Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 248604.pdf: 837714 bytes, checksum: 019309fd773e7f81d605fc584437ac7a (MD5) / A proteína celular do prion (PrPC) é expressa em vários tipos celulares, especialmente em neurônios. Sua função fisiológica é desconhecida, no entanto, seu papel no desenvolvimento das doenças neurodegenerativas foi bem descrito, as quais resultam de uma mudança conformacional da PrPC para a forma scrapie (PrPSC). Vários estudos têm mostrado uma associação entre a PrPC, o metabolismo do cobre e a atividade antioxidante da superóxido dismutase (SOD). Contudo, os processos celulares envolvendo a PrPC, neste contexto, permanecem indefinidos. Considerando que o padrão de expressão protéica da SOD em vasos lesados foi similar ao verificado no cérebro de camundongos knockout para a PrPC, a hipótese do presente estudo foi que alterações da expressão da PrPC levariam à anormalidade da regulação do cobre e induziriam sub-atividade da SOD da parede vascular. Assim, nossos objetivos foram estudar se a expressão da PrPC sofre indução por agentes que desencadeiam o estresse do retículo endoplasmático (RE) e determinar seu envolvimento no que se refere à atividade da SOD. Análises de western blotting e RT-PCR foram usadas para determinar a ocorrência de alteração da expressão da PrPC na presença de estresse do RE. Células musculares lisas de aorta de coelho foram cultivadas por diferentes períodos de tempo (4, 8 e 18 horas), com agentes estressores do RE, angiotensina II (AngII, 100 nM), tunicamicina (Tn, 5 g/mL) e 7-cetocolesterol (7kc, 5 g/mL). A atividade da SOD foi determinada pelo método de inibição da redução do citocromo c, e a atividade basal da SOD foi 13,9 1,2 U/mg de proteína. O estresse do RE produziu diminuição significativa na atividade da SOD após incubação por 4 horas com Tn (29%) e 7kc (12%), 8 horas com Tn (37%), bem como, após 18 horas com AngII (42%) e 7kc (32%); inversamente, foi observado um aumento significativo na atividade da SOD nas células expostas a AngII (41%) durante 8 horas. A concentração celular de cobre, determinada através de espectroscopia de absorção atômica, foi cerca de 9 vezes maior nas células estimuladas com AngII por 8 horas. As análises de western blotting para as isoenzimas da SOD mostraram um perfil variado de expressão, em todos os tempos de incubação com os diferentes estímulos, que não se correlacionou com a atividade enzimática. A expressão da PrPC diminuiu após a exposição a todos os estímulos nos diferentes tempos de incubação. Os ensaios de RT-PCR mostraram aumento da expressão do mRNA para PrPC apenas nas células estimuladas durante 8 horas com os diferentes agentes estressores. A expressão do mRNA para PrPC também foi avaliada em fragmentos de artérias ilíacas de coelhos submetidos à lesão por cateter balão, com sobrevida de 7 e 14 dias, bem como logo após a lesão. Neste ensaio, a expressão do mRNA para PrPC apresentou aumento pronunciado no grupo avaliado logo após a lesão. Os resultados obtidos com os modelos de estresse do RE vascular aqui utilizados não demonstraram um perfil de atividade antioxidante para a PrPC. O que não descarta a hipótese desta proteína estar envolvida em outro tipo de resposta celular frente ao estresse oxidativo. Palavras-chave: superóxido dismutase, proteína celular do prion, estresse do retículo endoplasmático, células musculares lisas de aorta de coelho.

