ARAÚJO, Fernanda Montenegro de Carvalho. Diagnóstico laboratorial para o vírus dengue em líquido cefalorraquidiano : a detecção do antígeno NS1 como uma nova ferramenta. 2011. 154 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T12:51:29Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_fmcaraújo.pdf: 2098135 bytes, checksum: 760992f75975379273e2104b7c249842 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T12:57:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_fmcaraújo.pdf: 2098135 bytes, checksum: 760992f75975379273e2104b7c249842 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T12:57:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_fmcaraújo.pdf: 2098135 bytes, checksum: 760992f75975379273e2104b7c249842 (MD5) Previous issue date: 2011 / The first cases of dengue fever in Ceará State occurred in August 1986. The disease has become endemic with a gradual increase in severe cases, some showing atypical manifestations, with involvement of the central nervous system (CNS). In order to study specific laboratory diagnosis of dengue in cerebral spinal fluid (CSF) samples aiming to implement the findings related to cases of neurological manifestations in the years of 2005, 2006, 2007 and 2008, 346 CSF samples collected from 346 patients were studied: the first group comprised 163 patients with fatal outcomes who were autopsied in Death Verification Service (DVS); the second group comprised 183 patients who attended at São José Hospital (SJH). Diagnostic methods used for CSF analysis were virus isolation in cell culture, RT- PCR, ELISA for IgM Ab and NS1 Ag detection and immunochromatography for IgG detection. A commercial kit for detection of NS1 Ag in serum was evaluated for use in CSF for the first time, and presented a sensitivity of 50% (CI 9.29-70.1) and a specificity of 100% (CI 94-100). In the first group with 163 individuals, 90 patients had infection with DENV, and from these, 46 (51.1%) were positive for dengue in CSF: one isolation of DENV-3, seven detections by RT-PCR ( four of DENV-3 and three of DENV-2), 26 NS1 Ag and 27 IgM Ab by ELISA; 38 were positive for IgG by immunochromatography. CSF added 27.8% (25/90) positive cases in the diagnosis of dengue negative in other biological samples. The clinical manifestations observed in 46 cases of deaths positive for DENV in CSF were: hyperthermia 65%, headache 50%, vomiting 30.4%, disorientation 30.4%, dyspnea 28%, polymialgia 28%, asthenia 28%, agitation 26%, abdominal pain 17%, diarrhea 16%, fall sensory 10.8% and cough 10.8%. Considering the clinical and laboratory data characterizing a CNS involvement in patients with positive CSF samples for DENV were found the following neurological disorders: 19 (41.3%) encephalitis, 14 (30.4%) meningoencephalitis and 13 (28.3%) meningitis. In the second group, all 183 CSF samples were negative for bacteria and fungi. Five cases were positive (2.7%), two for NS1 Ag and three for IgM Ab. Of the positives, four patients were hospitalized and one patient was treated at the clinic. Four patients were healed and one died. The clinical associated with suspected cases of meningitis was fever, headache, vomiting and neck stiffness. The positivity for DENV in CSF was higher in cases coming from the DVS (28.2), than the cases from SJH (2.7%), p< 0.000 (CI 4. 21-25.37) and Relative Risk of 10.33 times. The results from the study showed that there was CNS involvement in dengue cases in both groups, with a greater involvement in the cases referred from DVS. Given what has been found, it would be convenient to suggest that, in an endemic area of dengue, patients with neurological symptoms consistent with encephalitis and meningitis, showing or not classic sings of dengue fever, should be investigated for these viruses. However, prospective studies of cases with neurological manifestations of dengue are still needed to know and better understand the involvement of the CNS infection by DENV. / Os primeiros casos de dengue no Estado do Ceará ocorreram em agosto de 1986. A doença tornou-se endêmica, com aumento gradativo de casos graves, alguns apresentando manifestações não usuais, como o envolvimento do sistema nervoso central (SNC). Com o objetivo de estudar o diagnóstico laboratorial específico de dengue em amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR), visando à correlação entre a dengue e o envolvimento do SNC em casos