Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T09:29:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T09:29:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T09:29:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-07T09:29:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Ivanete F. Souza.pdf: 1234783 bytes, checksum: 7fd3beb35c0496a66d5f3fd370ed127b (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / The Amazon Biodiversity symbolize Is a great potential to Discovery of new bacterial straight producer of active biomolecules with importance biotechnological as antimycotics that can be producing by endophytic microorganisms whose the object may be the yeast Candida albicans. This yeast is present in the human body as commensally, being able to cause serious infections, especially in individual immune depressed by diseases as cancer, AIDS and diabetes. It is resistant to antifungal available actually. This way, the object this study was find, from the Amazon bacteria, a bacteria able of produce actives molecules against the C. Albicans yeast, with a purpose to make the production of a active extract that make possible to fractionate and purify the active substance. In the search this anti-candida substance after a analysis of bacteria from different habitats as Waters of the Rio Negro and Solimões and strains derived from endophytic bacteria work collection of Applied Genetics Laboratory Health and Biotechnology of UEA, initially had their potential antimicrobial tested against different pathogenic organisms (Mycobacterium smegmatis, Pseudomlmonasae ruginosa and Staphylococcus aureaus) by cross streaking. The potentials microorganisms were selected and identified by morphology and for sequences of the 16S rDNA region. The growth was made in two different culture media to production of crud extract. The verification the anti-candida action was by diffusion tests in Agar and the quantification was through the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The extract produced was pré-purified by chromatography in open column and was applied thin layer chromatography (TLC) to check the fractions obtained. In total six endopthytic bacteria were selected because they had antimicrobial activity against at least one of pathogens tested, but only the bacteria 229 presented active against C. albicans being cultivate to produce of extract and possibility of identified of anti-candida substance. The culture media that showed better production of biomolecules was the ISP2, according to analysis of size of the halos from of the extract produced. The colony growth was identified as B. amyloliquefaciens and morphologically characterized as Gram positive bacilli The pré-purification resulted in two actives fractions as MIC of 0,25 and 0,5 ug.mL-1 . This way, conclude that in Amazon is possible the identify of bacteria with pharmacological activities from which can be produce antimycotic molecules. / A Biodiversidade Amazônica representa um grande potencial para descoberta de novas linhagens bacterianas produtoras de biomoléculas ativas de importância biotecnológica, como os antimicóticos que podem ser produzidos por microrganismos endofíticos cujo o alvo pode ser a levedura Candida albicans. Esta levedura está presente no corpo humano de forma comensal, sendo capaz de ocasionar graves infecções, principalmente em individuos com o sistema imunológico debilitado por doenças como câncer, AIDS e diabetes. Ela apresenta resistência aos antifúngicos disponíveis na atualidade. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi encontrar, a partir de bactérias da Amazônia, uma bactéria capaz de produzir moléculas ativa contra a levedura C. albicans afim de fazer a produção de um extrato ativo que fosse possível fracionar e purificar a substância ativa. Na busca desta substância anti-candida, após a análise de bactérias de diversos habitats como águas dos Rios Negro e Solimões e de cepas oriundas de coleção de trabalho de bactérias endofiticas do Laboratório de Genética Aplicada a Sáude e a Biotecnologia da UEA tiveram inicialmente seu potencial antimicrobiano testado frente a diferentes microrganismos patogênicos (Micobacterium smegmatis, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus) por estrias cruzadas. Os microrganismos com potencial foram selecionados e identificados por morfológia e pelas sequências da região 16S do rDNA. Fez-se o cultivo em dois meios de cultura diferentes para produção do extrato bruto. A verificação da ação anti-candida foi por testes de difusão em ágar e a quantificação desta através da Concentração Mínima Inibitória (CIM). O extrato produzido foi pré-purificado por cromatografia em coluna aberta e aplicou-se cromatografia em camada delgada (CCD) para acompanhamento das frações obtidas. Ao total seis bactérias endofíticas foram selecionadas por apresentarem atividade antimicrobiana contra ao menos um dos patógenos testados, porém, somente a bactéria 229 apresentou-se ativa contra C. albicans sendo cultivada para produção do extrato e tentativa de identificação da substância anti-candida. O meio de cultura que apresentou melhor produção da biomolécula foi o ISP2, conforme avaliação do tamanho dos halos a partir do extrato produzido. A colônia cultivada foi identificada como Bacillus amyloliquefaciens e caracterizada morfologicamente como bacilos Gram positivo. A pre-purificação resultou em duas frações ativas com CIM de 0,25 e 0,5 ug.mL-1. Conclui-se desta maneira que na Amazônia é possível a identificação de bactérias com atividades farmacológicas a partir das quais pode-se produzir moléculas antimicóticas

