 1% respectively. The values of optical density (OD) for the bacterial metabolism, obtained by the XTT assay showed statistically significant for S. mutans SSB, at concentrations of TTO 0.25 to 2%, and for L. acidophillus SSB, at concentration of TTO 2% (p <0.05). However, there was ... (Complete abstract click electronic access below)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed the evaluation of the trypanocidal activity of terpinen-4-ol, γ-terpinene and α-terpinene against Trypanosoma evansi in vivo and in vitro. The in vitro assay was performed in culture medium of T. evansi, using three different concentrations of each compound (0.5, 1.0 and 2.0%), individually and in synergism. Motile (live) trypomastigotes were counted using a Neubauer chamber after 1, 3, 6 and 9 hours of incubation. Death of parasites occurred in a concentration-dependent manner, except for α-terpinene that was able to eliminate all parasites after 1 hour of incubation at all concentrations tested. Seventy mice were equally assigned into 10 groups (A to J) for the in vivo tests. Group A served as a negative control (healthy animals); groups B - J were infected with 0.1 mL of blood containing 105 T. evansi trypomastigotes. Group B served as a positive control; groups C, D and E received oral doses of 1.0 mL kg-1 of terpinen-4-ol, γ-terpinene and α-terpinene, respectively. Associations of the three compounds were orally administered to groups F I: terpinen-4-ol + γ-terpinene to group F, terpinen-4-ol + α-terpinene to group G, α-terpinene + γ-terpinene at 1.0 mL kg-1 (0.5 mL kg-1 for each compound) to group H, terpinen-4-ol + γ-terpinene + α-terpinene at 1.0 mL kg-1 (0.335 mL kg-1 of each compound) to group I. A therapeutic dose of diminazene aceturate (single dose of 3.5 mg kg-1, intraperitoneally) was administered to Group J aiming test validation. Animals in group E (treated with α-terpinene) showed an increase of longevity when compared to animals in group B. However, no curative effectiveness was observed, since all animals in this group died during the observation period. In order to evaluate the association between α-terpinene and diminazene aceturate, twenty-eight mice were assigned into 4 groups (A, B, C and D, n = 7). Group A included animals uninfected (negative control); group B was composed by infected animals (positive control); group C consisted of infected animals treated with diminazene aceturate (single dose of 3.5 mg kg-1, im); and group D consisted of infected animals treated with an association of diminazene aceturate (single dose of 3.5 mg kg-1, im) and α-terpinene (1.0 ml kg-1, orally administered for 10 days). It was observed, as a result of this experiment, an increase in the curative effectiveness (57.14%) in group D when compared to group C, which showed only 14.28% of curative effectiveness. Based on these results, α-terpinene was the compound present in M. alternifolia essential oil that showed trypanocidal activity. / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade tripanocida do terpinen-4-ol, gama-(γ)-terpinen e alfa-(α)-terpinen contra o Trypanosoma evansi in vitro e in vivo. Os testes in vitro foram realizados em meio de cultura contendo T. evansi, utilizando-se três concentrações de cada composto (0.5, 1.0 e 2.0%) de forma individual e em associação. A contagem de tripomastigotas vivas foi realizada em câmara de Neubauer após 1, 3, 6 e 9 horas pós-incubação. A partir dos testes in vitro, foi possível observar a morte dos parasitos de forma concentração-dependente, exceto o composto α-terpinen que foi capaz de eliminar todos os parasitos 1 h pós-incubação em todas as concentrações testadas. Para realização dos ensaios in vivo, primeiramente foram utilizados 70 camundongos divididos em 10 grupos (A ao J), com sete animais cada grupo. O grupo A serviu como controle negativo (animais sadios); grupos de B a J foram infectados com 0,1 mL de sangue contendo 105 tripomastigotas com T. evansi. O grupo B serviu como controle positivo; grupos C, D e E receberam terpinen-4-ol, γ-terpinen e α-terpinen via oral na dose de 1.0 mL kg-1, respectivamente. O grupo F recebeu a associação dos compostos terpinen-4-ol + γ-terpinen, grupo G recebeu a associação dos compostos terpinen-4-ol + α-terpinen; grupo H recebeu a associação