Orientador: Fumio Yokoya / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-22T20:33:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conti_MariaJosiane_M.pdf: 10300128 bytes, checksum: c571b2db431105550b581c8203ff0630 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O Alicyclobacillus acidoterrestris, é uma bactéria acidotermofílica, não patogênica, de origem ambiental. Este organismo é um potencial agente deteriorante em polpas e sucos de frutas ácidos. Devido à presença de endosporos de elevada resistência térmica, torna-se difícil sua inativação pelos tratamentos térmicos convencionais de pasteutização. Esta pesquisa visou extrair e processar termicamente o suco de seis tipos de frutas tropicais, de caráter ácido (abacaxi, acerola, caju, goiaba, manga e maracujá), e avaliar se estes apresentam condições para que o A. acidoterrestris se desenvolva em sua temperatura ótima (45°C) e também em temperatura de abuso de processamento (35°C), temperatura que favorece o crescimento de microrganismos mesófilos. Além disso, foi analisada a concentração mínima inicial, do microrganismo em estudo, capaz de sobreviver e se desenvolver no suco de manga, aquele que apresentou melhores condições de desenvolvimento na primeira fase do estudo. Neste estudo foi também incluída a análise qualitativa de guaiacol como indicador de deterioração. Foi preparada uma suspensão com a mistura de esporos de quatro cepas de A. acidoterrestris em mesma concentração, padronizada e inoculada nos sucos, previamente extraídos e tratados termicamente, apresentando carga inicial no suco de 102 UFC/mL. O desenvolvimento do microrganismo foi acompanhado através de plaqueamentos em meio de cultura próprio, por até 30 dias, ou até que atingissem uma contagem constante. Ao final, foram avaliados o desenvolvimento máximo da bactéria, em cada suco, na respectiva condição de cultivo, e o período que levou para atingir estes determinados valores. Apenas no suco de caju o pool de bactérias não apresentou desenvolvimento, no prazo máximo estipulado do ensaio (30 dias). O microrganismo apresentou desenvolvimento em todos os demais sucos, alcançando índices de produção de guaiacol e outros subprodutos / Abstract: Alicyclobacillus acidoterrestris is an acidophilic bacterium, nonpathogenic, of environmental origin. This organism is a potential spoiler acid frutits, pulps and juices. Due to the presence of endospores of high heat resistance, it becomes difficult to inactivate it by pasteurization conventional thermal treatment. This research aimed to extract and process thermally the juice of six kinds of tropical fruit, acid character (pineapple, acerola, cashew, guava, mango and passion fruit) and to evaluate if these have conditions for Alicyclobacillus acidoterrestris to develop in optimum temperature (45°C) and also in processing abuse temperature (35°C). Besides, it was analyzed the minimum initial concentration of the microorganism under study, which is able to survive and develop in the mango juice, which presented better conditions of development, according to the first phase of the study. A suspension was prepared with the spores mixture of four strains of A. acidoterrestris in the same concentration, because in preliminary studies it was possible to verify that some strains did not develop in all types of juice. The suspension was standardized and inoculated into the previously extracted and heart treated juices, showing initial concentration of 102 CFU/mL in the juice. The development of the microorganism was accompanied through plating in specific culture medium, for around 30 days or until it reached a constant counting. In the end, bacterium maximum growth was evaluated in each juice, in its respective growing condition and the time it took to achieve these values. The pool of bacteria didn't grow only in the cashew juice. All other juices showed development of the microorganism, reaching production rates of guaiacol and other byproducts, in accordaner with to previous studies / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Introdução: Enterococcus resistente à vancomicina (VRE do inglês Vancomycin Resistant Enterococcus) é uma importante causa de infecção relacionada a assistência à saúde com alta morbidade e mortalidade principalmente nos pacientes imunocomprometidos sendo a segunda causa mais comum de infecções hospitalares nessa população de pacientes em alguns centros. O uso prolongado da terapia antimicrobiana com vancomicina e outras drogas, são fatores de risco associados com a disseminação desse patógeno. Além disso, espécies de enterococos podem apresentar fatores de virulência tais como: substância de agregação (asa1), gelatinase (gelE), citolisina (cylA), proteína de superfície enterococo (esp) e hidrolase glicosil (hylefm). Entretanto, o papel da virulência na colonização e infecção por VRE é controverso. Objetivos: Avaliar o perfil clonal, virulência e resistência de 86 isolados de VRE (80 E. faecium e 06 E. faecalis) de infecção e colonização de 76 pacientes com doenças hematológicas e/ou submetidos a transplante de Medula Óssea (TMO) internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) no período de 10 anos (2005-2014). Material e Métodos: Foram realizadas concentração inibitória mínima para: vancomicina, teicoplanina, linezolida, gentamicina e estreptomicina em alta concentração (HLAR); Avaliação da clonalidade por eletroforese em campo pulsado (PFGE); Detecção dos mecanismos de resistência (vanA e vanB) e de virulência (esp, asa1, gelE, cylA e hylefm) pela técnica de PCR e sequenciamento total do genoma de dezoito isolados selecionados de acordo com a clonalidade. Foi criado um banco de dados no programa Epiinfo (CDC) com variáveis clinicas e demográficas dos pacientes. A proporção de isolados de colonização portadores de genes de virulência foi comparada com os isolados de infecção assim como a proporção de isolados de infecção portadores de genes de virulência que evoluíram para óbito. O valor de p < 0,005 foi considerado significativo. Resultados: Trinta e quatro pacientes eram colonizados e 42 infectados por VRE (28 eram infecção de corrente sanguínea), 48 pacientes eram transplantados dos quais 32 eram alogênicos. A mortalidade em 14 dias foi de 21.0% e durante a hospitalização de 53.9%. Todos os isolados foram resistentes à vancomicina e 87,3% à teicoplanina. Resistência a gentamicina e estreptomicina em alta concentração (HLAR) foi observada em 08 e 59 isolados respectivamente. Um isolado apresentou resistência a linezolida identificado pela primeira vez na unidade. O gene vanA foi detectado em todos os isolados. Quanto aos genes de virulência, 96,5% de isolados foram positivos para o gene esp e 69,8% para os genes gelE e asa1. Isolados de infecção de E. faecium carrearam mais genes de virulência: esp (100%), gelE (80,0%) e asa1 (75,5%) e o gene gelE foi significativamente mais frequente entre isolados de infecção que de colonização (p=0,008). Infecções causadas por isolados de E. faecium positivos para o gene asa1 foram significantemente associadas com maior mortalidade (p < 0,05). Quinze diferentes Pulsed field type (PFT) foram observados entre os isolados de E. faecium e 06 entre os isolados de E. faecalis. Dezessete E. faecium foram sequenciados e diferentes sequencias tipo (ST) foram observadas (ST412, ST478, ST78 e ST896) já descritas em outros estudos no Brasil. O isolado resistente a linezolida apresentou mutação no domínio V do gene 23S rRNA com um perfil alélico diferente, caracterizando um novo ST (ST987) descrito pela primeira vez no Brasil. Todos os ST observados nos isolados de E. faecium pertencem ao complexo clonal 17, dos quais dois