Os receptores ativadores da proliferação de peroxissomos (PPARs) pertencem à superfamília de receptores nucleares que funcionam como fatores transcricionais. Eles exercem um papel fundamental em processos que envolvem, principalmente, o metabolismo lipídico, em resposta à ativação por ligantes naturais e sintéticos como os ácidos graxos e os fibratos, respectivamente. A crescente descoberta de importantes funções fisiológicas, coordenadas pelos PPARs, e a necessidade de se conhecer como os agonistas, atualmente disponíveis, atuam nesses receptores, têm incitado pesquisas que vislumbram sua melhor exploração nos tratamentos de doenças metabólicas e inflamatórias, minimizando os efeitos adversos de ativações suprafisiológicas. Nesse cenário, o presente trabalho buscou compreender melhor as bases estruturais envolvidas nas funções atribuídas aos PPARs e explicar como as interações com seus ligantes ocorrem. Para isso, foram realizadas a subclonagem do domínio de ligação ao ligante do PPARα, sua expressão e purificação, seguidas de ensaios cristalográficos e biofísicos, além da abordagem de testes funcionais. Uma vez que a formação de oligômeros está relacionada à funcionalidade desses receptores, foram abordados estudos de oligomerização dos PPARs α e γ, compreendendo tanto o processo de homo- quanto o de heterodimerização. Os ensaios de cristalização do hPPARα LBD complexado a ligantes naturais e sintéticos, resultaram em estruturas cristalográficas que permitiram a identificação dos resíduos envolvidos no reconhecimento dos ligantes e a caracterização de sítios de ligação nunca antes descritos. A presença de ligantes nessas regiões afeta a conformação da proteína e, consequentemente, a modulação de sua função e o recrutamento da maquinaria transcricional. Adicionalmente, as estruturas cristalográficas da proteína complexada a ácidos graxos auxiliaram na compreensão de como essa importante classe de ligantes naturais possui efeitos farmacológicos similares aos de ligantes sintéticos. Esses resultados têm imediato impacto na procura racional de agonistas para esses receptores e se inserem em uma perspectiva de promoção do desenvolvimento científico-tecnológico na área de endocrinologia molecular. / The peroxisome proliferation-activated receptors (PPARs) belong to the nuclear receptors superfamily, acting as transcriptional factors. They play a key role in processes involving essentially lipid metabolism in response to activation by natural and synthetic ligands such as fatty acids and fibrates, respectively. The rising discovery of important physiological functions coordinated by PPARs and the necessity to know how the currently available agonists act on these receptors, have encouraged researches envisioning a better receptor exploration in the treatment of metabolic and inflammatory diseases, minimizing the adverse effects of supraphysiological activations. In this scenario, the present study aimed to better understand the structural basis involved in PPARs functions and elucidates how the interactions with their ligands takes place. For this, the ligand-binding domain of PPARα was subjected to subcloning, expression and purification steps, followed by crystallographical and biophysical assays, in addition to functional testing approaches. Since the degree of oligomerization is related to the functionality of these receptors, oligomeric studies of PPARs α and γ oligomerization were also achieved, comprising both homo- and hetero-dimerization. The co-crystallization assays of hPPARα LBD complexed with natural and synthetic ligands resulted in crystallographic structures that allowed the identification of residues involved in ligand recognition and the characterization of novel binding sites. The presence of ligands in these regions affects the conformation of the protein and thereby modulates their function and transcriptional machinery recruitment. Additionally, the crystallographic structures of the protein complexed to fatty acids were valuable for the understanding of how this important class of natural ligands has similar pharmacological effects to those of synthetic ligands. These results have direct impact on rational agonists design to these receptors and are inserted in a perspective of scientifical promotion and technological development in the field of molecular endocrinology.

Receptores do tipo Toll (TLRs) e o receptor do fator ativador de plaquetas (PAF-R) são altamente expressos em macrófagos. Neste estudo, investigamos o efeito da ativação do PAF-R na resposta de macrófagos peritoneais a agonistas de TLR. Descobrimos que PAF exógeno inibiu a produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-6, IL-12p40 e TNF-α) e aumentou a produção de IL-10 em macrófagos estimulados com Pam3Cys (TLR2) e LPS (TLR4), mas não Poly(I:C) (TLR3). PAF não afetou a expressão de MyD88 e TRIF, sugerindo que o efeito do PAF na modulação das citocinas é downstream aos adaptadores. PAF inibiu a fosforilação induzida por LPS da subunidade p65 do NF-κB que direciona a expressão de genes pró-inflamatórios, e aumentou a fosforilação da proteína precursora p105 do NF-κB, que induz a expressão da IL-10. Esses resultados indicam que em macrófagos ativados com LPS, a diminuição da atividade transcricional da p65 e o aumento da fosforilação da p105 induzidos pelo PAF são responsáveis pela downregulation das citocinas pró-inflamatórias e upregulation da IL-10, respectivamente. / Toll-like receptors (TLRs) and platelet-activating factor receptor (PAF-R) are highly expressed in macrophages. In this work, we investigated the effect of PAF-R activation on peritoneal macrophages responses to TLR agonists. We found that exogenous PAF inhibited the production of pro-inflammatory cytokines (IL-12p40, IL-6 and TNF-α) and increased IL-10 in macrophages challenged with Pam3Cys (TLR2) and LPS (TLR4), but not by Poly(I:C) (TLR3). PAF did not affect MyD88 and TRIF expression, suggesting that PAF modulation on cytokines is downstream to adaptors. PAF inhibited LPS-induced phosphorylation of NF-κB p65 that drives inflammatory cytokine gene expression and increased NF-κB p105 precursor phosphorylation, which induces IL-10 expression. These findings indicate that in LPS-activated macrophages, the impaired transcriptional activity of p65 subunit and enhanced p105 phosphorylation induced by PAF are responsible for the downregulation of pro-inflammatory cytokines and up-regulation of IL-10, respectively.