Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Graziella Nuernberg Back-Brito / Resumo: A maioria das infecções por Candida estão relacionadas com biofilmes microbianos, que muitas vezes são formados por associações de diferentes espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar as interações entre as diferentes espécies de Candida em biofilmes formados in vitro e verificar a sensibilidade dos biofilmes monotípicos de C. albicans e heterotípicos à terapia fotodinâmica (PDT). Foram estudadas cepas clínicas de C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata e C. krusei. A partir de suspensões padronizadas de cada cepa (107 células/mL), biofilmes monotípicos e heterotípicos (formados por C. albicans e espécies não albicans) foram formados em placas de microtitulação de 96 poços durante 48 horas. A seguir, os biofilmes monotípicos de C. albicans e heterotípicos foram submetidos à PDT com fotossensibilizador eritrosina associado ao diodo emissor de luz (LED) verde. Os biofilmes foram analisados por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mL) em HiCrome Candida por 48h e pela viabilidade celular através do ensaio colorimétrico XTT (2 metoxi 4 nitro 5 sulfofenil 5 fenilalanina carbonil 2H tetrazolium hidróxido). Os resultados obtidos foram submetidos à ANOVA e teste de Tukey. Tanto na contagem de UFC/mL quanto no ensaio colorimétrico XTT, foi observado que o crescimento de C. albicans em biofilme monotípico e heterotípicos com C. tropicalis e C. glabrata foi semelhante. Entretanto, foi inibido em biofilme heterotípico com C. krusei. Foi demonstrado também que a PDT reduziu a viabilidade celular e a contagem de UFC/mL tanto dos biofilmes monotípicos quanto heterotípicos. Concluiu-se que C. albicans estabeleceu relações favoráveis com C. tropicalis e C. glabrata e relações antagônicas com C. krusei em biofilmes heterotípicos. Além disso, os biofilmes monotípicos e heterotípicos foram sensíveis à PDT mediada por LED e eritrosina / Abstract: Most Candida infections are related to microbial biofilm, which are often formed by the association of different species. The objective of this study was to evaluate the interactions between different species of Candida biofilms in vitro and investigate the sensitivity of C. albicans monotypic biofilms and heterotypic biofilms to photodynamic therapy (PDT). From standardized suspensions of each strain (107 cells/ml), monotypic and heterotypic biofilms (formed by C. albicans and non-albicans species) were developed on flat-bottom 96-well microtiter plates for 48 hours. After that, C. albicans monotypic biofilms and heterotypic biofilms were subjected to PDT with photosensitizer erythrosine associated with green light emitting diode (LED). Biofilms were analysed by counting colony-forming units (CFU/m)l in Candida HiCrome for 48h and by cell viability using the XTT (2 methoxy 4 nitro 5 sulfophenyl 5 phenylamino carbonyl 2H tetrazolium hydroxide) colorimetric assay. The results were subjected to ANOVA and Tukey test. Both in the counting of CFU/ml as in the XTT colorimetric assay, it was observed that the growth of C. albicans in monotypic and heterotypic biofilm with C. glabrata and C. tropicalis was similar. However, it was inhibited in heterotypic biofilm with C. krusei. It was also demonstrated that PDT reduced cell viability and the number of CFU/mL of both monotypic and heterotypic biofilms. It was concluded that C albicans had favorable interaction with C. glabrata and C. tropicalis and antagonistic interaction with C.krusei in heterotypic biofilms. In addition, both of monotypic and heterotypic biofilms were sensitive to LED- and erythrosine-mediated Photodynamic Therapy / Mestre

Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: José Paes de Almeida Nogueira / Banca: Ary Fernandes Junior / Resumo: Listeria monocytogenes é uma bactéria frequentemente encontrada em vários alimentos crus, como carne, queijo e legumes. Está amplamente distribuída no ambiente causando a contaminação de alimentos durante seu processamento. Atualmente, a contaminação por L. monocytogenes nas indústrias alimentícias é considerada um dos maiores problemas de segurança alimentar, pois uma vez presente na linha de processamento à bactéria dificilmente é eliminada pela grande capacidade em formar biofilme. A formação de biofilmes em equipamentos pode levar a sérios