STs (ST963, ST792) foram descritos pela primeira vez no país. O isolado de E. faecalis sequenciado pertencia ao ST9 e ao complexo clonal 9 já descrito por outros autores. Conclusão: Nosso estudo observou que E. faecium foi predominante em nosso hospital e os ST circulantes pertenciam ao CC17. Os isolados de infecção foram mais virulentos que os isolados de colonização e o gene gelE foi significativamente mais frequente nos isolados de infecção. Infecções causadas por isolados de E. faecium positivos para o gene asa1 foram associadas com a alta mortalidade. Este achado pode ser útil para controlar a disseminação de E. faecium no ambiente hospitalar e em pacientes hematológicos / Introduction: Vancomycin Resistant Enterococcus (VRE) is a important cause of health care-associated infection with high morbidity and mortality, mainly in immunocompromised patients, being the second most common cause of hospital infections in this population of patients in some centers. Prolonged use of antimicrobial therapy with vancomycin and other drugs are risk factors associated with the spread of this pathogen. In addition, enterococcal species may present virulence factors such as: aggregation substance (asa1), gelatinase (gelE), cytolysin (cylA), enterococcal surface protein (esp) and glycosyl hydrolase (hylefm). However, the role of virulence on VRE colonization and infection is controversial. Objectives: To evaluate the clonal profile, virulence and resistance of 86 isolates of VRE (80 E. faecium and 06 E. faecalis) from infection and colonization of 76 patients with hematological diseases and / or submitted to bone marrow transplantation (BMT) at Hospital das Clinics of the Medical School of the University of São Paulo (HC-FMUSP) in the period of 10 years (2005-2014). Material and Methods: Minimum inhibitory concentration to vancomycin, teicoplanin, linezolid, gentamicin and streptomycin in high concentration (HLAR) was performed; Clonality of isolates by pulsed field electrophoresis (PFGE) was evaluated; Detection of resistance (vanA and vanB) and virulence (esp, asa1, gelE, cylA and hylefm) genes by PCR technique and whole genome sequencing of eighteen isolates selected based on clonality. Results: All isolates were resistant to vancomycin and 87.3% to teicoplanin. Resistance to gentamicin and streptomycin in high concentration (HLAR) was observed in 08 and 59 isolates respectively. One isolate presented resistance to linezolid observed for the first time in the unit. The vanA gene was detected in all isolates. Regarding virulence genes, 96.5% of isolates were positive for the esp gene and 69.8% for the gelE and asa1 genes. Isolates of E. faecium infection carried more virulence genes: esp (100%), gelE (80.0%) and asa1 (75.5%) and gelE gene was significantly more frequent among infection isolates than colonization (p = 0.008). Infections caused by E. faecium isolates carrying the asa1 gene were significantly associated with higher mortality (p < 0.05). Fifteen different Pulsed field type (PFT) were observed among the isolates of E. faecium and 06 among E. faecalis isolates. Seventeen E. faecium were sequenced and the following sequences type (ST) were observed (ST412, ST478, ST78 and ST896) all of them already described in Brazil. The linezolid-resistant isolate showed the 23S gene Vdomain mutation with a different allelic profile, characterizing a new ST (ST987) described for the first time in our study. All STs observed in E. faecium isolates belong to clonal complex 17. Two other STs (ST963, ST792) were identified for the first time in the country. The E. faecalis isolate belong to ST9 and clonal complex 9 already described by other authors in Brazil. Conclusion: Our study observed that E. faecium was predominant in our hospital and the circulating STs belonged to CC17 a virulent lineage. E. faecium infection isolates were more virulent than colonization isolates and harbored significantly more gelE gene. It appears that infections caused by E. faecium isolates carrying asa1 gene evolved more frequently to death. This finding may be useful to control the spread of E. faecium in the hospital environment and in haematological patients

Recursos fisioterapêuticos tem sido utilizados no tratamento de úlceras de perna como a terapia a laser de baixa intensidade. A contaminação bacteriana dessas úlceras é freqüente constituindo-se numa importante complicação da cicatrização. Assim, busca-se investigar os efeitos dessa terapêutica frente às culturas de diferentes espécies bacterianas in vitro e in vivo. Utilizou-se aparelho laser modelo Theralase III-DMC (685 e 830 nm) e diferentes doses (1,2 e 4J). Foram utilizados bactérias, S. aureus ATCC 6538 (Gram+) e P. aeruginosa ATCC 15442 (Gram-), reativadas em B.H.I.Agar inclinado a 37 graus C/24h. Após as bactérias foram re-suspensas em B.H.I. caldo/37 graus Celsius/20h, centrifugadas 3x/15min/4.500rpm, seguida de lavagens e homogeneização. A suspensão foi diluída em placas de cultura celular de 96 poços, submetidas a diluições seriadas sucessivas, encontrando as diluições ideais de \'10 POT.-12\' bactérias/ml para S. aureus e \'10 POT.-15\' bactérias/ml para P. aeruginosa. As soluções bacterianas foram irradiadas com laser de diferentes comprimentos de onda (685 e 830 nm) e diferentes doses (1, 2 e 4J). Dez micro litros da solução bacteriana do último poço foram semeados em placa de petri nos meios Mc Conkey Agar e B.H.I.-Agar bactérias Gram positiva e negativa respectivamente para posterior contagem das unidades formadoras de colônia (U.F.C.´s.). Foram semeadas 10 placas para cada dose de diferente comprimento de onda e espécie bacteriana diferente e 10 placas para o grupo controle, ou seja, sem irradiação laser. Nos estudos in vivo, foram utilizados coelhos, machos, neozelandeses pesando aproximadamente 1,5 Kg. A anestesia foi feita com 1,5 ml/animal de ketamina 100 mg e xylzina 1,0 ml/animal. Foram feitas 6 feridas de 6 mm de diâmentro (punch) em cada orelha, constituindo-se cada animal, um grupo (n=12). As feridas foram previamente contaminadas com S. aureus (G+) e P. aeruginosa (G-). Os animais foram divididos em Grupo 1 (laser 685 nm + G+), Grupo 2 (laser 830 nm + G+), Grupo 3 (laser 685 nm + G-), Grupo 4 (laser 830 nm + G-), Grupo 5 (apenas laser 685 nm), Grupo 6 (apenas laser 830 nm), Grupo 7 (lasers 685 e 830 nm + G-), Grupo 8 (lasers 685 e 830 nm + G+). As úlceras foram fotografadas nos tempos de 24h, 3 dias, 7 dias, 10 dias, 13 dias e 16 dias e posteriormente analisadas com programa Image J, realizadas pelo mesmo indivíduo. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico ANOVA e pós-teste de Bonferroni para múltiplas amostras não paramétricas. No experimento in vitro foi observado que todas as doses laser utilizadas tiveram efeito inibitório no crescimento bacteriano em ambas as espécies, sendo esse efeito maior na dose de 4 J/\'CM POT.2\', nos diferentes comprimentos de onda utilizados (685 nm e 830 nm), mesmo quando esses foram usados de forma consecutiva. In vivo, observou-se que no 3º dia pós cirúrgico houve uma diferença estatisticamente significante entre os grupos 1 e 6. No 7º dia a diferença estatística aconteceu entre os grupos 1 e 4. No 10º dia, não houve diferenças estatisticamente significante entre as áreas dos grupos. No 13º dia observou-se diferença estatística entre todos os grupos quando comparados com os grupos 7 e 8 (lasers 685 e 830 nm + G+). No 16º de segmento todas as feridas encontavam-se cicatrizadas. A terapia a laser de baixa intensidade apresentou efeito inibitório do crescimento bacteriano in vitro e nos estudos in vivo, mostrando-se capaz de acelerar o processo de cicatrização de feridas, mesmo contaminadas com diferentes espécies bacterianas. / Physical therapeutic resources have been used to treat leg ulcers, such as laser therapy of low intensity. Bacterial contamination of these ulcers often constitutes itself into a major complication of healing. Thus, search up to investigate the effects of this therapy off the cultures of different bacterial species in vitro and in vivo. It was used laser device model Theralase III-DMC (685 e 830 nm) in different doses (1, 2 e 4J). It was used bacteria S. aureus ATCC 6538 (Gram+) and P. aeruginosa ATCC 15442 (Gram-), reativated in tilted BHI-Agar to 37 Celsius degrees/24h. After the bacteria were re-suspended in broth B.H.I. to 37 Celsius degrees for 20h, centrifuged 3x/15min/4.500rpm, followed by washing and homogenization. The suspension was diluted in 96 wells cell culture plates, and submitted to successive serial dilutions, finding the ideas dilutions of \'10 POT.