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Avaliação da eficácia da Vacina BCG na mortalidade por causas específicas.Andrade, Kleydson Bonfim 26 May 2015 (has links)
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Dissertacao. Kleydson Bonfim Andrade.2015.pdf: 654797 bytes, checksum: 1ff7694eaf3e0bcfb880b2d0518bf2c9 (MD5) / Vários estudos demonstram efeito protetor da vacina BCG, 1 dose ao nascer, contra tuberculose, variando de 70-86%. Outros estudos demonstram efeitos inespecíficos da BCG, 1ª dose, na redução em 17% da mortalidade geral, com efeitos maiores no período neonatal. Objetivou-se com esse estudo, verificar o efeito da vacina BCG, 1ª dose neonatal e na infância, na mortalidade geral, nas cidades de Salvador-BA e Manaus-AM. Trata-se de um ensaio comunitário controlado e randomizado, sem placebo, acontecido entre 1996-1998 (REVAC-BCG). Escolas públicas de Salvador e Manaus com crianças de 7-14anos foram randomizadas para vacinação com BCG (2ª dose). Os registros compuseram um banco de dados com 354.406 crianças. Utilizando o software RecLink III, foi realizado o linkage probabilístico com todos os óbitos registrados no Sistema de Informação em Mortalidade, ocorridos nas duas capitais entre os anos de 1997 e 2014. Para a comparação entre os grupos (intervenção e controle), foi feira a estatística descritiva, incluindo o cálculo da Taxa de Mortalidade e a Razão da Taxa de Mortalidade. Para a estimativa da Efetividade Vacinal, foi utilizada a Regressão Logística com GEE, e para Análise de Sobrevida, foram calculadas as estimações não-paramétricas de Kaplan-Meier. Foi observada uma distribuição semelhante das variáveis (sexo, faixa etária e status socioeconômico) entre os grupos intervenção e controle, tanto no grupo de análise da primeira dose neonatal quanto na primeira dose na infância. Os achados apontam para um efeito protetor da vacinação por BCG neonatal na mortalidade geral de 25%, e da vacinação por 1ª dose de BCG na infância de 10%. Este é o primeiro estudo no Brasil que buscou avaliar o efeito de vacinas na mortalidade e, corroborando com outros estudos, os resultados demonstram que a vacina BCG neonatal é uma medida eficaz na redução de óbitos.
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Produção da enzima ciclodextrina glicosiltransferase por Bacillus sp. imobilizados em quitosana / Production of cgtase by Bacillus sp. immobilized on chitosanEs, Ismail 20 February 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Production of a starch-degrading cyclodextrin glicosiltransferase (CGTase, EC 2.4.1.19)
on solid-state culture and batch fermentation was evaluated by free and immobilized
alkalophilic Bacillus sp on polymeric chitosan matrix. Immobilization procedure was
performed by mixing bacterial cells with low molecular weight chitosan dissolved in HCl.
Structure of free bacterial cell, polymeric chitosan matrix and immobilized cells were
visualized by scanning electron microscopy (SEM). The images obtained from SEM
showed that the procedure used for immobilization was easy, cheap and effective. Three
different starch sources as substrate were used: potato, corn and cassava. Qualitative
analysis of CGTase production was determined by colorless area formation on solid
culture containing phenolphthalein. Enzymatic indices, which indicated the production of
CGTase on solid culture, were calculated for both free and immobilized cells on different
starch sources. Enzyme activity of CGTase was determined before and after each
purification step: ammonium sulfate precipitation, starch adsorption and dialysis.
Biomass growth and substrate consumption were analyzed by Flow cytometry and
modified phenol-sulfuric acid assay, respectively. Free cells reached very high numbers
(2.5 × 107 ml-1) during batch culture, besides; immobilized cells maintained initial
inoculum concentration (2.5 × 105 ml-1) during enzyme production. The maximum
enzyme activity achieved by free cells was 21.25 U (35 h), 14.65 U (40 h) and 19.16 U
(33 h) on cassava, potato and cornstarch, respectively. During batch culture, immobilized
cells produced CGTase with the enzyme activity of 24.375 U (16 h) for cassava, 24.375
U (9 h) for potato starch and 21.25 U (8.5 h) for cornstarch in a shorter cultivation time.
