Orientador: Sergio Lazzarini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T09:24:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CelsoHenriquede_M.pdf: 4447169 bytes, checksum: a5f0c977504907fc2280c3810d36740b (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Ácaros da poeira intradomiciliar têm sido considerados os principais aeroalérgenos da poeira de habitações humanas, sendo os colchões e travesseiros os principais locais de reservatório. Esse estudo avaliou a fauna acarina de 57 colchões da cidade de Campinas/SP e a sensibilidade cutânea de 124 pacientes com quadro sugestivo de atopia aos ácaros D. pteronyssinus, D. farinae e B. tropicalis, através de extratos padronizados em U.B.E., tentanto avaliar uma possível correlação entre os dados do levantamento acarino e a sensibilidade imediata observada. Foram coletadas amostras de poeira das duas faces dos colchões (superior e inferior), e estudadas quanto à presença de ácaros através de microscopia óptica. Os resultados dos testes cutâneos demonstraram positividade de 72,6% para o ácaro D. farinae, 66,9% para D. pteronyssinus e 47,4% para B. tropicalis. Quanto à fauna acarina, observou-se 3,5 vezes mais ácaros na parte inferior dos colchões, sendo encontrada uma média de 3.254 ácaros/g de poeira fina na parte inferior e 932 ácaros/g na parte superior. A principal família encontrada em ambas as partes dos colchões, foi a Pyrogiyphidae, sendo o ácaro D. pteronyssinus a principal espécie. A família Tarsonemidae foi a segunda mais encontrada na parte superior a Glycyphagidae a segunda na inferior. Houve diferença significativa entre o número de ácaros encontrados nas duas partes para as famílias Pyroglyphidae, Glycyphagidae, Acaridae e 'Outras Famílias'. O principal material de fabricação dos colchões foi a espuma (86,2%) e o uso de capa protetora foi relatada em apenas 10,3% dos casos / Abstract: House dust mites (HOM) have been considered the major source of allergens in dwellings, being mattresses and pillows the most important reservoirs. This work studied the mite fauna of upper and lower faces of 57 mattress from the city of Campinas, state of São Paulo, Brazil. Also, it was studied the HOM immediate Sensitivity in 124 atopic patients, using B.U. standardized extracts for Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis. Ali dust samples was collected by a vacuum cleaner and the samples was studied for mites through an optic microscopic. The results showed a skin positivity of 72.6% for D. farinae, 66.9% for D. pteronyssinus and 47.4% for B. tropicalis. As for mite fauna, it was found an increase over 3.5 at the lower face of the mattresses, when compared with the upper face, showing a mean number of 932 mites/gram of fine dust at upper face and 3,254 mites/g at lower face. The major family observed in both mattress faces was Pyroglyphidae, being D. pteronyssinus the most frequent species found. TarsQ'nemidae family was the second more frequent mite family observed at upper faces and Glycyphagidae family was the second one at the lower face. There was a significative difference between the number of mites found at the two mattress faces for the families Pyrogliphidae, Glycyphagidae, Acaridae and 'other families'. Foam mattress was the most frequent (86.2%) mattress and mattress-covers was related only by 10.3% of volunteers / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-29T01:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PellegrinoJunior_Jordao_D.pdf: 19309699 bytes, checksum: 1f1f8e41e2e7506cbc57707ef2e868a6 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Com a finalidade de avaliarmos se as técnicas moleculares, atualmente utilizadas na genotipagem de grupos sanguíneos, poderiam ser utilizadas com segurança em uma população com antecedentes étnicos diversos, foram estudadas 250 amostras de DNA de doadores voluntários de sangue, atendidos no Centro de Hematologia e Hemoterapia da Unicamp, previamente fenotipadas para os sistemas Rh, Kell, Duffy e Kidd. Nossos resultados demonstraram concordância entre o fenótipo e o genótipo, indicando que os primers utilizados e que foram desenhados de acordo com as sequências genômicas obtidas de indivíduos com ancestrais caucasianos, podem ser empregados na determinação dos genótipos de grupos sanguíneos em populações com antecedentes étnicos diversos. No sistema Duffy, 66% das amostras genotipadas como FY B foram fenotipadas como Fy(b-), devido à mutação no promotor eritróide GATA, o que demonstra que estes indivíduos são de fato FY B e, expressam a proteína Fyb em outros tecidos. Com o objetivo ainda de correlacionar os resultados dos fenótipos e genótipos dos sistemas Rh, Kell, Duffy e Kidd, em pacientes politransfundidos, e pelo fato de acreditarmos que a genotipagem molecular pode ser uma alternativa importante na determinação do perfil antigênico de pacientes portadores de anemias, em esquema de transfusão de sangue fenotipado, selecionamos dez pacientes portadores de 'beta' talassemia homozigótica e quarenta pacientes portadores de anemia falciforme. A fenotipagem eritrocitária foi realizada por testes de hemaglutinação em gel, enquanto que a genotipagem foi realizada pelas técnicas de AS-PCR e PCR-RFLP. Discrepâncias