-12\' bacteria/ml for S. aureus and \'10 POT.-15\' bacteria/ml for P. aeruginosa. The bacterial solutions were irradiated with different wavelength of laser (685 e 830 nm) and different doses (1, 2 e 4J). Ten microliters of bacterial solution from the last well were sowed in Petri´s plate with Mc Conkey agar and BHI-agar to bacterias Gram positive and negative respectively for further counting of colony forming units (CFU´s). Ten plates for each dose of different wavelength and different bacterial species were sowed and 10 boards for the control group, without laser irradiation. In the in vivo studies were used New Zealand male rabbits, weighing approximately 1.5 Kg. Anesthesia was made with 1.5 ml of ketamine 100 mg and xylzina 1.0 mL/animal. Six punched wounds were made in each ear, and each animal constituted a group (n=12). The wounds were previously contaminated with S. aureus (G+) and P. aeruginosa (G-). The animals were divided in Group 1 (laser 685 nm + G+), Group 2 (laser 830 nm + G+), Group 3 (laser 685 nm + G-), Group 4 (laser 830 nm + G-), Group 5 (only laser 685 nm), Group 6 (only laser 830 nm), Group 7 (lasers 685 e 830 nm + G-), Group 8 (lasers 685 e 830nm + G+). The ulcers were photographed in times of 24h, 3, 7, 10, 13 and 16 days and then analyzed with ImageJ software, conducted by the same individual. The results were analyzed by non parametric ANOVA statistical test and post-test for multiple samples by Bonferroni´s test. In the in vitro experiments was observed that all the laser doses used presented an inhibitory effect on bacterial growth in both species, and this effect was greater using the dose of 4J in different wavelengths (685 nm, 830 nm), even when these were applied consecutively. In vivo, it was observed that in the 3rd day after surgery there was a statistically significant difference between groups 1 and 6. In the 7th day happened to statistical difference between groups 1 and 4. In the 10th day there was no statistically significant difference among the areas of groups. In the 13th day there was statistical difference between all groups when compared with groups 7 and 8 (685 and 830 nm lasers + G+). In the 16th to follow all the wounds had been healed. The laser therapy of low intensity showed inhibitory effect of bacterial growth in vitro and in vivo studies and it were able to accelerate the wound healing, even contaminated with different bacterial species.

Resíduos de Serviços de Saúde (RSS) são definidos e classificados segundo a RDC ANVISA nº 306/2004, sendo que no Grupo A encontram-se aqueles com possível contaminação biológica. As atividades de atendimento, ensino e pesquisa em saúde humana e animal desenvolvidas na Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) geram cerca de 22 toneladas de RSS do Grupo A mensalmente. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os RSS do Grupo A gerados em laboratórios da UFRGS quanto à sua composição e forma de armazenamento, bem como analisar sua contaminação microbiológica, a fim de entender os desafios existentes para a gestão desse Grupo de resíduos. Os resíduos foram caracterizados por massa e volume em dezessete laboratórios de diferentes áreas de pesquisa com material biológico, com base na norma ABNT NBR 10.007/2004. Foram coletadas informações sobre o armazenamento e gerenciamento interno dos resíduos junto aos pesquisadores. A fim de verificar a contaminação microbiana, foram coletadas luvas de látex de todos os laboratórios e foram realizados testes de crescimento, isolamento e identificação dos microrganismos. Os resultados demonstram que existe grande diferença na composição dos resíduos entre os laboratórios, mas que luvas de procedimento (látex e nitrilica), papéis sujos e materiais plásticos (polietileno e polipropileno) são os materiais mais encontrados. Em relação à contaminação dos resíduos, verificou-se que cerca de 50% das amostras coletadas não apresentaram contaminação expressiva (menos de 30 colônias). Foram identificados 38 espécies, sendo quatro de leveduras e 34 de bactérias. O gerenciamento interno também é muito variável entre os laboratórios, sendo que alguns apresentam problemas de acondicionamento e segregação, enquanto outros seguem bons procedimentos, o que dificulta estabelecer uma gestão integrada para a Universidade. Portanto, com base nos resultados, verificamos que é necessário melhorar o gerenciamento dos RSS do Grupo A dos laboratórios da Universidade, pois parte dos materiais descartados nessa categoria não estão efetivamente contaminados. É preciso também levar em consideração às particularidades de cada laboratório, buscando políticas institucionais que atendam às diferentes realidades encontradas na Universidade. / Medical Waste (MW) are defined and classified by RDC ANVISA nº 306/2004.Group A are all solid residues possibly contaminated with pathogenic agents. All the activi-ties in the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) which involve ani-mal or human health monthly generate around 22 tons of MW of Group A. The aim of this study was to characterize the composition of MW of Group A generated in labor-atories of the University, and to analyze its contamination with microorganisms, so to comprehend the challenges of managing these residues. The residues of seventeen labs were characterized by weight and volume using ABNT NBR nº 10.007/2004 as guideline. Information about residues management and storage were obtained with the researches of each lab. In order to verify the presence of microorganisms in the residues, latex gloves were collected from all seventeen laboratories and microbial growth, isolation and identification analyses were performed. The results showed great differences among the labs, however, procedure gloves (latex and nitrile), pa-per and plastic materials (such as polyethylene and polypropylene) were the most representative materials found. Considering the contamination results, about 50% of the samples showed minimal contamination (less than 30 colonies).There was found 38 species of microorganisms, being four yeast and 34 bacteria. The internal man-agement of MW of Group A varies greatly among the labs, while some have good practices, others have difficulties with internal storage and residue segregation, therefore turning its administration very difficult for the University. Therefore, the re-sults show that it’s necessary to develop institutional policies in order to improve MW of Group A management, considering that part of the materials treated as this resi-dues are not contaminated. Nevertheless, since the laboratories have such different realities, it’s critical to take it in consideration, so the institutional policies could be really applied on the daily basis.

