Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / El propósito de este trabajo es conocer el funcionamiento de una farmacia hospitalaria, las secciones que la componen y las funciones del farmacéutico en cada una de ellas a través de una práctica prolongada realizada en la farmacia del Complejo Asistencial Dr. Sótero del Río (CASR). El CASR es un establecimiento de salud de alta complejidad (nivel terciario) que atiende cerca de 1.521.144 habitantes del área Sur Oriente de Santiago. La farmacia perteneciente al establecimiento, posee una dotación de 12 químicos farmacéuticos, quienes cumplen diferentes funciones, tales como: la selección, la programación, la recepción, el almacenamiento y la conservación de medicamentos, la elaboración de preparados enterales y parenterales, la dispensación y el registro de recetas de medicamentos controlados, la participación en el Comité de Farmacia y Terapéutica, la entrega de información sobre medicamentos, la supervisión de procesos y la capacitación al personal a su cargo. Durante seis meses se visitaron las diferentes áreas de la Unidad de Farmacia del CASR, cumpliendo un periodo en la Farmacia Central, Farmacia de Pediatría y Farmacia Ambulatoria. La práctica profesional tiene como objetivo ubicar al alumno en el contexto de la profesión a través de la participación activa del estudiante, logrando el aprendizaje integral, permitiendo conocer en parte el futuro laboral que para los químicos farmacéuticos es muy amplio y diverso

La resistencia antimicrobiana de las enterobacterias es un problema significativo en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI), debido principalmente al uso inapropiado de antibióticos que va a favorecer a los diferentes mecanismos de resistencia, obteniendo como consecuencia altos índices de mortalidad y un incremento en el costo económico. Metodología: Se realizó un estudio prospectivo durante el año 2004 en el del Hospital Nacional Dos de Mayo, donde se procedió a la revisión sistemática y ordenada de los Registros de Trabajo diario del Servicio de Microbiología y las Historias Clínicas de los pacientes hospitalizados en la UCI que obtuvieron un cultivo de muestra biológica positivo para evaluar el tratamiento antibiótico previo recibido. Resultados: De las 409 muestras que llegaron al servicio de Microbiología, 167 fueron positivas y de ellas en 89 se aislaron enterobacterias, los más comúnmente aislados fueron la Pseudomona aeruginosa 43.8%, klebsiella spp 33.7%, E.coli,13.4% Enterobacter 6.8% y acinetobacter 2.3%. En cuanto a la susceptibilidad antibiótica, se encontró un 46% de resistencia de la P.aeruginosa a la gentamicina y ciprofloxacino, 33% al imipenem. La E.coli l00% resistente a ceftriaxona y cefuroxima, 83.3% resistente a ciprofloxacino y 75% resistente a gentamicina. La Klebsiella 80% resistente a cefuroxima, 70% a ceftriaxona. El Enterobacter 100% resistente a cefalotina y menor resistencia a los aminoglucosidos. La P.aeruginosa tuvo un mayor porcentaje de resistencia a Ceftazidima y amikacina cuando estas fueron administradas previamente a la solicitud de cultivo p<0.05. La resistencia de las demás enterobacterias a los antibióticos fue alta aún sin la administración previa del antimicrobiano.p>0.05 Conclusiones: En este estudio las enterobacterias fueron las más frecuentemente aisladas en los cultivos de los pacientes de la UCI y que presentan una multidro resistencia significativamente incrementada pero que no guarda relación con el uso previo del tratamiento antibiótico en el caso de la Klebsiella, E.coli y Enterobacter

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / El presente trabajo se realizó con el objetivo de demostrar que la implementación de la centralización de la preparación de antimicrobianos intravenosos en el departamento de Farmacia Intrahospitalaria de Clínica Las Condes, permite obtener beneficios económicos a través de la mejor utilización de los recursos disponibles como el uso racional de estos medicamentos. La evaluación farmacoeconómica se realizó por medio de un análisis de minimización de costes comparando tres alternativas - Preparación enfermería de AMB IV - Preparación centralizada manual de AMB IV en Central de mezclas intravenosas (CMIV) en farmacia - Preparación centralizada automatizada de AMB IV en CMIV en farmacia Los parámetros evaluados durante el estudio fueron: el consumo de antimicrobianos utilizados por dosis, insumos utilizados y tiempo requerido en la preparación. Los datos de enfermería se obtuvieron por medio de un análisis observacional prospectivo que se evaluó por medio de una pauta en 4 servicios de la clínica (UTI-Adulto, Pediatría, Intermedio Adulto y Hemato-Oncologia), los datos de las otras dos alternativas de preparación se obtuvieron de la literatura consultada mediante revisión bibliográfica. Los resultados permitieron estimar que la centralización por parte del departamento de farmacia tanto por el sistema manual en CMIV como por el sistema automatizado, genera una diferencia de costos a favor de farmacia

