Diversos aspectos vêm sendo estudados com relação à introdução de novas variedades de mirtilo no Brasil. A polinização de culturas tipicamente de clima temperado em clima tropical representa um enorme desafio para adaptação dessa cultura no país. Estudos relacionados à biologia básica da reprodução e ecologia da polinização envolvendo abelhas nas variedades do tipo Southern Highbush, ainda são inexistentes no Brasil e serão importantes para disseminação do cultivo. Levando-se em consideração que um dos aspectos determinantes dos efeitos de plantas exóticas nas comunidades nativas é a forma como interagem com a fauna, esse trabalho buscou identificar algumas variáveis relacionadas à polinização envolvidas no processo de produção comercial da cultura do mirtilo. Os objetivos do trabalho foram: compreender aspectos básicos relacionados ao sistema de polinização em quatro variedades do tipo Southern Highbush; identificar os requerimentos básicos de polinização; observar as abelhas presentes na área de produção e observar o comportamento de visita floral e a sobrevivência de abelhas sem ferrão de cinco espécies diferentes (Melipona quadrifasciata, Frieseomelitta varia, Scaptotrigona depilis, Tetragonisca angustula e Plebeia droryana) introduzidas em área de produção comercial de mirtilo. Observações diretas no campo foram realizadas para variáveis como formação de frutos expostos ou não a polinizadores, tamanho de flores, danos às flores por abelhas do gênero Trigona, entre outros. O florescimento das quatro variedades na área de produção apresentou um comportamento muito semelhante com pequenas variações ao longo do período de observação. Iniciou por volta da última semana de fevereiro com menos de 1% das plantas floridas, e uma predominância da variedade Emerald no início do florescimento. O pico de florescimento ocorreu nos meses de março a julho, com final de florescimento bastante determinado em setembro. O período de antese das flores foi observado para todas as quatro variedades, das 07:00h até às 09:00h da manhã. Após esse período a flor permanecia aberta até sua senescência, cerca de seis a sete dias depois. Os estigmas das quatro variedades permaneceram receptivos desde a abertura da flor até o sexto dia após a antese. A viabilidade polínica foi verificada desde antese da flor até o momento de senescência da mesma. Um percentual de 89% dos grãos pólen contabilizados, nas quatro variedades avaliadas, apresentou-se viável até o quarto dia de vida da flor. Abelhas da espécie Frieseomelitta varia, Tetragonisca angustula e Plebeia droryana estiveram presentes em todas as observações. Já abelhas do gênero Melipona quadrifasciata e Scaptotrigona depilis não foram observadas visitando as flores de mirtilo. Os resultados mostram que mesmo em um ambiente com uma intensidade grande de manejo fitossanitário as abelhas suportaram razoavelmente bem, com apenas uma ocorrência de mortalidade de colônias. Os danos provocados por abelhas do gênero Trigona não foram severos e após a introdução de abelhas manejáveis, abelhas do gênero Trigona não foram mais observadas na área de produção. Concluímos que a cultura do mirtilo é amplamente beneficiada pela polinização cruzada e o manejo de determinados polinizadores nativos, além da abelha exótica Apis mellifera, contribui com o aumento da produtividade da cultura. / Several aspects have been studied in relation to the introduction of new blueberry varieties in Brazil. Pollination of crops typically temperate in tropical climate presents a huge challenge to adapt this crop in the country. Studies related to basic breeding biology and pollination ecology involving bees in Southern Highbush varieties are still non-existent in Brazil and will be important for dissemination of the crop. Taking into account that one of the determinant aspects of the effects of exotic plants in native communities is the way they interact with the fauna, this work sought to identify some variables related to the pollination involved in the commercial production process of the blueberry crop. The objectives of this work were: to understand basic aspects related to the pollination system in four Southern Highbush varieties; identify the basic pollination requirements; (Melipona quadrifasciata, Frieseomelitta varia, Scaptotrigona depilis, Tetragonisca angustula and Plebeia droryana) introduced into the commercial production area of blueberry . Direct observations in the field were performed for variables such as the formation of fruit exposed or not to pollinators, size of flowers, damage to flowers by bees of the genus Trigona, among others. The flowering of the four varieties in the production area showed a very similar behavior with small variations throughout the period of observation. It began around the last week of February with less than 1% of flowering plants, and a predominance of the \'Emerald\' variety at the beginning of flowering. The flowering peak occurred in the months of March to July, with a flowering end determined in September. The anthesis period of the flowers was observed for all four varieties, from 7:00 a.m. to 9:00 a.m. in the morning. After this period the flower remained open until its senescence, about six to seven days later. The stigmas of the four varieties remained receptive from the opening of the flower to the sixth day after the anthesis. The pollen viability was verified from before the flower until the moment of its senescence. A percentage of 89% of the pollen grains counted, in the four varieties evaluated, was viable until the fourth day of life of the flower. Bees of the species Frieseomelitta varia, Tetragonisca angustula and Plebeia droryana were present in all observations. Bees of the genus Melipona quadrifasciata and Scaptotrigona depilis were not observed were not observed visiting the blueberry flowers. The results show that even in an environment with a great intensity of phytosanitary management the bees supported reasonably well, with only one occurrence of colony mortality. The damage caused by bees of the genus Trigona was not severe and after the introduction of manageable bees, bees of the genus Trigona were no longer observed in the production area. We conclude that blueberry cultivation is widely benefited by cross - pollination and the management of certain native pollinators, in addition to the exotic bee Apis mellifera, contributes to the increase of crop productivity.