problemas de higiene e perdas econômicas devido à deterioração dos alimentos e deficiência dos equipamentos. Além disso, a contaminação por patógeno representa um grande risco para saúde. A incidência de listeriose é baixa, mas a taxa de letalidade é alta. Muitos dos focos principais de listeriose têm sido associados ao consumo de alimentos contaminados, especialmente os produtos lácteos. Assim, esse trabalho teve como objetivo analisar a capacidade de formação de biofilme, por 32 cepas de L. monocytogenes isoladas de diferentes alimentos, em diferentes materiais (aço inoxidável, vidro e poliestireno) e temperaturas (4º, 20º, 35ºC) observando a presença do gene luxS e também testar a eficácia de dois sanitizantes alcalino clorado, utilizados para sanitização de planta de processamento de alimentos. Os resultados demonstraram que entre as 32 cepas testadas 25 (78,1%) foram positivas para o gene luxS e a bactéria foi capaz de produzir biofilme em todos os materiais e temperaturas testadas, apresentando maior frequência de cepas produtoras nos materiais hidrofílicos (96,7% vidro e 95,6% inox) do que no hidrofóbico (28%). Os testes com sanitizantes mostraram que as concentrações recomendadas podem ser eficazes desde que utilizados em tempo mínimo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Listeria monocytogenes is frequently found in many raw foods such as meat, cheese and vegetables, is widely distributed in the environment causing contamination of food during processing. Currently, contamination by L. monocytogenes in food is considered a major food security problems, because once present in the processing line, this bacteria is hardly eliminated by the great ability to form biofilm. The formation of biofilms on equipment can lead to serious health and economic losses due to spoilage and disability equipment. Furthermore, contamination pathogen is a great risk to health. The listeriosis incidence is low, but the fatality rate is high. Many of the main focuses of listeriosis have been linked to consumption of contaminated food, especially dairy products. Thus, this study aimed to analyze 32 strains of L. monocytogenes isolated from different foods to form biofilms on different materials (stainless steel, glass and polystyrene) and temperatures (4 º, 20 º, 35 º C) for the presence of the gene luxS and also test the effectiveness of two sanitizers alkaline chlorine used to sanitize the plant food processing. The results showed that the strains tested 25 (78.1%) were positive for the gene and the bacterium was able to produce biofilm in all materials and temperatures tested, with higher frequency of hydrophilic materials in producing strains (96.7% glass and 95.6% stainless) than in the hydrophobic (12.4%). The tests show that the sanitizing recommended concentrations may be effective if used in minimum time of 30 minutes for the product A and 15 for the product B has led to the elimination of 16 (50%) of the strains tested. We conclude that the gene luxS may be involved in the regulation of biofilm formation, but shouldn't be the only one, once luxS-negative strains were also producers. We conclude... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: Com o crescente aumento de cepas de Candida spp. resistentes a antifúngicos, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a Terapia Fotodinâmica (TFD), sobre fatores de virulência desse gênero. A produção das enzimas hidrolíticas aspartil-proteinase (SAP), lipase (LIP) e fosfolipase (PL) é considerado um importante fator de virulência de C. albicans. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 pelas leveduras. Foram utilizadas cepas clínicas de Candida albicans (n=9) que foram isoladas de pacientes portadores do vírus HIV e a cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção de enzimas hidrolíticas (SAP5, LIP9 e PLB2) nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se o ensaio de PCR em tempo real. Para a terapia fotodinâmica foi utilizado laser de gálio-alumínio-arseneto de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) como fonte de luz e o corante azul de metileno a 300 μM, como fotossensibilizador. Foram avaliados quatro grupos experimentais, para cada cepa: a) F+L+: sensibilização com azul de metileno e irradiação com laser; b) F+L-: somente tratamento com azul de metileno; c) F-L+: somente irradiação com laser e d) F-L-: grupo controle, sem sensibilização com azul de metileno e ausência de luz. Os resultados obtidos foram analisados pelo Software do equipamento de real-time. A TFD diminuiu a expressão dos genes em 60% das amostras para o gene SAP5 e em 50% das amostras diminuiu a expressão de LIP9 e PLB2. Pode-se concluir que a TFD teve um efeito sobre os genes SAP5, LIP9 e PLB2 de C. albicans, considerados fatores de virulência / Abstract: With the increasing number of strains of Candida ssp. resistant to antifungal agents, becomes important and necessary the accomplishment of researches that evaluate the effects of new therapeutic methods, like Photodynamic therapy (PDT) in virulence factors of that gender, as the production of the hydrolytic enzymes aspartyl-proteinase (SAP), lipase (LIP) and phospholipase (PL). Thus, the objective of this study was to verify the effects of the photodynamic therapy on biofilms of Candida albicans, evaluating their effects on the expression of the genes SAP5, LIP9 and PLB2 for the yeast. Clinical strains of Candida albicans (n=9) isolated from patients bearers of the virus HIV and a pattern strain ATCC 18804 were used. The quantification of gene expression was related to the production of hydrolytic enzymes (SAP5, LIP9 and PLB2) in clinical samples and the reference strain using the PCR assay in real time. For photodynamic therapy were used laser-aluminum-gallium arsenide low power (red visible, 660 nm) as light source and the methylene blue to 300 μM, as a photosensitizer. We were assessed four experimental groups for each strain: a) F+L+: sensitization with methylene blue and laser irradiation; b) F+L-: only treatment with methylene blue; c) F-L+: only laser irradiation and d) F-L-: control group, without sensitization with methylene blue and light absence. The results were analyzed by the software of the real-time equipment. The PDT decreased gene expression in 60% of samples for gene SAP5 and 50% of the samples decreased expression of LIP9 and PLB2. It can be concluded that PDT had an effect on the genes SAP5, LIP9 and PLB2 of C. albicans / Mestre

Orientador: Ana Carolina Pero / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Raphael Freitas de Souza / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da utilização de um adesivo para prótese (Ultra Corega creme) na formação de biofilme sobre a superfície interna de próteses totais e na microbiota bucal, no grau de satisfação, além da estimativa de custo médio diário do produto. Trinta pacientes receberam próteses totais novas, e foram divididos em dois protocolos: protocolo 1- utilização do adesivo durante os primeiros 15 dias de teste, seguida por não utilização de nenhum tipo de adesivo durante os próximos 15 dias; protocolo 2- não utilização de adesivo durante os primeiros 15 dias de teste, seguida por utilização do adesivo durante os próximos 15 dias. Após cada período de 15 dias, o biofilme formado na superfície interna das próteses totais foi corado e quantificado por meio de um método fotográfico com o auxílio de um software (Image Tool 3.00). Amostras de material da mucosa palatina e da superfície interna das próteses superiores foram plaqueadas em meios seletivos para Candida spp. e Streptococcus mutans e em um meio não seletivo. Ainda, foi aplicado um questionário para avaliação da satisfação com as próteses e o custo médio diário do produto foi estimado por meio de fórmulas matemáticas. Todas as análises foram realizadas com α = 0,05 e foram empregados testes apropriados à distribuição dos dados. Foi observada formação de biofilme semelhante com ou sem o uso do adesivo sobre as próteses superiores (Wilcoxon, p=0,255) e inferiores (Wilcoxon, p=0,433). Contagens de colônias semelhantes foram observadas com ou sem a utilização do adesivo na mucosa e na superfície interna da prótese total superior (p>0,05). O uso de adesivo proporcionou maior satisfação aos participantes (Wilcoxon, p=0,04). Em média, cada paciente utilizou 3,9 ± 0,3 gramas de adesivo por dia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of adhesive usage (Ultra Corega cream) on biofilm formation on the internal surface of dentures and oral microbiota, degree of satisfaction, and the estimated average daily cost of product. Thirty patients received new dentures, and have been divided into two protocols: Protocol 1-use of the adhesive during the first 15 