Resumo: Actinobactérias ou actinomicetos são bactérias Gram-positivas com elevado conteúdo de G+C (guanina + citosina) e com alta capacidade de produzir diversos metabólitos secundários. Estas bactérias são comumente isoladas do solo e são muito estudadas pelo grande potencial em produzirem antibióticos. A ocorrência destes micro-organismos nas areias das praias na costa brasileira é raramente descrita na literatura. As comunidades de micro-organismos que estão presentes em regiões entre-marés de ambientes marinhos realizam processos essenciais que contribuem para o funcionamento das zonas costeiras, como por exemplo, a ciclagem do carbono, a transferência de metal e remoção de poluentes orgânicos para níveis tróficos superiores. Portanto, estes micro-organismos podem servir como bioindicadores do ecossistema. As condições da região entre-marés são extremas, devido aos ciclos de maré, resultando em gradientes de umidade, temperatura, a ação das ondas, a radiação UV, nutrientes e salinidade. Tais ondições favorecem o desenvolvimento e a disseminação de determinados micro-organismos com processos fisiológicos e metabólitos particulares. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo realizar a bioprospecção destes micro-organismos, previamente isolados na região entre-marés da Ilha do Mel, PR, principalmente para produção dedrogas antimicrobianas. Amostras de sedimentos superficiais foram coletadas em quinze estações da região entre-marés da Ilha do Mel (situada na entrada do Complexo Estuarino de Paranaguá, Paraná). As coletas foram realizadas nos dias 01 e 02 de fevereiro de 2007. Sub-amostras de sedimentos foram misturadas com água destilada e alíquotas do sobrenadante inoculadas em meio de cultura Czapeck Dox preparado com água destilada e água salina. As actinobactérias foram isoladas e identificadas por macromorfologia e coloração de Gram e por meio da técnica de microcultivo. Foram obtidas 116 actinobactérias e agrupadas em 10 morfotipos, pertencentes aos gêneros Nocardia e streptomyces. Para avaliação da atividade antibacteriana foram realizados ensaios biológicos qualitativos, em triplicata, pelo método dos poços. A ação das actinobactérias foi evidenciada através da produção de halos de inibição ao redor da colônia que sintetiza o metabólito. As cepas padrão utilizadas para os testes de atividade antimicrobiana foram: Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Candida albicans (ATCC 10231). Os resultados evidenciaram que dos 116 isolados, 79 apresentaram atividade contra pelo menos uma cepa patogênica testada. Aproximadamente 72% das amostras testadas apresentaram atividade contra duas ou mais cepas patogênicas padrão. Sendo que 87% dos isolados testados inibiram C. albicans, 77% S. aureus, 18% P. aeruginosa e 4% E. coli. Na sequência, os isolados que apresentaram potencial antimicrobiano tiveram seus metabólitos caracterizados quimicamente e foi confirmada a identificação ao nível de gênero, por meio da amplificação com oligonucleotídeos específicos do DNA ribossomal 16S. Estes resultados evidenciam a importância do estudo do potencial biotecnológico das actinobactérias isoladas das regiões entre-marés.