do γ-terpinen + α-terpinen via oral na dose de 1.0 mL kg-1 (0.5 mL kg-1 de cada composto). O grupo I recebeu a associação dos compostos terpinen-4-ol + γ-terpinen + α-terpinen via oral na dose de 1.0 mL kg-1 (0.335 mL kg-1 de cada composto). O grupo J foi tratado com aceturato de diminazeno na dose terapêutica (dose única de 3.5 mg kg-1, via intramuscular) para validação do teste. Foi possível verificar que os animais do grupo E (tratados com α-terpinen) apresentaram um aumento da longevidade quando comparados ao grupo B, porém sem eficácia curativa, pois todos os animais deste grupo morreram durante o período de observação da parasitemia. A partir disto, um segundo experimento foi realizado testando a associação entre o α-terpinen e o aceturato de diminazeno. Foram utilizados 28 camundongos divididos em 4 grupos (A, B, C e D; n=7). O grupo A foi formado por animais não infectados (controle negativo), o grupo B foi formado por animais infectados (controle positivo), o grupo C foi formado por animais infectados e tratados com aceturato de diminazeno (dose única de 3.5 mg kg-1, via intramuscular), e o grupo D foi formado por animais infectados e tratados com associação de aceturato de diminazeno (dose única de 3.5 mg kg-1, via intramuscular) mais α-terpinen (1.0 mL kg-1 via oral durante 10 dias). A partir deste resultado, foi possível observar um aumento da eficácia curativa (57.14 %) no grupo D quando comparado ao grupo C, que obteve apenas 14.28 % de eficácia curativa. Baseado nestes resultados, o α-terpinen foi o composto presente no óleo essencial de M. alternifolia que apresentou atividade tripanocida.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this work was the development of nanostructured formulations containing M. alternifolia essential oil. Polymeric nanocapsules and nanoemulsions (10 mg/mL) were prepared by the interfacial deposition of preformed polymer method and spontaneous emulsification, respectively. The formulations were evaluated in relation to their physicochemical characteristics (particle size, polydispersity index, zeta potential, pH and oil content). Formulations presented oil content of about 96%, nanometric mean size (160-220 nm), polydispersity index below 0.25 and negative zeta potential. The pH values were 6.43 ± 0.37 and 5.98 ± 0.00 for nanoemulsions and nanocapsules, respectively. The inclusion of oil in nanocapsules showed higher protection against volatilization. The analysis of mean size and polydispersity index of the formulations presented no significant alteration during 60 days of storage time (at 25 °C, protected from light). The in vitro antifungal activity of the formulations was evaluated through the study of the inhibition growth profile of Candida albicans yeast. In addition, the antifungal activity against Trichophyton rubrum was studied using two different in vitro models of dermatophyte nail infection. The effect of nanostructures on the growth curve of C. albicans showed inhibition and control of its growing. Nail infection models demonstrated the ability of the formulations in reducing the T. rubrum growth, and the inclusion of oil in nanocapsules was more efficient. The development of hydrogels containing the nanostructured systems were carried out. The semisolid formulations showed adequate properties for topical administration. The topical antiedematogenic effect was evaluated by ear thickness measurement before and 24 h after UVB radiation. Hydrogels containing the colloidal systems showed effect, unlike to hydrogel containing the free oil. The in vivo healing effect of hydrogels was evaluated by regression of the wound in the rat skin. Hydrogel containing the nanocapsules presented higher activity in comparison to the positive control (hydrogel containing allantoin). Analyses of the oxidative stress showed an increase of glutathione, vitamin C and catalase levels after the treatment with the hydrogel containing the nanocapsules prepared with melaleuca essential oil. / O principal objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de formulações nanoestruturadas contendo o óleo essencial de Melaleuca alternifolia. Suspensões de nanocápsulas poliméricas e nanoemulsões (10 mg/mL) foram preparadas pelos métodos de deposição interfacial de polímero pré-formado e