days of the test, followed by not using adhesive over the next 15 days; Protocol 2- no use of adhesive for the first 15 days of the test, followed by use of adhesive over the next 15 days. After each period of 15 days, the internal surfaces of the dentures were stained and photographed and the areas (total internal surface and surface stained with biofilm) quantified (Image Tool 3.00). Samples of material from the palatal mucosa and the internal surface of the maxillary denture were plated on selective media for Candida spp. and Streptococcus mutans and a non-selective medium. A questionnaire was applied to evaluate satisfaction with the dentures and the average daily cost of the product was estimated by mathematical formulas. All analyzes were performed with α=.05 and appropriate tests were applied to the data distribution. Similar biofilm formation was found with or without adhesive usage for maxillary (Wilcoxon, p=.255) and mandibular dentures (Wilcoxon, p=.433). Similar colony counts were observed with or without adhesive for mucosa and the internal surface of dentures, irrespective of the culture medium (p>.05). The use of adhesive provided higher satisfaction (Wilcoxon, p=.04). On average, each patient used 3.9 ± 0.3 grams of adhesive per day, equivalent to R $ 4.02 for average daily cost. It is concluded that the use of the adhesive did not affect the quantification of the biofilm and the oral microbiota, besides providing greater overall satisfaction / Doutor

Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: A mastite bovina é uma inflamação da glândula mamária, geralmente ocasionada por micro-organismos, que causa grandes prejuízos às fazendas leiteiras, devido ao uso de medicamentos, pagamento aos médicos veterinários, descarte de leite e até do animal e a Escherichia coli é o principal agente etiológico causador da forma clínica dessa doença. Neste trabalho, foram pesquisados genes para a classificação de E. coli diarreiogênica (DEC) ou de E. coli patogênica extra-intestinal (ExPEC), dentro dos grupos filogenéticos, além de genes que codificam fatores de virulência e resistência aos antimicrobianos. Também foram realizados testes de quantificação de produção de biofilme e produção de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL). Entre os 161 isolados, dois (1,2%) foram classificados como DEC. Considerando-se os genes pesquisados, os mais frequentes foram fimH (160 = 99,3%), traT (126 = 78,3%), ecpA (108 = 67%) e ompT (60 = 37,3%). Em relação aos grupos filogenéticos, a maioria foi classificada nos grupos B1 (52,8%) e A (36,6%). Quanto à produção de biofilme, 68 (42,2%) foram classificadas como não produtoras, 80 (49,7%) como fracas, 11 (6,8%) como moderadas e apenas duas (1,2%) foram fortes produtoras. Apenas dois (1,2%) isolados apresentaram positividade no teste fenotípico de ESBL, com a presença do gene blaCTX-M-15. Considerando-se outros genes de resistência, blaTEM foi encontrado em sete (4,3%) isolados e blaSHV em um (0,6%). Os dois (1,2%) isolados escN+ apresentaram padr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bovine mastitis is an inflammation of the mammary gland, usually caused by microorganisms, which causes great damage to dairy farms, due to the use of medicines, payment to veterinarians, disposal of milk and even the animal and Escherichia coli is the main etiologic agent that causes the clinical form of this disease. In this study, genes were searched for the classification of diarrhogenic E. coli (DEC) or extra-intestinal pathogenic E. coli (ExPEC), within the phylogenetic groups, in addition to genes that encode virulence factors and resistance to antimicrobials. Quantification tests of biofilm production and production of extended spectrum beta-lactamase (ESBL) were also performed. Among the 161 isolates, two (1.2%) were classified as DEC. Considering the researched genes, the most frequent were fimH (160 = 99.3%), traT (126 = 78.3%), ecpA (108 = 67%) and ompT (60 = 37.3%). Regarding phylogenetic groups, most were classified in groups B1 (52.8%) and A (36.6%). As for the production of biofilm, 68 (42.2%) were classified as non-producing, 80 (49.7%) as weak, 11 (6.8%) as moderate and only two (1.2%) were strong producers. Only two (1.2%) isolates were positive in the ESBL phenotypic test, with the presence of the blaCTX-M-15 gene. Considering other resistance