Made available in DSpace on 2018-08-24T22:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_4358_Dissertação CarolinaTonani 2010 - of.pdf: 1158275 bytes, checksum: 9c9c0e470f6d5b4b3df63f6a511565f6 (MD5) Previous issue date: 2010-08-20 / Os sistemas de esgotamento sanitário precisam ser aprimorados, revistos e adaptados para atender a uma demanda crescente pelos serviços, cuja carência afeta a maioria da população mundial. Ressalta-se também os demais agravantes que contribuem com o problema, como a escassez de água potável, a falta de recursos financeiros e o aumento populacional. Recentemente, foi resgatada uma idéia milenar sobre o reaproveitamento das excretas para uso como fertilizantes no ambiente. À aplicação desse conceito dá-se o nome de Ecosan ou Saneamento Ecológico. Nesse sistema, os esgotos são segregados na fonte em águas azul, cinza, amarela, marrom e negra (mistura de fezes com urina), para receber tratamento de acordo com suas características e seu potencial de reaproveitamento. As águas marrons, ou material fecal quando isento de água, apresentam particularidades no gerenciamento por possuírem significativo número de microrganismos e por apresentarem problemas psico-sociais na aplicabilidade em larga escala. No entanto, o material fecal é rico em matéria orgânica e possui significativa quantidade de nutrientes, como N e P. O presente estudo teve por objetivo avaliar a biodegradabilidade aeróbia de resíduos de origem fecal. A biodegradabilidade foi avaliada por respirometria aeróbia, utilizando quatro Tratamentos (T 1, T 2, T 3 e T 4) com três bactérias (A, J, N) e um controle (C). Notou-se que a composição dos Tratamentos foi relevante nos resultados obtidos, entre os quais os Tratamentos T1 e T3 apresentaram os maiores valores em mg de CO2. O resultado com menor produção de CO2 em mg foi apresentado no uso de T 4. A inoculação bacteriana não foi representativa, uma vez que A, J e N apresentaram desempenho semelhante entre si, e ainda a bactéria N foi simultaneamente semelhante ao controle (C), não sendo possível identificar a bactéria mais eficiente.

Orientador: Pilar Rodriguez de Massaguer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-19T12:22:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AlbaValeriados_M.pdf: 3650164 bytes, checksum: 441c92341459b833b0467d9ef53a4c5e (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Entre os poucos métodos de esterilização conhecidos para produtos e materiais termo-senslveis, o óxido de Etileno é bastante difundido, especialmente no ambiente hospitalar. Além dos cuidados que devem ser tomados no uso deste gás, são estudados vários parâmetros (concentração de gás, temperatura, umidade relativa, tempo de exposição e material de suporte) que influenciam sua atividade antimicrobiana. Além destes fatores, há a variabilidade inerente a microrganismos que deve ser considerada quando se estuda Indicador Biológico para processos de esterilização. Neste trabalho avaliou-se a resistência ao óxido de Etileno (em mistura com nitrogênio - 45%EO/55%N2 ) de esporos de Bacillus subtilis var. niger (globigii) fixados em tiras de papel ( fitas carregadoras ) produzidos a partir de Indicador Biológico americano (AMSCO) e a partir de esporos liofilizados de Coleção de Culturas alemã (DSM). Verificou-se que não há diferença significativa ( com 95% de nível de confiança ) entre estas duas fontes de esporos. Os Indicadores Biológicos produzidos pela metodologia deste experimento estão padronizados ( dentro dos limites dado pela USP XXII, 1990 e AAMI, 1986 ), porém com diferença significativa ( 95% de nível de confiança ) e resistência menor (16-37% ) quando comparados ao Indicador Biológico AMSCO. Este resultado levou ã avaliação do papel suporte, substituindo o utilizado por papel de menor gramatura e higroscopicidade, não sendo observado diferença significativa entre os dois tipos de papel testados. Sendo a umidade dos esporos fator importante na definição da resistência de Indicadores Biológicos, estudou-se ainda a influência do armazenamento dos Indicadores Biológicos , comparando a refrigeração ( 5-7°C ) e refrigeração + umidade relativa controlada ( 5-7°C, 75,7% UR ), não sendo observada diferença significativa ( com 95% de nível de confiança ) entre estes armazenamentos. Na avaliação dos resultados, comparou-se duas metodologias de cálculo de resistência de Indicador Biológico ( método de Stumbo, Murphy and Cochran, 1950 - Ds e Epstein-Hachigian , 1991 - )não sendo verificado diferença significativa ( com 95% de nível de confiança ) entre os métodos. Os valores de redução decimal ( valor D ) obtidos para os Indicadores Biológicos produzidos variaram de 16 a 24 minutos, enquanto que os Indicadores Biológicos AMSCO forneceram resultados de 25 a 29 minutos. Para as características de processo aqui estudadas, as condições de esterilização definidas foram: T = 27-32 °C UR = 67-81 % C = 694-720 mg/L t = 6 h / Abstract: Within the few known sterilization methods for therraosensitive materials and products, the use of Ethylene Oxide has been widespread, mainly in the hospital environment. Besides Ethylene Oxide carefull handling requirements, several parameters that may influence antimicrobic activities are being studied (gas concentration, temperature, relative humidity, exposure time and support