Durante a resposta inflamatória, diversos mediadores são liberados localmente com o objetivo de estimular a resposta imune celular e humoral. Por meio da ação das enzimas ciclooxigenases e lipoxigenases ocorrerão modificações estruturais na cadeia do ácido araquidônico levando a síntese de prostaglandinas ou leucotrienos e lipoxinas, respectivamente. Tais mediadores são responsáveis pela regulação da expressão dos genes RANK, RANKL e OPG, moduladores da osteoclastogênese. Dessa maneira, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão do RNA mensageiro (RNAm) para as enzimas envolvidas no metabolismo do ácido araquidônico, ciclooxigenase-2 (COX-2) e 5- lipoxigenase (5-LO), e para os mediadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG) no tecido ósseo, após inoculação de lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) nos canais radiculares de molares de camundongos. Posteriormente foi investigado o efeito do bloqueio farmacológico da via COX-2 induzida pelo LPS, na expressão de mediadores da osteoclastogênese e de genes envolvidos no metabolismo ósseo. Foram utilizados 144 camundongos C57BL/6, com 6 semanas de idade, pesando de 18 a 20 gramas, nos quais os canais radiculares dos primeiros molares foram inoculados com uma solução contendo lipopolissacarídeo bacteriano de E. coli (0,1, 1,0 e 10mg/ml). Decorridos os períodos experimentais de 7, 14, 21 e 28 dias, os animais foram submetidos à eutanásia e os blocos contendo dente e osso foram removidos para extração do RNA total. Em seguida, foi realizada a avaliação da expressão gênica por meio de transcrição reversa e reação da polimerase em cadeia em tempo real (qRT-PCR). A análise global da expressão de RNAm para proteínas envolvidas no metabolismo ósseo foi realizada por meio de um ensaio de PCR Array (Osteogenesis RT² Profiler PCR Array). Os valores de expressão relativa de cada RNAm, para cada grupo, foram comparados por meio da análise de variância (ANOVA) de duas vias seguido pelo pós-teste de Bonferroni ou por ANOVA de uma via seguido pelo pós-teste de Dunnett (&alpha = 0,05). A inoculação de LPS nos canais radiculares de molares de camundongos foi capaz de induzir a expressão dos genes PTGS2 e ALOX5, responsáveis pela codificação das enzimas COX-2 e 5-LO, envolvidas no metabolismo do ácido araquidônico, concomitantemente à modulação da expressão dos genes TNFRSF11A, TNFSF11 e TNFRSF11B, responsáveis pela codificação dos moduladores da osteoclastogênese RANK, RANKL e OPG, respectivamente. A administração de Indometacina, um inibidor não seletivo de COX-2, inibiu a expressão de RNAm para RANK e RANKL e estimulou a expressão de OPG durante os períodos iniciais de resposta à inoculação de LPS nos canais radiculares. A inibição da via COX-2 de metabolismo do ácido araquidônico nos períodos iniciais de resposta à inoculação de LPS nos canais radiculares modulou diferencialmente a expressão de genes envolvidos no catabolismo e anabolismo ósseo, indicando possíveis papéis para os mediadores derivados no ácido araquidônico na regulação do metabolismo ósseo. Estes resultados sugerem alvos terapêuticos importantes para intervenção precoce em doenças inflamatórias, como lesões periapicais para evitar a reabsorção do tecido ósseo. / During an inflammatory response, several mediators are locally released in order to stimulate cellular and humoral immune response. Through the action of cyclooxygenase and lipoxygenase enzymes structural changes occur in the arachidonic acid chain leading to synthesis of prostaglandins or leukotrienes and lipoxins, respectively. Such mediators are responsible for the regulation of RANK, RANKL and OPG gene expression, osteoclastogenesis modulators. Thus, the objective of this study was to evaluate the expression of messenger RNA (mRNA) for the enzymes involved in arachidonic acid metabolism, cyclooxygenase-2 (COX-2) and 5-lipoxygenase (5-LO), and the osteoclastogenesis mediators (RANK, RANKL and OPG) in bone tissue after injection of bacterial lipopolysaccharide (LPS) in murine dental root canals. Then, COX-2 pathway was pharmacologically blocked for investigation of expression of osteoclastogenesis mediators and genes involved in bone metabolism. We used 144 C57BL/6 mice, 6 weeks-old, weighing 18-20 grams, which had the first molars root canals inoculated with a solution containing LPS from E. coli (0.1, 1.0 and 10 mg/ml). After 7, 14, 21 and 28 days the animals were euthanized and the tooth-and-bone blocks were removed for total RNA extraction. Subsequently, the evaluation of gene expression was performed by reverse transcription and polymerase chain reaction in real time (qRT-PCR). Global analysis of mRNA expression for proteins involved in bone metabolism was performed using PCR arrays (Osteogenesis RT² Profiler PCR Array). The values for relative expression of each mRNA for each group were compared using two-way analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni post-test or one-way ANOVA followed by Dunnett\'s test (&alpha;=0.05). The injection of LPS into the root canals was induced expression of genes PTGS2 and ALOX5, responsible for encoding COX-2 and 5-LO enzymes, involved in the metabolism of arachidonic acid, simultaneously to the modulation of gene expression of TNFRSF11A, TNFSF11 and TNFRSF11B, responsible for encoding the osteoclastogenesis modulators RANK, RANKL and OPG, respectively. Administration of Indomethacin, a non-selective inhibitor of COX-2, inhibited the expression of mRNA for RANK and RANKL and stimulated the expression of OPG during the initial response to the root canals contamination with LPS. Inhibition of the COX-2 pathway from arachidonic acid metabolism in the initial periods of response to LPS injection into the root canals differentially modulated the expression of genes involved in bone catabolism and anabolism, indicating possible roles for mediators derived from arachidonic acid in the regulation of bone metabolism. These results suggest important therapeutic targets for early intervention in inflammatory diseases such as apical periodontitis to avoid resorption of bone tissue.