Submitted by Gábia Leite (gabya.leite@gmail.com) on 2016-06-24T13:30:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-07-05T15:20:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-07-05T15:26:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T15:26:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Natural environment has suffered high accumulations of pollutants which not only affect the soil, groundwater, rivers, lakes, water courses and air, but also human health due to forming of unhealthy conditions. Among the many effects when crude oil and derivates spill, the released xenobiotics to environment make worrisome because of its enviromental persistence and harmful effects to life. One solution to this problem is bioremediation, a tool that uses microorganisms for biochemical degradation of these compounds, transforming them into less or non-toxic substances. In this context, a previous study isolated the bacteria A. junii SB132 from macrophytes of the Negro River bank located by the port of Manaus and confirmed its identity by morphology and 16S gene sequencing. Biodegradation tests performed in laboratory have confirmed the ability of this bacteria to degrade oil and diesel fuel. Therefore, the aim of this research was to identify proteins of A. junii SB132 related in degradation pathways of the crude oil and diesel fuel. Ribosomal proteins, phenotypic, bacterial morphology, sensitivity profile to antibiotics and plasmid profile analysis were obtained. Proteins extracted from bacterial grown in crude oil, diesel fuel and yeast extract, 1.3% respectively, were used for 2-DE gels and similar and differential proteins were identified by using mass spectrometry and database at NCBI. The identity bacterial was confirmed and the plasmid profile was taken. These data revealed that the bacteria studied in this research is the really A. junii specie and that this had plasmids with size ranging 94.000pb to 5.000pb. Identified putative proteins were related to cellular processes, such as degradation of xenobiotic compounds, biosynthesis of molecules, DNA repair and protection, membrane transport proteins, cell signaling and transcription factors. / O ambiente natural vem sofrendo elevados acúmulos de poluentes os quais não somente prejudicam o solo, as águas subterrâneas, rios, lagos, vias pluviais e o ar, mas também a saúde humana em virtude da formação de condições insalubres. Dentre os muitos efeitos, os derramamentos de petróleo e derivados acumulam no ambiente compostos xenobióticos que se tornam preocupantes pela sua persistência e seus efeitos nocivos à vida. Uma das soluções para esse problema é a biorremediação, uma ferramenta que utiliza microrganismos para degradação bioquímica desses compostos, transformando-os em substâncias menos, ou não tóxicas. Neste contexto, um estudo prévio isolou a bactéria A. junii SB132 de macrófitas do Rio Negro no porto de Manaus e confirmou sua identificação por morfologia e sequenciamento do gene 16S. Testes de biodegradação realizados em laboratório confirmaram a capacidade de esta bactéria degradar petróleo e diesel. O objetivo desta pesquisa foi identificar proteínas de A. junii SB132 envolvidas com vias de degradação de petróleo e diesel. Foram feitas análises de identificação usando proteínas ribossomais e análises fenotípicas como morfologia da bacteriana, perfil de sensibilidade a antibióticos e perfil plasmidial. A partir das proteínas extraídas de bactérias cultivadas em petróleo bruto 1,3%, diesel 1,3% e extrato de levedura 1,3%, foram feitos géis 2-DE e proteínas de spots similares e diferenciais foram identificadas por análise em espectrometria de massa e banco de dados no NCBI. A confirmação da identidade bacteriana foi obtida, bem como o perfil plasmidial. Estes dados revelaram que de fato a bactéria estudada nesta pesquisa é a A. junii e que esta possui plasmídeos com tamanhos de variam de 94.000pb a 5.000pb. As proteínas putativas identificadas estavam relacionadas a processos celulares como degradação de compostos xenobióticos, biossíntese de moléculas, reparo e proteção do DNA, proteínas transportadoras de membrana, sinalização celular e fatores de transcrição.