ocorridos nos anos de 2005 a 2008, foram analisadas 346 amostras de LCR coletadas de 346 pacientes: 163 provenientes de pacientes com evolução fatal que foram necropsiados no Serviço de Verificação de Óbitos Dr. Rocha Furtado (SVO); e, 183 amostras de pacientes que foram atendidos no Hospital São José de Doenças Infecciosas (HSJ) com suspeita de meningite. Os métodos diagnósticos utilizados para a análise desses materiais foram: o isolamento viral, a transcrição reversa seguida da reação em cadeia pela polimerase (RT- PCR), a pesquisa de anticorpo (Ac) IgG, Ac IgM e pesquisa de antígeno não estrutural 1 (Ag NS1). Um ensaio imunoenzimático (ELISA) comercial para detecção de Ag NS1 em soro foi avaliado para uso, pela primeira vez, em LCR apresentando uma sensibilidade de 50% (IC- 29.9-70.1) e especificidade de 100% (IC-94-100). No grupo dos pacientes que evoluíram para óbito, 90 pacientes apresentaram infecção pelo vírus dengue (DENV), e destes 46 (51,1%) com positividade para dengue no LCR: um isolamento de DENV-3; sete detecções de vírus por RT–PCR (4 DENV-3; 3 DENV-2); 26 Ag NS1 e 27 Ac IgM por ELISA; 38 IgG foram positivos por imunocromatografia. O LCR acrescentou 27,8% (25/90) ao diagnóstico de dengue em pacientes negativos em outras amostras biológicas. As manifestações clínicas mais observadas nos 46 casos de óbitos em que o LCR foi positivo para DENV foram: febre, 65%; cefaléia 50%; vômito 30.4%; desorientação, 30,4%; dispnéia, 28%; polimialgia, 28%; adinamia, 28%; agitação, 26%; dor abdominal, 17%; diarréia, 16%; queda de sensório, 10,8%; tosse, 10,8%. Considerando os dados clínicos e laboratoriais que caracterizam um envolvimento do SNC nos pacientes com amostras de LCR positivas para DENV foram encontradas as seguintes patologias neurológicas: 19 (41,3%) encefalites, 14 (30,4%) meningoencefalites e 13 (28,3%) meningites. No grupo encaminhado do HSJ, as 183 amostras de LCR foram negativas para pesquisa de bactérias e fungos. Cinco casos foram positivos para DENV (2,7%): dois para Ag NS1 e três para Ac IgM. Dos positivos, quatro foram de pacientes internados e um de paciente atendido no ambulatório. Quatro pacientes evoluíram para cura e um foi a óbito. O quadro clínico associado aos casos suspeitos de meningite foi de febre, cefaléia, vômito e rigidez de nuca. A positividade para o DENV no LCR foi maior nos casos provenientes do SVO (28,2%) quando comparado com os casos encaminhados do HSJ (2,7%), com p< 0,000 (IC- 4,21-25,37) e Risco Relativo de 10,33 vezes. Os resultados desde estudo mostraram que houve envolvimento do SNC em casos de dengue nas duas populações trabalhadas, com um maior envolvimento nos casos encaminhados do SVO. Os resultados deste estudo sugerem que em área endêmica de dengue, pacientes com sintomatologia neurológica compatível com encefalite e meningite, apresentando ou não sinais clássicos de dengue, devem ser investigados para essa virose. Entretanto, estudos prospectivos de casos de dengue com manifestações neurológicas são necessários para conhecer e compreender melhor o envolvimento do SNC nas infecções pelos DENV.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T19:15:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:54:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAngiogêneseInflamatória.pdf: 1296094 bytes, checksum: 2850ce4e1829a2e43314ad1a6ed5f2f5 (MD5) Previous issue date: 2012 / O protozoário Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, possui proteínas de superfície ou glicoproteínas, como a GPI–mucina que se liga a receptores primitivos Toll like de células fagocíticas desencadeando a ativação de fatores de transcrição responsáveis pela produção e liberação de mediadores pró-inflamatórios que participarão efetivamente da resposta inflamatória ativando e recrutando células imunes para o sítio inflamatório auxiliando no controle da replicação parasitária. A neovascularização é um mecanismo necessário durante o processo inflamatório, tanto para o fornecimento de nutrientes quanto para o aumento do recrutamento celular no sítio em questão. Neste estudo, avaliamos a angiogênese inflamatória induzida por implantes sintéticos, alojados no espaço subcutâneo em camundongos e estimulados, 24 horas pós-implante, com antígenos de 108 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa Y do T. cruzi. Os implantes foram retirados nos dias 1, 4, 7 e 14 pós-implantes para análise