Durante a resposta inflamatória, diversos mediadores são liberados localmente com o objetivo de estimular a resposta imune celular e humoral. Por meio da ação das enzimas ciclooxigenases e lipoxigenases ocorrerão modificações estruturais na cadeia do ácido araquidônico levando a síntese de prostaglandinas ou leucotrienos e lipoxinas, respectivamente. Tais mediadores são responsáveis pela regulação da expressão dos genes RANK, RANKL e OPG, moduladores da osteoclastogênese. Dessa maneira, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão do RNA mensageiro (RNAm) para as enzimas envolvidas no metabolismo do ácido araquidônico, ciclooxigenase-2 (COX-2) e 5- lipoxigenase (5-LO), e para os mediadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG) no tecido ósseo, após inoculação de lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) nos canais radiculares de molares de camundongos. Posteriormente foi investigado o efeito do bloqueio farmacológico da via COX-2 induzida pelo LPS, na expressão de mediadores da osteoclastogênese e de genes envolvidos no metabolismo ósseo. Foram utilizados 144 camundongos C57BL/6, com 6 semanas de idade, pesando de 18 a 20 gramas, nos quais os canais radiculares dos primeiros molares foram inoculados com uma solução contendo lipopolissacarídeo bacteriano de E. coli (0,1, 1,0 e 10mg/ml). Decorridos os períodos experimentais de 7, 14, 21 e 28 dias, os animais foram submetidos à eutanásia e os blocos contendo dente e osso foram removidos para extração do RNA total. Em seguida, foi realizada a avaliação da expressão gênica por meio de transcrição reversa e reação da polimerase em cadeia em tempo real (qRT-PCR). A análise global da expressão de RNAm para proteínas envolvidas no metabolismo ósseo foi realizada por meio de um ensaio de PCR Array (Osteogenesis RT² Profiler PCR Array). Os valores de expressão relativa de cada RNAm, para cada grupo, foram comparados por meio da análise de variância (ANOVA) de duas vias seguido pelo pós-teste de Bonferroni ou por ANOVA de uma via seguido pelo pós-teste de Dunnett (&alpha = 0,05). A inoculação de LPS nos canais radiculares de molares de camundongos foi capaz de induzir a expressão dos genes PTGS2 e ALOX5, responsáveis pela codificação das enzimas COX-2 e 5-LO, envolvidas no metabolismo do ácido araquidônico, concomitantemente à modulação da expressão dos genes TNFRSF11A, TNFSF11 e TNFRSF11B, responsáveis pela codificação dos moduladores da osteoclastogênese RANK, RANKL e OPG, respectivamente. A administração de Indometacina, um inibidor não seletivo de COX-2, inibiu a expressão de RNAm para RANK e RANKL e estimulou a expressão de OPG durante os períodos iniciais de resposta à inoculação de LPS nos canais radiculares. A inibição da via COX-2 de metabolismo do ácido araquidônico nos períodos iniciais de resposta à inoculação de LPS nos canais radiculares modulou diferencialmente a expressão de genes envolvidos no catabolismo e anabolismo ósseo, indicando possíveis papéis para os mediadores derivados no ácido araquidônico na regulação do metabolismo ósseo. Estes resultados sugerem alvos terapêuticos importantes para intervenção precoce em doenças inflamatórias, como lesões periapicais para evitar a reabsorção do tecido ósseo. / During an inflammatory response, several mediators are locally released in order to stimulate cellular and humoral immune response. Through the action of cyclooxygenase and lipoxygenase enzymes structural changes occur in the arachidonic acid chain leading to synthesis of prostaglandins or leukotrienes and lipoxins, respectively. Such mediators are responsible for the regulation of RANK, RANKL and OPG gene expression, osteoclastogenesis modulators. Thus, the objective of this study was to evaluate the expression of messenger RNA (mRNA) for the enzymes involved in arachidonic acid metabolism, cyclooxygenase-2 (COX-2) and 5-lipoxygenase (5-LO), and the osteoclastogenesis mediators (RANK, RANKL and OPG) in bone tissue after injection of bacterial lipopolysaccharide (LPS) in murine dental root canals. Then, COX-2 pathway was pharmacologically blocked for investigation of expression of osteoclastogenesis mediators and genes involved in bone metabolism. We used 144 C57BL/6 mice, 6 weeks-old, weighing 18-20 grams, which had the first molars root canals inoculated with a solution containing LPS from E. coli (0.1, 1.0 and 10 mg/ml). After 7, 14, 21 and 28 days the animals were euthanized and the tooth-and-bone blocks were removed for total RNA extraction. Subsequently, the evaluation of gene expression was performed by reverse transcription and polymerase chain reaction in real time (qRT-PCR). Global analysis of mRNA expression for proteins involved in bone metabolism was performed using PCR arrays (Osteogenesis RT² Profiler PCR Array). The values for relative expression of each mRNA for each group were compared using two-way analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni post-test or one-way ANOVA followed by Dunnett\'s test (&alpha;=0.05). The injection of LPS into the root canals was induced expression of genes PTGS2 and ALOX5, responsible for encoding COX-2 and 5-LO enzymes, involved in the metabolism of arachidonic acid, simultaneously to the modulation of gene expression of TNFRSF11A, TNFSF11 and TNFRSF11B, responsible for encoding the osteoclastogenesis modulators RANK, RANKL and OPG, respectively. Administration of Indomethacin, a non-selective inhibitor of COX-2, inhibited the expression of mRNA for RANK and RANKL and stimulated the expression of OPG during the initial response to the root canals contamination with LPS. Inhibition of the COX-2 pathway from arachidonic acid metabolism in the initial periods of response to LPS injection into the root canals differentially modulated the expression of genes involved in bone catabolism and anabolism, indicating possible roles for mediators derived from arachidonic acid in the regulation of bone metabolism. These results suggest important therapeutic targets for early intervention in inflammatory diseases such as apical periodontitis to avoid resorption of bone tissue.