O espessamento intimal e a reestenose que ocorrem após os procedimentos de angioplastia transluminal percutânea e/ou o implante de stents representam uma causa freqüente de falência destes procedimentos. O principal achado patológico responsável pela reestenose parece ser a hiperplasia intimal, já que o dispositivo intravascular é resistente ao remodelamento arterial geométrico. O propósito deste estudo é avaliar, através da morfometria digital, o espessamento intimal presente nas regiões da parede arterial imediatamente proximal e distal ao implante de um stent metálico em configuração em “Z “ não recoberto ou recoberto com PTFE. Vinte e cinco suínos de raça mista, com seis a dez semanas de idade, pesando em média 20 kg foram divididos em três grupos. No grupo I, cinco animais foram submetidos à exposição cirúrgica retroperitoneal da aorta abdominal, aortotomia e manipulação com uma bainha introdutora de 12 F. O grupo II incluiu dez animais que foram submetidos ao implante de um stent metálico auto-expansível não recoberto. No grupo III, incluindo também dez animais, foram implantados stents recobertos com PTFE. Após quatro semanas, todos os animais foram sacrificados e o segmento aorto-ilíaco foi removido. Quatro animais foram excluídos do estudo por trombose da aorta (um animal do grupo II e três animais do grupo III). Para a análise morfométrica foram utilizados os testes não paramétricos de Wilcoxon e de Kruskal-Wallis, para as comparações, respectivamente, no mesmo grupo e entre os grupos. Foi adotado o nível de significância de 5% ( p< 0,05). Quando os espécimes da parede arterial, imediatamente proximal e distal aos stents foram comparados, nenhuma diferença estatisticamente significativa foi encontrada entre as áreas luminal, intimal, média ou índice intimal em cada grupo. Na comparação entre os grupos, as áreas intimal, média e o índice intimal não demonstraram variação estatisticamente significativa. Foram identificadas diferenças entre os grupos quanto às áreas luminais proximais (p = 0,036) e distais (p=0,044). Pelo teste de comparações múltiplas para Kruskal-Wallis (Teste de Dunn) identificou-se diferença significativa entre os grupos I e II. Entretanto, quando estas variáveis foram controladas pelo fator peso (relação área luminal/peso) a diferença não foi mais observada. Concluímos que, após quatro semanas, stents recobertos com PTFE induzem um espessamento intimal justa-stent similar ao observado com stents não recobertos ou com a simples manipulação arterial com uma bainha introdutora. Neste modelo experimental suíno, de curto seguimento, o revestimento com PTFE não foi responsável por adicional espessamento intimal. / Intimal thickening and restenosis occurring after angioplasty and/or stent deployment constitutes a frequent determinant of failure of these procedures. The main pathologic finding responsible for restenosis seems to be intimal hyperplasia, since the intravascular device is resistant to geometric arterial wall remodeling. The purpose of this study is to evaluate, by means of digital morphometry, the intimal thickening present in the regions of the arterial wall proximal and distal to the implant of a naked or PTFE covered stainless steel Z stent. Twenty five crossbred pigs, 6 to 10 weeks old, weighing between 14 and 32 kg (average= 20 kg) kg were divided in three groups. Group I included five animals that were submitted to retroperitoneal exposure of the aorta, aortotomy and simple insertion of a 12 F sheath. Group II included those animals in which a naked stent was deployed. Finally, in group III included the use of a PTFE covered stent. After four weeks, all animals were submitted to euthanasia and the aorto-iliac segment was removed. Four animals were excluded from the study due to aortic thrombosis (one from group II and three from group III). Morphometric analysis was performed using the non-parametric Wilcoxon and Kruskal-Wallis tests to compare data within the group, and across groups, respectively. When specimens of the arterial wall immediately proximal and distal to the stents were compared, no statistically significant difference could be established regarding luminal, intimal and media areas or intimal index. It was not possible to find significant differences between the intimal and medial areas or the intimal index. According to the Kruskal-Wallis test, a significant difference between proximal (p=0,036) and distal (p=0,044) luminal areas was observed between groups. The Dunn test identified differences between groups I and II. However, when these variables were corrected regarding the weight factor (luminal area/ weight index) this difference was no longer seen. We conclude that, after four weeks, covered PTFE stents generate an intimal thickening similar to uncovered stents or simple catheter manipulation. In this experimental model, the PTFE material was not responsible for additional intimal thickening during this limited period of time.

