Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In order to determinate technicals to execution trials in protected environments for italian pumpkin was accomplished an experiment, from 18/08/2003 to 07/12/2003, in the area of the Department of Fitotecnia UFSM, in plastic greenhouse, with four rows and each row consisted of twenty-four plants. A total of twenty-seven harvests were made, evaluating fruit weight with length ≥15cm. The sample soil was sampled before accomplishment the experiment; one sample point is equal to four sub sample. The Smith heterogeneity index was estimated using SMITH s method (1938) and optimum plot size using method modified maximum curvature (MEIER & LESSMAN, 1971). Estimate, for how long productive period of italian pumpkin, in plastic greenhouse, must be evaluated aiming to estimate the experimental error and the difference among four intervals of harvest, was the aim in order to first paper. The harvest and evaluation of the initial half of the productive period of Italian pumpkin in plastic greenhouse was sufficient to estimate the experimental error, using six plants by plot, to evaluate different intervals of harvest. Because of high experimental error, the evaluation of the Italian pumpkin production during all the productive period is not sufficient to differentiate four treatments of intervals of harvest. The aim the second paper, was evaluate the chemicals characteristics of the soil heterogeneity index under environmental protect and determinate sample size. The values the Smith heterogeneity index were considerate small. The optimum plot size was equal to one basic unit, in other words, one sample point. The sample size estimated was ten sample points for the half width of the confidence interval of 20%, to 5% of error probability. The third paper, aimed evaluate the Smith heterogeneity index in order to different intervals of the harvest of fruits in different levels of the accumulate harvests of italian pumpkin in greenhouse, estimate the optimum plot size and determinate the least significant differences within treatments with variation in the size plot and number of replications. The Smith heterogeneity index is smaller and the use of smaller plots with larger number of replications benefit the experimental precision. The optimum plot size in order to yield italian pumpkin varying between one and seven plants, promoted appropriate evaluation of the yield italian pumpkin in the different studied treatments. Plots with three plants and six replications is better in order conduction the experiments, with least significant differences within treatments (average percentage) in 75,94%. / Para se determinar técnicas para execução de experimentos, sob ambiente protegido, para a cultura da abobrinha italiana, foi realizado um experimento em estufa plástica no período de 18/08/2003 a 07/12/2003, em área pertencente ao Departamento de Fitotecnia, na UFSM, Santa Maria, RS. As mudas foram transplantadas para a estufa plástica com espaçamento de 0,80 m entre plantas e 1,0 m entre filas, totalizando 24 plantas por fila. Foram realizadas 27 colheitas de frutos,com comprimento ≥ 15 cm. As amostras de solo foram coletadas antes da implantação do experimento, cada ponto amostral era composto por quatro subamostras. O índice de heterogeneidade de Smith (b) foi estimado pelo método de SMITH (1938) e o tamanho ótimo de parcela através do método da máxima curvatura modificado (MEIER & LESSMAN, 1971). A estimativa do erro experimental e a diferença entre quatro intervalos de colheita foram avaliados no primeiro trabalho. A colheita e avaliação da metade inicial do período produtivo da abobrinha italiana em estufa de plástica foi suficiente para estimar o erro experimental, usando seis plantas por parcela, para avaliar diferentes intervalos de colheita. O objetivo do segundo trabalho, foi avaliar o índice de heterogeneidade de Smith das principais características químicas do solo, em estufa plástica, e determinar o tamanho de amostra. Para todas variáveis analisadas, o índice de heterogeneidade de Smith, foi próximo a zero e o tamanho ótimo de parcela, foi igual à uma unidade básica, ou seja, um ponto amostral. O tamanho de amostra estimado, foi de dez pontos amostrais, como representativo para todas as variáveis analisadas, com semiamplitude do intervalo de confiança da média em porcentagem, de 20% em nível 5% de probabilidade de erro. O terceiro trabalho teve por objetivos avaliar o índice de heterogeneidade de Smith da produção de abobrinha italiana, para os diferentes intervalos de colheita dos frutos, em diferentes níveis de colheitas acumuladas, em ambiente protegido; estimar o tamanho ótimo de parcela e determinar a diferença mínima significativa entre tratamentos, variando o tamanho da parcela e o número de repetições. Como conclusão, o índice de heterogeneidade de Smith, foi baixo e o tamanho ótimo de parcela para a produção total de abobrinha italiana varia entre uma e sete plantas, conforme a freqüência de colheitas. O uso de parcelas com três plantas, seis repetições é mais adequado e apresenta uma diferença mínima significativa entre tratamentos, em porcentagem da média, de 75,94%.