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-12-15T14:53:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) VersaoAtualizada2016 - Tese Georgge Gomes Oliveira - varsão para biblioteca UFPE.pdf: 3290385 bytes, checksum: 2ddc23c4486bcc121a9ea222566d1f09 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T14:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) VersaoAtualizada2016 - Tese Georgge Gomes Oliveira - varsão para biblioteca UFPE.pdf: 3290385 bytes, checksum: 2ddc23c4486bcc121a9ea222566d1f09 (MD5) Previous issue date: 2015-04-27 / Ministério da Saúde do Brasil / Estudos recentes mostram que a síndrome metabólica (SM) é freqüente nas pessoas vivendo com HIV/AIDS (PLWHA). A importância na identificação da SM baseia-se no aumento do risco em cinco vezes de desenvolver diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e em duas vezes de apresentar doença cardiovascular (DCV) trombóticas, embora os fatores de hipercoagulabilidade não estejam incluídos nos critérios de definição da síndrome. A SM é caracterizada pela presença concomitante de fatores reconhecidamente aterogênicos em um mesmo indivíduo. A freqüência de DCV em PLWHA vem aumentando ao longo dos anos. O PAI-1 é uma proteína importante na cascata de fibrinólise e seu aumento está associado ao estado de hipercoagulabilidade. Sua regulação depende de fatores genéticos, dentre eles, destaca-se o polimorfismo 4G5G do gene SERPINE1. A participação de substâncias protrombóticas na doença cardiovascular é conhecida em pessoas sem HIV, porém menos elucidada em PLWHA. Diante disto o objetivo deste trabalho foi determinar a freqüência do polimorfismo 4G5G em pessoas que vivem com HIV e verificar se o polimorfismo tem associação com a expressão do PAI-1 plasmático, com SM e com risco cardiovascular (RCV) estimado pelo escore de Framingham. Também objetivamos verificar associação dos níveis de PAI-1 com RDC e com SM. Para tanto foi desenvolvido estudo transversal para determinação da freqüência do polimorfismo 4G5G do PAI-1 e estudo tipo caso-controle para verificar associações entre polimorfismos com níveis plasmáticos de PAI-1 com SM e depois com RCV. Também foram testadas associações com fatores de risco tradicionais. Para primeiro estudo a amostra foi 185 pessoas sorteadas de um grupo de 2074 participantes da Cohort AIDS-PE Study Group. A prevalência de heterozigose foi de 86,8% e homozigose para 4G4G de 4,4%. A média de idade foi de 40,5 (DP ± 9,9 anos). A mediana de PAI-1 ativado foi de 13,6 ng/mL (IQ: 10,8-17,5). A freqüência de SM foi de 37,9% e de dislipidemia de 82,4%. Não encontramos associação do polimorfismo com os níveis plasmáticos de PAI-1, nem com SM. Para o segundo estudo houve perda de 23, restando 162 pessoas das quais 72,8% era do sexo feminino e a média de idade foi de 40 anos. A freqüência de RDCV estimado > 10% foi de 10,5%. O alelo 4G esteve presente em 91,0% das pessoas (genótipos 4G4G e 4G5G). Não houve associação entre polimorfismo e RDCV estimado > 10% (OR=0,6; IC95% 0,1 – 3,7), nem diferença dos níveis de PAI-1 em relação ao RDCV estimado (RCV>10% 14,6 ng/ml x RDCV < 10% 14,1 ng/ml; ρ=0,9). Hipercolesterolemia foi associada com genótipo 5G5G do polimorfismo (OR: 3,3; IC95%: 1,25 – 10) e com níveis plasmáticos mais elevados do PAI-1 (colesterol não HDL (CNHDL) > 130 mg/dl = 15,6 ng/ml versus CNHDL < 130 ng/ml = 13,8 ng/ml; ρ=0,04). Nesse estudo, encontramos alta prevalência do heterozigose para o polimorfismo 4G5G em pessoas vivendo com HIV/AIDS, no nordeste do Brasil. Entretanto, não encontramos associação entre o polimorfismo estudado com níveis plasmáticos de PAI-1 nem com SM. Também não verificamos associação do polimorfismo 4G5G do PAI-1 nem dos níveis plasmáticos de PAI-1 com RCV>10% pelo escore de Framingham, mas houve com hipercolesterolemia. / Recent studies show that the metabolic syndrome (MS) is common in people living with HIV / AIDS (PLWHA). The importance of identifying MS is based on an increased risk of developing fivefold type 2 diabetes mellitus (T2DM) and twice presenting cardiovascular disease (CVD) thrombotic, although hypercoagulability factors are not included in the definition of criteria syndrome. MS is characterized by the concomitant presence of known atherogenic factors in the same individual. The frequency of CVD in PLWHA has increased over the years. The PAI-1 is an important protein in the fibrinolytic cascade and its increase is associated with the hypercoagulable state. Its regulation depends on genetic factors, among them stands out the 4G5G polymorphism SERPINE1 gene. The participation of prothrombotic substances in cardiovascular disease is known in people without HIV, but less elucidated in PLWHA. In view of this the objective of this study was to determine the frequency of 4G5G polymorphism in people living with HIV and verify that polymorphism is associated with the expression of PAI-1 plasma with MS and cardiovascular risk (RCVD) estimated by the Framingham score . We aim to also assess the association of PAI- 1 levels with CVD and with MS. For this cross-sectional study was developed to determine the frequency of 4G5G polymorphism of PAI- 1 and case-control study to examine associations between polymorphisms and plasma levels of PAI- 1 with SM and then RCVD. Associations were also tested with traditional risk factors. For the first study sample was randomly selected 185 people of a group of participants 2074 of AIDS-PE Cohort Study Group. The prevalence of heterozygosity was 86.8% and homozygous for 4G4G 4.4%. The average age was 40.5 (SD ± 9.9 years). The PAI-1 activated median was 13.6 ng/mL (CI: 10.8 to 17.5). The frequency of MS was 37.9% and 82.4% dyslipidemia. We did not find polymorphism association with plasma levels of PAI-1 or with SM. For the second study, there was loss of 23, leaving 162 people of which 72.8% were female and the average age was 40 years. The frequency of RDCV estimated> 10% was 10.5%. The 4G allele was present in 91.0% of people (4G4G and 4G5G genotypes). There was no association between polymorphism and RDCV estimated> 10% (OR = 0.6; 95% CI 0.1 to 3.7), or difference of PAI-1 levels relative to estimated RDCV (RCV> 10% 14.6 ng / ml x RDCV <10% 14.1 ng/ml; ρ = 0.9). Hypercholesterolemia was associated with 5G5G genotype polymorphism (OR: 3.3; 95% CI: 1.25 to 10) and higher plasma levels of PAI-1 (non-HDL cholesterol (CNHDL)> 130 mg / dl = 15.6 ng/ml CNHDL versus <130 ng/ml = 13.8 ng/ ml; ρ = 0.04). In this study, we found a high prevalence of heterozygous for the polymorphism 4G5G in people living with HIV/AIDS, in northeastern Brazil. However, we found no association between the polymorphism studied with plasma levels of PAI-1 or with SM. Nor do we find polymorphism association 4G5G of PAI-1 or plasma levels of PAI-1 with RCV> 10% by Framingham score, but happened to hypercholesterolemia.