Introdução: As glândulas salivares humanas passam por diversos e complexos processos durante o período de desenvolvimento, até que adquiram maturidade estrutural para desempenhar sua função, a formação e secreção de saliva. Considerada essencial à saúde e homeostase da cavidade oral, a saliva é um fluido aquoso que depende de um mecanismo de transporte entre as membranas celulares por meio das aquaporinas. A família de proteínas aquaporinas possui treze membros. Somente algumas dessas proteínas atuam nas glândulas salivares formando poros na bicamada lipídica das membranas celulares facilitando o transporte de água e pequenos solutos, cruciais à regulação da qualidade e quantidade de saliva secretada. Proposição: Diante deste cenário, avaliamos por meio da técnica de imunoistoquímica o padrão de expressão das aquaporinas 1, 3 e 5 de glândulas salivares em desenvolvimento, com o intuito de contribuir com informações de base para futuras pesquisas. Metodologia: 47 espécimes parafinados de glândulas salivares em desenvolvimento, de diferentes sítios da cavidade oral de 20 fetos humanos, com idade entre 14 e 25 semanas, foram submetidos à técnica de imunoperoxidase. Os resultados foram analisados, de acordo com o estágio da morfogênese glandular e localização da expressão das aquaporinas. Resultados: Na fase de botão, houve a expressão das aquaporinas 1, 3 e 5 em todas as células epiteliais; na fase pseudoglandular, a expressão dessas proteínas foi vista nos ductos rudimentares (com exceção da aquaporina 1) e nas porções terminais (futuros ácinos); na fase canalicular as aquaporinas foram principalmente detectadas nos ácinos rudimentares e ductos. Finalmente, na fase de botão terminal, as aquaporinas 3 e 5 foram detectadas nas membranas das células acinares e os ductos expressaram todas as aquaporinas. Conclusão: O presente trabalho evidenciou a imunoexpressão das aquaporinas 1, 3 e 5 nas glândulas salivares humanas durante o período de embriogênese. A análise topográfica dessas proteínas nos permitiu identificar diferenças no padrão de expressão entre as diferentes regiões estruturais e estágios do desenvolvimento glandular, sugerindo diferentes papéis para cada proteína / Introduction: The human salivary glands morphogenesis depends on complex processes during the development period until they reach full structural maturity to perform its function - the synthesis and secretion of saliva. The saliva is a complex aqueous fluid considered essential to health and homeostasis of the oral cavity; its synthesis depends on several molecular mechanisms, including the transport of water, solutes, ions, amongst others across the cell membranes. The aquaporin family of proteins is essential in this process. This protein family consists of thirteen members that form channels across the cell membrane facilitating water and small solutes transportation, crucial to the regulation of quality and quantity of secreted saliva. Aims: In this scenario, we evaluated, using the immunohistochemistry technique, the expression pattern of aquaporins 1, 3 and 5 in the different phases of salivary glands development, in order to understand the role of these protein in the formation of human salivary gland morphogenesis. Methodology: 47 specimens of paraffin embedded human salivary glands at various developmental phases were included in the study. The specimens were derived from various sites of the oral cavity of 20 human fetuses aged between 14 and 25 weeks of gestation. All specimens were subjected to the imunohistochemical immunoperoxidase technique. The results were qualitatively and semiquantitatively analyzed according to the stage of glandular morphogenesis and express location of aquaporin. Results: In the bud stage, there was expression of aquaporin 1, 3 and 5 in all glandular epithelial cells; in pseudoglandular stage, the expression of these proteins was seen in rudimentary ducts (except aquaporin-1) and the terminal end buds (future acini); in the canalicular phase the aquaporins were mainly detected in the rudimentary ducts and acini. Finally, in terminal bud stage, the aquaporin 3 and 5 were detected in the membranes of the ducts and acinar cells expressed all aquaporins. Conclusion: This study showed the presence of aquaporins 1, 3 and 5 in human salivary glands during embryogenesis period. The topographic analysis of these proteins allowed us to identify differences in the expression pattern between the different structural regions and stages of glandular development, suggesting different roles for each of these proteins