Consequently, immobilization decreased the production time and increased enzyme
activity of CGTase. / A produção e atividade enzimática da “Ciclodextrina glicosiltransferase” (CGTase, EC
2.4.1.19) em cultura sólida e fermentação por batelada por bactérias alcalifílicas livres e
imobilizadas em matriz polimérica de quitosana foi avaliada. O procedimento de
imobilização foi realizado através da mistura das células bacterianas com quitosana de
baixa massa molecular dissolvida em HCl. A estrutura da célula bacteriana livre, a matriz
polimérica de quitosana e as células imobilizadas foram visualizadas por microscopia
eletrônica de varredura (MEV). As imagens obtidas por MEV mostraram que o
procedimento utilizado para a imobilização foi realizado com sucesso e pode ser
considerado como um procedimento simples, barato, rápido e eficaz. Foram utilizados
três diferentes fontes do amido como substrato: mandioca, batata e milho. A análise
qualitativa da produção da CGTase foi determinada pela formação de área amarela em
cultura sólida contendo fenolftaleína. Índices enzimáticos, que indicam a produção da
CGTase pelas colônias bacterianas em cultura sólida, foram calculados para ambas as
células livres e imobilizadas em diferentes fontes de amido. A atividade enzimática da
CGTase foi determinada antes e depois de cada passo de purificação: precipitação com
sulfato de amônio, adsorção no amido e diálise. O crescimento da biomassa e consumo
do substrato foram analisados por citometria de fluxo e ensaio modificado de fenol - ácido
sulfúrico, respectivamente. Células livres atingiram concentrações muito elevadas (2.5 ×
107 ml-1) durante a fermentação por batelada, porém as células imobilizadas continuaram
com a concentração do inóculo inicial (2.5 × 105 ml-1) durante a produção da enzima. A
atividade máxima da enzima obtida por células livres foi 21.25 U (35 h), 14.65 U (40 h)
e 19.16 U (33 h) utilizando amido de mandioca, batata e milho, respectivamente. Durante
a fermentação batelada, as células imobilizadas produziram a CGTase com a atividade
enzimática de 24.375 U (16 h) para a mandioca, 24.375 U (9 h) para fécula de batata e
21.25 U (8.5 h) para o amido de milho. Consequentemente, a imobilização diminuiu o
tempo de produção e aumentou a atividade da CGTase.
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Aquisição de bactéria gram-negativa multidroga resistente antes do transplante de fígado: o impacto no desfecho / Multidrug-resistant Gram-negative bacteria acquired before liver transplantation: the impact on the outcomeFreire, Maristela Pinheiro 25 September 2017 (has links)
As infecções em pacientes submetidos a transplantes de órgãos sólidos são importante causa de morbidade, além de serem definidoras da sobrevida desta população. A maioria das infecções que ocorre nos dois primeiros meses pós-transplante é relacionada à assistência à saúde (IRAS). O objetivo deste trabalho é identificar fatores de risco para IRAS por bactérias Gram-negativas (BGN) multi-droga resistentes (MDR) em pacientes submetidos a transplante de fígado (TF), nos dois primeiros meses após o transplante. Os objetivos secundários são: identificar fatores de risco para aquisição por MDR GNB em pacientes submetidos a TF, e determinar o impacto das IRAS por MDR GNB na sobrevida desses pacientes. Foram avaliados os TF consecutivos realizados em pacientes adultos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) no período de novembro de 2009 a novembro de 2011. A vigilância microbiológica foi realizada no dia do TF, e semanalmente até a alta hospitalar ou 60 dias após o transplante. Os sítios de coleta foram swab de orofaringe ou secreção traqueal, swab retal e swab axilar. Foram pesquisadas as seguintes bactérias: A. baumannii. P. aeruginosa e Enterobactérias resistentes a carbapenêmico, e K. pneumoniae e E. coli produtoras de betalactamase de espectro estendido (ESBL). Posteriormente, as amostras clínicas foram comparadas com as cepas da mesma espécie isoladas em culturas de vigilância por tipagem molecular. A análise de fatores de risco foi realizada por tipo de infecção e espécie de bactéria. Na análise estatística utilizou-se o teste qui-quadrado ou teste exato de Fisher para variáveis dicotômicas, e teste de Mann-Whitney para variáveis ordenáveis. A análise multivariada foi realizada por regressão logística. A análise de sobrevida foi realizada por regressão de Cox. O nível de significância de P considerado foi 0,05. Foram realizados, no período, 229 transplantes em 202 pacientes, e analisados 214 transplantes em 195 pacientes. O motivo de indicação do transplante mais frequente foi cirrose pelo vírus C, 33%. Foram identificados no período do estudo 110 pacientes (56,4%) com IRAS pós-TF, e um total de 201 infecções. Em 76,3% dos pacientes com IRAS (84/110) foi isolado MDR GNB em alguma amostra clínica relacionada à infecção. Os dois principais sítios de infecção foram infecção de sitio cirúrgico (32%) e infecção primária de corrente sanguínea (27%). Os dois microrganismos mais frequentemente isolados das IRAS foram A. baumannii e K. pneumoniae, e a proporção de infecções por cepas resistentes a carbapênemico foi, respectivamente, 100% e 48,9%. Os fatores de risco para infecções por MDR GNB pós-TF foram: retransplante precoce, volume de concentrados de