Bartonella bacilliformis es el agente causal de la enfermedad de Carrión. Actualmente, en el Perú los casos se siguen presentando y se ha reportado fallas en el tratamiento. Hay muy pocas investigaciones acerca de la susceptibilidad a antimicrobianos, y no se tiene estandarizada una prueba de antibiograma para esta bacteria. Asímismo, aún no se conocen los mecanismos de resistencia ni las secuencias de los genes asociados a ellas en cepas nativas circulantes de Bartonella bacilliformis. Por ello, el objetivo fue caracterizar molecularmente los genes asociados a la resistencia antimicrobiana en cepas circulantes en zonas endémicas para evaluar si presentan o no mutaciones en estos genes. Se estandarizó una prueba de antibiograma utilizando la cepa B. bacilliformis CIP 57.18 colocándose los discos de antibióticos comerciales: ciprofloxacina (CIP, 5 µg), rifampicina (RD, 30 µg), eritromicina (E, 15 µg), gentamicina (CN, 15 µg), doxiciclina (DO, 30 µg), cloranfenicol (30 µg), ácido nalidíxico (AN, 5 µg) y levofloxacina (LVX, 5 µg). Todas las cepas ensayadas mostraron resistencia al ácido nalidíxico pero sensibilidad a ciprofloxacina, a excepción de la cepa USM-LMM-002 que presentó susceptibilidad disminuida a ciprofloxacina. El análisis de las proteínas que codifican los genes gyrA y parC implicados en la resistencia a estos antibióticos, determinó que ambos presentan una diferencia aminoacídica (Ser83 por Ala) en la región del QRDR en relación a la GyrA y ParC de E. coli. Interesantemente, esta Ala83 en GyrA y ParC sólo proporciona resistencia a ácido nalidíxico y no a ciprofloxacina, siendo necesaria la acumulación de mutaciones en gyrA para la resistencia a ciprofloxacina. Para los demás antibióticos, las cepas fueron sensibles y en el secuenciamiento de los genes (rpoB, L4 y 16S ribosomal) asociado a dichas resistencia no se encontró ninguna mutación. La resistencia constitutiva al ácido nalidíxico es una propiedad de B. bacilliformis, y sería un buen indicador de la susceptibilidad a las fluoroquinolonas pero su resistencia no está relacionada a la resistencia de otras fluoroquinolonas. Además, la sensibilidad a otros antibióticos como doxiciclina, rifampicina, cloranfenicol y gentamicina podría indicar alternativas en el tratamiento de esta enfermedad aunque ensayos clínicos serian necesarios. / Bartonella bacilliformis is the causative agent of Carrion's disease. Currently in Peru are still present cases and are reported failures in treatment. There is very little research on antimicrobial susceptibility, nor has been standardized a test of sensitivity to the bacteria. Also, are not yet known resistance mechanisms and the sequences of genes associated with them in circulating native strains of Bartonella bacilliformis. Therefore, the objective was molecularly characterize the genes associated with antimicrobial resistance in isolates circulating in endemic areas to assess whether present or not mutations in these genes. Susceptibility testing was standardized using the strain of B. bacilliformis CIP 57.18 placing commercial antibiotic discs: ciprofloxacin (CIP, 5 µg), rifampin (RD, 30 µg), erythromycin (E, 15 µg), gentamicin (CN, 15 µg), doxycycline (DO, 30 µg), chloramphenicol (30 µg), nalidixic acid (NA, 5 µg) and levofloxacin (LVX, 5 µg). All strains tested showed resistance to nalidixic acid but sensitive to ciprofloxacin, except for strain USM-LMM-002 that presented reduced susceptibility to ciprofloxacin. The analysis of the proteins encoded by gyrA and parC genes involved in resistance to these antibiotics, determined that both have an aminoacid difference (Ser83 by Ala) in the QRDR region in relation to the GyrA and ParC of E. coli. Interestingly, the Ala83 in GyrA and ParC only provides resistance to nalidixic acid and not to ciprofloxacin, being necessary the accumulation of mutations in gyrA for ciprofloxacin resistance. For other antibiotics, the strains were sensitive and sequencing of genes (rpoB, and 16S ribosomal L4) associated with such resistance, there was no mutation. Constitutive resistance to nalidixic acid is a property of B. bacilliformis, and would be a good indicator of susceptibility to fluoroquinolones but this resistance is not related to resistance to other fluoroquinolones. In addition, sensitivity to other antibiotics such as doxycycline, rifampicin, chloramphenicol and gentamicin might suggest alternatives in the treatment of this disease, although clinical trials are needed.