entre o fenótipo e o genótipo foram encontradas em nove dos dez pacientes portadores de 'beta' talassemia (90%) e, em seis dos quarenta pacientes portadores de anemia falciforme (15%). Para uma maior segurança de nossos resultados, em todos os pacientes que apresentaram resultados discrepantes entre a fenotipagem e a genotipagem, novas análises foram realizadas empregando-se DNA extraído de células do epitélio bucal e, todas confirmaram os resultados previamente obtidos em DNA extraído de leucócitos de sangue periférico. Nestes casos, tivemos a oportunidade de realizar nova determinação do fenótipo nas amostras das unidades de sangue transfundidas e pudemos verificar que os fenótipos pertenciam aos doadores e não aos receptores. Nossos resultados sugerem que a genotipagem de grupos sanguíneos contribui, substancialmente,na qualidade da transfusão de sangue fenotipado, sobretudo em pacientes que necessitam de transfusões de repetição, como por exemplo, pacientes portadores de anemia falciforme ou thalassemia. Nos casos onde a discrepância de resultados foi identificada, a nova conduta hemoterápica possibilitou um aumento na sobrevida das hemácias transfundidas e um aumento nos níveis de hemoglobina dos pacientes. Em conclusão, a genotipagem de grupos sanguíneos deve ser recomendada em pacientes dependentes de transfusão pois permite a seleção correta do sangue a ser transfundido. Auxilia portanto, na prevenção da aloimunização podendo diminuir os efeitos de potenciais reações hemolíticas / Abstract: Accurate phenotyping of red blood cells (RBCs) can be difficult in transfusiondependent patients such as those with thalassemia and sickle celIs anemia because of the presence of previously transfused RBCs in the patient's circulation. Recently,the molecular basis associated with the expression of many blood group antigens was established. This allowed the development of a plethora of polymerase chain reaction (PCR)-based tests for identification of the blood group antigens by testing DNA. These new technologies complement phenotyping by overcoming some of the limitations of hemagglutination assays. These molecular assays were developed on the basis of DNA sequences of individuals of Caucasian ancestry. The present study addresses the concern that these genotyping assays may not be suitable to populations of highly diverse ancestry because of variability in intronic regions or because of unrecognized alleles. We determined both, phenotype and genotype for RHD, RH C/c, RH E/e, KEL 1/KEL 2, JK A/JK B, FY A/ FY B (nt -33) in 250 normal blood donors using PCR. Phenotype and genotype results agreed in 100% of the cases, indicating that molecular genotyping protocols can be effectively applied to populations with a highly diverse genetic background. Furthermore" genotyping for Duffy antigens provided information that could not be obtained by phenotyping. Essentially, 30.5 % ofthe donors with the FY B gene typed as Fy(b-) due to mutation in the GATA box. This information is very useful for the management of transfusion dependent patients. We also evaluated the usefulness of DNA genotyping for red blood cell antigens as a tool for the management of polytransfused patients with 'beta' thalassemia and Sickle Cell disease (SCD) to overcome the limitations of hemagglutination assays. We studied blood samples ftom 10 patients with 'beta' thalassemia and 40 SCD patients by hemagglutination and by Polymerase Chain Reaction/Restriction Fragment Length Polymorphism (pCR-RFLP) for the Rh (D, C/c, E/e), Kell, Kidd and Duffy systems. We found discrepancies between hemagglutination and DNA typing test results in nine of the ten patients with 'beta' thalassemia (90%) and in six of the forty SCD patients (15%). In these 15 patients, DNA typing results by PCR-RFLP from buccal cells were identical with those from peripheral blood leukocytes, ruling out a potential role for microchimerism due to contaminating donor leukocytes. DNA typing of samples from segments of transfused units confinned the blood group phenotype of blood donors to these patients. In conclusion, DNA typing of blood groups by PCR-RFLP in peripheral blood leukocytes contributes to the man~gement of transfusions in patients with 'beta' thalassemia and in SCD patients by allowing more accurate selection of donor units with consequent prevention of alloimmunizationand potential hemolytic reactions / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador : Lilian Maria de Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T21:46:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_ArtemisSocorrodoNascimento_M.pdf: 19510658 bytes, checksum: d40ac317790d7af4a2cd94b9f87ced53 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O sistemaRh é o maior, mais complexo e mais imunogênico sistema de grupos sanguíneos.Representa um dos sistemas de maior interesse clínico, por seu envolvimento na Doença Hemolítica Peri-Natal; nas Reações Transfusionais Hemolíticas e nas Anemias Hemolíticas Auto-Imunes. Os antígenos do sistema Rh são codificados por 2 genes altamente homólogos, RHD e RHCE. As bases moleculares da maioria dos fenótipos Rh foram determinadas nos últimos 10 anos e rearranjos gênicos, deleções e mutações de ponto podem ser