material). In addition to these factors, variability must also be considered when biological indicators for sterilization processes are studied. In this study it was evaluated resistance to Ethylene Oxide (mixed to nitrogen - 45%E0/55%N2 ) of Bacillus subtilis var.niger (globigii) spores in strips of paper (carrier strips) produced from American Biological Indicator (AMSCO) and from lyophilized spores of german culture collection (DSM). There were no significative differences (95% accuracy) observed between these two spores sources. The Biological Indicators produced by the methodology of 'this experiment are standardized (within the limits stated by USP XXII 1990 and AAMI, 1986) but have a significative difference (95% accuracy) and lower resistance (16-37%) if compared to AMSCO Biological Indicator. This conclusion has led to an evaluation of support paper, substituting the one used by another one of less gramature and hygroscopicity. No significative differences were found between them. Since spore humidity is very important to define resistance of biological indicators, further studies were made about influence of Biological Indicators storage by comparing refrigeration conditions ( 5-7ºC and controlled refrigeration + relative humidity (5-7°C, 75,7% RH. No significative differences (95% accuracy) were found. Comparing the two calculation methodologies of biological indicators resistance (Stumbo, Murphy and Cochran, 1950 and Epstein-Hachigian, 1991 methods) no significative differences (95% accuracy) were found in the results evaluation. The decimal reduction ( D value ) for the produced Biological Indicator varied from 16 to 24 minutes, while AMSCO Biological Indicators had values from 25 to 29 minutes. For the process, subject to this study, the defined sterilization conditions were: T = 27- 32 °C UR = 67- 81 % C = 694-720 mg/L t = 6 h / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Magíster en Ciencias de la Ingeniería, Mención Química / El objetivo de este estudio es desarrollar un método computacional capaz de predecir con alta especificidad y sensibilidad los genes pequeños de ARN no codificante en genomas bacterianos, identificando las variables involucradas de mayor importancia que deben ser consideradas para su correcta clasificación. El trabajo aquí presentado consistió en investigar y analizar el estado del arte en métodos de predicción computacional de genes pequeños de ARN no codificante en bacterias, recopilar un listado de las variables involucradas y determinar estadísticamente aquellas que diferencian con mayor precisión los genes pequeños de ARN no codificante de secuencias genéticas al azar, comparar distintos métodos de predicción e identificar el que otorgue mejores resultados. Finalmente, se compararon los resultados del método con otros preexistentes y se aplicó el método al genoma completo de Escherichia coli. Los principales resultados obtenidos en este estudio son la identificación de 4 variables que influyen significativamente en la detección correcta de genes pequeños de ARN no codificante. Estas son: Valor z, Valor de partición, EMPI y Porcentaje de bultos, las cuales corresponden al subconjunto de variables con mayor capacidad discriminatoria. Por este motivo se recomienda que futuros métodos predictivos consideren la inclusión de estas 4 variables. Las variables seleccionadas muestran que existe una presión selectiva en la evolución de los genes pequeños de ARN no codificante, la que apunta a aumentar la estabilidad de la molécula al modificar su estructura para disminuir la energía de plegamiento y eliminar subestructuras desestabilizantes no funcionales. El mejor método de clasificación corresponde al Perceptrón Multicapa basado en redes neuronales, con una alta sensibilidad (88,8%) y alta especificidad (85,5%), teniendo una tasa de falsos positivos relativamente baja (14,5%). Con este subconjunto de variables y el método de clasificación, se realizó una predicción sobre el genoma de la bacteria Escherichia coli, generando 1192 predicciones, con un valor de sensibilidad de 30,5% y un valor predictivo positivo de 1,51 % respecto a los genes pequeños de ARN no codificante conocidos. Seleccionando las predicciones cercanas a promotores σ70 o terminadores intrínsecos (independientes del factor ρ), se obtiene un desempeño predictivo similar al logrado por otros autores en la literatura, con el beneficio adicional de requerir la medición de sólo 4 variables y sin la necesidad de información sobre genes homólogos en organismos cercanos filogenéticamente. La contribución de este trabajo consiste en profundizar el conocimiento acerca de las características de los genes de ARN no codificante, al haber estudiado las variables utilizadas previamente en la literatura y definir las 4 más relevantes, las cuales se relacionan directamente con la estructura secundaria y su energía mínima de plegamiento. En segundo lugar se propone un listado de 1192 secuencias del genoma de Escherichia coli y un listado más corto con las 5 más probables de ser genes sARN, estas secuencias pueden ser comprobadas experimentalmente. Estos resultados inciden positivamente en mejorar la calidad de las anotaciones de estos genes en genomas bacterianos, permitiendo mayores avances en estudios de genómica funcional y regulación en redes metabólicas.