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patricia Mata.pdf: 1374526 bytes, checksum: 67db6228e85d4c5c26a146b237710efc (MD5) Previous issue date: 2014-02-16 / The increase of fat tissue, in obesity, can be associated to physiological alterations, including important modifications in the concentration of circulating hormones, including the sexual steroid hormones. The epididymis, organ of the male genital system, is androgynous-dependent, therefore, susceptible to resulting modifications of sexual steroids hormones concentrations, which can compromise its main functions: transport, maturation, maintenance, protection and storage of the spermatozoids. The water transporting, in the epididymis, is essential to form the adequate luminal environment so the epididymal and spermatozoid related functions can happen; thus, alterations in aquaporins (AQPs), may intervene in the homeostasis of the duct and, consequently, negatively affect fertility. The accumulation of fat may increase the local temperature and alter the epididymal functions and, even, influence in the synthesis and secretion of cytokines such as the interleukin-6 (IL6), due to the chronicle inflammatory estate of low intensity as a consequence of obesity. The objective of this study was to evaluate the influence of the cafeteria diet over the morphology of the coating epithelium of the epididymal duct of rats and about the expression of IL6 and AQPs 1 and 9 in the mentioned epithelium. The analysis were made using tissue samples of the epididymis of Wistar rats of the groups control (CON, animals fed with the pattern diet) and cafeteria (CAF, animals fed with a cafeteria diet) treated throughout the experimental period of 24 weeks. The samples were submitted to a histological routine and immunohistochemical reactions for morphological, morphometric and the expression of IL6 and AQPs 1 and 9 analysis. The analysis evidenced a modification in the relative cellular distribution, with decrease of basal cells in the region of the epididymal body, and a significant increase of halo cells in the epididymal segments initial, head and tail of the CAF animals. The luminal diameter and the epithelial height didn t show significant differences between the animals. The intense expression of IL6 in the initial segment of the CAF animals was the outstanding result for this interleukin. The expression of AQP1 was altered in the CAF group animals, in general, with bigger expression in the vascular channels, mainly, the initial segment and the head; besides the bigger expression in the peritubular cells in the initial segment. The expression of AQP9 was altered only in the initial segment of the CAF group, which reactivity was average, while the reactivity was intense in this segment in the animals of the CON group. The results obtained indicate that the cafeteria diet promoted segment-specific alterations in the distribution of basal cell and halo and expression of IL6 and AQPs 1 and 9. These results allow us to deduce that the increase of body mass, induced by a cafeteria diet may promote alterations in the epididymal luminal environment with possible damage in the transport, maturation, maintenance, protection and storage of the spermatozoids. In order to enlighten the extension of the damage caused by the alterations resulting from the cafeteria diet, new studies such as epididymal biochemical alterations, ultrastructural analysis of the epididymal cell types and morphology and motility of the spermatozoids are necessary / O aumento de tecido adiposo, na obesidade, pode ser associado a alterações fisiológicas, incluindo modificações importantes nas concentrações circulantes de hormônios, inclusive dos hormônios esteroides sexuais. O epidídimo, órgão do sistema genital masculino, é andrógeno-dependente, portanto, susceptível a modificações resultantes das alterações nas concentrações de hormônios esteroides sexuais, as quais podem comprometer suas principais funções: transporte, maturação, manutenção, proteção e armazenamento dos espermatozoides. O transporte de água, no epidídimo, é essencial para formar o ambiente luminal adequado para que as funções epididimárias e relativas aos espermatozoides sejam realizadas; assim, alterações das, aquaporinas (AQPs), podem intervir na homeostase do ducto e, consequentemente, afetar negativamente a fertilidade. O acúmulo de gorduras pode aumentar a temperatura local e alterar as funções epididimárias e, ainda, influenciar na síntese e secreção de citocinas como a interleucina-6 (IL6), em razão do estado inflamatório crônico de baixa intensidade em consequência da obesidade. O objetivo este estudo foi avaliar a influência da dieta de cafeteria sobre a morfologia do epitélio de revestimento do ducto epididimário de ratos e sobre a expressão de IL6 e de AQPs 1 e 9 no referido epitélio. As análises foram realizadas utilizando amostras teciduais do epidídimo de ratos Wistar dos grupos controle (CON, animais alimentados com dieta padrão) e cafeteria (CAF, animais alimentados com dieta de cafeteria), tratados pelo período experimental de 24 semanas. As amostras foram submetidas à rotina histológica e reações imunohistoquímicas para análises morfológica, morfométrica e da expressão de IL6 e AQPs 1 e 9. As análises evidenciaram uma modificação na distribuição celular relativa, com diminuição de células basais na região de corpo epididimário, e aumento significativo de células halo no segmento inicial, cabeça e cauda epididimária dos animais CAF. O diâmetro luminal e altura epitelial não apresentaram diferenças significativas entre os grupos experimentais. Houve aumento na expressão de IL6 no segmento inicial do epidídimo dos animais CAF. A expressão de AQP1 foi alterada nos animais do grupo CAF, em geral, com maior expressão nos canais vasculares, principalmente, do segmento inicial e cabeça; além de maior expressão nas células peritubulares do segmento inicial. A expressão de AQP9 foi diminuída