Os enterococos são patógenos com considerável capacidade de expressar resistência a vários antimicrobianos e com abundante representatividade em alimentos. Este estudo teve por finalidade realizar o isolamento de cepas do gênero Enterococcus em alimentos, representados por carne de frango e carne suína (crua e processada), analisar o perfil de resistência antimicrobiana através do método de disco-difusão e identificar através de técnicas moleculares as espécies dos isolados e os genes codificadores de resistência para vancomicina e tetraciclina. Foram analisadas 36 amostras, totalizando 54 cepas isoladas pertencentes ao gênero Enterococcus. A espécie detectada em maior ocorrência nos isolados de carne crua de frango (40%) e carne crua suína (29%) foi E. faecalis e nos isolados de produtos cárneos processados (100%) E. faecium. E. casseliflavus/E. flavencens teve seu isolamento apenas em produto processado. A espécie E. gallinarum não foi confirmada entre as amostras de alimentos analisadas. As espécies E. faecalis e E. faecium isoladas a partir de carne crua de frango foram significativamente mais resistentes que as isoladas das demais amostras, apresentando altos percentuais de resistência para: estreptomicina, ciprofloxacina, norfloxacina, eritromicina, vancomicina e tetraciclina. Isolados de carne crua de frango e suína apresentaram gene de resistência para tetraciclina e vancomicina. Portanto, sugere-se que, alimentos de origem animal possam desempenhar um papel importante na disseminação e transferência de enterococos resistentes e/ou genes de resistência aos seres humanos. / Enterococci are pathogens with considerable ability to express resistance to multiple antimicrobials and abundant representation in foods. This study aimed to carry out the isolation of strains of the genus Enterococcus in food, represented by chicken and pork (raw and processed), to analyze the profile of antimicrobial resistance by the disk diffusion method and by molecular techniques to identify species isolates and genes encoding resistance to vancomycin and tetracycline. 36 samples, totaling 54 strains belonging to the genus Enterococcus were analyzed. The species detected in most occurred in isolates from raw chicken meat (40 %) and raw pork (29%) was isolated in E. faecalis and processed meat products (100%) E. faecium. E. casseliflavus / E. flavencens had its isolation only in the processed product. The species E. gallinarum was confirmed between food samples surveyed. E. faecalis and E. faecium isolates from raw chicken meat isolated were significantly more resistant than the other samples, showing high percentage of resistance to: streptomycin, ciprofloxacin, norfloxacin, erythromycin, vancomycin and tetracycline. The isolated raw poultry and swine gene showed resistance to tetracycline and vancomycin. Therefore, it is suggested that food of animal origin may play an important role in the dissemination and transfer resistant enterococci and / or resistance genes to humans.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-11-22T13:57:41Z No. of bitstreams: 1 2012_GracieneAraujodaSilva.pdf: 2104104 bytes, checksum: 774f89c439b5a7d9fb167ed984b74118 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-27T13:45:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_GracieneAraujodaSilva.pdf: 2104104 bytes, checksum: 774f89c439b5a7d9fb167ed984b74118 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T13:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_GracieneAraujodaSilva.pdf: 2104104 bytes, checksum: 774f89c439b5a7d9fb167ed984b74118 (MD5) / Doenças infecciosas são responsáveis por milhões de mortes em todo o mundo e o uso abusivo de antibióticos para tratamento dessas doenças tem provocado aumento da resistência aos antimicrobianos. O desenvolvimento de novas drogas faz-se necessário e os compostos extraídos de liquens são uma promissora fonte de novos medicamentos, pois têm apresentado forte ação antifúngica e antibacteriana. O ácido fumarprotocetrárico, extraído do líquen Cladonia verticilaris, mostrou ser um potente agente antimicrobiano, o que justifica o objetivo deste trabalho que foi avaliar o efeito desse ácido sobre a viabilidade e a função de macrófagos peritoneais de camundongos da linhagem Swiss em ensaios in vitro. Para o teste da viabilidade celular utilizou-se o método do MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina). A produção de peróxido de hidrogênio foi avaliada pelo teste de oxidação do vermelho de fenol e a de óxido nítrico pela reação de Griess. A capacidade fagocitária foi avaliada utilizando Saccharomyces cerevisiae, sensibilizadas ou não com soro de camundongos. Os níveis das citocinas Interleucina-6 (IL-6), Interleucina-10 (IL-10), Interleucina-12 (IL-12), Interleucina-23 (IL-23), proteína quimiotáctica de monócitos (MCP-1) e fator de necrose tumoral (FNT) foram analisados nos sobrenadantes das culturas celulares por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA – Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay). Todos os ensaios foram efetuados utilizando-se o ácido fumarprotocetrárico nas concentrações de 10, 50 ou 100 µg/mL e os resultados mostraram que as células permaneceram viáveis. O ácido fumarprotocetrárico, nas concentrações testadas, não interferiu com a produção de NO, IL-6, IL-10 e IL-12, mas aumentou a produção de IL-23 e inibiu a produção de MCP-1. Em uma concentração de 10 ug/mL, o ácido inibiu a produção de H2O2, mas nas concentrações de 50 ou 100 ug/mL essa produção foi estimulada. O ácido, em uma concentração de 100 ug/mL, inibiu a produção de FNT. Além dos efeitos antimicrobianos já relatados na literatura, o conjunto de resultados obtidos mostrou que o ácido fumarprotocetrárico possui efeitos imunomodulatórios, o que o torna um potencial agente para o desenvolvimento de novos medicamentos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Infectious diseases are responsible for millions of deaths worldwide and the excessive use of antibiotics to treat these diseases has led to increased antimicrobial resistance. The development of new drugs is necessary and the compounds extracted from lichens are a promising source of new medicaments as they have presented strong antifungal and antibacterial activity. The fumarprotocetraric acid, extracted from the lichen Cladonia verticilaris, proved to be a potent antimicrobial agent, justifying the purpose of this study that was to evaluate the effect of this acid on the viability and function of peritoneal macrophages from Swiss mice lineage in in vitro tests. For the cell viability test it was used the MTT (3 – (4,5-dimethylthiazol-2yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide)method. The production of hydrogen peroxide was evaluated by oxidation of phenol red and nitric oxide by Griess reaction. The phagocytic capacity was evaluated using Saccharomyces cerevisiae, sensitized or not with serum from mice. The levels of the cytokines Interleukin-6 (IL-6), Interleukin-10 (IL-10), Interleukin-12 (IL-12), Interleukin-23 (IL-23), monocyte chemotactic protein (MCP-1) and Tumor Necrosis Factor (TNF) were examined in cell culture supernatants by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). All assays were performed using the fumarprotocetraric acid at concentrations of 10, 50 or 100 μg/mL and the results showed that cells remained viable. The fumarprotocetraric acid did not interfere on NO, IL-6, IL-10, IL-12 production but increased IL-23 and inhibited MCP-1 production. At a concentration of 10 µg/mL the acid inhibited H2O2 production but at concentrations of 50 or 100 µg/mL this production was stimulated. The acid, at a concentration of 100 µg/mL, inhibited TNF production. In addition to the antimicrobial effects already described in the literature, the set of results obtained showed that fumarprotocetraric acid has immunomodulatory effects, which makes it a potential agent for the development of new drugs.

Tese (doutorado)—Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, 1997. / Submitted by Leandro Silva Borges (leandroborges@bce.unb.br) on 2013-05-10T20:46:33Z No. of bitstreams: 1 1997_PatriciaMedeirosSouza.pdf: 1534767 bytes, checksum: 365a8ec90fb84017f722bf205b63b6d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-10T20:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1997_PatriciaMedeirosSouza.pdf: 1534767 bytes, checksum: 365a8ec90fb84017f722bf205b63b6d5 (MD5) / Este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do metronidazol sobre a função hepática, um medicamento comumente empregado no tratamento da tticommúase vaginal e outras parasitoses, alem de infecções anaeróbias bacterianas. Para tal, empregaram-se 72 ratos albinos Wistar, machos, tratados com metronidazol 7,5 mg/kg, 15 mglkg e 30 mg/kg ou com solução de NaCl 0,9% (controle), em duas aplicações diárias, por 4 dias, via ip. Após 48, 72 e 96 horas do inicio dos tratamentos, collieram-se amostras de sangue para a dosagem da atividade sérica das enzimas ALT(alanina aminotransferase) e AST(aspartato anúnotransferase). Os resultados apontaram que, comparado ao controle, o metronidazol (15 mg/kg e 30 mg/kg) provoca um aumento significante (p<0,05) na atividade enzimática da AL T, sendo este efeito já observado após 48 horas de tratamento. Já o aumento da atividade sérica da AST somente ocorreu nos animais tratados com o metronidazol 30 mg/kg, após 96 horas de tratamento, sendo este efeito reversivel após a retirada da droga. Concluiu-se que o metronidazol, quando empregado em doses maiores e mesmo por tempo restrito, em ratos, aumenta a atividade sérica das enzimas ALT e AST, efeito este reversivel após a retirada da droga. _____________________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this work was to study the effects of metronidazole, a compound employed in trichomoniases and anaerobic infections treatment, upon hepatíc function. For this purpose, 72 male rats Wistar (220 ± 20 g) were treated with metronidazole 7.5 mgfkg, 15 mg/kg and 30 mgfkg or saline (control), BID, for 4 days, intraperitoneal route. 