O presente trabalho teve, como objetivos, a) desenvolver um procedimento para estabelecer, em abelhas Melipona quadrifasciata anthidioides, a resposta de escolha de acordo com o modelo, com base em dados da literatura; b) testar o procedimento elaborado; c) aperfeiçoar ou modificar esse procedimento, com base nos dados obtidos. Como o procedimento, inicialmente proposto para ser testado, tivesse se mostrado ineficaz para instalar a resposta desejada, várias modificações foram efetuadas com base nos dados que estavam sendo produzidos, até chegar à elaboração de um procedimento eficaz para instalar, nos sujeitos, a resposta de escolha de acordo com o modelo, utilizando estímulos de duas cores diferentes. Esse procedimento iniciava-se com a apresentação de apenas dois cartões de tamanhos diferentes, sendo que o maior (SD ) englobava os estímulos modelo e de comparação de mesma cor. Através de fading da dimensão tamanho, o modelo era gradualmente separado do estímulo de comparação de mesma cor, ate que os três estímulos ficassem igualmente espaçados e distribuídos em três cartões de igual tamanho. Os resultados obtidos com esse procedimento mostraram um ,aumento gradativo na porcentagem de RD, até estabilizar na porcentagem máxima; cada aumento na distância entre os estímulos era seguido de uma diminuição, pequena e de curta duração, na porcentagem de RD Esses resultados, e os obtidos com outros procedimentos utilizados, foram discutidos em ter mos dos efeitos das modificações efetuadas na situação experimental sobre o desempenho dos sujeitos. / The present work has, as main goal, the development of a procedure to stablish matching-to-sample response in bees (Melipona quadrifasciata anthidioides ). Based on an analysis of the literature, a procedure was chosed. The data of the testing of such a procedure, showed the need to introduce several modifications, until gradual improvement of the final procedure was achieved. The dimension along which the work was developed was wavelength. On the final procedure, two post cards of different sizes were used, the e larger one contained both the standard and one of the comparison stimuli, the smaller card contained the remaining comparison stimulus, and initially this was always the one not-to-be-chosen. Gradually, standard and comparison stimuli present in the same card were separated, by fading the size dimension, until all three stimuli were evenly spaced and distributed on three equal size cards. Under this procedure, correct responses showed a gradual increase reaching the maximum percentage of correct responses. Each increase in the space between the standard and the to-be-chosen comparison stimulus was followed by an small and short living decrease in the percentage of correct responses. Different features of this, and other discarded procedures were analyzed in connection to the subjects performance.

Large volumes of antisera were generated against Apis melli/era venom with which to develop a novel, platform technology for the inexpensive production of anti venoms. The ovine sera contained high levels of specific antibodies which neutralised the myotoxic, phospholipase A2 and in vivo activities of the venom. Methods of processing the antisera to provide Fab or F(ab')2 were investigated. F(ab')2 was thought to be clinically advantageous and, by determining the conditions necessary for the preferential breakdown of Fc and serum components other than F(ab')2' it was possible to avoid salt precipitation. Diafiltration was then used to remove most of the unwanted small fragments and anion-exchange chromatography to remove any remaining acidic impurities such as pepsin and large aggregates. The F(ab')2 was -97% pure and the yield - 199 per L of serum. This is the first specific therapy for mass envenoming by European or Africanised bees. Spiders of the genus Latrodectus (black widows) are distributed widely and about 2,500 bites are reported annually in the USA. The neurotoxic effects of the venom were studied on the isolated phrenic nerve diaphragm preparation. Low venom concentrations (ImgIL) were stimulatory while high concentrations (IOmg/L) caused nerve blockade which was potentiated by increased calcium levels. Although effective, the Merck antivenom, which is unprocessed horse serum, causes unacceptable risks. The second purpose of this project was to prepare an improved Latrodectus spider antivenom using the new platform technology. Different immunisation schedules were studied to optimise the humoral immune response. Sheep immunised with 2mg La. hesperus venom produced the highest levels of specific antibodies as assessed by ELISA, using the isolated nerve diaphragm preparation or in vivo in mice. The new process provided a pure F(ab')2 antivenom retaining 78% of the original antisera ED so neutralising power and was - twice as effective as the Merck antivenom.