emulsificação espontânea, respectivamente, e avaliadas em relação as suas características físico-químicas (tamanho de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, pH e determinação do conteúdo de óleo). As formulações apresentaram rendimento em óleo de, aproximadamente, 96%, diâmetro médio nanométrico (160-200 nm), índice de polidispersão inferior a 0,25 e potencial zeta negativo. Os valores de pH foram de 6,43 ± 0,37 e 5,98 ± 0,00 para nanoemulsões e suspensões de nanocápsulas, respectivamente. A nanoencapsulação do óleo apresentou uma maior proteção deste frente à volatilização. As análises de tamanho médio de partícula e índice de polidispersão não apresentaram alterações durante 60 dias de armazenamento, a uma temperatura de 25 °C, ao abrigo da luz. A avaliação da atividade antifúngica das formulações foi realizada, através do estudo do perfil de inibição do crescimento da levedura de Candida albicans. Adicionalmente, a atividade antifúngica também foi testada frente ao Trichophyton rubrum, utilizando dois diferentes modelos de infecção ungueal. O efeito das nanoestruturas na curva de crescimento da levedura demonstrou inibição e controle do crescimento. Nos modelos de infecção de unha foi possível evidenciar a habilidade das formulações em reduzir o crescimento do T. rubrum, obtendo-se resultados promissores para as nanocápsulas. O estudo de desenvolvimento de hidrogéis contendo os sistemas nanoestruturados propostos neste trabalho foi, também, realizado. As formulações semissólidas desenvolvidas apresentaram propriedades adequadas para aplicação tópica. Ainda, o efeito antiedematogênico tópico foi avaliado pela medida da espessura da orelha de camundongos antes a após 24 horas de exposição à radiação. Os hidrogéis contendo os sistemas coloidais desenvolvidos demonstraram atividade, ao passo que o gel contendo o óleo livre não apresentou efeito. Adicionalmente, o efeito cicatrizante in vivo dos hidrogéis foi avaliado através da regressão da área da ferida na pele de ratos. No modelo de cicatrização, o hidrogel contendo as nanocápsulas apresentou atividade superior ao controle positivo (hidrogel contendo alantoína). Análises de marcadores de estresse oxidativo demonstraram aumento nos níveis de glutationa, vitamina C e catalase após o tratamento com o hidrogel contendo as nanocápsulas preparadas com o óleo essencial de melaleuca.

M.Tech. (Homoeopathy) / Please refer to full text to view abstract

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-12-19T11:52:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 589894 bytes, checksum: 4daf5c895081f6b17bae6155971ec4aa (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-19T11:52:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 589894 bytes, checksum: 4daf5c895081f6b17bae6155971ec4aa (MD5) Previous issue date: 2003-11-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente trabalho teve como objetivo analisar técnica e economicamente o cultivo e a extração do óleo essencial de Melaleuca alternifolia Cheel. Foi desenvolvido a partir do acompanhamento e coleta de dados da referida cultura, desde o plantio até a extração do respectivo óleo essencial, num plantio em espaçamento de 1 x 1 m, no município de São Miguel do Anta, localizado na região da Zona da Mata Norte do Estado de Minas Gerais. Realizou-se um levantamento dos rendimentos e custos da cultura para as atividades de produção de mudas, implantação, manutenção, colheita, transporte e extração do óleo essencial, bem como as receitas. Procedeu-se a uma análise econômica, calculando os principais indicadores econômicos. Posteriormente foi feita uma análise de sensibilidade, utilizando-se a técnica de simulação de Monte Carlo, por meio do software @Risk. Uma vez reunidos e analisados os dados, fixaram- se parâmetros mínimos, médios e máximos para as distribuições de probabilidade triangular dos custos de implantação, manutenção, colheita, destilação e receita, oriundos do projeto de produção do óleo essencial, permitindo uma melhor avaliação dos indicadores econômicos perante a análise de riscos. Observou-se que o custo de implantação foi de R$3.016,71 por ha, enquanto os outros custos anuais por ha foram com manutenção (R$6.909,09), colheita (R$961,36) e extração (R$3.414,13). A receita anual obtida pela