Orientadores: Eneida de Paula, Leonardo Fernandes Fraceto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T01:05:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_RobertaAlineFrancode_M.pdf: 1479897 bytes, checksum: 3c9af4bda36adc886426ab930c957a40 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A dor desempenha um papel biológico muito importante como indicador da presença de um estímulo nocivo, que pode representar dano real ou potencial ao organismo; entretanto, não é interessante que essa sinalização persista além das necessidades fisiológicas a ponto de tornar-se um incomodo, podendo dificultar o desempenho das atividades normais, comprometer a qualidade de vida do indivíduo e impedir a realização de práticas cirúrgicas curativas. Os anestésicos locais são fármacos empregados para alívio da dor aguda ou crônica, pois bloqueiam a condução do estímulo nervoso em membranas neuronais. Dentre eles, está a Tetracaína (TTC) um amino-éster de grande utilidade na prática clínica, empregado em procedimentos que requerem anestesia tópica, como aqueles oftalmológicos que necessitam de intervenções na córnea. As limitações do uso clínico da TTC está relacionadas à sua baixa estabilidade química (hidrólise da ligação éster por esterases plasmáticas) e sua toxicidade sistêmica. Sistemas de liberação modificada de fármacos, que empregam carreadores como ciclodextrinas, constituem uma alternativa para aumentar o tempo de ação anestésica e diminuir a toxicidade. As ciclodextrinas são capazes de formar complexos de inclusão com diversos fármacos, alterando propriedades como a solubilidade aquosa, o que torna esses oligosacarídeos cíclicos promissores para este tipo de aplicação. Neste trabalho, estudamos a complexação da TTC com beta-ciclodextrina (?-CD) e hidroxipropil-beta-ciclodextrina (HP-?-CD) em pH fisiológico e sua influência na toxicidade celular e efeito antinociceptivo, induzidos por aquele anestésico, objetivando a preparação de novas formas farmacêuticas. Para caracterização dos complexos de inclusão TTC:?-CD e TTC:HP-?-CD foram empregados métodos espectroscópicos (Ressonância Magnética Nuclear, fluorescência, absorção UV/VIS), difração de raios-X e calorimetria diferencial de varredura. A partir das análises realizadas, encontrou-se que a estequiometria de complexação da TTC com ambas as ciclodextrinas é de 1:1. A constante de associação aparente da TTC, determinada por DOSY-NMR, é de 777 M-1 e 2243 M-1, para ?-CD e HP-?-CD respectivamente, indicando uma forte interação entre as moléculas de anestésico e das ciclodextrinas, em pH fisiológico. Os dados de proximidade espacial, determinados por RMN (1DROESY) revelaram interações entre os hidrogênios Hh e Hi, (que fazem parte do anel aromático da TTC) e hidrogênios da cavidade interna das ciclodextrinas, permitindo assim propor a geometria dos complexos de inclusão da TTC com ambas ciclodextrinas. Ensaios in vitro, em cultura de fibroblastos da linhagem 3T3, mostraram aumento na viabilidade celular após complexação da TTC com ?-CD e HP-?-CD, em relação à TTC em solução. Testes de atividade biológica, de bloqueio do nervo infraorbital em ratos, demonstraram aumento significativo do tempo de duração da anestesia nos animais tratados com os complexos TTC:?-CD e TTC:HP-?-CD (40 min e 40 min), em relação ao grupo tratado com 0,5% de TTC livre (30 min). Os resultados obtidos neste estudo demonstram a formação de complexos de inclusão com forte interação entre TTC e ?-CD e HP-?-CD; indicam ainda que a utilização destes complexos de inclusão é promissora como forma farmacêutica alternativa para este anestésico, devido ao aumento da duração da anestesia (pois os complexos apresentaram maior eficácia quando comparados à TTC livre nas mesmas doses), ou ainda a diminuição da toxicidade (atingindo a mesma eficácia da TTC livre, com menores concentrações de TTC complexada). / Abstract: Pain plays an important biological role as a sign of the presence of a noxious stimulus, that denotes actual or potential damage to the body. However, it is not interesting this signal to persist beyond the physiological point, to become a nuisance that impairs the performance of normal activities, the quality of life or prevents the procedure of healing surgical practices. Local anesthetics are used for the relief of acute or chronic pain since they block the conduction of the painful stimulation in neuronal membranes. Among them is Tetracaine (TTC) an