Protozoários do gênero Leishmania são parasitas digenéticos, com uma fase no tubo digestório de um hospedeiro invertebrado (promastigota), e uma fase parasita intracelular de macrófagos (amastigotas). Estudar a demanda de L-arginina no parasita é interessante, uma vez que o aminoácido é indispensável para a sobrevida do parasita e, ao mesmo tempo, serve de substrato para a produção de óxido nítrico, principal composto microbicida dos macrófagos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o transporte de arginina em Leishmania (Leishmania) amazonensis do ponto de vista fisiológico e caracterizar o gene que codifica o transportador do aminoácido, bem como a regulação da sua expressão em resposta a diferentes condições biológicas. Para medir o influxo de L-arginina em fagolisossomos, utilizamos macrófagos J774 infectados com L. (L.) amazonensis e desenvolvemos uma metodologia com citometria de fluxo com sorting para a purificação da organela. Validamos microscopicamente a presença do parasita na organela por sua fluorescência, e avaliamos a integridade da membrana externa dessa com marcador de pH ácido. Paralelamente, o gene que codifica o transportador de arginina do parasita foi caracterizado. Foram encontradas duas cópias em tandem que produzem dois transcritos (5.1AAP3 e 4.7AAP3), cujas regiões 5\'UTR e 3\'UTR são diferentes. Por meio de PCR quantitativo em tempo real, avaliamos a expressão desses transcritos e verificamos que 5.1AAP3 é mais expressa ao longo do desenvolvimento do parasita, com um máximo em fase estacionária. A determinação da meia-vida dos mRNA das duas cópias indicou uma duração de 32,6±5,0min para o mRNA de 4.7AAP3, enquanto que o de 5.1AAP3 não apresentou decaimento até 180min do estudo, evidenciando que a estabilidade maior pode ser a razão de sua maior abundância. A submissão de parasitas à privação de arginina levou a aumento na tomada do aminoácido concomitante ao aumento do transcrito 5.1AAP3. Mutantes nulos de arginase submetidos à privação de arginina respondem com uma taxa de incorporação mais baixa em relação aos parasitas selvagens, e mantém a resposta à privação mesmo com os parasitas em fase estacionária, diferente do observado nos parasitas selvagens. Esse conjunto de resultados nos levou a sugerir que a expressão do transportador pode ser regulada pela estabilidade do mRNA, e que o pool de arginina interno ao parasita pode controlar, num mecanismo de retroalimentação negativo, a expressão de seu transportador. / Protozoan of genus Leishmania are digenetic parasites that present a stage in the life in insect gut (promastigotes) and an intracellular phase (amastigotes) inside vertebrate host macrophages. The study of L-arginine influx consists in an interesting matter, since the amino acid is used on NO production pathway (the main macrophage microbial pathway) but are also important for parasites survival. The aim of this work was to perform a genetic and physiological characterization of the arginine transport in Leishmania (Leishmania) amazonensis. To verify how does the arginine uptake occurs in the phagolisosomes, we used J774 macrophages infected with L. (L.) amazonensis to establish a flow cytometry sorting protocol to purify the organelle. Microscopic validation of organelle integrity was achieved by acidic pH marker treatment and detection of fluorescent parasites. The arginine transporter coding gene was characterized. We found two copies in tandem that produces two transcripts, named 5.1AAP3 and 4.7AAP3, with distinct 5\'UTR and 3\'UTR. By quantitative real time PCR we found that 5.1AAP3 mRNA expression varies along parasite development. This copy was, also, more abundant than 4.7AAP3 mRNA. This last mRNA showed a half-life of 32.6±5.0 min, while the 5.1AAP3 mRNA did not decay until 180min. As response to arginine starvation, wild type parasites increase the uptake of arginine, as well as the abundance of 5.1AAP3 mRNA. Arginase null parasites starvation responses showed lower arginine uptake rates compared to wild type responses. Unlike wild type, the null mutants also respond to starvation in stationary phase. This data set allow us to propose that arginine internal pool can downregulate its transporter expression in a feed-back mechanism.