hemácias transfundidos no intra-operatório da cirurgia do TF, colonização por MDR GNB no pré-transplante, tempo prolongado de internação em UTI e tempo prolongado de isquemia fria. Cento e cinco pacientes adquiriram algum MDR GNB nos 60 dias pós-TF, e o único fator de risco detectado para aquisição de MDR GMB no pós-TF foi tempo prolongado de sonda vesical de demora. A análise de clonalidade demonstrou que as cepas de MDR identificadas pré-TF eram fortemente relacionadas às cepas isoladas das infecções no pós-TF para A. baumannii e K. pneumoniae resistente a carbapenêmico. As infecções por MDR GNB apresentaram uma tendência a aumentar o risco de óbito nos 60 primeiros dias pós-TF, mas esta / Bacterial infections among patients submitted to liver transplantation (LT) are an important cause of morbidity and have huge impact on patients\' survival. The majority of infections in the first two months after LT are related to healthcare assistance. The aim of this study has been to identify risk factors for healthcare-associated infections (HAI) caused by multidrug-resistant Gram-negative bacteria (MDR GNB) in liver transplant patients in the first two months after LT. The secondary aims have been to identify risk factors for acquisition of MDR BGN among liver transplant patients and analyze the survival rate during the first two months after LT. We analyzed consecutive liver transplantations performed at Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) from November 2009 to November 2011. Surveillance cultures were performed on a weekly basis, starting on the day of the LT until the hospital discharge or 60 days after the LT. We collected surveillance cultures through swab from oropharynx (or tracheal secretion), axillary and inguinal rectal sites. We surveyed the following bacteria: carbapenem-resistant A. baumanni, P. aeruginosa, Enterobacteriaceae, ESBL-producing K. pneumoniae, and E. coli. The strains isolated from surveillance culture were compared to strains isolated from clinical cultures through PFGE. The risk factor analysis was performed for each type of MDR bacterium for risk of colonization and infection. The statistical analysis was carried out for dichotomous variables using chi-square tests or Fisher\'s exact tests when appropriate; Mann-Whitney tests were used for continuous variable and step-wise logistic regression was used for multivariate analysis. The survival rate analysis was performed using Cox regression. The significant value of P was 0.05. During the study period, 229 liver transplantations were performed in 202 patients and we analyzed 214 LT performed in 195 patients. The main baseline disease that warranted LT was virus C cirrhosis, 33%. 110 (56.4%) patients developed healthcare-associated infections after the LT and a total of 201 infections were identified; 84 (76.3%) patients had MDR GNB isolated from clinical cultures related to HAI. Surgical wounds (31%) and primary bloodstream (27%) were the most prevalent infection sites. The risk factors for HAI by MDR GNB after the LT were: re-transplantation, volume of blood units transfused during the LT surgery, colonization by MDR GNB before the LT, prolonged time of ICU stay, and prolonged time of cold ischemia. 105 patients acquired MDR GNB during the first 60 days after the LT; the only risk factor identified was the prolonged use of urinary drain. The clonal analysis showed that strains isolated in the period before the LT were closely related to strains isolated from clinical culture after the LT for carbapenem-resistant A. baumannii e K. pneumoniae. The infections by MDR GNB have been shown to increase the risk of death in the first 60 days after LT
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Avalia??o do efeito da vacina??o BCG na rea??o do Teste Tubercul?nico (TT) nos dois primeiros anos de vida / Evaluation of the effect of BCG neonatal vaccination on the reaction of the tuberculin test in the first two years of lifeKurtz, Tatiana 31 August 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-08-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction and Objectives: Tuberculosis (TB) is a complex infectious disease that can occur in any age group. When the host comes in contact with Mycobacterium tuberculosis (MTB) the immune response of the organism may be sufficient to prevent the disease, resulting in total destruction of the bacteria or establishment of latency, termed latent tuberculosis (TBL). Due to the difficulty in demonstrating MTB in the clinical specimens of the child, the diagnosis of TB disease is based on the clinical, epidemiological and radiological bases associated with the interpretation of the cutaneous tuberculin (TT) test. In this context, Mycobacterium tuberculosis infection, mostly latent, represents an important reservoir for reactivation of the disease. This contingent is sufficient to continue generating new cases for many decades, even if the chain of transmission is interrupted. Thus, the precise definition of the criteria for diagnosis of latent TB has great relevance and TT is an important tool. The objective of the study is to evaluate the effect of the neonatal BCG vaccine on the tuberculin skin test cutaneous reaction and to define cutoff points to detect tuberculosis in the first two years of life.