venda de 82 litros de óleo essencial foi de R$12.272,73. A análise econômica considerou um projeto de 11 anos e uma taxa de desconto anual de 10%. Encontraram-se um VPL de R$3.054,98 por ha, uma TIR de 30,46% ao ano, um VAE de R$497,18 por ha, um CMPr de R$143,92 por litro de óleo essencial ao ano e uma B/C de 1,04, indicando a viabilidade econômica da cultura. A análise de sensibilidade indicou uma baixa probabilidade de a atividade tornar-se inviável economicamente, sendo ela mais afetada pela receita anual e menos pelo custo de implantação e taxa de desconto anual. Com base nos resultados obtidos pelas análises econômica e de sensibilidade anteriormente citados, concluiu-se que a produção desse óleo na região é economicamente viável. Através da baixa tecnologia e cuidados especiais requeridos pela cultura (não necessitando de mão-de-obra especializada), da produtividade regional compatível com a da Austrália, dos baixos custos de implantação e manutenção (salvo cuidados com irrigação e capina) e da baixa necessidade de investimentos, com conseqüente possibilidade de produção em pequena e média escalas, verificou-se uma excelente oportunidade de investimento para agricultores da região, com a cultura apresentando uma viabilidade técnica satisfatória. / The objective of this work was to analyze technically and economically Melaleuca alternifolia Cheel cultivation and essential oil extraction. This work was developed based on data monitoring and collection from planting (1x1 m spacing) to oil extraction, in the municipality of São Miguel do Anta, Zona da Mata Norte , State of Minas Gerais, Southeastern Brazil. Data on cultivation profits and costs for seedling production, implantation, maintenance, harvest, transport and essential oil extraction, as well as revenue were collected. An economical analysis was performed using the Monte Carlo simulation technique with the @Risk software. Once data was gathered and analyzed, minimum, medium and maximum parameters were established for the triangular probability distributions of costs for implantation, maintenance, harvest, distillation, and revenue, derived from the project of essential oil production, allowing a better evaluation of the economical indicators for the risk analysis. It was observed that the implantation cost was R$ 3,016.71 per hectare. Other annual costs per hectare were maintenance (R$ 6,909.09), harvest (R$ 961.36) and extraction (R$3,414.13). The annual revenue for the sales of 82 L of essential oil was R$ 12,272.73. The economical analysis considered an 11 year-old project and a 10% annual discount rate. A R$ 3,054.98 VPL per hectare, 30.46% TIR per year, R$ 497.18 VAE per hectare, R$ 143.92 CMPr per liter of essential oil per year and a 1.04 B/C were found, indicating the economical viability of this crop. The analysis of sensitivity showed a low probability for the activity to become economically non-viable, being more affected by the annual revenue and less by the implantation cost and the annual discount rate. Based on the results obtained from the aforementioned economical and sensitivity analysis, it was concluded that the production of this oil in this region is economically viable. Since this crop does not require any special care (no skilled workforce needed) and utilizes low-technology, the local productivity is similar of that in Australia, and considering the low costs of implantation and maintenance (except for irrigation and weeding), the low need for investments, and the resulting possibility of small and medium scale production, an excellent investment opportunity for farmers of this region is observed, as this crop shows a satisfying technical viability. / Não foi localizado o cpf do autor.