Orientador: Ricardo Andrade Rebelo. / Co-orientador: Caio Mauricio Mendes de Cordova. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

A variação sazonal na produção de compostos secundários em Tithonia diversifolia (Hemsl) Gray foi investigada desde a primavera de 2002 até o inverno de 2003. Coletas bimensais foram realizadas com posterior extração e fracionamento do material vegetal (folhas e flores). As amostras foram monitoradas por CCD e analisadas quanto a atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella choterasuis e Pseudomonas aeruginosa, pelo método de microplaca. Os perfis cromatográficos foral distintos para as diferentes épocas do ano, sendo evidenciada a presença de um grupo de substâncias em maior quantidade no mês de Abril de 2003 (outono), período de pré-florada desta espécie. Os extratos foram ativos para apenas dois microrganismos dentre os quatro testados. Algumas frações apresentaram CIM (concentração inibitória mínima) significativa (<1mg/mL). / The seasonal variation upon production of active compounds in Tithonia diversifolia (Hemsl) Gray was investigated from spring of 2002 until winter of 2003. Leaf samples were collected every three months for posterior extraction and analysis . The samples were monitored by Thin Layer Chromatography (TLC) and analyzed for anti-microbial activities on Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella choterasuis and Pseudomonas aeruginosa, using micro-plate method. The TLC results showed a clear accumulation of active compounds during April . The extracts were active for only two microorganisms of a total of four studied.

O Streptococcus pneumoniae, também conhecido como pneumococo, é um importante agente etiológico causador de pneumonia, bacteremia, meningite e otite aguda do ouvido médio, acometendo especialmente crianças e idosos. A cápsula polissacarídica (PS) é o fator de virulência mais importante e localiza-se na superfície do microrganismo e tem ação anti-fagocítica in vivo. O pneumococo expressa pelo menos 91 cápsulas diferentes, que são química e sorologicamente distintas. Usualmente, a cápsula é o antígeno das vacinas anti-pneumocócicas, tanto como polissacarídeo livre ou conjugado a proteínas. O sorotipo 6B acomete principalmente crianças e é o segundo mais prevalente no Brasil, e a otimização das condições de cultivo buscando maior produtividade em PS é o alvo desta tese. Simultaneamente, também foi investigada a influência do inóculo e da glicose residual no instante do pulso ou do início da alimentação em cultivos descontínuos alimentados. Nos cultivos descontínuos alimentados foi observado que quanto menor a densidade óptica da cultura do inóculo, maior a concentração de PS obtida. A concentração da glicose residual no momento do pulso provavelmente influenciou a produção de PS: a produção foi maior quando o pulso foi dado ainda em altas concentrações de substrato. Por isso, obteve-se uma produção de PS ~390 mg/L em cultivo descontínuo alimentado com pulso, quando DO 600 nm da cultura do inóculo ~1,6 e o pulso de glicose e acetato de amônio ~15 g/L. Observou-se também que, mesmo com DO do inóculo ~1,65, a produção de PS foi somente 248 mg/L, devido à aplicação do pulso quando a concentração de glicose residual era ~4,5 g/L. A menor produção de PS foi obtida quando a DO da cultura do inóculo foi ~2,6 e a concentração de glicose residual ~3,4 g/L, gerando somente 194 mg/L de PS. Assim, cultivos descontínuos alimentados com pulso renderam melhores resultados que os cultivos descontínuos alimentados. A alimentação constante rendeu maior quantidade de PS quando comparada à alimentação exponencial. E tanto os ensaios descontínuos com ou sem pulso e os descontínuos alimentados foram melhores do que os cultivos contínuos, principalmente se considerarmos a facilidade de operação. O efeito da concentração residual da glicose no instante da alimentação na produção de PS é provavelmente influenciado pela presença de outros componentes do meio, devido aos requerimentos nutricionais do pneumococo. O estado fisiológico do inóculo determinou uma importante correlação entre a produção de PS nos cultivos descontínuos alimentados do sorotipo 6B: cultura do inóculo no meio da fase exponencial rendeu maior produção de PS. Esta correlação poderia ser conseqüência do perfil de crescimento do microrganismo in vitro e da ação de enzimas líticas após a fase exponencial. Foi observado, portanto, um efeito sinérgico entre a DO da cultura do inóculo, a concentração de glicose residual no momento de alimentação e produção de PS nos cultivos descontínuos alimentados. / Streptococcus pneumoniae is a major pathogen commonly responsible for pneumonia, bacteraemia, meningitis and otitis media, especially among young children and older adults. The most prominent pneumococcal virulence factor is the capsular polysaccharide (PS), which coats the surface of the bacterium and acts as an antiphagocytic factor in vivo. S. pneumoniae express at least 91 distinct capsules which are chemically and serologically distinct. The capsule is currently used as antigen in pneumococcal vaccines, either as free polysaccharide or conjugated to proteins. Pneumococcal serotype 6B is the second most prevalent in Brazil and the optimization of cultivation conditions is part of this study. Simultaneously we investigated the influence of the growth phase of the inoculum and the residual glucose concentration at the instant of the pulse or the start of feeding on PS production in batch and fed-batch cultivation. Streptococcus pneumoniae serotype 6B strain ST 433/03 was used. Bench scale experiments were carried out using a variant of the Hoeprich medium, containing glucose, acid-hydrolyzed casein, dialyzed yeast extract, L-glutamine and asparagine as nitrogen sources, choline as a growth factor and salts. The experiments were conducted in bioreactors monitored by the LabView 7.1program. It was observed in fed-batch cultivation, that the lower was the OD of the starter culture, the higher was the PS concentration obtained. The residual glucose concentration at the moment of the pulse also influenced the PS production: the PS production was higher when the pulse was given at higher residual glucose concentration. Hence, in fed-batch culture the highest PS production (387 mg/L) was obtained using an OD=1.6 of the starter culture and giving the pulse when the residual glucose was ~15 g/L. Using a similar inoculum (OD=1.65), the PS concentration reached 248 mg/L after giving the pulse when the residual glucose was 4.5 g/L. The lowest PS production was obtained when a culture with an OD=2.6 was inoculated into the reactor and the pulse was given when the residual glucose was 3.4 g/L (PS=194 mg/L). The effect of the residual glucose concentration at the instant of the start of feeding on PS production was probably influenced by the presence of other components in the concentrated feeding medium, which could better fit the nutritional requirements of the microorganism. The physiological state of the inoculum showed an important correlation to the PS production in batch and fed-batch cultivation of S. pneumoniae serotype 6B: mid-log phase inocula yielded high PS production. This correlation is consequence of the in vitro growth profile, the action of lytic enzymes after the log phase. In fed-batch cultivation, it was also observed a synergic effect of the inoculum OD and the residual glucose concentration in the moment of the pulse on PS production.