amino ester useful in clinical procedures requiring local anesthesia such as those ophthalmic ones with intervention in the cornea. The clinical use of TTC is limited by its low chemical stability (hydrolysis of the ester bond by plasma esterases) and systemic toxicity. The use of drug-delivery systems, in carriers such as cyclodextrins is a good approach to improve the duration of action and to diminish the toxicity of local anesthetics. Cyclodextrins are suitable for this type of application since these cyclic oligosaccharides are able to form inclusion complexes with several drugs improving their water solubility. Here we have studied the complexation of TTC with beta (?-CD) and hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HP-?-CD) and its influence in cell toxicity and antinociceptive effects induced by that anesthetic, aiming the development of new pharmaceutical forms. TTC and ?-CD or HP-?-CD inclusion complexes were characterized using spectrophotometric methods (Nuclear Magnetic Resonance, fluorescence, UV-VIS absorption), X-ray Diffraction and Differential Scanning Calorimetry. A 1:1 stoichiometry of complexation was found for both complexes. The association constant determined by DOSY was 777 M-1 and 2.243 M-1 for TTC complexation with ?-CD and HP-?-CD, respectively, indicating a strong association between the anesthetic and both cyclodextrins, at physiological pH. The nuclear overhauser NMR data (ROESY) had disclosed trough the space proximities between hydrogens Hh and Hi - at the aromatic ring of TTC - and hydrogens from the inner cavity of the cyclodextrins, allowing us to suggest the geometry of TTC:?-CD and TTC:HP-?-CD complex formation. In vitro culture tests on 3T3 fibroblasts cells revealed an increase in cell viability after TTC complexation with ?-CD and HP-?-CD, in comparison to the effect of free TTC. Biological activity was assessed in rats, through the infraorbital nerve blockade test. The results revealed a significant increase in the duration of anesthesia in animals treated with TTC:?-CD and TTC:HP-?-CD (40 min and 40 min), in comparison to a solution of 0.5% tetracaine (30 min). The results presented here demonstrate the formation of strong associated inclusion complexes between TTC and ?-CD and HP-?-CD. The in vivo results allow us to consider those complexes as promising pharmaceutical forms to increase the duration of anesthesia induced by tetracaine (since both complexes showed higher anesthetic potency when compared to free TTC at equivalent doses) or to diminish its toxicity (since the same activity can be achieved with lower concentrations of the complexed TTC formulations). / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Neste trabalho foi avaliado a seletividade de reações biocatalisadas por fungos basidiomicetos frente a compostos bifuncionalizados com os grupos cetona e seleneto (1-2) ou cetona e sulfeto (3-4). Os compostos 1-4 foram sintetizados de acordo com metodologias descritas na literatura. Na síntese dos padrões racêmicos dos β-hidróxi-selenetos 1a-2a e β-hidróxi-sulfetos 3a-4a observou-se que a redução química utilizando NaBH4 levou a formação preferencial dos estereoisômeros cis-(1a-4a). Enquanto que a redução promovida na utilização dos fungos basidiomicetos levou a formação preferencial do estereoisômero trans-(1a-4a). Desta forma duas metodologias complementares para a preparação de β-hidróxi-selenetos e β-hidróxi-sulfetos foram estabelecidas. Cinco linhagens destes fungos (Irpex lacteus CCB 196, Trametes rigida CCB 285, Pycnoporus sanguineus CCB 501, Trametes byssogenum CCB 203, Trametes versicolor CCB 202 ) foram testadas visando à obtenção de β-hidróxi-selenetos (1a-2a) e β-hidróxi-sulfetos (3a-4a) na forma enantiomericamente pura ou enriquecida. Um estudo qualitativo indicou que o fungo Trametes rigida CCB 285 apresentou alta seletividade frente aos compostos utilizados levando aos produtos cis-(1a-4a) e trans-(1a-4a) com elevados valores de excessos enantioméricos (e.e. 99 %). Posteriormente, um estudo quantitativo permitiu o isolamento dos produtos, a determinação dos rendimentos isolados e também a configuração absoluta para os compostos isolados. Na segunda parte deste trabalho avaliou-se a aplicação de fungos Aspegillus terreus em reações de desmetilação/desalquilação de aminas terciárias. Os resultados obtidos indicam que os estes fungos apresentam grande potencial para reações de desmetilação de aminas