genes, blaTEM was found in seven (4.3%) isolates and blaSHV in one (0.6%). The two (1.2%) escN+ isolates showed a “localized-like” adhesion pattern in HeLa cells and their potential to induce attaching/effacing lesio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Claúdia Pavarina / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Ana Paula Dias Ribeiro / Resumo: A necessidade de superar o desafio criado pelos biofilmes resistentes aos tratamentos antimicrobianos convencionais tem levado à busca por tratamentos alternativos, como terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). Este estudo avaliou in vitro a eficácia da aPDT na inativação de biofilmes de Staphylococcus aureus suscetíveis e resistentes à meticilina (MRSA e MSSA), mediado pelos fotossensibilizadores (PSs) Curcumina (Cur) e Photodithazine® (PDZ). Biofilmes foram formados e tratados com diferentes concentrações de Cur (0, 20, 40 e 80 μM) e PDZ (0, 50 e 75 mg/L), e iluminados ou não por fonte de luz LED (Cur 455 ± 3 nm/ 5,28 J/cm2; PDZ 660 ± 3 nm/ 5,28 J/cm2 ou 50 J/cm²). Os grupos Controle Positivo (CP) não receberam nenhum PS e também não foram iluminados. A viabilidade dos micro-organismos após a aPDT foi avaliado pelo número de colônias viáveis, pelo ensaio de XTT e pela utilização do kit LIVE/DEAD® na Microscopia Confocal de Varredura à Laser (MCVL). Os resultados foram avaliados por análises de variância de dois fatores de efeitos fixos (ANOVA) e complementados por comparações múltiplas de médias pelo teste de Tukey. Para ambas as cepas, todas as concentrações de Cur e PDZ testadas reduziram significativamente a atividade metabólica e o UFC/mL para ambos micro-organismos quando comparado com os grupos CN (p0,05). Os resultados foram otimizados para a Cur quando utilizou-se a maior concentração (80 μM), para a PDZ, a maior redução nos micro-organismos foi observada quando associou-se a maior concentração de PDZ (75 mg/L) com a maior dose de luz (50 J/cm²). Os biofilmes submetidos a aPDT demostraram pela MCVL um maior número de células coradas em vermelho, indicando que a aPDT foi eficaz para promover danos ou morte às células bacterianas. Assim, a aPDT pode ser considerada promissora para atuar de forma sinérgica no tratamento de infecções bacterianas / Abstract: The need to overcome the challenge created by biofilms regarding conventional antimicrobial approaches has lead to search of alternative treatments such as Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). This in vitro study evaluated the efficacy of aPDT using the photosensitizer (PS) Curcumin (Cur) and Photodithazine® (PDZ) in the inactivation of biofilms of methicillin susceptible and resistant S. aureus (MSSA and MRSA). Biofilms were treated with different Cur (0, 20, 40 or 80 μM of Cur) and PDZ concentrations (0, 50 or 75 mg/L) and illuminated or not with LED source (Cur 455 ± 3 nm/ 5.28 J/cm2; PDZ 660 ± 3 nm/ 5.28 J/cm2 or 50 J/cm²). Positive control samples were not exposed to PS or light. The microorganisms viability after aPDT were evaluated by counting the number of colonies, the XTT assay and LIVE/DEAD® staining using confocal laser scanning microscopy (CLSM). The results were evaluated by analysis of variance, two-factor fixed effects (ANOVA) and complemented by multiple comparisons by Tukey test. For both strains, all the tested Cur and PDZ concentrations reduced significantly both biofilm metabolic activity and CFU/mL compared to the negative control (p0.05). Moreover, the results were optimized for Cur when the higher concentration was used (80 μM); For PDZ, the best results were obtained when it was associated a higher concentration of PDZ (75 mg/L) with the higher dose of light (50 J/cm²). Biofilms submitted to aPDT showed a large number of red-stained colonies, indicating that this therapy was efficient in disrupting the bacterial membrane. It can be concluded that PS was efficient in reducing viable colonies of both S. aureus strains by damaging cell membrane and causing cell death. Thus, the aPDT is can be considered promising to act synergistically in the treatment of bacterial infections / Mestre