Os procedimentos de higienização nos matadouros de aves consistem fundamentalmente no uso de água quente, detergentes e sanificantes. Embora a água quente e os detergentes diminuam a carga bacteriana das superfícies, o objetivo principal do seu uso é a remoção de resíduos orgânicos e minerais. A sanitização, que é a última etapa do procedimento de higienização, visa reduzir os microrganismos até níveis seguros, de modo a obter um produto de boa qualidade higiênico-sanitária. Dentre os contaminantes da carne de aves, microrganismos patogênicos apresentam grande relevância como causadores de doenças veiculadas por alimentos e por terem reflexo econômico. Do ponto de vista da segurança e da degradação de alimentos, os biofilmes são importantes devido à sua formação em alimentos, utensílios e superfícies e à sua dificuldade de remoção. Com base na relevância destes temas, nesta tese constam seis trabalhos científicos. No primeiro trabalho foi avaliada a contaminação bacteriana das superfícies em contato com carne de frango através das contagens de microrganismos mesófilos aeróbios, coliformes totais, Escherichia coli, Staphylococcus sp, S. aureus e pesquisa de Salmonella sp. Verificou-se que a E. coli foi detectada na bancada de aço inoxidável e na esteira sobreposta de “nylon”, Staphylococcus sp foi detectado em todas as amostras, S. aureus não foi detectado apenas na bancada de aço inoxidável e em uma das esteiras lisas de poliuretano e Salmonella sp esteve ausente em todas as superfícies analisadas. No trabalho 2 avaliou-se a formação de biofilme em placas de poliestireno por Salmonella Heidelberg isoladas de abatedouros avícolas, cultivadas em caldo TSB com diferentes concentrações de glicose e a hidrofobicidade destas cepas na fase logarítmica (4 h) e na fase estacionária (24 h) do crescimento bacteriano. As S. Heidelberg foram capazes de formar biofilmes no poliestireno, com diferentes fontes de nutrientes, sendo fortemente formadoras de biofilme no caldo TSB sem suplementação de glicose, e foram determinadas como altamente hidrofóbicas e com média hidrofobicidade. O terceiro trabalho foi realizado para comparar o uso de swab e esponja para avaliação de superfícies em contato com alimentos em matadouro de aves. Concluiu-se que não houve diferença estatística entre as duas metodologias para a verificação da higienização em superfícies como as bancadas de aço inoxidável, esteiras de poliuretano, esteira sobreposta de “nylon” e placas de polietileno. No trabalho 4 foi realizada a pesquisa de Salmonella sp e Listeria sp em diferentes superfícies de contato com alimentos e a verificação da eficácia do processo de sanitização. Salmonella sp. não foi isolada em nenhuma das superfícies testadas. Antes da lavagem, isolou-se Listeria welshimeri da esteira de poliuretano e L. monocytogenes da mesa de aço inoxidável, ambas de superfícies contendo resíduos de alimentos. Após a lavagem com água quente isolou-se L. monocytogenes da esteira de poliuretano, sendo que este agente não foi novamente isolado após o tratamento com amônia quaternária a 2%. No trabalho 5 foram avaliadas as condições higiênico-sanitárias das superfícies de uma sala de cortes de abatedouro avícola, utilizando microbiologia convencional (placas Rodac e esponja) e ATP-bioluminescência, para analisar a efetividade da água quente e da ação de três princípios ativos (ácido peracético, amônia quaternária e biguanida) no processo de higienização, quantificando microrganismos mesófilos aeróbios, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e ATP. O método ATP-bioluminescência demonstrou a presença de matéria orgânica em todos os pontos coletados e, assim como a microbiologia convencional, também evidenciou a eficácia da higienização, demonstrando ser um método rápido para a verificação e controle do processo. A utilização das placas Rodac possibilitou uma melhor recuperação de microrganismos que a esponja na quantificação de mesófilos aeróbios, E. coli e S. aureus. Houve redução da contaminação após o uso da água quente. Quanto aos sanitizantes, após o uso da amônia quaternária e do ácido peracético, em todas as superfícies avaliadas, não houve mais recuperação de E. coli e S. aureus. No trabalho 6 foi realizada a quantificação da formação de biofilme em poliestireno por Listeria, Escherichia coli e Staphylococcus aureus isolados de superfícies de abatedouro avícola. As amostras de S. aureus formaram biofilme no poliestireno em pelo menos uma das concentrações testadas, sendo fortemente formadoras em caldo TSB com 2 %, 3 %, 3,5 % e 4 % de glicose. As amostras de Listeria demonstraram-se moderadamente formadoras de biofilme em todas as concentrações de glicose testadas, exceto as cultivadas em TSB com 1,5 % glicose, no qual foram não formadoras e fracamente formadoras. Uma amostra, cultivada no caldo TSB com 3,5 % de glicose, foi a única L. monocytogenes considerada fortemente formadora de biofilme. As amostras de E. coli formaram biofilme em pelo menos uma das concentrações testadas, e foram fortemente formadoras quando cultivadas em caldo TSB com 0 %, 3,5 % e 4 %. / Cleaning procedures at poultry slaughterhouses basically include the use of hot water, detergents and sanitizing agents. Although hot water and detergents reduce the bacterial load on surfaces, their main goal is to remove organic and mineral residues. Sanitization, which is the last cleaning step is targeted at reducing the number of microorganisms to safety levels so as to obtain a product of good hygienic and sanitary quality. Among