apenas no segmento inicial do grupo CAF, cuja reatividade foi média, enquanto a reatividade foi intensa neste segmento dos animais do grupo CON. Os resultados obtidos indicam que a dieta de cafeteria promoveu alterações segmento-específicas na distribuição de células basais e halo e na expressão de IL6 e de AQPs 1 e 9. Estes resultados permitem inferir que o aumento de massa corpórea, induzido por dieta de cafeteria, pode promover alterações no ambiente luminal epididimário com possível prejuízo das funções de transporte, maturação, manutenção, armazenamento e proteção dos espermatozoides. A fim de esclarecer a extensão do prejuízo causado pelas alterações resultantes da dieta de cafeteria, novos estudos tais como alterações bioquímicas epididimárias, análises ultraestruturais dos tipos celulares epididimários; capacidade reprodutiva e morfologia e motilidade dos espermatozoides são necessários

A patogenia da hiponatremia decorrente do uso da Fluoxetina em pacientes idosos não está bem definida. Este achado tem sido atribuído a uma secreção inapropriada do Hormônio Antidiurétido (HAD), embora ainda não tenha sido evidenciado um aumento dos níveis plasmático deste hormônio nestes pacientes. Desta forma, este trabalho visa investigar o efeito da Fluoxetina sobre o rim e mais especificamente se ela teria um efeito direto sobre o Ducto Coletor Medular Interno (DCMI) de ratos normais: 1) Estudos in vivo- 10 ratos foram suplementados com aplicações intraperitoniais diárias de 10mg/kg de Fluoxetina. Após 10 dias os animais foram sacrificados e o sangue e os rins foram coletados para posterior análise. 2) Estudos in vitro- a) estudos com a técnica de Imunoblotting para avaliar a expressão da proteína da Aquaporina 2 (AQP2) em ratos suplementados e em suspensão de túbulos de DCMI de 10 ratos normais incubados com 10-7M de Fluoxetina por 30 min. b) estudos com microperfusão de segmentos isolados do nefron- a permeabilidade osmótica à água (Pf, mm./sec) foi determinada em DCMI perfundidos de ratos normais(n=6) com a técnica standart, na presença de10-7M de Fluoxetina. Resultados: 1) Os estudos in vivo mostraram que o peso caiu de 179±1,28g para 158±1,15g (p<0,0001), o Na plasmático caiu de 139,3±0,78mEq/l para 134,9±0,5mEq/l (p<0,0001) e não houve alterações do K e do HAD plasmáticos. 2) Os estudos in vitro-a) a análise densitométrica dos ensaios com imunoblotting mostraram um aumento da expressão da proteína da AQP2 de 40%, ambos, em ratos suplementados (cont-99,6± 5,2 vs Fx 145,6±16,9, p< 0,05) e em frações de membrana da suspensão de túbulos incubados com Fluoxetina (cont-100,0±3,5.vs 143,0±2,0, p<0,01). b) A Fluoxetina aumentou a Pf nos DCMI, na ausência de HAD de 7,24±2,07 para Fx- 15,77±3,25 (p<0,01). Em resumo, nossos dados revelaram que a Fluoxetina determinou uma diminuição do peso corporal e do nível plasmático de Na sem alterar os níveis plasmáticos de K e HAD e ocasionou um aumento da expressão da proteína da AQP2 e um aumento da permeabilidade à água nos DCMI, levando-nos à conclusão de que o efeito direto da Fluoxetina no DCMI, aumentando a reabsorção de água, pode ser responsável pela hiponatremia encontrada nos pacientes idosos com depressão que fazem uso desta droga. / The pathogenesis of the hyponatremia after Fluoxetine(Fx) supply in elderly is not well understood. This event has been attributed to an inappropriate antidiuretic hormone secretion although the vasopressin enhanced plasma level has not been demonstrated yet in these pacients. Thus, this experiment was designed to investigate the effect of Fx on the kidney and more specifically if it would have a direct effect in the inner medullary collecting duct (IMCD) from normal rats: 1) in vivo study- 10 rats were supplied daily with i.p. injections of Fx 10 mg/kg. After five days, the rats were sacrificed and blood and kidneys were collected. 2) in vitro studya) Immunobloting studies for AQP2 protein expression, in IMCD from supplied rats and in IMCD tubules suspension from 10 normal rats incubated with mm./sec) Fx. by 30 min. b) Microperfusion studies- the osmotic water permeability (Pf, mm./sec) was determined in normal rats IMCD(n=6) isolated and perfused by the standart methods.Fx (10-7M) was added to the bath fluid. Results: In vivo study showed that the weight decreased from 179±1.28g to 158±1.5g(p<0.0001); the Na+ plasma level decreased from 139.3±0.78mEq/l to 134.9±0.5mEq/l(p<0.0001), the K+ and the ADH plasma level remained unchanged. In vitro study- a) the densitometric analysis of the immunobloting essays showed an increase in AQP2 protein abundance of about about 40%, both, in supplied rats (cont-99.6± 5.2 vs Fx 145.6±16.9, p< 0.05), and in membrane fraction extracted from IMCD tubule suspension incubated with Fx ( cont-100.0±3.5.vs 143.0±2.0,p<0.01). b) Fx increased the Pf in IMCD in absence of vasopressin from the control period- 7.24±2.07 to Fx- 15.77±3.25 (p<0.01). In summary, our data revealed that, after Fx, weight, and plasma Na+ level decreased, the plasma K+ and ADH levels remained unchanged, whereas the AQP2 protein abundance and the water absorption in IMCD increased, leading us to conclude that the direct effect of Fx in the IMCD, could account for the hyponatremia produced by this drug in depressed elderly.