responsáveis por algumas variantes dos antígenos RhD e RhCE. A elucidação da base molecular das variantes Rh possibilitou o desenvolvimento de técnicas para a determinação de variantes que parecem ser predominantes em algumas populações. Desta forma, é possível estabelecer a correlação adequada entre os genótipos e os fenótipos e o esclarecimento da perda de expressão de alguns antígenos Rh comuns. A determinação da fteqüência das variantes Rh em populações distintas pode auxiliar na determinação de fenótipos raros que não são caracterizados sorologicamente Estudos envolvendo variantes Rh em pacientes falciformes politransfundidos, poderão em futuro próximo auxiliar no melhor entendimento da correlação entre o fenótipo e o genótipo e aumentar a segurança transfusional destes pacientes que muitas vezes desenvolvem anticorpos após transfusão de sangue. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The Rh blood group system is one of the most polymorphic and immunogenic systems known in humans. In the past decade, intense investigation has yielded considerable knowledge of the molecular background of this system. The genes encoding 2 distinct Rh proteins that carry C or c together with either E or e antigens, and the D antigen, have been cloned, and the molecular bases of many of the antigens and of the phenotypes have been determined. Gene rearrangements, deletions, or point mutations may cause partial D and CE antigens. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador : Lilian Maria de Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T06:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BaleottiJunior_Wilson_M.pdf: 6907784 bytes, checksum: 324eddb7fcb054026e1642e61315fd3e (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O sistema de grupo sanguíneo Diego é constituído por 21 antígenos localizados na glicoproteína banda 3 da membrana eritrocitária. Compreende 4 antígenos antitéticos Dia/Dib e Wra/Wrb e 17 antígenos de baixa incidência populacional. O fenótipo Dia resulta de uma mutação de ponto no nucleotídeo 2561 (T>C) que leva à substituição do aminoácid6 Prolina (Dib) para Leucina (Dia) na posição 854. O antígeno Dib é um antígeno de alta incidência na população geral, enquanto que o antígeno Dia é de baixa incidência em caucasianos, mas pode ser comum entre índios e japoneses. A mutação 166A>G no gene SLC4A1 (AE 1) que codifica a banda 3 dá origem a uma proteína variante, chamada banda 3-Memphis. Podem ser distinguidos dois tipos de banda 3 Memphis: variantes 1 e 11. A banda 3 Memphis II está associada a presença do antígeno Dia e apresenta maior afinidade de reação covalente com o H2DIDS do que a Memphis 1 e a banda 3 normal. De acordo com a literatura, o antígeno Dia está sempre associado a presença da banda 3-Memphis, caracterizando a variante Memphis 11. Entretanto, nenhum estudo de freqüência dos alelos DI A e 166G foi realizado até o momento. Com a finalidade de determinar a freqüência dos alelos DI A/DI B e da mutação 166A>G na população brasileira por métodos moleculares, estudamos 318 amostras de DNA de 4 diferentes populações (93 doadores voluntários de sangue, 71 descendentes de japoneses, 84 descendentes de africanos e 70 índios da tribo dos Parakanãs).Nossos resultados demonstraram que existe forte associação entre os alelos DI A e 166G e que o alelo DI A pode também ocorrer sem o alelo 166G. Em nosso trabalho foram identificadas 4 formas alélicas da associação DI / Memphis na população brasileira: alelo DI A 1 66A, DI A 1 66G, DI B166A e DI B166G . Os resultados da genotipagem 166A/G demonstraram que a banda 3-Memphis é um polimorfismo comum entre as populações estudadas. Devido a alta freqüência da mutação 166A>G encontrada, o alelo 166G pode ser considerado como um bom marcador genético de populações não miscigenadas e que o alelo 166G pode também ser considerado um protótipo do gene SLC4A1. Além disso, considerando a importância clínica dos antígenos Dia e Dib, a possibilidade em determinar os genótipos DI A/DI B, poderá contribuir substancialmente na segurança transfusional e materno-fetal / Abstract: The Diego blood group system consists of21 antigens located on band 3 of the red blood cell membrane. It includes the 4 antithetical antigens Dia / Dib and Wra / Wrb, and 17 low incidence antigens. The Dia phenotype results from a point mutation at nucleotide 2561 (T>C) leading to a single amino acid substitution from Leu (Dia) to Pro (Dib) in position 854. Dib is a high incidence antigen while Dia has low incidence among Caucasians but is particularly common among American Indians and Japanese. The Memphis variants of band 3 result from a point mutation 166 A>G in SLC4Al leading to an amino acid substitution (56 Lys>Glu). There appears to be a strong association of Memphis (56Glu) with Dia (854Leu) among Native Americans. The initial aim of this study was to determine the frequency of Diego (DI A/DI B) and Memphis (166A>G) mutations in the Brazilian population. We studied samples from 70 Amazonian Indians, 71 individuals of Japanese descent, 93 regular blood donors and 84 Sickle Cell Disease patients by PCR-RFLP. PCR assays were designed to amplify a sequence of 149 bp from exon 18 (DI A/DI B alleles), and of 84 bp