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4221.pdf: 1619993 bytes, checksum: e58f2b93617431fa47276cfbf3f7b73e (MD5) Previous issue date: 2012-02-15 / Universidade Federal de Sao Carlos / The objective of this work was to develop methodologies for the determination of inorganic constituents in meat sample and the study of correlations between samples with chemical elements profile, especially Nelore samples of project BifeQuali aimed at improving the quality of Brazilian meat. Three different strategies for sample preparation, basic extraction, acid extraction and microwave assisted acid digestion were optimized and evaluated, by using bovine liver certified reference material (NIST 1577b), and the decomposition assisted by microwave radiation chosen for the decomposition of 650 samples used in this work. For the measurements of chemical elements, mass spectrometry and optical emission inductively coupled argon plasma (ICP OES and ICP-MS, respectively) were used. The chemical elements quantified by ICP-MS were V, Mn, As, Co, Ni, Mo, Cd, Pb, Cr, Se and Fe, by ICP OES were Ca, K, Mg, Na, P, S and Zn. The use of internal standard (Sc, Y and Bi) contributed to the accuracy and precision of measurements. For principal component analysis (PCA) was developed a worksheet to perform the spectral scanning, monitoring 250 wavelength from 167 to 770 nm using ICP OES. The results showed that the crop that is bred proved to be an important variable, forming clusters corresponds to the two crops analyzed, which indicates that climatic factors affect the profile of chemical elements and the quality of nutrition. Moreover, the place of confinement is also presented as an important variable, showing the grouping according to the place where it was confined. Through PCA and analysis using SAS software was possible to observe the correlation between Na and K with the tenderness, and the higher the concentration of these, the lower the shear force, and the higher the tenderness / Esta tese teve como objetivo o desenvolvimento de metodologias para determinação de elementos químicos essenciais e tóxicos em amostra de carne bovina (Longissimus dorsi) e a identificação de possíveis correlações entre as informações obtidas. Assim, visou-se a rastreabilidade das amostras, em especial aquelas de gado Nelore pertencentes ao projeto BifeQuali , em desenvolvimento na Embrapa que objetiva a melhoria da qualidade da carne nacional. Foram otimizadas e avaliadas três diferentes estratégias de preparo de amostra: extração alcalina, extração ácida e digestão assistida por radiação micro-ondas, empregando amostra de fígado bovino certificado (NIST 1577b), sendo a decomposição assistida por radiação micro-ondas adotada como padrão para a decomposição das 650 amostras disponíveis para o trabalho. Para as quantificações foram utilizadas a espectrometria de massa e de emissão óptica com plasma de argônio indutivamente acoplado (ICP-MS e ICP OES, respectivamente). Os elementos químicos quantificados por ICP-MS foram As, Cd, Co, Cr, Fe, Mn, Mo, Ni, Pb, Se e V; já por ICP OES foram Ca, K, Mg, Na, P, S e Zn. A utilização de padrão interno (Sc, Y e Bi) contribuiu para a exatidão e precisão das quantificações. Os dados obtidos foram tratados estatisticamente e para as análises de componente principal (PCA) foi desenvolvida uma planilha para realizar varredura espectral de 250 comprimentos que compreendiam o intervalo de 167 a 770 nm, empregando ICP OES. Os resultados demonstraram que a safra em que o animal foi criado mostrou-se como parâmetro importante, formando os agrupamentos correspondentes às duas safras analisadas, fato que indica que os fatores climáticos afetam o perfil dos elementos químicos e na qualidade da alimentação do rebanho. Além disso, o local de confinamento também se apresentou como uma condição importante, mostrando o agrupamento de acordo com o local onde os animais eram confinados. As análises de PCA e as análises estatísticas indicaram existir correlação entre Na e K com a maciez da carne, sendo que quanto maior a concentração desses, menor será a força de cisalhamento, ou seja, maior será a maciez do contra-filé.

INTRODUÇÃO: O endotélio corneal exerce papel primordial para a fisiologia da córnea. Seus dados morfológicos gerados pelo microscópio especular (MEC) como densidade endotelial (DE), área celular média (ACM), coeficiente de variação (CV) e porcentagem de células hexagonais (HEX) são importantes para avaliar sua vitalidade. Para interpretar estes dados de forma padronizada e reprodutível, foi utilizado um programa estatístico de análise amostral, Cells Analyzer PAT. REQ.(CA). OBJETIVO: Demonstrar valores de referência para DE, ACM, CV e HEX. Demonstrar o percentual de células endoteliais marcadas e desconsideradas no exame ao marcar-se 40, 100 e 150 células em uma única imagem do mosaico endotelial e o perfil do intervalo de confiança (IC) das variáveis estudadas ao se considerar 40, 100, 150 e tantas células quantas indicadas pelo CA. Demonstrar o erro amostral de cada grupo estudado. MÉTODOS: Estudo transversal. Os exames de MEC foram realizados com o aparelho Konan NONCON ROBO® SP-8000, nos 122 olhos de 61 portadores de catarata (63,97 ± 8,15 anos de idade). As imagens endoteliais caracterizaram se pelo número de células marcadas e consideradas para cálculo dos seguintes dados: DE, ACM, CV e HEX. Os grupos foram formados de 40, 100, 150 células marcadas numa única imagem endotelial e Grupo CA em que foram marcadas tantas células quanto necessárias em diferentes imagens, para obter o erro relativo calculado inferior ao planejado (0,05), conforme orientação do programa CA. Estudou-se o efeito do número de células sobre IC para as variáveis endoteliais utilizadas. RESULTADOS: A média dos valores de referência encontrados para DE foi 2395,37 ± 294,34 cel/mm2; ACM 423,64 ± 51,09 m2; CV 0,40 ± 0,04 e HEX 54,77 ± 4,19%. O percentual de células endoteliais desconsideradas no Grupo 40 foi 51,20%; no Grupo 100, 35,07% e no Grupo 150, 29,83%. O número médio de células calculado inicialmente pelo CA foi 247,48 ± 51,61 e o número médio de células efetivamente incluídas no final do processo amostral foi 425,25 ± 102,24. O erro amostral dos exames no Grupo 40 foi 0,157 ± 0,031; Grupo 100, 0,093 ± 0,024; Grupo 150, 0,075 ± 0,010 e Grupo CA, 0,037 ± 0,005. O aumento do número de células diminuiu a amplitude do IC nos olhos direito e esquerdo para a DE em 75,79% e 77,39%; ACM em 75,95% e 77,37%; CV em 72,72% e 76,92%; HEX em 75,93% e 76,71%. CONCLUSÃO: Os valores de referência da DE foi 2395,37 ± 294,34 cel/mm2; ACM foi 423,64 ± 51,09 m2; CV foi 0,40 ± 0,04 e HEX foi 54,77 ± 4,19%. O percentual de células endoteliais desconsideradas no Grupo 40 foi 51,20%; no Grupo 100 foi 35,07% e no Grupo 150 foi 29,83%. O programa CA considerou correto os exames nos quais 425,25 ± 102,24 células foram marcadas entre duas e cinco imagens (erro relativo calculado de 0,037 ± 0,005). O aumento do número de células diminuiu a amplitude do IC para todas as variáveis endoteliais avaliadas pela MEC / INTRODUCTION: Corneal endothelium plays an important role in physiology of the cornea. Morphological data generated from specular microscope such as endothelial cell density (CD), average cell area (ACA), coefficient of variance (CV) and percentage of hexagonal cells (HEX) are important to analyze corneal status. For a standard and reproducible analysis of the morphological data, a sampling statistical software called Cells Analyzer PAT. REC (CA) was used. PURPOSE: To determine normal reference values of CD, ACA, CV and HEX. To analyze the percentage of marked and excluded cells when the examiner counted 40, 100, 150 cells in one endothelial image. To analyze the percentage of marked and excluded cells according to the statistical software. To determine the confidence interval of these morphological data. METHODS: Transversal study of 122 endothelial specular microscope image (Konan, non-contact NONCON ROBO® SP- 8000 Specular Microscope) of 61 human individuals with cataract (63.97 ± 8.15 years old) was analyzed statistically using CA. Each image was submitted to standard cell counting. 40 cells were counted in study Group 40; 100 cells were counted in study Group 100; and 150 cells were counted in study Group 150. In study group CA, the number of counted cells was determined by the statistical analysis software in order to achieve the most reliable clinical information (relative error < 0,05). Relative error of the morphological data generated by the specular microscope were then analyzed by statistical analysis using CA software. For Group CA, relative planned error was set as 0.05. RESULTS: The average normal reference value of CD was 2395.37 ± 294.34 cells/mm2, ACA was 423.64 ± 51.09 m2, CV was 0.40 ± 0.04 and HEX was 54.77 ± 4.19%. The percentage of cells excluded for analysis was 51.20% in Group 40; 35.07% in Group 100; and 29.83% in Group 150. The average number of cells calculated initially by the statistical software was 247.48 ± 51.61 cells and the average number of cells included in the final sampling process was 425.25 ± 102.24 cells. The average relative error was 0.157 ± 0.031 for Group 40; 0.093 ± 0.024 for Group 100; 0.075 ± 0.010 for Group 150 and 0.037 ± 0.005 for Group CA. The increase of the marked cells decreases the amplitude of confidence interval (right and left eyes respectively) in 75.79% and 77.39% for CD; 75.95% and 77.37% for ACA; 72.72% and 76.92% for CV; 75.93% and 76.71% for HEX. CONCLUSION: The average normal reference value of CD was 2395.37 ± 294.34 cells/mm2, ACA was 423.64 ± 51.09 m2, CV was 0.40 ± 0.04 and HEX was 54.77 ± 4.19%. The percentage of excluded cells for analysis was 51.20% in Group 40; 35.07% in Group 100 and 29.83% in Group 150. CA software has considered reliable data when 425.25 ± 102.24 cells were marked by the examiner in two to five specular images (calculated relative error of 0.037 ± 0.005). The increase of the marked cells decreases the amplitude of confidence interval for all morphological data generated by the specular microscope

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to compare the caterpillar and stinkbug collection capability of sampling methods and to determine the sample size (number of sampling points) to estimate the number of caterpillars and stinkbugs collected by three sampling methods in soybean plants. The study was carried out in the experimental area of the Phytosanitary Department of the Federal University of Santa Maria on an area of 6.1 ha of soybean crop; a grid of 154 sample points was marked with a 20 × 20 m spacement. In each of these 154 points caterpillars of the species Anticarsia gemmatalis, Pseudoplusia includens and Spodoptera eridania (small, large and total) and stinkbugs of the species Dichelops furcatus, Piezodorus guildinii, Nezara viridula, Euschistus heros, Edessa meditabunda and Acrosternum hilare (nymphs, adults and total) were collected by means of beating cloth, wide beating cloth and vertical beat sheet sampling on 14 different soybeans growth stages, for a total of 6468 sample collections. For the study comparing the ability to collect samples, data were compared by Student t test (bilateral) for data paired in the 5% level of probability. Sample sizes (number of sampling points) were calculated to estimate the average number of