La resistencia antimicrobiana de las enterobacterias es un problema significativo en la Unidad de Cuidados Intensivos (UCI), debido principalmente al uso inapropiado de antibióticos que va a favorecer a los diferentes mecanismos de resistencia, obteniendo como consecuencia altos índices de mortalidad y un incremento en el costo económico. Metodología: Se realizó un estudio prospectivo durante el año 2004 en el del Hospital Nacional Dos de Mayo, donde se procedió a la revisión sistemática y ordenada de los Registros de Trabajo diario del Servicio de Microbiología y las Historias Clínicas de los pacientes hospitalizados en la UCI que obtuvieron un cultivo de muestra biológica positivo para evaluar el tratamiento antibiótico previo recibido. Resultados: De las 409 muestras que llegaron al servicio de Microbiología, 167 fueron positivas y de ellas en 89 se aislaron enterobacterias, los más comúnmente aislados fueron la Pseudomona aeruginosa 43.8%, klebsiella spp 33.7%, E.coli,13.4% Enterobacter 6.8% y acinetobacter 2.3%. En cuanto a la susceptibilidad antibiótica, se encontró un 46% de resistencia de la P.aeruginosa a la gentamicina y ciprofloxacino, 33% al imipenem. La E.coli l00% resistente a ceftriaxona y cefuroxima, 83.3% resistente a ciprofloxacino y 75% resistente a gentamicina. La Klebsiella 80% resistente a cefuroxima, 70% a ceftriaxona. El Enterobacter 100% resistente a cefalotina y menor resistencia a los aminoglucosidos. La P.aeruginosa tuvo un mayor porcentaje de resistencia a Ceftazidima y amikacina cuando estas fueron administradas previamente a la solicitud de cultivo p<0.05. La resistencia de las demás enterobacterias a los antibióticos fue alta aún sin la administración previa del antimicrobiano.p>0.05 Conclusiones: En este estudio las enterobacterias fueron las más frecuentemente aisladas en los cultivos de los pacientes de la UCI y que presentan una multidro resistencia significativamente incrementada pero que no guarda relación con el uso previo del tratamiento antibiótico en el caso de la Klebsiella, E.coli y Enterobacter

FREITAS, Carlos Iberê Alves. Estudo sobre a atividade antimicrobiana de substâncias extraídas e purificadas de secreções da pele de anfíbios. 2003. 180 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2003. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-25T12:10:48Z No. of bitstreams: 1 2003_tese_ciafreitas.pdf: 2906725 bytes, checksum: f4ff474e79b3031ede3b89ce587206e5 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-30T14:16:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2003_tese_ciafreitas.pdf: 2906725 bytes, checksum: f4ff474e79b3031ede3b89ce587206e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-30T14:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2003_tese_ciafreitas.pdf: 2906725 bytes, checksum: f4ff474e79b3031ede3b89ce587206e5 (MD5) Previous issue date: 2003 / A emergência de mocroorganismos resistente a multidrogas, tais como Staphylococcus aureus as resistentes a meticilina, Enterococcus resistente a vancomicina, e Mycobacterium tuberculosis resistente a drogas, tem incitado esforçospara desenvolver e pesquisar novas classes de antibióticos que possam ter utilidade clínica. Nos últimos anos, uma variedade de antibióticos de baixo peso molecular têm sido isolados de diversas espécies animais. Estes agentes incluem peptídeos, lipídios, e alcalóides, exibem atividade antibiótica contra micróbios do meio ambiente e considera-se que desempenhem um papel na imunidade inata. Compostos com largo espectro de atividade antimicrobiana que são sintetizados pelas glândulas granulares presentes na pele de anuras (rãs e sapos) têm recebido uma crescente atenção como agentes terapêuticos em potencial. Nós relatamos aqui a descoberta de um antibiótico esteroidal de atividade de largo espectro, bufadienolídeos, chamados hellebrigenin, telocinobufagin, marinobufagin e bufalin de Bufo schneideri, um sapo Brasileiro, com atividade inibitória diferenciada contra sete microorganismos e nenhuma atividade contra Pseudomonas aeruginosa. A secreção da pele do sapo foi obtida porcompressão manual das glândulas paracnemis e tibial. Tr~e peptídeos com estruta possivelmente relacionada com uma potente atividade inibitória para bactéria gram positiva, Staphylococcus aureus e uma potente proteína com