Carbamazepina (Carba) é um anticonvulsivante, uma droga psicotrópica muito utilizada no tratamento de pacientes com distúrbios intelectuais. Esta droga foi utilizada para diminuir o volume urinário no Diabetes Insípido (DI), pois possui um efeito antidiurético, mas a incidência de hiponatremia é uma ocorrência comum. O lítio é uma das drogas mais importantes para o tratamento do distúrbio bipolar. No entanto, ele tem uma grande capacidade de induzir DI dificultando o seu uso em pacientes debilitados psicologicamente. Atualmente, a associação destas drogas é frequentemente utilizada para o tratamento de pacientes com distúrbios psiquiátricos e neurológicos. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da Carba no ducto coletor medular interno (DCMI) de ratos normais e elucidar a sua ação no DI induzido pelo lítio: 1) Estudos in vitro- A) Estudos com microperfusão de segmentos isolados do néfron onde a permeabilidade à água (Pf, m/sec) foi determinada em DCMI perfundidos de ratos normais (n=20) na presença de Carba à 10-5 M, e na ausência de HAD. B) estudos com a técnica de Imunoblotting para avaliar a expressão da proteína Aquaporina 2 (AQP2) em suspensão de túbulos de DCMI de ratos normais incubados com 10-5 M de Carba por 30 minutos. 2) Estudos in vivo A) quatro grupos foram formados: a) Controle (n=5); b) Li (40 mmol/Kg/dieta por 3 semanas; n=4); c) Li+Carba (40 mmol Li/Kg/dieta + 400 mg carba/Kg/dia por 3 semanas; n=5); d) Carba (400 mg /Kg/dia por 3 semanas; n=5); - B) estudo da expressão da AQP2 no DCMI destes quatro grupos pela técnica de Western Blot. Resultados: 1) Estudos in vitro A) nos estudos de microperfusão a carba adicionada ao banho aumentou a Pf dos DCMI, na ausência de HAD (n=6) Controle12,3+ 3,6, Carba-62,6+14,8 (p<0,01), Recuperação (Rec)-17,4+5,5 (p<0,01). Com o intuito de estudar o mecanismo pelo qual a Carba ativa a cascata do HAD, foi utilizado o inibidor do receptor V2 do HAD (AV2; n=10): Controle-23,5+5,2, Carba-37,4±4,4 (p<0,01), Carba+AV2-19,6±5,0 (p<0,05), Rec-21,4+5,5; e Controle-18,6+7,0, AV2-27,3+7,2, AV2+Carba-25,3+5,7, Rec-32,6+6,4. O inibidor da PKA (H8; n=4) também foi utilizado: Controle-15,0+9,0, Carba-106,1+12,3 (p<0,01), Carba+H8-60,3+16,4 (p<0,01), Rec- 44,5+13,2. B) a análise densitométrica mostrou um aumento de 38,8% na expressão da AQP2 (Controle-100,0+8,3 vs. Carba-138,8+12,12, p<0,05); 1) Estudos in vivo Volume urinário (UV, mL/24h) Controle-10,7+3,0, Li-62,6+6,0 (p<0,001), Li+Carba-28,5+4,9 (p<0,001), Carba-23,3+3,0 (<0,001). Osmolalidade urinária (mOsm/Kg/H2O) Controle-819,6+175,7, Li-149,4+18,0 (p<0,01), Li+Carba-251,5+39,7 (p<0,05), Carba-396,2+75,5 (p<0,01). FENa+ (%) - Controle-0,15+0,01, Li-0,10+0,02, Li+Carba-0,12+0,02, Carba-0,11+0,02. Expressão da AQP2 (%) Controle-100,0+6,7, Li-55,8+5,4 (p<0,01), Li+Carba-75,8+9,6 (p<0,01), Carba- 99,7+4,7 (p<0,05). Não houve diferenças significantes no Na+, K+ e Osmolalidade plasmáticas. Em resumo, nossos dados revelaram que a Carba diminui o UV, aumenta a osmolalidade urinária e a expressão da AQP2 no DI induzido pelo lítio, e aumenta a permeabilidade à água, provavelmente agindo diretamente no receptor da vasopressina (V2). Estes resultados enfatizam que a hiponatremia encontrada nos pacientes que fazem uso da Carba pode ser explicada, pelo menos em parte, pelo aumento da permeabilidade osmótica no DCMI e que a poliúria do DI ocasionado pelo uso do lítio pode ser diminuída com a associação da Carba. / Carbamazepine (Carba) is an anticonvulsant and a psychotropic medication commonly used in the treatment of patients with intellectual disability (ID). This drug has been used to try to decrease the urinary volume in Diabetes Insipidus (DI) because Carba presents an antidiuretic effect, but the incidence of the hyponatremia in neurological patients is a common ocurrence. Lithium (Li) is one of the most important drugs used to treat