Methods: A cross-sectional study was carried out in children from the municipality of Santa Cruz do Sul, who met the inclusion criteria of the study: infants up to 2 years of age who received BCG vaccine during the neonatal period. Exclusion criteria were birth weight <2,000 grams, being the mother of HIV positive mother, or mother with persistence of tuberculosis in the perinatal period, or cases where there was evidence of primary immunodeficiency, absence of BCG vaccine scar after 6 months of life, in addition to TB research and TB contact. The children were identified and included through the authorization of the person responsible, explaining the project and accepting the consent term. The project was approved by the Research Ethics Committee of the Santa Cruz Hospital, where patient data were collected and the University of Santa Cruz do Sul (UNISC). The variable under study was the cutaneous induration reaction of the tuberculin test, in the first two years post-vaccination, using different cutoff points. A descriptive analysis of the variables was performed. Numerical variables were represented by mean and standard deviation and categorical variables by means of absolute number and percentage. To describe the data, we used means and standard deviation, or median and interquartile range for the quantitative variables; percentage for qualitative variables. For analysis of the Tuberculin Test, the sample was submitted to the analysis of variance (ANOVA), with significance level of p?0.05. The data analyzed in the SPSS Program 17.0.
Results: Potentially eligible participants totaled 808, of which 90 were selected from the inclusion / exclusion criteria. Data collected included demographic characteristics, nutritional indexes, vaccination status and previous exposure to TB. TTs were administered and induration measured after 48-72 hours. The selected ones were of both sexes, with ages varying between 3 and 24 months. Of these, eleven were excluded because they did not attend the reading of the tuberculin test (TT), resulting in a sample of 79 patients. The median age was 9.5 months for boys and 11 months for girls. It was divided into 3 groups according to the age range: between 3-9 months (group 1), 10-18 months (group 2) and 19-24 months of age (group 3). We found that, when comparing the 3 groups, we showed a decrease in the mean response to tuberculin as the age group progresses, presenting statistical significance (p = 0.041). Considering the probable absence of Mycobacterium tuberculosis infection in the sample of patients included in the study, we observed that the tuberculin test with the highest reaction occurs in group 1. From the age of 10 months, no patient shows a reaction to the tuberculin test above 5 mm. The finding shows the decline in the tuberculin reaction curve in the first year of life. A complementary analysis was performed excluding patients who did not present an induration reaction (TT = 0 mm), and 28 patients were excluded from the interpretation. The 51 patients with Test Tuberculin reactor were divided into the same 3 groups according to age group. Between 3-9 months (group 1), 10-18 months (group 2) and 19-24 months of age (group 3), we found that when comparing the 3 groups, again we showed a decrease in the reaction to tuberculin according to age progresses, presenting significance (p = 0.031). We found that there were no adverse effects, described in the literature, in patients who underwent the Tuberculin Test.
Conclusions: Based on the data from the study, we demonstrated that the induration reaction occurs in the tuberculin test in the first 12 months of age in previously healthy and BCG-vaccinated patients in the neonatal period. Therefore our results suggest that the cutoff point could be modified from 10mm to 5mm of induration after 12 months of age, improving the specificity of the TT diagnostic test to identify cases of TB infection. This reevaluation of the lowest cutoff point in the first two years of life may prevent inappropriate management in patients with tuberculosis. / Introdu??o e Objetivos: A tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa complexa, podendo ocorrer em qualquer faixa et?ria. Quando o hospedeiro entra em contato com o Mycobacterium tuberculosis (MTB) a resposta imunit?ria do organismo pode ser suficiente para evitar a doen?a, ocorrendo destrui??o total das bact?rias ou estabelecimento de um estado de lat?ncia, denominado de tuberculose latente (TBL). Devido ? dificuldade em demonstrar MTB nos esp?cimes cl?nicos da crian?a, o diagn?stico da TB doen?a ? fundamentado em bases cl?nicas, epidemiol?gicas e radiol?gicas associados ? interpreta??o do teste tubercul?nico (TT) cut?neo. Neste contexto, verifica-se que a infec??o pelo Mycobacterium tuberculosis, na sua maioria forma latente, representa um importante reservat?rio de reativa??o da doen?a. Este contingente ? suficiente para continuar gerando novos casos por muitas d?cadas, mesmo que a cadeia de transmiss?o seja interrompida. Dessa forma, a defini??o precisa dos crit?rios para diagn?stico de TB latente tem grande relev?ncia e o TT ? uma importante ferramenta. O objetivo do estudo ? avaliar o efeito da vacina BCG neonatal na rea??o de endura??o cut?nea do Teste Tubercul?nico e definir pontos de corte para detectar tuberculose nos dois primeiros anos de vida.