caterpillars and stinkbugs. The number of caterpillars collected by means of sampling decreases in the following order: vertical beat sheet, wide beating cloth and beating cloth. The number of bugs collected from the wide beating cloth and vertical beat sheet sampling exceeded the number of bugs in the beating cloth sampling method. Sample size differed among the species collected, between growth phases (small and large) and between crop development stages. After stage V11, the sample size decreased significantly, reaching the lowest values at stage R4. In the Critical phases of culture (R3 and R4) 15 sample points are needed to quantify the population density of caterpillars on soybean plants. To estimate the average number of stinkbugs, 52 sampling points (estimation error of 20%) are sufficient for the beating cloth method. For the wide beating cloth and vertical beat sheet methods 27 sampling points are required (estimation error of 20%) in a soybean crop. / Este trabalho teve por objetivos comparar a capacidade de coleta de métodos de amostragem de lagartas e de percevejos e determinar o tamanho amostral (número de pontos amostrais) para a estimativa do número de lagartas e percevejos coletados por três métodos de amostragem na cultura de soja. O trabalho foi realizado na área experimental do Departamento de Defesa Fitossanitária da Universidade Federal de Santa Maria, em área de 6,1 ha de soja, foi demarcado um gride de 154 pontos amostrais, espaçados de 20 × 20 m. Em cada um desses 154 pontos foram coletadas lagartas das espécies Anticarsia gemmatalis, Pseudoplusia includens e Spodoptera eridania (pequenas, grandes e total) e percevejos das espécies Dichelops furcatus, Piezodorus guildinii, Nezara viridula, Euschistus heros, Edessa meditabunda e Acrosternum hilare (ninfas, adultos e total), por meio dos métodos de amostragem pano-de-batida, pano-de-batida largo e pano-de-batida vertical, em 14 estádios fenológicos da cultura de soja, totalizando 6.468 coletas. Para o estudo de comparação da capacidade de coleta os dados foram comparados pelo teste t (bilateral) de Student para dados pareados, em nível de 5% de probabilidade. Foi calculado o tamanho de amostra (número de pontos amostrais) para a estimação da média de lagartas e percevejos. O número de lagartas coletadas por meio dos métodos de amostragem é decrescente na seguinte ordem: pano-debatida vertical, pano-de-batida largo e pano-de-batida. O número de percevejos coletados por meio dos métodos de amostragem pano-de-batida vertical e pano-de-batida largo é superior ao pano-de-batida. O tamanho de amostra diferiu entre as espécies coletadas, entre as fases (pequenas e grandes) e entre os estádios de desenvolvimento da cultura. Após o estádio V11 o tamanho de amostra diminuiu consideravelmente, atingindo os menores valores no estádio R4. Nas fases críticas da cultura (R3 e R4) são necessários 15 pontos amostrais para quantificar a densidade populacional de lagartas em lavoura de soja. Para a estimação da média do número de percevejos, 52 pontos amostrais (erro de estimação de 20%) são suficientes para o pano-de-batida. Para o pano-de-batida largo e pano-de-batida vertical são necessários 27 pontos amostrais (erro de estimação de 20%) em uma lavoura de soja.

The use of pesticides in agriculture and urban areas has always been associated with advantages and disadvantages. As benefits, the increase of the productivity of crops and the control of vectors that cause diseases can be highlighted. However, excessive use of these substances has been causing human health damage as well as environmental degradation, especially regarding to water resources. In the present work, a method for the determination of 62 pesticides residues in surface water using rotating disk sorptive extraction (RDSE) as sample preparation and determination by ultra-high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) was optimized and validated. Several parameters were evaluated during the development of the extraction method: time and rotational disk velocity in the extraction step, types and amounts of sorbents, sample pH, ionic strength, time and velocity of the rotating disk in the desorption step of the analytes and different desorption solvents. The best results were obtained using 50 mL of acidified sample at pH 2.0 and 2.5 g of NaCl. The velocity of rotation disk in the extraction stage was 1600 rpm in a time of 80 min. Inside the disk cavity the polymeric sorbent Oasis® HLB (20 mg) used. The desorption step of the analytes was performed with 3 mL of methanol for 60 min using a rotation velocity of 1600 rpm. The analytical curves showed linearity between 0.05 or 0.1 to 2 μg L-1, with r2 values greater than 0.99 for all compounds. The method LOQ values ranged from 0.05 to 0.1 μg L-1. The method showed suitable accuracy and precision, with recoveries between 70.1 and 119.9% and RSD ≤20% for the spiked levels at 0.05; 0.1; 0.5 and 2 μg L-1. The validated method was applied to 11 surface water samples from different river basins of the Rio Grande do Sul state. Only one sample presented no pesticide residues. The other samples presented residues of at least one of the following pesticides: atrazine, azoxystrobin, clomazone, difenoconazole, epoxiconazole, propoxur, simazine and tebuconazole. From the six hydrographic basins, all presented pesticides residues and the concentrations ranged between 0.06 and 0.35 μg L-1. Therefore, the results indicate that the proposed method is suitable for the analysis of