bipolar mood disorders. However, Li has the undesirable capacity to induce DI complicating its usage in patients psychologically weakened. Nowadays, the association of these drugs is used in the treatment of patients with psychiatric and neurological problems. Our objective was to investigate the effect of Carba in the Inner Medullary Collecting Duct (IMCD) and elucidate its effect in the lithium-induced DI: 1) In vitro study: A) Microperfusion studies the water permeability (Pf, m/sec) was determined in normal rats IMCD isolated and perfused by the standard methods. Carba 10-5M was added to the bath fluid. B) Immunoblotting studies for AQP2 protein expression in IMCD tubule suspension from normal rats incubated with Carba 10-5M for 30 minutes. 2) In vivo study A) four groups of normal rats were done - a) Control (C, n=5); b) Li (40 mmol/kg/food/3 weeks n=4) c) Li+Carba (40 mmol Li/kg/food/3 weeks and 400 mg Carba/kg/bw/2 last weeks, n=5); and Carba (400 mg Carba/kg/bw/3weeks, n=5); - B) AQP2 expression in IMCD from the four groups, by Western Blot. Results: 1) In vitro study A) in microperfusion, Carba added to the bath in Vasopressin (Vp) absence (n=6) increased Pf Control-12.3+3.6, Carba-62.6+14.8 (p<0.01), Recuperation (Rec)-17.4+5.5 (p<0.01). In order to study the mechanism by which Carba activates the Vp cascade, the antagonist of the Vp receptor 2 (AV2; n=10) was used: Control-23.5+5.2, Carba-37.4±4.4 (p<0.01), Carba+AV2-19.6±5.0 (p<0.05), Rec-21.4+5.5; and Control-18.6+7.0, AV2- 27.3+7.2, AV2+Carba-25.3+5.7, Rec-32.6+6.4. The PKA inhibitor (H8; n=4) was also used: Control-15.0+9.0, Carba-106.1+12.3 (p<0,01), Carba+H8-60.3+16.4 (p<0.01), Rec-44.5+13.2. B) the densitometric analysis showed an increased of 38.8% in AQP2 expression (Control- 100.0+8.3 vs. Carba-138.8+12.12, p<0.05); B) In vivo study Urinary volume (UV, mL/24h) Control-10.7+3.0, Li-62.6+6.0 (p<0.001), Li+Carba-28.5+4.9 (p<0.001), Carba-23.3+3.0 (p<0.001). Urinary Osmolality (mOsm/Kg/H2O) Control-819.6+175.7, Li-149.4+18.0 (p<0.01), Li+Carba-251.5+39.7 (p<0.05), Carba-396.2+75.5 (p<0.01). FENa+ (%) - Control- 0.15+0.01, Li-0.10+0.03, Li+Carba-0.12+0.02, Carba-0.11+0.02. AQP2 expression (%) Control-100.0+6.7, Li-55.8+5,4 (p<0.01), Li+Carba-75.8+9.6 (p<0.01), Carba-99.7+4.7 (p<0.05). There were no significant differences in Na+, K+ and plasma osmolality. In summary, our data showed that Carba decreased the UV, increased the UOsm and the AQP2 expression in Li-induced DI, increased the water permeability, probably acting directly in the Vp V2 receptor-Protein G complex, since its action was blocked by the specific Vp V2 receptor antagonist. These results emphazise that the hyponatremia found in patients using Carba could be explained, at least in part, by increased osmotic permeability of IMCD. In addition, poliuria observed in lithium-induced DI can be decreased with Carba-treatment.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leonardo.pdf: 2065969 bytes, checksum: ecaa0d3dc812ef2017f1f16fc1f49d2a (MD5) Previous issue date: 2013-07-01 / The induction of obesity in experimental animals with cafeteria diet simulates the high-calorie food that humans eat, nowadays, thus enabling to study obesity and comorbidities resulting from this condition. The male reproductive system is directly affected by obesity with increased lipid peroxidation, increase of apoptotic bodies, changes in parameters espermatobioscópicos and reduced fertility. The aim of the study was to evaluate whether there are changes caused by obesity in epithelia of efferent ducts and epididymis , both in relation to morphology and expression of aquaporins 1 and 9 ( AQPs 1 and 9 ) in adult Wistar rats . After weaning , the animals were randomly divided into two groups : control group ( CON ) received standard diet and water ad libitum ( n = 10 ) and group cafeteria ( CAF ) , which received cafeteria