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-04T15:36:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hélio Galdino Júnior - 2008.pdf: 1866044 bytes, checksum: 37a41759b9e3790adfe67161890f0dd4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-04T15:38:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hélio Galdino Júnior - 2008.pdf: 1866044 bytes, checksum: 37a41759b9e3790adfe67161890f0dd4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T15:38:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hélio Galdino Júnior - 2008.pdf: 1866044 bytes, checksum: 37a41759b9e3790adfe67161890f0dd4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2008-02-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Microorganisms express conserved molecules which ones activate the innate immune system. These molecules are known as pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as lipopolysaccharide (LPS) and bacterial lipoproteins. The PAMPs can be recognized by Toll-like receptors (TLR). The innate immunity activation through TLR pathway induces pro-inflammatory cytokines and lipid mediators, as tumor necrosis factor (TNF) and platelet-activating factor (PAF), respectively. Several reports showed the interaction between TLR4 and PAF receptor (PAFR) signaling to the TNF production; however, the interaction between PAF and other TLR was poorly investigated. The aim of this study was to evaluate the PAF regulatory activity on TLR2-induced TNF production. Thus, Mycoplasma fermentans PG 18 lipoproteins (LAMPf), TLR2/TLR6 agonists and Pam3Cys, a synthetic lipopeptide agonist of TLR2/TLR1 were added to human whole blood cultures and TNF was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay. To evaluate the effects of endogenous PAF on TNF production, a PAF receptor antagonist, WEB2170 was used, and to evaluate the effect of exogenous PAF, PAF was added to the cultures. The blood cultures were also activated with Gram-positive or negative heat-killed bacteria (Staphylococcus aureus or Escherichia coli). The TLR2 expression on polymorphonuclear (PMN) and monocytes were evaluated by flow cytometry, analyzing total cellularity for PMN and CD14+ cells for monocytes. LAMPf, Pam3Cys or LPS induced TNF and the treatment with WEB2170 increased TNF production after TLR2 activation, but not after TLR4 activation. Priming of the blood cultures with PAF up regulated TLR2- induced TNF production. Addition of PAF did not alter TNF release induced by LPS. E. coli induced higher levels of TNF than S. aureus and the treatment with WEB2170 lead to a significant reduction of S. aureus-induced TNF release. However, addition of PAF did not significantly alter bacteria-induced TNF production. With E. coli neither treatment with WEB2170 nor with PAF modulated TNF release. Results indicate that PAF can increase or decrease TNF production induced by TLR2 depending on the time when PAF is combined with TLR2. The increase of the TNF production after extended priming with PAF it was not caused by an increase in TLR2 expression. Thus, it is suggested that interaction between PAFR and TLR2 signaling determines the levels of TNF release. TLR2/PAF/TNF signaling pathway can be relevant in innate immune responses against Gram positive bacteria as well as in inflammatory diseases. / Os microrganismos expressam moléculas conservadas que ativam as células do sistema imune inato. Estas são conhecidas como padrões moleculares associados aos patógenos (PAMPs), tais como o lipopolissacarídeo (LPS) e as lipoproteínas bacterianas. Estes PAMPs são reconhecidos por receptores da família dos Toll-like receptors (TLR). A ativação das células da imunidade natural via TLR induz a produção de citocinas e mediadores lipídicos pro-inflamatórios dentre eles, o fator de necrose tumoral (TNF) e o fator ativador de plaquetas (PAF), respectivamente. A modulação da produção de TNF induzida por agonista de TLR4 (o LPS), pelo PAF, é conhecida, no entanto, a interação entre PAF e outros TLR foi pouco investigada. O presente trabalho teve o objetivo de avaliar a atividade moduladora do PAF na produção de TNF induzida por agonistas de TLR2. Para isto, foram utilizados as lipoproteínas de Mycoplasma fermentans PG 18 (LAMPf), agonistas de TLR2/TLR6 e o Pam3Cys, um lipopeptídeo sintético agonista de TLR2/TLR1. Culturas de sangue total periférico humano foram ativadas com os agonistas de TLR2 ou TLR4 e o TNF foi avaliado nos sobrenadantes, por meio do ELISA. Para avaliar os efeitos do PAF endógeno na produção do TNF, foi utilizado o antagonista do receptor do PAF (PAFR), o WEB2170, e para avaliar o efeito do PAF exógeno, o PAF foi adicionado às hemoculturas. As hemoculturas também foram ativadas com bactérias inteiras (S. aureus ou E. coli) inativadas pelo calor. A expressão de TLR2 em polimorfonucleares (PMN) e monócitos foi avaliada por citometria de fluxo, analisando a celularidade total para os PMN e as células CD14+, para os monócitos. As LAMPf, Pam3Cys ou LPS induziram TNF nas hemoculturas. O tratamento com WEB2170 aumentou a produção de TNF nas hemoculturas estimuladas com agonistas de TLR2, mas não de TLR4. A pré-estimulação das hemoculturas com o PAF aumentou a produção de TNF induzida pelos agonistas de TLR2. A adição de PAF não causou alterações significantes na produção de TNF induzida pelo LPS. Nos ensaios com as bactérias inteiras, E. coli induziu maiores concentrações de TNF do que S. aureus. O tratamento com WEB2170 das hemoculturas estimuladas com S. aureus reduziu a produção de TNF, no entanto, a adição de PAF não alterou significantemente a produção de TNF nas hemoculturas estimuladas com as bactérias. Para E. coli, nem o tratamento com WEB2170, nem com o PAF alterou significantemente a produção de TNF. Os resultados indicam que o PAF pode aumentar ou diminuir a produção de TNF induzida por agonista de TLR2, dependendo do momento em que ele ativa o PAFR em relação à ativação do TLR2. O aumento da produção de TNF após prolongada pré-ativação das hemoculturas com o PAF não foi devido a um aumento na expressão de TLR2. Assim, é sugerido que a interação entre as vias bioquímicas de sinalização do PAFR e do TLR2 determina o nível de produção de TNF. A via de sinalização TLR2/PAF/TNF pode ser importante na imunidade inata contra infecções causadas por bactérias Gram positivas tão bem quanto em doenças inflamatórias.