terciárias aromáticas, sendo que as reações conduzidas em meio neutro (pH = 7) levaram aos produtos desmetilados com bons valores de conversão. No entanto, não foram observadas reações de desalquilação com grupos etila nas condições utilizadas. / In this work was considered the selectivity of reactions biocatalysted by basidiomycetes fungi with bifuncionalized compounds with ketone and selenide groups (1-2) or ketone and thio groups (3-4). The compounds 1-4 were prepared in according with methodologies from literature. During the synthesis of standard racemic β-hydroxyselenides 1a-4a and β-hydroxysulfides 3a-4a we noticed that chemical reduction using NaBH4 led to the preferential formation of the cis-(1a-4a) isomers. On the other hand, the bioreduction promoted by basidiomycetes fungi led to the preferential formation of trans-(1a-4a) isomers. Therefore, two complementary methodologies for preparation of β-hydroxyselenides and β-hydroxysulfides were established. Five strains of basidiomycetes fungi (Irpex lacteus CCB 196, Trametes rigida CCB 285, Pycnoporus sanguineus CCB 501, Trametes byssogenum CCB 203, Trametes versicolor CCB 202) were examined to aim at the preparation of β-hydroxyselenides and β-hydroxysulfides on the enantiomerically pure form. A qualitative study indicated that cells of T. rigida CCB 285 showed high selectivity led to the products cis-(1a-4a) and trans-(1a-4a) in high enantiomeric excess (ca 99 %). After that, a quantitative study allowed us to determine the isolated yields and the absolute configuration for the compounds cis-(1a-4a) and trans-(1a-4a). In the second part of this work was considered the application of Aspergillus terreus fungi in demethylation/dealkylation reactions by tertiary amines. The results indicated that those fungi showed a big potencial for demethylation reaction of aromatic tertiary amines. The reaction done on the pH = 7 led to the demethylated products with good values of conversion. Dealkylation reactions were not observed.

Orientadores: Regina Celia Spadari-Bratfisch, Dora Maria Grassi-Kassisse / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T14:08:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_AndreLuizde_M.pdf: 4831255 bytes, checksum: 89a79fa25a0a6831c383781d8adbb2ce (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O estresse por choque nas patas promove supersensibilidade ao efeito cronotrópico positivo da isoprenalina em átrios direitos isolados de ratos e ratas sacrificadas em diestro, a qual está associada a aumento da proteína do adrenoceptor P2 naquele tecido. Em átrio direito de fêmeas ocorre também subsensibilidade ao efeito cronotrópico da noradrenalina. O objetivo deste trabalho é avaliar se a resposta inotrópica a agonistas Padrenérgicos também é alterada em tecido cardíaco de ratos submetidos a estresse por choque nas patas para ampliar nosso conhecimento da extensão em que a fisiologia cardíaca é alterada pelo estresse. Utilizamos átrios esquerdos isolados de ratos machos adultos da linhagem Wistar submetidos ou não a três sessões consecutivas de choques nas patas (30 minutos de duração, 120 pulsos aplicados aleatoriamente a intervalos que variavam de 5 a 25 seg; intensidade de 1 mA e duração de 1 seg). Todos os átrios receberam pré-tratamento in vitro para inibir os processos de recaptação neuronal e captação extra-neuronal. Em seguida foram obtidas curvas concentração-efeito aos agonistas isoprenalina, na presença ou ausência dos antagonistas CGP20712A, IC1118.551 ou ambos; noradrenalina, na presença ou ausência de CGP20712A; TA-2005; BRL37344 e CGP12177. Analisamos a sensibilidade do tecido aos agonistas (pD2) e a afinidade dos antagonistas (pKB). Para determinar se a população de adrenoceptores P é homogênea ou heterogênea, realizamos análise de regressão linear de Schild. Os valores foram expressos como médias: erros padrão da média. Átrios esquerdos isolados de ratos submetidos a estresse quando comparados aos átrios esquerdos isolados de ratos controle apresentaram supersensibilidade à isoprenalina (pD2: 8,44 :t 0,16 para controles e 8,85 :t 0,09 para estresse, p < 0,05; teste t de Student) e sem alteração de sensibilidade à noradrenalina (pD2: 8,00 :t 0,03 para o grupo controle e 7,83 :t 0,01 para o grupo estresse, p > 0,05; teste t de Student). Não foi observada diferença de sensibilidade para os agonistas TA-2005, BRL37344 e CGP12177. A supersensibilidade para isoprenalina foi cancelada