forte atividade antimicrobiana contra Pseudomonas aeruginosa (MIC = 9,64 microg/ml) foi isolada com secreções da pele de Leptodactylus pentadactylus estimuladas por adrenalina obtidas por injeção subcutânea de 500 micro l (100 microg/ml) e caracterizada. Os bufadienolídeos foram obtidos com separação em CLAE de fase reversa sendo executado utilizando-se uma coluna C-18 (15 micro m, 100 Ao, Shim-pack PREP 250 mm x 25 mm) com um gradiente de 0-40 % de acetonitrila/água e 0,05 % de ácido trifluoroacético. Análise de NMR de alta resolução das amostras purificadas por aplicação de seqüência de pulsos modernos tais como 1H, 1H-COSY e NOESY, e determinação da correlação heteronuclear dos carbono-hidrogênio ligados diretamente 1H, 13C-COSY (HETCOR) e via detecção do hidrogênio inversa (HMQC), bem como o seqüenciamento a longa distância, COLOC e HMBC, permitindo assim sua identificação como um esteróide do tipo bufodienolídeo. A proteína de L. pentadactylus foi purificada por cromatografia em Sephacryl S-400 (460 mm x 6 mm) eluída com um tampão (Tris – HCl 0,05 N) e sua pureza foi avaliada poreletroforese em condições desnayurantes e não desnaturantes.A proteína total foi determinada pelo método de Bradford usando albumina soro bovina como padrão. O isolamento dos peptídeos foi efetuado usando-se o exsudato liofilizado e redissolvendo em água bidestilada/TFA 0,05 % (20:1; P:V) e corrido numa coluna C18 de fase reversa em CLAE (15 micro m, 100 Ao, Shim-pack PREP 250 mm x 25 mm) eluída com um gradiente linear de 5 - 80% em 103 min num fluxo de 5 ml/min com acetonitrila/água e ácido trifluoroacético 0.05 %. A atividade antimicrobiana de todas as amostras foi monitorada pelos métodos de Bauer – Kirby e placa de microdiluição padrãousando Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 1304, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031, Salmonella choleraesus choleraesus var typhi ATCC 6534, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 P e Pseudomonas aeruginosa HUWC 1. No primeiro método, cada placa com agar Müeller –Hinton após promover incubação por 24 h a 35 °C. As zonas claras na superfície do agar foram tomadas como indicativoda atividade antibacteriana. O diâmetro destas foram mensuradas e a atividade foi expressa em área das zonas claras (mm2). As incubações com os microorganismos foram feitas em caldo de B.H.I. por diferentes tempos até 24 h a 35°C e estimada a influência da desnaturação na atividade das amostras protéicas. Após incubação, na absorbância de 492 nm cada poço foi determinado usando-se um Detector Shimadzu UV – VS modelo SPD - 10A VP. A mínima concentração inibitória (MICs) se possível foi determinada pelo método da microdiluição padrão. Todos os procedimentos foram executados de acordo com os manuais de instrução do Comitê National de Padronização para Laboratórios Clínicos (Wayne, PA, USA). A hemólise induzida por amostras foi determinada por incubação de uma suspensão 5% (v/v) de hemácias humanas dos tipos antigênicos A e O, rato e caprinos em tampão fosfato - salina com quantidades apropriadas das amostras a 37 ºC até 24 h. O sobrenadante foi mensurado em densidade optical a 541 nm. Esta foi comparada a uma suspensão tratada com detergente a 0,1 % com agitação enérgica e definido o % de hemólise. Todos os compostos manifestaram moderado ou nenhuma atividade hemolítica. A proteína de L. pentadactylus apresentou uma concentração hemolítica mínima de 2,09 x 10-4, 1,34x10-2, 1,07x10-1 e 1,34x10-2 microgramas para rato, caprino, tipos antigênicos humanos A e O humanos respectivamente. Sob refrigeração estes valores decrescem. Para analisar interrelação entre a assimetria e mecanismos, estimativa de parâmetros cinéticos foram obtidos pelos modelos matemáticos de equações de Gompertz e regressão não linear, ANOVA e teste de comparação múltipla de Tukey.