contaminants of poultry meat, pathogenic microorganisms play a key role as causing agents of foodborne diseases and also have a remarkable economic impact. With respect to food safety and degradation, biofilms are important because of their formation on foods, utensils and surfaces and because they cannot be easily removed. Given the relevance of these issues, the present study includes six scientific articles. The first one assessed bacterial contamination of surfaces in contact with poultry meat based on the counting of aerobic mesophiles, total coliforms, Escherichia coli, Staphylococcus sp, S. aureus and investigation of Salmonella sp. E. coli was detected on stainless steel tables and on the overhead nylon conveyor; Staphylococcus sp was detected in all samples; S. aureus was not detected only on stainless steel tables and on one smooth polyurethane conveyor, and Salmonella sp was not detected in any of the surfaces analyzed. The second article assessed biofilm formation on polystyrene cutting boards by Salmonella Heidelberg isolated from poultry slaughterhouses, grown in TSB at different glucose concentrations, in addition to the hydrophobicity of these strains in the logarithmic phase (4 h) and in the stationary phase (24 h) of bacterial growth. S. Heidelberg strains were capable of forming biofilm on polystyrene, at different nutrient concentrations, and turned out to be strong biofilm producers in TSB without glucose supplement, being regarded as highly and moderately hydrophic. The third article compared the use of swab and sponge in the assessment of surfaces in contact with foods at a poultry slaughterhouse. It concluded that there was no statistical difference between the two methods used to check the cleaning of surfaces such as stainless steel tables, polyurethane conveyors, overhead nylon conveyors and polyethylene cutting boards. Article 4 investigated Salmonella sp and Listeria sp on different surfaces in contact with foods and the efficacy of the sanitization process. Salmonella sp. was not isolated on any of the surfaces analyzed. Before washing, Listeria welshimeri was isolated from the polyurethane conveyor and L. monocytogenes from the stainless steel table, both from surfaces that contained food residues. After hot water washing, L. monocytogenes was isolated from the polyurethane conveyor, but this pathogen was not detected again after cleaning with 2% quaternary ammonium. Article 5 assessed the cleaning and hygiene of surfaces in the cutting room of a poultry slaughterhouse using conventional microbiological methods (Rodac plates and sponge) and ATP-bioluminescence to assess the effectiveness of hot water and the action of three active ingredients (peracetic acid, quaternary ammonium and biguanide) in the sanitization process, quantifying aerobic mesophilic microorganisms, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and ATP. The ATP-bioluminescence assay revealed presence of organic matter at all sites analyzed and, as with conventional microbiology, it also demonstrated that sanitization was efficacious, proving that it is a quick method for inspecting and controlling the process. The use of Rodac plates allowed for better recovery of microorganisms than the sponge in the quantification of aerobic mesophiles, E. coli and S. aureus. Contamination was reduced after hot water use. With regard to sanitizing agents, E. coli and S. aureus were no longer detected on any of the surfaces analyzed after the use of quaternary ammonium and peracetic acid. The last article quantified biofilm formation on polystyrene by Listeria, Escherichia coli and Staphylococcus aureus isolated from surfaces at a poultry slaughterhouse. S. aureus strains formed biofilm on polystyrene at least at one of the concentrations tested, being strong biofilm producers in TSB with 2, 3, 3.5 and 4% of glucose. Listeria strains were moderate biofilm producers at all glucose concentrations, except for those grown in TSB containing 1.5% of glucose, in which they did not form biofilm or were weak producers. One L. monocytogenes strain, grown in TSB with 3.5% of glucose, was the only one regarded as strong biofilm producer. E. coli strains analyzed formed biofilm at least at one of the concentrations and were strong biofilm producers when grown in TSB with 0, 3.5 and 4% of glucose.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-04Bitstream added on 2014-06-13T20:33:02Z : No. of bitstreams: 1 pedroso_tm_me_arafcf_parcial.pdf: 91662 bytes, checksum: f5c6c2b00880819f56fc5a7a78654f9d (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-13T18:26:27Z: pedroso_tm_me_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-04-13T18:27:06Z : No. of bitstreams: 1 000712772.pdf: 1022206 bytes, checksum: 44846063b688caab618840158e9fc515 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os antimicrobianos têm um papel fundamental no controle de doenças infecciosas. As cefalosporinas se mantêm como uma classe de antimicrobianos que se sobressaem pela sua importância terapêutica, elevada frequência de utilização, segurança e efetividade contra um amplo espectro microbiano. A cefazolina sódica (CFZ) é um agente antimicrobiano β-lactâmico, classificada como cefalosporina de primeira geração, muito utilizado como agente terapêutico e na profilaxia perioperatória. Neste trabalho foram desenvolvidos novos métodos analíticos para análise qualitativa e para a quantificação de cefazolina sódica, visando a obtenção de métodos mais rápidos, mais seguros para os operadores, mais econômicos e de