O espessamento intimal e a reestenose que ocorrem após os procedimentos de angioplastia transluminal percutânea e/ou o implante de stents representam uma causa freqüente de falência destes procedimentos. O principal achado patológico responsável pela reestenose parece ser a hiperplasia intimal, já que o dispositivo intravascular é resistente ao remodelamento arterial geométrico. O propósito deste estudo é avaliar, através da morfometria digital, o espessamento intimal presente nas regiões da parede arterial imediatamente proximal e distal ao implante de um stent metálico em configuração em “Z “ não recoberto ou recoberto com PTFE. Vinte e cinco suínos de raça mista, com seis a dez semanas de idade, pesando em média 20 kg foram divididos em três grupos. No grupo I, cinco animais foram submetidos à exposição cirúrgica retroperitoneal da aorta abdominal, aortotomia e manipulação com uma bainha introdutora de 12 F. O grupo II incluiu dez animais que foram submetidos ao implante de um stent metálico auto-expansível não recoberto. No grupo III, incluindo também dez animais, foram implantados stents recobertos com PTFE. Após quatro semanas, todos os animais foram sacrificados e o segmento aorto-ilíaco foi removido. Quatro animais foram excluídos do estudo por trombose da aorta (um animal do grupo II e três animais do grupo III). Para a análise morfométrica foram utilizados os testes não paramétricos de Wilcoxon e de Kruskal-Wallis, para as comparações, respectivamente, no mesmo grupo e entre os grupos. Foi adotado o nível de significância de 5% ( p< 0,05). Quando os espécimes da parede arterial, imediatamente proximal e distal aos stents foram comparados, nenhuma diferença estatisticamente significativa foi encontrada entre as áreas luminal, intimal, média ou índice intimal em cada grupo. Na comparação entre os grupos, as áreas intimal, média e o índice intimal não demonstraram variação estatisticamente significativa. Foram identificadas diferenças entre os grupos quanto às áreas luminais proximais (p = 0,036) e distais (p=0,044). Pelo teste de comparações múltiplas para Kruskal-Wallis (Teste de Dunn) identificou-se diferença significativa entre os grupos I e II. Entretanto, quando estas variáveis foram controladas pelo fator peso (relação área luminal/peso) a diferença não foi mais observada. Concluímos que, após quatro semanas, stents recobertos com PTFE induzem um espessamento intimal justa-stent similar ao observado com stents não recobertos ou com a simples manipulação arterial com uma bainha introdutora. Neste modelo experimental suíno, de curto seguimento, o revestimento com PTFE não foi responsável por adicional espessamento intimal. / Intimal thickening and restenosis occurring after angioplasty and/or stent deployment constitutes a frequent determinant of failure of these procedures. The main pathologic finding responsible for restenosis seems to be intimal hyperplasia, since the intravascular device is resistant to geometric arterial wall remodeling. The purpose of this study is to evaluate, by means of digital morphometry, the intimal thickening present in the regions of the arterial wall proximal and distal to the implant of a naked or PTFE covered stainless steel Z stent. Twenty five crossbred pigs, 6 to 10 weeks old, weighing between 14 and 32 kg (average= 20 kg) kg were divided in three groups. Group I included five animals that were submitted to retroperitoneal exposure of the aorta, aortotomy and simple insertion of a 12 F sheath. Group II included those animals in which a naked stent was deployed. Finally, in group III included the use of a PTFE covered stent. After four weeks, all animals were submitted to euthanasia and the aorto-iliac segment was removed. Four animals were excluded from the study due to aortic thrombosis (one from group II and three from group III). Morphometric analysis was performed using the non-parametric Wilcoxon and Kruskal-Wallis tests to compare data within the group, and across groups, respectively. When specimens of the arterial wall immediately proximal and distal to the stents were compared, no statistically significant difference could be established regarding luminal, intimal and media areas or intimal index. It was not possible to find significant differences between the intimal and medial areas or the intimal index. According to the Kruskal-Wallis test, a significant difference between proximal (p=0,036) and distal (p=0,044) luminal areas was observed between groups. The Dunn test identified differences between groups I and II. However, when these variables were corrected regarding the weight factor (luminal area/ weight index) this difference was no longer seen. We conclude that, after four weeks, covered PTFE stents generate an intimal thickening similar to uncovered stents or simple catheter manipulation. In this experimental model, the PTFE material was not responsible for additional intimal thickening during this limited period of time.