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-11-14T03:25:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348745.pdf: 3945904 bytes, checksum: ddf577110c8eedff4520ef61978e6a0e (MD5) Previous issue date: 2017 / As bactérias da família Enterobacteriaceae estão entre os micro-organismos de maior relevância nas infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS), devido à alta prevalência e à facilidade de adquirir e transmitir genes de resistência aos antimicrobianos. O objetivo do presente trabalho foi identificar e caracterizar enterobactérias coletadas entre abril-setembro/2015 no HU-UFSC. Um total de 180 pontos de coleta foram monitorados mensalmente em cinco unidades hospitalares, incluindo pacientes, profissionais de saúde e ambiente hospitalar, o que totalizou 1.080 amostras, que foram semeadas em ágar MacConkey. Obteve-se 210 amostras positivas para enterobactérias (76,9%) e 284 isolados. Os isolados foram identificados por método automatizado (Vitek2®) e sequenciamento de um fragmento do gene 16S rRNA (MiSeq System, Illumina). MALDI-TOF (Vitek MS) e sequenciamento do gene rpoB também foram aplicados para alguns isolados. A resistência das enterobactérias foi determinada pelo TSA (Vitek2®) e pela pesquisa de genes codificadores de ß-lactamases (qPCR). As maiores proporções de amostras positivas foram em pacientes (44,4%), seguidas de ambiente (16,1%) e profissionais (6,9%). As maiores taxas foram nos swabs retais dos pacientes (89,4%) e nas áreas de repouso e alimentação dos profissionais (40,5%). Os métodos de identificação Vitek2® e 16S rRNA tiveram excelente concordância a nível de gênero (82,8%) e de espécie (90,8%), apesar de algumas discordâncias, principalmente para o gênero Enterobacter spp., que foi melhor identificado pelo rpoB. As enterobactérias mais abundantes foram E. coli (20,1%), K. pneumoniae (19,4%), Pantoea spp. (19%) e E. cloacae complex (17,3%). Um total de 35% das enterobactérias foram classificadas como MDR, 30,9% foram resistentes às cefalosporinas de espectro estendido (ESC-R) e 14,5% resistentes aos carbapenêmicos (CARB-R). O gene de resistência mais frequente foi blaSHV (20,1%), seguido de blaCTX-M-1 (10,2%), blaCTX-M-8 (8,7%), blaCTX-M-9 (4,6%), blaKPC (4,6%) e blaCTX-M-2 (0,4%). A distribuição de bactérias MDR, ESC-R e CARB-R foi homogênea entre pacientes, profissionais e ambiente, indicando ampla disseminação pelo hospital. Esse estudo contribuiu com informações relevantes sobre a distribuição, abundância e caracterização do perfil de resistência das enterobactérias circulantes no HU-UFSC, podendo ser utilizado para o delineamento de novas estratégias para redução de IRAS. / Abstract : Some of the most concerning microorganisms found in HAI (Health-care Associated Infections) belong to the Enterobacteriaceae family, due to their high prevalence and risk of acquiring resistance genes. The aim of this study was to identify and characterize enterobacteria collected between Apr-Sep/2015 at HU-UFSC. Monthly, a total of 180 collection points were monitored in five hospital units, including samples from patients (PT), healthcare workers (HCW) and hospital environment (HEV). The 1,080 samples were seeded in MacConkey agar. A total of 210 samples were positive for enterobacteria (76.9%) and 284 isolates were obtained. The isolates were identified by an automated system (Vitek2®) and by 16S rRNA sequencing (MiSeq System, Illumina). MALDI-TOF (Vitek® MS) and rpoB sequencing were also applied for some isolates. The resistance profile was determined by AST (Vitek2®) and by the presence of ß-lactamases encoding genes (qPCR). The samples that presented higher proportion of enterobacteria were from PT (44.4%), followed by HEV (16,1%) and HCW (6.9%). The highest rates were from PT rectal swabs (89.4%) and rest/dinning areas of the HCW (40.5%). The identification methods Vitek2® and 16S rRNA presented excellent concordance rates at genera (82.8%) and species level (90.8%). Although there were some discordances, especially for Enterobacter spp., that was better identified by the rpoB gene. The most abundant enterobacteria were E. coli (20.1%), K. pneumoniae (19.4%), Pantoea spp. (19%) and E. cloacae complex (17.3%). A total of 35% of the enterobacteria were classified as multi-drug resistant (MDR), 30.9% were resistant to extended spectrum cephalosporins (ESC-R) and 14.5% were resistant to carbapenems (CARB-R). The most frequent resistance gene was blaSHV (20.1%), followed by blaCTX-M-1 (10.2%), blaCTX-M-8 (8.7%), blaCTX-M-9 (4.6%), blaKPC (4.6%) and blaCTX-M-2 (0.4%). The MDR, ESC-R and CARB-R enterobacteria distribution was homogeneous between PT, HCW and HEV, highlighting their wide distribution in the hospital. This study gave relevant information about the distribution, abundance and resistance profile of the HU-UFSC circulating enterobacteria. These findings could play an important role in developing new strategies for HAI control.