from exon 3 SLC4Algene that determine band 3-Memphis. Al1eles were identified by digestion of amplified products with the restriction enzymes Msp I to discriminate DI A from DI B in exon 18, and Mnl I to identify band 3-Memphis in exon 3. Both the DI A allele and band 3-Memphis had high gene frequency among Amazonian Indians (0.571 and 0,543, respectively). Unexpectedly, four Amazonian Indians had the DI A allele without the band-3 Memphis mutation / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Claudio Lucio Rossi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T13:41:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_GiseleCristina_M.pdf: 3746706 bytes, checksum: 35cd836fe35ad43c826295dce5e69174 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A neurocisticercose é uma importante causa de doença neurológica em muitos países em desenvolvimento. O diagnóstico clínico da neurocisticercose é dificultado pelo polimorfismo e pela não especificidade dos sintomas. Os procedimentos de neuroimagem, como a tomografia computadorizada (TC) e a ressonância magnética nuclear (RMN), têm contribuído para um diagnóstico mais preciso e uma melhor compreensão dos processos patofisiológicos da neurocisticercose. Entretanto, o alto custo desses procedimentos tem limitado a sua utilização em países em desenvolvimento apresentando altas taxas de infecção. Nestas circunstâncias, a detecção de anticorpos específicos pode ser grande utilidade para o diagnóstico da neurocisticercose. A detecção de anticorpos anti-cisticercos em amostras de LCR é considerada um critério importante para o diagnóstico da neurocisticercose. Entretanto, a pesquisa de anticorpos específicos em amostras de soros apresenta algumas vantagens: o soro é obtido de uma maneira menos invasiva do que o LCR, estudos soroepidemiológicos podem mapear áreas endêmicas e a pesquisa de anticorpos em amostras de soros pode ser útil em estudos de reatividade cruzada. No presente estudo, a eficácia de sete preparações antigênicas, quatro de cisticercos de T. solium (extratos brutos total-TsoW, de membrana-TsoMe, de líquido vesicularTsoLVe de escólex-TsoEsc) e três de cisticercos de T. crassiceps (extratos brutos totalTcraW, de membrana-TcraMe e de líquido vesicular-TcraLV), foi avaliada para o diagnóstico sorológico da neurocisticercose usando uma técnica imunoenzimática (ELISA) quantitativa. Anticorpos IgG anti-cisticercos foram pesquisados em amostras de soros de 30 pacientes com neurocisticercose, 32 pacientes com outras infecções e 48 pessoas sadias. A técnica TsoW-ELISA apresentou 83% de sensibilidade e 89% de especificidade, enquanto que a sensibilidade e a especificidade da técnica TcraW-ELISA foram 67% e 86%, respectivamente. As especificidades das técnicas TsoMe-ELISA, TsoEsc-ELISA e TcraMeELISA foram, respectivamente, 91%, 89% e 78%, enquanto que a sensibilidade encontrada para os três ensaios foi 70%. O desempenho da técnica TsoL V -ELISA (80% de sensibilidade; 93% de especificidade) foi similar ao desempenho da técnica TsoW-ELISA, enquanto que o desempenho da técnica TcraLV-ELISA (77% de sensibilidade; 94% de especificidade) foi superior ao desempenho da técnica TcraW-ELISA Nenhuma das _preparações antigênicas utilizadas no presente estudo apresentou uma performance excepcional. Entretanto, considerando os resultados obtidos com todas as preparações antigênicas, o líquido vesicular de cisticercos de T. solium e T. crassiceps pode ser útil em reações imunológicas para a detecção de anticorpos específicos em soros de pacientes com neurocisticercose / Abstract: Evaluation of Taenia solium and Taenia crassiceps cysticercal antigens for the serodiagnosis of neurocysticercosis. Neurocysticercosis is an important cause of neurological disease in many developing countries. The clinical diagnosis of neurocysticercosis is impaired by the polymorphism and nonspecificity of the symptoms. Neuroimaging techniques such as computed tomography and magnetic resonance imaging have contributed to a more accurate diagnosis and a better understanding of the pathophysiology of neurocysticercosis. However, because of their high cost and restricted availability, these procedures may be of limited use in developing countries with high rates of infection. In these circumstances, the detection of cysticercus-specific antibodies is of considerable value for the diagnosis of neurocysticercosis. A positive immunological test for T. solium cysticercal antigens in CSF samples has been considered an important criterion for the diagnosis of neurocysticercosis. However, the use of serum samples for the immunodiagnosis of neurocysticercosis has some advantages: serum can be obtained in a less invasive manner than CSF, serum epidemiological studies can map areas of endemicity, and serum analysis can be very usefiil for cross-reactivity studies. In the present study, the usefulness of seven cysticercal antigen extracts, four from T. solium cysticerci (whole parasite-TsoW, membrane-TsoMe, vesicular fluid-TsoVF and scolex-TsoSc) and three from T. crassiceps cysticerci (whole parasite-TcraW, membrane-TcraMe and vesicular fluid-TcraVF), for serodiagnosis of neurocysticercosis was evaluated using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Cysticercus-specific