Submitted by Magnaura Santos (magnaurasantos@gmail.com) on 2016-07-11T20:13:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Maria Auxiliadora Neves de Carvalho.pdf: 2771282 bytes, checksum: b94729c1bc5908063efa61e4d2764311 (MD5) FICHA_CATALOGRAFICA.pdf: 11860 bytes, checksum: b43efa958c4a1b9374909edabe8e3f2c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-07-13T12:35:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Maria Auxiliadora Neves de Carvalho.pdf: 2771282 bytes, checksum: b94729c1bc5908063efa61e4d2764311 (MD5) FICHA_CATALOGRAFICA.pdf: 11860 bytes, checksum: b43efa958c4a1b9374909edabe8e3f2c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-07-13T12:40:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Maria Auxiliadora Neves de Carvalho.pdf: 2771282 bytes, checksum: b94729c1bc5908063efa61e4d2764311 (MD5) FICHA_CATALOGRAFICA.pdf: 11860 bytes, checksum: b43efa958c4a1b9374909edabe8e3f2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T12:40:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Maria Auxiliadora Neves de Carvalho.pdf: 2771282 bytes, checksum: b94729c1bc5908063efa61e4d2764311 (MD5) FICHA_CATALOGRAFICA.pdf: 11860 bytes, checksum: b43efa958c4a1b9374909edabe8e3f2c (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Nosocomial infections caused by various microorganisms have been a huge challenge for the medicine. Among these microorganisms, Staphylococcus aureus leads all statistics of infections and also complications and morbimortality. This capability is attributed to the expression of a sophisticated defense system that provides resistance, among other factors, even to the most effective antibiotics. Manaus-AM does not differ from other large centers in Brazil and the world, because resistant strains have being identified frequently in this city. In a view of this worrying scenario for medicine, it is necessary to (1) delineate the pathogenesis of nosocomial infections and the epidemiology of S. aureus, (2) monitoring the development of resistance mechanisms, to support medical decisions in defining the treatment more adequate and (3) creating one protocol to the identification of isolates and resistance profile in a period up to 24 hours. This study describe the S. aureus resistance spectrum, obtained by two studies with an interval of five years, involving 113 patients and discuss the problem of the mechanism of the antibiotic resistance. We observed an increased frequency of infections caused by MRSA strains 47.3% to 96.6%. The increase of the MRSA strains is alarming. These results confirm the need for urgent control policy of the multi-resistant strains of S. aureus which will help prophylactically to hospital infections and also will subsidize the medical body in cases of antibiotic therapy. / As infecções hospitalares causadas por diversos micro-organismos tem sido um enorme desafio enfrentado pela medicina desde sempre. Dentre esses, Staphylococcus aureus lidera todas as estatísticas tanto de infecções quanto de complicações e morbimortalidade. Tal capacidade é atribuída à expressão de um sofisticado sistema de defesa que confere, entre outros fatores, resistência até mesmo aos antibióticos mais eficazes. Manaus-AM não difere dos outros grandes centros do Brasil e do mundo, porque tem sido cada vez mais frequente a identificação de cepas resistentes, isoladas em hospitais da capital amazonense. Tendo em vista esse quadro extremamente preocupante para os serviços de saúde, é necessário (1) delinear a etiopatogenia das infecções hospitalares e a epidemiologia do S. aureus, (2) acompanhar a evolução dos mecanismos de resistência, para subsidiar as decisões médicas na definição do tratamento mais adequado e (3) criar um protocolo de identificação dos isolados e perfil de resistência em um período de no máximo 24 horas. O objetivo desse trabalho é relatar os achados epidemiológicos e do espectro de resistência do S. aureus, obtido mediante 2 estudos transversais com intervalo de cinco anos, envolvendo 113 pacientes, todos com cultura positiva para S. aureus e discutir a problemática da identificação em nível de espécie, bem como do mecanismo de resistência aos antibióticos. Observou-se um aumento da frequência de infecções por cepas MRSA de 47,3% para 96,6%, um resultado alarmante. Em conjunto esses resultados confirmam a necessidade de medidas urgentes de controle das cepas multi resistentes de S. aureus o que contribuirá de forma profilática às infecções hospitalares e também subsidiará o médico nos casos submetidos à antibioticoterapia.