M?todos: Estudo transversal, em crian?as do munic?pio de Santa Cruz do Sul, que se adequaram aos crit?rios de inclus?o do estudo: lactentes at? 2 anos de idade que receberam vacina BCG durante o per?odo neonatal. Crit?rios de exclus?o foram: peso ao nascimento <2,000 gramas, ser filho de m?e HIV positiva, ou m?e com vig?ncia de tuberculose no per?odo perinatal, ou ainda os casos em que houve evid?ncia de imunodefici?ncia prim?ria, aus?ncia de cicatriz vacinal de BCG ap?s 6 meses de vida, al?m de investiga??o de TB e contato de TB. As crian?as foram identificadas e inclu?das atrav?s de autoriza??o do respons?vel, mediante explica??o do projeto e aceita??o do termo de consentimento. O projeto foi aprovado pela Comiss?o de ?tica em Pesquisa do Hospital Santa Cruz, onde foi realizada a coleta de dados dos pacientes e Universidade de Santa Cruz do Sul (UNISC). A vari?vel em estudo foi a rea??o de endura??o cut?nea do teste tubercul?nico, nos dois primeiros anos p?s-vacina??o, utilizando diferentes pontos de corte. Realizada uma an?lise descritiva das vari?veis. As vari?veis num?ricas foram representadas por meio de m?dia e desvio padr?o e as categ?ricas por meio de n?mero absoluto e porcentagem. Para descri??o dos dados, foram utilizados m?dias e desvio padr?o, ou mediana e intervalo interquartil para as vari?veis quantitativas; porcentagem para as vari?veis qualitativas. Para an?lise do Teste Tubercul?nico a amostra foi submetida ao teste de an?lise de vari?ncia (ANOVA), com n?vel de signific?ncia de p?0,05. Os dados analisados no Programa SPSS 17.0.
Resultados: Os participantes potencialmente eleg?veis totalizaram 808, desses 90 foram selecionados a partir dos crit?rios de inclus?o/exclus?o. Dados coletados inclu?ram caracter?sticas demogr?ficas, ?ndices nutricionais, estado de vacina??o e exposi??o pr?via ? TB. TTs foram administrados e a endura??o medida ap?s 48-72 horas. Os selecionados foram de ambos os sexos, com idade variando entre 3 e 24 meses. Destes, onze foram exclu?das, pois n?o compareceram a leitura do teste tubercul?nico (TT), resultando em amostra final de 79 pacientes. A mediana das idades foi de 9,5 meses, entre os meninos, e 11 meses entre as meninas. Realizada divis?o em 3 grupos conforme faixa et?ria: entre 3-9 meses (grupo 1), 10-18 meses (grupo 2) e 19-24 meses de idade (grupo 3). Constatamos que, quando comparados os 3 grupos, evidenciamos queda na m?dia de rea??o ? tuberculina conforme a faixa et?ria progride, apresentando signific?ncia estat?stica (p= 0.041). Considerando a prov?vel aus?ncia de infec??o por Mycobacterium tuberculosis na amostra de pacientes inclu?dos no estudo, observamos que o teste tubercul?nico com rea??o mais elevada ocorre no grupo 1. A partir dos 10 meses de idade nenhum paciente demonstra rea??o ao teste tubercul?nico acima de 5 mm. O achado evidencia o decl?nio na curva de rea??o ? tuberculina j? no primeiro ano de vida. Realizada an?lise complementar excluindo os pacientes que n?o apresentaram rea??o de endura??o (TT= 0 mm), sendo exclu?dos da interpreta??o 28 pacientes. Os 51 pacientes com Teste Tubercul?nico reator foram divididos nos mesmos 3 grupos conforme faixa et?ria. Entre 3-9 meses (grupo 1), 10-18 meses (grupo 2) e 19-24 meses de idade (grupo 3), onde constatamos que quando comparados os 3 grupos, novamente evidenciamos queda na rea??o ? tuberculina conforme a faixa et?ria progride, apresentando signific?ncia (p= 0.031). Constatamos que n?o ocorreram efeitos adversos, descritos em literatura, nos pacientes que se submeteram a aplica??o do Teste Tubercul?nico.
Conclus?es: A partir dos dados do estudo demonstramos que ocorre queda da rea??o de endura??o no teste tubercul?nico nos primeiros 12 meses de idade em pacientes previamente h?gidos e vacinados com BCG no per?odo neonatal. Portanto nossos resultados sugerem que o ponto de corte poderia ser modificado de 10mm para 5mm de endura??o ap?s os 12 meses de idade, melhorando a especificidade do teste diagn?stico TT para identifica??o dos casos de TB infec??o. Esta reavalia??o do ponto de corte menor nos dois primeiros anos de vida pode evitar manejos inadequados nos pacientes com contato com tuberculose.