IgG were screened in serum samples from 30 patients with neurocysticercosis, 32 patients with other infections and 48 healthy persons. The TsoW-ELISA showed 83% sensitivity and 89% specificity, whereas the sensitivity and specificity of the TcraW-ELISA were 67% and 86%, respectively. The specificities for the TsoMe-ELISA, TsoSc-ELISA and TcraMe-ELISA were, respectively, 91%, 89% and 78%, whereas the sensitivity for all three assays was 70%. The performance of the TsoW-ELISA (80% sensitivity; 93% specificity) was similar to that of the TsoW-ELISA, whereas the performance of the TcraVF-ELISA (77% sensitivity; 94% specificity) was superior to that of the TcraW-ELISA. None of the antigen preparations from T. solium and T. crassiceps cysticerci used in this study showed outstanding performance for the serodiagnosis of neurocysticercosis. However, considering the results obtained with the seven antigen preparations, ¿ vesicular fluid from T. solium and T. crassiceps cysticerci may be useful for detecting specific antibodies in sera from patients with neurocysticercosis. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T10:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_KarinaAnteroRosa_M.pdf: 9556135 bytes, checksum: c5c2410984bcb33910ac159609eec0d7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O sistema Rh representa atualmente um dos sistemas de grupos sangüíneos de maior interesse devido a sua importância na clínica transfusional e na medicina materno-feta!. Os antígenos do sistema Rh são codificados por dois genes altamente homólogos, RHD que produz o antígeno D e o gene RHCE (alelos RH Ce, RH cE, RH ce e RH CE), que produz dois pares de antígenos antitéticos, C/c e Ele. Variantes que apresentam expressão parcial ou ausência total dos produtos do gene RHCE são relativamente freqüentes e suas bases moleculares têm sido motivo de diversas pesquisas, pois permitem correlacionar os genótipos com os fenótipos e esclarecer a perda de expressão de alguns antígenos Rh comuns, aumentando assim a segurança transfusional de pacientes politransfundidos e facilitando a seleção adequada de sangue a ser transfundido. Até o momento, poucos estudos moleculares das variantes deste gene foram realizados na população brasileira, o que tem dificultado a elaboração de protocolos de genotipagem seguros para aplicação na clínica transfusional e materno-feta!. Baseados nestas informações, nossos objetivos foram: estabelecer protocolos eficientes de genotipagem RHCE na população brasileira; calcular as freqüências gênicas (porcentagem de ocorrência) e as taxas de combinações alélicas dosalelos RHCE em nossa população e caracterizar molecularmente variantes do gene RHCE responsáveis por alterações na expressão dos antígenos Rh. Foram estudadas 358 amostras de sangue de doadores voluntários, 5 amostras de sangue de uma família portadora do fenótipo Rhnull e 2 amostras de sangue de indivíduos portadores da rara variante do gene Rhce denominada JAL. A genotipagem RH Cc foi realizada através de duas técnicas de PCR: uma técnica de PCR-RFLP, onde o índice de discrepância entre os resultados da fenotipagem e genotipagem foi de 26% e uma técnica de PCR-ASP, onde a discrepância entre os resultados da fenotipagem e genotipagem foi de 0,28%. A discrepância observada na técnica de PCR-ASP ocorreu em virtude da presença da variante híbrida RHD (D-CE-D) denominada r's, responsável pela fraca expressão do antígeno RH C em indivíduos de origem Africana. A genotipagem RH Ee foi realizada através de uma técnica de PCR-RFLP em todas as amostras de sangue dos doadores e apresentou apenas 1 discrepância (0,28%) em relação ao resultado da fenotipagem. A análise molecular desta amostra discrepante evidenciou a presença da mutação da mutação 48G>C no exon 1 e das mutações G667T e 733G no exon 5 do gene RHce, responsáveis pela diminuição da expressão do antígeno Rhe, caracterizando assim a discrepância observada. As freqüências do gene RHCE observadas em nosso estudo variaram entre as diferentes populações analisadas, sugerindo assim o processo de miscigenação ocorrido na nossa população. Os indivíduos portadores da rara variante JAL foram fenotipados como VS-V+ JAL+. O seqüênciamento direto dos 10 exons do gene RHCE em ambas as amostras identificou as mutações C733G (L245V) no exon 5 responsável pelo antígeno VS, e a mutação A1060C (N354A) no exon 7 que silencia o alelo VS, ambas em heterozigose. As amostras de sangue da família Rhnullforam fenotipadas, submetidas a análises de expressão dos antígenos Rh (citometria de fluxo), genotipadas, clonadas e seqüenciadas para os 10 exons do gene RHce. Os propósitos RhnUIaIpresentaram ausência na expressão dos antígenos Rh, o que caracterizou o fenótipo como Rhnull tipo amorfo. A genotipagem Rh revelou um gene RHD deletado e o genótipo RHce. O seqüênciamento do gene RHce identificou a deleção de um nucleotídeo entre os nucleotídeos 960 e 963 do exon 7, o que gerou um stop codon prematuro e a produção de uma proteína RHce truncada, responsável pelo fenótipo Rhnulldo tipo amorfo nestes indivíduos / Abstract: Rh is a highly complex red cell blood group system, consisting of 48 antigens. The RH locus is composed of two highly