O endotélio reveste a parede vascular e possui função essencial na manutenção da homeostase. A célula endotelial é capaz de perceber estímulos extracelulares, como fatores químicos e mecânicos, transmitir a informação para dentro da célula e regular sua função e fenótipo. Neste sentido, investigamos os mecanismos moleculares associados as células endoteliais em dois contextos importantes de intervenções vasculares 1) nos stents farmacológicos, onde a rapamicina exerce funções antiproliferativas e pró-trombogênicas, e 2) na revascularização cardíaca por ponte de safena, onde o alto estiramento mecânico exerce grande impacto no remodelamento vascular e no fenótipo da célula endotelial. A rapamicina pertence à classe de drogas limus, bastante utilizadas nos stents farmacológicos usados no procedimento de desobstrução vascular. Além de sua função antiproliferativa, exploramos os efeitos deletérios associados a pró-trombogênese. Os dados demonstraram que a rapamicina ativa o receptor de TGF independentemente de seu ligante TGFbeta, promovendo aumento na expressão da PAI-1 (pró-trombogênica), alteração no fenótipo endotelial (Transição endotélio-mesenquimal - EndMT) e na formação de fibras de estresse. Os efeitos observados são dependentes da ativação de Smad2 e independentes da via clássica antiproliferativa por mTOR. Experimentos in vivo mostraram que o tratamento com inibidor do receptor de TGF diminui os efeitos pró-trombogênicos e a expressão de PAI-1 induzidos pela rapamicina em artérias carótidas de camundongos. A ponte de safena é um procedimento bastante utilizado na cirurgia de revascularização cardíaca e a arterialização do segmento venoso submetido ao estresse hemodinâmico arterial resulta em remodelamento vascular, que influencia o sucesso do procedimento. Nossos dados demonstram que a célula endotelial humana de veia safena humana (hSVEC), susceptível as modificações do tipo EndMT induzido quimicamente (estímulo pró-fibrótico e pró-inflamatório), não expressou o mesmo comportamento em resposta ao aumento de estiramento mecânico que ocorre durante a arterialização venosa. Entretanto, detectamos uma pronunciada redução dos filamentos de actina, modulação no padrão de ativação da cofilina e na proporção de actina glomerular (G-actina) entre citoplasma e núcleo, com redução da biodisponibilidade de NO. De modo interessante, demonstramos que a redução no filamento de actina é específica para a célula endotelial venosa, não sendo observado em células endoteliais de origem arterial de aorta e coronária. Em conjunto, os dados mostram que 1) efeitos pró-trombogênicos associados a rapamicina são mediados por ativação do receptor de TGF independente do seu ligante e da atividade antiproliferativa da droga e 2) a adaptação da célula endotelial venosa ao estiramento mecânico envolve modulação da síntese/degradação de filamentos de actina e redução na biodisponibilidade de NO. Estes novos elementos sobre o mecanismo de transdução de estímulos químicos e físicos pelo endotélio poderão ser explorados terapeuticamente para modular a plasticidade endotelial em disfunções cardiovasculares / Endothelium is the inner layer in vascular wall and displays an essential role in the maintenance of cardiovascular homeostasis. Endothelial cell senses the extracellular stimuli, such as chemical and mechanical factors, transduce and process these signals to regulate cell function and phenotype. Here, we investigated molecular underpinning of the endothelial cells under two important scenarios: 1) in drug-eluting stents, where rapamycin exerts antiproliferative and undesirable prothrombogenic functions, and 2) in vein graft bypass surgery, where increased stretch modulates vascular remodeling and endothelial cell phenotype. Rapamycin belongs to the class of limus drugs and is widely used in drug eluting stents (DES) to vascular restenosis. In addition to its antiproliferative function, we explore the deleterious effects associated with prothrombogenesis. Our data demonstrated that rapamycin activates TGF receptor independent of its ligand TGFbeta, in concert with promotion of PAI-1 expression (prothrombogenic), changes in endothelial phenotype (Endothelial to Mesenchymal Transition - EndMT) and stress fibers induction. These effects are Smad2 dependent and independent of the classical antiproliferative mTOR pathway of rapamycin. Our in vivo experiments showed that TGF receptor inhibitor treatment decreases prothrombogenic effects and PAI-1 expression induced by rapamycin in mice carotid arteries. Saphenous vein is widely used in coronary artery bypass surgery (CABG) and the vein arterialization remodeling in response to the increased stress influences graft patency. Our data demonstrated that human saphenous vein endothelial cell (hSVEC) is susceptible to chemically induced endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) by pro-fibrotic and pro-inflammatory stimuli. On the other hand, physical stimulus associated with high stretch failed to induce EndMT. However, we detected a pronounced decrease of actin filaments, modulation of the cofilin activation, changes in the proportion of glomerular actin (G-actin) between cytoplasm and nucleus, and reduction of NO bioavailability. Interestingly, the reduction of actin fibers by high stretch is specific to venous endothelial cell since arterial endothelial cells from aorta, and coronary artery failed to display the response. Altogether, our data show that 1) the thrombogenic effects of rapamycin are mediated by TGF receptor activation independent of its ligand and independent of the antiproliferative pathway of the drug, and 2) the adaptation of venous endothelial cell to mechanical stretch involves synthesis/degradation of actin filaments and reduced NO bioavailability. These new elements on signal transduction of endothelial cells in response to chemical and physical stimuli may be therapeutically explored to modulate endothelial plasticity in cardiovascular disorders