48, 72 e 96 hours after the beginning o f the treatment, blood samples were collected to measure the ALT and AST senun activities. The results showed that metronidazole !5 mgfkg and 30 mgfkg promote a significant increase (p<0,05) of AL T values, observed 48 h after treatment The increase of AST activity only happened 96 h after treatment with metronidazole 30 mgfkg. The reference values of the both enzyme activities became returned to the basal leveis after the drug withdrawal. We conclude that the metronidazole does not promote pennanent alterations in hepatic function, when employed in short time periods, even in high dosage, in rats.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-12-10T14:17:35Z No. of bitstreams: 1 2013_AnneDaianneSousaSilvaMarques.pdf: 863748 bytes, checksum: e0fd3a74a6b77dc7bd10df21bd03dbdc (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-12-10T14:41:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AnneDaianneSousaSilvaMarques.pdf: 863748 bytes, checksum: e0fd3a74a6b77dc7bd10df21bd03dbdc (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-10T14:41:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AnneDaianneSousaSilvaMarques.pdf: 863748 bytes, checksum: e0fd3a74a6b77dc7bd10df21bd03dbdc (MD5) / A bactéria Escherichia coli é um microorganismo pertencente à microbiota normal de animais e humanos. Os patotipos de E.coli podem estar presentes no trato gastrintestinal dos animais carreando genes diarreiogênicos (enterotoxinas e adesinas), sem que estes estejam manifestando sinais de diarréia. A proximidade entre humanos e animais pode ser determinante para a transmissão inter-espécie de cepas que contêm genes envolvidos nos mecanismos de patogenicidade do agente. O presente trabalho teve como objetivo detectar os genes STa (toxina termoestável), K99 (F45), Intimina (eae), Stx1(Toxina Shiga, bem como realizar o antibiograma de 48 isolados obtidos de coletas de suabe retal de 50 cães, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade de Brasília. Nas amostras testadas nenhum isolado foi positivo para STa e K99. Foram encontrados 21 isolados positivos para Stx1(43,75%) e 14 isolados positivos (29,2%) para gene de Intimina. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos também foi analisado para os seguintes fármacos: Sulfazotrim, Azitromicina, Enrofloxacina, Ceftiofur, Amoxicilina+Clavulanato, Doxiciclina, Ampicilina, Cefalexina. Os antibióticos que apresentaram maiores percentuais de resistências foram: Ampicilina (25%) Doxiciclina (22,9%) e Cefalexina (20,8%). Já aqueles que demonstraram maiores percentuais de sensibilidade foram Sulfazotrim (87,5%), Azitromicina (85,41%) e Enrofloxacina (77%). ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bacterium Escherichia coli is a microorganism inhabitant of the normal microbiota of animals and humans. Pathotypes of E.coli may be present in the gastrointestinal tract of animals hustling genes that cause diarrhea, (enterotoxins and adhesin)s, they are not manifesting signs of diarrhea. The proximity of humans and animals can be crucial to the inter-species transmission of strains that contain genes involved in the mechanisms of pathogenicity of the agent. The present study aimed to detect the genes STa (heat stable toxin), K99 (F45), Intimina (eae), Stx1(Shiga toxin 1) and perform susceptibility testing of 48 isolates from rectal swab samples from 50 dogs attended Veterinary Hospital at the University of Brasilia. In any isolated samples tested were positive for STa and K99. 21 positive isolates were found to Stx1(43.75%) and 14 positive isolates (29.2%) to intimin gene. The antimicrobial susceptibility profile was also analyzed for the following drugs: sulfazotrim, Azithromycin, Enrofloxacin, Ceftiofur, Amoxicilina + Clavulanate, Doxycycline, Ampicillin, Cephalexin. The antibiotics that showed higher percentages of resistance were: ampicillin (25%) Doxycycline (22.9%) and cephalexin (20.8%). Those who have already demonstrated higher sensitivity were sulfazotrim percentage (87.5%), Azithromycin (85.41%) and Enrofloxacin (77%).