Em abelhas, como nos demais himenópteros, a haplodiploidia e o mecanismo de determinação do sexo restringem o tamanho efetivo da população. Ademais, a nidificação próxima ao sítio natal pelas fêmeas das espécies solitárias restringe o fluxo gênico materno e causa alta viscosidade populacional. Centris é um gênero de abelhas solitárias da tribo Centridini, encontradas em distintos locais, como matas contínuas ou fragmentos florestais, bem como em ambientes urbanos; as espécies C. analis e C. tarsata se destacam no gênero pela abundância com que são encontradas nestas localidades. São abelhas poliléticas ou generalistas na coleta de pólen e nidificam em cavidades pré-existentes. Em razão de seu porte médio, presume-se que não apresentem alta capacidade de dispersão. Fêmeas de algumas espécies do gênero apresentam comportamento filopátrico. Estes dados nos levam a supor que espécies com traços biológicos similares tenham suas populações naturalmente estruturadas (subdivididas). Para testar esta hipótese, foram analisadas algumas regiões do genoma mitocondrial (DNAmt) de abelhas Centridini residentes em áreas urbanas. As duas subunidades da citocromo c oxidase (COI e COII), bem como o RNA transportador de leucina (RNAtLeu), apresentaram baixo nível de variação intra-específica, e a dificuldade em amplificar estas regiões para uma das espécies impediu a utilização destas regiões para análises populacionais. Desta forma, foram selecionadas duas regiões gênicas com taxas de variação intra-específicas distintas, o gene citocromo b (cytb) e a subunidade maior do DNA ribossômico (16S). Por ser uma molécula de herança materna, a análise destas regiões gênicas nos permitiu obter informações a respeito de colonização e o número de linhagens maternas. Os resultados deste trabalho sugerem que as populações de Centris tarsata e Centris trigonoides apresentam baixa e moderada estruturação, respectivamente. Para C. analis, a espécie mais bem amostrada, o excesso de picos duplos apresentados nos eletroferogramas dificultou a interpretação dos resultados. Foi possível ainda verificar diferenças na distribuição haplotípica de machos e fêmeas de C. tarsata, sugerindo a ocorrência de uma dispersão enviesada para machos, caracterizando uma dispersão sexo-assimétrica. / In bees, as in other hymenopterans, the haplodiploidy and mechanism of sex determination constrain the effective population size. Moreover, the nesting close to home site by the females of solitary species restricts maternal gene flow and causes high population viscosity. Centris is a genus of solitary bees of the tribe Centridini found in different locations, such as continuous forests or forest fragments, as well as in urban environments; the species C. analis and C. tarsata stand out in the genre for the abundance that are found in these locations. They are polyletics bees, or generalists in collecting pollen, and nest in cavities pre-existing. In reason of its medium size, it is presumed that do not present high dispersal capacity. How some species of the genus are phylopatric, we presume that other also presenting similar behavior. These data lead us to suppose that species with similar traits have their populations naturally structured (subdivided). To test this hypothesis, we analyzed urban populations of four species of Centris for some regions of mitochondrial genome (mtDNA). The two subunits of cytochrome c oxidase (COI and COII) and the tRNA leucine (tRNALeu) showed a low level of intraspecific variation, and the difficulty to amplify those regions for one species prevented the use of these regions to population analysis. Thus, we selected two gene regions with distinct rates of intra-specific variation, the gene cytochrome b (cytb) and the large subunit ribosomal DNA (16S). As a molecule maternally inherited, the analysis of the mitochondrial genes enabled us to obtain informations about colonization through the number of maternal lineages. Our results suggest that Centris tarsata and Centris trigonoides populations exhibit low and moderate genetic structuring, respectively. In C. analis, the species most well sampled, the excess of double peaks showed in the electropherograms difficults the interpretation of results. Also, for the species C. tarsata was possible to verify differences between males and females, suggesting the occurrence of a male skewed dispersion and an asymmetrical dispersion.

Em colônias de insetos eussociais, é prevista uma demanda conflitante entre a produção de operárias e indivíduos reprodutivos, visto que operárias realizam tarefas essenciais para a sobrevivência da colônia, enquanto machos e rainhas estão relacionados com a reprodução. Nesse trabalho, foram testadas as hipóteses (1) que a produção de sexuados estaria diretamente relacionada com a disponibilidade de recursos alimentares e (2) que haveria uma regulação temporal da produção de sexuados, com épocas mais favoráveis à produção de reprodutivos (verão) e menos favoráveis (inverno). O sistema de estudo foi a abelha sem ferrão Scaptotrigona aff. depilis e foram realizados dois experimentos. No primeiro experimento, na estação de verão, foram montadas quinze colônias padronizadas e sorteadas em cinco grupos experimentais. Os grupos A2 e C2 receberam o dobro de alimentação artificial (xarope de açúcar e pólen apícola) do que os grupos A1 e C1. As colônias dos grupos C2 e C1 foram mantidas confinadas, enquanto as colônias dos grupos A2 e A1 podiam forragear livremente. O grupo A0 (controle) não recebeu alimentação artificial e as colônias permaneceram abertas. No inverno, o mesmo experimento foi realizado, porém apenas com os grupos com colônias abertas. No experimento 2, a quantidade de pólen estocado nas colônias foi manipulada. As colônias do grupo Co não foram manipuladas e apresentaram em média 44 potes de pólen, as colônias do grupo A receberam em média 96 potes e as colônias do grupo B, 12 potes. No experimento 1, para o verão, foi encontrado um efeito significativo do confinamento, porém, nas duas estações, não houve efeito da quantidade de alimento sobre a produção de sexuados. Nas duas estações, verificou-se grande variação dentro dos grupos e a produção de machos foi dominada por poucas colônias. Não houve diferenças em relação à produção de sexuados entre as estações. No inverno, a produção de machos e células reais foi correlacionada positivamente com a quantidade de potes de alimento nas colônias. No experimento 2, apesar das diferenças iniciais quanto ao alimento armazenado, houve uma rápida recuperação dos estoques de alimento, principalmente pelo grupo B. Não foi verificada diferença na produção de sexuados devido ao tratamento experimental, porém, a produção de machos foi correlacionada com o número de potes de pólen nos ninhos, como no experimento 1. Considerando esses resultados em conjunto, não foi possível refutar as hipóteses de efeito positivo da quantidade de recursos alimentares e de efeito da sazonalidade sobre a produção de sexuados em S. aff. depilis. / In colonies of eusocial insects, it is expected a trade-off in resource allocation between worker and sexual offspring production, as workers perform tasks essential to colony\'s survival, while males and queens are associated with reproduction. In this study, we tested the following hypotheses: (1) that sexual offspring production would be directly related to food resources availability and (2) that there would be a temporal regulation of sexual offspring production, with a favorable season to reproductives production (summer) and a less favorable season (winter). The study system