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do presente estudo foi avaliar se o Bezafibrato, um agonista PAN-PPAR, é capaz de aliviar a doença não alcoólica do fígado gorduroso (NAFLD) na prole de machos de mães C57BL/6 obesas. Fêmeas virgens foram alimentadas com uma dieta HL (hiperlipídica, 49% de lipídios) ou uma dieta C (controle, 10% de lipídios) por oito semanas antes do acasalamento e durante os períodos de gestação e lactação. A prole de machos foi subdividida em quatro grupos: C (dieta controle para as mães e filhotes); C/BZ (dieta controle para as mães e filhotes com tratamento com Bezafibrato[100mg/Kg]); HL (dieta HL para as mães e dieta controle para os filhotes); e HL/BZ (dieta HL para as mães e dieta controle para os filhotes com tratamento com Bezafibrato [100mg/Kg]). O tratamento com Bezafibrato começou na 12 semana e se manteve por três semanas. Análise do metabolismo, bioquímica, estereológica e por western-blotting foram realizadas. A dieta HL causou um fenótipo de sobrepeso nas mães e acarretou em uma intolerância oral à glicose com aumento da glicemia de jejum. A prole HL apresentou hiperfagia, ganho de massa corporal, altos níveis de triglicerídeo hepático e plasmático, esteatose hepática e aumento da expressão de proteínas lipogênicas concomitante com diminuição do receptor ativador de proliferação peroxissomal alfa (PPAR&#945;), que é responsável pela &#946;-oxidação e aumento do receptor ativador de proliferação peroxissomal gama (PPAR&#947;) e do elemento regulador de esterol ligante da proteína 1 (SREBP-1c) proteínas envolvidas na lipogênese hepática. Por outro lado, o tratamento com o Bezafibrato reverteu o quadro da programação metabólica no fígado, com uma melhora dos parâmetros morfológicos, bioquímicos e moleculares do fígado dos animais, com um aumento da ativação de PPAR&#945; em associação a uma diminuição do PPAR&#947; e não alterando a expressão de SREBP-1c. Em conclusão, nós demonstramos que o tratamento com Bezafibrato melhora a NAFLD causada pela obesidade materna. / The aim of the present study was to evaluate whether Bezafibrate , a PAN-PPAR agonist, could attenuate non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) of male offspring from obese C57BL/6 dams. Dams were fed on a HF (high-fat, 49% lipids) diet or SC (standard chow; 10% lipids) diet for 8 weeks before mating and during gestation and lactation periods. Male offspring were subdivided into 4 groups: SC (standard-chow for dams and offspring); SC/BZ [standard-chow for dams and offspring with treatment with BZ (100mg/Kg)]; HF (high-fat diet for dams and standard-chow for offspring); HF/BZ [high-fat diet for dams and standard-show for offspring with treatment with Bezafibrate (100mg/Kg)]. Treatment with Bezafibrate started at 12th week and was maintained for 3 weeks. Metabolic measurements, biochemical analysis, stereological tools and western-blotting were performed. The HF diet yielded an overweight phenotype and an increase in oral glucose tolerance and fasting glucose of dams. The HF offspring presented hyperphagia, body mass gain, high levels of plasmatic and hepatic triglycerides, impairment of glucose metabolism, hepatic steatosis and high expression of lipogenic proteins concomitant to decreased expression of PPAR&#945;, which is responsible for &#946;-oxidation. On the other hand, treatment with Bezafibrate reverted hepatic outcomes of metabolic programming, with an improvement of morphological, biochemical and molecular parameters of animals livers, with an increase of PPAR&#945; activation in association with a decrease of PPAR&#947; expression and no changes in SREBP-1c expression. In conclusion, we demonstrated that treatment with Bezafibrate improved NAFLD caused by maternal obesity.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do presente estudo foi avaliar se o Bezafibrato, um agonista PAN-PPAR, é capaz de aliviar a doença não alcoólica do fígado gorduroso (NAFLD) na prole de machos de mães C57BL/6 obesas. Fêmeas virgens foram alimentadas com uma dieta HL (hiperlipídica, 49% de lipídios) ou uma dieta C (controle, 10% de lipídios) por oito semanas antes do acasalamento e durante os períodos de gestação e lactação. A prole de machos foi subdividida em quatro grupos: C (dieta controle para as mães e filhotes); C/BZ (dieta controle para as mães e filhotes com tratamento com Bezafibrato[100mg/Kg]); HL (dieta HL para as mães e dieta controle para os filhotes); e HL/BZ (dieta HL para as mães e dieta controle para os filhotes com tratamento com Bezafibrato [100mg/Kg]). O tratamento com Bezafibrato começou na 12 semana e se manteve por três semanas. Análise do metabolismo, bioquímica, estereológica e por western-blotting foram realizadas. A dieta HL causou um fenótipo de sobrepeso nas mães e acarretou em uma intolerância oral à glicose com aumento da glicemia de jejum. A prole HL apresentou hiperfagia, ganho de massa corporal, altos níveis de triglicerídeo hepático e plasmático, esteatose hepática e aumento da expressão de proteínas lipogênicas concomitante com diminuição do receptor ativador de proliferação peroxissomal alfa (PPAR&#945;), que é responsável pela &#946;-oxidação e aumento do receptor ativador de proliferação peroxissomal gama (PPAR&#947;) e do elemento regulador de esterol ligante da proteína 1 (SREBP-1c) proteínas envolvidas na lipogênese hepática. Por outro lado, o tratamento com o Bezafibrato reverteu o quadro da programação metabólica no fígado, com uma melhora dos parâmetros morfológicos, bioquímicos e moleculares do fígado dos animais, com um aumento da ativação de PPAR&#945; em associação a uma diminuição do PPAR&#947; e não alterando a expressão de SREBP-1c. Em conclusão, nós demonstramos que o tratamento com Bezafibrato melhora a NAFLD causada pela obesidade materna. / The aim of the present study was to evaluate whether Bezafibrate , a PAN-PPAR agonist, could attenuate non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) of male offspring from obese C57BL/6 dams. Dams were fed on a HF (high-fat, 49% lipids) diet or SC (standard chow; 10% lipids) diet for 8 weeks before mating and during gestation and lactation periods. Male offspring were subdivided into 4 groups: SC (standard-chow for dams and offspring); SC/BZ [standard-chow for dams and offspring with treatment with BZ (100mg/Kg)]; HF (high-fat diet for dams and standard-chow for offspring); HF/BZ [high-fat diet for dams and standard-show for offspring with treatment with Bezafibrate (100mg/Kg)]. Treatment with Bezafibrate started at 12th week and was maintained for 3 weeks. Metabolic measurements, biochemical analysis, stereological tools and western-blotting were performed. The HF diet yielded an overweight phenotype and an increase in oral glucose tolerance and fasting glucose of dams. The HF offspring presented hyperphagia, body mass gain, high levels of plasmatic and hepatic triglycerides, impairment of glucose metabolism, hepatic steatosis and high expression of lipogenic proteins concomitant to decreased expression of PPAR&#945;, which is responsible for &#946;-oxidation. On the other hand, treatment with Bezafibrate reverted hepatic outcomes of metabolic programming, with an improvement of morphological, biochemical and molecular parameters of animals livers, with an increase of PPAR&#945; activation in association with a decrease of PPAR&#947; expression and no changes in SREBP-1c expression. In conclusion, we demonstrated that treatment with Bezafibrate improved NAFLD caused by maternal obesity.