Orientador : Jacks Jorge Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-01T16:21:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_NadjaRodriguesde_D.pdf: 2154762 bytes, checksum: 630af7fce371ffa49f82b89764258413 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Uma das principais infecções oportunistas em pacientes imunocomprometidos é a candidose oral, presente em mais que 90% dos pacientes infectados pelo HIV. Um total de 204 amostras de leveduras provenientes de pacientes infectados pelo HIV (n=173) e controles (n=31) foram identificadas e avaliadas quanto à resistência a antifúngicos. Candida albicans correspondeu a 57,8% (n=100) das amostras identificadas e 42, 1% foram de outras espécies, sendo 13 C. krusei, 9 C. lusitaniae e 8 C. tropicalis. Também foram isoladas 2 amostras de C. intermedia e 1 de C. norvegensis. Sensibilidade para anfotericina B (AMPH), fluconazol (FLCZ), miconazol (MCZ) e itraconazol (ITCZ) foi determinada por microdiluição. Do total de amostras, 29 isolados de C. albicans e 14 de outras espécies apresentaram baixa susceptibilidade para FLCZ. Dois isolados de C. tropicalis, 5 de C. krosei e 1 de C. norvegensis foram resistentes ao FLCZ. Cinco isolados de C. tropicalis, 12 de C. krusei, 4 de C. glabrata, 2 de C. intermedia e 1 de C. norvegensis foram resistentes ao ITCZ. Este estudo demonstrou a aumento da diversidade de espécies de Candida na cavidade bucal de pacientes infectados pelo HIV, associado à emergência de espécies incomuns de Candida, assim como a sensibilidade a agentes antifúngicos destes isolados / Abstract: Oral candidosis is one of the main opportunistic fungal infections amongst immunocompromised individuais, and affects more than 90% of HIV-infected patients.Two hundred and fouryeasts isolatesfrom oral cavities of HIV-infectedand control patients were identified and tested for antifungal resistance. C. albicans corresponded to 57.8% of the isolates while 42.1% were identified as other species, from which 13 were subsequently identified as C. krusei, 9 as C. lusitaniae, and 8 as C. tropicalis. There were also 2 isolates of C. intermedia and 1 of C. norvegensis. Antifungal resistance of the isolatesto amphotericinB (AMPH),fluconazole (FLCZ), miconazole (MCZ) and itraconazole (ITCZ) was measured by microdilution. Out of 204 isolates, 29 of C. albicans and 14 of other species had low susceptibility to FLCZ. Two isolates of C. tropicalis, 5 of C. krusei, and 1 C. norvegensiswere resistant to FLCZ. Five isolates of C. tropicalis, 12 of C. krusei, 4 of C. glabrata, 2 of C. intermedia, and 1 of C. norvegensis were resistant to ITCZ. This study demonstrated increased diversity of Candida species in the oral cavity of HIV-infected patients, associated with the emergence uncommon species, as well as the sensibility of these isolates to antifungal agents / Doutorado / Doutor em Biologia e Patologia Buco-Dental

Objetivo: Describir la prevalencia y los factores asociados a la compra de antimicrobianos sin receta médica (CASRM) en usuarios de boticas y farmacias según la Encuesta Nacional de Satisfacción de Usuarios en Salud (ENSUSALUD) 2016. Métodos: Se realizó un análisis secundario de ENSUSALUD 2016; estudio con muestreo probabilístico bietápico en las Instituciones Prestadoras de Servicios de Salud del Ministerio de Salud y Gobiernos Regionales, Seguro Social de Salud, Fuerzas Armadas y Policiales, y Clínicas del sector privado. Se realizaron modelos lineales generalizados y se estimaron razones de prevalencia (RP) con IC 95% para muestreo complejo. Resultados: La prevalencia de CASRM fue 56,00%. La prevalencia de CASRM en la Sierra y la Selva fue 69,00% (RP= 1,69 IC95%:1,34-2,14) y 61,00% (RP=1,61 IC95%:1,31-1,99) mayor, respectivamente, que la prevalencia de CASRM en Lima Metropolitana. La prevalencia de CASRM en los que tenían Seguro Integral de Salud (SIS) fue 28,00% menor que, en aquellos que realizaron alguna CASRM y no tenían seguro de salud (RP=0,72 IC95%:0,59-0,88). La prevalencia de CASRM en los que compraron para su cónyuge o hijo/a fue 34,00% (RP=0,66 IC95%:0,56-0,78) y 35,00% (RP=0,65 IC95%:0,50-0,86) menor, respectivamente, que en aquellos que realizaron la CASRM para