O aumento do custo das matérias primas para produção de rações e a crescente preocupação com o meio ambiente têm alavancado diversos estudos com enzimas exógenas adicionadas na alimentação de aves. No presente estudo, uma protease foi adicionada em dietas de frangos de corte formuladas com milho, farelo de soja e farinha de carne e ossos. Utilizou-se um total de 1764 pintos de 1 dia de idade machos Ross X Ross 308 alojados em 63 boxes, com 28 aves cada. Estas aves foram divididas em sete tratamentos, com nove repetições cada. O programa alimentar teve uma dieta Inicial do alojamento até 21 d (2915 kcal EM/kg. 21,5% PB) e uma dieta crescimento até 40 d (3000 kcal EM/kg. 19,0% PB). As dietas foram suplementadas com 0, 100, 200, 400, 800, 1600 g/ton de um mono-componente enzimático proteolítico. Dióxido de titânio (1 kg/ton) foi adicionado como um marcador indigestível na dieta na última semana. Os tratamentos foram distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado. Aos 40 d, 8 aves de cada repetição foram retiradas aleatoriamente e sacrificadas após insensibilização elétrica. Estas aves foram processadas e tiveram seu conteúdo ileal coletado e homogeneizado dentro de cada repetição para análise de aminoácidos. Não houve resposta significativa para ganho de peso corporal, no entanto, conversão alimentar apresentou uma melhora linear (p 0.05) de acordo com o aumento da concentração enzimática na dieta. A análise de contraste entre as aves alimentadas ou não com a protease apresentou uma melhora significativa da uniformidade do peso corporal aos 40 d nas aves suplementadas com a protease (p 0,05). Além disso, aves alimentadas protease mostraram melhora significativa (p 0,05) na digestibilidade de met e his em 2,6 e 2,1 %, respectivamente. / Increased costs of feedstuffs for animal production and growing concerns with the environment have been fuelling studies with exogenous enzymes added to poultry feeds. In the present study a protease was added to broiler diets formulated with corn. soybean meal and meat and bone meal. A total of 1,764 male Ross X Ross 308 broiler chicks were placed in 63 floor pens. 28 in each. Birds were divided into seven treatments with nine replications each. The feeding program had a starter from placement to 21 d (2,915 kcal ME/Kg. 21.5% CP) and a grower diets to 40 d (3000 Kcal ME/kg. 19.0% CP). Diets were supplemented with 0, 100, 200, 400, 800 e 1,600 g/ton of a mono component protease. Titanium dioxide was added as an indigestible maker in the last week’s diet at 1 kg/ton. Treatments were distributed in a complete randomized design. At 40 d. 8 broilers were randomly taken from each pen and sacrificed after electrical stunning. Ileal contents were collected from each processed bird and pooled by pen for amino acid analyses. There was no significant response for body weight gain; however. FCR was linearly improved (p 0.05) as enzyme was gradually increased in the diets. The contrast analysis between birds fed or not with the protease demonstrated significant improvement in body weight uniformity at 40 d for those fed the protease (p 0.05). Also. birds fed any level of the protease showed significant (p 0.05) improvements in the digestibility of methionine and histidine by 2.6 and 2.1 %. respectively.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-18T12:07:21Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 482560 bytes, checksum: d580975f1f62e46343a350e2b55d516b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-18T12:07:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 482560 bytes, checksum: d580975f1f62e46343a350e2b55d516b (MD5) Previous issue date: 2005-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Conduziu-se um experimento com o objetivo de determinar os coeficientes de digestibilidade ileal verdadeiro da proteína e dos aminoácidos digestíveis de um concentrado protéico, utilizando duas técnicas: dieta isenta de proteína (DIP) e dieta com caseína hidrolisada enzimaticamente (Casein Hydrolised Enzymatically - CHE), para determinação das perdas endógenas de proteína, de aminoácidos e de nitrogênio, Foram utilizados 12 suínos mestiços, machos, castrados, com o peso médio de 35 kg, submetidos previamente à cirurgia para implantação da cânula “T” simples. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com três tratamentos, quatro repetições e um animal por unidade experimental. Os tratamentos foram constituídos por: tratamento 1. dieta com CHE, tratamento 2; dieta isenta de proteína e tratamento; e 3. dieta com 23% do concentrado protéico teste. Comparando as duas técnicas a utilização da CHE proporcionou aumento dos valores estatísticos das perdas endógenas para proteína bruta de 4,57% e para os aminoácidos glutamina, serina e cistina (P<0,01) e para os aminoácidos arginina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, valina, alanina, ácido aspártico e tirosina (P<0,05); no entanto para os aminoácidos triptofano, glicina e prolina não foram observadas diferenças significativas (P>0,05). Os coeficientes de digestibilidade ileal verdadeiro dos aminoácidos metionina, treonina, triptofano e serina que foram determinados pelas perdas endógenas com dieta contendo CHE foram superiores estatisticamente àqueles em que se utilizaram as perdas endógenas com DIP. As quantidades das secreções protéicas e de aminoácidos obtidas pela técnica da CHE foram superiores às obtidas pela técnica da DIP. Os coeficientes de digestibilidade verdadeira da proteína foram inferiores, e os dos aminoácidos, superiores, quando determinados pelo método da CHE. / The objective of this study was to compare two endogenous losses determination techniques for protein, aminoacid and nitrogen, the diet without protein (DIP) and enzime-hydrolysed casein (CHE) techniques, to evaluate the true digestibility coefficients of proteins and digestible aminoacid of the protean nucleus tested. Twelve half-breed male swine were used, castrated at 35 kg of weight, previously submitted to a surgery for implantation of the simple “T” stem. The experimental delineation was entirely random with 3 treatments, 4 repetitions and one animal as experimental unit. The treatments were constituted of: treatment 1 containing diet with enzyme-hydrolysed casein (CHE), treatment 2, diet without protein (DIP) and treatment 3 diet containing 23% of the protean nucleus tested. The real digestibility coefficient values of the brute protein were higher when determined through the DIP technique. However there were significant statistical differences for the aminoacids glutamine, serine and cystine (P<0.01) and for arginine, hystidin, isoleucin, leucin, lysine, metyonine, phenylalanine, threonyne, valin, alanine, aspartic acid and tyrosine (P<0.05). For tryptofan, glycin, and proline there were no significant differences (P>0.05). The amounts of protein and amino acids secretions obtained by the CHE technique were superior to obtained by the DIP technique the coefficients of real protein digestibility were inferiors and the coefficients of real amino acid digestibility were superiors.