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Talyta Thereza Goncalves.pdf: 907908 bytes, checksum: e95af9fbf26b3c640f010f7f04eb4425 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Biological Nitrogen Fixation (BNF) is a process of high energy demand dependent on environmental factors such as oxygen and fixed nitrogen levels, which are detected by proteins that are part of signal transduction systems. The need to monitor the concentrations of fixed nitrogen and external oxygen and provide enough energy to sustain the BNF imposed regulatory principles that differ between diazotrophic organisms and depend on the physiology of the plant host. Although several studies have been conducted on the physiology and BNF of G. diazotrophicus, it has not been possible to make a broad physiological characterization for the plant-microbe association. G. diazotrophicus requires exopolysaccharides to form an endophytic interaction, nitrogen fixing, success with sugar cane and other grasses. In addition, during the initial stages of interaction, G. diazotrophicus is faced with an oxidative burst, caused by the plant, which should be overcome. In this study, levels of exopolysaccharides were positively correlated with survival in hydrogen peroxide (H 2 O 2 ). Damage caused by H were mitigated when the EPS was the co-cultured with cells deficient in EPS production. The purified EPS is able to reduce in vitro the levels of H 2 O 2 2 . This suggests a potential as an additional protective function against H 2 O 2 O 2 exopolysaccharide during the early interaction of bacteria with the plant / A fixação biológica de nitrogênio (FBN) é um processo de alta demanda energética dependente de fatores ambientais, tais como baixas tensões de oxigênio e nitrogênio fixado, que são detectados por proteínas que fazem parte de sistemas de transdução de sinal. A necessidade de responder as concentrações de nitrogênio fixado e oxigênio externo e de prover energia suficiente para sustentar a FBN, impõe diferentes mecanismos regulatórios aos organismos fixadores de nitrogênio que dependem da sua fisiologia e estilo de vida. Apesar de vários estudos já terem sido realizados sobre a fisiologia e FBN da bactéria G. diazotrophicus, ainda não foi possível fazer uma caracterização ampla de aspectos fisiológicos importantes para a associação com plantas. G. diazotrophicus requer exopolissacarídeos a fim de formar uma interação endofítica, fixadora de nitrogênio, de sucesso com cana-de-açúcar e outras poáceas. Além disso, durante os estágios iniciais de interação, G. diazotrophicus se depara com uma explosão oxidativa, provocada pela planta, a qual deve ser superada. Neste estudo, níveis de exopolissacarídeos foram correlacionados positivamente com a sobrevivência em peróxido de hidrogênio (H 2 O 2 ). Danos provocados por H 2 O foram mitigados, quando o EPS foi co-cultivado as com as células deficientes na produção de EPS. O EPS purificado é capaz de diminuir in vitro os níveis de H 2 O 2 2 . Isto sugere uma potencial protetor como função adicional do exopolissacarídeo contra H 2 O 2 durante o inicio da interação da bactéria com a planta.

O objetivo do presente estudo foi avaliar a ação do ácido indol-3-acético (AIA) combinado com a peroxidase de raiz forte (HRP), formando um sistema gerador de espécies reativas de oxigênio, sobre a viabilidade de Staphylococcus aureus. Para tal, avaliou-se a viabilidade do S. aureus através da contagem das unidades formadoras de colônias após crescimento em ágar manitol, potencial e integridade de membrana por citometria de fluxo e integridade do DNA através de eletroforese em gel de poliacrilamida. Para realização dos ensaios foram utilizadas cepas de S. aureus recuperadas de casos de mastites clínicas. As cepas foram cultivadas em meio BHI (brain-heart-infusion) a 37ºC \"overnight\". Nos ensaios, o microrganismo foi incubado na ausência (controle) e presença de AIA (1 mmol/L)/HRP (1 µmol/L) em diferentes tempos (0, 1,5, 3 e 6 horas) a 37ºC. Foram realizados também ensaios contendo o microrganismo incubado na presença de AIA ou de HRP. O sistema AIA/HRP inibiu em 96%, 98%, 99% a formação de colônias do microrganismo para os tempos de 1,5, 3 e 6 horas, respectivamente, em relação ao controle em cada tempo. Ocorreu uma redução na polarização da membrana do microrganismo em 38, 69 e 99% nos tempos 1,5, 3 e 6 horas, respectivamente e uma diminuição significativa do número de microrganismos com membrana integra de 17 e 22% quando estes foram incubados por 3 e 6 horas, respectivamente em relação ao controle nos respectivos tempos. A adição das enzimas antioxidantes catalase ou superóxido dismutase ao meio de incubação não alterou o efeito deletério promovido pelo sistema AIA/HRP avaliado pelas unidades formadoras de colônias, despolarização e integridade de membrana. O sistema AIA/HRP não induziu a fragmentação do DNA do S. aureus após 3 e 6 horas de incubação. No presente estudo, foi possível verificar que a oxidação do AIA pela HRP produz uma resposta citotóxica potente capaz de promover a inibição do crescimento de S. aureus em ágar manitol, provocar a despolarização e a perda da integridade da membrana do microrganismo, sugerindo a possibilidade da utilização do sistema AIA/HRP como uma possível terapia alternativa contra bactérias. / The objective of this study was to evaluate the action of the indole-3-acetic acid (IAA) in combination with horseradish peroxidase (HRP), forming a system generator of reactive oxygen species, on the viability of Staphylococcus aureus. To this end, was evaluated the of viability of S. aureus through the counting of the colony forming units after growth in mannitol agar, membrane potential and membrane integrity by flow cytometry and integrity of the DNA through the polyacrylamide gel electrophoresis. For the tests were used strains of S. aureus recovered from cases of clinical mastitis. The strains were grown in BHI medium (brain-heart-infusion) at 37°C overnight. In the tests, the microorganism was incubated in the absence (control) and presence of IAA (1 mmol/L)/HRP (1 µmol/L) at different times (0, 1.5, 3 and 6 hours) at 37°C. There were also conducted tests containing the microorganism incubated in the presence of IAA or HRP. The system IAA/HRP inhibited at 96%, 98%, 99% colony formation of microorganism to the times of 1.5, 3 and 6 hours, respectively, in relation to the control in every time. There was a decrease in polarization of the membrane of the microorganism on 38, 69 and 99% at times 1.5, 3 and 6 hours, respectively, and a significant decrease in the number of microorganisms with membrane integrity, 17 and 22% when they were incubated for 3 and 6 hours, respectively, in relation to the control in their time. The addition of the antioxidant enzymes catalase and superoxide dismutase in incubation medium did not alter the deleterious effect promoted by the system IAA/HRP assessed by colony forming units, membrane potential and membrane integrity. The system IAA/HRP did not induce the DNA fragmentation of S. aureus after 3 and 6 hours of incubation. In the present study, it was possible to verify that the oxidation of the IAA by HRP produces a potent cytotoxic response capable of promoting the inhibition of growth of S. aureus in mannitol agar, causing depolarization and the loss of integrity of the membrane of the microorganism, suggesting the possibility of using the system IAA/HRP as a possible alternative therapy against bacteria.