ellos mismos. Conclusión: Más de la mitad de usuarios de boticas y farmacias, que compraron antimicrobianos, fue sin receta médica. La CASRM está asociado a ser de la Sierra o Selva, tener SIS y comprar para su cónyuge o hijo/a. Se sugiere fomentar el uso y dispensación adecuado de antimicrobianos así como el acceso a servicios de salud en la población peruana. / Objectives: To describe the prevalence of the purchase of antimicrobials without medical prescription (PAWMP) and its associated factors in users of drugstores/pharmacies according to the National Survey on User Satisfaction of Health Services (ENSUSALUD) 2016. Materials and Methods: We performed a secondary data-analysis of ENSUSALUD 2016; a two-stage population-based study carried out in health care centes of the Ministry of Health and Regional Governments , Social Security, Armed Forces and Police and the private sector. Generalized linear models for complex survey sampling were fit to estimate prevalence ratios (PR) and 95% confidence intervals (CI). Results : The prevalence of PAWMP was 56.00%. The prevalence of PAWMP in the Mountains/Jungle was 69.00% (PR : 1.69 ; 95% CI: 1.34-2.14) and 61,00% (RP=1.61 IC95%:1.31-1.99) greater, respectively, than the prevalence of PAWMP in Lima. The prevalence of PAWMP in those with Integral Health Insurance (SIS) was 28.00% lower, than in those with PAWMP who did not have health insurance (RP=0.72 IC95%:0.59-0.88). The prevalence of PAWMP in those who bought for their spouse or child was 34.00% (RP=0,66 IC95%:0,56-0,78) and 35.00% (RP=0.65 IC95%:0.50-0.86) lower, respectively, than in those that bought for themselves. Conclusions: More than half of users of drugstores/pharmacies who bought antimicrobials, did it without a medical prescription. In Peru, PAWMP is associated with being from the Mountains or Jungle, having SIS and purchase antimicrobials for their spouse or child. We suggest strategies to promote the adequate use and dispensing of antimicrobials, and increase the access to health services in the Peruvian population.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:26:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339589.pdf: 2720917 bytes, checksum: c7c298560a1ba7e810b503b1565204fd (MD5) Previous issue date: 2016 / Algas pardas da família Dictyotaceae são conhecidas por produzirem uma ampla variedade de metabólitos secundários bioativos. Muitos desses metabólitos já demonstraram potencial antifúngico, antibacteriano, antiviral, além de exercerem múltiplas funções nas algas. Estudos químicos da espécie Canistrocarpus cervicornis levaram ao isolamento de diterpenos dos tipos dolastano e secodolastano, enquanto de Dictyota mertensii foram isolados os guaianos prenilados. Organismos marinhos geralmente apresentam uma diversidade química considerável entre amostras coletadas em locais diferentes. Nesse trabalho foram investigadas as espécies C. cervicornis (C2) e D. mertensii (D5) coletadas na ?Pedra do Paraíso? (CE) e Ilha da Trindade (ES), respectivamente. C2 e D5 foram selecionados por apresentarem resultados promissores a partir de uma triagem das atividades antioxidante e antimicrobiana, realizadas por grupos parceiros. As algas previamente secas foram maceradas em diclorometano/metanol 2:1 e fracionadas através de sucessivas separações cromatográficas, geralmente utilizando sílica gel e solventes de polaridade crescente. O monitoramento de extratos e frações foi realizado por cromatografia em camada delgada. As substâncias isoladas foram analisadas por métodos espectroscópicos. De C. cervicornis foram isolados os diterpenos do tipo dolastano Cc2 (4a-acetóxi-9ß,14a-dihidroxidolasta-1(15),7-dieno) e Cc4 (4a-acetóxi-14a-hidroxidolasta-1(15),7,9-trieno), além de um hidrocarboneto, um ácido graxo e outros 12 compostos ainda não identificados. De D. mertensii foram isolados os diterpenos Dm2 (acetato de dictyol B, do tipo guaiano prenilado) e Dm3 (10-acetóxi-18-hidroxidolabela-2,7-dieno, do tipo dolabelano), os plasticidas Dm1 (ftalato de dipentila) e Dm5 (adipato de bis(2-(2-butoxietoxi) etila), além de outras seis substâncias ainda não identificadas. Dm3 é inédito para D. mertensii e é o primeiro diterpeno do tipo dolabelano isolado da espécie. Considerando os resultados obtidos para ambas as espécies e as variações químicas e biológicas observadas em função do local de coleta, a continuidade dos seus estudos contribui para o esclarecimento da distribuição de metabólitos secundários entre as espécies, bem como do potencial farmacológico e ecológico dos mesmos.