Esta tese foi realizada objetivando comparar 4 programas alimentares, em dietas à base de milho e farelo de soja, formuladas com ou sem restrição de proteína bruta (PB), suplementadas ou não com L-Val e L-Ile, e usando diferentes níveis de lisina digestível (dig.). Os programas alimentares (PRG) foram: PRG 1, PB limitada a um mínimo (22,4, 21,1, 19,8, 18,4% para as fases pré-inicial, inicial, crescimento e final, respectivamente, com relações de AA:Lis definidos apenas para Met+Cis (0,72) e Tre (0,65); PRG 2, a PB não foi restrita e as relações estendidas para Val (0,77) e Ile (0,67); PRG 3, mesmas restrições do PRG 2 e suplementadas com L-Val; PRG 4, mesmas restrições do PRG 3, e suplementadas com L-Ile. Dois experimentos foram realizados, um com 1.800 e outro com 4.800 pintos machos Cobb x Cobb 500 de 1 dia de idade. No primeiro experimento, as rações foram formuladas usando os 4 PRG e níveis de Lis dig. de 1,324%, 1,217%, 1,095% e 1,006% ou 5% maiores, para cada fase, totalizando 8 tratamentos e 9 repetições cada. Para o segundo experimento, os 4 PRG foram utilizados até 1-21 d, totalizando 4 tratamentos com 48 repetições. E de 22 a 42 dias, cada PRG foi subdividido nos 4 PRG, passando cada PRG da fase anterior a receber todos os 4 PRG para as fases de crescimento e final, totalizando 16 tratamentos com 12 repetições cada. Não houve interação entre os tratamentos em ambos os experimentos, com exceção para o ganho de peso (GP) e conversão alimentar (CA) de 36 a 43d, no primeiro experimento, onde aves alimentadas com PRG 2 demonstraram melhorias no GP e CA quando alimentadas com um aumento de 5% no nível de Lis. Também, o GP e a CA acumulados aos 35 e 43d foram melhores quando as aves foram alimentadas com o PRG 2, sem diferença estatística para o PRG 3 e 4. Um aumento em 5% no nível de Lis dig. resultou na melhoria da CA acumulativa aos 43d. A gordura abdominal, como porcentagem da carcaça eviscerada aos 43d, foi maior para as aves alimentadas com a PRG 1. No segundo experimento, as aves alimentadas com PRG 2 tiveram melhor CA de 22 a 42d e de 1 a 42d, mas sem diferença estatística para os PRG 3 e 4. As aves alimentadas com PGR 1 de 1 a 42d apresentou o menor GP e o pior CA sem diferenças entre os PGR 2 e 3, e os PGR 3 e 4, respectivamente. Os dados do presente estudo demonstram que a suplementação de dietas para frangos de corte com fontes sintéticas dos cinco primeiros AA limitantes permitiram resultados de desempenho semelhantes a uma dieta com PB restrita a um valor mínimo. / This thesis was carried out to compare four corn-soy feeding programs formulated with or without crude protein (CP) restrictions supplemented with or without L-Val and L-Ile, and using different digestible (dig.) Lys levels. Feeding programs (PRG) were: PRG 1, CP was restricted to a minimum (22.4, 21.1, 19.8, 18.4% for pre starter, starter, grower and finisher phases, respectively) with AA to Lys ratios set only for TSAA (0.72) and Thr (0.65); PRG 2, CP was not restricted while minimum ratios were also extended to Val (0.77) and Ile (0.67); PRG 3, restrictions were as in PRG 2 but with L-Val added; PRG 4, restrictions were as in PRG 3, but with L-Ile added. For this two experiments were conducted, one using 1,800 and the other using 4,800 oneday- old Cobb 500 male broiler chicks. For the first experiment, feeds had formulated using the 4 PRG and dig. Lys as 1.324%, 1.217%, 1.095% and 1.006% or 5% higher, for each phase, totaling 8 treatments with 9 replicates each. For the second experiment, the 4 PRG were used from 1 to 21 d, totaling 4 treatments with 48 replicates. From 22 to 42d, each PRG was subdivided in 4 PRG having the same rational as it was done to 21d, where each of the 4 PRG began receiving all 4 PRG for grower and finisher phases, totaling 16 treatments with 12 replicates each. No interaction was found between treatments in both experiments, with one exception for body weight gain (BWG) and feed conversion ratio (FCR) from 36 to 43d, in the first experiment, with birds fed PRG 2 demonstrating improvements in BWG and FCR when fed the 5% increasing in dig. Lys. And also, cumulative BWG and FCR at 35 and 43d and in each individual feeding phases showed broilers from PRG 2 having the best BWG and FCR; however, mean separations using Tukey showed no difference from birds fed PRG 3 and 4. Feeding a dietary program with 5% increase in dig. Lys resulted in improvement in cumulative FCR at 43d. Abdominal fat, as a percentage of the eviscerated carcass at 43d, was highest for birds fed the PRG 1. For the second experiment, birds fed with PRG 2 led to the best FCR from 22 to 42d and from 1 to 42d, but without statistical difference from PRG 3 and 4. Birds fed PGR 1 from 1 to 42d showed the lowest BWG and the highest FCR without statistical differences from PGR 2 and 3 and PGR 3 and 4, respectively. Data from the current study demonstrate that the supplementation of broiler diets with crystalline sources of the first five limiting AA allowed performance results similar to those produced when CP is restricted to a minimum.