was the stingless bee Scaptotrigona aff. depilis and two experiments were conducted. In the first experiment, in summer, fifteen standardized colonies were set up and randomly assigned into five groups. Groups A2 and C2 received twice the amount of artificial food (sugar syrup and Apis mellifera pollen) than colonies from groups A1 and C1. Colonies from groups C2 and C1 were kept confined, while colonies from groups A2 and A1 could forage freely. The control group A0 did not receive any artificial food and the colonies remained open. In the winter the same experiment was carried out, only with groups with open colonies. In experiment 2, the amount of pollen stored in the colonies was manipulated. The colonies of group Co were not manipulated and presented a mean number of 44 pots of pollen, colonies from group A received 96 pots and colonies from group B 12 pots (mean). In summer (experiment 1), there was a significant effect for confinement, however for both seasons, there was no effect for food amount on sexual offspring production. For both seasons, there was a large intra-group variation and a few colonies were responsible for major male production. There was no difference on sexual offspring production between seasons. In winter, the production of males and royal cells was positively correlated with the amount of food pots in the colonies. In experiment 2, even though there was an initial difference in relation to food stores, a fast recovery on food storage was observed, specially for group B. There was no difference on sexual offspring production due to experimental treatment, however male production was correlated with the number of pollen pots, as in experiment 1. Considering these results together, it was not possible to refute the hypotheses of the positive effect of amount of food resources and the effect of seasonality on the production of sexual offspring in S. aff. depilis.

For over twenty years, flower-visitation networks have been used to assess the effects of pollinator decline, linked to habitat loss, climate change and invasive species, on entire communities. However, most rely on flower visit frequency as a proxy for pollination; very few sample pollen from flower visitor's bodies or from stigmas and so do not include a quantitative measure of pollination success. Here, I add pollinator effectiveness (as single visit pollen deposition) into a traditional flower visitation network, creating a pollinator importance network that better evaluates the flower visitor community from the plant's perspective. Given recent interest in pollination in urban areas, I use an urban garden habitat, and compare visitation, pollen transport and pollinator importance networks, giving several novel conclusions. Firstly, although there are similarities in the structure of my networks, interactions were most specialised in the pollinator importance network, with pollen transport proving to be a better proxy for pollinator importance than visitation alone. Secondly, the specialisation of individual plants and the role of individual flower visitors varied between the networks, suggesting that community-level patterns in simple visitation networks can mask important individual differences. Thirdly, the correlation between flower visit frequency and pollinator importance largely depends on bees, and may not hold in plant-pollinator communities that are not bee-dominated. Fourthly, heterospecific pollen deposition was relatively low, despite the unusually diverse plant community of a garden. Finally, bees (particularly Bombus and non-eusocial halictids) carried the largest pollen loads and were the most effective at depositing pollen on to the stigma during a single visit in this garden habitat. The implications of this thesis highlight the strengths and limitations of each network for future studies, and raise important questions for the future of urban pollination studies.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:01:03Z : No. of bitstreams: 1 lisboa_lco_dr_rcla.pdf: 650724 bytes, checksum: 95fb2a1a2dad2bd0de9a5e34f0e6d402 (MD5) / Entre as abelhas altamente eussociais, o estudo de aspectos da morfologia e da ultra-estrutura tem ajudado a esclarecer uma série de questões sobre a sua biologia. A divisão de trabalho distingue as fêmeas em duas castas, sendo uma com função reprodutiva (rainha) e outra que desempenha as mais diversas tarefas dentro da colônia (operária). Espécies do gênero Frieseomelitta mostram esta divisão de forma mais clara, uma vez que suas operárias nunca põem ovos; começando um processo degenerativo nos ovários ainda no final de sua diferenciação. Porém, nas diferentes espécies e em diferentes condições, as operárias podem desenvolver seus ovários e realizar postura de ovos tróficos que são comidos pelas rainhas, ou dar origem a machos. O primeiro caso mostra que além da contribuição dada pelas operárias na produção de alimento para a cria com suas secreções glandulares, elas contribuem também com seus ovos para produzir alimento. Já o segundo caso pode ser um indicativo de que a divisão do trabalho reprodutivo ainda não está totalmente definida. A fertilidade das rainhas também parece se manifestar de diferentes formas. Em Apis mellifera, é evidenciada pela enorme diferença no número de ovaríolos, bem maior nas rainhas do que nas operárias. Esta diferença é devido a uma redução sofrida pelas operárias durante o desenvolvimento pós-embrionário. Já nos 9 meliponíneos o número de ovaríolos de rainhas e operárias é, para a maioria das espécies, igual e em número de quatro por ovário. Em Trigona spinipes, o número de ovaríolos dos ovários das operárias é sempre igual a quatro, enquanto que nas rainhas pode variar entre oito e quinze, entre as rainhas e entre os ovários da mesma rainha... . / The survey of morphological and ultrastructural aspects of highly eusocial bees, have cleared and supported many questions about their biology. The division of labour discern the females in to two castes, being one with reproductive function (queen) and other that perform differents tasks within the colony (worker). Frieseomelitta shows this division clearly. The workers never lay eggs; starting a degenerative process in the ovaries yet in the ending your differentiation. However, in different species and in different conditions, the workers can develop their ovaries and lay eggs that can be trophic and be eaten by the queens, or give rise males. The first condition show that further of the contribution given by the workers in the food production for the brood with yours glandular secretions, they contribute also with yours eggs for to produce food. The second condition can be an evidence that division of reproductive labour is not entirely solved yet. Queen's fertility also seems to be expressed in different ways. In honey bees Apis mellifera, there is a large difference in ovarioles number, which are bigger in queens than workers. This difference is due to the decrease in workers ovarioles number during the post-embryonic development. In Meliponini the ovarioles number of queens and workers is, for most of the species, the same; four per ovary. 11 In Trigona spinipes, the ovarioles number in workers is always four, while in queens can vary from eight to fifteen among queens and among the ovaries of the same queen. Anyway, the ovariole number present in the ovary of queens in Meliponini is very small if compared to Apis mellifera; that suggest that their efficience in egg production can be higher and attached to the ovarioles lengh... (Complete abstract, click electronic address below).