pesticide residues in surface waters, allowing the preparation of several samples simultaneously with low material consumption. / O uso de agrotóxicos tanto na agricultura quanto na área urbana, sempre esteve associado a vantagens e desvantagens. Pode-se destacar como benefícios o aumento da produtividade das lavouras e o controle de vetores causadores de doenças. No entanto, a utilização excessiva destas substâncias vem causando malefícios à saúde humana e ao meio ambiente, principalmente no que diz respeito aos recursos hídricos. No presente trabalho, um método para a determinação de resíduos de 62 agrotóxicos em águas superficiais, utilizando extração sortiva em disco rotatório (RDSE) para o preparo de amostra e determinação por cromatografia líquida de ultra-alta eficiência acoplada à espectrometria de massas em série (UHPLC-MS/MS) foi otimizado e validado. Na otimização do método de extração foram avaliados diversos parâmetros como: diferentes tempos e velocidades de rotação do disco na etapa de extração, tipos e quantidades de sorventes, pH da amostra, força iônica, tempo e velocidade de rotação do disco na etapa de dessorção dos analitos e diferentes solventes de dessorção. Os melhores resultados foram obtidos utilizando 50 mL de amostra acidificada em pH 2 e adicionando 2,5 g de NaCl. A velocidade de rotação do disco na etapa de extração foi de 1600 rpm por um tempo de 80 min. Na cavidade do disco foi utilizado o sorvente polimérico Oasis® HLB (20 mg). A dessorção dos analitos foi realizada com 3 mL de metanol por 60 min usando uma velocidade de rotação de 1600 rpm. As curvas analíticas apresentaram linearidade entre 0,05 ou 0,1 a 2 μg L-1, com valores de r2 maiores que 0,99 para todos os compostos. O limite de quantificação do método variou entre 0,05 e 0,1 μg L-1. O método apresentou exatidão e precisão adequadas, com recuperações entre 70,1 e 119,9% e RSD ≤20% para níveis de fortificação 0,05; 0,1; 0,5 e 2,0 μg L-1. O método validado foi aplicado em 11 amostras de água superficiais de diferentes bacias hidrográficas do estado do Rio Grande do Sul. Apenas uma amostra não apresentou resíduos de agrotóxicos. As demais apresentaram resíduos de pelo menos um dos seguintes agrotóxicos: atrazina, azoxistrobina, clomazona, difenoconazol, epoxziconazol, propoxur, simazina e tebuconazol. Das seis bacias hidrográficas amostradas todas apresentaram resíduos de agrotóxicos e as concentrações variaram entre 0,06 e 0,35 μg L-1. Os resultados indicam que o método proposto é adequado para análise de resíduos de agrotóxicos em águas superficiais, permitindo o preparo de várias amostras simultaneamente com baixo consumo de material.

In recent years, the indiscriminate use of pesticides and a lack of adoption of good agricultural practices have been evidenced by the results of analyzes of residues of pesticides in food. Thus, the goal of this work was to develop and validate two methods for determination of pesticide residues in plum, apple, pear and peach, with analysis by ultra high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). In the development of the QuEChERS method, different conditions of the extract clean-up were tested. In the validation results, the linear range of the method was 5 to 200 μg kg-1 with recoveries were between 70 and 120% and RSD ≤20%. The practical limit of quantification (LOQ) for 161 compounds was 10 μg kg-1. In MSPD optimization, different sorbents (C18, florisil®, PSA, alumina, amino, silica, chitosan, Oasis® HLB, StrataTM-X and fluoridated) were tested as solid support in different proportions with the sample. The homogenization was carried out with metallic spheres and extraction with acetonitrile and ultrasound. Accuracy and precision results obtained by MSPD were adequate for 131 pesticides residues studied, with recovery results ranging between 70 and 120%, with RSD ≤ 20%. The studied compounds presented practical LOQ of 10 μg kg-1. In the analysis of 100 samples of the studied fruits, different pesticides residues were found in concentrations ranging from <LOQ to 2.334,6 μg kg-1. / Nos últimos anos, o uso indiscriminado de agrotóxicos e a não adoção das boas práticas agrícolas têm sido evidenciados pelos resultados de análises de resíduos de agrotóxicos em alimentos. Assim, este trabalho teve como objetivo desenvolver e validar dois métodos para determinação de resíduos de agrotóxicos em ameixa, maçã, pera e pêssego, com análise por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas em série (UHPLC-MS/MS). No desenvolvimento do método QuEChERS, diferentes condições da limpeza do extrato foram testadas. Nos resultados de validação, o intervalo linear do método foi de 5 a 200 μg kg-1, com recuperações entre 70 e 120% e RSD ≤ 20%. O limite de quantificação prático (LOQ) para 161 compostos foi de 10 μg kg-1. No desenvolvimento da técnica MSPD foram testados diferentes sorventes (C18, florisil®, PSA, alumina, amino, sílica, quitosana, Oasis® HLB, StrataTM-X e fase fluorada) como suporte sólido em diferentes proporções com a amostra. A homogeneização foi realizada com auxílio de esferas metálicas e a extração com acetonitrila e ultrassom. Os resultados de exatidão e precisão obtidos por MSPD foram adequados para resíduos de 131 agrotóxicos, com resultados de recuperação entre 70 e 120%, with RSD ≤ 20%. Os compostos estudados apresentaram LOQ prático de 10 μg kg-1. Na análise de 100 amostras das frutas estudadas, foram quantificados resíduos de diferentes agrotóxicos em concentrações entre <LOQ e 2.334,6 μg kg-1.