homologous genes, the RHD gene, which encodes for the D protein and the RHCE alleles have been characterized: ce, Ce, CE and cE. Six nucleotide (nt) substitutions within exons 1 and 2 have been reported to determine C/c polymorphism at caused by a single nt substitution (C/G), resulting in a Pro/Ala amino acid exchange at position 226. a plethora of RHCE variants have been identified at molecular level, although the requirements for expression of the RhCE antigens are not fully understood. There are few studies of the RHCE gene and these variants in the Brazilian population and little is known about them in such population. Based on this knowledge, the purpose of this study was to investigate the presence of the RHCE alleles and their frequencies, to establish protocols for RHCE genotyping andT to identify at molecular level RHCE variants responsible for weak expression of the RhCE antigens in the Brazilian population. Blood and DNA sample from 358 blood donors were tested for RH Cc by two different techniques (one multiplex PCR one PCR-RFLP) and for RH Ee for a PCR-RFLP technique... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_ArtemisSocorrodoNascimento_D.pdf: 9543028 bytes, checksum: 5774a3716484ea2212070f20c266a89f (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Considerando a imunogenicidade e importância clínica do antígeno RhD bem como o grande número de variantes RhD identificadas, estudos que possam esclarecer sua expressão e mecanismos moleculares envolvidos são importantes para a padronização de técnicas moleculares e sorológicas em diferentes populações. Assim foram nossos objetivos: padronizar técnicas moleculares para realização da genotipagem RHD fraco e determinar sua ocorrência na população brasileira; associar os tipos de RhD fracos encontrados com os haplótipos Rh presentes; e avaliar a aplicação da determinação do antígeno RhD na prática transfusional. Estudamos 503 amostras de DNA de doadores voluntários de sangue fenotipados como RhD ftaco. Destas amostras de DNA estudadas, 415 (82,5%) foram caracterizadas como RhD ftaco, 65 (12,9%) como RhD parcial, 15 (3%) apresentaram associações de RhD parcial e RhD ftaco e 8 (1,6%) foram RhD normal. I Os antígenos RhD fraco tipos 1, 3 e 4 foram os mais fteqüentes em nossa população. Como estes três tipos de RhD fraco não apresentam risco de aloimunização anti-D, pacientes assim classificadospodem ser transfundidos com sangue RhD-positivo. Nossos resultados demonstraram que 12,~A>das amostras fenotipadas como RhD fraco eram na verdade RhD parcial. Os antígenos RhD parciais encontrados em nosso estudo foram D~ DHMi e DVI. Quarenta (7,9%) amostras de DNA foram caracterizadas como D~ 16 (3,2%) como DHMi e 9 (1,8%) como DVI. A caracterização dos antígenos RhD parciais que reagem sorologicamente como RhD ftaco, tais como D DHMi e RhD categoria VI pode ser de grande auxilio na prevenção da aloimunização anti-D em pacientes politransfundidos e gestantes. A freqüência dos antígenos RhD parciais D~ DHMi e DVI encontrada em nossas amostras sugere um elevado risco de aloimunização ao antígeno RhD em pacientes fenotipados como RhD ftaco. - Das 503 amostras estudadas, 15 apresentaram mutações responsáveis pela expressão do antígeno RhD fraco e ao mesmo tempo mutações características de antígenos RhD parciais, ou seja, estas amostras possuíam os antígenos RhD fraco e RhD parcial associados. Estudamos quatro amostras de DNA de pacientes fenotipados como RhD :fraco que apresentavam anti-D. Nosso estudo demonstrou que a aloimunização anti-D nestes pacientes estava relacionada à presença de um antígeno RhD parcial e não a um antígeno RhD :fraco como diagnosticado sorologicamente. Duas amostras foram classificadascomo RhD parcial DAR, 1 como RhD parcial DHMi e 1 como DVI. Os resuhados demonstraram que os tipos de RhD fraco 1, 2, 3 e 4 que foram detectados à TA ou à 3'te e apresentaram grau de aglutinação superior a 1+ na AGH podem ser considerados como RhD positivo, pois não foram associados ao antígeno RhD parcial. Apesar deste trabalho ter sido o único que relacionou os tipos de RhD ftaco com o grau de aglutinação, a literatura revela que ainda não foi demonstrada aloimunização anti-D em pacientes portadores dos antígenos RhD fraco tipos 1,2 e 3. De acordo com os nossos resultados pode-se concluir que: 1. A transfusão com sangue RhD-positivo pode ser recomendada para todos os pacientes que apresentam os tipos do antígeno RhD :ftaco 1, 3 e 4 identificados por técnicas moleculares e para aqueles que apresentarem grau de aglutinação superior a 1+ na fenotipagem RhD. 2. A utilização de métodos de fenotipagem mais sensíveis em combinação com reagentes anti-D de alta afinidade é recomendada na detecção de antígenos RhD ftaco com baixa densidade antigênica em doadores de sangue; 3. Há necessidade da utilização de dois anti-soros monoc1onais (IgM e IgG) na determinação do antígeno RhD :ftacoem pacientes; 4. As genotipagens RHD, RHD ftaco e RHD parcial devem ser rea1i73dasquando os resuhados sorológicos não forem claros ou quando o paciente for politransfundido. 