fácil execução, que são essenciais para a análise desta cefalosporina na indústria farmacêutica. Na análise qualitativa, a cefazolina foi estudada quanto a sua solubilidade, ponto de fusão, pH, espectrofotometria na região do ultravioleta (UV) e na região de infravermelho (IV), cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), possibilitando a identificação da amostra. Para quantificação do fármaco três métodos foram validados. O método espectrofotométrico na região do ultravioleta foi validado utilizando o comprimento de onda de 270 nm, com faixa linear de concentração de 8 a 28 μg/mL utilizando água purificada como solvente, o teor foi de 99,10% e a exatidão foi de 100,56%. Ensaio microbiológico por método turbidimétrico utilizou o micro-organismo Staphylococcus aureus ATCC 26923, com faixa linear de 6 a 11,46 μg/mL e apresentou potência de 100,07% e exatidão foi 99,92%. A validação do método por CLAE foi realizada empregando fase móvel composta por água purificada e acetonitrila (60:40 v/v), com pH 8 ajustado com trietilamina (TEA), no comprimento de onda... / The antimicrobials have a crucial role in the control of infectious diseases. Cephalosporins remain one class of antimicrobials that stand out for their therapeutic importance, high frequency of use, safety and effectiveness against a broad microbial spectrum. Cefazolin sodium (CFZ) is a β-lactam antimicrobial agent, classified as first-generation cephalosporin, often used as a therapeutic agent and for perioperative prophylaxis. In this work, new analytical methods were developed for qualitative and quantitative analysis of cefazolin sodium in lyophilized powder, seeking obtain method faster, safer for operators, more economical and easiness of implementation, which are essential for the analysis of this cephalosporin in pharmaceutical industry. For qualitative analysis, several methods were performed, including analyzes of solubility, melting point and pH; ultraviolet (UV) and infrared (IR) spectrophotometry; thin layer chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) allowing the identification of samples. For quantification of the drug, three analytical methods were validated. The spectrophotometric method in the ultraviolet region was validated at 270 nm, with a linear range of concentration from 8 to 28 mg/mL, using purified water as solvent, the content of 99.10% accuracy of 100.56%. In the microbiological assay by turbidimetric method, Staphylococcus aureus ATCC 26923 was used as microrganism test, with linear range from 6 to 11.46 mg/mL, the method presented potency of 100.07% and accuracy of 99,92%. Validation of the HPLC method consisted of mobile phase composed of purified water and acetonitrile (60:40 v/v), adjusted to pH 8 with triethylamine (TEA), and detection wavelength of 270 nm, yielding a retention time of 3.6 minutes in the linear range evaluated from 30 to 80 μg/mL, content... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Armando da Silva Cunha Junior / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: Os antimicrobianos têm um papel fundamental no controle de doenças infecciosas. As cefalosporinas se mantêm como uma classe de antimicrobianos que se sobressaem pela sua importância terapêutica, elevada frequência de utilização, segurança e efetividade contra um amplo espectro microbiano. A cefazolina sódica (CFZ) é um agente antimicrobiano β-lactâmico, classificada como cefalosporina de primeira geração, muito utilizado como agente terapêutico e na profilaxia perioperatória. Neste trabalho foram desenvolvidos novos métodos analíticos para análise qualitativa e para a quantificação de cefazolina sódica, visando a obtenção de métodos mais rápidos, mais seguros para os operadores, mais econômicos e de fácil execução, que são essenciais para a análise desta cefalosporina na indústria farmacêutica. Na análise qualitativa, a cefazolina foi estudada quanto a sua solubilidade, ponto de fusão, pH, espectrofotometria na região do ultravioleta (UV) e na região de infravermelho (IV), cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), possibilitando a identificação da amostra. Para quantificação do fármaco três métodos foram validados. O método espectrofotométrico na região do ultravioleta foi validado utilizando o comprimento de onda de 270 nm, com faixa linear de concentração de 8 a 28 μg/mL utilizando água purificada como solvente, o teor foi de 99,10% e a exatidão foi de 100,56%. Ensaio microbiológico por método turbidimétrico utilizou o micro-organismo Staphylococcus aureus ATCC 26923, com faixa linear de 6 a 11,46 μg/mL e apresentou potência de 100,07% e exatidão foi 99,92%. A validação do método por CLAE foi realizada empregando fase móvel composta por água purificada e acetonitrila (60:40 v/v), com pH 8 ajustado com trietilamina (TEA), no comprimento de onda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The antimicrobials have a crucial role in the control of infectious diseases. Cephalosporins remain one class of antimicrobials that stand out for their therapeutic importance, high frequency of use, safety and effectiveness against a broad microbial spectrum. Cefazolin sodium (CFZ) is a β-lactam antimicrobial agent, classified as first-generation cephalosporin, often used as a therapeutic agent and for perioperative prophylaxis. In this work, new analytical methods were developed for qualitative and quantitative analysis of cefazolin sodium in lyophilized powder, seeking obtain method faster, safer for operators, more economical and easiness of implementation, which