Introdução A visão tradicional afirma que as células miointimais responsáveis pela hiperplasia intimal derivam das células musculares lisas da média e que, através da mudança de seu fenótipo para um estado proliferativo, migram para a região intimal Esta visão tem sido contestada em algumas publicações que tem demonstrado o importante papel da adventícia na fisiopatologia da hiperplasia intimal. Objetivo: Analisar as alterações da estrutura da parede da aorta abdominal de suínos secundária a ressecção dos VV presentes na adventícia e no tecido conetivo Peri aórtico e avaliar se estas alterações se modificam com um período mais prolongado de isquemia da parede arterial. Material e método: Trata-se de um estudo experimental com uma série de dez suínos da raça Landrace , com idade entre 8 e12 semanas, pesando em torno de 20Kg. A aorta abdominal foi abordada por incisão retro peritoneal, o tecido Peri - aórtico contento os vasa vasorum e tecido gorduroso foi ressecado e este segmento de 1 cm envolvido por pericárdio bovino. Um grupo de animais foi sacrificado após 4 semanas e outro após 8 semanas. Os cortes histológicos foram corados com hematoxilina e coloração Weigert para identificar melhor as fibras elásticas. Foram analisados o processo inflamatório, neovascularização e a degeneração da camada media assim como a presença de hiperplasia e fibrose subendotelial. Resultado: Em ambas as coortes havia espessamento importante de todo o tecido Peri aórtico e do endotélio. Na coloração com H/E se identificava processo inflamatório moderado a intenso junto ao pericárdio em todos os casos. No grupo de 04 semanas o processo inflamatório e a neovascularização envolvia apenas o 1/3 externo da média e não se observava hiperplasia endotelial ou fibrose subendotelial evidentes. Já no grupo de 8 semanas havia uma progressão do grau de inflamação e neovascularização acentuada envolvendo mais de 2/3 da camada média da artéria. Neste grupo de 08 semanas observa - se hiperplasia endotelial focal, fibrose subendotelial e desestruturação da camada media e duplicação da lamina elástica interna.Conclusão : em nosso estudo, confirmamos que a isquemia da parede vascular secundária a interrupção do fluxo pelos VV mesmo sem lesão da adventícia gerou uma desestruturação da camada média , neovascularização acentuada, fibrose subendotelial e hiperplasia intimal que progride ao longo das 8 semanas. Estes resultados tem implicações práticas para o cirurgião vascular e endovascular, podendo contribuir para um melhor entendimento das re-estenoses secundárias à dissecção arterial nas cirurgias abertas e lesão por estiramento da parede nos procedimentos endovasculares.

In the mouse embryo, the first definitive haematopoietic stem cells (HSCs), capable of repopulating adult irradiated mice, emerge at mid-gestation by embryonic day E11. At this stage, the aorta-gonad-mesonephros (AGM) region is able to initiate and expand HSCs. Recently, it has been shown that the development of HSC in the AGM region results from the maturation of haematopoietic precursors called pre-HSCs. Mounting evidence points at an endothelial origin for these cells, the haematogenic endothelium. Analysis of VEGFs mutants, a critical pathway for endothelial developement, suggested that it also plays a role during early haematopoiesis. The main receptor of the pathway, FLK-1 (also known as VEGRR2 or KDR), is expressed in early hematopoietic and endothelial cells in the mouse embryo. Knock-out mutants for Flk-1 showed a decrease of endothelial and intra-embryonic haematopoietic progenitors. Although Flk-1 has been identified as an essential gene for HSC emergence, its exact point of action in HSC development remains unknown. In this thesis, I investigated the role of FLK-1 signalling in haematopoietic development and defined precise stages and cell types during HSC emergence in which FLK-1 is critically involved. by using a reporter line and antibody staining, I demonstrated that FLK-1 is expressed in the pre-HSCs/HSC lineage. Germ-line Flk-1 knockout results in embryonic lethality at around E9.0, before HSC emergence, mainly due to defects in vasculogenesis. Since arterial specification precedes HSC formation, it has never been elucidated whether the haematopoietic defects found in the knockouts are a secondary effect of the loss of vasculature or it FLK-1 is directly involved in haematopoietic specification. Therefore, to determine the role of the receptor in HSC development, I used a conditional inducible mutagenesis approach that allowed the deletion of Flk-1 precisely when pre-HSCs mature into HSCs at E10.5 and E11.5. My data showed that Flk-1 deletion at these stages affects both endothelial and haematopoietic progenitors, as well as HSCs. This suggests that the VEGF pathway is not only essential in early stages of haematopoietic development, as previously demonstrated, but it may be also involved in the maturation of pre HSC into HSCs at later stages.