5. A biologia molecular associada à hemaglutinação pode aumentar consideravelmente a segurança transfusional pela mellior caracterização dos antígenos RhD em nossa população / Abstract: The purpose of this study was to characterize by molecular studies theRhD antigens (weak D and partial D) in Brazilian blood donors. DNA samples ftom 503 blood donors phenotyped as weak D were tested by two different sequence-specific primers (pCR-SSP) assays to determine the presence or absence of RHD gene (PCR-SSP intron 4 and exon 10) and to detect the common weak D types. Ofthe 503 weak D samples studied, 415 (82,5%) were identified as weak D, 65 (12,9%) as partial D, 15 (3%) showed association ofweak D and partial D and 8 (1,6%) were normal D. Weak D types 1, 3 and 4 contributed more than 85% of alI molecular weak D types. For these 3 types, D-positive transfusion can be considered safe because no immunization events have been documented yet. These findings show for the first time the frequency of weak D types in Brazilians. Molecular analysis showed that 12,9% of the weak D phenotype samples studied carried a partia! D alIele. The partial Ds found in our study were DAR, DVI and DHMi. Forty (7,9%) DNA samples were characterized as DAR, 16 (3,8%) as DHMi and 9 (1,8%) as DVI. The characterization of the partia! D antigens DAR, DHMi and DVI may avoid alIoimmunization in patients phenotyped as weak D. Fiffeteen patients showed mutations to weak D and partia! D showing that these samples had the weak D and partia! D antigens associated. We also studied 4 DNA samples of patients phenotyped as weak D who had developed anti-D. Our study showed that anti-D alIoimmunization in these patients was associated with the presence of partia! D antigens. Two samples were classified as partia!, D DAR, 1 as DHMi and 1 was DVI.AlI the weak D types identified in our study were associated with the intensity of agglutination obtained at room temperature (RT), 3'fC and AGH. The sensitivity of detecting weak D depends on the anti-D reagent and on the exact conditions of the methods. Our results showed that the weak D types 1, 2, 3 and 4 were frequently detected at RT and 3'fC and therefore could be considered as D-positive for transfusion. According to our results we could recommend the use ofmonoclonal anti-DIgM with high avidity to detect weak D antigen with low antigen density in blood donors and two monoclonals, one IgM and one IgG in combination with AGT to detect the weak D antigen in patients / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:16:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_Laerciode_D.pdf: 15534575 bytes, checksum: 0d830bc1ab58a6f7460b5beacb32557c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O Programa de Controle de Qualidade Externo em Imunohematologia foi introduzido com o objetivo de avaliar a qualidade do diagnóstico em Imunohematologia. Foram realizadas 41 avaliações em 223 instituições no período de 1992 a 2003 que incluíram testes de proficiência para determinação ABO e RhD, fenotipagem Rh e K, teste direto da antiglobulina humana, pesquisa de anticorpos irregulares e identificação de anticorpos. No período de 12 anos o programa incluiu 8014 determinações de grupo sanguíneo ABO, 8000 classificações RhD, 5193 fenotipagens Rh, 5101 fenotipagens K, 7939 pesquisas de anticorpos irregulares, 4533 identificações de anticorpos e 7912 testes diretos da antiglobulina humana. Respostas incorretas foram classificadas como erros clericais, técnicos, ou não determinados. Ocorreu um número elevado de erros clericais na determinação do grupo sanguíneo ABO (76/76 erros), classificação RhD (34/58 erros) e na fenotipagem Rh (50/73 erros). Erros técnicos ocorreram predominantemente na determinação do antígeno D fraco (91/95 erros), na pesquisa de anticorpos irregulares (252/301 erros) e na identificação de anticorpos (321/335 erros) e estavam associados à sensibilidade das técnicas e dos reagentes utilizados. As avaliações teóricas, como incentivo à educação continuada, auxiliaram na diminuição dos erros, estimularam o treinamento dos participantes e o trabalho em equipe. A detecção dos erros foi importante para propor melhoria técnica com reavaliação dos protocolos bem como ações corretivas visando à melhoria da qualidade. A participação em um programa de controle de qualidade externo bem organizado mostrou ser fundamental na melhoria da qualidade dos testes em imunohematologia, reduzindo a freqüência dos erros e no potencial risco de reações hemolíticas garantido uma melhoria na qualidade das transfusões / Abstract: The Brazilian External Quality Assessment Program in Immunohematology (BEQAPI) was introduced with the objective of evaluating the quality of diagnosis in Immunohematology. From 1992 to 2003, proficiency tests for ABO grouping, Rh (D, C, c, E, e), K phenotyping, Direct Antiglobulin Testing (DAT), Antibody Screening (AS) and Antibody Identification (AI) were performed. Forty-one evaluations were carried out in 223 institutions. Over the period of 12 years, the program included 8,014 ABO typing, 8,000 RhD typing, 5,193 Rh (C, c, E, e), 5,101 K phenotyping, 7,939 AS, 4,533 AI and 7,912 DATs. Erroneous responses were classified as clerical, technical or undetermined. A substantial proportion of erroneous responses due to clerical errors occurred in ABO typing (76/76 errors), RhD typing (34/58 errors) and Rh