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-02-07T03:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 343949.pdf: 778340 bytes, checksum: 08c2a7c9b6d44ca8b806325c4539546e (MD5) Previous issue date: 2016 / O presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade antimicrobiana dos extratos aquosos das algas Haematococcus pluvialis, Kappaphycus alvarezii, Sargassum filipendula e Undaria pinnatifida em cepas padrão e em isolados de bactérias patogênicas de organismos aquáticos (Citrobacter freundii, Pseudomonas fluorescens, Streptococcus agalactiae, Vibrio alginolyticus e Vibrio anguillarum). O método de microdiluição em caldo foi utilizado para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) dos extratos aquosos. Além disso, foi determinado o perfil de suscetibilidade a 12 antimicrobianos das bactérias pelo método de disco-difusão em ágar. O extrato aquoso da microalga H. pluvialis demonstrou CIM de 156,25 mg/mL, enquanto os extratos aquosos das macroalgas K. alvarezii, S. filipendula e U. pinnatifida obtiveram CIM de 625 mg/mL, 312,5 mg/mL e 39,062 mg/mL, respectivamente. A multirresistência foi verificada em 100% das cepas testadas. Os resultados sugerem que os extratos aquosos das algas exerceram atividade antimicrobiana frente as cepas de bactérias patogênicas da aquicultura, sendo o extrato da U. pinnatifida o que inibiu o crescimento dos micro-organismos com as menores concentrações.<br> / Abstract : The aim of this work was to investigate antimicrobial activity of aqueous extracts from the seaweeds Haematococcus pluvialis, Kappaphycus alvarezii, Sargassum filipendula and Undaria pinnatifida on standard strains and on isolates of pathogenic bacteria from aquatic organisms (Citrobacter freundii, Pseudomonas fluorescens, Streptococcus agalactiae, Vibrio alginolyticus and Vibrio anguillarum). Broth microdilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of the aqueous extracts. Further, the susceptibility profile to 12 antimicrobials bacteria was determined by disk diffusion method on agar. Aqueous extract of the seaweed H. pluvialis showed MIC of 156.25 mg/mL while aqueous extracts of macroalgae K. alyarezii, S. filipendula and U. pinnatifida acquired MIC of 625 mg/mL, 312.5 mg/mL and 39.062 mg/mL, respectively. Multidrug resistance was found in 100% of the tested strains, suggesting that aqueous extracts of seaweed exerted antimicrobial activity against strains of pathogenic bacteria in aquaculture, being U. pinnatifida extract the one which inhibited micro-organisms growth with the lowest concentrations.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-graduação em Biologia Molecular, 2011. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-06-26T22:29:36Z No. of bitstreams: 1 2011_MarianaTorquatoQuezadodeMagalhaes.pdf: 6229263 bytes, checksum: c403806342d7a4f80df912ac72ff753c (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-27T14:26:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MarianaTorquatoQuezadodeMagalhaes.pdf: 6229263 bytes, checksum: c403806342d7a4f80df912ac72ff753c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-27T14:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MarianaTorquatoQuezadodeMagalhaes.pdf: 6229263 bytes, checksum: c403806342d7a4f80df912ac72ff753c (MD5) / As toxinas de origem vegetal, animal e microbiana há muito despertam o interesse do homem. Assim, a busca por moléculas bioativas que permitam uma ampla biblioteca informativa surge como alternativa na busca de soluções de problemas agrícolas e farmacológicos. A pele dos anfíbios é uma rica fonte destas moléculas, as quais são produzidas pelas glândulas serosas holócrinas do tegumento, as quais estão localizadas nos grânulos do lúmem, e são liberadas sob a presença de estímulos apropriados. Suas funções são variadas, atuando tanto na regulação das funções fisiológicas da pele, como na defesa contra predadores e microrganismos. As moléculas mais estudas são os peptídeos antimicrobianos (PAM), os quais atuam diretamente na defesa química contra patógenos. Neste trabalho, foi estudada uma nova classe de PAM presentes na secreção cutânea do anuro Hypsiboas