Embora a grande maioria dos pacientes com asma tenha controle com o padrão de tratamento com corticosteroides, 5 a 10% destes asmáticos ainda desenvolvem algumas formas graves da doença e são considerados pacientes difíceis de controlar. A ativação do NFkB contribui para a manutenção e desenvolvimento de inflamação pulmonar crônica na fisiopatologia da asma. O éster fenetilico do ácido cafeico (CAPE), um componente ativo de própolis das colmeias de abelhas, é conhecido por ter propriedades antiinflamatórias e imunomoduladoras. É conhecido como um potente e um inibidor específico da ativação de NFk B. Nós anteriormente mostramos que Y27632, um inibidor de Rho quinase, atenuou a resposta pulmonar das vias aéreas, inflamação e remodelamento. Para o nosso conhecimento, tratamentos com os inibidores de NFk B ou Rho-quinase em comparação com o uso de corticosteroides não foram previamente investigados em um modelo animal de inflamação pulmonar crônica alérgica. MÉTODOS: Trinta camundongos BALB/C machos (20 a 25g) foram divididos em cinco grupos (n=6 em cada grupo): SAL (instilado com solução salina), OVA (expostos à ovalbumina), OVA-CAPE (expostos à ovalbumina e tratados com CAPE), OVA-RHO (expostos à ovalbumina e tratados com inibidor de Rho), OVA-CORT (expostos à ovalbumina e tratados com corticosteróide). Os animais foram sensibilizados para ovalbumina durante 28 dias e os controles receberam solução salina. A administração de corticosteróide (1mg/Kg/dia) e CAPE (10mg/Kg/dia) foi feita por via intraperitoneal e Y-27632 (10 mg/kg) administrado por via intranasal, todos nos dias 22, 24, 26 e 28 do protocolo experimental. Vinte e quatro horas após a conclusão do protocolo experimental, os animais foram submetidos a uma avaliação da curva de resposta à dose à metacolina, consideramos as respostas máximas da Resistência ao Sistema Respiratório (Rrs) e Elastância (Ers) às 24 horas após o último desafio com ovalbumina (respostas basais e máximas após a metacolina desafio 3, 30 e 300mg/mL). Posteriormente, os pulmões foram removidos e a análise histológica foi realizada usando morfometria. RESULTADOS: não houve diferenças nos valores basais de todos os grupos. expostos à ovalbumina Houve um aumento em Rrs e Ers após o desafio da metacolina em comparação com o grupo SAL (p < 0,05). No grupo exposto ao OVA, os tratamentos com CAPE, CORT e RHO reduziram a resposta máxima de Ers em relação ao OVA (p < 0,05). Em relação ao tratamento com somente CAPE atenuou a resposta máxima de Rrs em relação ao OVA (p < 0,05). Houve diminuição nos eosinófilos, conteúdo de fibras de colágeno, células positivas para iNOS, MMP-9, TIMP-1 em grupos OVA-CAPE, OVA-CORT e OVA-RHO em comparação com os animais sensibilizados (grupo OVA) (p < 0,05). CONCLUSÃO: a inibição de NFkB e Rho-quinase contribuiu para o controle da hiperresponsividade, inflamação, processo de remodelamento da matriz extracelular e ativação do estresse oxidativo. Embora os inibidores de NFkB e Rho-quinase sejam uma alternativa ao tratamento da asma, são necessários mais estudos / Although the great majority of asthma patients obtain control with the gold standard treatment using corticosteroids, 5 to 10% of these asthmatics still develop some severe forms of the disease, called difficult to control patients. Activation of NFk B contributes to the maintenance and development of chronic lung inflammation in pathophysiology of asthma. Caffeic acid phenethyl ester (CAPE), an active component of propolis from honeybee hives, is known to have anti-inflammatory and immunomodulatory properties. It is known as a potent and a specific inhibitor of NFk B activation. We previously have shown that Y27632, a Rho-quinase inhibitor, attenuated airway lung responsiveness, inflammation and remodeling. To our knowledge, treatments with the NFk B or Rho-kinase inhibitors compared to the use of corticosteroids have not been previously investigated in an animal model of chronic allergic lung inflammation. METHODS: Thirty male BALB/c mice (20 to 25g) were divided into five groups (n=6 in each group): SAL (saline-instilled), OVA (exposed-ovalbumin), OVA-CAPE (exposedovalbumin and treated with CAPE), OVA-RHO (exposed-ovalbumin and treated with Rho inhibitor), OVA-CORT (exposed-ovalbumin and treated with corticosteroid). The BALB/c mice were sensitized to ovalbumin for 28 days and controls received saline. The administration of corticosteroid (1mg/Kg/day) and CAPE (10mg/Kg/day) was made intraperitoneally and Y-27632 (10mg/kg) was intranasally, all on days 22, 24, 26 and 28 of the experimental protocol. Twentyfour hours after completion of the experimental protocol, animals were subject to an evaluation of dose response curve to methacholine. We considered the maximal responses of respiratory system resistance (Rrs) and elastance (Ers) 24 hours after the last challenge with ovalbumin (baseline and maximal responses after metacholine challenge 3, 30 and 300mg/mL). Afterwards, lungs were removed and histological analysis was performed using morphometry. RESULTS: There were no differences on baseline values of all groups. Ovalbumin-exposed mice had an increase in Rrs and Ers after methacholine challenge compared to SAL group (p < 0.05). In OVA-exposed groups, the treatments with CAPE, CORT and RHO reduced maximal response of %Ers compared to OVA (p < 0.05). In relation to %Rrs only CAPE treatment attenuated the maximal response compared to OVA (p < 0.05). There was a decrease in eosinophils, collagen fibers content, iNOS, MMP-9, TIMP-1 positive cells in OVACAPE, OVA-CORT and OVA-RHO groups compared to only sensitized animals (OVA group) (p < 0.05). CONCLUSION: NFkB and Rho-quinase inhibition contributes to the control of hyperresponsiveness, inflammation, extracellular matrix remodeling process and oxidative stress activation. Although NFkB and Rho-quinase inhibitors were an alternative to asthma treatment, more studies are needed