<br> / Abstract : Brown algae of Dictyotaceae family are known to produce a wide variety of bioactive secondary metabolites. Many of these metabolites have shown antifungal, antibacterial and antiviral activities, and play multiples functions in algae. Previous investigations on Canistrocarpus cervicornis led to the isolation of dolastane and secodolastane diterpenes, while Dictyota mertensii samples afforded prenylated guaianes. Identical marine organisms present usually a considerable chemicals change among samples collected from different locations. This study investigated species C. cervicornis and D. mertensii collected in ?Pedra do Paraíso? (CE) and Trindade Island (ES), respectively. These extracts were selected after a screening of antioxidant and antimicrobial activities performed by partner groups, since they showed the most promising results. The dried algae were soaked in dichloromethane/methanol 2:1 (v/v) and fractionated by successive chromatographic separations with silica gel and solvents of increasing polarity. Extracts and fractions were monitorated by thin layer chromatography. Isolated compounds were identified by spectroscopic methods. Two diterpenes of dolastane types, Cc2 (4a-acetoxy-9ß, 14a-dihidroxydolasta-1 (15), 7-diene) and Cc4 (4a-acetoxy-14a-hidroxydolasta-1 (15) 7 9-triene), along with a hydrocarbon, a fatty acid and 12 yet unidentified compounds were isolated from C. cervicornis. From D. mertensii were isolated two diterpenes Dm2 (dictyol B acetate, a prenylated guaiane) and Dm3 (10-acetoxy-18-hidroxydolabela-2,7-diene, a dolabellane), besides the plasticizers Dm1 (dipentyl phthalate) and Dm5 (adipate bis (2- (2-butoxyethoxy) ethyl), and six other substances not yet identified. Dm3 is new reported from D. mertensii and it is the first dolabellane isolated in this species. Considering the results obtained for both species, besides chemical and biological changes observed due to the collection site, the continuity of their studies would help to clarify the distribution of secondary metabolites among species, as well as their pharmacological and ecological potential.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los antimicrobianos son la principal herramienta en el tratamiento de enfermedades causadas por bacterias en humanos y animales. El excesivo y mal uso de estos compuestos ha causado la aparición de resistencia bacteriana y uno de los problemas de interés público es el posible traspaso de estas resistencias de los animales al hombre. Es así que a nivel mundial, los Programas de Armonización y Globalización Internacional han hecho énfasis en el uso racional de los antimicrobianos en animales de producción, a través de programas de monitoreo de resistencia bacteriana. El método de determinación bacteriana más utilizado y aceptado mundialmente es el método de dilución en placa, que da valores de MIC (Concentración Mínima Inhibitoria) para un determinado antimicrobiano. Otro método que está siendo utilizado estos años en medicina humana, por su rapidez y sencillez es el de las Tiras Reactivas de MIC (E-test). En este trabajo se evaluó la utilización de este método como base para un plan de monitoreo de resistencia bacteriana en Medicina Veterinaria. Siendo las mastitis una de las principales causas de uso de antimicrobianos en el ganado bovino, se evaluó la susceptibilidad a 178 cepas aisladas de mastitis clínica de bovinos de leche por métodos de dilución en placa y E-test. Se encontró concordancia de resistencia. No se obtuvieron diferencias significativas entre los valores de MIC obtenidos por ambos métodos con cefoperazona, ampicilina, amoxicilina, bencilpenicilina y enrofloxacino, excepto con gentamicina. Estos resultados indicarían que E-test podría ser utilizado como método de screening por ser simple y rápido, pero faltan estudios