pelo antagonista ICI118.551, sendo que os valores pD2 neste caso foram: 8,43 1: 0,11 para o grupo controle e 8,60 1: 0,11 para o grupo estresse (p > 0,05; teste t de Student). Os valores pKB do IC1118.551 foram iguais a: 7,191: 0,08 para o grupo controle e 7,13 1: 0,31 para o grupo estresse. Análise de regressão linear de Schild para o antagonismo entre CGP20712A e isoprenalina ou noradrenalina demonstrou que átrios esquerdos isolados de ratos controle e ratos submetidos a estresse apresentam uma população heterogênea de receptores-adrenérgicos. Nós concluímos que átrios esquerdos de ratos submetidos a estresse apresentam supersensibilidade à isoprenalina devido ao aumento da participação dos adrenoceptores _2. A resposta aos demais agonistas não se altera. Esta alteração na sensibilidade à isoprenalina desencadeada pelo estresse é semelhante ao que ocorre em átrio direito e em tecido adiposo de ratos submetidos ao mesmo protocolo de estresse. Estes resultados indicam que não apenas o cronotropismo mas também o inotropismo cardíaco são afetados pelo estresse o que provavelmente resulta em alterações funcionais cardíacas, de caráter adaptativo / Abstract: Following foot shock stress white adipocytes and right atria from male and right atria from female rats sacrificed at diestrous, are supersensitive to the chronotropic effect of isoprenaline. Right atria from female rats are also subsensitive to noradrenaline. In the present study, we investigated whether the inotropic response to B-adrenergic agonists was altered in cardiac tissue from stressed rats. Left atria isolated from control or stressed male Wistar rats submitled to three 30 min foot shock sessions (120 pulses of 1.0 mA and 1.0 s duration, applied at random intervals of 5-25 s) were mounted in organ baths under a tension of 4,9 mN (0,5 gf) and stimulated with pulses of 2 Hz and 5 ms duration at voltage 20% above threshold. Concentration-response curves were obtained for the Badrenoceptor agonists isoprenaline, noradrenaline, TA2005, BRL37344 and CGP12177. Curves were also obtained for isoprenaline and noradrenaline in the presence of the selective antagonist CGP20712A (10, 30 and 100 nM), and for isoprenaline in the presence of the antagonist IC1118,551 (50 nM) or both antagonists. The sensitivity to noradrenaline, TA2005, BRL37344 and CGP12177 was unaltered in atria from foot shock stressed rats. The pD2 for isoprenaline was significantly higher in atria from stressed rats (8.85 :t 0.09) compared to control rats (8.44 :t 0.15; P < 0.05, Student's t-test). Treatment with IC1118,551 (50 nM) abolished this difference (pD2 in the presence of ICI118,551: 8.43:t 0.11 and 8.60:!: 0.11 for atria from control and stressed rats, respectively. The pKs for IC1118.551 was 7.19:t 0.08 in control atria and 7.13:t 0.31 in atria from stressed rats (p > 0.05, Student's t-test). Schild analyses for the antagonism between CGP20712A and isoprenaline or noradrenaline indicated that the B-adrenoceptor population in left atria from control and stressed rats was heterogeneous. We conclude that the supersensitivity of atria from foot shock stressed rats to isoprenaline resulted from an increase in B2-adrenoceptor mediated responses. These results were similar to those previously reported for right atria and adipocytes from rats submitted to the same stress protocol and indicate that not only the cardiac chronotropism also the inotropism was affected by stress what probably causes. adaptative alterations in the heart function / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aguiar_ClaudioLimade_D.pdf: 3633403 bytes, checksum: a077bdb4a30340781da556e96aa2116b (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: As isoflavonas são conhecidas por suas atividades biológicas tais como, atividades estrogênica, antifúngica, antioxidante e antitumoral (mama e próstata), além de inibir a atividade de enzimas ligadas à divisão celular, sendo estas atividades biológicas mais acentuadas nas formas agliconas que glicosiladas. Sua presença em produtos de soja, tem sido relatada como importante para a saúde humana, além do que o Brasil é o maior exportador de soja no mundo a partir de 2003. O presente trabalho de tese teve como objetivos, avaliar os teores de isoflavonas e seus conjugados presentes em cultivares de soja brasileiros e em alguns produtos à base de soja, bem como, discutir os efeitos associados à presença de isoflavonas, em suas diferentes