Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são leveduras encapsuladas e agentes etiológicos da criptococose. Estes microrganismos são patogénos intracelulares facultativos os quais interagem com macrófagos do hospedeiro durante o processo de infecção. C. neoformans é capaz de se replicar no interior de células fagocíticas utilizando uma estratégia única que envolve permeabilização do fagolisossoma e produção de polissacarídeos. No presente trabalho, a metodolologia da Análise da Diferença Representacional (RDA) foi aplicada para identificar genes diferencialmente expressos por C. neoformans e C. gattii durante o desenvolvimento intracelular em macrófagos peritoneais de ratos. C. neoformans internalizados por macrófagos expressaram genes relacionados ao tráfego vesicular, transporte de membrana, atividade de chaperona, regulação da meiose, metabolismo de monossacarídeo e resposta ao estresse. Em C. gattii, foram induzidos transcritos relacionados à respiração aeróbica, endocitose, tráfego vesicular, metabolismo de monossacarídeo e nitrogênio, sinalização celular e resposta ao estresse. Nossos resultados revelaram novos genes envolvidos no parasitismo intracelular de C. neoformans e C. gattii.

MONTEIRO, P. B. Dinâmica de oferecimento e realização da citologia em gestante de Fortaleza. 2016. 55 f. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) - Faculdade de Medicina,Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-05T13:35:09Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbmonteiro.pdf: 707730 bytes, checksum: c5813c720342d9db6cb326564df971ca (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-05T13:35:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbmonteiro.pdf: 707730 bytes, checksum: c5813c720342d9db6cb326564df971ca (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T13:35:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_pbmonteiro.pdf: 707730 bytes, checksum: c5813c720342d9db6cb326564df971ca (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Cervical cancer was responsible for the death of 265,000 women in the world in 2012. With the exception of skin cancer, this tumor is the one with the greatest potential for prevention and cure when diagnosed early. The conventional Pap test (Papanicolaou) is the main strategy of screening programs for cervical cancer in Brazil and worldwide. It is known that, in developing countries, many women only seek health services when they show symptoms of disease or during pregnancy. Therefore, pregnancy can be a good opportunity to conduct a Pap smear with the aim of preventing cervical cancer. This study had the objective of assess the dynamics of offering and performing cytology collection for screening cervical cancer in pregnant women in Fortaleza-CE. This is a descriptive cross-sectional study with a quantitative approach. The research was conducted at the Maternity School Assis Chateaubriand (MEAC), with a sample of 318 patients. Univariate and multivariate analysis was performed using SPSS statistical software. Only 11% of all patients and 10.8% of patients over 25 years took advantage of the prenatal consultations to make the Pap smear. Among the 283 (89%) patients who did not realize cervical cancer prevention in pregnancy, the majority, 80.9%, did not do it because the health professional had not offered. In the analysis of demographic and socioeconomic variables, the group of patients who were employed at the time showed the highest prevalence of taking the exam during pregnancy compared to women who did not work (PR: 2.19; 95% CI 1.00 to 4.87; p: 0.043). Patients that had the pregnancy considered high risk pregnancy (PR: 3.15; 95% CI 1.52 to 6.54; p <0.001), that had prenatal care at MEAC (PR: 2.77; 95% CI 1.48 -5.19; p 0.001), that made all consultations with a physician (PR: 2.95; 95% CI 1.53 to 5.69; p: 0.003), that did not have a health center close to home (PR: 3.22; 95% CI 1.44 to 7.21; p: 0.026) and that knew that the exam could be done during pregnancy (PR: 5.05; 95% CI 2.16 to 11.83; p <0.001) had significantly higher prevalence of having their Pap smear performed during prenatal care. It can be concluded that the frequency of offering and the realization of cervical cytological collection was very low and that it is necessary to conduct awareness programs for health professionals on the importance and safety of performing the prevention of cervical cancer during prenatal visits. / O câncer de colo uterino foi responsável pelo óbito de 265 mil mulheres no mundo em 2012. Com exceção do câncer de pele, esse tumor é o que apresenta maior potencial de prevenção e cura, quando diagnosticado precocemente. O teste citopatológico convencional (Papanicolaou) é a principal estratégia de programas de rastreamento do câncer do colo do útero no Brasil e no mundo. Sabe-se que, em países em desenvolvimento, muitas mulheres só procuram os Serviços de Saúde