This thesis presents the use of ultrasonic radiation for the digestion of biodiesel samples (B100) for the determination of metal ions by electrochemical stripping techniques (potentiometric and voltammetric) using a glassy-carbon electrode modified with a mercury film. Biodiesel samples (50 mg) were subjected to digestion in glass tubes with a mixture of 3.0 mL of concentrated HCl and 4.4 ml H2O2 (30%), placed in an ultrasonic bath (40 kHz and 120 W) exactly on the higher intensity region (piezoelectric) of the ultrasound and sonicated for 40 min at room temperature (~ 20°C). These parameters were optimized using the chemometric technique of factorial design for the analysis of biodiesel samples spiked with ethanolic standard solutions of zinc, cadmium, lead and copper. Recovery values between 97 and 107% were observed in the optimal conditions found to zinc, cadmium, lead and copper. Residual carbon content (RCC) values after digestions were in the range of 3.05 to 3.75%. The simultaneous determination of zinc, cadmium, lead and copper using anodic stripping voltammetry revealed limit of detection (LD) values of 44 ng kg -1; 30 ng kg -1; 145 ng kg -1; 96 ng kg -1, respectively. Additionally, biodiesel samples (100 mg) were also treated in glass tubes with a mixture of 1.59 mL concentrated HCl and 3.0 ml H2O2 (30%) under sonication of an ultrasonic probe (sonication time 12.5 min, 25% amplitude, pulse of 5.0 s and time interval of 2.0 s). The parameters were also optimized employing the chemometric technique of factorial design for the analysis of spiked samples. Recovery values between 95 and 104% were observed in the satisfactory condition for zinc, cadmium, lead and copper. RCC values after digestions comprised values between 0.43 to 0.54%. For the simultaneous determination of zinc, cadmium, lead and copper using anodic stripping voltammetry obtained in the digestates employing the ultrasonic probe, the LD values found respectively for zinc, cadmium and copper were 25 ng kg -1 and for lead 56 ng kg -1. All results obtained using assisted digestion by ultrasonic bath and / or ultrasonic probe indicate that the proposed methods for the biodiesel sample preparation presents a comparable performance to traditional methods of digestion using acid blends, or yet digestions assisted by microwave radiation. / Esta tese apresenta o emprego da radiação ultrassônica para a digestão de amostras de biodiesel (B100) para a determinação dos íons metálicos por técnicas eletroquímicas de redissolução (potenciomérica e voltamétrica) empregando eletrodo de carbono vítreo modificado com filme de mercúrio. Amostras de biodiesel (50 mg) foram submetidas a digestão em tubos de vidro, com uma mistura de 3,0 mL de HCl concentrado e 4,4 ml de H2O2 (30%), colocados em um banho ultrassônico (40 kHz e 120 W) exatamente sobre a região de intensidade mais elevada (piezoelétricos) do ultrassom e sonicada durante 40 min a temperatura ambiente (~ 20 ºC). Estes parâmetros foram otimizados empregando-se a técnica quimiométrica de planejamento fatorial para a análise de amostras de biodiesel enriquecidas com soluções padrão etanólicas de zinco, cádmio, chumbo e cobre. Valores de recuperação entre 97 e 107 % foram verificados na condição de ótimo encontrada para zinco, cádmio, chumbo e cobre. Valores de RCC (teor de carbono residual) nos digeridos encontraram-se na faixa de 3,05-3,75%. A determinação simultânea de zinco, cádmio, chumbo e cobre empregando voltametria de redissolução anódica revelou valores de limite de detecção (LD) de 44 ng Kg-1; 30 ng Kg-1; 145 ng Kg-1 e 96 ng Kg-1, respectivamente. Adicionalmente, amostras de biodiesel (100 mg) também foram tratadas em tubos de vidro com uma mistura de 1,59 mL de HCl concentrado e 3,0 ml de H2O2 (30%), sob sonicação de uma sonda ultrassônica (tempo de sonicação de 12,5 minutos, amplitude de 25 %, tempo de pulso de 5,0 s em intervalo 2,0 s). Os parâmetros também foram otimizados empregando-se técnica quimiométrica de planejamento fatorial para a análise de amostras enriquecidas. Valores de recuperação entre 95 e 104% foram verificados nas condições satisfatórias para os íons metálicos zinco, cádmio, chumbo e cobre. Valores de RCC após as digestões compreendem valores entre 0,43-0,54 %. Na determinação simultânea de zinco, cádmio, chumbo e cobre empregando voltametria de redissolução anódica nos digeridos obtidos após tratamento com a sonda ultrassônica, os valores de LD encontrados respectivamente para os íons metálicos zinco, cádmio e cobre foram de 25 ng Kg-1 e para íon chumbo de 56 ng Kg-1. Todos os resultados obtidos empregando digestão assistida por banho de ultrassom e /ou sonda de ultrasssom indicam que os métodos propostos para o preparo de amostra de biodiesel apresentam um desempenho comparável aos metodos tradicionais de digestão que utilizam misturas ácidas, ou ainda as digestões assistidas por radiações de microondas. / Doutor em Química