phenotyping (50/73 errors). Technical errors occurred predominantly for weak D (91/95 errors), AS (252/301 errors) and AI (321/335 errors). Based on these results, since 1996, participants have received ¿Questions and Case Studies¿ as an incentive for training and education. The results of the present study show an improvement in the performance of participants in the course of the program. We found that a well-organized external proficiency program can contribute to the improvement of quality of testing in Immunohematology / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T10:52:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garmes_HeraldoMendes_M.pdf: 1631848 bytes, checksum: fed0142ad21dd75d72806c3fbb118f74 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A falência ovariana precoce é caracterizada por amenorréia hipergonadotrófica antes dos 40 anos de idade e pode apresentar diversas etiologjas. Trabalhos recentes caracterizaram subgrupos destas pacientes com inúmeras evidências sugerindo auto-imunidade como fator responsável. Com objetivos de detectar o anticorpo antiovário neste subgrupo, inúmeras técnicas têm sido utilizadas. Contudo, a prevalência deste anticorpo na população com falência ovariana precoce :oão está estabelecida. Neste trabalho realizaram-se a extração e a solubilização de antígenos a partir de tecido ovariano humano. Os extratos assim obtidos foram caracterizados eletroforeticamente e utilizados para a detecção do anticorpo antiovário através das técnicas de imunodifusão simples e immunoblotting. Utilizando imunodifusão simples foram detectados anticorpos séricos em 5 (14%) pacie!1tes. Por outro lado, empregando o método de immunoblotting, 14 (40%) pacientes apresentaram reatividade para peptídeo com peso molecular de 30kDa. Após classificar as pacientes em dois grupos dependentes da presença ou não de reatividade à banda de 30kDa, não foram verificadas diferenças estatísticas quando avaliada a idade da menarca, idade de início dos síntomas e nível de gonadotrofinas. Estudos posteriores, como a caracterização das propriedades biológicas destes anticorpos e isolamento da fração com peso molecular de 30kDa, poderão trazer importantes subsídios para o entendimento dos fatores imunes envolvidos com a falência ovariana precoce / Abstract: Premature Ovarian F ailure is characterized by hypergonadotrophic ammenorrhea before the age of forty (40) and can present diverse aetiologies. There is innumerable evidences suggesting that auto immUIrity is a factor which responsible for this disfunction. To detect this antibody, several techniques have been used, however the prevalence in the population of women who have premature ovarian failure. has not been established yet. Human ovarian tissue was used with the purpose to extract soluble antigens to be able to use them in the detection of serum antibodies by means of simple immuno-diffusion and immunoblotting methods. 5/35 (14%) patients presented reaction by immunodifusion and specific reactivity was found for a protein wi1!b molecular weight of 30 kDa in 14/35 (40%) patient~ using immunoblotting. Nevertheless, even classificating these patient in two groups depending on the presence or not, of reactivity for peptide of 30 kDa, no diference with the regard the age of menarc, the age of onset of synptoms and the leveI of gonadotrophins was found. Later studies such as the characterization of biological properties of these antibodies and isolation of peptide of 30 kDa, could bring important aid for the understanding of premature ovarian failure / Mestrado / Medicina Interna / Mestre em Medicina

Orientador: Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T07:10:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sakurada_JuliaKeiko_D.pdf: 5244339 bytes, checksum: fd795ed6c959b2f398364f1e1b32ac92 (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: As investigações foram levadas a efeito com o sentido de se verificar se seria possível utilizar o fenômeno da inibição da imuno hemólise por soro anti-IgG, como instrumento para o estudo da fixação de Cl aos imunecomplexos.. A ação de imunesoros de carneiro anti-IgG de coelho ou de imuneglobulinas isoladas sobre a lise específica de hemácias sensibilizadas com a fração IgG de soro de coelho anti-hemácia de carneiro (EA) ou sensibilizada com o complexo SAB.antiSAB (EGA) foi investigada. Os resultados obtidos mostram que: Os soros anti-IgG eram capazes de reforçar ou inibir a lise desses sistemas hemolíticos dependendo da dose utilizada, ao passo que uma imuneglobulina isolada desse soros por cromatografia em DE-celulose e caracteizada por imunoeletroforese como IgS, apresentava apenas a capacidade de inibir a lise desse sistema. As relações encontradas entre a quantidade de IgS anti-IgG (x) e o grau de lise (y) podem ser expressas pela equação de von KROG , de modo que se pode determinar a dose inibitória 50% (IH50). O valor de IH50 quarda relação direta com a quantidade de IgG de coelho presente na superfície da hemácia mas independe da especifidade de IgG indicando assim que o fenômeno da inibição da lise é uma conseqüência da interação especifica entre a IgG e a IgS anti-IgG...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas