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Efeito inibitório in vitro de ciprofloxacina isolada e em combinação com antifúngicos frente a Coccidioides posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum / In vitro inhibitory effect of ciprofloxacin alone and in combination with antifungal drugs against Coccidioides posadasii and Histoplasma capsulatum var. capsulatumCaetano, Érica Pacheco January 2010 (has links)
CAETANO, Erica Pacheco. Efeito inibitório in vitro de ciprofloxacina isolada e em combinação com antifúngicos frente a Coccidioides posadasii e histoplasma capsulatum var. capsulatum. 2010. 131 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010 / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T16:03:22Z
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Previous issue date: 2010 / Coccidioidomycosis and histoplasmosis are systemic mycoses that occur in humans and other animals and are caused by the dimorphic fungi Coccidioides posadasii and Histoplasma capsulatum var. capsulatum, respectively. They are considered important deep mycoses that can lead to several secondary complications. In the past years, the improvement of the techniques applied in mycological diagnosis and the increase in the occurrence of immunocompromising diseases have caused a great impact in the incidence of deep and opportunistic mycoses in the world. In spite of the existence of effective antifungal therapy against coccidioidomycosis and histoplasmosis, the pursue of new drugs to treat theses diseases is necessary. Ciprofloxacin is a classic antibacterial drug that belongs to the group of fluoroquinolones, which inhibit the catalytic activity of DNA gyrase and topoisomerase IV, which are essential in bacterial DNA replication and transcription. Some studies have shown that ciprofloxacin can act on fungal DNA gyrase. Thus, the present study aimed at evaluating the in vitro inhibitory effect of ciprofloxacin (CIP), when associated with amphotericin B (AMB), itraconazole (ITC), voriconazole (VRC) or caspofungina (CAS), on C. posadasii and H. capsulatum var. capsulatum. Sixteen strains of C. posadasii in the filamentous phase and 16 and 9 strains of H. capsulatum in the filamentous and yeast-like phase, respectively, were used. Broth macrodilution and microdilution assays were performed, as described in the documents M38-A and M27-A2, respectively, of the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Drug interaction was analyzed by calculating the fractional inhibitory concentration index (FICI), which is defined as the sum of the ratios between the minimal inhibitory concentration (MIC) of each combined drug and the MIC of the same drug isolatedly. Values of FICI smaller or equal to 0.5 indicate the occurrence of synergy. Concerning the isolates of C. posadasii, synergistic interactions were observed for all combinations, especially for the associations of CIP (3.125≤CIM≤12.5 ug mL-1) with ITC (0.0078≤CIM≤0.125 ug mL-1) (n=13/16), CIP (3.125≤CIM≤12.5 ug mL-1) with VRC (0.0078≤CIM≤0.0312 ug mL-1) (n=13/16) and CIP (3.125≤CIM≤12.5 ug mL-1) with CAS (2≤CIM≤8 ug mL-1) (n=14/16). For the isolates of H. capsulatum in the filamentous phase synergistic interactions were also observed for all combinations, with emphasis to the associations of CIP (3.906≤CIM≤62.5 ug mL-1) with ITC (0.00006≤CIM≤0.0078 ug mL-1) (n=14/16) and CIP (31.25≤CIM≤125 ug mL-1) with VRC (0.0156≤CIM≤0.125 ug mL-1) (n=16/16). For H. capsulatum in yeast-like phase, few synergistic interactions were observed for the tested drug combinations. None of the tested combinations presented antagonism. The obtained data may point at a new alternative for the treatment of coccidioidomycosis and histoplasmosis. Thus, it is necessary to investigate the mechanisms of action of these drug combinations on the fungal cellular metabolism and to perform in vivo experiments to confirm the relevance of these findings. / A coccidioidomicose e a histoplasmose são micoses sistêmicas que acometem o homem e animais, causadas por espécies de fungos dimórficos, com ênfase para Coccidioides posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum, respectivamente. São consideradas doenças profundas importantes, podendo culminar em diversas complicações secundárias. Nos últimos anos, a melhoria dos métodos de diagnóstico micológico e o aumento da ocorrência de doenças imunossupressoras causaram grande impacto na incidência das micoses profundas e oportunistas no mundo. Apesar da existência de terapias eficazes com antifúngicos contra a coccidioidomicose e a histoplasmose, a busca por novas drogas para o tratamento destas doenças se faz necessária. Ciprofloxacina é uma droga antibacteriana clássica do grupo das fluoroquinolonas, que inibe a atividade catalítica da DNA girase e topoisomerase IV, essenciais na replicação e transcrição do DNA bacteriano. Estudos verificaram que ciprofloxacina pode atuar na DNA girase dos fungos. Assim, o presente estudo visou avaliar o efeito inibitório in vitro de ciprofloxacina (CIP) isolada e em combinação com os antifúngicos anfotericina B (AMB), itraconazol (ITC), voriconazol (VRC) e caspofungina (CAS) frente à C. posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Foram utilizados 16 cepas de C. posadasii na fase filamentosa, 16 cepas de H. capsulatum var. capsulatum na fase filamentosa e 9 cepas de H. capsulatum var. capsulatum na fase leveduriforme. O estudo foi conduzido em ensaio de macrodiluição e microdiluição em caldo, descritos nos documentos M-38A e M-27A2, padronizados pelo Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), sendo utilizados para C. posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum, respectivamente. A interação das drogas foi analisada através do cálculo do Índice da Concentração Inibitória Fracionária (FICI), definido como a soma das relações entre a concentração inibitória mínima (CIM) de cada droga em combinação e a CIM da mesma droga isolada, considerando os valores menores ou iguais a 0,5 indicativos de sinergismo. Com relação às cepas de C. posadasii, foram observadas interações sinérgicas em todas as combinações, com destaque para as associações de CIP (3,125≤CIM≤12,5 ug mL-1) com ITC (0,0078≤CIM≤0,125 ug mL-1) (n=13/16), CIP (3,125≤CIM≤12,5 ug mL-1) com VRC (0,0078≤CIM≤0,0312 ug mL-1) (n=13/16) e CIP (3,125≤CIM≤12,5 ug mL-1) com CAS (2≤CIM≤8 ug mL-1) (n=14/16). Para as cepas de H. capsulatum na fase filamentosa, também foram observadas interações sinérgicas em todas as combinações, com destaque para as associações de CIP (3,906≤CIM≤62,5 ug mL-1) com ITC (0,00006≤CIM≤0,0078 ug mL-1) (n=14/16) e CIP (31,25≤CIM≤125 ug mL-1) com VRC (0,0156≤CIM≤0,125 ug mL-1) (n=16/16). No tocante às cepas de H. capsulatum na fase leveduriforme, foram observadas poucas interações sinérgicas nas combinações de drogas testadas. Nenhuma das associações de drogas testadas apresentou antagonismo. Os dados obtidos apontam uma nova alternativa para o tratamento da coccidioidomicose e da histoplasmose, sendo necessários novos estudos que visem investigar os mecanismos de ação dessas combinações de drogas no metabolismo celular fúngico, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significância desses achados.
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Avaliação do perfil de resistência a antifúngicos de leveduras isoladas do Arroio Dilúvio em Porto Alegre / Analysis of antifungal susceptibility of yeasts isolated from Arroio Dilúvio, Porto AlegreMilanezi, Ana Carolina Medeiros January 2016 (has links)
A água é um recurso essencial a todas as formas de vida, e a forma como é explorada se reflete nos âmbitos sociais, econômicos e ambientais. A urbanização em torno de bacias hidrográficas é responsável por diversas alterações de serviços ecossistêmicos importantes. O Arroio Dilúvio, em Porto Alegre, é um importante afluente do Lago Guaíba, que por sua vez é a principal fonte hídrica de abastecimento da cidade. Ao longo da história o Arroio sofreu diversas modificações, além de intensa contaminação através da deposição de esgoto. O estudo da microbiota deste ambiente permite maior elucidação do efeito de contaminantes sobre a diversidade e manifestação de diferentes fenótipos. Leveduras são fungos unicelulares amplamente difundidos no ambiente, e estudos sugerem que há uma correlação positiva entre leveduras e ambientes aquáticos poluídos. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a diversidade e a resistência à antifúngicos de leveduras isoladas de amostras de água coletadas ao longo do Arroio Dilúvio em Porto Alegre. Isolados de leveduras provenientes do Arroio Dilúvio foram submetidos a testes de suscetibilidade frente a antifúngicos através dos métodos de disco-difusão em ágar e ensaio de concentração inibitória mínima. Para a realização das técnicas moleculares, foi extraído o DNA genômico dos isolados para amplificação da região ITS1-5.8S-IT2 do rDNA utilizando os oligonucleotídeos iniciadores ITS1 e ITS4. A região ITS foi submetida a técnica de PCR-RFLP utilizando as endonucleases HinfI, HaeIII e CfoI e o perfil de restrição permitiu a construção de um dendrograma. Os ensaios de suscetibilidade mostraram alta prevalência de resistência a antifúngicos da classe dos azóis. Dezesseis isolados exibiram resistência a anfotericina B, dos quais 14 foram submetidos ao sequenciamento da região ITS. A análise das sequências permitiu a identificação de leveduras do gênero Candida, incluindo as espécies potencialmente patogênicas C. glabrata, C. parapsilosis e C. tropicalis, e do gênero Debaryomyces. A resistência a antifúngicos em leveduras do Arroio Dilúvio, reforça a importância de estudos da microbiota ambiental e indica que a degradação do ambiente influencia no fenótipo exibido. / Water is an essential resource to all forms of life, and the way it is exploited is reflected in the social, economic and environmental spheres. Urbanization around watershed is responsible for several important ecosystem service changes. In Porto Alegre, Arroio Dilúvio is an important component of Lake Guaiba, which in turn is the main water source of the city. Throughout history, Arroio Dilúvio underwent several changes, and it suffers with intense contamination by the deposition of sewage. The study of the environment's microbiota enables further elucidation of the effect of contaminants on diversity and expression of phenotypes. Yeasts are unicellular fungi widespread in the environment, and studies suggest that there is a positive correlation between yeast and polluted aquatic environments. The aim of this study was to analyze the diversity and resistance to antifungals of yeasts isolated from water samples collected along the Arroio Dilúvio in Porto Alegre. Yeast isolates from the Arroio Dilúvio were subjected to susceptibility testing against antifungals through the agar disk diffusion method and the minimum inhibitory concentration test. For the molecular techniques, the genomic DNA of the isolates was extracted with further amplification of ITS1-5.8S-IT2 using primers ITS1 and ITS4. The ITS region was subjected to PCR-RFLP using the restriction enzymes HinfI, HaeIII and CfoI and the restriction profile allowed the construction of a dendrogram. Susceptibility tests showed high prevalence of resistance to azole antifungals. Sixteen isolates exhibited resistance to amphotericin B, of which 14 were subjected to sequencing of the ITS region. The sequence analysis allowed the identification of Candida species, including the potentially pathogenic species C. glabrata, C. parapsilosis and C. tropicalis, and Debaryomyces genus. The manifestation of resistance to antifungals in yeasts isolated from Arroio Dilúvio reinforces the importance of studies of environmental microbiota and indicates that environmental degradation influences the phenotype displayed.
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Consequências da aquisição da resistência à natamicina em espécies de Candida / Consequences of acquired natamycin resistance in Candida spp. isolatesRebhahm, Bruna Rodrigues January 2017 (has links)
A natamicina é um composto antifúngico bastante utilizado na indústria alimentar, pois é seguro para o consumo e não afeta a qualidade dos alimentos. Recentemente surgiu uma preocupação em relação ao seu uso aditivo em bebidas e iogurtes, uma vez que a natamicina poderia exercer pressão seletiva e desencadear o desenvolvimento de resistência aos polienos in vivo na microbiota comensal do hospedeiro. Diante dessa incerteza, abordamos o possível desenvolvimento da resistência contra a natamicina. Uma seleção de 17 isolados de Candida spp. foi submetida a concentrações crescentes de natamicina durante um tempo prolongado. A exposição à natamicina provocou um aumento de MIC em 14 dos 17 isolados testados e o desenvolvimento de resistência à natamicina foi evidenciado em 5 destes 14 isolados. Dezesseis isolados apresentaram aumento de MIC para anfotericina B e 4 destes isolados mostraram resistência à anfotericina B. A capacidade de formação de biofilmes desses isolados também foi realizada e 3 isolados apresentaram aumento da capacidade de formação de biofilmes após indução de resistência à natamicina. Foi possível evidenciar que a resistência adquirida à natamicina foi maior em isolados que apresentavam baixa suscetibilidade antes da exposição à natamicina. Em vista dos resultados acima mencionados, ressalta-se a importância do monitoramento da natamicina aditivada nos alimentos, pois seus níveis residuais em concentrações elevadas podem exercer uma pressão seletiva sobre as espécies de Candida constituintes da microbiota comensal humana gastrointestinal, no que tange a sua virulência e resistência. / Natamycin is a antifungal compound used in the food industry because it is safe for consumption and has no effect on quality of foods. Recently a concern has arisen over its additive use in beverages and yogurts since natamycin could exert selective pressure and trigger the development of polyene resistance in vivo in the commensal microbiota of host. In view of this uncertainty, we address the possible development of resistance against the natamycin. A selection of 17 isolates of Candida spp. was subjected to increasing concentrations of natamycin for prolonged time. The natamycin-exposure caused an increase of M.I.C. in 14 out of 17 tested isolates and the development of natamycin resistance was evidenced in 5 of these 14 isolates. Sixteen isolates showed increased of M.I.C to amphotericin B and 4 of these isolates showed resistance to amphotericin B. The biofilm forming capacity of the isolates also was performed and 3 isolates presented increasing the capacity to form biofilms after induction of natamycin resistance. It was possible to show that acquired natamycin resistance was increased in isolates that showed low susceptibility before natamycin exposure. In view of the aforementioned results, the importance of the monitoring of natamycin in food is highlighted, since its residual levels in high concentrations may exert a selective pressure on Candida species constituting the gastrointestinal human commensal microbiota, in relation to its virulence and resistance.
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Avaliação da atividade antifúngica de extratos de plantas do Cerrado brasileiro sobre isolados clínicos de Candida SPP / Evaluation antifungal activity of crude extracts from brazilian Cerrado plants against clinical isolates Candida speciesCorreia, Amabel Fernandes 19 February 2016 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Curso de Ciências Farmacêuticas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-04-18T17:17:35Z
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2016_AmabelFernandesCorreia.pdf: 4094341 bytes, checksum: 3f879a1d3c01e387f658ff7df2c7d634 (MD5) / A maioria dos casos de candidíase sistêmica era atribuído à espécie de Candida albicans. Entretanto, Candida não albicans têm sido identificadas como patógenos em infecções humanas, representando mudança de prevalência com percentual por vezes superior a Candida albicans. Esta mudança na etiologia de candidíase sistêmica, está relacionada a novos métodos diagnósticos, como a identificação das espécies, empregando técnicas moleculares, e pode refletir a alta taxa de resistência a antifúngicos de Candida não albicans. Este estudo teve o objetivo de caracterizar isolados clínicos de Candida spp. quanto aos aspectos epidemiológicos e terapêuticos e, como proposta à resistência aos antifúngicos apresentados por Candida spp., foram avaliados a atividade antifúngica de extratos de plantas do cerrado brasileiro. Foram utilizados métodos clássicos e moleculares de identificação microbiológica e teste de disco difusão segundo protocolo de referência. Os métodos de identificações microbiológicas caracterizaram 150 isolados clínicos de pacientes com suspeita de infecções sistêmicas no Distrito Federal, Brasil, entre Janeiro/2011 e Dezembro/2012. Candida albicans foi a espécie mais isolada (50,6%), seguida por Candida parapsilosis (21,3%), Candida tropicalis (16,6%), Candida glabrata (8,0%), Candida krusei (0,7%), Candida guilliermondii (0,7%), Candida intermedia (0,7%) e Kadamaea ohmeri (0,7%), que foram isoladas em amostras de lavado broncoalveolar, sangue e escarro, predominantemente em pacientes do sexo masculino com idade entre 21 e 60 anos. O teste de disco difusão foi utilizado para determinar a atividade antifúngica de agentes convencionais e extratos de plantas. Na atividade antifúngica de agentes convencionais, a maioria dos isolados clínicos de Candida foram sensíveis a anfotericina B (97,9%); 91,9% foram sensíveis a voriconazol; 91,3% a fluconazol; 73% a itraconazol e 2,7% a 5-fluorocitosina. A resistência cruzada aos azólicos foi demonstrada por isolados de C. glabrata e C. intermedia. Na avaliação da atividade antifúngica dos extratos, as seis espécies de plantas, Eugenia dysenterica, Pouteria ramiflora, Pouteria torta, Erythroxylum subrotundum, Erythroxylum daphnites e Bauhinia rufa apresentaram efeito inibitório sobre diferentes espécies de Candida, sendo Candida glabrata a espécie mais inibida. Nossos resultados apontam, que os extratos avaliados possuem fitocompostos com potenciais atividades antifúngicas contra espécies de Candida, principalmente espécies de Candida não albicans, que representam atualmente grande revelância clínica e terapêutica. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Most cases of systemic candidiasis were assigned to the Candida albicans species. However, non albicans Candida have been identified as human pathogens in infections representing a change in prevalence with a percentage at times related to Candida albicans. This change in the etiology of systemic candidiasis is related to new diagnostic methods, such as identification of species using molecular techniques and may reflect on the high rate of resistance to antifungal Candida non albicans. This study´s main proposed objective is to characterize clinical isolated cases of Candida spp. to epidemiological and therapeutic aspects resisting to antifungal agents during treatment. Plant extracts of Brazilian Cerrado were used to evaluate. Microbiological identification on classic and molecular methods, and disk diffusion test were used as a protocol reference. The microbiological identification methods characterized 150 isolated clinical in patients suspected of systemic infection in the Federal District, Brazil, between January/2011 and December/2012. Candida albicans is the most commonly isolated species (50.6%), followed by Candida parapsilosis (21.3%), Candida tropicalis (16.6%), Candida glabrata (8.0%), Candida krusei (0.7%), Candida guilliermondii (0.7%), Candida intermedia (0.7%) and Kadamaea ohmeri (0.7%), which were isolated in bronchoalveolar lavage samples, blood and mucus, predominantly in male patients aged between 21 and 60 years. The disk diffusion test was used to determine the antifungal activity of conventional agents and plant extracts. In conventional antifungal agents, most isolated clinical cases of Candida were sensitive to amphotericin B (97.9%); 91.9% were susceptible to voriconazole; 91.3% to fluconazole; 73% itraconazole and 2.7% 5-fluorocytosine. The cross resistance to azoles has been demonstrated by isolated cases of C. glabrata and C. intermedia. When evaluating the antifungal activity of the extracts, the six species of plants, Eugenia dysenterica, Pouteria ramiflora, Pouteria torta, Erythroxylum subrotundum, Erythroxylum daphnites and Bauhinia rufa showed inhibitory effect on various Candida species, and Candida glabrata the most inhibited species. Our results suggest that the extracts evaluated have compounds with potential antifungal activity against Candida species, especially Candida non albicans species, representing currently important great clinical and therapeutic.
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Candidemia de escape após a padronização do uso de micafungina em dois hospitais sul brasileiros : um estudo retrospectivoBreda, Giovanni Luís January 2016 (has links)
Orientador : Prof. Dr. Felipe F. Bondan Tuon / Coorientador : Profª. Drª. Flávio Queiroz-Telles / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 02/12/2016 / Inclui referências : f. 37-42 / Resumo: Introdução: A candidemia é a principal doença fúngica invasiva em pacientes hospitalizados. Diversos casos de candidemia de escape (CE) têm sido relatados, porém poucos estudos avaliaram a epidemiologia, fatores de risco e desfecho destes pacientes, especialmente em países em desenvolvimento, assim como em pacientes recebendo equinocandinas. Objetivos: Avaliar e comparar a epidemiologia, fatores de risco, perfil microbiológico e desfecho de pacientes com candidemia de escape (casos) e candidemia não escape (controles). Métodos: Estudo transversal, com coleta retrospectiva dos dados, em dois centros diferentes, para avaliar a epidemiologia, fatores de risco, perfil microbiológico e desfecho clínico em pacientes com CE. As características clínicas de cada grupo foram comparadas através de análise univariada, e os fatores de risco foram comparados usando análise univariada e multivariada. Os isolados de Candida dos casos de escape também foram submetidos a testes de suscetibilidade antifúngica. Resultados: Cento e quarenta e oito episódios de candidemia foram revisados, com vinte e sete casos de escape (18%). Entre os casos, 12 (44%) estavam recebendo micafungina, 7 (26%) fluconazol, 6 (22%) voriconazol, 1 (4%) anfotericina B, e 1 (4%) estava recebendo terapia combinada com micafungina e voriconazol. Neutropenia e mucosite foram identificados como fatores de risco independentes para CE. Candida não albicans foi mais frequente nos casos de escape (p<0,001), sem diferenças significativas entre as espécies; C. albicans foi a espécie mais sensível, com baixas concentrações inibitórias mínimas para todos os antifúngicos testados. Conclusão: Infecções de escape ocorreram principalmente em pacientes mais jovens, gravemente imunossuprimidos, com neutropenia e mucosite. Espécies de Candida não albicans foram mais frequentemente recuperadas nos casos de escape, incluindo isolados resistentes à terapia antifúngica vigente. A mortalidade hospitalar e em trinta dias não diferiu significativamente entre os grupos. Palavras-chave: Candidemia; candidemia de escape; fatores de risco / Abstract: Introduction: Candidemia is the main invasive fungal disease among hospitalized patients. Several breakthrough candidemia (BrC) cases have been reported, but few studies evaluate the epidemiology, risk factors and outcome of those patients, especially in developing countries, and in patients receiving echinocandins. Objectives: Evaluate and compare the epidemiology, risk factors, microbiological profile and outcome of patients with breakthrough candidemia (cases) and non breakthrough candidemia (controls). Methods: Transversal study, with retrospective data collection in two centers, to evaluate the epidemiology, risk factors, microbiological profile and clinical outcome in patients with BrC. Clinical characteristics of each group were compared using univariate analysis, and risk factors were compared using univariate and multivariate analysis. Candida isolates from BrC were also submitted to antifungal susceptibility testing. Results: One hundred and forty-eight candidemia episodes were reviewed, with twenty-seven breakthrough infections (18%). Among the BrC patients, 12 (44%) received micafungin, 7 (26%) fluconazole, 6 (22%) voriconazole, 1 (4%) amphotericin B, and 1 (4%) received combined therapy with micafungin and voriconazole. Neutropenia and mucositis were identified as independent risk factors for BrC. Candida non-albicans were more frequent in the BrC group (p<0.001), without significant differences between individual species; C. albicans was the most susceptible, with low MIC for all antifungal agents tested. Conclusion: Breakthrough infections occurred mainly in younger patients, severely immunosuppressed, with neutropenia and mucositis. Candida non-albicans species were more commonly recovered from breakthrough cases, including species resistant to the current antifungal under use. Thirty day and inpatient mortality did not differed significantly between the groups. Key words: Candidemia, Breakthrough Candidemia, Risk Factors.
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Consequências da aquisição da resistência à natamicina em espécies de Candida / Consequences of acquired natamycin resistance in Candida spp. isolatesRebhahm, Bruna Rodrigues January 2017 (has links)
A natamicina é um composto antifúngico bastante utilizado na indústria alimentar, pois é seguro para o consumo e não afeta a qualidade dos alimentos. Recentemente surgiu uma preocupação em relação ao seu uso aditivo em bebidas e iogurtes, uma vez que a natamicina poderia exercer pressão seletiva e desencadear o desenvolvimento de resistência aos polienos in vivo na microbiota comensal do hospedeiro. Diante dessa incerteza, abordamos o possível desenvolvimento da resistência contra a natamicina. Uma seleção de 17 isolados de Candida spp. foi submetida a concentrações crescentes de natamicina durante um tempo prolongado. A exposição à natamicina provocou um aumento de MIC em 14 dos 17 isolados testados e o desenvolvimento de resistência à natamicina foi evidenciado em 5 destes 14 isolados. Dezesseis isolados apresentaram aumento de MIC para anfotericina B e 4 destes isolados mostraram resistência à anfotericina B. A capacidade de formação de biofilmes desses isolados também foi realizada e 3 isolados apresentaram aumento da capacidade de formação de biofilmes após indução de resistência à natamicina. Foi possível evidenciar que a resistência adquirida à natamicina foi maior em isolados que apresentavam baixa suscetibilidade antes da exposição à natamicina. Em vista dos resultados acima mencionados, ressalta-se a importância do monitoramento da natamicina aditivada nos alimentos, pois seus níveis residuais em concentrações elevadas podem exercer uma pressão seletiva sobre as espécies de Candida constituintes da microbiota comensal humana gastrointestinal, no que tange a sua virulência e resistência. / Natamycin is a antifungal compound used in the food industry because it is safe for consumption and has no effect on quality of foods. Recently a concern has arisen over its additive use in beverages and yogurts since natamycin could exert selective pressure and trigger the development of polyene resistance in vivo in the commensal microbiota of host. In view of this uncertainty, we address the possible development of resistance against the natamycin. A selection of 17 isolates of Candida spp. was subjected to increasing concentrations of natamycin for prolonged time. The natamycin-exposure caused an increase of M.I.C. in 14 out of 17 tested isolates and the development of natamycin resistance was evidenced in 5 of these 14 isolates. Sixteen isolates showed increased of M.I.C to amphotericin B and 4 of these isolates showed resistance to amphotericin B. The biofilm forming capacity of the isolates also was performed and 3 isolates presented increasing the capacity to form biofilms after induction of natamycin resistance. It was possible to show that acquired natamycin resistance was increased in isolates that showed low susceptibility before natamycin exposure. In view of the aforementioned results, the importance of the monitoring of natamycin in food is highlighted, since its residual levels in high concentrations may exert a selective pressure on Candida species constituting the gastrointestinal human commensal microbiota, in relation to its virulence and resistance.
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Determinação da atividade antifúngica de Acca sellowiana / Determination of antifungal activity of Acca sellowianaMachado, Gabriella da Rosa Monte January 2015 (has links)
Infecções fúngicas causadas por leveduras oportunistas de Candida não – albicans (CNA) têm aumentado drasticamente nas últimas décadas, podendo estar relacionadas com o elevado número de pacientes imunocomprometidos, mais susceptíveis a essas infecções. CNA possuem maior resistência aos antifúngicos tradicionais como o fluconazol (FLZ), fármaco de escolha para o tratamento de infecções por Candida spp. A resistência antifúngica conduz a falhas na terapia clínica podendo levar ao aumento das taxas de morbidade e mortalidade. Associações entre fármacos e substâncias naturais pode ser uma alternativa viável para superar a resistência antifúngica em CNA. Acca sellowiana (O.Berg) Burret, é uma goiabeira pertencente à família Myrtaceae, possuindo diversas atividades biológicas comprovadas. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar a atividade antifúngica de frações ativas obtidas a partir do extrato aquoso liofilizado de folhas de A. sellowiana frente a isolados resistentes de CNA. Como resultado, isolados de Candida glabrata foram os mais susceptíveis as frações ativas quando comparados aos demais isolados. As frações ativas F1, F2 e F3 apresentaram melhor atividade antifúngica comparadas às demais, sendo a fração ativa F2, a mais eficaz. Foi demonstrado efeito sinérgico em 80% dos isolados de C. glabrata entre a combinação de FLZ e a fração ativa F2. Na determinação de compostos fenólicos foi identificada a presença de catequina nas frações ativas. A análise dos espectros no UV dos demais picos cromatográficos encontrados nessas frações indica a presença de flavonoides e compostos fenólicos, correlacionando a possível atividade antifúngica dessas frações com a combinação dessas substâncias. O ensaio do sorbitol indicou que a ação da fração ativa F2 ocorre na parede celular das leveduras, corroborando com o dano estrutural observado através de microscopia eletrônica de varredura (MEV). / Fungal infections caused by opportunistic yeast non - albicans Candida (NAC) have dramatically increased in recent decades and could be related to the high number of immunocompromised patients. NAC have greater resistance to traditional antifungal agents such as fluconazole (FLZ), the drug of choice for the treatment of infections caused by Candida spp. The antifungal resistance leads to failures in clinical therapy and may cause an increase in morbidity and mortality rates. Associations between drugs and natural substances can be a feasible alternative to overcome antifungal resistance in NAC. Acca sellowiana (O.Berg) Burret is a guava tree belonging to the Myrtaceae and has several proven biological activities. Thus, the aim of this study was to evaluate the antifungal activity of fractions obtained from the freeze-dried aqueous extract of leaves of A. sellowiana against resistant isolates of NAC. As a result, Candida glabrata isolates were the most susceptible to active fractions when compared to the others isolates. The F1, F2 and F3 active fractions showed the better antifungal activity and the F2 active fraction was the most effective. Synergistic effect of FLZ with F2 active fraction was demonstrated in 80% of C. glabrata isolates. The UV spectra analysis of the chromatographic peaks found in these other fractions indicate the presence of flavonoids and phenolic compounds, correlating the antifungal activity of these fractions with the combination of these substances. The sorbitol test indicates that the action of F2 active fraction possibly occurs in the cell wall of yeasts, confirming structural damage observed by scanning electron microscopy (SEM).
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Avaliação do perfil de resistência a antifúngicos de leveduras isoladas do Arroio Dilúvio em Porto Alegre / Analysis of antifungal susceptibility of yeasts isolated from Arroio Dilúvio, Porto AlegreMilanezi, Ana Carolina Medeiros January 2016 (has links)
A água é um recurso essencial a todas as formas de vida, e a forma como é explorada se reflete nos âmbitos sociais, econômicos e ambientais. A urbanização em torno de bacias hidrográficas é responsável por diversas alterações de serviços ecossistêmicos importantes. O Arroio Dilúvio, em Porto Alegre, é um importante afluente do Lago Guaíba, que por sua vez é a principal fonte hídrica de abastecimento da cidade. Ao longo da história o Arroio sofreu diversas modificações, além de intensa contaminação através da deposição de esgoto. O estudo da microbiota deste ambiente permite maior elucidação do efeito de contaminantes sobre a diversidade e manifestação de diferentes fenótipos. Leveduras são fungos unicelulares amplamente difundidos no ambiente, e estudos sugerem que há uma correlação positiva entre leveduras e ambientes aquáticos poluídos. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a diversidade e a resistência à antifúngicos de leveduras isoladas de amostras de água coletadas ao longo do Arroio Dilúvio em Porto Alegre. Isolados de leveduras provenientes do Arroio Dilúvio foram submetidos a testes de suscetibilidade frente a antifúngicos através dos métodos de disco-difusão em ágar e ensaio de concentração inibitória mínima. Para a realização das técnicas moleculares, foi extraído o DNA genômico dos isolados para amplificação da região ITS1-5.8S-IT2 do rDNA utilizando os oligonucleotídeos iniciadores ITS1 e ITS4. A região ITS foi submetida a técnica de PCR-RFLP utilizando as endonucleases HinfI, HaeIII e CfoI e o perfil de restrição permitiu a construção de um dendrograma. Os ensaios de suscetibilidade mostraram alta prevalência de resistência a antifúngicos da classe dos azóis. Dezesseis isolados exibiram resistência a anfotericina B, dos quais 14 foram submetidos ao sequenciamento da região ITS. A análise das sequências permitiu a identificação de leveduras do gênero Candida, incluindo as espécies potencialmente patogênicas C. glabrata, C. parapsilosis e C. tropicalis, e do gênero Debaryomyces. A resistência a antifúngicos em leveduras do Arroio Dilúvio, reforça a importância de estudos da microbiota ambiental e indica que a degradação do ambiente influencia no fenótipo exibido. / Water is an essential resource to all forms of life, and the way it is exploited is reflected in the social, economic and environmental spheres. Urbanization around watershed is responsible for several important ecosystem service changes. In Porto Alegre, Arroio Dilúvio is an important component of Lake Guaiba, which in turn is the main water source of the city. Throughout history, Arroio Dilúvio underwent several changes, and it suffers with intense contamination by the deposition of sewage. The study of the environment's microbiota enables further elucidation of the effect of contaminants on diversity and expression of phenotypes. Yeasts are unicellular fungi widespread in the environment, and studies suggest that there is a positive correlation between yeast and polluted aquatic environments. The aim of this study was to analyze the diversity and resistance to antifungals of yeasts isolated from water samples collected along the Arroio Dilúvio in Porto Alegre. Yeast isolates from the Arroio Dilúvio were subjected to susceptibility testing against antifungals through the agar disk diffusion method and the minimum inhibitory concentration test. For the molecular techniques, the genomic DNA of the isolates was extracted with further amplification of ITS1-5.8S-IT2 using primers ITS1 and ITS4. The ITS region was subjected to PCR-RFLP using the restriction enzymes HinfI, HaeIII and CfoI and the restriction profile allowed the construction of a dendrogram. Susceptibility tests showed high prevalence of resistance to azole antifungals. Sixteen isolates exhibited resistance to amphotericin B, of which 14 were subjected to sequencing of the ITS region. The sequence analysis allowed the identification of Candida species, including the potentially pathogenic species C. glabrata, C. parapsilosis and C. tropicalis, and Debaryomyces genus. The manifestation of resistance to antifungals in yeasts isolated from Arroio Dilúvio reinforces the importance of studies of environmental microbiota and indicates that environmental degradation influences the phenotype displayed.
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Determinação da atividade antifúngica de Acca sellowiana / Determination of antifungal activity of Acca sellowianaMachado, Gabriella da Rosa Monte January 2015 (has links)
Infecções fúngicas causadas por leveduras oportunistas de Candida não – albicans (CNA) têm aumentado drasticamente nas últimas décadas, podendo estar relacionadas com o elevado número de pacientes imunocomprometidos, mais susceptíveis a essas infecções. CNA possuem maior resistência aos antifúngicos tradicionais como o fluconazol (FLZ), fármaco de escolha para o tratamento de infecções por Candida spp. A resistência antifúngica conduz a falhas na terapia clínica podendo levar ao aumento das taxas de morbidade e mortalidade. Associações entre fármacos e substâncias naturais pode ser uma alternativa viável para superar a resistência antifúngica em CNA. Acca sellowiana (O.Berg) Burret, é uma goiabeira pertencente à família Myrtaceae, possuindo diversas atividades biológicas comprovadas. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar a atividade antifúngica de frações ativas obtidas a partir do extrato aquoso liofilizado de folhas de A. sellowiana frente a isolados resistentes de CNA. Como resultado, isolados de Candida glabrata foram os mais susceptíveis as frações ativas quando comparados aos demais isolados. As frações ativas F1, F2 e F3 apresentaram melhor atividade antifúngica comparadas às demais, sendo a fração ativa F2, a mais eficaz. Foi demonstrado efeito sinérgico em 80% dos isolados de C. glabrata entre a combinação de FLZ e a fração ativa F2. Na determinação de compostos fenólicos foi identificada a presença de catequina nas frações ativas. A análise dos espectros no UV dos demais picos cromatográficos encontrados nessas frações indica a presença de flavonoides e compostos fenólicos, correlacionando a possível atividade antifúngica dessas frações com a combinação dessas substâncias. O ensaio do sorbitol indicou que a ação da fração ativa F2 ocorre na parede celular das leveduras, corroborando com o dano estrutural observado através de microscopia eletrônica de varredura (MEV). / Fungal infections caused by opportunistic yeast non - albicans Candida (NAC) have dramatically increased in recent decades and could be related to the high number of immunocompromised patients. NAC have greater resistance to traditional antifungal agents such as fluconazole (FLZ), the drug of choice for the treatment of infections caused by Candida spp. The antifungal resistance leads to failures in clinical therapy and may cause an increase in morbidity and mortality rates. Associations between drugs and natural substances can be a feasible alternative to overcome antifungal resistance in NAC. Acca sellowiana (O.Berg) Burret is a guava tree belonging to the Myrtaceae and has several proven biological activities. Thus, the aim of this study was to evaluate the antifungal activity of fractions obtained from the freeze-dried aqueous extract of leaves of A. sellowiana against resistant isolates of NAC. As a result, Candida glabrata isolates were the most susceptible to active fractions when compared to the others isolates. The F1, F2 and F3 active fractions showed the better antifungal activity and the F2 active fraction was the most effective. Synergistic effect of FLZ with F2 active fraction was demonstrated in 80% of C. glabrata isolates. The UV spectra analysis of the chromatographic peaks found in these other fractions indicate the presence of flavonoids and phenolic compounds, correlating the antifungal activity of these fractions with the combination of these substances. The sorbitol test indicates that the action of F2 active fraction possibly occurs in the cell wall of yeasts, confirming structural damage observed by scanning electron microscopy (SEM).
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Efeito da nistatina, fluconazol e do extrato etanolico de propolis de Apis mellifera sobre propriedades de superficie de resina acrilica / Effect of nystatin, fluconazole and ethanolic extract of Apis mellifera propolis on acrylic resin surfaceSilva, Wander José da, 1980- 30 September 2005 (has links)
Orientadores: Altair Antoninha Del Bel Cury, Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:42:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2005 / Resumo: Na candidose, ou estomatite induzida por prótese, a Candida albicans atua como o patógeno mais importante e mais virulento. A terapêutica indicada no tratamento são os agentes antifúngicos (AA) como Fluconazol (FLU) e Nistatina (NYS) e mais recentemente tem sido indicado soluções a base de própolis. Entretanto, a literatura é escassa sobre os efeitos destes agentes nos materiais utilizados para confecção de bases de próteses. O objetivo deste estudo foi verificar a influência de NYS, FLU, e gel orobase (GO) de própolis sobre a superfície de resinas acrílicas durante período de 14 dias. Água destilada e GO manipulado sem princípio ativo foram utilizadas como grupos controle. Espécimes (3,0 x 2,5 x 0,5 cm) foram fabricados a partir de moldes de cera, com resina acrílica polimerizada em banho de água (Jet Clássico, grupos 1 a 5) ou com energia de microondas (OndaCryl, grupos 6 a 10), ambas processadas de acordo com as instruções dos fabricantes. Após a confecção, os espécimes receberam acabamento e polimento e a rugosidade superficial (RS), ângulo de contato (AC), energia livre de superfície (ELS) e dureza de superfície (DS) foram mensuradas. Os tratamentos de superfície foram feitos com os AA e grupos controles e os espécimes foram escovados com dentifrício e escova macia 3 vezes ao dia durante os 14 dias. Os meios de imersão foram substituídos diariamente. Novas mensurações para as variáveis foram executadas em 3, 7, 10 e 14 dias de exposição. Os compostos dos AA que poderiam ser incorporados à resina acrílica foram mensurados por cromatografia líquida. Os resultados mostraram que a RS aumentou para ambas as resinas acrílicas, mas não diferiram entre si (p>0,05); os grupos G2 e G7, contendo propolis mostraram valores maiores e estatisticamente diferente dos demais agentes nos tempos de T7, T10 e T14 (p<0,05). Também com o passar do tempo os grupos G1, G3, G4 e G8 mostraram valores de rugosidade aumentada e significantemente diferente dos demais tempos (p<0,05, teste de Tukey). Nas análises de cromatografia não foi detectada a presença de FLU ou NYS, assim como não foi detectada diferença entre as resinas acrílicas (p>0,05, teste de Tukey) quanto a compostos do GO. A microscopia eletrônica de varredura mostrou as alterações sobre a superfície dos espécimes após o tratamento. Dentro dos limites deste estudo, é possível concluir que os agentes antifúngicos podem interferir com propriedades da superfície de resina acrílica que são associadas a adesão de Candida sp / Abstract: The high prevalence of candidosis in denture wearers, and its association to Candida spp. as principal pathogen is well established. Besides, there are many studies about candidosis etiology, predisposing factors and its treatment using antifungal agents such as Fluconazole (FLU) and Nystatin (NYS). However, little work has been performed to explore the effects of these antifungal agents on acrylic resin surface. The aim of this study was to verify the influence of NYS, FLU, and propolis orobase gel over surface acrylic resins. Distillate water and orobase gel without any active component were used as control groups. Specimens (3.0 x 2.5 x 0.5 cm) were fabricated from wax moulds using heat cured (HC = Clássico; groups 1 to 5) or microwave cured (MW = Onda Cry; groups 6 to 10) acrylics resin, both processed according to manufacturers¿ instructions. After polymerized the specimens were polished and had their surface roughness (SR), contact angle (CA), surface free energy (SFE) and hardness (HD) measured. The surface treatments were done with antifungal agents and controls. The specimens had their surface toothbrushed 3 times a day during the 14 days of exposure to antifungal agents. The antifungal agents¿ solutions and gels were replaced daily. Measurements to all variables were performed in days 3, 7, 10 and 14. Components from antifungal agents that could be incorporated to acrylic resin measured with liquid chromatography. The results showed that SR increased for both acrylic resins and the treatment with propolis showed higher values and statistically different from the others (p<0.05). No statistical difference (Tukey test, p>0.05) was found regarding CA and SFE. No presence of FLU or NYS were detected in chromatography and no difference (p<0.05) between acrylic resins were detect to orobase gels detection. Scanning electronic microscopy evaluation showed surface alterations after treatment. Within the limits of this study, it is possible to conclude that antifungal agents are able to interfere with the surface properties of acrylic resins that are associated to Candida spp. adhesion / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica
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