Nosema ceranae, a microsporidian, has been given much attention in recent years as it has been linked with Colony Collapse Disorder (CCD), which leads to the sudden deaths of honey bee colonies. It has been described that many pathogenic organisms secrete virulence factors in order to hijack its host`s cellular functions, but in most cases the underlying mechanisms of this process still remains to be deciphered. Cornman et al. (2009) have identified in N. ceranae a list of putative effector proteins (called secretome) destined to be secreted into the host, and I have taken this list for further investigation using a bioinformatical and experimental approaches. The principal aim of this project was to generate a N. ceranae ORFeome for genes predicted to be secreted, elucidate the function of effector candidates important for N. ceranae biology and/or pathogenicity, as well as to investigate any interactions between N. ceranae proteins and its host utilising two eukaryotic model organisms, budding yeast, S. cerevisiae, and fruit fly, D. melanogaster. A library of S. cerevisiae strains expressing N. ceranae proteins was generated utilising the Gateway® technology, and phenotypic and localisation screens were undertaken to investigate the N. ceranae secretome. Two N. ceranae ORFs, NcORF-15 (NcORF-02039) and NcORF-16 (NcORF-01159) encoding a putative thioredoxin and a hexokinase, respectively, were subjected to yeast complementation assays in order to assess their catalytic activity. NcORF-15, the putative thioredoxin, was able to rescue the sensitive phenotype of S. cerevisiae Δtrx2 under oxidative stress, whereas NcORF-16, the putative hexokinase, did not complement YSH7.4-3C, a triple knockout lacking hexokinase activity. A third N. ceranae effector candidate NcORF-4 (NcORF-00654), a putative proteasome subunit, was investigated for its nuclear localisation and protein interactions in both S. cerevisiae and D. melanogaster.

Submitted by SABRINA MEIRELES (sabmeireles@gmail.com) on 2018-10-29T21:13:50Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Sabrina_Meireles.pdf: 2292151 bytes, checksum: dc1ccdda3053377755362d9e3b03674a (MD5) / Rejected by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppg_biotec.ufam@yahoo.com.br), reason: Faltando carta de encaminhamento e ata de defesa. on 2018-10-31T20:04:44Z (GMT) / Submitted by SABRINA MEIRELES (sabmeireles@gmail.com) on 2018-11-01T20:29:28Z No. of bitstreams: 3 Dissertação_Sabrina_Meireles.pdf: 2292151 bytes, checksum: dc1ccdda3053377755362d9e3b03674a (MD5) Carta de encaminhamento de dissertação.pdf: 350635 bytes, checksum: 10a769692f682bf7f5677800b78f1cf9 (MD5) Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) / Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppg_biotec.ufam@yahoo.com.br) on 2018-11-06T20:42:33Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Dissertação_Sabrina_Meireles.pdf: 2292151 bytes, checksum: dc1ccdda3053377755362d9e3b03674a (MD5) Carta de encaminhamento de dissertação.pdf: 350635 bytes, checksum: 10a769692f682bf7f5677800b78f1cf9 (MD5) Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) / Rejected by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: A Carta anexada deve ser a "Carta de Encaminhamento para o Autodepósito" disponível em http://biblioteca.ufam.edu.br/servicos/teses-e-dissertacoes e ela deve está datada. Dúvidas? ddbc@ufam.edu.br on 2018-11-07T12:19:17Z (GMT) / Submitted by SABRINA MEIRELES (sabmeireles@gmail.com) on 2018-11-09T15:41:14Z No. of bitstreams: 3 Dissertação_Sabrina_Meireles.pdf: 2292151 bytes, checksum: dc1ccdda3053377755362d9e3b03674a (MD5) Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) / Rejected by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppg_biotec.ufam@yahoo.com.br), reason: No arquivo da Dissertação falta a ficha catalográfica. on 2018-11-12T19:00:12Z (GMT) / Submitted by SABRINA MEIRELES (sabmeireles@gmail.com) on 2018-11-12T20:37:14Z No. of bitstreams: 3 Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) Dissertação_Enviado TEDE.pdf: 2362346 bytes, checksum: 1eda835ac27bb468843b802a36d93c70 (MD5) / Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppg_biotec.ufam@yahoo.com.br) on 2018-11-12T20:47:05Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) Dissertação_Enviado TEDE.pdf: 2362346 bytes, checksum: 1eda835ac27bb468843b802a36d93c70 (MD5) / Rejected by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: Tese/Dissertação inserida por meio de Autodepósio, na BDTD devem ser de Acesso Aberto, ou seja, estarão disponíveis a partir da data de depósito. A dissertação inserida é Confidencial e/ou passível de Patente, pois foi estipulada uma data para a sua liberação. Nestes casos o depósito deve ser feito