con algunos antimicrobianos utilizados en Medicina Veterinaria. Por otro lado, una de las resistencias mas conocidas es a los compuestos -lactámicos. Es así, que en este trabajo también se estudió la presencia de vi enzimas -lactamasas en cepas de E. coli y estafilococos. Además, se estudió la presencia de -lactamasas de espectro expandido (BLEE) y la resistencia a meticilina, en ambos tipos de cepas respectivamente, ya que son causas de fallas terapéuticas comunes en humanos y posibles mecanismos de resistencia a las bacterias de mastitis bovina evaluadas. Se encontró la presencia de -lactamasas en el 100% de las cepas de E. coli y no se detectaron BLEE. En las cepas de estafilococos se detectó un 34% de presencia de -lactamasas: 1/26 en Staphylococcus aureus, 6/26 en Staphylococcus coagulasa negativos y 4/10 en Staphylococcus spp., fueron resistentes a meticilina. Estos resultados sugerirían que la presencia de -lactamasas y mecanismos de resistencia más complejos, como lo son a meticilina, podrían dar cuenta de las resistencias observadas a diferentes antimicrobianos del tipo -lactámicos en aislados de mastitis bovina.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El uso de antimicrobianos en animales de producción trae consigo el riesgo de presencia de residuos que superen los límites máximos permitidos de estos medicamentos en alimentos de origen animal. Esto ha llevado a desarrollar programas de control para lo cual es necesario contar con métodos de detección de estas sustancias, entre los cuales están los métodos de “screening”. El objetivo del presente estudio fue validar la prueba de “screening” microbiológico “Fast Antimicrobial Screen Test” (“FAST”) para la detección de 16 antibióticos frecuentemente usados en la producción animal en Chile. Para esto, se siguieron las pautas recomendadas por la Unión Europea (U.E) publicadas en el Diario Oficial de las Comunidades Europeas (2002). La implementación de la técnica, se basó en las recomendaciones del fabricante (Medtox®). En esta experiencia se determinó que la zona inhibitoria alrededor del sensidisco control N5 estuvo, en la mayoría de los casos, dentro de un rango de 25 a 30 mm, valor un poco más elevado que aquel descrito para la técnica (20 a 26 mm). Por otro lado, si bien en este estudio se observó que pueden obtenerse resultados tan pronto como a las seis horas de iniciada la incubación, para la validación del método la lectura de las placas se fijó a las 24 horas, tiempo al cual se visualizaron inequívocamente los halos de inhibición. La especificidad del método se determinó analizando los solventes y diluyentes utilizados en el estudio y tejido renal libre de antimicrobianos, observándose que ninguno de ellos produjo interferencia con los resultados. Para medir la capacidad de detección del método se fijó el límite de determinación para los 16 antibióticos como drogas puras con los siguientes resultados: amoxicilina (25 μg/kg o ppb), ampicilina (25 μg/kg), ceftiofur (3000 μg/kg), cloxacilina (25 μg/kg), enrofloxacino (100 μg/kg), eritromicina (100 μg/kg), estreptomicina (500 μg/kg), florfenicol (300 μg/kg), flumequina (1000 μg/kg), gentamicina (375 μg/kg), neomicina (2500 μg/kg), oxitetraciclina (300 μg/kg), penicilina (25 μg/kg) y tilosina 2 (200 μg/kg). Para ácido oxolínico y lincomicina no pudo ser determinado. Además, se obtuvo el límite de determinación para enrofloxacino y oxitetraciclina presentes en matrices renales de aves tratadas con dosis terapéuticas, obteniéndose valores de 1467 y 247μg/kg, respectivamente. El análisis de robustez indicó que el método no es lo suficientemente robusto frente a los 4 factores seleccionados, los cuales fueron operador, pH del medio, concentración de esporas y temperatura de incubación. En conclusión, a pesar de la baja robustez del método, éste resultó tener una especificidad y sensibilidad adecuadas siendo capaz de detectar, en conformidad a los niveles de exigencia, un amplio espectro de antimicrobianos como drogas puras. Sin embargo, si se desea emplear este método en Chile, es importante que se continúen los estudios basados en la matriz renal, para definir con mayor precisión la sensibilidad de la técnica.