GUSMÃO, Gustavo Oliveira de Meira. Estudo das propriedades vibracionais do aminoácido DL-metionina por Espectroscopia Raman. 2014. 87 f. Tese (Doutorado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Edvander Pires (edvanderpires@gmail.com) on 2014-10-31T21:05:15Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_gomgusmao.pdf: 3607583 bytes, checksum: 0a291595482cfd3c0bfa53179df9d6cf (MD5) / Approved for entry into archive by Edvander Pires(edvanderpires@gmail.com) on 2014-10-31T21:06:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_gomgusmao.pdf: 3607583 bytes, checksum: 0a291595482cfd3c0bfa53179df9d6cf (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-31T21:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_gomgusmao.pdf: 3607583 bytes, checksum: 0a291595482cfd3c0bfa53179df9d6cf (MD5) Previous issue date: 2014 / In this work, DL-methionine crystals (C5H11NO2S) are investigated by Raman spectroscopy varying the thermodynamic parameters temperature and pressure. Raman scattering measurements were performed on DL-methionine amino acid (C5H11NO2S) in the form at room temperature in the spectral region between 40 and 3200 cm-1. Subsequently the vibrational modes and wave numbers of the isolated methionine molecule through density functional theory (DFT) calculations were computed by implementing the exchange-correlation functional B3LYP and the basis set of 6-31 G (d, p) with the aid the Gaussian 03. The computational calculations reproduced the characteristics of the material in good agreement with the experimental spectrum. Based on this agreement, it was possible to associate the observed wave numbers with atomic displacements in the molecules. Also for the molecule of DL-methionine calculations distribution of potential energy PED were performed, allowing classifying eigenmodes with greater precision and confront those that have been reported in the literature. Measurements of Raman scattering in the crystal of DL-methionine in the spectral region between 50 cm-1 and 3200 cm-1 were performed from room temperature to the temperature of 10 K. In the spectra, no significant changes were observed, only temperature effects associated with decreasing anharmonicity. In the Raman spectroscopy experiments varying the temperature between 298 K and 443 K, it was found that the crystal of DL-methionine has undergone a structural phase transition at around 338 K, which were detected in the Raman spectra through the changes exhibited by the peaks associated with vibrations mainly attributed to carboxyl (CO2-), NH3+ group, CS and CC bonds and CH2 and CH3 groups. The analysis of the Raman spectra obtained after returning to room temperature revealed the crystal DL-methionine retrieves the beta phase. The experiment of thermal analysis confirms the structural phase transition suggested by Raman spectroscopy experiments at high temperatures. Raman scattering as a function of hydrostatic pressure measurements were done in the DL-methionine crystal. The experiments were performed in the spectral range between 50 cm-1 and 1200 cm-1 compressing the sample from atmospheric pressure up to the pressure of 5.1 GPa and then decompressing it to atmospheric pressure. Changes related to the vibrations of the CO2- and NH3+ units and external modes changes show that the crystal undergoes a structural phase transition at 1.5 GPa involving some of the hydrogen bonds. The results of the decompression show that the phase transition is reversible. / Neste trabalho, cristais de DL-metionina (C5H11NO2S) são investigados através de espectroscopia vibracional variando-se os parâmetros termodinâmicos temperatura e pressão. Medidas de espalhamento Raman foram realizadas no aminoácido DL-metionina (C5H11NO2S) na forma à temperatura ambiente na região espectral entre 40 e 3200 cm-1. Posteriormente foram computados os modos vibracionais e os números de onda da molécula isolada da DL-metionina na forma (C5H11NO2S) através de cálculos de teoria do funcional de densidade (DFT), implementando o funcional de troca e correlação B3LYP e a função de base 6-31 G(d,p) com o auxílio do programa Gaussian 03. Os cálculos computacionais reproduziram as características do material em boa concordância com o espectro experimental. Com base neste acordo, foi possível associar os números de onda observados aos deslocamentos atômicos nas moléculas. Ainda para a molécula de DL-metionina foram realizados cálculos de distribuição de energia potencial PED, o que possibilitou classificar os modos normais de vibração com maior precisão e confrontar com as que foram reportadas na literatura. Foram realizadas medidas de espalhamento Raman no cristal de DL-metionina na região espectral entre 50 cm-1 e 3200 cm-1 desde a temperatura ambiente até a temperatura de 10 K. Nos espectros não foram observadas mudanças significativas, apenas redução dos efeitos de anarmonicidade que se refletiu na mudança de intensidades e larguras de linha. Nos experimentos de espectroscopia Raman variando a temperatura entre 298 K e 443 K, verificou-se que o cristal de DL-metionina sofreu uma transição de fase estrutural em torno de 338 K, as quais foram detectadas no espectro Raman através das mudanças nos picos associados principalmente às vibrações atribuídas ao grupo carboxila (CO2-), e ao grupo anino NH3+, e à ligações CS e CSC e grupos CH2 e CH3. A análise dos espectros Raman obtidos após o retorno a temperatura ambiente revelaram que o cristal de DL-metionina recupera a fase inicial. O experimento de análise térmica confirmou a transição de fase estrutural sugerida pelos experimentos de espectroscopia Raman a altas temperaturas. Medidas de espalhamento Raman em função da pressão hidrostática foram realizadas no cristal de DL-metionina. Os experimentos foram feitos no intervalo espectral entre 50 cm-1 e 1200 cm-1 comprimindo a amostra desde a pressão atmosférica até a pressão de 5,1 GPa e em seguida descomprimindo-a até a pressão atmosférica através do uso de uma célula de pressão a extremos de diamante. Mudanças observadas nos modos externos e em modos relacionados às vibrações das unidades CO2 e NH3+ evidenciaram que o cristal sofre uma transição de fase estrutural em 1,5 GPa, envolvendo ligações de hidrogênio. Os resultados obtidos na descompressão da amostra mostraram que a transição de fase é reversível.