pessoalmente na Biblioteca Central, conforme orientações em http://biblioteca.ufam.edu.br/servicos/teses-e-dissertacoes Dúvidas? ddbc@ufam.edu.br on 2018-11-12T21:02:24Z (GMT) / Submitted by SABRINA MEIRELES (sabmeireles@gmail.com) on 2018-11-21T16:28:32Z No. of bitstreams: 3 Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) Dissertação_Enviado TEDE.pdf: 2362346 bytes, checksum: 1eda835ac27bb468843b802a36d93c70 (MD5) / Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppg_biotec.ufam@yahoo.com.br) on 2018-11-21T17:55:02Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) Dissertação_Enviado TEDE.pdf: 2362346 bytes, checksum: 1eda835ac27bb468843b802a36d93c70 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-11-21T19:41:17Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) Dissertação_Enviado TEDE.pdf: 2362346 bytes, checksum: 1eda835ac27bb468843b802a36d93c70 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-21T19:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Ata de defesa_SABRINA.pdf: 137071 bytes, checksum: b6dc6ae572159917e96c3353244d7fea (MD5) CartaEncaminhamentoAutodepósito-SABRINA-MEIRELES-Dissertação.pdf: 104760 bytes, checksum: 8b5e7685916e53325a10bf89174a2564 (MD5) Dissertação_Enviado TEDE.pdf: 2362346 bytes, checksum: 1eda835ac27bb468843b802a36d93c70 (MD5) Previous issue date: 2018-07-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Native stingless bees (Apidae: Meliponini), as well as the other social insects of the order hymenoptera, present symbiotic interactions with the yeasts, indicated as the main responsible for the processing of pollen, fermented food preferred by the meliponids, and by the fermentation of other vegetal materials taken to these nests. In this project, it was proposed to identify yeasts associated with the nest of two Amazon native bees and establish a reference database for Amazonian strains. For this, the substrates (pollen, honey, larval food and wax) were collected from the nest of Melipona interrupta and Cephalotrigona femorata in three meliponaria, located in Iranduba, Parintins and Paraná de Parintins, (n = 12 samples). The methodological procedures adopted in this work are as follows: (1) isolation in YPD, (2) screening in CHROMágar for separation of the isolates in groups of colors, (3) DNA extraction, (4) screening for RFLP standards based on the amplification of the 18S, ITS1-5,8S-ITS2 and D1 / D2 regions of the 26S rRNA gene and digestion of the amplicon with the Dde I restriction enzyme. The amplicons of the different profiles were sequenced and the identification was achieved comparing the sequences against the nucleotide databases of the INSDC consortium using the BLASTN tool. A total of 749 nest bees associated yeasts were isolated, among these 15 lines were identified, namely: SM01 Candida sp., SM02 Hyphopichia sp., SM03 Rhodotorula sp., SM04 Wickerhamiella versalitis, SM05 Debaryomyces sp., SM06 Candida orthopsilosis, SM07 Candida apícola, SM08 Metschnikowia sp., SM09 Zygosaccharomyces siamensis, SM10 Hanseniaspora opuntiae, SM11 Pichia sp., SM12 Pichia kluyveri, SM13 Trichosporon asahii, SM14 Kodamaea ohmeri and SM15 Aureobasidium sp. This work contributed to (1) the identification of yeast associated to the natives stingless bees, (2) contributed to the databases through the deposit of complete nucleotide sequences, useful for yeast identification, (3) established thirteen new RFLP standards, (4) in addition to compose a database of yeasts, which from this bank, future works may prospect processes and biomolecules of biotechnological interest. / As abelhas nativas sem ferrão (Apidae: Meliponini) apresentam interações simbióticas com as leveduras, apontadas como as principais responsáveis pela fermentação do pólen, alimento preferido pelos meliponídeos, e pela fermentação de outros materiais de origem vegetal coletados pelas abelhas. Neste projeto, foi proposto identificar leveduras associadas ao ninho de duas abelhas nativas da Amazônia e estabelecer um banco de estirpes amazônicas de referência. Para isso, os substratos (pólen, mel, alimento larval e cera) foram coletados do ninho de Melipona interrupta e Cephalotrigona femorata em três meliponários, localizados em Iranduba, Parintins e Paraná de Parintins, (n=12 amostras). Os procedimentos metodológicos adotados neste trabalho seguem a seguinte ordem: (1) isolamento em YPD, (2) triagem em CHROMágar para separação dos isolados em grupos de cores, (3) extração de DNA, (4) triagem de padrões moleculares por PCR/RFLP baseado na amplificação das regiões 18S, ITS1-5,8S-ITS2 e D1/D2 do gene 26S rRNA e digestão do amplicon com a enzima Dde I (5) sequenciamento dos amplicons dos diferentes padrões obtidos na RFLP e a identificação mediante