diet soda and degassed ad libitum ( n = 10). The treatment group CAF began after the 12th week of life, totaling 40 weeks of consumption of cafeteria diet, being all dead animals with 52 weeks of age. The efferent ducts , along with initial segments ( Si ) , head ( Cç ) , body ( Co ) and tail ( Cd ) epididymis were submitted to routine histological and immunohistochemical staining for AQP- 1 and AQP- 9 . In the present study we evaluated the data: body mass, length nasoanal, waist circumference, Lee index and retroperitoneal fat mass and perigonadais; also evaluated dimensions, using morphometry and morphology of the epithelia of the efferent ducts and segments Si, Cç, Co and Cd epididymis and analyzed the expression of AQP- 9 and AQP- 1 in the efferent ducts and epididymal segments above. Changes in expression of AQPs in the efferent ducts and the epididymal epithelium were observed with increased expression of AQP- 1 and AQP- 9 reduction in efferent ducts and epididymal cauda, respectively, in animals treated with cafeteria diet. Also, there were morphological changes in the epididymal epithelium, such as increasing the number and size of cells and clear halo; increased endocytic organelles, and heterogeneous distribution of stereocilia, in animals with diet-induced obesity cafeteria. Given the results, it is believed that these changes should cause a profound impact on the luminal environment and interfere in the transport process, maturation, maintenance, protection and storage of sperm, being responsible for obesity alter the expression of AQP- 1 in efferent ducts, AQP- 9 in the epididymal cauda, the relative distribution of cells and clear halo and morphological characteristics of these parts via the sperm. However, more studies are needed to elucidate the specific mechanisms by which the cafeteria diet affects sperm morphology via specifically efferent ducts and epididymal ducts / A indução à obesidade, no modelo experimental animal com dieta de cafeteria, simula a alimentação com alto teor calórico que os seres humanos ingerem, na atualidade, possibilitando, assim, estudar a obesidade bem como as comorbidades advindas desta condição. O sistema genital masculino é afetado diretamente pela obesidade com aumento de peroxidação lipídica, aumento de corpos apoptóticos, mudanças nos parâmetros espermatobioscópicos e redução de fertilidade. O objetivo do estudo foi avaliar se há alterações causadas pela obesidade nos epitélios dos ductos eferentes e epididimário, tanto em relação à morfologia quanto à expressão de aquaporinas 1 e 9 (AQPs 1 e 9) em ratos Wistar adultos. Após o desmame, os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: grupo controle (CON), que recebeu dieta padrão e água ad libitum (n=10) e grupo cafeteria (CAF), que recebeu dieta de cafeteria e refrigerante desgaseificado ad libitum (n=10). O tratamento do grupo CAF teve início depois da 12º semana de vida, totalizando 40 semanas de consumo da dieta de cafeteria, sendo todos os animais mortos com 52º semanas de idade. Os ductos eferentes, juntamente com segmentos inicial (Si), cabeça (Cç), corpo (Co) e cauda (Cd) do epidídimo, foram submetidos à rotina histológica e imunohistoquímica para AQP-1 e AQP-9. No presente estudo foram avaliados os dados: massa corporal, comprimento nasoanal, circunferência abdominal, índice de Lee e massa das gorduras retroperitoniais e perigonadais; também, avaliou-se dimensões, através de morfometria, e características morfológicas dos epitélios dos ductos eferentes e segmentos Si, Cç, Co e Cd do epidídimo, bem como foram analisadas as expressões de AQP-9 e AQP-1 nos ductos eferentes e segmentos epididimários supracitados. Alterações na expressão das AQPs, nos ductos eferentes e parte do epitélio epididimário, foram observadas com aumento na expressão de AQP-1 e redução de AQP-9 nos ductos eferentes e cauda