Objetivou-se avaliar o efeito da suplementação de um complexo enzimático, composto principalmente por endo 1,4 xilanase e endo 1,3(4) β-glucanases (CE), sobre o desempenho produtivo, a digestibilidade de aminoácidos (AA) e a utilização da energia em frangos de corte. Foram alojados 2.016 frangos de corte machos Cobb x Cobb 500 de um dia de idade em 72 boxes experimentais. As aves foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado com 9 tratamentos, 8 repetições e 28 aves por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de uma dieta controle, formulada com níveis usuais de energia metabolizável aparente (EMA) e aminoácidos digestíveis (AA dig.) sem a inclusão do CE; e 8 dietas com reduções de EMA (-80 e -120 kcal/kg) e de AA dig. (-3% e 6%), suplementadas ou não com 50 mg/kg do CE. Foi utilizado um programa alimentar de 3 fases: inicial (1 a 21 d), crescimento (22 a 35 d) e final (36 a 42 d). Todas as dietas foram formuladas a base de milho e farelo de soja e com 1% de Celite, utilizado como indicador indigestível. Ganho de peso, consumo de ração e conversão alimentar corrigida para mortalidade (CA) foram avaliados aos 21, 35 e 42 d. Nos dias 21 e 42, 4 aves por unidade experimental foram sacrificadas para coleta de conteúdo ileal e posterior determinação da energia digestivel ileal (EDI) e da digestibilidade de AA. Os dados foram submetidos à análise de variância e, quando significativas, as médias foram comparadas pelo teste de Student-Newman-Keuls a 5% de significância. Contrastes ortogonais foram realizados entre os tratamentos com reduções nutricionais com e sem adição do CE. Frangos alimentados com dietas com reduções de energia e de AA dig. sem a adição do CE apresentaram maior CA e menor EDI quando comparados aos frangos que receberam a suplementação do CE. A suplementação do CE nas dietas aumentou a digestibilidade total de AA aos 21 d, porém não houve efeito aos 42 dias. A maior liberação de energia proporcionada pelo CE foi observada aos 21 d em frangos de corte alimentados com dietas com -120 kcal/kg AME e -6% AA dig., sendo 5,8% maior quando comparados aos alimentados com a dieta análoga sem enzima. Conclui-se que a adição do CE melhorou o desempenho produtivo e resultou em aumento da digestibilidade de AA e do aproveitamento da energia em frangos de corte aos 21 e aos 42 d. / The objective of this study was to evaluate the effect of supplementation of an enzyme complex, composed of endo 1,4 xylanase and endo 1,3 (4) β-glucanases (EC), on the productive performance, amino acid digestibility (AA) and the use of energy in broilers. A total of 2,016 one-day-old Cobb x Cobb 500 male broilers were allocated in 72 floor pens. Chicks were distributed into 9 treatments with 8 replicates of 28 birds each in a completely randomized design. Treatments consisted of a control diet formulated with usual apparent metabolizable energy (AME) and nutrient levels without enzyme supplementation as well as 8 diets having reductions in formulated AME (-80 and -120 kcal/kg) and digestible amino acids (dig. AA; -3 and -6%) supplemented or not with 50 mg/kg of the supplemental enzyme complex. A 3 phases feeding program was used: Starter (1 to 21 d), Grower (22 to 35 d) and Finisher (36 to 42 d). All diets were corn-soybean meal based with 1% of Celite, used as marker. Body weight gain, feed intake and feed conversion corrected for the weight of dead birds (FCR) were evaluated at 21, 35 and 42 d. On days 21 and 42, four birds per experimental unit were sacrificed for ileal content collection and subsequent determination of ileal digestible energy (IDE) and AA digestibility. Data were submitted to analysis of variance and, when significant, the means were compared by the Student-Newman-Keuls test at 5% significance. Orthogonal contrasts were performed between treatments with nutritional reductions with and without EC addition. Diets with AME and dig. AA reductions without enzyme had higher FCR and lower IDE (P < 0.05). The supplemental enzyme increased total AA digestibility at 21 d; however, no effects were observed at 42 d. The highest energy improvement provided by the supplemental enzyme was observed at 21 d on broilers fed diets with -120 kcal/kg AME and -6% dig. AA, being 5.8% higher when compared to those fed the analogous diet without enzyme. Summarizing, the addition of EC led to improvements on growth performance, digestibility of AA and energy utilization on broilers at 21 and 42 d.