Wolbachia é um gênero de bactérias endossimbiontes que são verticalmente transmitidas pelas fêmeas aos seus descendentes, embora transmissão entre táxons distintos também ocorra com certa freqüência. Entre os efeitos que essa bactéria causa nos sistemas de reprodutivos de seus hospedeiros destaca-se a incompatibilidade citoplasmática (IC). Wolbachia foi descrita em numerosas espécies de artrópodos, especialmente os insetos. Dentre os insetos, essa bactéria foi descrita em diversos gêneros das moscas-das-frutas da familia Tephritidae, tendo sido demonstrada a IC em Rhagoletis cerasi e Ceratitis capitata. Recentemente, essas bactérias foram identificadas nas moscas-das-frutas do gênero Anastrepha. No presente trabalho, procurou-se demonstrar se a Wolbachia estaria relacionada a IC entre Anastrepha sp.1 aff. fraterculus e Anastrepha obliqua. A amplificação e o seqüenciamento do gene wsp revelou que as populações das duas espécies, mantidas no laboratório, estavam infectadas por Wolbachia. A presença da bactéria foi, também, demonstrada citologicamente em embriões corados pelo DAPI, tendo-se, além disso, observado que elas se distribuem nos embriões em gradiente decrescente do pólo posterior para o anterior. Para testar a hipótese de que a bactéria é a causa da IC, foram estabelecidas populações das duas espécies onde a Wolbachia (e possivelmente outras bactérias não identificadas) foram eliminadas por tratamento térmico (30oC) aplicado às pupas. As taxas de eclosão de larvas nas progênies de cruzamentos entre indivíduos curados, foram menores que a eclosão nos cruzamentos entre indivíduos infectados, mas o tratamento não alterou a proporção sexual dos adultos. Cruzamentos intra-específicos entre indivíduos infectados e curados, produziu assimetria nas progênies dos cruzamentos recíprocos, ou seja, quando os fêmeas eram curadas e os machos infectados a taxa de eclosão foi significativamente menor que nos cruzamentos recíprocos demonstrando, assim, a existência de IC unidirecional nos cruzamentos dessas duas espécies de Anastrepha. Nesses cruzamentos, a proporção sexual das progênies adultas não divergiu significativamente do 1:1 esperado. Nas progênies híbridas de cruzamentos interespecíficos entre indivíduos infectados, observou-se um decréscimo significativo nas taxas de eclosão e alteração na proporção sexual entre os adultos, de acordo com a regra de Haldane. Quando as fêmeas eram de A. sp.1, as progênies eram constituídas apenas por fêmeas e quando eram de A. obliqua, machos também foram produzidos, mas em frequências menores que o esperado. Resultados similares foram obtidos quando indivíduos curados foram cruzados entre si. Cruzamentos interespecíficos de indivíduos infectados cruzados com indivíduos curados, produziram progênies com taxas de eclosão muito reduzidas e menores quando as fêmeas eram de A. sp.1 (infectadas ou curadas), do que nos cruzamentos onde as fêmeas eram de A. obliqua (infectadas ou não). Nestes últimos, quando a fêmea era infectada e os machos curados, a taxa de eclosão foi maior que no cruzamento recíproco, demonstrando a presença de IC entre as duas espécies. A proporção sexual também foi alterada nesses cruzamentos, segundo a regra de Haldane. Os resultados do presente trabalho demonstram, pela primeira vez, que a incompatibilidade citoplasmática mediada pela Wolbachia, ocorre nas duas espécies de Anastrepha e sugerem que deve existir uma interação entre a bactéria e os genomas das espécies hospedeiras. / The endosymbiont bacteria Wolbachia are vertically transmitted by the females to its progenies, although horizontal transmission between distinct taxa is also known. One of the most relevant effects caused by these bacteria in the reproductive behavior of its hosts is the cytoplasmic incompatibility (CI). Wolbachia was described in several groups of arthropods, in the insects including several genera of the tefritid fruit flies. Wolbachia-induced CI was reported in Rhagoletis cerasi and Ceratitis capitata. Recently, occurrence of these bacteria was described in several species of genus Anastrepha. Search for possible Wolbachia-induced CI in crosses of Anastrepha obliqua and A. sp.1 aff. fraterculus was the aim of the present study. Amplification and sequencing of the gene wsp of Wolbachia revealed that laboratory colonies of both species were infected with this bacteria. Cytological analysis of embryos stained with DAPI showed a multitude of bacteria distributed in decreasing gradients from the posterior to the anterior pole of the embryos. The hypothesis that there is CI between the two host species was tested using infected and cured individuals. The bacteria were removed by treating the pupae at the temperature of 30o C. Rate of egg hatch in progenies recovered from crosses of cured flies were lower than egg hatch in crosses of the infected strains, but no sex-ratio deviation from the expected 1:1 was observed. Intra-specific crosses between infected and cured individuals resulted in asymmetries in the progenies of reciprocal crosses. The egg hatch