formas, nas propriedades biológicas (antioxidante, antiinflamatória e antimicrobiana) encontradas em extratos alcoólicos de soja. Analisou-se os teores de isoflavonas em cultivares de soja (Glycine max L.) provenientes de diferentes órgãos estaduais e federais de pesquisa em soja e o efeito da temperatura na extração de isoflavonas de soja. As concentrações mais elevadas de isoflavonas foram obtidas principalmente por extração alcoólica em solução 80 ou 90% de metanol e solução 60 ou 70% de etanol. Foi avaliada a composição de isoflavonas presentes em soja, após tratamento térmico e por radiação gama. A farinha de soja foi tratada por aquecimento a 100 e 121°C por 20, 40 e 60 min; a 121°C por 40 e 60 min, alonil-isoflavonas em farinha de soja foram completamente transformadas a glicosil-isoflavonas. A radiação gama também promoveu a redução no conteúdo de isoflavonas. O extrato metanólico de soja tratado por radiação gama apresentou uma perda gradual no conteúdo de isoflavonas totais (perda de 33,5%), mas em farinha de soja, rica em fibras, a radiação gama teve pouco efeito (perda de 9,96%). Por outro lado, o fungo filamentoso Aspergillus onJzae ATCC 22786 produziu alta atividade de 13-glicosidase, a qual foi capaz de converter glicosil-isoflavonas em agliconas presentes em farinha de soja. Glicosil-isoflavonas (daidzina, glicitina e genistina) foram eficientemente transformadas às suas formas agliconas (daidzeína, gliciteína e genisteína) por fermentação em estado sólido por 48 h a 30°C com esporos (107 esporosjmL) ou pela l3-glicosidase de A. oryzae, após 30 min a 40°C. Após o tratamento da farinha de soja com P-glicosidase, 85,5% das glicosil-isoflavonas foram hidrolisadas às formas agliconas. O tratamento térmico a 121°C seguido da reação enzimática, produziu grande quantidade de isoflavonas agliconas. Portanto, o tratamento combinado de aquecimento a 121°C e reação com p-glicosidase de A. oryzae ATCC 22786 pode transformar eficientemente malonil-isoflavonas a glicosil-conjugados e, posteriormente, a agliconas. Além disso, os extratos metanólicos de farinha de soja tratada com aquecimento e P-glicosidase demonstraram elevadas atividades antioxidantes. No entanto, o tratamento com aquecimento e reação enzimática não mostrou claramente um aumento nas atividades antimicrobiana e antiinflamatória. / Abstract: The isoflavones from soybean are known to have several biological properties such as estrogenic, antimicrobial and antitumoral (breast and prostate) activities, besides inhibiting the activity of enzymes linked to the cellular division. These properties are shown to be more accentuated in the aglycone than glycoside forms. Their presence in soy products have been reported with a number of beneficial health effects. In addition, Brazil is a major soybean producer in the World. The main objectives of this work of Thesis was to evaluate the isoflavone contents, and its conjugate forms, present in different Brazilian soybean cultivars, as well as, in some soy products. Other objective of this work, was to discuss the effects associated to the presence of isoflavones with some biological properties (antioxidant, anti-inflammatory, and antimicrobial) into alcoholic extracts of soybean. The isoflavone contents was analyzed in different soybean cultivars donated by State and Federal Organization on Soy Research, and the effect of the temperature in the extraction of soybean isoflavones. The high isoflavone concentrations were obtained mainly by alcoholic extraction using 80% methanol and 60% ethanol solutions. As a major soybean producer, Brazil finds important to characterize the isoflavone composition of the some Brazilian soybean cultivars, which were treated with heat processing and gamma irradiation. Soybean flour was treated by heating at 100 and 121°C for 20, 40, and 60 mino At 121°C for 40 and 60 min, the isoflavone malonate into defatted soybean flour was completely converted to their glycoside conjugates. Gamma irradiation also promoted some reduction in isofIavone profiles. The methanolic extract of soybean treated by y-radiation had a gradual decreasing in their isofIavone contents (loss of 33.5%), but on soybean fIour, rich in fiber, the y-radiation had a little effect (loss of 9.96%). On the other hand, the filamentous fungus Aspergillus oryzae ATCC 22786 a high f3-glucosidase producer, was found to be able to convert glycoside isofIavones to aglycones forms present