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Cystic echinococcosis (CE) is a zoonotic disease caused by Echinococcus genus. The larval stage (hydatid cyst) of the parasite causes serious public health problems, and affects various species of animals, causing economic losses to the meat industry. This study aimed to identify samples of fertile hydatid cysts in cattle and characterize them molecularly, analyzing in vitro and ex vivo Melaleuca alternifolia oil activity (tea tree oil - TTO) and its formulation in nanoemulsion (NE-TTO) and saris an (terpinen 4-ol) front to protoscolices of Echinococcus spp. Two thousand three hundred and ninety-six samples with cysts derived from an abattoir in the central region of the RS were analyzed, where 295 samples were classified as hydatid cysts by the presence of protoscolices. In PCR reactions for the 12S gene, 251 positive samples were identified for the group of genotypes G5/G6/G7 (E. ortleppi/ E. canadensis) and 40 samples for the G1 genotype (E. granulosus sensu stricto). In PCR subsequently, 250 samples were positive for G5 (E. ortleppi) and one sample for G7 (E. canadensis). A sample (n=12) of PCR products using the region of cox I gene, which was sequenced and compared with samples deposited in Genbank. Phylogenetic analysis identified three distinct groups E1, E2 and E3, which were grouped in sequences with greater similarity. The organ most affected by echinococcosis in cattle was the lung. After confirming the fertility of the cyst, protoscolices were removed and evaluated for viability using eosin 0.1%. For in vitro testing, concentrations of 2.5, 5 and 10 mg/mL of TTO, 10mg/mL of NE-TTO and 1, 1.5 and 2 mg/mL of terpinen-4-ol were analyzed front to protoscolices of E. ortleppi previously identified, in times of 5, 10, 15 and 30 minutes. For ex vivo test, TTO 10mg/mL and 20mg/mL was injected directly into hydatid cysts of E. ortleppi (n = 20) at times of 5, 15 and 30 minutes, and for each time one aliquot of protoscolices was removed for feasibility detection and implementation of PCR to confirm the species involved in the parasitism. Results of this in vitro study showed the protoscolicidal effect of M. alternifolia in all tested formulations and concentrations. Terpinen-4-ol (2mg/mL) had a better action when compared with the highest concentration of pure oil (TTO 10mg/mL). Nanoemulsion formulations (10mg/mL) showed a good activity front to the protoscolices. In ex vivo analysis, TTO (20mg/mL) showed 100% protoscolicidal action in hydatid cyst in 15 minutes. This study is pioneer in Brazil in identifying the potent effect of protoscolicidal M. alternifolia front protoscolices of E. ortleppi, being this kind of Echinococcus genus responsible for most fertile hydatid cysts analyzed in cattle in RS. / A equinococose cística (EC) é uma infecção zoonótica causada por parasito do gênero Echinococcus. O estágio larvário (cisto hidático) do parasito causa sérios problemas de saúde pública, além de acometer várias espécies de animais, ocasionando prejuízos econômicos à indústria de carnes. Neste contexto, o objetivo desse estudo foi identificar amostras de cistos hidáticos férteis em bovinos e caracterizá-las molecularmente, além de analisar in vitro e ex vivo a atividade anti-helmíntica do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO), bem como sua formulação em nanoemulsão (NE-TTO) e seu componente majoritário (terpinen 4-ol) frente aos protoescóleces de Echinococcus spp. Foram analisadas 2396 amostras de cistos oriundos de bovinos abatidos em frigorífico da região central do RS, onde 295 amostras foram classificadas como cistos hidáticos pela presença de protoescóleces. Nas reações de PCR para o gene 12S, pode-se identificar 251 amostras positivas para o grupamento de genótipos G5/G6/G7 (E. ortleppi/ E. canadensis) e 40 amostras para o genótipo G1 (E. granulosus sensu stricto). Em subsequente PCR foram identificadas 250 amostras positivas para G5 (E. ortleppi) e uma amostra positiva para G7 (E. canadensis). Uma amostragem (n=12) dos produtos de PCR utilizando o gene da região cox I, foi sequenciada e comparada com amostras depositadas no Genbank. A análise filogenética identificou três grupos distintos E1, E2 e E3, onde agruparam-se sequências com maior similaridade. O órgão mais acometido pela parasitose em bovinos foi o pulmão. Após a confirmação da fertilidade do cisto, os protoescóleces foram retirados e avaliados quanto à viabilidade utilizando eosina 0.1%. Para o teste in vitro, concentrações de 2.5, 5 e 10mg/ml de TTO, 10mg/ml de NE-TTO e 1, 1.5 e 2mg/ml de Terpinen 4-ol foram analisadas frente aos protoescóleces de E. ortleppi previamente identificados, nos tempos de 5, 10, 15 e 30 minutos. Para o teste ex vivo, TTO 10mg/ml e 20mg/ml foi injetado diretamente em cistos hidáticos de E. ortleppi (n=20) nos tempos de 5, 15 