O gênero Mazama é composto por cinco espécies no Brasil. São animais de visualização dificultada por causa de comportamentos evasivos, o que torna as capturas e os estudos comportamentais quase impossíveis. Assim, o uso de metodologias não invasivas para estudos ecológicos e genéticos destas espécies se torna necessário. A análise do DNA fecal está dentro das técnicas mais promissoras para esse fim. Este estudo objetivou genotipar amostras fecais, de uma população de veado-mateiro (Mazama americana) para a obtenção de informações genéticas e ecológicas. Para tanto, foram coletadas, com auxílio de um cão farejador, georreferenciadas e estocadas em etanol absoluto, 52 amostras fecais de cervídeos. A coleta realizou-se em um fragmento (21o20S 47o17W) de 600 ha de floresta estacional semidecidual. Dessas amostras coletadas, 31% (n=16) foram classificadas como frescas e 69% (n=36) como não frescas. O DNA foi extraído em torno de 30 dias após a coleta, usando o kit comercial QIAamp® DNA Stool Mini Kit, seguindo o protocolo do fabricante. Das 52 amostras, 45 foram identificadas por PCR/RFLP como pertencentes a M. americana e as demais apresentaram problemas de amplificação e digestão, permanecendo sem identificação. Amplificaram-se por PCR cinco locos microssatélites, e o sucesso de amplificação, visualizado em gel de agarose, variou com o tamanho dos locos e com a classe das amostras. O sucesso de amplificação foi de 65% das amostras da categoria fresca e 35% das amostras da categoria não fresca. Encontrou-se uma correlação negativa (R= -0,82) entre o tamanho dos fragmentos dos locos de microssatélites e o sucesso de amplificação. Foi possível identificar o sexo do animal em 43,7% das amostras fecais, pela amplificação do gene da amelogenina. Os locos microssatélites amplificados foram analisados em sequenciador automático. Os eletroferogramas gerados pelo seqüenciador impossibilitaram a genotipagem da maioria dos locos e amostras, tornando inviável qualquer análise genética e ecológica com confiabilidade. Fica evidente a dificuldade de se trabalhar com a metodologia do DNA fecal para a identificação individual e sexagem de amostras obtidas de Cervídeos florestais em vida livre. Algumas melhorias metodológicas (coleta de amostras fecais frescas, seleção de iniciadores para locos menores e quantificação do DNA extraído por PCR em tempo real) são sugeridas para o aumento nos índices de sucesso na genotipgem em estudos futuros. / Mazama genus is composed by five species in Brazil. All of them are difficult to observe due to their evasive behaviors, what makes the captures and behavioral studies almost impossible. Thus, the use of non invasive methodologies is necessary to study the ecology and genetics of these species. The fecal DNA analysis is one of the most promising techniques for this purpose. This study aimed to genotype a Mazama americana population faecal samples for obtaining genetics and ecological information. For this, 52 deer faecal samples were collected in a 600ha seasonal semideciduos forest fragment (21o20S 47o17W), with the help of a detection dog, stored in ethanol and georeferenced. Of these samples 31% (n=16) was classified as fresh and 69% (n=36) as not fresh. About thirty days after the collection the DNA was extracted using the QIAamp® DNA Stool Mini Kit following the manufacturers instructions. From the 52 samples collected and extracted, 45 were identified by PCR/RFLP as M. americana and the others showed amplification and digestion problems, remaining without identification. Five microsatellite loci were amplified by PCR and the amplification success, visualized in agarose gel, varied with the loco size and age class. The amplifications success occurred in 65% of the fresh samples and in 35% of the non-fresh samples and a negative correlation (R= -0.82) was found between amplification success and loci sizes. It was possible to identify the animal sex in 43% of the samples by the amelogenin gene. The microsatellite loci amplifications were analyzed in an automatic sequencer. The majority of the samples and loci were impossible to genotype because of the quality of the elestroferograms, what made impossible any reliable genetic and ecological analysis. It is evident the difficulty to work with the faecal DNA methodology using field collected forests deer samples for individual and sexual identifications. Some methodological improvements (collect fresh samples, select primers for shorter loci and quantify the extracted DNA by real time PCR) are suggested to increase the genotyping success indexes in future studies

Orientador: Isabel Cristina Sales Fontes Jardim / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T03:13:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morais_ElisaHelenadaCosta_D.pdf: 9967369 bytes, checksum: ea8d16d7416102a344421831d13e0740 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os pimentões destacam-se no Brasil como uma das hortaliças mais cultivadas. No entanto, de acordo com o Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos da Agência Nacional de Vigilância Sanitária, eles têm apresentado o maior índice de irregularidades com agrotóxicos não autorizados e/ou autorizados, sendo encontrados em concentrações acima do limite máximo de resíduo (MRL). Neste contexto, métodos utilizando dispersão da matriz em fase sólida (MSPD) com um sorvente constituído por poli(metiltetradecilsiloxano) imobilizado termicamente sobre sílica aluminizada, Si-Al(PMTDS), QuEChERS (tampão citrato), e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS) foram desenvolvidos e validados para determinação multirresíduo de agrotóxicos em pimentão verde. Ambos os métodos apresentaram seletividade, limites de quantificação (LOQ) menores que os MRL, linearidade, exatidão (recuperações entre 50 e 120%) e precisão (coeficientes de variação < 20%). Os métodos foram aplicados em amostras de pimentão verde do comércio, e pelo menos um dos analitos foi detectado na maioria das amostras. Embora ambos os métodos sejam adequados para o emprego em pimentão verde para determinação destes agrotóxicos, o método QuEChERS-LC-MS/MS proporcionou resultados mais satisfatórios com relação à exatidão, precisão e recuperação, e LOQ mais baixos. Também foi possível transferir o método desenvolvido por HPLC para cromatografia líquida de ultra eficiência (UHPLC), demonstrando algumas vantagens desta última técnica como menor tempo de análise, e reduzido volume de amostra, consumo de fase móvel e geração de resíduos, bem como menor efeito matriz e LOQ para a