Distúrbios de hemostasia são uma das principais manifestações clínicas observadas nos acidentes por serpentes do gênero Bothrops. Tendo em vista a importância da ativação de fatores da cascata de coagulação no desenvolvimento da patologia no envenenamento, o presente trabalho descreve o isolamento e a caracterização bioquímica e funcional de uma metaloprotease capaz de induzir a ativação de fatores de coagulação, a partir da peçonha de Bothrops moojeni. A metaloprotease foi isolada por três etapas cromatográficas utilizando colunas de exclusão molecular (Sephacryl S-200), interação hidrofóbica (Phenyl Sepharose) e troca aniônica (ES 502N). A protease isolada, denominada moojenactivase, é uma glicoproteína com massa molecular de aproximadamente 89 kDa e ponto isoelétrico de 4,92, sendo composta por três cadeias com massas de 66; 17 e 14 kDa, ligadas por pontes dissulfeto. A determinação da sequência de aminoácidos por espectrometria de massas evidenciou grande identidade sequencial com outras metaloproteases, indicando a presença dos domínios metaloprotease, desintegrina-like e lectinas-like e classificando-a como uma protease da classe PIIId. Funcionalmente, a moojenactivase foi capaz de induzir a cogulação de plasma humano pela ativação dos fatores II (protrombina) e X da cascata de coagulação, gerando -trombina e fator X ativado, respectivamente. A protease apresentou atividade fibrinogenolítica, especialmente sobre a cadeia da molécula de fibrinogênio, porém não foi capaz de induzir a formação do coágulo de fibrina pela ativação deste. A moojenactivase foi parcialmente inibida quando incubada em condições de pH entre 3,5 e 5,0 e em pH 9,0, além de temperaturas acima de 60ºC, bem como na presença de ions Cu2+, além dos inibidores EDTA, SDS, DTT e soro anti-ofídico crotalico/botrópico. A protease induziu agregação plaquetária e não apresentou atividades fibrinolítica e hemorrágica. Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) tratadas com a protease foram capazes de produzir TNF- assim como expressar fator tecidual (Fator III da coagulação) na forma ativa, fazendo com que essas células apresentassem caráter procoagulante. Com o objetivo avaliar os efeitos nos parâmetros hematológicos in vivo, a moojenactivase foi administrada em ratos (3g/Kg) onde foi observado que a protease foi capaz de prolongar o tempo de sangramento dos animais e induzir a diminuição do número de plaquetas sanguíneas, caracterizando um quadro de trombocitopenia. Ainda, o plasma dos animais administrados com a moojenactivase apresentaram valores elevados do tempo de protrombina e tempo de tromboplastina parcialmente ativada, assim como redução na concentração de fibrinogênio. Na análise dos parâmetros da série branca, foi observado aumento leucocitário na circulação, com predominância de neutrófilos até 3h após a administração, indicando a instalação de um quadro inflamatório. Com relação à análise da série vermelha, a moojenactivase não foi capaz de alterar nenhum dos parâmetros estudados. Os resultados obtidos no presente trabalho mostram, pela primeira vez, o isolamento de uma metaloprotease da classe P-IIId da peçonha de Bothrops moojeni capaz de atuar sobre diferentes ii eventos do processo hemostático, sendo essa ação prócoagulante responsável pelo quadro de incoagulabilidade sanguínea em animais. Os dados gerados podem auxiliar no entendimento dos distúrbios de coagulação em pacientes envolvidos em acidentes por serpentes da espécie Bothrops moojeni, levando ao melhor direcionamento na terapia anti-ofídica. Ainda, a função da moojenactivase sobre componentes biológicos credencia a molécula para uma possível aplicação biotecnológica em processos que envolvem o sistema hemostático. / Haemostasis disorders are a major clinical manifestation induced by Bothrops snake envenomations. Considering the relevance of the activation of coagulation factors during the envenomation pathophysiology, the present work describes, for the first time, the isolation and functional and biochemical characterization of a coagulation factor activator metalloprotease from Bothrops moojeni snake venom. The protease was purified by three chromatographic procedures using size exclusion (Sephacryl S-200), hydrophobic interaction (Phenyl Sepharose) and anion exchange (ES 502N) chromatographies. The isolated protease, named moojenactivase, is a glycoprotein with molecular mass of approximately 89 kDa by SDS-PAGE, and composed of 66 kDa, 17 kDa and 14 kDa disulfide linked chains, with pI of 4,92. The amino acid sequence determination of tryptic peptides from moojenactivase by mass spectrometry presented fragments with high identity to snake venom metalloproteases, confirming the presence of the metalloprotease, disintegrin-like and lectin-like domains, which allowed its classification as a PIIId class snake venom metalloprotease. Regarding its functional properties, the protease was capable to induce human plasma coagulation by inducing activation of coagulation factors II and X, forming-thrombin and factor X activated, respectively. Also, moojenactivase presented fibrinogenolitic activity, by cleaving preferentially -chain of fibrinogen, however was not capable to induce the formation of fibrin clot from fibrinogen. The enzyme stability was assessed and showed that moojenactivase presented a reduced functional activity when preincubated in pH values ranging from 3,5 to 5,0 and at pH 9,0, and in temperature conditions over 60ºC. Cu2+ ions and inhibitors such as EDTA, SDS, DTT and crotalic/bothropic antiophidian serum reduced the protease activity. Moojenactivase induced platelet aggregation, but no fibrinolytic and haemorrhage activities. In order to evaluate the stimulation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC), cells were treated with the protease and we observed the release of proinflammatory cytokine TNF- and expression of active Tissue Factor (coagulant factor III), inducing a procoagulant state on PBMC. In order to evaluate in vivo haematological effects, the protease (3 g/Kg) was administered in rat (i.v.) and was observed that moojenactivase induced a prolonged bleeding time and reduced platelet counting (indicating a thrombocytopenia state). Moreover, the evaluation of the hemostasis parameters was assessed by the the prothrombin time and activated partial thromboplastin time assays and showed a prolonged clot time on both tests, and also a decrease in fibrinogen plasma levels. The leukogram analysis showed an increase in the circulating leukocyte number up to 3 hours after moojenactivase administration, composed predominantly of neutrophils. However, parameters envolving red cells shows that the protease do not affect. The results obtained in the present work show, for the first time, the isolation of a PIIId class metalloprotease from Bothrops moojeni snake venom involved on the activation of several hemostatic events, inducing a pro coagulant activity and leading to blood unclottable state in experimental animals. These data can assit in understanding coagulation disturbs in iv patients involved in Bothrops moojeni envenomation and leading to a better anti ophidic therapy guidance. Moreover, moojenactivase functional activities accredits this protease as a possible molecular instrument applied on biotechnological prospect related to the hemostasis.