are essential for the analysis of this cephalosporin in pharmaceutical industry. For qualitative analysis, several methods were performed, including analyzes of solubility, melting point and pH; ultraviolet (UV) and infrared (IR) spectrophotometry; thin layer chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) allowing the identification of samples. For quantification of the drug, three analytical methods were validated. The spectrophotometric method in the ultraviolet region was validated at 270 nm, with a linear range of concentration from 8 to 28 mg/mL, using purified water as solvent, the content of 99.10% accuracy of 100.56%. In the microbiological assay by turbidimetric method, Staphylococcus aureus ATCC 26923 was used as microrganism test, with linear range from 6 to 11.46 mg/mL, the method presented potency of 100.07% and accuracy of 99,92%. Validation of the HPLC method consisted of mobile phase composed of purified water and acetonitrile (60:40 v/v), adjusted to pH 8 with triethylamine (TEA), and detection wavelength of 270 nm, yielding a retention time of 3.6 minutes in the linear range evaluated from 30 to 80 μg/mL, content... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os procedimentos de higienização nos matadouros de aves consistem fundamentalmente no uso de água quente, detergentes e sanificantes. Embora a água quente e os detergentes diminuam a carga bacteriana das superfícies, o objetivo principal do seu uso é a remoção de resíduos orgânicos e minerais. A sanitização, que é a última etapa do procedimento de higienização, visa reduzir os microrganismos até níveis seguros, de modo a obter um produto de boa qualidade higiênico-sanitária. Dentre os contaminantes da carne de aves, microrganismos patogênicos apresentam grande relevância como causadores de doenças veiculadas por alimentos e por terem reflexo econômico. Do ponto de vista da segurança e da degradação de alimentos, os biofilmes são importantes devido à sua formação em alimentos, utensílios e superfícies e à sua dificuldade de remoção. Com base na relevância destes temas, nesta tese constam seis trabalhos científicos. No primeiro trabalho foi avaliada a contaminação bacteriana das superfícies em contato com carne de frango através das contagens de microrganismos mesófilos aeróbios, coliformes totais, Escherichia coli, Staphylococcus sp, S. aureus e pesquisa de Salmonella sp. Verificou-se que a E. coli foi detectada na bancada de aço inoxidável e na esteira sobreposta de “nylon”, Staphylococcus sp foi detectado em todas as amostras, S. aureus não foi detectado apenas na bancada de aço inoxidável e em uma das esteiras lisas de poliuretano e Salmonella sp esteve ausente em todas as superfícies analisadas. No trabalho 2 avaliou-se a formação de biofilme em placas de poliestireno por Salmonella Heidelberg isoladas de abatedouros avícolas, cultivadas em caldo TSB com diferentes concentrações de glicose e a hidrofobicidade destas cepas na fase logarítmica (4 h) e na fase estacionária (24 h) do crescimento bacteriano. As S. Heidelberg foram capazes de formar biofilmes no poliestireno, com diferentes fontes de nutrientes, sendo fortemente formadoras de biofilme no caldo TSB sem suplementação de glicose, e foram determinadas como altamente hidrofóbicas e com média hidrofobicidade. O terceiro trabalho foi realizado para comparar o uso de swab e esponja para avaliação de superfícies em contato com alimentos em matadouro de aves. Concluiu-se que não houve diferença estatística entre as duas metodologias para a verificação da higienização em superfícies como as bancadas de aço inoxidável, esteiras de poliuretano, esteira sobreposta de “nylon” e placas de polietileno. No trabalho 4 foi realizada a pesquisa de Salmonella sp e Listeria sp em diferentes superfícies de contato com alimentos e a verificação da eficácia do processo de sanitização. Salmonella sp. não foi isolada em nenhuma das superfícies testadas. Antes da lavagem, isolou-se Listeria welshimeri da esteira de poliuretano e L. monocytogenes da mesa de aço inoxidável, ambas de superfícies contendo resíduos de alimentos. Após a lavagem com água quente isolou-se L. monocytogenes da esteira de poliuretano, sendo que este agente não foi novamente isolado após o tratamento com amônia quaternária a 2%. No trabalho 5 foram avaliadas as condições higiênico-sanitárias das superfícies de uma sala de cortes de abatedouro avícola, utilizando microbiologia convencional (placas Rodac e esponja) e ATP-bioluminescência, para analisar a efetividade da água quente e da ação de três princípios ativos (ácido peracético, amônia quaternária e biguanida) no processo de higienização, quantificando microrganismos mesófilos aeróbios, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e ATP. O método ATP-bioluminescência demonstrou a presença de matéria orgânica em todos os pontos coletados e, assim como a microbiologia convencional, também evidenciou a eficácia da higienização, demonstrando ser um método rápido para a verificação e controle do processo. A utilização das placas Rodac possibilitou uma melhor recuperação de microrganismos que a esponja na quantificação de mesófilos aeróbios, E. coli e S. aureus. Houve redução da contaminação após o uso da água quente. Quanto aos sanitizantes, após o uso da amônia quaternária e do ácido peracético, em todas as superfícies avaliadas, não houve mais recuperação de E. coli e S. aureus. No trabalho 6 foi realizada a quantificação da formação de biofilme em poliestireno por Listeria, Escherichia coli e