Orientador: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Resumo: Apesar de as bactérias serem os agentes mais prevalentes na mastite bovina, cada vez mais a literatura registra casos da doença ocasionados por fungos e algas do gênero Prototheca. O presente trabalho teve como objetivo gerar novos conhecimentos sobre a etiologia e patogenicidade dos agentes da mastite bovina causada por fungos e algas do gênero Prototheca a partir da identificação morfofisiológica e molecular, além de análises da capacidade de produção de biofilme e perfil de sensibilidade. Para isto, foram realizadas análises morfofisiológicas e moleculares de 33 isolados de leveduras e 40 algas do gênero Prototheca obtidos a partir de casos clínicos e subclínicos de mastite, colhidos sistematicamente em cinco propriedades leiteiras dos estados de São Paulo e Minas Gerais,como parte de seus respectivos programas de controle de mastite. Os resultados obtidos indicaram que todas as algas são pertencentes à espécie Prototheca zopfii e, entre as leveduras, foram identificadas as seguintes espécies: Pichia kudriazevii (n=16; 48,5%), Candida akabanensis (n=8; 24,2%), Candida tropicalis (n=3; 9,1%), Cyberlindnera jadinii (n=2; 6,1%), Candida glabrata (n=1; 3%), Candida parapsilosis (n=1; 3%), Candida palmioleophila (n=1; 3%) e Candida haemulonis (n=1; 3%), sendo que Candida akabanensis, Candida palmioleophila e Cyberlindnera jadinii nunca foram descritas em casos de mastite bovina. A diversidade de espécies de leveduras isoladas sugere que a utilização de técnicas moleculares te... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although bacteria are the most prevalent agents in bovine mastitis, increasingly literature reported cases of the disease caused by fungi and algae of the genus Prototheca. This study aimed to generate new knowledge about the etiology and pathogenicity of bovine mastitis agents caused by fungi and algae of the genus Prototheca from morphophysiological and molecular identification, besides analysis of biofilm production capacity and susceptibility profile. For this, morphophysiological and molecular analyzes were performed of 33 yeast isolates and 40 algae of the genus Prototheca obtained from clinical and subclinical mastitis cases, systematically collected in five dairy properties in the states of São Paulo and Minas Gerais, as part of their respective mastitis control programs. The results indicated that all algae are belonging to the species Prototheca zopfii and, among the yeasts, the following species have been identified: Pichia kudriazevii (n=16; 48.5%), Candida akabanensis (n=8; 24.2% ), Candida tropicalis (n= 3; 9.1%), Cyberlindnera jadinii (n= 2; 6.1%), Candida glabrata (n= 1, 3%), Candida parapsilosis (n= 1, 3%), Candida palmioleophila (n= 1, 3%) and Candida haemulonis (n= 1, 3%). It is worth mentioning that Candida akabanensis, Candida palmioleophila and Cyberlindnera jadinii have never been described in cases of bovine mastitis. The diversity of yeasts species suggests that the use of molecular techniques has allowed the realization of more accurate diagnoses, wh... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Trabalho de investigação desenvolvido na Delft University of Technology. Faculty of Applied Sciences. Department of Biotechnology / Tese de Mestrado Integrado. Bioengenharia. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2012

CAMPOS, R. S. Atividade antifúngica da palmatina frente a isolados de Candida spp. resistentes a azólicos e sua atividade contra biofilme formado e em formação. 2017. 104 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-22T11:52:05Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-22T11:52:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T11:52:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Currently, the incidence of fungal infections has been increasing and in a prominent position, those caused by species of the genus Candida, which is the most isolated microorganism in hospital sepsis. The most frequently isolated species was Candida albicans, but this scenario has been changing with the increase of non-albicans species, which are more resistant to fluconazole. Due to the resistance problem and the fact that there are few antifungal drugs available on the market, it is necessary to search for new drugs. In this context, there was an interest in studying palmatine, which is an isoquinolinic alkaloid, which has been used in traditional Chinese medicine for several years, presenting several pharmacological properties, including antifungal. The objective of this work was to evaluate the antifungal