in crosses of cured obliqua females to infected sp.1 males was lower than in the reciprocal crosses, clearly indicating the presence of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. In these crosses, sex-ratio among the adults does not deviate from the 1:1 ratio. In the hybrid progenies of inter-specific crosses, it was observed a decrease in the egg hatch rate, and deviation from 1:1 in the adult sex-ratio according to the Haldanes rule. From crosses of sp.1 females to obliqua males, only females were recovered while in crosses of obliqua females to sp.1 males, males were also produced but in lower frequencies than expected. Similar results were obtained when cured individuals were crossed. Very low egg hatch rates were observed in inter-specific crosses of infected to cured individuals, when sp.1 females (infected or cured) were used. In crosses of obliqua females (infected or cured), higher egg hatch rate was observed. Egg hatch was larger in crosses of infected female to cured males than in the reciprocal crosses, indicating a Wolbachia-induced IC between the two species of Anastrepha. The sex-ratios were also according to the Haldanes rule. This is the first report of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. The existence of a possible interaction between the bacteria and the genomes of the host species is also suggested.

O surgimento de resistência bacteriana aos tratamentos convencionais tem proporcionado o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento e/ou controle da cárie dentária. Nesse contexto, a utilização da terapia fotodinâmica (TFD) é sugerida como alternativa para a inativação de microrganismos patogênicos envolvidos na gênese da cárie. O objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica (TFD) sobre três culturas de S. mutans: uma cepa padrão de S. mutans (ATCC 25175) e dois isolados clínicos (43513 e 47513) oriundos da saliva de crianças. O corante (C) azul de orto-toluidina (TBO) foi utilizado associado à iluminação com LEDs (L) no comprimento de onda vermelho. Estas suspensões foram transferidas para placas de 96 orifícios, tratadas com quatro concentrações de TBO (0,25; 2,5; 25 e 250 µg/mL) e expostas a quatro dosimetrias (12; 24; 36 e 48 J/cm2) constituindo o grupo C+L+ (TFD). Suspensões adicionais foram tratadas somente com as quatro concentrações de TBO (C+L-) ou apenas com as quatro dosimetrias (C-L+). Amostras não submetidas ao tratamento com a fonte de luz nem ao corante, constituíram a condição C-L- (controle positivo). Alíquotas de 100 µL de cada orifício foram transferidas para tubos de ensaio para se verificar a presença ou ausência de crescimento microbiológico. Adicionalmente, alíquotas de 25 µL do grupo correspondente a TFD (C+L+) foram semeadas em placas de Petri, as quais foram incubadas a 370C por 48 horas para posterior visualização de halos de inibição e/ou crescimento microbiológico correspondente a efetividade ou ineficiência da TFD, respectivamente. Com o intuito de confirmar os achados, essas mesmas amostras foram submetidas à análise pela microscopia confocal a laser. Os resultados demonstraram que a TFD, em determinadas condições experimentais, foi efetiva no controle do crescimento microbiológico das espécies de S. mutans usadas neste estudo. A concentração mínima de TBO necessária para a inativação in vitro das três culturas de S. mutans foi de 2,5 µg/mL associada à dosimetria mínima de 24 J/cm2 da fonte de luz LED utilizada no estudo. / The increase of bacterias resistance to conventional treatment resulted in the development of new therapeutic modalities for dental caries treatment and/or prevention. In this field, the use of photodynamic therapy (PDT) is suggested as an alternative for inactivation of patogenic microrganisms involved in the etiology of tooth decay. The aim of this study was to evaluate in vitro the antimicrobian effect of the photodynamic therapy (PDT) on bacteria suspensions of S. mutans (ATCC 25175) and two suspensions (43513 and 47513) from infants saliva. Toluidine blue O (TBO) (D) and a red light-emmiting diodes (LEDs) (L) were used in association. Samples were inserted into 96 well-plate and treated with four TBO concentrations (0.25; 2.5; 25 e 250 µg/mL) and exposed to four dosimetries (12; 24; 36 e 48 J/cm2) defining the D+L+ group (PDT). Additional samples were treated only with TBO (D+L-) or only with red LEDs (D-L+). The treatment without dye and none red LED constituted the D-L- condition (positive control). Aliquots from D+L+ (TFD group) were inserted in Petri dishes, which were incubated at 370C for 48 hours. Posterior analysis of microbiologic growth, corresponding to PDT effectivity, was conducted. These samples were also submitted to laser confocal microscopy analysis for microbiologic data confirmation. The results showed PDT effectiveness for S. mutans inactivation in particular conditions. It was demonstrated that PDT was efficient to kill S. mutans species in the presence of the TBO at 2.5 µg/mL (minimum concentration) associated to 24 J/cm2 dosimetry.