quando apresentam sintomas de doenças ou durante a gravidez. Portanto, a gravidez pode ser uma boa oportunidade de realizar uma colpocitologia com o objetivo de prevenção do câncer do colo uterino. O presente estudo teve o objetivo de avaliar a dinâmica de oferecimento e realização de coleta de citologia oncótica para rastreamento de câncer de colo uterino em gestantes em Fortaleza-CE. Trata-se de um estudo descritivo de abordagem quantitativa do tipo transversal. A pesquisa foi desenvolvida na Maternidade Escola Assis Chateaubriand, com amostra de 318 pacientes. Para análise univariada e bivariada foi utilizado o programa estatístico SPSS. Apenas 11% das pacientes aproveitaram as consultas pré-natais para realizar o exame citopatológico do colo do útero. Entre as 283 (89%) pacientes que não realizaram sua prevenção de câncer de colo uterino na gestação, a grande maioria, 80,9% não o fez devido o profissional de saúde não ter oferecido. Na análise das variáveis demográficas e socioeconômicas, o grupo de pacientes que exerciam atividade remunerada apresentou prevalência maior, estatisticamente significante, de realizar o exame durante a gravidez quando comparadas às mulheres que não trabalhavam (RP: 2,19; IC95%1,00-4,87; p: 0,043). Pacientes cuja gravidez foi considerada de alto risco (RP: 3,15; IC95%1,52-6,54; p<0,001), que fizeram o pré-natal na MEAC (RP: 2,77; IC95% 1,48-5,19; p0,001), que realizaram todas as consultas com médico (RP: 2,95; IC95% 1,53-5,69; p: 0,003), não ter posto de saúde perto de casa (RP: 3,22; IC95% 1,44-7,21; p: 0,026) e consciência do não risco da coleta durante a gestação (RP: 5,05; IC95% 2,16-11,83; p < 0,001) apresentaram prevalência significativamente maior de terem seu exame citopatológico realizado durante o pré-natal. Pode-se concluir que a frequência de oferecimento e realização da coleta colpocitológica é muito baixa e que é necessário realizar programas de conscientização dos profissionais de saúde da importância e segurança da realização da prevenção do câncer de colo uterino durante as consultas pré-natais.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-16T03:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 349284.pdf: 2437951 bytes, checksum: a8b91ae71bb317e19028fb574bf1734d (MD5) Previous issue date: 2017 / Uma grande vertente de estudos da biotecnologia é a utilização das células estromais mesenquimais (CEM) para terapias regenerativas. Entretanto, o sucesso da terapia celular com CEM é dependente da sua fonte de obtenção, da qualidade e da eficiência destas células, sendo uma das mais importantes, o tecido adiposo (TA) subcutâneo. Este tecido é de fácil obtenção, comumente obtido de excedentes descartáveis de procedimentos cirúrgicos amplamente realizados no mundo. No entanto, a grande maioria das pesquisas com CEM do TA (CEM-TA) são de origem do tronco e membros, sendo o TA facial pouco explorado com fonte destas células. O TA apresenta diversas distinções de acordo com sua deposição anatômica: origem embrionária, tipos, distribuição, funções e constituição tecidual. Estas diferenças podem influenciar nas características e eficiência terapêutica das CEM-TA. Tendo em vista estes aspectos, o presente trabalho buscou caracterizar comparativamente o perfil fenotípico e o potencial de diferenciação de células obtidas do TA facial e do abdominal humano. Também foi analisada a integridade celular visando investigar a segurança da sua aplicação terapêutica. Para isto, as CEM foram isoladas do TA facial e do abdominal humano, e suas características morfológicas e fenotípicas mesenquimais, bem como o potencial de diferenciação celular foram analisadas. Os resultados mostraram que ambas as CEM-TA apresentam morfologia fusiforme, aderência ao plástico e presença de marcadores específicos de células mesenquimais, porém, com algumas diferenças. As CEM-TA da face apresentaram maior expressão do marcador CD105 que as de abdômen, além de maior potencialidade para gerar osteócitos enquanto as CEM-TA do abdômen foram mais precoces no processo de gerar adipócitos. Após esta caracterização comparativa, foram avaliados o potencial de viabilidade/proliferação, de migração e a capacidade de formar colônias (Colony-forming unit-fibroblasts-CFU-F, do inglês). Os resultados mostraram que ambas as CEM-TA são equiparadas no potencial de viabilidade e de migração celular, mas diferem na capacidade de proliferação e no potencial de formar CFU-F. As CEM-TA da face foram mais proliferativas e mostraram maior eficiência para formar CFU-F do que as CEM-TA obtidas do abdômen. Por fim, foram avaliadas a senescência e integridade genética. Os resultados mostraram que ambas as CEM-TA foram equiparadas em todas as análises, entretanto, em passagens mais altas (p23-28) as células obtidas do abdômen demonstraram maior instabilidade nuclear do que as CEM-TA da face durante a expansão celular. Em conclusão, o presente trabalho