activity of palmatina against Candida spp. Resistant to azoles. The methodology used to verify the antifungal action was the broth microdilution technique. Flow cytometry tests were performed to elucidate the possible mechanisms of death involved. The anticancer action of palmatine was verified in biofilms formed and in formation in the three main Candida species (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis). Proteomic analysis was also used as a tool to understand the biochemical processes involved in the action of palmatine and the cytotoxicity test was also performed on murine fibroblasts. Palmatina demonstrated antifungal activity with MICs ranging from 32 to 128 μg / mL. It was found that palmatine reduced cell density, caused DNA damage, promoted mitochondrial depolarization, increased phosphatidylserine outgrowth, suggesting cell death by apoptosis. In biofilms formed, palmatine reduced the cellular viability of the biofilm in a concentration of 20x MIC (C. albicans) and 10x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis) by 50%. In biofilms in formation, the same percentage of inhibition was achieved in the MIC concentration (C. albicans) and 2x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis). Proteomic analysis of a strain of C. albicans exposed to palmatine demonstrated the overexpression of proteins related to energy production and synthesis of macromolecules. Palmatine did not demonstrate cytotoxicity when evaluated at the concentration of 100 μg / mL in murine fibroblast L929 cells. The antifungal action of palmatine in Candida spp. Resistant to planktonic and biofilm forming and forming biofilms, as well as being non-cytotoxic to animal cells, point to a promising new molecule or anti-plaque prototype. / Atualmente, a incidência das infecções fúngicas vem aumentando e em posição de destaque, as causadas por espécies do gênero Candida, a qual é o microrganismo mais isolado em sepse hospitalar. A espécie mais frequentemente isolada era Candida albicans, mas esse panorama vem mudando com o aumento de espécies não albicans, as quais apresentam uma maior resistência ao fluconazol. Devido ao problema de resistência e o fato de haver poucos fármacos antifúngicos disponíveis no mercado, faz-se necessário a busca por novos fármacos. Neste contexto, houve interesse em estudar a palmatina que é um alcalóide isoquinolínico, há anos já vem sendo usado na medicina tradicional chinesa apresentando várias propriedades farmacológicas, inclusive antifúngica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica da palmatina frente à cepas de Candida spp. resistentes a azólicos. A metodologia utilizada para verificar a ação antifúngica foi a técnica de microdiluição em caldo. Foi realizados testes de citometria de fluxo para elucidar os possíveis mecanismos de morte envolvidos. A ação anticandida da palmatina foi verificada em biofilmes formados e em formação nas três principais espécies de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis). A análise proteômica também foi utilizada como ferramenta no entendimento dos processos bioquímicos envolvidos na ação da palmatina e também foi realizado o teste de citotoxicidade em fibroblastos murino. Palmatina demonstrou atividade antifúngica com os CIM variando 32 a 128 μg/ mL. Verificou-se que a palmatina reduziu a densidade celular, causou danos ao DNA, promoveu despolarização mitocondrial, aumenta a externalização de fosfatidilserina, sugerindo morte celular por apoptose. Em biofilmes formados, palmatina reduziu em 50% a viabilidade celular do biofilme na concentração de 20x CIM (C. albicans) e 10x CIM (C. tropicalis e C. parapsilosis). Já em biofilmes em formação, a mesma porcentagem de inibição foi alcançada na concentração do CIM (C. albicans) e 2x CIM (C. tropicalis e C. parapsilosis). Análise proteômica de uma cepa de C. albicans exposta a palmatina demonstrou a super expressão de proteínas relacionadas à produção de energia e síntese de macromoléculas. Palmatina não demonstrou citotoxicidade quando avaliada na concentração de 100 μg/ mL em células L929 de fibroblasto murino. A ação antifúngica da palmatina em Candida spp. resistentes a azólicos na forma planctônica e em biofilme formados e em formação, assim como, ao fato de não ser citotóxica para células animais, apontam para uma promissora nova molécula ou protótipo anticandida.