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Análise imunogênica da proteína recombinante aspartil aminopeptidase (Rv0800) de Mycobacterium tuberculosis / Immunogenic analysis of the recombinant protein aspartil aminopeptidase (Rv0800) from Mycobacterium tuberculosisSilva, Duanne Alves da 05 December 2014 (has links)
Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-03-14T14:44:11Z
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Previous issue date: 2014-12-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / sem resumo em língua estrangeira. / Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade da enzima Rv0800 (DAP) do Mycobacterium tuberculosis como componente de vacina de subunidade proteica em dois sistemas de adjuvantes derivados de plantas. Para tanto, foi feita a produção heteróloga da enzima Rv0800 em E. coli e sua expressão pelo Mtb foi confirmada. A proteína recombinante obtida (rDAP) foi avaliada como vacina primeiramente associada ao Cn-AMP1, um peptídeo antimicrobiano proveniente da água de coco, e em outro experimento, associada ao ADVAXTM, um adjuvante polissacarídico derivado da delta inulina e foram usadas para vacinar camundongos BALB/c. As vacinas DAPC e DAPVAX induziram anticorpos IgG1 e IgG2a específicos. A vacina DAPC gerou resposta imune celular de linfócitos TCD4+ e TCD8+ produtores de IFN-γ+ antes e depois do desafio com Mtb, e quando combinada com a vacina BCG melhorou a resposta induzida por esta. Contudo, apesar de as vacinas terem induzido resposta imune específica no modelo estudado, após a infecção foram geradas extensas lesões pulmonares e não houve diminuição da carga bacilar nos pulmões. Neste projeto foram desenvolvidas novas vacinas de subunidade proteica compostas por uma enzima do Mycobacterium tuberculosis associada a adjuvantes derivados de plantas, nunca testados no modelo murino de infecção e que se mostraram imunogênicas, mas não conferiram proteção.
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Aquisição de bactéria gram-negativa multidroga resistente antes do transplante de fígado: o impacto no desfecho / Multidrug-resistant Gram-negative bacteria acquired before liver transplantation: the impact on the outcomeMaristela Pinheiro Freire 25 September 2017 (has links)
As infecções em pacientes submetidos a transplantes de órgãos sólidos são importante causa de morbidade, além de serem definidoras da sobrevida desta população. A maioria das infecções que ocorre nos dois primeiros meses pós-transplante é relacionada à assistência à saúde (IRAS). O objetivo deste trabalho é identificar fatores de risco para IRAS por bactérias Gram-negativas (BGN) multi-droga resistentes (MDR) em pacientes submetidos a transplante de fígado (TF), nos dois primeiros meses após o transplante. Os objetivos secundários são: identificar fatores de risco para aquisição por MDR GNB em pacientes submetidos a TF, e determinar o impacto das IRAS por MDR GNB na sobrevida desses pacientes. Foram avaliados os TF consecutivos realizados em pacientes adultos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) no período de novembro de 2009 a novembro de 2011. A vigilância microbiológica foi realizada no dia do TF, e semanalmente até a alta hospitalar ou 60 dias após o transplante. Os sítios de coleta foram swab de orofaringe ou secreção traqueal, swab retal e swab axilar. Foram pesquisadas as seguintes bactérias: A. baumannii. P. aeruginosa e Enterobactérias resistentes a carbapenêmico, e K. pneumoniae e E. coli produtoras de betalactamase de espectro estendido (ESBL). Posteriormente, as amostras clínicas foram comparadas com as cepas da mesma espécie isoladas em culturas de vigilância por tipagem molecular. A análise de fatores de risco foi realizada por tipo de infecção e espécie de bactéria. Na análise estatística utilizou-se o teste qui-quadrado ou teste exato de Fisher para variáveis dicotômicas, e teste de Mann-Whitney para variáveis ordenáveis. A análise multivariada foi realizada por regressão logística. A análise de sobrevida foi realizada por regressão de Cox. O nível de significância de P considerado foi 0,05. Foram realizados, no período, 229 transplantes em 202 pacientes, e analisados 214 transplantes em 195 pacientes. O motivo de indicação do transplante mais frequente foi cirrose pelo vírus C, 33%. Foram identificados no período do estudo 110 pacientes (56,4%) com IRAS pós-TF, e um total de 201 infecções. Em 76,3% dos pacientes com IRAS (84/110) foi isolado MDR GNB em alguma amostra clínica relacionada à infecção. Os dois principais sítios de infecção foram infecção de sitio cirúrgico (32%) e infecção primária de corrente sanguínea (27%). Os dois microrganismos mais frequentemente isolados das IRAS foram A. baumannii e K. pneumoniae, e a proporção de infecções por cepas resistentes a carbapênemico foi, respectivamente, 100% e 48,9%. Os fatores de risco para infecções por MDR GNB pós-TF foram: retransplante precoce, volume de concentrados de hemácias transfundidos no intra-operatório da cirurgia do TF, colonização por MDR GNB no pré-transplante, tempo prolongado de internação em UTI e tempo prolongado de isquemia