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-20T14:28:26Z No. of bitstreams: 1 Adriano Marcio Freire da Silva.pdf: 233973 bytes, checksum: 8365664074820b5955fb940c37b47616 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T14:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriano Marcio Freire da Silva.pdf: 233973 bytes, checksum: 8365664074820b5955fb940c37b47616 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Bacterial canker (Xanthomonas campestris pv. viticola) (Xcv) caused great damage to the grapevine cultivation in the Vale do Submédio São Francisco. In the first paper techniques of in vitro tissue culture in modified Galzy medium (MGM) were studied in order to eliminate Xcv from ‘Red Globe’ grapevine plants. The first experiment aimed to select the ideal length of apex and axillary’s buds for cultivation in MGM; the second to verify the effect of the thermotherapy (38ºC/four weeks) associated to the MGM cultivation; and the third intended to test antibiotics to eliminate Xcv from explants taken from infected grapevines. All plants obtained without contamination in vitro and culture media contaminated were indexed by using the semi-selective culture media nutrient agar-dextrose-yeast extract-ampicilin (NYDAM) followed by a pathogenicity test. The cultivation of 3 mm explants permitted to obtain plants free of bacteria with regeneration 14.3 times higher than 1 mm explants. The thermotherapy of infected plants associated to the in vitro culture did not eliminate the pathogen. The cultivationof 10 mm explants for 40 days in MGM+cefotaxime (300 mg L-1) eliminated Xcv from grapevine plants. The indexation in NYDAM permitted the visualization of specific Xcv growing. The indexation of in vitro regenerated grapevine plants for Xcv infection by using NYDAM medium is an economic and efficient alternative for production of selected plants. It is known that pruning residues of infected plants abandoned in the grapevine plantations are important source of disease primary inoculum and that burning is recommended as control measure. Thus the second paper investigated the survival of Xcv in infected tissues and the use of composting to eradicate Xcv associated with crop residues. Plants of grapevine “Festival’ were inoculated with a mutant resistant to rifampicin Xcv2Rif and at the time they presented high disease severity, fragmented shoots and entire leaves were placed in mesh bags. These bagswere placed on the surface of microplots in experimental area (experiment 1) and inside compost piles of grapevine pruning residues (experiment 2). The survival of Xcv2Rif in grapevine infected tissue was monitored in the culture medium NYDAM + rifampicin (0,1g L-1) + azoxystrobim (0,16 g L-1), at 8 and 10 days intervals from 1 and 2 experiment setting, respectively. In the experiment 1 tissue decomposition was also evaluated and in the experiment 2, pile temperature curves, phenolyc content, and fungi and bacteria antagonistic to Xcv2Rif were analyzed. The pathogen survived in high densities (104 a 106 CFU g-1) for at least 80 days in grapevine-infected tissues on soil surface. Then grapevine-pruning residues are important inoculum source for other plants in the vineyard. The composting process eliminated Xcv2Rif from crop residues in 10 days due to high temperatures in piles, liberation of phenolyc compounds during the process and microbial antagonism. Therefore the composting is a viable and safemethod to manage pruning residues in grapevine plantations without problems of Xcv survival and without losing of an important source of organic matter for the culture. / O cancro-bacteriano causado por Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) é responsável por grandes prejuízos ao cultivo de videira no Vale do Submédio São Francisco. No primeiro trabalho, técnicas de cultura de tecidos em meio de Galzy modificado (MGM) foram estudadas visando eliminar Xcv de mudas de videira ‘Red Globe’. O primeiro experimento visou selecionar o tamanho ideal de ápices e gemas axilares para o cultivo em MGM; o segundo, verificar o efeito da termoterapia de mudas (38ºC/quatro semanas) associada ao cultivo em MGM; e o terceiro, testar antibióticos para eliminação de Xcv em explantes oriundos de videiras infectadas. Todas as plantas obtidas sem contaminação in vitro e meios de cultivo contaminados foram indexados utilizando o meio ágar nutritivo-dextrose-extrato de leveduraampicilina (NYDAM) seguindo-se teste de patogenicidade. O cultivo de explantes com 3 mm possibilitou a obtenção de plantas livres da bactéria, com regeneração 14,3 vezes maior que explantes de 1 mm de comprimento. A termoterapia de mudas infectadas associada ao cultivo in vitro não eliminou o patógeno. O cultivo de explantes com 10 mm durante 40 dias em MGM+cefotaxima (300 mg L-1) proporcionou limpeza clonal das mudas. A indexação em NYDAM permitiu a visualização do crescimento de Xcv. A indexação de plantas de videira regeneradas in vitro quanto à infecção por Xcv utilizando NYDAM é uma alternativa econômica e eficiente para produção de plantas selecionadas. Sabe-se que restos de poda de plantas infectadas deixados no parreiral são importante fonte de inóculo primário da doença, recomendando-se a queima como medida de controle. No segundo trabalho, investigou-se a sobrevivência de Xcv em tecidos de videira infectados e o uso da compostagem para erradicação de Xcv em associação com restos culturais. Mudas de videira ‘Festival’ foram inoculadas com omutante resistente a rifampicina Xcv2Rif e quando apresentavam alta severidade da doença, ramos fragmentados e folhas inteiras foram acondicionados em bolsas de malha plástica. Estas foram alocadas na superfície de microparcelas em área experimental (experimento 1) e no interior de pilhas de compostagem de restos de poda de videira (experimento 2). A sobrevivência de Xcv2Rif em tecidos infectados de videira foi monitorada em meio NYDAM + rifampicina (0,1g L-1) + azoxystrobim (0,16 g L-1), a intervalos de 8 e 10 dias a partir do início do experimento, respectivamente nos experimentos 1 e 2. No experimento 1, foi também avaliada a decomposição de tecidos e no experimento 2, as curvas de temperatura das pilhas, conteúdo de fenóis, e presença de microbiota fúngica e bacteriana antagonista a Xcv2Rif. O patógeno sobreviveu em altas densidades (104 a 106 UFC g-1) por pelo menos 80 dias em tecidos infectados de videira na superfície do solo. Portanto, restos de poda de videira constituem importante fonte de inóculo primário para infecção de outras plantas no parreiral. O processo de compostagem eliminou Xcv2Rif de restos culturais em 10 dias, devido às altas temperaturas alcançadas pelas pilhas, liberação de compostos fenólicos durante o processo e antagonismo microbiano. Desta forma, a compostagem constitui uma maneira viável e segura de manejar os restos de poda em parreirais, sem perigo de sobrevivência de Xcv e sem que haja a perda de uma importante fonte de matéria orgânica para a cultura.