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:12Z : No. of bitstreams: 1 000831217.pdf: 416876 bytes, checksum: 8613d4f25135ffe9c4661b38ebe09868 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ratas prenhas normotensas ou hipertensas (SHR) apresentam redução da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, associada à redução da atividade simpática perivascular de leitos mesentéricos e redução de respostas vasoconstritoras a alguns agonistas vasoconstritores. O endotélio vascular modula a resposta contrátil estimulada por vasoconstritores e, na prenhez, uma maior modulação do óxido nítrico (NO) sobre a reatividade vascular de aortas tem sido atribuída à maior atividade da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS). No entanto, nenhuma alteração da reatividade de aortas à Acetilcolina, ou a o A23187, foi observada em aortas de ratas prenhas. Foi sugerido que a participação de uma via de sinalização independente de ativação de receptores e menos dependente de cálcio, estaria envolvida na modulação endotelial sobre a vasoconstrição durante a prenhez. A expressão da eNOS fosforilada está aumentada em aorta de ratas prenhas. A eNOS pode ser fosforilada em resíduos de serina e treonina pela via PI3K/AKT. No entanto, a participação da via PI3K/AKT/eNOS na hiporreatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina ainda não foi demonstrada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o Wortmannin, um inibidor da via PI3K/AKT, poderia reverter a hiporreatividade de aortas à fenilefrina associada à prenhez e alterar as concentrações citosólicas de óxido nítrico (NO), cálcio (Ca2+) e de espécies reativas de oxigênio (ERO) em células endoteliais isoladas de aortas de ratas Wistar e SHR prenhas. Inicialmente, avaliamos as possíveis alterações nos parâmetros cardiovasculares e na sensibilidade barorreflexa associadas à prenhez de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) por estudos in vivo. O efeito do Wortmannin foi avaliado na reatividade de aortas isoladas à fenilefrina por estudos funcionais e nas concentrações... / Normotensive or hypertensive pregnant rats (SHR) show a significant reduction in blood pressure in the final period of pregnancy, associated with reduced activity of perivascular sympathetic mesenteric beds and reduced vasoconstrictor responses to some vasoconstrictor agonists. The vascular endothelium modulates contractile response stimulated by vasoconstrictors and in pregnancy, an additional modulation of nitric oxide (NO) on vascular reactivity of aortas has been attributed to increased activity of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). However, no change in the aortas of reactivity to acetylcholine or A23187 was observed in aortas of pregnant rats. The involvement of a signaling pathway independent of receptor activation and less dependent calcium was suggested. This pathway is involved in the modulation of endothelial vasoconstriction during pregnancy. The expression of phosphorylated eNOS is increased in the aorta of pregnant rats and this enzyme can be phosphorylated on serine and threonine residues of the PI3K/Akt pathway. However, the participation of the PI3K/AKT/eNOS pathway in hyporeactivity in the aortas of pregnant rats to phenylephrine has not been demonstrated. The aim of this study was evaluate if the PI3K/AKT pathway inhibitor (Wortmannin) could reverse the hyporeactivity of aortas to phenylephrine associated with the end of pregnancy and change the cytosolic concentrations of nitric oxide (NO), calcium (Ca2+) and reactive oxygen species (ROS) in isolated endothelial cells from aortas of pregnant Wistar rats and SHR. Initially, we evaluated the possible changes in cardiovascular parameters and baroreflex sensitivity associated with pregnancy in spontaneously hypertensive rats (SHR) by in vivo studies. The effect of Wortmannin was evaluated in the isolated aortas reactivity to phenylephrine and by functional studies through cytosolic concentrations of NO, Ca2+ and ROS... / FAPESP: 12/05746-8

O espessamento intimal e a reestenose que ocorrem após os procedimentos de angioplastia transluminal percutânea e/ou o implante de stents representam uma causa freqüente de falência destes procedimentos. O principal achado patológico responsável pela reestenose parece ser a hiperplasia intimal, já que o dispositivo intravascular é resistente ao remodelamento arterial geométrico. O propósito deste estudo é avaliar, através da morfometria digital, o espessamento intimal presente nas regiões da parede arterial imediatamente proximal e distal ao implante de um stent metálico em configuração em “Z “ não recoberto ou recoberto com PTFE. Vinte e cinco suínos de raça mista, com seis a dez semanas de idade, pesando em média 20 kg foram divididos em três grupos. No grupo I, cinco animais foram submetidos à exposição cirúrgica retroperitoneal da aorta abdominal, aortotomia e manipulação com uma bainha introdutora de 12 F. O grupo II incluiu dez animais que foram submetidos ao implante de um stent metálico auto-expansível não recoberto. No grupo III, incluindo também dez animais, foram implantados stents recobertos com PTFE. Após quatro semanas, todos os animais foram sacrificados e o segmento aorto-ilíaco foi removido. Quatro animais foram excluídos do estudo por trombose da aorta (um animal do grupo II e três animais do grupo III). Para a análise morfométrica foram utilizados os testes não paramétricos de Wilcoxon e de Kruskal-Wallis, para as comparações, respectivamente, no mesmo grupo e entre os grupos. Foi adotado o nível de significância de 5% ( p< 0,05). Quando os espécimes da parede arterial, imediatamente proximal e distal aos stents foram comparados, nenhuma diferença estatisticamente significativa foi encontrada entre as áreas luminal, intimal, média ou índice intimal em cada grupo. Na comparação entre os grupos, as áreas intimal, média e o índice intimal não demonstraram variação estatisticamente significativa. Foram identificadas diferenças entre os grupos quanto às áreas luminais proximais (p = 0,036) e distais (p=0,044). Pelo teste de comparações múltiplas para Kruskal-Wallis (Teste de Dunn) identificou-se diferença significativa entre os grupos I e II. Entretanto, quando estas variáveis foram controladas pelo fator peso (relação área luminal/peso) a diferença não foi mais observada. Concluímos que, após quatro semanas, stents recobertos com PTFE induzem um espessamento intimal justa-stent similar ao observado com stents não recobertos ou com a simples manipulação arterial com uma bainha introdutora. Neste modelo experimental suíno, de curto seguimento, o revestimento com PTFE não foi responsável por adicional espessamento intimal. / Intimal thickening and restenosis occurring after angioplasty and/or stent deployment constitutes a frequent determinant of failure of these procedures. The main pathologic finding responsible for restenosis seems to be intimal hyperplasia, since the intravascular device is resistant to geometric arterial wall remodeling. The purpose of this study is to evaluate, by means of digital morphometry, the intimal thickening present in the regions of the arterial wall proximal and distal to the implant of a naked or PTFE covered stainless steel Z stent. Twenty five crossbred pigs, 6 to 10 weeks old, weighing between 14 and 32 kg (average= 20 kg) kg were divided in three groups. Group I included five animals that were submitted to retroperitoneal exposure of the aorta, aortotomy and simple insertion of a 12 F sheath. Group II included those animals in which a naked stent was deployed. Finally, in group III included the use of a PTFE covered stent. After four weeks, all animals were submitted to euthanasia and the aorto-iliac segment was removed. Four animals were excluded from the study due to aortic thrombosis (one from group II and three from group III). Morphometric analysis was performed using the non-parametric Wilcoxon and Kruskal-Wallis tests to compare data within the group, and across groups, respectively. When specimens of the arterial wall immediately proximal and distal to the stents were compared, no statistically significant difference could be established regarding luminal, intimal and media areas or intimal index. It was not possible to find significant differences between the intimal and medial areas or the intimal index. According to the Kruskal-Wallis test, a significant difference between proximal (p=0,036) and distal (p=0,044) luminal areas was observed between groups. The Dunn test identified differences between groups I and II. However, when these variables were corrected regarding the weight factor (luminal area/ weight index) this difference was no longer seen. We conclude that, after four weeks, covered PTFE stents generate an intimal thickening similar to uncovered stents or simple catheter manipulation. In this experimental model, the PTFE material was not responsible for additional intimal thickening during this limited period of time.

In this thesis, a parallel solver was developed for the modelling of blood flow through a number of patient-specific geometries. A locally conservative Galerkin (LCG) spatial discretisation was applied along with an artificial compressibility and characteristic based split (CBS) scheme to solve the 3D incompressible Navier-Stokes equations. The Spalart-Allmaras one equation turbulence model was also optionally employed. The solver was constructed using FORTRAN and the Message Passing Interface (MPI). Parallel testing demonstrated linear or better than linear speedup on hybrid patient-specific meshes. These meshes were unstructured with structured boundary layers. From the parallel testing it is clear that the significance of inter-processor communication is negligible in a three dimensional case. Preliminary tests on a short patient-specific carotid geometry demonstrated the need for ten or more boundary layer meshes in order to sufficiently resolve the peak wall shear stress (WSS) along with the peak time-averaged WSS. A time sensitivity study was also undertaken along with the assessment of the order of the real time step term. Three backward difference formulae (BDF) were tested and no significant difference between them was detected. Significant speedup was possible as the order of time discretisation increased however, making the choice of BDF important in producing a timely solution. Followed by the preliminary investigation, four more carotid geometries were investigated in detail. A total of six haemodynamic wall parameters have been brought together to analyse the regions of possible atherogenesis within each carotid. The investigations revealed that geometry plays an overriding influence on the wall parameter distribution. Each carotid artery displayed high time-averaged WSS at the apex, although the value increased significantly with a proximal stenosis. Two out of four meshes contained a region of low time-averaged WSS distal to the flow divider and within the largest connecting artery (internal or external carotid artery), indicating a potential region of atherosclerosis plaque formation. The remaining two meshes already had a stenosis in the corresponding region. This is in excellent agreement with other established works. From the investigations, it is apparent that a classification system of stenosis severity may be possible with potential application as a clinical diagnosis aid. Finally, the flow within a thoracic aortic aneurysm was investigated in order to assess the influence of a proximal folded neck. The folded neck had a significant effect on the wall shear stress, increasing by up to 250% over an artificially smoothed neck. High wall shear stresses may be linked to aneurysm rupture. Being proximal to the aneurysm, this indicated that local geometry should be taken into account when assessing the rupture potential of an aneurysm.

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Graziela Scalianti Ceravolo / Banca: Carlos Alan Candido Dias Júnior / Resumo: Ratas prenhas normotensas ou hipertensas (SHR) apresentam redução da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, associada à redução da atividade simpática perivascular de leitos mesentéricos e redução de respostas vasoconstritoras a alguns agonistas vasoconstritores. O endotélio vascular modula a resposta contrátil estimulada por vasoconstritores e, na prenhez, uma maior modulação do óxido nítrico (NO) sobre a reatividade vascular de aortas tem sido atribuída à maior atividade da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS). No entanto, nenhuma alteração da reatividade de aortas à Acetilcolina, ou a o A23187, foi observada em aortas de ratas prenhas. Foi sugerido que a participação de uma via de sinalização independente de ativação de receptores e menos dependente de cálcio, estaria envolvida na modulação endotelial sobre a vasoconstrição durante a prenhez. A expressão da eNOS fosforilada está aumentada em aorta de ratas prenhas. A eNOS pode ser fosforilada em resíduos de serina e treonina pela via PI3K/AKT. No entanto, a participação da via PI3K/AKT/eNOS na hiporreatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina ainda não foi demonstrada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o Wortmannin, um inibidor da via PI3K/AKT, poderia reverter a hiporreatividade de aortas à fenilefrina associada à prenhez e alterar as concentrações citosólicas de óxido nítrico (NO), cálcio (Ca2+) e de espécies reativas de oxigênio (ERO) em células endoteliais isoladas de aortas de ratas Wistar e SHR prenhas. Inicialmente, avaliamos as possíveis alterações nos parâmetros cardiovasculares e na sensibilidade barorreflexa associadas à prenhez de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) por