O objetivo do presente estudo foi avaliar as condições periodontais, bem como a presença de patógenos periodontais por meio de análise microbiana, dos indivíduos residentes na comunidade negra de Santo Antônio do Guaporé-Rondônia pareados clinicamente com indivíduos de uma população negra urbana residente na região do Vale do Paraíba-São Paulo. Foram realizados levantamento de dados clínicos periodontais incluindo avaliação da profundidade de sondagem e nível de inserção clínica além da coleta e processamento microbiano das duas populações examinadas. Foram incluídos um total de 84 indivíduos (25.5218.00 anos de idade), de ambos os gêneros, sendo 42 da comunidade de Santo Antônio do Guaporé-RO e 42 da região do Vale do Paraíba. Os exames clínicos e coleta microbiana dos indivíduos foram realizados por dois examinadores treinados e calibrados (um de Santo Antonio do Guaporé outro do Vale do Paraíba). As amostras subgengivais foram processadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) para avaliar a presença de Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Campylobacter rectus, Tannerella forsythia e Prevotella intermedia. Os resultados clínicos mostraram que as populações foram compostas por indivíduos periodontalmente saudáveis (13/13); (15/15) diagnosticados com gengivite e finalmente (14/14) com periodontite de leve a moderada. Microbiologicamente os resultados mostraram que à exceção de C. rectus, os demais patógenos periodontais não apresentaram diferença estatisticamente significativa entre as duas populações estudadas. Verificou-se ainda que numericamente houve maior freqüência bacteriana nas condições periodontais mais severas. Assim, podemos concluir que as populações estudadas mostraram-se distribuídas entre indivíduos periodontalmente saudáveis, com gengivite ou periodontite e a freqüência bacteriana foi elevada e compatível com a gravidade. / The aim of this study was evaluate the periodontal conditions and detect periodontal pathogens of a black population situated at Santo Antônio do Guaporé-RO. The data collected were paired with an urban black population situated at Vale do Paraíba-SP region. The evaluation was based in periodontal clinical data, such as periodontal probing, attachment level, collect and microbiological process of both examinated population. The sample consisted of 84 individuals (25.5218.00 years old), of both gender, being 42 from Santo Antônio do Guaporé community and 42 from Vale do Paraíba community. Clinical examination and microbiological collect were carried out by two trained and calibrated examiners. The subgengival samples were processed by Polimerase Chain Reaction (PCR) to evaluate the presence of Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Campylobacter rectus, Tannerella forsythia e Prevotella intermedia. Clinical results presented populations constituted of periodontally healthy individuals (13/13); (15/15) with clinical diagnosis of gingivitis and finally (14/14) with mild to moderate periodontitis. Microbiological results showed no significant statistical difference among populations studied, except for C. rectus. It was observed that there was more bacterial frequency in worse periodontal conditions. Thus, we can conclude that populations studied was compound of periodontally healty individuals, individuals seized by gingivitis or periodontitis and bacterial frequence was elevated and agree with gravity of disease.