Introdução: Enterococcus resistente à vancomicina (VRE do inglês Vancomycin Resistant Enterococcus) é uma importante causa de infecção relacionada a assistência à saúde com alta morbidade e mortalidade principalmente nos pacientes imunocomprometidos sendo a segunda causa mais comum de infecções hospitalares nessa população de pacientes em alguns centros. O uso prolongado da terapia antimicrobiana com vancomicina e outras drogas, são fatores de risco associados com a disseminação desse patógeno. Além disso, espécies de enterococos podem apresentar fatores de virulência tais como: substância de agregação (asa1), gelatinase (gelE), citolisina (cylA), proteína de superfície enterococo (esp) e hidrolase glicosil (hylefm). Entretanto, o papel da virulência na colonização e infecção por VRE é controverso. Objetivos: Avaliar o perfil clonal, virulência e resistência de 86 isolados de VRE (80 E. faecium e 06 E. faecalis) de infecção e colonização de 76 pacientes com doenças hematológicas e/ou submetidos a transplante de Medula Óssea (TMO) internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HCFMUSP) no período de 10 anos (2005-2014). Material e Métodos: Foram realizadas concentração inibitória mínima para: vancomicina, teicoplanina, linezolida, gentamicina e estreptomicina em alta concentração (HLAR); Avaliação da clonalidade por eletroforese em campo pulsado (PFGE); Detecção dos mecanismos de resistência (vanA e vanB) e de virulência (esp, asa1, gelE, cylA e hylefm) pela técnica de PCR e sequenciamento total do genoma de dezoito isolados selecionados de acordo com a clonalidade. Foi criado um banco de dados no programa Epiinfo (CDC) com variáveis clinicas e demográficas dos pacientes. A proporção de isolados de colonização portadores de genes de virulência foi comparada com os isolados de infecção assim como a proporção de isolados de infecção portadores de genes de virulência que evoluíram para óbito. O valor de p < 0,005 foi considerado significativo. Resultados: Trinta e quatro pacientes eram colonizados e 42 infectados por VRE (28 eram infecção de corrente sanguínea), 48 pacientes eram transplantados dos quais 32 eram alogênicos. A mortalidade em 14 dias foi de 21.0% e durante a hospitalização de 53.9%. Todos os isolados foram resistentes à vancomicina e 87,3% à teicoplanina. Resistência a gentamicina e estreptomicina em alta concentração (HLAR) foi observada em 08 e 59 isolados respectivamente. Um isolado apresentou resistência a linezolida identificado pela primeira vez na unidade. O gene vanA foi detectado em todos os isolados. Quanto aos genes de virulência, 96,5% de isolados foram positivos para o gene esp e 69,8% para os genes gelE e asa1. Isolados de infecção de E. faecium carrearam mais genes de virulência: esp (100%), gelE (80,0%) e asa1 (75,5%) e o gene gelE foi significativamente mais frequente entre isolados de infecção que de colonização (p=0,008). Infecções causadas por isolados de E. faecium positivos para o gene asa1 foram significantemente associadas com maior mortalidade (p < 0,05). Quinze diferentes Pulsed field type (PFT) foram observados entre os isolados de E. faecium e 06 entre os isolados de E. faecalis. Dezessete E. faecium foram sequenciados e diferentes sequencias tipo (ST) foram observadas (ST412, ST478, ST78 e ST896) já descritas em outros estudos no Brasil. O isolado resistente a linezolida apresentou mutação no domínio V do gene 23S rRNA com um perfil alélico diferente, caracterizando um novo ST (ST987) descrito pela primeira vez no Brasil. Todos os ST observados nos isolados de E. faecium pertencem ao complexo clonal 17, dos quais dois STs (ST963, ST792) foram descritos pela primeira vez no país. O isolado de E. faecalis sequenciado pertencia ao ST9 e ao complexo clonal 9 já descrito por outros autores. Conclusão: Nosso estudo observou que E. faecium foi predominante em nosso hospital e os ST circulantes pertenciam ao CC17. Os isolados de infecção foram mais virulentos que os isolados de colonização e o gene gelE foi significativamente mais frequente nos isolados de infecção. Infecções causadas por isolados de E. faecium positivos para o gene asa1 foram associadas com a alta mortalidade. Este achado pode ser útil para controlar a disseminação de E. faecium no ambiente hospitalar e em pacientes hematológicos / Introduction: Vancomycin Resistant Enterococcus (VRE) is a important cause of health care-associated infection with high morbidity and mortality, mainly in immunocompromised patients, being the second most common cause of hospital infections in this population of patients in some centers. Prolonged use of antimicrobial therapy with vancomycin and other drugs are risk factors associated with the spread of this pathogen. In addition, enterococcal species may present virulence factors such as: aggregation substance (asa1), gelatinase (gelE), cytolysin (cylA), enterococcal surface protein (esp) and glycosyl hydrolase (hylefm). However, the role of virulence on VRE colonization and infection is controversial. Objectives: To evaluate the clonal profile, virulence and resistance of 86 isolates of VRE (80 E. faecium and 06 E. faecalis) from infection and colonization of 76 patients with hematological diseases and / or submitted to bone marrow transplantation (BMT) at Hospital das Clinics of the Medical School of the University of São Paulo (HC-FMUSP) in the period of 10 years (2005-2014). Material and Methods: Minimum inhibitory concentration to vancomycin, teicoplanin, linezolid, gentamicin and streptomycin in high concentration (HLAR) was performed; Clonality of isolates by pulsed field electrophoresis (PFGE) was evaluated; Detection of resistance (vanA and vanB) and virulence (esp, asa1, gelE, cylA and hylefm) genes by PCR technique and whole genome sequencing of eighteen isolates selected based on clonality. Results: All isolates were resistant to vancomycin and 87.3% to teicoplanin. Resistance to gentamicin and streptomycin in high concentration (HLAR) was observed in 08 and 59 isolates respectively. One isolate presented resistance to linezolid observed for the first time in the unit. The vanA gene was detected in all isolates. Regarding virulence genes, 96.5% of isolates were positive for the esp gene and 69.8% for the gelE and asa1 genes. Isolates of E. faecium infection carried more virulence genes: esp (100%), gelE (80.0%) and asa1 (75.5%) and gelE gene was significantly more frequent among infection isolates than colonization (p = 0.008). Infections caused by E. faecium isolates carrying the asa1 gene were significantly associated with higher mortality (p < 0.05). Fifteen different Pulsed field type (PFT) were observed among the isolates of E. faecium and 06 among E. faecalis isolates. Seventeen E. faecium were sequenced and the following sequences type (ST) were observed (ST412, ST478, ST78 and ST896) all of them already described in Brazil. The linezolid-resistant isolate showed the 23S gene Vdomain mutation with a different allelic profile, characterizing a new ST (ST987) described for the first time in our study. All STs observed in E. faecium isolates belong to clonal complex 17. Two other STs (ST963, ST792) were identified for the first time in the country. The E. faecalis isolate belong to ST9 and clonal complex 9 already described by other authors in Brazil. Conclusion: Our study observed that E. faecium was predominant in our hospital and the circulating STs belonged to CC17 a virulent lineage. E. faecium infection isolates were more virulent than colonization isolates and harbored significantly more gelE gene. It appears that infections caused by E. faecium isolates carrying asa1 gene evolved more frequently to death. This finding may be useful to control the spread of E. faecium in the hospital environment and in haematological patients