bioquímica (hemoglobina, enzima mieloperoxidase, enzima N-acetil-b-Dglicosaminidase), imunológica (citocinas e quimiocinas) e avaliação histológica. Foi observado que os antígenos do T. cruzi elevaram os níveis de mediadores inflamatórios (TNF-alfa, CCL2, CCL5) e pró-angiogênicas (VEGF) no 7º dia pós-implante e o aumento do conteúdo de hemoglobina no 14º dia pós-implante. Além disso, observou-se aumento do infiltrado de monócitos no 7º dia pós-implante, provavelmente responsável pela angiogênese descrita no 14o dia, sendo estes dados confirmados pela análise histológicas dos implantes. O infiltrado de neutrófilos e a deposição de colágeno não foram alterados com o estímulo dos antígenos nos dias avaliados. Os resultados obtidos através deste estudo sugerem que os antígenos do T. cruzi (cepa Y) atuaram como um agente angiogênico (angiogênese inflamatória) no modelo de esponja subcutânea. Novas perspectivas de estudos esclarecerão se este padrão de angiogênese observado é reprodutível no sítio cardíaco e, se o mesmo é dependente da cepa do T. cruzi utilizada. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Acute inflammatory cells (granulocytes, macrophages, endothelial cells and fibroblasts) ordinarily lead to the resolution of a series events promoting mantainance of local tissue. Angiogenesis and inflammation are persistent features of several pathological conditions induced by pathological agents. Particularly, glycoproteins derived from the protozoan Trypanosoma cruzi are suggested to induce this inflammatory angiogenesis. In this study, we investigated the effects of total antigen from 108 trypomastigote forms of T. cruzi (Y strain), inoculated in sponge implantes of mice, on angiogenesis, inflammatory cell pattern and endogenous production of inflammatory and angiogenic mediators on days 1, 4, 7 and 14 post implant. There was an elevation of hemoglobin content on the 14th day, assessed by hemoglobin of the implants, but with no difference between those sponges stimulated with T. cruzi antigen or vehicle (PBS). However, parasite antigens induced high production of vascular endothelial growth factor (VEGF) and inflammatory mediators TNF-alpha, CCL2 and CCL5 on the 7th day in sponges when compared to the unstimulated group. Accumulation of neutrophils and macrophages was determined by measuring of myeloperoxidase (MPO) and N-acetyl-b-D-glucosaminidase (NAG) enzymes activitiy, respectively. MPO activity was unaffected by T.cruzi antigen, but macrophage accumulation was increased after stimulation with antigens initiating at day 4 and peaking at day 7. Morphometric analysis of the sponges suggested that inflammatory and angiogenic mediators, particularly induced by macrophages, increased blood vascularization in the matrix of the sponges peaking at 14th day. Together, our results suggest that T.cruzi molecules are the pivotal reason to the magnification of inflammatory angiogenesis in the sponge model and this process might be trigger by T.cruzi-induced inflammatory mediators.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000440746-Texto+Completo-0.pdf: 8186310 bytes, checksum: 2ddc0fe8a6260707c7754fc8b9f27f5b (MD5) Previous issue date: 2012 / The Angiostrongylus genus includes two species that can infect humans, A. cantonensis and A. costaricensis. They may cause infections known as eosinophilic meningitis and abdominal angiostrongyliasis, respectively. In A. costaricensis infection, eggs and larvae are central elements in the inflammatory reactions, which may get worse with death of the worms. The currently available anthelmintics act on the parasite essential metabolic pathways with a killing effect. Therefore, an alternative substance to treat angiostrongyliasis, acting mainly in worms reproduction is necessary. An in vitro study conducted with Schistosoma mansoni showed inhibition of oviposition by Phenanthroline. In another study with Caenorhabditis elegans, it was shown that serotonin increases the egg-laying rate of the female nematode, besides controlling the change of its posture state (rest and activation). Serotonin is a neurotransmitter present in vertebrates and invertebrates. In order to test the effect on egg laying of Angiostrongylus spp., two substances that interfere with serotonin neurotransmission in humans, Buspirone and Pizotifen, were used in an experimental model in vivo. 28 rodents of species Rattus norvegicus were divided into three groups and infected with 100 L3 of A. cantonensis: a control group (untreated) and two groups treated with each substance. The substances were administered as soon as all rodents started releasing larvae, once a day, orally, for 10 days, at a concentration of 0. 03 mg / mL each. In this period rodent feces were collected daily for counting the number of L1 and after 10 days the animals were euthanized for collection of the worms. The average number of larvae released in feces was 37,934 by the Control group, 10,658 by the Buspirone group and 6,658 by the Pizotifen group. The worms were counted and separated by sex: in the Control group 59 females and 40 males were obtained; in Buspirone group 86 females and 41 males were found; and in the Pizotifen group 83 females and 64 males were counted. The comparison of data from Control and Experimental groups was statistically analyzed by ANOVA and no significant difference was observed. Females were measured using a millimetric eyepiece installed in a stereomicroscope. The ANOVA analysis resulted in a significant difference between Control and Pizotifen, which had an average size of 18 mm, compared with to average size of 19 mm of Control, indicating that Pizotifen would have some effect in the nematodes development, but not affecting their reproduction. These results indicate that the search for alternative drugs that act on egg laying needs a better understanding of the pathways that regulate the reproductive system of parasitic organisms. / O gênero Angiostrongylus engloba duas espécies A. cantonensis e A. costaricensis, que podem infectar o ser humano e causar infecções conhecidas como meningite eosinofílica e angiostrongilíase abdominal, respectivamente. Na infecção por A. costaricensis, ovos e larvas são elementos centrais nas reações inflamatórias podendo haver o agravamento dessas lesões, pela morte dos vermes. Os anti-helmínticos atualmente disponíveis, atuam em vias metabólicas essenciais ao parasito, culminando com a morte dos vermes. Portanto, uma droga alternativa para o tratamento das angiostrongilíases, que atue principalmente na reprodução dos vermes, se torna necessária. Um estudo in vitro realizado com Schistosoma mansoni demonstrou a inibição da oviposição pela fenantrolina. Em outro estudo com Caenorhabditis elegans foi demonstrado que a serotonina estimula o aumento da taxa de ovos liberados pela fêmea do nematódeo, além de controlar a alteração do seu estado de postura (repouso e ativação). A serotonina é um neurotransmissor presente tanto em vertebrados como em invertebrados .Com o objetivo de testar o efeito na oviposição de Angiostrongylus cantonensis, duas substâncias que interferem na neurotransmissão da serotonina em humanos, Buspirona e Pizotifeno, foram utilizadas em modelo experimental in vivo. 28 roedores da espécie Rattus norvegicus foram divididos em 3 grupos e infectados com 100 L3 de A. cantonensis: um grupo controle (não tratado) e 2 grupos tratados com cada substância. As substâncias foram administradas a partir do momento em que todos os roedores iniciaram a larvipostura, uma vez ao dia por via oral, durante 10 dias, numa concentração de 0,03 mg/mL cada. Neste período as fezes dos roedores foram recolhidas diariamente para a contagem do número de L1 eliminadas e, após os 10 dias, os animais foram eutanasiados para coleta dos vermes. A média de larvas eliminadas nas fezes para o grupo controle foi 37. 934, para o grupo Buspirona 10. 658 e para o grupo Pizotifeno 6. 658. Os vermes foram contados e separados pelo sexo: no grupo controle foram obtidas 59 fêmeas e 40 machos; no grupo Buspirona foram encontradas 86 fêmeas e 41 machos e no grupo Pizotifeno 83 fêmeas e 64 machos. A comparação dos dados dos grupos experimentais e do controle foram analisadas estatisticamente pelo teste ANOVA e nenhuma diferença significativa foi verificada. As fêmeas foram medidas através de uma ocular milimetrada instalada em um estereomicroscópio.A análise foi feita também pelo teste ANOVA e resultou numa diferença significativa entre o grupo controle e o Pizotifeno, no qual teve um tamanho médio de 18 mm, em comparação com o tamanho médio do controle de 19 mm, indicando que o Pizotifeno poderia ter algum efeito no desenvolvimento dos nematódeos, porém não afetando a reprodução. Estes resultados indicam que para a procura de drogas alternativas, que atuem na oviposição, é necessário uma melhor compreensão das vias reguladoras do sistema reprodutivo dos organismos parasitos.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biología Celular Programa de Pós-graduação em Biología Molecular, 2013. / Submitted by Flávia Renata Santos Gasparotto (flavia.gasparotto@gmail.com) on 2014-08-20T15:15:22Z No. of bitstreams: 1 2013_Thaina de Almeida Lima.pdf: 3712308 bytes, checksum: 37656dfe6751626b9aa10a3be5dfb69d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-08-21T14:05:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_Thaina de Almeida Lima.pdf: 3712308 bytes, checksum: 37656dfe6751626b9aa10a3be5dfb69d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-21T14:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_Thaina de Almeida Lima.pdf: 3712308 bytes, checksum: 37656dfe6751626b9aa10a3be5dfb69d (MD5) / O câncer é classificado como uma doença crônica degenerativa, com evolução prolongada e progressiva se não sofrer interferência em alguma de suas fases, e configura-se como um grande problema de saúde pública tanto nos países desenvolvidos como nos países em desenvolvimento. A relação entre câncer e o sistema imune começou a ser explorada no começo do século XX na Alemanha, quando foi sugerido que os carcinomas poderiam ser suprimidos pelo sistema imune. Antígenos do tipo câncer/testis (ACTs) são uma classe única de antígenos que ocorrem naturalmente em alguns tecidos imunoprivilegiados e em células carcinogênicas; dentre eles, pode-se destacar NY-ESO-1, um ACT associado a diversos tipos de malignidades que é capaz de desencadear resposta imune tanto celular quanto humoral, o que o tornou um dos candidatos mais promissores ao desenvolvimento de estratégias imunoterapêuticas. A produção de NY-ESO-1, em sua forma integral e em grandes quantidades, é imprescindível para a aquisição de maiores informações acerca de seu modo de ação e subsequente exploração de seu potencial, e o desenvolvimento de sistemas de produção heteróloga estáveis e seguros são fundamentais. Este trabalho propôs a utilização de tabaco e soja como biofábricas para o acúmulo deste importante antígeno em sua forma integral e completamente livre de fusões e tags de purificação, a fim de oferecer uma alternativa estável, segura para uso em humanos e de custo mais baixo. Dentre os sistemas utilizados, apenas a expressão em sementes de soja apresentou expressão e acúmulo da proteína-alvo, chegando a um nível de expressão médio de 0,079% de NY-ESO-1, tornando este trabalho pioneiro não apenas por ser o primeiro a utilizar plantas como sistema de expressão, mas também por evitar a expressão associada a proteínas de fusão e tags de purificação, comumente utilizadas como estratégia para a expressão deste importante antígeno. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cancer is classified as a chronic degenerative disease with prolonged and progressive evolution if not interfered in any of its phases; it is characterized as a large public health problem both in developed and in non-developed countries. The relationship between cancer and the immune system began to be explored in the early 20th century in Germany when it was suggested that carcinomas could be suppressed by the immune system. Antigens cancer / testis ( ACTs ) are a unique class of naturally occurring antigens in some immune-privilged tissues and cancer cells. Among them, we can highlight NY-ESO-1, an ACT associated with various types of malignancies which is capable to trigger both cellular and humoral immune response, becoming one of the most promising candidates for the development of immunotherapeutic strategies. The large scale production of NY-ESO-1 in its native form is essential to acquire more information about its mode of action and subsequent exploitation of its full potential, and the development of stable and secure heterologous production systems are fundamental. This work proposes the use of tobacco and soybean seeds as bio¬factories for the accumulation of this important antigen in its integral form, completely free of protein fusion and purification tags, aiming to offer an alternative treatment that is stable, low cost and safe for humans. Among the systems elected only soybean seeds presented expression and accumulation of the target protein, reaching an average expression level of 0.079 %, which can be considered promising as the heterologous expression of NY-ESO-1 is in most cases dependent on fusion proteins and purification tags, and usually presents low success in eukaryotic systems.