punctatus, as fenilseptinas (Phes). Estas são peptídeos antimicrobianos de 18 resíduos de aminoácido (FFFDTLKNLAGKVIGALT-NH2), com massa molecular M+H+=1954.2, as quais ocorrem naturalmente na forma de uma mistura racêmica (L-/D-Phes), e apresentam propriedades sensoriais. A enantiomerização do resíduo de aminoácido Phe2 e a amidação C-terminal foram estudadas e confirmadas por uma combinação de técnicas incluindo RP-UFLC, espectrometria de massa combinada com mobilidade iônica, experimentos de MS/MS de alta resolução, sequenciamento de cDNA, síntese de peptídeos em fase sólida e sequenciamento N-terminal por degradação de Edman. Os estudos detalhados das 20 estruturas de menor energia obtidas por experimentos de 1H RMN demonstram que os peptídeos assumem uma conformação de α-hélice dos resíduos 5-18 (RMSD 0.22 ± 0.09), e existe em D-Phes uma de mudança de 90° na orientação da porção N-terminal 1-3. Os peptídeos foram ativos contra bactérias gram-positivas e gram-negativas em ensaios de determinação da atividade antimicrobiana in vitro (e.x. S. aureus -65,5 e 32,7 μM, L-Phes e D-Phes, respectivamente). E, as mesmas moléculas foram testadas em camundongos às propriedades gustativas, em um sistema de animais KO para um canal iônico essencial para a transdução do sabor amargo e doce (Trpm5). Os camundongos WT rejeitaram os peptídeos (p < 0,05), enquanto que os camundongos KO foram indiferentes aos mesmos (p > 0,3). Provavelmente, as divergências estruturais são mais relacionadas com as diferenças observadas em relação às atividades antimicrobianas diferenciadas entre as duas moléculas, do que com as propriedades sensoriais. Fenilseptinas representam o primeiro relato de moléculas antimicrobianas, com propriedades sensoriais e enorme plasticidade estrutural. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Toxins from plant, animal and microorganism long light the interest of man. Thus, the search for bioactive molecules that allow a large databank appears as an alternative looking for solutions to agricultural problems and pharmacological. Amphibian skin secretions is a rich source of these molecules, which are produced by serous holocrine glands, which are located in the lumen of the granules and are released in the presence of appropriate stimuli. Their functions are diverse, acting both in the regulation of physiological functions of the skin, as in defense against predators and microorganisms. The molecules most studied are the naturally occurring antimicrobial peptides (AMP), which act directly on the chemical defense against pathogens. Here we report a new class of AMP present in the skin secretions of anuran Hypsiboas punctatus, the fenilseptina (Phes). These are antimicrobial peptides of 18 amino acid residues (FFFDTLKNLAGKVIGALT-NH2), with a molecular mass of M+H+ = 1954.2, that was purified as two naturally occurring D- and L-Phe analogs, with sensorial properties. The amino acid epimerazition and C-terminal amidation for both molecules (in short, D-Phes and L-Phes) were confirmed by a combination of techniques including reverse-phase UPLC, ion mobility mass spectrometry, high resolution MS/MS experiments, Edman degradation, cDNA sequencing and solid-phase peptide synthesis. RMSD analysis of the twenty best 1H NMR structures of each peptide revealed that the peptides assume an α-helical conformation of residues 5-18 (RMSD 0:22 ± 0.09), and there is D-Phes has a major 90° difference between the two backbones at the first four N-terminal residues and substantial orientation changes of the respective side chains. The peptides were active against gram-positive and gram-negative in vitro assays (S. aureus -65.5 and 32.7 mM, L-and D-Phes Phes, respectively). And the same molecules were tested in mice to evaluate the properties in a system of KO animals to a ion channel essential for transduction of bitter and sweet (Trpm5). The mice rejected the WT peptide (p < 0.05), while the KO mice were indifferent to them (p > 0.3). These structural divergences are most likely linked to the quantified differences in antimicrobial potencies determined for both molecules, but produced no detectable change in the gustatory aversive behavior. Perhaps the Phenylseptins are early examples of the amazing plasticity of small biomolecules yet to be understood.