Resíduos de Serviços de Saúde (RSS) são definidos e classificados segundo a RDC ANVISA nº 306/2004, sendo que no Grupo A encontram-se aqueles com possível contaminação biológica. As atividades de atendimento, ensino e pesquisa em saúde humana e animal desenvolvidas na Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) geram cerca de 22 toneladas de RSS do Grupo A mensalmente. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os RSS do Grupo A gerados em laboratórios da UFRGS quanto à sua composição e forma de armazenamento, bem como analisar sua contaminação microbiológica, a fim de entender os desafios existentes para a gestão desse Grupo de resíduos. Os resíduos foram caracterizados por massa e volume em dezessete laboratórios de diferentes áreas de pesquisa com material biológico, com base na norma ABNT NBR 10.007/2004. Foram coletadas informações sobre o armazenamento e gerenciamento interno dos resíduos junto aos pesquisadores. A fim de verificar a contaminação microbiana, foram coletadas luvas de látex de todos os laboratórios e foram realizados testes de crescimento, isolamento e identificação dos microrganismos. Os resultados demonstram que existe grande diferença na composição dos resíduos entre os laboratórios, mas que luvas de procedimento (látex e nitrilica), papéis sujos e materiais plásticos (polietileno e polipropileno) são os materiais mais encontrados. Em relação à contaminação dos resíduos, verificou-se que cerca de 50% das amostras coletadas não apresentaram contaminação expressiva (menos de 30 colônias). Foram identificados 38 espécies, sendo quatro de leveduras e 34 de bactérias. O gerenciamento interno também é muito variável entre os laboratórios, sendo que alguns apresentam problemas de acondicionamento e segregação, enquanto outros seguem bons procedimentos, o que dificulta estabelecer uma gestão integrada para a Universidade. Portanto, com base nos resultados, verificamos que é necessário melhorar o gerenciamento dos RSS do Grupo A dos laboratórios da Universidade, pois parte dos materiais descartados nessa categoria não estão efetivamente contaminados. É preciso também levar em consideração às particularidades de cada laboratório, buscando políticas institucionais que atendam às diferentes realidades encontradas na Universidade. / Medical Waste (MW) are defined and classified by RDC ANVISA nº 306/2004.Group A are all solid residues possibly contaminated with pathogenic agents. All the activi-ties in the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) which involve ani-mal or human health monthly generate around 22 tons of MW of Group A. The aim of this study was to characterize the composition of MW of Group A generated in labor-atories of the University, and to analyze its contamination with microorganisms, so to comprehend the challenges of managing these residues. The residues of seventeen labs were characterized by weight and volume using ABNT NBR nº 10.007/2004 as guideline. Information about residues management and storage were obtained with the researches of each lab. In order to verify the presence of microorganisms in the residues, latex gloves were collected from all seventeen laboratories and microbial growth, isolation and identification analyses were performed. The results showed great differences among the labs, however, procedure gloves (latex and nitrile), pa-per and plastic materials (such as polyethylene and polypropylene) were the most representative materials found. Considering the contamination results, about 50% of the samples showed minimal contamination (less than 30 colonies).There was found 38 species of microorganisms, being four yeast and 34 bacteria. The internal man-agement of MW of Group A varies greatly among the labs, while some have good practices, others have difficulties with internal storage and residue segregation, therefore turning its administration very difficult for the University. Therefore, the re-sults show that it’s necessary to develop institutional policies in order to improve MW of Group A management, considering that part of the materials treated as this resi-dues are not contaminated. Nevertheless, since the laboratories have such different realities, it’s critical to take it in consideration, so the institutional policies could be really applied on the daily basis.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-20T14:39:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 260475 bytes, checksum: 75cd7fa15456edf29588849379577fad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T14:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 260475 bytes, checksum: 75cd7fa15456edf29588849379577fad (MD5) Previous issue date: 2002-04-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Conselheiros: Reginaldo da Silva Romeiro e Onkar Dev Dhingra. Sete meios semi-seletivos foram avaliados quanto à sua eficácia em permitir o crescimento de isolados de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli e suprimir o crescimento de contaminantes, objetivando selecionar um meio para utilização na rotina de laboratório. Foram utilizados 48 isolados da bactéria, provenientes de diferentes regiões do Brasil. Todos os meios semi- seletivos apresentaram boa eficiência em permitir o crescimento da bactéria quando preparados sem a adição dos compostos antimicrobianos presentes em suas composições originais. Quando da adição desses compostos aos meios, apenas o meio MXP modificado (M-MXP) não foi eficiente na recuperação da bactéria. Através de antibiogramas qualitativo e quantitativo respectivamente, os isolados do patógeno foram expostos a 43 compostos antimicrobianos, em diferentes concentrações. Foram selecionados sete compostos aos quais todos os isolados se mostraram insensíveis. Quatro destes compostos foram adicionados separadamente e em conjunto ao meio padrão (meio 523), em diferentes concentrações, e permitiram o crescimento de todos os isolados. Os meios semi-seletivos foram testados quanto à sua repressividade, utilizando- se, para tal, seis isolados representativos do total. Verificou-se que houve uma variação muito grande no valor do índice de repressão (IR) dos meios para cada isolado. Em alguns casos, os meios semi-seletivos permitiram maior desenvolvimento da bactéria que o meio padrão. Avaliando-se a supressividade, todos os meios semi-seletivos foram mais eficientes que o meio padrão em suprimir o crescimento de contaminantes associados a sementes de feijão nas duas amostras testadas. / Seven semi-selective media were evaluated for their efficiency to allow the growth of Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli isolates and suppress the growth of contaminants, to select a medium for use in laboratory routine tests. Forty-eight isolates of the bacterium, collected from distinct geographic regions of Brazil, were used. All semi-selective media permitted the growth of all isolates when prepared without the antimicrobial compounds presented on their original formula. When these compounds were added to the media, only the modified MXP did not permitted growth. Using qualitative or quantitative antibiograms, the isolates were exposed to forty-three different antimicrobial compounds and in different concentrations. Seven of these compounds to which the isolates showed insensibility were selected. Four of these compounds were added separately or together to the standard (523 medium), in different concentrations, and tested for growth of all the isolates. The semi- selective media were tested for their repression, using six representative isolates. There was a very high variation in repressing index value of the different media for each isolate. In some cases, the semi-selective media allowed more growth of the bacteria than the standard medium. Evaluating the suppression, all semi-selective media were found to be more efficient than the standard medium for suppressing the growth of contaminants associated with two bean seed samples. / Dissertação importada do Alexandria