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-03T22:40:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Oliane Maria Correia Magalhães.pdf: 578908 bytes, checksum: bd57c22da972523afb5d5f5eb9771e5f (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T15:34:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Oliane Maria Correia Magalhães.pdf: 578908 bytes, checksum: bd57c22da972523afb5d5f5eb9771e5f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T15:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Oliane Maria Correia Magalhães.pdf: 578908 bytes, checksum: bd57c22da972523afb5d5f5eb9771e5f (MD5) Previous issue date: 2007-09-28 / Paracoccidioidomicose (PCM) apresenta múltiplas manifestações clínicas é causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. PCM é diagnosticada pela detecção microscópica de células leveduriformes multibrotantes em amostras clínicas, pela cultura cotonosa e/ou cerebriforme e testes sorológicos. Os objetivos desta pesquisa foram padronizar antígenos de P. brasiliensis de cultura selvagem e de culturas obtidas na Coleção de Culturas Micoteca URM. As estruturas leveduriformes multibrotantes evidenciadas a partir da termoconversão demonstraram que as referidas culturas depositadas na Micoteca URM são compatíveis às descritas de P. brasiliensis, contudo algumas culturas apresentaram características morfológicas atípicas e perda da habilidade dimórfica. Os critérios adotados para seleção das culturas para obtenção de antígenos foram baseados nos aspectos macroscópicos das colônias e da termoconversão das células de P. brasiliensis, os quais permitiram selecionar as culturas URM 3634, 3635 e a cultura selvagem 5378. Com NGTA os antígenos produzidos foram padronizados pela titulação, concentração de proteínas e identificação de frações protéicas. O título dos antígenos foi 1/4, 1/8 e 1/32 e a concentração de proteínas 541μg/mL, 658μg/mL e 808μg/mL respectivamente das culturas URM 3634, 3635 e 5378. Os exoantígenos apresentaram várias frações protéicas. Com soros adquiridos de bancos de soros, foram realizados testes sorológicos com as técnicas de imunodifusão (ID), contraimunoeletroforese (CIE) e imunobloting (IB). Com o teste de ID, os soros apresentaram 86,0% de sensibilidade, com CIE 98,0%. Com IB 100% de 29 soros testados reconheceram a molécula de 43 KDa, gp43, considerada o principal antígeno usado no imunodiagnóstico da PCM. Todos os testes expressaram 100% de especificidade. / Paracoccidioidomycosis (PCM) presents multiples clinical manifestations being caused by thermally dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. PCM is diagnosed by detection microscopic of yeast cells that reproduces by multiple budding in clinical samples, by culture cottony and/or cerebriform and by serological tests. The aims of research were to standard antigens of P. brasiliensis wild strain and strain obtained at the Coleção de Culturas - Micoteca URM. Like-yeast structures multiple-budding in thermoconversion ensured that the strains deposited at the Micoteca URM are P. brasiliensis; however some strains showed atypical morphological patterns and loss for dimorphic ability. The adopted criterion from selection of the fungi strains aiming at antigen production were based in observation macroscopic of the colonies and of the cells thermoconvertion from P. brasiliensis, wich it allowed to select the strains URM 3634, 3635 and the wild strain URM5378. The antigens produced with NGTA were standardized by titers, protein content and identifications of proteins fraction. The titers of antigens produced were of 1/4, 1/8 e 1/32 and the protein content was 541μg per ml, 658μg per ml and 808 μg per ml for strains URM3634, 3635 and 5378 respectively; the exoantigens apresented several antigenic fractions. The serological tests immunodiffusion (ID), counterimmunoelectrophoresis (CIE) and Immunobloting (IB) were made with serum samples obtained from a bank of sera. The ID and CIE tests presented 86.0% and 98.0% of sensitivity, respectively. The IB test realized with 29 sera showed that all it (100%) recognized the 43-KDa molecule, gp 43, considered to the main antigen used for immunodiagnostic of PCM. All of the tests expressed 100% specificity.