SILVA, Janice Oliveira. Sensibilidade a antimicribianos de bacteroidales de microbiota intestinal de cães e o efeito de concentracöes subinibitórias de antimicrobianos na formação de biofilme in vitro. 2015. 71 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-21T14:02:09Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_josilva.pdf: 3676948 bytes, checksum: 203813cb8b6b1cfde06f219baa3a05cb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-21T14:03:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_josilva.pdf: 3676948 bytes, checksum: 203813cb8b6b1cfde06f219baa3a05cb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-21T14:03:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_josilva.pdf: 3676948 bytes, checksum: 203813cb8b6b1cfde06f219baa3a05cb (MD5) Previous issue date: 2015 / The Bacteroides and Parabacteroides spp are involved in serious diseases like abscesses and bacteremia in humans and animals. These bacteria are characterized by antimicrobial resistance and B. fragilis is the main anaerobic bacteria isolated from the intestine which can form biofilm. The aim of this study was to isolate Bacteroides and Parabacteroides strains from dogs intestinal tract, to investigate the antimicrobial susceptibility and to evaluate the action of antimicrobials subinhibitory concentrations on biofilm formation. A total of 30 strains were evaluated in this study. The assays were performed in accordance with the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) guidelines and other established methods. Antimicrobial susceptibility was observed against penicillin, amoxicillin-clavulanic acid, cefoxitin, imipenem, clindamycin, ciprofloxacin, enrofloxacin, tetracycline, chloramphenicol and metronidazole. Fifteen B. fragilis strains were tested for biofilm formation and the stronger four biofilm producer strains were chosen to evaluate the effect of subinhibitory concentrations (1/2 and 1/4MIC) of six antimicrobials on biofilm formation. B. fragilis was the most frequently isolated anaerobic bacteria followed by P. distasonis and B. vulgatus. The isolates were uniformly susceptible to metronidazole, imipenem and chloramphenicol and were penicillin resistant. Tetracycline and clindamycin were active against 50% and 33% of the strains respectively. The biofilm production of all four strains was uniformly and significantly lower (P<0.05) after growth with ½ MIC and ¼ MIC of imipenem and metronidazole. The induction of biofilm formation was observed in two isolates at ½ MIC and ¼ MIC of enrofloxacin. / Os gêneros Bacteroides e Parabacteroides estão envolvidos em doenças graves como abscessos e bacteremia em humanos e animais. Estas bactérias são caracterizadas pela resistência antimicrobiana e B. fragilis é a principal bactéria anaeróbica isolada do intestino que pode formar biofilme. O objetivo deste trabalho foi isolar Bacteroides e Parabacteroides do trato intestinal de cães, para avaliar a sensibilidade antimicrobiana e a ação de concentrações subinibitórias de antimicrobianos sobre a formação de biofilme. Um total de 30 amostras foram avaliadas neste estudo. Os ensaios foram realizados de acordo com os métodos e as diretrizes de Clínicals Laboratory Standards Institute (CLSI) e outras metodologias estabelecidas. Os antimicrobianos testados contra Bacteroides e Parabacteroides foram: penicilina, amoxicilina-ácido clavulânico, cefoxitina, imipenem, clindamicina, ciprofloxacina, enrofloxacina, tetraciclina, cloranfenicol e metronidazol. Quinze cepas de B. fragilis foram testadas para a formação de biofilme e as quatro cepas mais produtoras de biofilmes foram escolhidas para avaliar o efeito de concentrações subinibitórias (1/2 e 1/4CIM) de seis antimicrobianos sobre a formação de biofilme. B. fragilis foi a bactéria mais frequentemente isolada seguida por P. distasonis e B. vulgatus. Os isolados foram uniformemente sensíveis ao metronidazol, imipenem e cloranfenicol e foram resistentes à penicilina. Tetraciclina e clindamicina foram ativas contra 50% e 33% das cepas, respectivamente. A produção de biofilme de todas as quatro cepas foi uniforme e significativamente menor (P <0,05) após crescimento com ½ e ¼CIM de imipenem e metronidazol. A indução da formação de biofilme foi observada em duas cepas com ½ e ¼ CIM de enrofloxacina.