e 30 minutos, para cada tempo foi retirada uma alíquota de protoescóleces para detecção da viabilidade e realização do PCR para confirmação da espécie envolvida na parasitose. Os resultados deste estudo in vitro indicaram efeito protoescolicida de M. alternifolia em todas as formulações e concentrações testadas. O Terpinen 4-ol (2mg/ml) obteve uma melhor ação quando comparado com a maior concentração testada do óleo puro (TTO 10mg/ml). As formulações em nanoemulsão (10mg/ml) demonstraram atividade frente aos protoescóleces. Na análise ex vivo, TTO (20mg/ml) apresentou 100% de ação protoescolicida no cisto hidático em 15 minutos. O presente estudo torna-se pioneiro no Brasil a identificar o potente efeito protoescolicida de M. alternifolia frente aos protoescóleces de E. ortleppi, sendo essa espécie do gênero Echinococcus a responsável pela maior parte dos cistos hidáticos férteis analisados em bovinos no RS.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daiane Cristine Mirante.pdf: 2726451 bytes, checksum: 032734e58cd5a2dc0e010068ceda3d38 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The development of antimicrobial agents is one of the most important advances in the therapeutic area due to microbial resistance, causing problems to public health, with serious economic, social and political implications. Thus, this study aimed to the technological development of microparticles of biopolymer poly-L-lysine (PLL) and polymeric nanocapsules containing essential oil of Melaleuca alternifolia Cheel uncoated or coated with PLL. The microparticles were obtained by the spray drying technique with a yield of 42.4%. The nanocapsules were prepared by interfacial deposition technique of a preformed polymer. The nanocapsules showed average nanometer diameter (160-200 nm), polydispersity index of less than 0.25 and negative zeta potential for nanocapsules poly(caprolactone) (PCL) (-39.8 mV) and positive for the nanocapsules of PLL (+17, 75 mV), indicating that there was an electrostatic adsorption interaction between PCL and PLL. An analytical method was developed and validated by UV-vis pectrophotometry in order to enable a reliable determination of encapsulation efficiency (EE). This method showed specificity, linearity, precision, detection and quantification satisfactory limits according to current recommendations. The EE was 99.86%. The antimicrobial activity of micro systems and nanocapsules was evaluated, containing PLL against the microorganisms, E. coli S. aureus, S. pyogenes, P. aeruginosa and C. albicans. The results demonstrate that the incorporation of the essential oil of M. alternifolia in the nanostructured system developed has been able to increase their antibacterial activity. The microparticles and nanocapsules, can, in the future, be promising antimicrobial agents, promoting the development of an effective therapeutic alternative and more effective at lower doses. / O desenvolvimento de agentes antimicrobianos representa um dos mais importantes avanços na área terapêutica, devido à resistência microbiana acarretar problemas para a saúde pública, com sérias implicações econômicas, sociais e políticas. Visto isso, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento tecnológico de micropartículas do biopolímero -poli-L-Lisina (PLL) e de nanocápsulas poliméricas contendo óleo essencial de Melaleuca alternifolia Cheel, revestidas ou não -PLL. As micropartículas foram obtidas pela técnica de secagem por aspersão com rendimento de 42,4 %. As nanocápsulas foram preparadas pela técnica de deposição interfacial de um polímero pré-formado. As nanocápsulas apresentaram diâmetro médio nanométrico (160-200 nm), índice de polidispersão inferior a 0,25 e potencial zeta negativo para as nanocápsulas de poli(-caprolactona) (PCL) (-39,8 mV) e positivo para as nanocápsulas de PLL (+17,75 mV), demonstrando que houve o processo de adsorção por interação eletrostática entre a PCL e a PLL. Foi desenvolvido e validado um método analítico por espectrofotometria de UV-Vis com a finalidade de permitir uma determinação confiável da eficiência de encapsulação (EE). Este método apresentou especificidade, linearidade, precisão, limites de detecção e quantificação satisfatórios de acordo com as recomendações vigentes. A EE foi de 99,86%. Foi