maioria dos analitos / Abstract: Bell peppers stand out in Brazil as one of the most cultivated vegetables. However, according to the Program for the Analysis of Pesticide Residues in Foods of the National Health Surveillance Agency, they have shown the highest rate of irregularities with non-approved and/or non-authorized pesticides being found at concentrations above the maximum residue limit (MRL). In this context, methods using either solid phase matrix dispersion (MSPD) with a sorbent consisting of poly (methyltetradecylsiloxane) thermally immobilized on aluminized silica, Al-Si (PMTDS), QuEChERS (citrate buffer), and liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) were developed and validated for multiresidue determination of pesticides in green peppers. Both methods presented selectivity, limits of quantitation (LOQ) smaller than the MRL, linearity, accuracy (recoveries between 50 and 120%) and precision (coefficients of variation <20%). The methods were applied to samples of green peppers from market, and at least one of the analytes was detected in the majority of the samples. Although both methods are suitable for employment in green pepper for determination of these pesticides, the QuEChERS-LC-MS/MS method provided more satisfactory results with respect to accuracy, precision and recovery, and a lower LOQ. It was also possible to transfer the developed HPLC method to ultra high performance liquid chromatography (UHPLC), demonstrating some advantages of the latter technique such as shorter analysis time, and reduced sample volume, mobile phase consumption and waste generation, as well as a lower matrix effect and LOQ for most analytes / Doutorado / Quimica Analitica / Doutora em Ciências

The study aimed to evaluate the influence of soybeans genotypes on spider mites populations, quantify the occurring damage from spider mite attack and determinate leaflet number collected from different genotypes to estimate the spider mite population. Two studies were carried, in São Sepé (20 genotypes) and in Santa Maria (25 genotypes). The experiments were carried in randomized block design with four replications in 4,5 and 5,0 x 25 m experimental units. Weekly samplings were carried collecting 25 leaflets from the medium stratum and 25 leaflets from the superior soybean plant stratum in each genotype and evaluated an area of 20 cm2 of each leaflet. To determinate the sample size was used the data from evaluations which at least one genotype presented average population superior to one spider mite cm-2. To estimate spider mite number was considered the number of immature + adults spider mites, averages were compared with t bootstrap test. Sample size was estimated for an amplitude of 2 and 4 spider mites 20cm-2 and the optimal sample size calculus. To quantify spider mite damage in each genotype was maintained infested plots and not infested plots by pulverizations of acaricide. The predominant specie was Mononychellus planki. Population of spider mites vary in different genotypes and concentrates on the plant superior stratum. The necessary sample size is crescent as population grows, at the beginning of the infestation, 50 leaflets are enough with CIA95% (confidence interval amplitude with 1-p=0,95) maximum equal to 2 spider mites 20cm-2. To quantify higher populations 150 leaflets is necessary with CIA95% maximum equal to 4 spider mites 20cm-2. Yield variation as response to spider mite populations attack depend on the studied genotype and to all genotypes there is difference between the infested and not-infested plots. Average damage on Santa Maria experiment was 493 kg ha-1 and São Sepé 427 kg ha-1 and average gain of 33,4%. / Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência de genótipos de soja na população de ácaros, quantificar os danos decorrentes do ataque de ácaros e determinar o número de folíolos a serem coletados em diferentes genótipos para a quantificação de sua população. Para isto, foram realizados dois experimentos localizados nos municípios de São Sepé (20 genótipos) e Santa Maria (25 genótipos). Os experimentos foram conduzidos no delineamento blocos ao acaso, com quatro repetições em parcelas de 4,5 e 5,0 x 25 m. Foram realizadas amostragens semanais através da coleta de 25 folíolos do extrato médio e 25 do extrato superior das plantas em cada genótipo, avaliando uma área de 20 cm2 por folíolo. Para a determinação do tamanho de amostra foram utilizados os dados das avaliações em que pelo menos um genótipo apresentou população média superior a um ácaro.cm-². Para o número de ácaros, utilizou-se os valores de imaturos + adultos, comparando as médias dos genótipos pelo teste t bootstrap. Foi estimado o tamanho de amostra para amplitudes de 2 e 4 ácaros 20cm-2 e realizado o cálculo do tamanho ótimo de amostra. Para quantificação dos danos dos ácaros manteve-se, em cada genótipo, parcelas infestadas e sem infestação, através de aplicação de acaricidas. A espécie predominante foi Mononychellus planki. A população de ácaros é diferente em função do genótipo e concentra-se na parte superior das plantas. O tamanho de amostras necessário é crescente em função do incremento da população de ácaros, no início das infestações 50 folíolos suficientes com AIC95% (amplitude do intervalo de confiança com 1-p=0,95) máxima igual a 2 ácaros 20cm-2. Para quantificação de populações mais elevadas são necessários 150 folíolos com AIC95% máxima igual a 4 ácaros 20cm-2. A variação no rendimento de grãos pelo ataque de ácaros depende do genótipo avaliado e, comparando a área controlada com a não controlada, há diferença para todos os genótipos. O dano médio no experimento de Santa Maria foi de 493 kg ha-1 e no de São Sepé 427 kg ha-1, com ganho médio de 33,4%.