into soybean fIour. It was observed that the glycoside isofIavones extracted such as, daidzin, glycitin and genistin, were efficiently transformed into their aglycones forms (daidzein, glycitein and genistein) by solidstate fermentation after 48 h at 30°C with A. oryzae spores (107 sporesjmL) or f3-glucosidase after 30 min at 40°C. After treatment of the methanolic extracts with f3-glucosidase, 85.5% of glycoside isofIavones were hydrolyzed by this enzyme to form aglycones. The enzymatic reaction on the methanolic extract from the soybean sample treated at 121°C indicated that the glycoside isoflavones were efficiently transformed into aglycones. Therefore, combined application of heat treatment at 121°C and the fungal p-glucosidase could transform efficiently malonylglycoside isoflavones and glycoside isoflavones to aglycones. Furthermore, methanolic extracts of soybean sample treated by heating and with P-glucosidase demonstrated higher antioxidant activity. However, the treatment by heating and enzyme reaction do not show an increasing in the antimicrobial and anti-inflammatory activities. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:03:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7189_1.pdf: 1050765 bytes, checksum: e7a2d33f54d7aaed4a2234e32f3def21 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A classe de modelos de regressão beta é de grande utilidade em situações de modelagem onde o objetivo reside no estudo da relação entre uma variável de interesse que assume continuamente valores no intervalo (0, 1) e outras variáveis que afetam seu comportamento através de uma estrutura de regressão. A presente dissertação dedica-se a estudar aspectos computacionais inerentes à estimação pontual dos parâmetros do modelo de regressão beta proposto por Ferrari & Cribari-Neto (2004) através da avaliação de diferentes métodos de otimização não-linear que podem ser utilizados para maximizar numericamente a função de log-verossimilhança. Nós mostramos, através de simulações de Monte Carlo e de estimações com conjuntos de dados reais, que os métodos de otimização não-linear que usam informação relativa `a matriz hessiana, como é o caso dos métodos de Newton e BFGS, são os mais eficientes no que tange à maximização da função de log-verossimilhança do modelo de regressão beta. Isso ocorre devido à sua rapidez, precisão e robustez frente a perturbações comumente verificadas em situações práticas, tais como presença de pontos de alavanca e elevada correlação entre variáveis regressoras

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7252_1.pdf: 741462 bytes, checksum: e43c42f531b9875c740bc855589799da (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O modelo de regressão beta possui potencialmente aplicabilidade prática, em particular, na modelagem de taxas e proporções. Assim, o cálculo dos vieses dos estimadores dos parâmetros deste modelo torna-se importante, visto que, em geral, para modelos regulares, quanto menores são os tamanhos de amostra, mais viesados são os estimadores de máxima verossimilhança. A obtenção de expressões que permitam calcular os vieses desses estimadores possibilita a obtenção de estimadores corrigidos, que em príncipio são mais precisos que os não corrigidos. O objetivo deste trabalho é fornecer expressões para os vieses de segunda ordem dos estimadores de máxima verossimilhança no modelo de regressão beta proposto por Ferrari & Cribari?Neto (2003). Com a finalidade de reduzir os vieses destes estimadores em amostras finitas, utilizam-se correções de viés obtidas a partir de esquemas analíticos (Cox & Snell,1968; Firth, 1993) e de bootstrap. Deduzimos uma fórmula para o cálculo dos vieses de segunda ordem dos estimadores de máxima verossimilhança dos parâmetros do modelo de regressão beta. Em seguida, fornecemos estimativas corrigidas do tipo corretivo, preventivo e de bootstrap, mostrando numericamente que as estimativas corrigidas de tipo corretivo e de bootstrap apresentam desempenhos superiores em termos de viés e erro médio quadrático `as suas respectivas estimativas de máxima verossimilhança. Apresentamos intervalos de confiança do tipo assintótico, bootstrap percentil e bootstrap BCa para os parâmetros do modelo de regressão beta. A avaliação numérica revelou que os intervalos de tipo percentil para os parâmetros baseados nas estimativas corrigidas apresentam os melhores desempenhos em termos de cobertura, balanceamento e comprimento. Adicionalmente, mostramos que os intervalos de confiança para o parâmetro de precisão são bastante assimétricos, sendo que os intervalos do tipo assintótico baseados nas estimativas de máxima verossimilhança e corrigida corretivamente possuem as melhores coberturas e menores comprimentos