Os objetivos desta pesquisa foram verificar a proporção entre Streptococcus salivarius subsp. thermophilus e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus em iogurte natural, comercial e os efeitos do armazenamento (dentro do prazo de validade) sobre a proporção das bactérias lácticas componentes do produto, o pH, a acidez e a presença de microrganismos psicrófilos. As amostras de iogurte foram adquiridas por trinta dias consecutivos, num total de 30 amostras, de um mesmo lote, e submetidas às análises de pH, acidez titulável e contagem, em meio TPPY – Eriocromo-ágar, de Lactobacillus sp. e Streptococcus sp. (em UFC/mL). Os resultados mostraram que, durante o armazenamento, ocorreram variações nas características físico-químicas do iogurte, como pH que variou de 4,36, inicialmente, para 4,18, e acidez titulável que variou de 0,73% (em ácido láctico) para 1,17%. Streptococcus salivarius subsp. thermophilus e Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus foram encontrados na proporção de 2:1, respectivamente, diminuindo para 1:1 devido, provavelmente, às variações de pH e acidez titulável durante o armazenamento, por trinta dias, que corresponde ao prazo de validade. / The objectives of this research were to verify the proportion of Streptococcus salivarius subsp. thermophilus to Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus in commercial natural yogurt and evaluate the effect of the period of storage in some characteristics of the product, such as proportion of lactic bacteria, pH, acidity and presence of psychrophiles microorganisms. Yogurts from the same lot were analysed during a period of 30 consecutive days, within the best before date. One sample a day was analysed for pH, acidity and bacterial count (c.f.u./ml) of Streptococcus sp. and Lactobacillus sp. in broth TPPY-Eriochrome-agar. Results indicated that significant changes on physical-chemical characteristics of the yogurt occured during the storage of the product. The pH decreased from 4.36 to 4.18 and the acidity increased from 0.73% (lactic acid) to 1.17% during the period of storage. The proportion of Streptococcus salivarius subsp. thermophilus to Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus during the period of storage varied from 2:1 to 1:1, respectively, probably because of the variations of pH and acidity during these 30 days.

Pela utilização de métodos bioquímicos, biofísicos, de tipagem sorológica e de visualização das proteínas totais bacterianas, isolados de surubim Pseudoplatystoma corruscans, tilápia Oreochromis niloticus e pacu Piaractus mesopotamicus, foram caracterizados, identificados e sua virulência determinada. Dentre as linhagens de referência, o isolado de surubim caracterizou-se como sendo Plesiomonas shiguelloides e os demais isolados de tilápia e pacu foram identificados como Aeromonas hydrophila, todos pertencentes à família Vibrionaceae. Os isolados de tilápia e pacu caracterizaram-se como linhagens virulentas, resistentes aos antibióticos ampicilina, amoxicilina, lincomicina, novobiocina, oxacilina, penicilina, rifampicina e trimetoprim+sulfametoxazol, em ensaios de antibiograma realizados em meio YEA que evidenciaram que as linhagens isoladas de peixes são resistentes a oito das dezessete substâncias antimicrobianas testadas pelo método de difusão em disco. Essas características são compatíveis com as apresentadas pelo espécime tipo de A. hydrophila. Ambas as linhagens quando cultivadas em meio YEA compartilharam a mesma banda de aproximadamente 33,61kDa com o espécime tipo para A. hydrophila. Em meio enriquecido com glucose, a banda compartilhada entre elas teve peso molecular aproximado de 144,28kDa. Os testes de aglutinação sorológica evidenciaram nestas duas linhagens a presença de antígenos estáveis ao calor do tipo O. A técnica de dupla imunodifusão de Ouchterlony demonstrou que o antígeno preparado a partir do isolado de tilápia é a linhagem de A. hydrophila mais indicada para ser utilizada em estudos visando o desenvolvimento de uma vacina polivalente. / Bacteria isolated from surubim Pseudoplatystoma corruscans, tilapia Oreochromis niloticus e pacu Piaractus mesopotamicus, were characterized and identified by biochemical, biophysical, serology, and SDS-PAGE, and their virulence observed. The strain isolated from surubim was characterized as Plesiomonas shigelloides. The other strains isolated from tilapia and pacu were Aeromonas hydrophila. The isolated A. hydrophila strains presented virulence and resistance against the follow antibacterial substances: ampicillin, amoxicillin, lincomicin, novobiocin, oxacillin, penicillin, rifampin and trimetoprim+sulfametoxazole. Both strains when cultivated in YEA medium shared with the A. hydrophila type strain a similar protein band of 33,61kDa. In a medium supplemented with glucose, only one protein exhibiting relative molecular mass of 144.28 kDa, was shared by the type strains isolated from fish and the type strain. The serology tests revealed that all isolated strains presented heat-stable O-antigens. The Ouchterlony double-immunodiffusion showed that the antigen prepared from the tilapia strain possessed surface antigens similar to A. hydrophila type strain and the strains isolated from pacu. This suggested the possibility of development and usage of a common or polyvalent vaccine for A. hydrophila among tilapia and pacu or other freshwater fish species.