comparação das sequências obtidas contra os bancos de dados de sequências nucleotídicas do consórcio INSDC, com auxílio da ferramenta BLASTN. Foram isoladas 749 leveduras associadas ao ninho das abelhas Melipona interrupta e Cephalotrigona femorata, das quais, 15 linhagens foram identificas, a saber: SM01 Candida sp., SM02 Hyphopichia sp., SM03 Rhodotorula sp., SM04 Wickerhamiella versalitis, SM05 Debaryomyces sp., SM06 Candida orthopsilosis, SM07 Candida apícola, SM08 Metschnikowia sp., SM09 Zygosaccharomyces siamensis, SM10 Hanseniaspora opuntiae, SM11 Pichia sp., SM12 Pichia kluyveri, SM13 Trichosporon asahii, SM14 Kodamaea ohmeri e SM15 Aureobasidium sp. Este trabalho resultou em (1) dados inéditos a respeito das leveduras associadas às abelhas sem ferrão da Amazônia, (2) contribuiu com os bancos de dados por meio do depósito de sequências nucleotídicas completas de regiões gênicas usadas para identificação de leveduras, (3) estabeleceu 14 novos padrões de RFLP, (4) forneceu quinze linhagens a serem exploradas em estudos futuros, das quais cinco podem ser espécies ainda não descritas na literatura, que visem prospectar processos e biomoléculas de interesse biotecnológico.

Submitted by Leonard Souza (leonardrebello21@gmail.com) on 2018-12-13T17:51:29Z No. of bitstreams: 6 Universidade Federal do Amazonas Versão FINAL Dissertação - Leonard Rebello Santos de Souza - 07.12.2018.pdf: 6617992 bytes, checksum: 11329e8ee711f51c4743aa5b662f3a1c (MD5) Ata de Aprovação.pdf: 202356 bytes, checksum: eb3c1a44c559f01a75f1abc6d61d37f0 (MD5) Carta de encaminamento.pdf: 316076 bytes, checksum: d0e3b634bca40202a56a5d82ce13ab16 (MD5) Declaração de defesa.pdf: 324580 bytes, checksum: 1f224f73c548234d76ffcc2652bff783 (MD5) Ficha catalográfica.pdf: 1931 bytes, checksum: 6dd2816a4e114eef6af8cdb4402fe8ba (MD5) Parecer da comissão examinadora da defesa.pdf: 266273 bytes, checksum: de4593a49e020d79130de4a0263a4caa (MD5) / Approved for entry into archive by PPGQ Química (ppgqsecretaria@gmail.com) on 2018-12-14T15:10:05Z (GMT) No. of bitstreams: 6 Universidade Federal do Amazonas Versão FINAL Dissertação - Leonard Rebello Santos de Souza - 07.12.2018.pdf: 6617992 bytes, checksum: 11329e8ee711f51c4743aa5b662f3a1c (MD5) Ata de Aprovação.pdf: 202356 bytes, checksum: eb3c1a44c559f01a75f1abc6d61d37f0 (MD5) Carta de encaminamento.pdf: 316076 bytes, checksum: d0e3b634bca40202a56a5d82ce13ab16 (MD5) Declaração de defesa.pdf: 324580 bytes, checksum: 1f224f73c548234d76ffcc2652bff783 (MD5) Ficha catalográfica.pdf: 1931 bytes, checksum: 6dd2816a4e114eef6af8cdb4402fe8ba (MD5) Parecer da comissão examinadora da defesa.pdf: 266273 bytes, checksum: de4593a49e020d79130de4a0263a4caa (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-12-14T18:01:15Z (GMT) No. of bitstreams: 6 Universidade Federal do Amazonas Versão FINAL Dissertação - Leonard Rebello Santos de Souza - 07.12.2018.pdf: 6617992 bytes, checksum: 11329e8ee711f51c4743aa5b662f3a1c (MD5) Ata de Aprovação.pdf: 202356 bytes, checksum: eb3c1a44c559f01a75f1abc6d61d37f0 (MD5) Carta de encaminamento.pdf: 316076 bytes, checksum: d0e3b634bca40202a56a5d82ce13ab16 (MD5) Declaração de defesa.pdf: 324580 bytes, checksum: 1f224f73c548234d76ffcc2652bff783 (MD5) Ficha catalográfica.pdf: 1931 bytes, checksum: 6dd2816a4e114eef6af8cdb4402fe8ba (MD5) Parecer da comissão examinadora da defesa.pdf: 266273 bytes, checksum: de4593a49e020d79130de4a0263a4caa (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-14T18:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 6 Universidade Federal do Amazonas Versão FINAL Dissertação - Leonard Rebello Santos de Souza - 07.12.2018.pdf: 6617992 bytes, checksum: 11329e8ee711f51c4743aa5b662f3a1c (MD5) Ata de Aprovação.pdf: 202356 bytes, checksum: eb3c1a44c559f01a75f1abc6d61d37f0 (MD5) Carta de encaminamento.pdf: 316076 bytes, checksum: d0e3b634bca40202a56a5d82ce13ab16 (MD5) Declaração de defesa.pdf: 324580 bytes, checksum: 1f224f73c548234d76ffcc2652bff783 (MD5) Ficha catalográfica.pdf: 1931 bytes, checksum: 6dd2816a4e114eef6af8cdb4402fe8ba (MD5) Parecer da comissão examinadora da defesa.pdf: 266273 bytes, checksum: de4593a49e020d79130de4a0263a4caa (MD5) Previous issue date: 2018-10-19 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mankind has always sought in nature sources of raw materials, whether of vegetable origin or products derived from animals that could be used with therapeutic and medicinal characteristics for the treatment of their diseases. Among the many, one has been used over the years by the inhabitants of the Amazon region, the geopropolis, which is produced by stingless bees of the genus Melipona. The M. seminigra and M. interrupta species are known to be less aggressive and quite sociable, facilitating