We give overcrowding estimates for the Sine(beta) process, the bulk point process limit of the Gaussian beta-ensemble. We show that the probability of having exactly n points in a fixed interval is given by e(-beta/2n2) log(n)+O(n(2)) as n -> infinity. We also identify the next order term in the exponent if the size of the interval goes to zero.

Propranolol (PROP) is a β-blocker prescribed mainly to treat human cardiac diseases but with its wide usage it often makes its way into the aquatic environment. This study examined whether PROP alters developmental patterns and catecholamine (CA)-regulated processes in the zebrafish (Danio rerio) and if exposure during early life alters the stress response and behaviors of adults. The 48 h LC50 was 21.6 mg/L, well above environmental levels (0.00059 mg/L). Embryos/larvae continuously PROP-exposed had decreased and increased transcript levels of the β1-adrenoceptor at 1 dpf and 5 dpf, respectively. Stressed, PROP-exposed zebrafish had reduced testosterone and estradiol levels and exhibited less anxiety behaviours than control fish. Furthermore, adults previously PROP-exposed as embryos/larvae had decreased growth in terms of body length (0.0006 mg/L PROP) and mass (20 mg/L PROP). Changes in cholesterol and testosterone levels occurred in PROP-exposed fish. Thus PROP-exposure alters developmental patterns and CA-regulated process that are essential for normal behaviours and responses to stress, and at least some of these changes persist in the adult zebrafish.

Alzheimer’s disease (AD) is the most common form of dementia, with more than 25 million people worldwide suffering this progressive intellectual failure. The disease was first described by the German psychiatrist, Alois Alzheimer in 1907, and is characterised by the appearance of proteinaceous depositions (first isolated in 1984), which are comprised of insoluble amyloid-ß (Aß)-aggregates. Aβ is derived from the β-amyloid precursor protein from which it is generated by the action of two proteases. Initially it was assumed that the insoluble amyloid fibrils, which were easily detectable, mediated the observed toxicity although it was recognised that amyloid plaque number did not correlate well with the severity of dementia. However, further studies with synthetic and human-derived Aß provided strong evidence that soluble prefibrillar aggregates of Aß mediated the synaptic failure and loss of cognitive performance. In 2008 genetic evidence showed that the presence of soluble Aß-oligomers is sufficient to cause an AD-like dementia, which centres the oligomeric Aβ as the probable effector of synapse loss. Although a variety of assemblies have been described their meta-stability and technical limitations caused a controversial debate about aggregate related pathogenesis. Thus, this study aimed to establish a structure-activity relationship comparing different synthetic Aß-aggregates using biophysical methods to follow aggregation and to assess morphology, absolute MW and meta-stability of monomeric, oligomeric, protofibrillar and fibrillar Aß. However, interference with the aggregate equilibrium, by changing the ionic environment, can cause structural conversion of Aß-aggregates. Therefore, different Aß-aggregates were only compared in short-termed physiological settings i.e. neuronal binding and hippocampal neurotransmission. Herein, only prefibrillar aggregates bound to neurons and differentially impaired hippocampal neurotransmission either by inhibition of basal neurotransmission or NMDA-dependent long-term potentiation. In addition, changing the ionic environment provoked a structural conversion, which also changed the pathogenic mode of action. This study provides experimental evidence that different soluble Aß-aggregates are highly potent synaptotoxins, impairing neurotransmission by different mechanisms. Furthermore, solution-based biophysical characterisation and acute biological paradigms are crucial for differential characterisation of Aß-aggregates revealing that virtually similar aggregates can have opponent pathogenic effects; thus, morphology only does not explain observed pathogenicity.