Orientador : Humberto de Araujo Rangel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T05:45:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CamargoNeto_NeiFerreirade_M.pdf: 2470332 bytes, checksum: 169edc55c1b93750e9f04bec199da8f5 (MD5) Previous issue date: 1977 / Mestrado

Existe un grupo de enteropatía conocidas como AVSN que pueden simular enfermedad celíaca. Objetivo: El objetivo de este estudio es describir los hallazgos histológicos y de inmunohistoquímica en pacientes con enfermedad celíaca y AVSN. Material y métodos: 15 biopsias de pacientes con enfermedad celíaca y 19 biopsias con AVSN fueron reexaminados. Se estudió características histológicas tales como atrofia severa, hiperplasia de criptas, número de células plasmáticas, número de eosinófilos y presencia de neutrófilos. Asimismo, a través de inmunohistoquímica se estudió la presencia de linfocitos CD4, CD8, CD3, CD56. Resultados: Se encontró diferencia significativa en la mayor presencia de hiperplasia de criptas (p=0,0348) y mayor número de células plasmáticas (p=0,0348) en las biopsias de enfermedad celíaca que en las catalogadas como AVSN. El número de linfocitos CD8, CD4, CD56 y su distribución fue similar en ambos grupos. El porcentaje de linfocitos intraepiteliales CD3 positivos (p=0,0144) fue mayor en pacientes con AVSN. Conclusión: Los hallazgos histológicos e inmunohistoquímicos muestran más similitudes que diferencias. La diferencia hallada en nuestro estudio sugiere mayor respuesta inmune humoral en pacientes con enfermedad celiaca que en AVSN. / There is a group of enteropathies recently known as seronegative villous atrophy (SNVA), which can simulate celiac disease. Objective: The aim of this study was to describe histological and immunohistochemical differences between a group of Celiac disease and SNVA patients. Material and methods: Microscopy reexamination and Immunohistochemistry study were performed for a group of 15 celiac patients and 19 SNVA patients. Histological features as severe atrophy, crypt hyperplasia, plasma cells number, eosinophils number, neutrophils presence were studied; CD4, CD8, CD3, and CD56 markers were studied through immunohistochemistry. Results: There was a significant difference between the frequency of observation of crypt hyperplasia (p=0.0348) and plasma cells (p=0.0348) in celiac disease patients than SNVA patients. In celiac disease was bigger. The number and distribution of CD 8, CD4 and CD56 lymphocytes was similar in both groups. The percentage of CD3 positive intraepithelial lymphocytes (p=0.0144) was higher in SNVA. Conclusion: Histological and immunohistochemical evaluation shows more similarities than differences. The differences found in this study suggest more humoral immune response in celiac disease than in SNVA.

CD55, CD59, CD35 e CD46 são proteínas de membrana que apresentam propriedades reguladoras da ativação da cascata do complemento. A deficiência na expressão destas proteínas está associada a uma menor proteção contra a ativação do sistema complemento, inclusive do complexo de ataque a membrana, levando à lise e morte celular. Pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) com citopenias parecem apresentar uma deficiência adquirida destas proteínas. Contudo, os mecanismos que modulam essa diminuída expressão continuam desconhecidos e o seu impacto nas manifestações do LES necessitam ser melhor estudados. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de expressão de CD55, CD59, CD35 e CD46 em células do sangue periférico de pacientes com LES e a correlação com a presença de citopenias, atividade da doença e ativação do complemento. Foram realizadas análises por citometria de fluxo em leucócitos e eritrócitos de 100 SLE pacientes e 61 controles saudáveis. Neste trabalho foi identificada uma diminuição da expressão de CD55, CD59 e CD46, em pacientes com LES com linfopenia e neutropenia; apenas CD59 e CD35 estavam diminuídos em pacientes com LES com anemia, quando comparados com controles saudáveis. Além disso, foi observada uma correlação negativa entre a expressão de CD55 e de CD59 em neutrófilos e a atividade da doença (SLEDAI); uma correlação positiva entre a expressão de CD55 e CD35 em neutrófilos e CD55 nos linfócitos e o nível de C3; e uma correlação positiva com a expressão de CD35 nos eritrócitos e o nível C4. Os resultados obtidos no estudo sugerem que há uma alteração no padrão da expressão destas proteínas nas células do sangue periférico de pacientes com LES, e esta alteração parece estar correlacionada com a atividade da doença e / ou atividade do complemento.