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) é caracterizada pela limitação persistente de trocas gasosas, usualmente progressiva e associada a uma resposta inflamatória crônica exacerbada das vias aéreas a partículas e gases nocivos. Apesar de prevenível e tratável, não se logrou até o presente uma terapêutica eficaz, que resulte na cura da doença. Neste cenário, a terapia celular apresenta-se como uma alternativa terapêutica potencialmente promissora em DPOC, bem como em outras doenças pulmonares degenerativas e de caráter inflamatório. Porém, vários aspectos da terapia celular carecem de um melhor entendimento. Um dos principais desafios ao sucesso da terapia celular são as baixas taxas de sobrevivência das células transplantadas. O Inibidor do Ativador de Plasminogênio 1 (Plasminogen Activator Inhibitor 1 - PAI-1) pode representar um potencial mediador da sobrevivência de células estromais mesenquimais (CTM) pós-transplante, pois tem sido proposto que anticorpos neutralizadores do PAI-1 auxiliam no aumento da sobrevivência de CTM no tecido-alvo da terapia celular. Desta forma, a diminuição dos níveis de PAI-1 possui um potencial terapêutico interessante, ao modular os principais processos envolvidos na criação de um ambiente pouco propício ao \"homing\" celular durante o processo de injúria. A diminuição dos níveis de PAI-1 é promovida, pela sinvastatina, fármaco da família das estatinas. Desta forma, objetivou-se com este trabalho analisar os efeitos da sinvastatina sobre a expressão do PAI-1, bem como sua influência na sobrevivência das células infundidas para terapia celular de enfisema pulmonar em modelo murino. Camundongos da linhagem FVB foram submetidos à instilação intranasal de elastase para indução de enfisema pulmonar e, posteriormente, tratados com CTM do tecido adiposo e sinvastatina. Os resultados mostraram que, quanto aos aspectos morfológicos e funcionais, considerando-se a análise conjunta de ambos os pulmões, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos submetidos à instilação intranasal de elastase e submetidos à terapia celular com CTM tratados ou não com sinvastatina. Quando porém os pulmões foram analisados individualmente constatou-se que não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos controle e os resultados referentes ao lado direito do pulmão dos animais tratados com elastase e que receberam sinvastatina e infusão de CTM. Diferenças anatômicas entre os lados direito e esquerdo do pulmão, levaram a uma maior deposição de células no lado direito, como evidenciado pelos resultados obtidos nos ensaios de bioluminescência. Pode-se, portanto, inferir que a recuperação morfológica no lado direito do pulmão de animais com DPOC/enfisema poderia ser decorrente de um efeito regenerativo parácrino das CTM associadas à sinvastatina. / Chronic Obstructive Pulmonary Disease - COPD is characterized by the persistent limitation of gas exchange, is usually progressive, and associated to a chronic augmented inflammatory response of the airways to particles and noxious gases. Despite preventable e treatable, an effective, curative therapeutic approach is yet to be achieved. In this context, cell therapy presents itself as a promising therapeutic approach for COPD and other pulmonary inflammatory and degenerative diseases. However, many aspects of cell therapy with stem cells remain unclear. One of the major challenges to the success of cell therapy are the low survival rates of transplanted cells. The Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI-1) is a potential mediator of the survival of mesenchymal stromal cells (MSC) after transplantation, since PAI-1 neutralizing antibodies have been shown to increase the survival rate of MSC in the target tissue of cell therapy. Thus, the decreased levels of PAI-1 has an interesting therapeutic potential to modulate key processes involved in creating an inhospitable environment, during the process of injury, to the homing of transplanted cells. Decreased levels of PAI-1 are promoted by simvastatin, a drug of the statins family. Thus, the goal of this work was to evaluate the effect of simvastatin in vivo on the expression of PAI-1, as well as its influence on the survival rate of infused cells in mice model of cell therapy for pulmonary COPD/emphysema. FVB mice were submitted pulmonary emphysema induction by means of intranasal instillation of elastase and than treated with adipose-derived mesenchymal stem cells and simvastatin. The results regarding morphological and functional aspects, when considering the analisys of both lungs, presented no statistically significant difference among the groups submitted to intranasal instillation of elastase and cell therapy with MSC, treated or not with simvastatin. However, when the lungs where analyzed individually, it was found that there was no statistically significant difference between the control group and the results regarding the right lung of animals treated with elastase and that received simvastatin and MSC infusion. Anatomical differences between the right and left sides of the lung lead to a higher deposition of cells in the right side, as observed in the bioluminescence assays. Thus, it is possible to infer that the morphological recovery in the right side of the lung of animals with DPOC/emphysema could be due to a regenerative paracrine effect of mesenchymal stem cells associated with simvastatin.