avaliada a atividade antimicrobiana dos sistemas micro e nanoencapsulados contendo PLL contra os micro-organismos E. coli, S. aureus, S. pyogenes, P. aeruginosa e C.albicans. Os resultados demonstram que a incorporação do óleo essencial de M. alternifolia no sistema nanoestruturado desenvolvido foi capaz de aumentar a sua atividade antibacteriana. As micropartículas e as nanocápsulas, podem futuramente ser agentes antimicrobianos promissores, promovendo o desenvolvimento de uma alternativa terapêutica eficaz com doses menores e mais efetivas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-28Bitstream added on 2014-06-13T20:56:27Z : No. of bitstreams: 1 rasteiro_vmc_me_sjc.pdf: 1221269 bytes, checksum: f3aeff19484ca0a9a263ca0d701959a9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antimicrobiana in vitro e in vivo dos óleos essenciais de Cymbopogon citratus e Melaleuca alternifolia sobre Candida albicans. No estudo in vitro foi determinada a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de M. alternifolia e C. citratus em culturas planctônicas de C. albicans de acordo com as normas da NCCLS. Os efeitos dos óleos essenciais também foram testados sobre biofilmes de C. albicans formados no fundo da placa de 96 poços por 48 horas. Para a realização do estudo in vivo, foram utilizados 42 camundongos imunossuprimidos por injeções de prednisolona. A indução de candidose experimental foi realizada por inoculações de C. albicans (108 células/mL) no dorso da língua dos animais e administração de tetraciclina na água de beber. A seguir, os camundongos foram tratados com 3 aplicações do óleo essencial de C. citratus, M. alternifolia ou solução fisiológica (grupo Controle) no dorso da língua. Foram realizadas coletas de amostras bucais, antes e após o tratamento, para recuperação de leveduras da cavidade bucal dos animais e contagem de UFC/mL. Após 5 dias da indução da candidose experimental, os animais foram submetidos à eutanásia para análise histológica e de microscopia eletrônica do dorso da língua. Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes de Tukey e Kruskal-Wallis (p ≤ 0,05). Os resultados obtidos nos testes realizados in vitro demonstraram que a CIM foi de 0,195% para M. alternifolia e menor que 0,01% para C. citratus. A redução microbiana observada nos biofilmes de C. albicans foi de 6,88 e 5,84 log, respectivamente, para M. alternifolia e C. citratus. Em relação à recuperação de C. albicans da cavidade bucal dos animais... / The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity in vitro and in vivo of essential oils of Cymbopogon citratus and Melaleuca alternifolia on Candida albicans. In vitro study was determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of M. alternifolia and C. citratus in planktonic cultures of C. albicans according to NCCLS standards. The effects of essential oils were also tested on biofilms of C. albicans formed deep inside the 96-well plate for 48 hours. For the study in vivo, we used 42 mice immunosuppressed by injections of prednisolone. The induction of experimental candidiasis was performed by inoculation of C. albicans (108 cells / mL) on the back of the tongue of animals and administration of tetracycline in drinking water. Next, the mice were treated with three applications of the essential oil of C. citratus, M. alternifolia or saline (control group) on the back of the tongue. Samples were collected with mouth before and after treatment for recovery of yeasts from the oral cavity of animals and number of CFU / mL. 5 days after induction of experimental candidiasis, the animals were euthanized for histological and electron microscopy of the tongue. The results were statistically analyzed by Tukey's test and Kruskal-Wallis test (p ≤ 0.05). The results obtained in in vitro tests showed that the MIC was 0.195% for M. alternifolia and less than 0.01% for C. citratus. The microbial reduction observed in biofilms of C. albicans was 6.88 and 5.84 log, respectively, for M. alternifolia and C. citratus. Regarding the recovery of C. albicans from the oral cavity of animals, there was a reduction of 6.49 log for microbial M. alternifolia and 5.95 for log C. citratus. In the microscopic analysis of the tongue, there was... (Complete abstract click electronic access below)