Two of the existing assay procedures for dopamine B-hydroxylase were studied with respect to their suitability in the measurement of low levels of activity. Specifically, the spectrophotometric method and the coupled radioenzymatic methods were assessed relative to their ability to detect DBH activity in the perfusate of isolated rat tail arteries incubated under conditions known to inhibit the sodium pump. The spectrophotometric method , was the initial choice because of its low cost, greater ease of performance, and the fact that DBH is assayed under saturating conditions. Although it was found that this method suffered from a lack of sensitivity, attempts were made to improve this. The blank value was reduced and stabilized by the introduction of a mixture of 5 X 10⁻⁴ M fusaric acid and 5 X 10⁻⁴ M EDTA, which produced routine blank levels of ΔA= 0.005, equal to the lowest reported literature values. Also, the effect of ADP activation was investigated for its suitability in the procedure. Despite a three-fold increase in measured DBH activity, however, this method was still not sensitive enough to detect the enzyme activity in tissue incubates, although these improvements made the method more suitable for the assessment of levels of DBH activity in the serum of laboratory animals. The second choice was the coupled radioenzymatic method of Molinoff, because of its inherently greater sensitivity. While initial experiments proved this procedure effective in the detection of the release of DBH from rat vas deferens under conditions known to stimulate maximum exocytosis it was felt that problems could be encountered in the measurement of DBH activities obtained under less than optimal conditiona. Therfore, the procedure was investigated with respect to maximizing the absolute sensitivity. Preliminary studies on the feasibility of extended incubation in the first step, led to a rationale in which the two enzymic reactions were isolated and studied separately. In the second step, it was found that tyramine as expected, inhibited the PNMT reaction, although with sigmoidal kinetics. Paradoxically, non-dialyzable and heat stable impurities that inhibited PNMT were found in commercial preparations of catalase, although the addition of ascorbate eliminated this effect. Bovine serum albumin was found to selectively activate PNMT in a highly concentration dependent manner, with a five-fold maximum activation resultant from the inclusion of 0.14% BSA in the sample aliquot. Blank mixture and reaction time were investigated, and a doubling of sensitivity was found to result from limiting reaction time for the second step to 25 minutes. The PNMT was also shown to be unsaturated with respect to SAM, and an increase in the total concentration of SAM by the addition of labelled and unlabelled SAM to a concentration 40 times normal, was found to make the second reaction linear with respect to octopamine concentration. Fin ally, the [PNMT] could be increased up to 20 times without affecting linearity, and this produced an increase in sensitivity in direct proportion to the increase in enzyme concentration. These modifications were sufficiently effective so as to allow an increase in the concentration of tyramine in the first reaction mixture without too much of a loss of activity. This made the DBH reaction linear with respect to both time and enzyme concentration, which greatly improves accuracy and correlatability of results. Trial experiments proved that the combination of all these modifications into an improved procedure resulted in an assay with an improvement in sensitivity of at least two orders of magnitude over the standard method, with vastly improved characteristics of time and concentration linearity. The suitability of this method for our planned tissue release studies was also confirmed. It is hoped that the improvement in sensitivity and linearity of this modified procedure will allow its use in new experimental situations. / Medicine, Faculty of / Pathology and Laboratory Medicine, Department of / Graduate