Submitted by RAFAEL MASSAMI SUZUKI null (rafael-msuzuki@hotmail.com) on 2016-04-25T16:27:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Rafael - Definitiva.pdf: 1828628 bytes, checksum: 7ab33dfa0c92841eda9e9c68bfc23a60 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-27T18:43:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suziki_rm_me_jabo.pdf: 1828628 bytes, checksum: 7ab33dfa0c92841eda9e9c68bfc23a60 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-27T18:43:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suziki_rm_me_jabo.pdf: 1828628 bytes, checksum: 7ab33dfa0c92841eda9e9c68bfc23a60 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos relacionados a utilização de um determinado nutriente são importantes para se obter conhecimentos a respeito do aproveitamento deste nutriente pelo animal, uma vez que há nem tudo o que é fornecido, é aproveitado pelo mesmo. Dessa forma, o que foi de fato utilizado para o animal pode ser convertido em produção animal, como um acréscimo proteico nos frangos de corte, ou então a utilização de nutrientes para a produção de ovos em poedeiras. A utilização de aminoácidos marcados nos permite avaliar processos metabólicos em diferentes estudos nutricionais, tanto no processo de incorporação refletido no processo de turnover, quanto na deposição do aminoácido nos diferentes tecidos. Deste modo, o trabalho teve como enfoque a utilização da L-(15N) treonina que foi explorada por meio de três abordagens diferentes: verificar a distribuição deste aminoácido marcado em diferentes tecidos de frangos de corte por meio de um balanço de massas (Capítulo 2); calcular a eficiência de utilização nestes tecidos, ou seja, calcular qual foi o aproveitamento da L-(15N) treonina ingerida que foi depositada/incorporada a esses tecidos (Capítulo 2); e por fim, analisar o turnover da L-(15N) treonina para se analisar a incorporação do aminoácido no tecido (Capítulo 3). / Studies related to the utilization of a particular nutrient are important to obtain knowledge regarding the utilization of this nutrient by the animal, because only a part of the nutrient will be used. Thus, what was in fact used for the animal can be converted to livestock as an increase in protein broilers, or the use of nutrients to egg production of laying hens. The use of labeled amino acids allows us to evaluate metabolic processes in different nutritional studies, both in the incorporation process reflected in the turnover process, as the amino acid deposition in different tissues. Thus, the aim of the work was to focus the utilization of L-(15N) threonine, which was explored by three different approaches: verify the distribution of labelled amino acid in different tissues of broiler chickens through a mass balance (Chapter 2 ); calculate the utilization efficiency of these tissues or the L-(15N) threonine intake which has been deposited / incorporated into these tissues (Chapter 2); and finally, to analyze the turnover of L-(15N) for threonine analyzing the amino acid incorporation into the tissue (Chapter 3). / FAPESP: 2013/25761-4

O aumento do custo das matérias primas para produção de rações e a crescente preocupação com o meio ambiente têm alavancado diversos estudos com enzimas exógenas adicionadas na alimentação de aves. No presente estudo, uma protease foi adicionada em dietas de frangos de corte formuladas com milho, farelo de soja e farinha de carne e ossos. Utilizou-se um total de 1764 pintos de 1 dia de idade machos Ross X Ross 308 alojados em 63 boxes, com 28 aves cada. Estas aves foram divididas em sete tratamentos, com nove repetições cada. O programa alimentar teve uma dieta Inicial do alojamento até 21 d (2915 kcal EM/kg. 21,5% PB) e uma dieta crescimento até 40 d (3000 kcal EM/kg. 19,0% PB). As dietas foram suplementadas com 0, 100, 200, 400, 800, 1600 g/ton de um mono-componente enzimático proteolítico. Dióxido de titânio (1 kg/ton) foi adicionado como um marcador indigestível na dieta na última semana. Os tratamentos foram distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado. Aos 40 d, 8 aves de cada repetição foram retiradas aleatoriamente e sacrificadas após insensibilização elétrica. Estas aves foram processadas e tiveram seu conteúdo ileal coletado e homogeneizado dentro de cada repetição para análise de aminoácidos. Não houve resposta significativa para ganho de peso corporal, no entanto, conversão alimentar apresentou uma melhora linear (p 0.05) de acordo com o aumento da concentração enzimática na dieta. A análise de contraste entre as aves alimentadas ou não com a protease apresentou uma melhora significativa da uniformidade do peso corporal aos 40 d nas aves suplementadas com a protease (p 0,05). Além disso, aves alimentadas protease mostraram melhora significativa (p 0,05) na digestibilidade de met e his em 2,6 e 2,1 %, respectivamente. / Increased costs of feedstuffs for animal production and growing concerns with the environment have been fuelling studies with exogenous enzymes added to poultry feeds. In the present study a protease was added to broiler diets formulated with corn. soybean meal and meat and bone meal. A total of 1,764 male Ross X Ross 308 broiler chicks were placed in 63 floor pens. 28 in each. Birds were divided into seven treatments with nine replications each. The feeding program had a starter from placement to 21 d (2,915 