estudos in vivo. O efeito do Wortmannin foi avaliado na reatividade de aortas isoladas à fenilefrina por estudos funcionais e nas concentrações... / Abstract: Normotensive or hypertensive pregnant rats (SHR) show a significant reduction in blood pressure in the final period of pregnancy, associated with reduced activity of perivascular sympathetic mesenteric beds and reduced vasoconstrictor responses to some vasoconstrictor agonists. The vascular endothelium modulates contractile response stimulated by vasoconstrictors and in pregnancy, an additional modulation of nitric oxide (NO) on vascular reactivity of aortas has been attributed to increased activity of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). However, no change in the aortas of reactivity to acetylcholine or A23187 was observed in aortas of pregnant rats. The involvement of a signaling pathway independent of receptor activation and less dependent calcium was suggested. This pathway is involved in the modulation of endothelial vasoconstriction during pregnancy. The expression of phosphorylated eNOS is increased in the aorta of pregnant rats and this enzyme can be phosphorylated on serine and threonine residues of the PI3K/Akt pathway. However, the participation of the PI3K/AKT/eNOS pathway in hyporeactivity in the aortas of pregnant rats to phenylephrine has not been demonstrated. The aim of this study was evaluate if the PI3K/AKT pathway inhibitor (Wortmannin) could reverse the hyporeactivity of aortas to phenylephrine associated with the end of pregnancy and change the cytosolic concentrations of nitric oxide (NO), calcium (Ca2+) and reactive oxygen species (ROS) in isolated endothelial cells from aortas of pregnant Wistar rats and SHR. Initially, we evaluated the possible changes in cardiovascular parameters and baroreflex sensitivity associated with pregnancy in spontaneously hypertensive rats (SHR) by in vivo studies. The effect of Wortmannin was evaluated in the isolated aortas reactivity to phenylephrine and by functional studies through cytosolic concentrations of NO, Ca2+ and ROS... / Mestre

Introdução A visão tradicional afirma que as células miointimais responsáveis pela hiperplasia intimal derivam das células musculares lisas da média e que, através da mudança de seu fenótipo para um estado proliferativo, migram para a região intimal Esta visão tem sido contestada em algumas publicações que tem demonstrado o importante papel da adventícia na fisiopatologia da hiperplasia intimal. Objetivo: Analisar as alterações da estrutura da parede da aorta abdominal de suínos secundária a ressecção dos VV presentes na adventícia e no tecido conetivo Peri aórtico e avaliar se estas alterações se modificam com um período mais prolongado de isquemia da parede arterial. Material e método: Trata-se de um estudo experimental com uma série de dez suínos da raça Landrace , com idade entre 8 e12 semanas, pesando em torno de 20Kg. A aorta abdominal foi abordada por incisão retro peritoneal, o tecido Peri - aórtico contento os vasa vasorum e tecido gorduroso foi ressecado e este segmento de 1 cm envolvido por pericárdio bovino. Um grupo de animais foi sacrificado após 4 semanas e outro após 8 semanas. Os cortes histológicos foram corados com hematoxilina e coloração Weigert para identificar melhor as fibras elásticas. Foram analisados o processo inflamatório, neovascularização e a degeneração da camada media assim como a presença de hiperplasia e fibrose subendotelial. Resultado: Em ambas as coortes havia espessamento importante de todo o tecido Peri aórtico e do endotélio. Na coloração com H/E se identificava processo inflamatório moderado a intenso junto ao pericárdio em todos os casos. No grupo de 04 semanas o processo inflamatório e a neovascularização envolvia apenas o 1/3 externo da média e não se observava hiperplasia endotelial ou fibrose subendotelial evidentes. Já no grupo de 8 semanas havia uma progressão do grau de inflamação e neovascularização acentuada envolvendo mais de 2/3 da camada média da artéria. Neste grupo de 08 semanas observa - se hiperplasia endotelial focal, fibrose subendotelial e desestruturação da camada media e duplicação da lamina elástica interna.Conclusão : em nosso estudo, confirmamos que a isquemia da parede vascular secundária a interrupção do fluxo pelos VV mesmo sem lesão da adventícia gerou uma desestruturação da camada média , neovascularização acentuada, fibrose subendotelial e hiperplasia intimal que progride ao longo das 8 semanas. Estes resultados tem implicações práticas para o cirurgião vascular e endovascular, podendo contribuir para um melhor entendimento das re-estenoses secundárias à dissecção arterial nas cirurgias abertas e lesão por estiramento da parede nos procedimentos endovasculares.