Bartonella bacilliformis es el agente causal de la enfermedad de Carrión. Actualmente, en el Perú los casos se siguen presentando y se ha reportado fallas en el tratamiento. Hay muy pocas investigaciones acerca de la susceptibilidad a antimicrobianos, y no se tiene estandarizada una prueba de antibiograma para esta bacteria. Asímismo, aún no se conocen los mecanismos de resistencia ni las secuencias de los genes asociados a ellas en cepas nativas circulantes de Bartonella bacilliformis. Por ello, el objetivo fue caracterizar molecularmente los genes asociados a la resistencia antimicrobiana en cepas circulantes en zonas endémicas para evaluar si presentan o no mutaciones en estos genes. Se estandarizó una prueba de antibiograma utilizando la cepa B. bacilliformis CIP 57.18 colocándose los discos de antibióticos comerciales: ciprofloxacina (CIP, 5 µg), rifampicina (RD, 30 µg), eritromicina (E, 15 µg), gentamicina (CN, 15 µg), doxiciclina (DO, 30 µg), cloranfenicol (30 µg), ácido nalidíxico (AN, 5 µg) y levofloxacina (LVX, 5 µg). Todas las cepas ensayadas mostraron resistencia al ácido nalidíxico pero sensibilidad a ciprofloxacina, a excepción de la cepa USM-LMM-002 que presentó susceptibilidad disminuida a ciprofloxacina. El análisis de las proteínas que codifican los genes gyrA y parC implicados en la resistencia a estos antibióticos, determinó que ambos presentan una diferencia aminoacídica (Ser83 por Ala) en la región del QRDR en relación a la GyrA y ParC de E. coli. Interesantemente, esta Ala83 en GyrA y ParC sólo proporciona resistencia a ácido nalidíxico y no a ciprofloxacina, siendo necesaria la acumulación de mutaciones en gyrA para la resistencia a ciprofloxacina. Para los demás antibióticos, las cepas fueron sensibles y en el secuenciamiento de los genes (rpoB, L4 y 16S ribosomal) asociado a dichas resistencia no se encontró ninguna mutación. La resistencia constitutiva al ácido nalidíxico es una propiedad de B. bacilliformis, y sería un buen indicador de la susceptibilidad a las fluoroquinolonas pero su resistencia no está relacionada a la resistencia de otras fluoroquinolonas. Además, la sensibilidad a otros antibióticos como doxiciclina, rifampicina, cloranfenicol y gentamicina podría indicar alternativas en el tratamiento de esta enfermedad aunque ensayos clínicos serian necesarios. / --- Bartonella bacilliformis is the causative agent of Carrion's disease. Currently in Peru are still present cases and are reported failures in treatment. There is very little research on antimicrobial susceptibility, nor has been standardized a test of sensitivity to the bacteria. Also, are not yet known resistance mechanisms and the sequences of genes associated with them in circulating native strains of Bartonella bacilliformis. Therefore, the objective was molecularly characterize the genes associated with antimicrobial resistance in isolates circulating in endemic areas to assess whether present or not mutations in these genes. Susceptibility testing was standardized using the strain of B. bacilliformis CIP 57.18 placing commercial antibiotic discs: ciprofloxacin (CIP, 5 µg), rifampin (RD, 30 µg), erythromycin (E, 15 µg), gentamicin (CN, 15 µg), doxycycline (DO, 30 µg), chloramphenicol (30 µg), nalidixic acid (NA, 5 µg) and levofloxacin (LVX, 5 µg). All strains tested showed resistance to nalidixic acid but sensitive to ciprofloxacin, except for strain USM-LMM-002 that presented reduced susceptibility to ciprofloxacin. The analysis of the proteins encoded by gyrA and parC genes involved in resistance to these antibiotics, determined that both have an aminoacid difference (Ser83 by Ala) in the QRDR region in relation to the GyrA and ParC of E. coli. Interestingly, the Ala83 in GyrA and ParC only provides resistance to nalidixic acid and not to ciprofloxacin, being necessary the accumulation of mutations in gyrA for ciprofloxacin resistance. For other antibiotics, the strains were sensitive and sequencing of genes (rpoB, and 16S ribosomal L4) associated with such resistance, there was no mutation. Constitutive resistance to nalidixic acid is a property of B. bacilliformis, and would be a good indicator of susceptibility to fluoroquinolones but this resistance is not related to resistance to other fluoroquinolones. In addition, sensitivity to other antibiotics such as doxycycline, rifampicin, chloramphenicol and gentamicin might suggest alternatives in the treatment of this disease, although clinical trials are needed. / Tesis