epididimária, respectivamente, dos animais tratados com dieta de cafeteria. Também, ocorreram alterações morfológicas no epitélio epididimário, como aumento do número e tamanho de células halo e claras; aumento de organelas endocíticas; e distribuição heterogênea de estereocílios, nos animais com obesidade induzida por dieta de cafeteria. Em vista dos resultados, acredita-se que essas alterações devem causar um profundo impacto sobre o ambiente luminal e interferir no processo de transporte, maturação, manutenção, proteção e armazenamento dos espermatozoides, sendo a obesidade responsável por alterar a expressão de AQP-1 nos ductos eferentes, da AQP-9 na cauda epididimária, a distribuição relativa de células claras e halo e características morfológicas destas partes da via espermática. No entanto, mais estudos são necessários para esclarecer os mecanismos específicos pelos quais a dieta de cafeteria afeta a morfologia da via espermática, especificamente dos ductos eferentes e ductos epididimários

Carbamazepina (Carba) é um anticonvulsivante, uma droga psicotrópica muito utilizada no tratamento de pacientes com distúrbios intelectuais. Esta droga foi utilizada para diminuir o volume urinário no Diabetes Insípido (DI), pois possui um efeito antidiurético, mas a incidência de hiponatremia é uma ocorrência comum. O lítio é uma das drogas mais importantes para o tratamento do distúrbio bipolar. No entanto, ele tem uma grande capacidade de induzir DI dificultando o seu uso em pacientes debilitados psicologicamente. Atualmente, a associação destas drogas é frequentemente utilizada para o tratamento de pacientes com distúrbios psiquiátricos e neurológicos. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da Carba no ducto coletor medular interno (DCMI) de ratos normais e elucidar a sua ação no DI induzido pelo lítio: 1) Estudos in vitro- A) Estudos com microperfusão de segmentos isolados do néfron onde a permeabilidade à água (Pf, m/sec) foi determinada em DCMI perfundidos de ratos normais (n=20) na presença de Carba à 10-5 M, e na ausência de HAD. B) estudos com a técnica de Imunoblotting para avaliar a expressão da proteína Aquaporina 2 (AQP2) em suspensão de túbulos de DCMI de ratos normais incubados com 10-5 M de Carba por 30 minutos. 2) Estudos in vivo A) quatro grupos foram formados: a) Controle (n=5); b) Li (40 mmol/Kg/dieta por 3 semanas; n=4); c) Li+Carba (40 mmol Li/Kg/dieta + 400 mg carba/Kg/dia por 3 semanas; n=5); d) Carba (400 mg /Kg/dia por 3 semanas; n=5); - B) estudo da expressão da AQP2 no DCMI destes quatro grupos pela técnica de Western Blot. Resultados: 1) Estudos in vitro A) nos estudos de microperfusão a carba adicionada ao banho aumentou a Pf dos DCMI, na ausência de HAD (n=6) Controle12,3+ 3,6, Carba-62,6+14,8 (p<0,01), Recuperação (Rec)-17,4+5,5 (p<0,01). Com o intuito de estudar o mecanismo pelo qual a Carba ativa a cascata do HAD, foi utilizado o inibidor do receptor V2 do HAD (AV2; n=10): Controle-23,5+5,2, Carba-37,4±4,4 (p<0,01), Carba+AV2-19,6±5,0 (p<0,05), Rec-21,4+5,5; e Controle-18,6+7,0, AV2-27,3+7,2, AV2+Carba-25,3+5,7, Rec-32,6+6,4. O inibidor da PKA (H8; n=4) também foi utilizado: Controle-15,0+9,0, Carba-106,1+12,3 (p<0,01), Carba+H8-60,3+16,4 (p<0,01), Rec- 44,5+13,2. B) a análise densitométrica mostrou um aumento de 38,8% na expressão da AQP2 (Controle-100,0+8,3 vs. Carba-138,8+12,12, p<0,05); 1) Estudos in vivo Volume urinário (UV, mL/24h) Controle-10,7+3,0, Li-62,6+6,0 (p<0,001), Li+Carba-28,5+4,9 (p<0,001), Carba-23,3+3,0 (<0,001). Osmolalidade urinária (mOsm/Kg/H2O) Controle-819,6+175,7, Li-149,4+18,0 (p<0,01), Li+Carba-251,5+39,7 (p<0,05), Carba-396,2+75,5 (p<0,01). FENa+ (%) - Controle-0,15+0,01, Li-0,10+0,02, Li+Carba-0,12+0,02, Carba-0,11+0,02. Expressão da AQP2 (%) Controle-100,0+6,7, Li-55,8+5,4 (p<0,01), Li+Carba-75,8+9,6 (p<0,01), Carba- 99,7+4,7 (p<0,05). Não houve diferenças significantes