fria. Cento e cinco pacientes adquiriram algum MDR GNB nos 60 dias pós-TF, e o único fator de risco detectado para aquisição de MDR GMB no pós-TF foi tempo prolongado de sonda vesical de demora. A análise de clonalidade demonstrou que as cepas de MDR identificadas pré-TF eram fortemente relacionadas às cepas isoladas das infecções no pós-TF para A. baumannii e K. pneumoniae resistente a carbapenêmico. As infecções por MDR GNB apresentaram uma tendência a aumentar o risco de óbito nos 60 primeiros dias pós-TF, mas esta / Bacterial infections among patients submitted to liver transplantation (LT) are an important cause of morbidity and have huge impact on patients\' survival. The majority of infections in the first two months after LT are related to healthcare assistance. The aim of this study has been to identify risk factors for healthcare-associated infections (HAI) caused by multidrug-resistant Gram-negative bacteria (MDR GNB) in liver transplant patients in the first two months after LT. The secondary aims have been to identify risk factors for acquisition of MDR BGN among liver transplant patients and analyze the survival rate during the first two months after LT. We analyzed consecutive liver transplantations performed at Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) from November 2009 to November 2011. Surveillance cultures were performed on a weekly basis, starting on the day of the LT until the hospital discharge or 60 days after the LT. We collected surveillance cultures through swab from oropharynx (or tracheal secretion), axillary and inguinal rectal sites. We surveyed the following bacteria: carbapenem-resistant A. baumanni, P. aeruginosa, Enterobacteriaceae, ESBL-producing K. pneumoniae, and E. coli. The strains isolated from surveillance culture were compared to strains isolated from clinical cultures through PFGE. The risk factor analysis was performed for each type of MDR bacterium for risk of colonization and infection. The statistical analysis was carried out for dichotomous variables using chi-square tests or Fisher\'s exact tests when appropriate; Mann-Whitney tests were used for continuous variable and step-wise logistic regression was used for multivariate analysis. The survival rate analysis was performed using Cox regression. The significant value of P was 0.05. During the study period, 229 liver transplantations were performed in 202 patients and we analyzed 214 LT performed in 195 patients. The main baseline disease that warranted LT was virus C cirrhosis, 33%. 110 (56.4%) patients developed healthcare-associated infections after the LT and a total of 201 infections were identified; 84 (76.3%) patients had MDR GNB isolated from clinical cultures related to HAI. Surgical wounds (31%) and primary bloodstream (27%) were the most prevalent infection sites. The risk factors for HAI by MDR GNB after the LT were: re-transplantation, volume of blood units transfused during the LT surgery, colonization by MDR GNB before the LT, prolonged time of ICU stay, and prolonged time of cold ischemia. 105 patients acquired MDR GNB during the first 60 days after the LT; the only risk factor identified was the prolonged use of urinary drain. The clonal analysis showed that strains isolated in the period before the LT were closely related to strains isolated from clinical culture after the LT for carbapenem-resistant A. baumannii e K. pneumoniae. The infections by MDR GNB have been shown to increase the risk of death in the first 60 days after LT
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Avaliação dos processos de produção de protease fibrinolitica por fermentação submersa, semi-sólida e extrativa utilizando uma espécie de bacilo da AmazôniaCruz Filho, Raimundo Felipe da 18 April 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-04-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The fibrinolytic proteases degrade fibrin clots and therefore play an important role in the pharmaceutical industry as chemotherapeutic agents in the treatment of cardiovascular diseases. These biocatalysts were gradually discovered from plants, insects, earthworms, snakes and microorganisms (bacteria and fungi). Cardiovascular disease has been one of the leading causes of death in the world. A major cause of heart disease is the accumulation of fibrin in the arteries, causing thrombosis. According to the World Health Organization (WHO), about 17.5 million people will die of cardiovascular disease this year, and in 2030, this amount will be 23.6 million. Given the great potential of microbial biodiversity and the growing regional Amazon applicability of enzymes in the production of drugs, this research was conducted with the objective to (1) evaluate the growth of Bacillus stearothermophilus, (2) establish growth parameters associated with production of fibrinolytic proteases in submerged fermentation and (3) assess the effect of the extractive fermentation in the separation of these enzymes. In this study techniques of extractive fermentation and solid-state fermentation were employed. By submerged fermentation the following parameters were determined: Profile of growth of Bacillus stearothermophilus and the production of protease using 100 mL of the liquid medium [(g / L) 2 g KH2PO4, (NH4)2SO4 1 g, MgSO4 7H2O 0,1 g Na2HPO4 2H2O 0,9 g, yeast extract 1 g, distilled water 1000 ml] pH 7.2 supplemented with 0.5% gelatin in an 500 mL Erlenmeyer flask. The growth of the bacteria was determined at 610 nm, once every 2 hours for 36 hours. To determine the best conditions for the production of proteases were evaluated the influence of pH, stirring and temperature, age of inoculum and substrate concentration, the influence of natural sources of carbon (tapioca, arraruta and crueira), nitrogen sources and aeration. In the recovered extract was also performed a toxicity bioassay in Artemia salina and degradation tests in vitro of the blood clot by the fibrin plate method and the artificial clot degradation in tube. In addition, the partition coefficient (K), the purification factor (PF) and recovering the enzyme were determined. The solid-state
fermentation was performed using as substrate 10g of manteiguinha bean [Vigna unguiculata (L.) Walp] with 60% humidity, pH 5.0 in a 250 ml Erlenmeyer flask. In extractive fermentation the best conditions were pH 5.0, 180 rpm and 25 °C in systems using PEG 1000 (g/mol-1) to 20% (w/w) and phosphate salts 15% (w/w) with K 1.05; FP 1.00; 152.54 Y. 34 mm halo in fibrin plate and partial degradation of the clot in tube. In the solid-state fermentation, the production of protease was 8.87 (U/mL), 23 mm of translucent halo in fibrin plate with total degradation of the blood clot in 24 hours. In this study, protease produced from Bacillus stearothermophilus by extractive fermentation and semi-solid fermentation was evaluated, showing in the optimum cultivation conditions that this microorganism presents physiology for industrial application in the production of the fibrinolytic protease / As proteases fibrinolíticas degradam coágulos de fibrina, por isso têm um importante papel na indústria farmacêutica como agentes quimioterapêuticos no tratamento de doenças cardiovasculares. Estes biocatalisadores foram descobertos gradualmente a partir de plantas, insetos, anelídeos, serpentes e micro-organismos (bactérias e fungos). Doenças cardiovasculares tem sido a principal causa de morte no mundo. Uma das principais causas de doenças cardíacas é o acúmulo de fibrina nas artérias, acarretando trombose. De acordo com Organização Mundial da Saúde (OMS), cerca de 17,5 milhões de pessoas morrerão este ano de doenças cardiovasculares, e em 2030, esse montante será de 23,6 milhões. Tendo em vista o grande potencial da biodiversidade microbiana regional Amazônica e a crescente aplicabilidade de enzimas na produção de medicamentos, esta pesquisa foi realizada com o objetivo de (1) avaliar o crescimento de Bacillus stearothermophilus, (2) estabelecer os parâmetros de crescimento associado a produção de proteases fibrinolíticas por fermentação submersa e (3) verifica o efeito da fermentação extrativa na separação dessas enzimas. Neste estudo foram empregados técnicas de fermentação extrativa e fermentação semi-sólida. Por fermentação submersa foram determinados os seguintes parâmetros: Perfil do crescimento de Bacillus stearothermophilus e a produção de protease utilizando 100mL do meio líquido [(g/L) KH2PO4 2g; (NH4)2SO4 1g; MgSO4 7H2O 0,1 g; Na2HPO4 2H2O 0,9 g; Extrato de Levedura 1 g; água destilada 1000mL] pH 7,2 suplementado com gelatina 0,5%, em frasco de Erlenmeyer de 500mL. O crescimento da bactéria foi determinado a 610nm, de 2 em 2 horas, durante 36 horas. Na Determinação das melhores condições para produção de proteases foram avaliados a influência do pH; agitação, temperatura, a idade do inóculo, da concentração do substrato, a influência das fontes de naturais de carbono (tapiocas, araruta e crueira), fontes de nitrogênio e aeração. No extrato recuperado foi realizado também bioensaio de toxicidade em Artemia salina e testes de degradação in vitro do coágulo
sanguíneo pelos métodos da placa de fibrina e degradação do coagulo artificial em tubo. Foi determinado também o coeficiente de partição (K), o fator de purificação (FP) e a recuperação da enzima. A fermentação semi-sólida foi realizada utilizando como substrato 10g feijão manteiginha [Vigna unguiculata (L.) Walp], com 60% umidade, pH 5,0 em frasco Erlenmeyers de 250 mL. Na fermentação extrativa as melhores condições foram: pH 5,0; 180 rpm e 25 ºC, no sistemas utilizaram PEG 1000 (g/mol-1) a 20% (p/p) e sais fosfato a 15% (p/p) com K de 1,05; FP de 1,00; Y de 152,54. Halo de 34 mm na placa de fibrina e degradação parcial do coagulo em tubo. Na fermentação semi-sólida a produção de protease foi de 8,87 (U/mL), halo translucido de 23 mm em placa de fibrina com degradação total do coagulo de sangue em 24h. No presente estudo, protease de Bacillus stearothermophilus produzido em fermentação extrativa e fermentação semi-sólida foi avaliada, demonstrando nas condições ótimas de cultivo que este micro-organismo apresenta fisiologia para aplicações industriais na produção de protease fibrinolítica
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