their creation and management through Meliponicutura. The geopropolis has a complex composition rich in several chemical classes greatly because of its formation include parts of plants, resins, pollen, in addition to the soil and mineral mixture and which consequently can provide promising biological activities such as antitumor, antitussive, antioxidant, antiparasitic, antimicrobial, antiseptic, antimutagenic, anti-inflammatory and immunomodulatory, making it very appreciable by consumer communities. In the Amazon, besides the climate, the flora used to collect bee subsidies directly influences the chemical composition of the geopropolis, reflecting the biological properties of the product. The reduced amount of studies on the chemical composition of the geopropolis and the possible botanical origin of the substances, emphasized the importance of conducting the research. In this context, the study was developed to chemically characterize the geopropolis of five different locations in the vicinity of Manaus. The methanolic extracts were obtained by the methodology of maceration (48h) of the geopropolis followed by ultrasonic bath (20min), filtered and analyzed by Mass Spectrometry (EM) and Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) and it was possible to differentiate the chemical constituents between the points (PCA and HCA) evidencing the presence of flavonoids, organic acids and benzophenones. Twenty-eight chemical substances were proposed by direct injection into the High Resolution Mass Spectrometry equipment. GC-MS analyzes revealed the presence of fourteen terpene substances. The results of IC 50 and total phenols presented anti-radical potential for the extracts of the geopropolis of the study species. The antimicrobial assay of the extracts of M. interrupta showed satisfactory results of inhibition and death against strains E. feacalis and S. aureus. The research contributed with chemical and biological knowledge about the bees' geoprópolis M. seminigra and M. interrupta, since there are few reports in the literature about the product. / A humanidade sempre buscou na natureza fontes de matérias-primas, seja de origem vegetal ou em produtos oriundos de animais que pudessem ser utilizadas com cunho terapêutico e medicinal para o tratamento de suas enfermidades. Dentre os muitos, um tem sido utilizado ao longo dos anos pelos habitantes da região Amazônica, a geoprópolis, que é produzida pelas abelhas sem ferrão do gênero Melipona. As espécies M. seminigra e M. interrupta são conhecidas por serem pouco agressivas e bastante sociáveis facilitando sua criação e manejo por meio da Meliponicutura. A geoprópolis possui uma composição complexa rica em diversas classes química muito por sua formação incluir partes de vegetais, resinas, pólens, além da mistura de solo e minerais e que como consequência podem proporcionar atividades biológicas promissoras como, antitumoral, antitussígeno, antioxidante, antiparasitário, antimicrobiano, antisséptico, antimutagênico, anti-inflamatório e imunomoduladora, tornando-a bastante apreciável pelas comunidades consumidoras. Na Amazônia além do clima, a flora utilizada para coleta de subsídios por parte das abelhas influencia diretamente na composição química da geoprópolis, refletindo nas propriedades biológicas do produto. A quantidade reduzida de estudos sobre a composição química da geoprópolis e possível origem botânica das substâncias, ressaltaram a importância de se realizar a pesquisa. Nesse contexto, foi desenvolvido o estudo para caracterizar quimicamente a geoprópolis de cinco diferentes localidades dos arredores de Manaus. Os extratos metanólicos foram obtidos pela metodologia de maceração (48h) da geoprópolis seguido de banho ultrassônico (20min), filtrados e analisados por Espectrometria de Massas (EM) e Espectroscopia de Ressonância Magnética (RMN) e foi possível diferenciar os constituintes químicos entre os pontos de coleta por meio da Quimiometria (PCA e HCA) evidenciando a presença de flavonoides, ácidos orgânicos e benzofenonas. Por injeção direta no equipamento de Espectrometria de Massas de Alta Resolução foram propostas vinte e oito substâncias químicas. As análises por CG-MS revelaram a presença de quatorze substâncias terpênicas. Os resultados de CI50 e fenóis totais apresentaram potencial anti-radicalar para os extratos da geoprópolis das espécies de estudo. O ensaio antimicrobiano dos extratos de M. interrupta mostrou resultados satisfatórios de inibição e morte frente as cepas E. feacalis e S. aureus. A pesquisa contribuiu com conhecimento químico e biológico acerca da geoprópolis das abelhas M. seminigra e M. interrupta, posto que existem poucos relatos na literatura sobre o produto.