CD55, CD59, CD35 e CD46 são proteínas de membrana que apresentam propriedades reguladoras da ativação da cascata do complemento. A deficiência na expressão destas proteínas está associada a uma menor proteção contra a ativação do sistema complemento, inclusive do complexo de ataque a membrana, levando à lise e morte celular. Pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) com citopenias parecem apresentar uma deficiência adquirida destas proteínas. Contudo, os mecanismos que modulam essa diminuída expressão continuam desconhecidos e o seu impacto nas manifestações do LES necessitam ser melhor estudados. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de expressão de CD55, CD59, CD35 e CD46 em células do sangue periférico de pacientes com LES e a correlação com a presença de citopenias, atividade da doença e ativação do complemento. Foram realizadas análises por citometria de fluxo em leucócitos e eritrócitos de 100 SLE pacientes e 61 controles saudáveis. Neste trabalho foi identificada uma diminuição da expressão de CD55, CD59 e CD46, em pacientes com LES com linfopenia e neutropenia; apenas CD59 e CD35 estavam diminuídos em pacientes com LES com anemia, quando comparados com controles saudáveis. Além disso, foi observada uma correlação negativa entre a expressão de CD55 e de CD59 em neutrófilos e a atividade da doença (SLEDAI); uma correlação positiva entre a expressão de CD55 e CD35 em neutrófilos e CD55 nos linfócitos e o nível de C3; e uma correlação positiva com a expressão de CD35 nos eritrócitos e o nível C4. Os resultados obtidos no estudo sugerem que há uma alteração no padrão da expressão destas proteínas nas células do sangue periférico de pacientes com LES, e esta alteração parece estar correlacionada com a atividade da doença e / ou atividade do complemento.

CD55, CD59, CD35 e CD46 são proteínas de membrana que apresentam propriedades reguladoras da ativação da cascata do complemento. A deficiência na expressão destas proteínas está associada a uma menor proteção contra a ativação do sistema complemento, inclusive do complexo de ataque a membrana, levando à lise e morte celular. Pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) com citopenias parecem apresentar uma deficiência adquirida destas proteínas. Contudo, os mecanismos que modulam essa diminuída expressão continuam desconhecidos e o seu impacto nas manifestações do LES necessitam ser melhor estudados. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de expressão de CD55, CD59, CD35 e CD46 em células do sangue periférico de pacientes com LES e a correlação com a presença de citopenias, atividade da doença e ativação do complemento. Foram realizadas análises por citometria de fluxo em leucócitos e eritrócitos de 100 SLE pacientes e 61 controles saudáveis. Neste trabalho foi identificada uma diminuição da expressão de CD55, CD59 e CD46, em pacientes com LES com linfopenia e neutropenia; apenas CD59 e CD35 estavam diminuídos em pacientes com LES com anemia, quando comparados com controles saudáveis. Além disso, foi observada uma correlação negativa entre a expressão de CD55 e de CD59 em neutrófilos e a atividade da doença (SLEDAI); uma correlação positiva entre a expressão de CD55 e CD35 em neutrófilos e CD55 nos linfócitos e o nível de C3; e uma correlação positiva com a expressão de CD35 nos eritrócitos e o nível C4. Os resultados obtidos no estudo sugerem que há uma alteração no padrão da expressão destas proteínas nas células do sangue periférico de pacientes com LES, e esta alteração parece estar correlacionada com a atividade da doença e / ou atividade do complemento.