kcal ME/Kg. 21.5% CP) and a grower diets to 40 d (3000 Kcal ME/kg. 19.0% CP). Diets were supplemented with 0, 100, 200, 400, 800 e 1,600 g/ton of a mono component protease. Titanium dioxide was added as an indigestible maker in the last week’s diet at 1 kg/ton. Treatments were distributed in a complete randomized design. At 40 d. 8 broilers were randomly taken from each pen and sacrificed after electrical stunning. Ileal contents were collected from each processed bird and pooled by pen for amino acid analyses. There was no significant response for body weight gain; however. FCR was linearly improved (p 0.05) as enzyme was gradually increased in the diets. The contrast analysis between birds fed or not with the protease demonstrated significant improvement in body weight uniformity at 40 d for those fed the protease (p 0.05). Also. birds fed any level of the protease showed significant (p 0.05) improvements in the digestibility of methionine and histidine by 2.6 and 2.1 %. respectively.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 366440 bytes, checksum: 2511220b1b0ec987ad7eb7c382dd5258 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The experiment was conduced with objective of evaluate the effect of digestible tryptophan levels on the performance and carcass characteristics of heavy swine. A number of 80 commercial hybrid castrated swine males of high genetic potential for lean deposition on carcass were used, with initial and final body weight; respectively, of 97.0 ± 2.81 kg and 125.0 ± 3.31 kg distributed in a randomized experimental block design, with five treatments (0.124; 0.133; 0.142; 0.151 e 0.160% % of digestible tryptophan), respectively to the relationships of 16.5; 17.7; 18.9; 20.1 e 21.3% of digestible tryptophan lysine, with eight repetitions and two animals in each experimental unit. The digestible tryptophan level influenced the daily gain that improved by a quadratic way until the level of 0.144 %. The digestible tryptophan intake increased in a linear way when the tryptophan intake level was increased in the diet. It was not observed effect of the treatments on feed intake, feed conversion and carcass characteristics. It was concluded that the level of 0.144% of digestible tryptophan, corresponding a relationship of digestible tryptophan: lysine of 19.2%, provided the best results of weight gain for barrows with high genetic potential for lean deposition, from 97.0 to 125.0 kg. / O experimento foi conduzido para avaliar o efeito dos níveis de triptofano digestível sobre o desempenho e as características de carcaça de suínos pesados. Foram utilizados 80 suínos machos castrados híbridos comerciais, de alto potencial genético para deposição de carne magra na carcaça, com peso inicial de 97,0 ± 2,81 kg, distribuídos em delineamento experimental de blocos ao acaso, com cinco tratamentos (0,124; 0,133; 0,142; 0,151 e 0,160% de triptofano digestível), correspondendo às relações de 16,5; 17,7; 18,9; 20,1 e 21,3%, de triptofano: lisina digestíveis, com oito repetições e dois animais por unidade experimental. Os animais permaneceram no experimento até atingirem o peso final de 125,0 ± 3,31 kg. Os níveis de triptofano digestível das rações influenciaram o ganho de peso dos animais, que melhorou de forma quadrática até o nível estimado de 0,144%. O consumo de triptofano digestível aumentou de forma linear em função dos níveis de triptofano da dieta. Não houve efeito significativo dos tratamentos sobre o consumo de ração, conversão alimentar e características na carcaça. Concluiu-se que o nível estimado de 0,144% de triptofano digestível correspondente à uma relação de 19,2% com a lisina digestível, proporcionou a melhor resposta de ganho de peso dos suínos machos castrados de alto potencial genético, dos 97,0 aos 125,0 kg.

Submitted by MARIANA KIYOMI MARUNO null (mkmaruno@hotmail.com) on 2016-08-27T11:58:08Z No. of bitstreams: 1 MarunoMK_Tese.pdf: 1894584 bytes, checksum: 005c208a24cbace9a87dd40260b94115 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-30T14:37:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maruno_mk_dr_bot.pdf: 1894584 bytes, checksum: 005c208a24cbace9a87dd40260b94115 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maruno_mk_dr_bot.pdf: 1894584 bytes, checksum: 005c208a24cbace9a87dd40260b94115 (MD5) Previous issue date: 2016-08-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo tem por objetivo avaliar se a metodologia de isótopos estáveis convalida e acrescenta informações adicionais às obtidas com a metodologia convencional de dose e resposta de em estudos de exigências nutricionais em frangos de corte. O estudo presente no Capítulo II avaliou o período que compreendeu de 1 a 20 dias de idade e, foi realizado um ensaio experimental aplicando-se a metodologia de dose e resposta outro com a de diluição isotópica. Os ensaios foram em delineamento inteiramente casualisado e em ambos, foram utilizadas dietas experimentais seguindo as recomendações propostas por Rostagno et al. (2011) exceto em lisina digestível. As dietas foram balanceadas a base de plantas do ciclo fotossintético C3 e consistiram em: 100Lys (1,17% de lisina, seguindo a recomendação de Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1,01% de lisina); 90Lys (1,06% de lisina); 95Lys (1,11% de lisina); 105Lys (1,23% de lisina); 110Lys (1,29% de lisina) e 115Lys (1,35% de lisina digestível). No ensaio com aplicação da técnica de dose-resposta avaliou-se desempenho e rendimento de carcaça e no ensaio que foi utilizado técnica dos isótopos estáveis, foi avaliado o turnover de 13C do fígado, tíbia, músculo do peito e da coxa. Para desempenho foi observado diferença significativa para consumo de ração (P<0,013), com maior consumo para os frangos do tratamento 100Lys e menor para 95Lys. As aves do tratamento 105Lys (P<0,007) foi o que apresentou maior rendimento de carcaça, porém quando avaliado em termos de peso absoluto, observou-se maior peso para carcaça (P<0,001), peito (P<0,001) e coxa (P<0,027) para o tratamento 115Lys e, maior peso de coxa (P<0,001) para o tratamento 105Lys. Para diluição isotópica pôde-se observar que o nível de lisina presente na dieta influencia diretamente as taxas de turnover, de crescimento e metabólica. As aves do tratamento 85Lys foram as que apresentaram maiores valores de meia vida e troca total, quando avaliadas as taxas de turnover e metabólica. Já quando os níveis de lisina administrados eram acima ou os conforme recomendados por Rostagno et al. (2011), verificou-se reduções das taxas de turnover e metabólica. Baseado nos resultados de rendimento de carcaça e de turnover, observou-se que o tratamento 100Lys foi o mais adequado para frango de corte na fase inicial. O Capílulo III avaliou de 22 a 42 dias de idade e, foi realizado um ensaio utilizando a metodologia de dose e resposta, e outro, com a metodologia de diluição isotópica. Os ensaios foram em delineamento inteiramente casualisado e em ambos foram utilizadas dietas experimentais seguindo as recomendações propostas por Rostagno et al. (2011), exceto em lisina digestível. As dietas foram à base de plantas do ciclo fotossintético C3 e consistiram em: 100Lys (1,04% de lisina, conforme recomendado por Rostagno et al., 2011)); 85Lys (0,89% de lisina); 90Lys (0,94% de lisina); 95Lys (0,99% de lisina); 105Lys (1,09% de lisina); 105Lys (1,14% de lisina) e 115Lys (1,21% de lisina digestível). O ensaio com o uso da técnica de dose e resposta objetivou avaliar o desempenho e rendimento de carcaça e o ensaio com aplicação da técnica dos isótopos estáveis, o turnover de 13C do fígado, tíbia, músculo do peito e da coxa. Para análise de desempenho, rendimento e peso absoluto de carcaça e partes não foram observadas diferenças significativas para nenhuma variável analisada (P>0,05). Com os resultados gerados no ensaio de diluição isotópica, pôde-se observar que o nível de lisina presente na dieta influencia diretamente a taxa de turnover, de crescimento e metabólica, principalmente para os músculos da coxa e do peito. Para os tecidos musculares, o tratamento 85Lys foi o que apresentou menores valores de meia vida e troca total. Quando os níveis eram acima do recomendado Rostagno et al. (2011), o tratamento 115Lys, promoveu redução da taxa de turnover e metabólica. Para essa metodologia, o tecido muscular esquelético e o fígado mostraram ser mais adequado, diferentemente da tíbia. Baseado nos resultados das análises isotópicas, o tratamento 115Lys favoreceu a taxa de troca isotópica, diferentemente do tratamento 85Lys, sendo então considerado menos adequado para frango de corte na fase de crescimento. / This study aims to evaluate and validate the methodology of stable isotopes and adds additional information to those obtained with conventional methodology dose and response in studies of nutrient requirements of broilers from 1 to 20 days of age fed with different levels of lysine digestible. We conducted a trial test using the dose response methodology and another with the isotopic dilution. The tests were completely randomized design and in both the diets followed the recommendations proposed by Rostagno et al. (2011) except lysine. Diets were formulated based on the plants photosynthetic cycle C3 and consisted of: 100Lys (1.17% lysine, according to the recommendation of Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1.01% lysine); 90Lys (1.06% lysine); 95Lys (1.11% lysine); 105Lys (1.23% lysine); 110Lys (1.29% lysine) and 115Lys (1.35% digestible lysine). In the assay with dose-response technique, performance and carcass yield were evaluated and the assay technique of stable isotopes was evaluated carbon-13 turnover in the liver, tibia, breast and thigh muscle. Performance analysis showed a significant difference only for feed intake (P<0,013), with higher consumption for 100Lys treatment and lower for 95Lys. The 105Lys treatment showed the highest carcass yield (P<0,007), but when measured in terms of absolute weight, there was a heavier weight for carcass (P<0,001), breast (P<0,001) and thigh (P<0,027) for 115Lys treatment and, the heavier weight for drumstick (P<0,001) for105Lys treatment. In isotope dilution assay, it was observed that the level of lysine in the diet directly influences turnover rates, growth and metabolic. The 85Lys treatment showed the lowest values of half-life and full exchange when evaluated the rates of turnover and metabolic. But when the lysine levels were administered were above or as recommended by Rostagno et al. (2011), there are reductions in the rates and metabolic turnover. Based on the results of carcass yield and turnover, it was observed that the treatment 100Lys was suitable for broilers in the initial stage. / FAPESP: 2014/07099-5