no Na+, K+ e Osmolalidade plasmáticas. Em resumo, nossos dados revelaram que a Carba diminui o UV, aumenta a osmolalidade urinária e a expressão da AQP2 no DI induzido pelo lítio, e aumenta a permeabilidade à água, provavelmente agindo diretamente no receptor da vasopressina (V2). Estes resultados enfatizam que a hiponatremia encontrada nos pacientes que fazem uso da Carba pode ser explicada, pelo menos em parte, pelo aumento da permeabilidade osmótica no DCMI e que a poliúria do DI ocasionado pelo uso do lítio pode ser diminuída com a associação da Carba. / Carbamazepine (Carba) is an anticonvulsant and a psychotropic medication commonly used in the treatment of patients with intellectual disability (ID). This drug has been used to try to decrease the urinary volume in Diabetes Insipidus (DI) because Carba presents an antidiuretic effect, but the incidence of the hyponatremia in neurological patients is a common ocurrence. Lithium (Li) is one of the most important drugs used to treat bipolar mood disorders. However, Li has the undesirable capacity to induce DI complicating its usage in patients psychologically weakened. Nowadays, the association of these drugs is used in the treatment of patients with psychiatric and neurological problems. Our objective was to investigate the effect of Carba in the Inner Medullary Collecting Duct (IMCD) and elucidate its effect in the lithium-induced DI: 1) In vitro study: A) Microperfusion studies the water permeability (Pf, m/sec) was determined in normal rats IMCD isolated and perfused by the standard methods. Carba 10-5M was added to the bath fluid. B) Immunoblotting studies for AQP2 protein expression in IMCD tubule suspension from normal rats incubated with Carba 10-5M for 30 minutes. 2) In vivo study A) four groups of normal rats were done - a) Control (C, n=5); b) Li (40 mmol/kg/food/3 weeks n=4) c) Li+Carba (40 mmol Li/kg/food/3 weeks and 400 mg Carba/kg/bw/2 last weeks, n=5); and Carba (400 mg Carba/kg/bw/3weeks, n=5); - B) AQP2 expression in IMCD from the four groups, by Western Blot. Results: 1) In vitro study A) in microperfusion, Carba added to the bath in Vasopressin (Vp) absence (n=6) increased Pf Control-12.3+3.6, Carba-62.6+14.8 (p<0.01), Recuperation (Rec)-17.4+5.5 (p<0.01). In order to study the mechanism by which Carba activates the Vp cascade, the antagonist of the Vp receptor 2 (AV2; n=10) was used: Control-23.5+5.2, Carba-37.4±4.4 (p<0.01), Carba+AV2-19.6±5.0 (p<0.05), Rec-21.4+5.5; and Control-18.6+7.0, AV2- 27.3+7.2, AV2+Carba-25.3+5.7, Rec-32.6+6.4. The PKA inhibitor (H8; n=4) was also used: Control-15.0+9.0, Carba-106.1+12.3 (p<0,01), Carba+H8-60.3+16.4 (p<0.01), Rec-44.5+13.2. B) the densitometric analysis showed an increased of 38.8% in AQP2 expression (Control- 100.0+8.3 vs. Carba-138.8+12.12, p<0.05); B) In vivo study Urinary volume (UV, mL/24h) Control-10.7+3.0, Li-62.6+6.0 (p<0.001), Li+Carba-28.5+4.9 (p<0.001), Carba-23.3+3.0 (p<0.001). Urinary Osmolality (mOsm/Kg/H2O) Control-819.6+175.7, Li-149.4+18.0 (p<0.01), Li+Carba-251.5+39.7 (p<0.05), Carba-396.2+75.5 (p<0.01). FENa+ (%) - Control- 0.15+0.01, Li-0.10+0.03, Li+Carba-0.12+0.02, Carba-0.11+0.02. AQP2 expression (%) Control-100.0+6.7, Li-55.8+5,4 (p<0.01), Li+Carba-75.8+9.6 (p<0.01), Carba-99.7+4.7 (p<0.05). There were no significant differences in Na+, K+ and plasma osmolality. In summary, our data showed that Carba decreased the UV, increased the UOsm and the AQP2 expression in Li-induced DI, increased the water permeability, probably acting directly in the Vp V2 receptor-Protein G complex, since its action was blocked by the specific Vp V2 receptor antagonist. These results emphazise that the hyponatremia found in patients using Carba could be explained, at least in part, by increased osmotic permeability of IMCD. In addition, poliuria observed in lithium-induced DI can be decreased with Carba-treatment.