Staphylococcus aureus isolados de superfícies de abatedouro avícola. As amostras de S. aureus formaram biofilme no poliestireno em pelo menos uma das concentrações testadas, sendo fortemente formadoras em caldo TSB com 2 %, 3 %, 3,5 % e 4 % de glicose. As amostras de Listeria demonstraram-se moderadamente formadoras de biofilme em todas as concentrações de glicose testadas, exceto as cultivadas em TSB com 1,5 % glicose, no qual foram não formadoras e fracamente formadoras. Uma amostra, cultivada no caldo TSB com 3,5 % de glicose, foi a única L. monocytogenes considerada fortemente formadora de biofilme. As amostras de E. coli formaram biofilme em pelo menos uma das concentrações testadas, e foram fortemente formadoras quando cultivadas em caldo TSB com 0 %, 3,5 % e 4 %. / Cleaning procedures at poultry slaughterhouses basically include the use of hot water, detergents and sanitizing agents. Although hot water and detergents reduce the bacterial load on surfaces, their main goal is to remove organic and mineral residues. Sanitization, which is the last cleaning step is targeted at reducing the number of microorganisms to safety levels so as to obtain a product of good hygienic and sanitary quality. Among contaminants of poultry meat, pathogenic microorganisms play a key role as causing agents of foodborne diseases and also have a remarkable economic impact. With respect to food safety and degradation, biofilms are important because of their formation on foods, utensils and surfaces and because they cannot be easily removed. Given the relevance of these issues, the present study includes six scientific articles. The first one assessed bacterial contamination of surfaces in contact with poultry meat based on the counting of aerobic mesophiles, total coliforms, Escherichia coli, Staphylococcus sp, S. aureus and investigation of Salmonella sp. E. coli was detected on stainless steel tables and on the overhead nylon conveyor; Staphylococcus sp was detected in all samples; S. aureus was not detected only on stainless steel tables and on one smooth polyurethane conveyor, and Salmonella sp was not detected in any of the surfaces analyzed. The second article assessed biofilm formation on polystyrene cutting boards by Salmonella Heidelberg isolated from poultry slaughterhouses, grown in TSB at different glucose concentrations, in addition to the hydrophobicity of these strains in the logarithmic phase (4 h) and in the stationary phase (24 h) of bacterial growth. S. Heidelberg strains were capable of forming biofilm on polystyrene, at different nutrient concentrations, and turned out to be strong biofilm producers in TSB without glucose supplement, being regarded as highly and moderately hydrophic. The third article compared the use of swab and sponge in the assessment of surfaces in contact with foods at a poultry slaughterhouse. It concluded that there was no statistical difference between the two methods used to check the cleaning of surfaces such as stainless steel tables, polyurethane conveyors, overhead nylon conveyors and polyethylene cutting boards. Article 4 investigated Salmonella sp and Listeria sp on different surfaces in contact with foods and the efficacy of the sanitization process. Salmonella sp. was not isolated on any of the surfaces analyzed. Before washing, Listeria welshimeri was isolated from the polyurethane conveyor and L. monocytogenes from the stainless steel table, both from surfaces that contained food residues. After hot water washing, L. monocytogenes was isolated from the polyurethane conveyor, but this pathogen was not detected again after cleaning with 2% quaternary ammonium. Article 5 assessed the cleaning and hygiene of surfaces in the cutting room of a poultry slaughterhouse using conventional microbiological methods (Rodac plates and sponge) and ATP-bioluminescence to assess the effectiveness of hot water and the action of three active ingredients (peracetic acid, quaternary ammonium and biguanide) in the sanitization process, quantifying aerobic mesophilic microorganisms, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and ATP. The ATP-bioluminescence assay revealed presence of organic matter at all sites analyzed and, as with conventional microbiology, it also demonstrated that sanitization was efficacious, proving that it is a quick method for inspecting and controlling the process. The use of Rodac plates allowed for better recovery of microorganisms than the sponge in the quantification of aerobic mesophiles, E. coli and S. aureus. Contamination was reduced after hot water use. With regard to sanitizing agents, E. coli and S. aureus were no longer detected on any of the surfaces analyzed after the use of quaternary ammonium and peracetic acid. The last article quantified biofilm formation on polystyrene by Listeria, Escherichia coli and Staphylococcus aureus isolated from surfaces at a poultry slaughterhouse. S. aureus strains formed biofilm on polystyrene at least at one of the concentrations tested, being strong biofilm producers in TSB with 2, 3, 3.5 and 4% of glucose. Listeria strains were moderate biofilm producers at all glucose concentrations, except for those grown in TSB containing 1.5% of glucose, in which they did not form biofilm or were weak producers. One L. monocytogenes strain, grown in TSB with 3.5% of glucose, was the only one regarded as strong biofilm producer. E. coli strains analyzed formed biofilm at least at one of the concentrations and were strong biofilm producers when grown in TSB with 0, 3.5 and 4% of glucose.