isolou CEM do TA facial e do abdominal humano. A origem do TA influenciou nas propriedades das células, mas ambas são equiparadamente promissoras para terapias regenerativas. Por fim, o TA facial é uma fonte alternativa de CEM tanto ou mais eficiente do que o TA abdominal humano. / Abstract : A major theme of biotechnological studies is the use of mesenchymal stromal cells (MSCs) for regenerative therapies. However, the tissue source is fundamental for the success of cell therapy with MSCs as well as their quality and efficiency. A well-known source of these cells is the subcutaneous adipose tissue (AT) which is easy to obtain and is a large reservoir of MSCs. Most studies obtain MSCs from AT (denominated in this study as MSC-AT) originated from trunk and members. AT has several differences depending on its anatomical location and embryonic origin, its types, distribution, functions and tissue constitution that might influence the characteristics and therapeutic efficiency. Therefore, the present study aimed to compare and characterize the phenotypic profile and potential cell differentiation of human facial and abdominal MSC-AT. Cellular integrity was also assessed to ensure safety of therapeutic applications. MSCs were isolated from facial and abdominal AT disposal after plastic surgeries and patient agrément. After cultured their morphological and phenotypical characteristics were analyzed, as well as the cell differentiation potential. Both facial and abdominal MSC-AT showed fusiform morphology, adhesion to plastic and mesenchymal markers. Facial MSC-AT showed a higher expression of CD105 marker and ostegenic potential than abdominal MSC-AT, in addition abdominal MSC-AT displayed premature adipogenic potential. Both facial and abdominal MSC-AT exhibited equivalent viability and cell migration potential, but were different in proliferation capacity and fibroblastoid colony forming units (CFU-F) potential. Facial MSC-AT were more proliferative and showed higher CFU-F efficiency than abdominal cells. However, in higher passages (p23-28), abdominal MSC-AT demonstrated higher nuclear instability than facial cells. In summary, the present study isolated MSCs from both facial and abdominal human AT, the origin of AT influenced some cell properties and facial AT is an important alternative source of MSCs.

O tratamento com antimicrobianos é a principal estratégia de controle da tuberculose (TB). Entretanto, o aumento do número de casos de TB com cepas de Mycobacterium tuberculosis resistente aos antimicrobianos cria um cenário que dificulta a cura do paciente e o controle da doença. Embora várias mutações em loci específicos tenham sido identificadas como base de resistência, outros mecanismos, como o sistema de efluxo, podem contribuir para a resistência e o estabelecimento dessas mutações. O objetivo deste estudo foi avaliar a contribuição do mecanismo de efluxo em isolados clínicos de M. tuberculosis resistentes aos principais antimicrobianos do esquema básico (isoniazida, INH; e rifampicina, RIF) e de multirresistência (ofloxacina, OFX; e amicacina, AMK). Três clássicos inibidores de bombas de efluxo - EPI - (verapamil, VP; tioridazina, TZ; e clorpromazina, CPZ) foram selecionados para detectar o efluxo. Primeiramente, foram analisadas três cepas MDR, duas pré-XDR e a cepa sensível de referência H37Rv. Foi utilizada a metodologia de checkerboard combinada com o tetrazolium microplate-based assay para analisar a interação entre os EPIs com os fármacos. Foi observado que os EPIs diminuem efetivamente a resistência aos antibióticos utilizados, com reduções de 4 a 64 vezes. Para avaliar a atividade do efluxo em tempo real foi utilizado o método fluorimétrico com o brometo de etídio (BrEt), em presença dos EPIs. Foi demonstrado que todas as cepas apresentaram efluxo intrínseco, porém a acumulação e o efluxo do BrEt foi mais evidente na cepa pre-XDR com resistência adicional a AMK. A quantificação transcricional do RNAm dos genes de bombas de efluxo (mmpl7, mmr, Rv1258, p55, efpA, Rv2459) e do regulador transcricional whib7, quando as cepas foram expostas às concentrações subinibitórias dos antibióticos, foi analisada por RT-qPCR. Houve um aumento do nível transcricional de todos os genes em uma cepa MDR e na cepa Pre-XDR com resistência adicional a OFX, quando expostas a pelo menos um dos fármacos envolvidos na resistência. / Treatment with antimicrobials is the main TB control strategy. However, the increase in the number of TB cases with Mycobacterium tuberculosis strains resistant to antimicrobial creates a scenario that hinders patient's healing and disease control. Although several genetic mutations in specific loci involved in drug resistance have been identified as base of resistance, other mechanisms such as efflux system may contribute to resistance and to the establishment of these mutations. The main goal of this study was to assess the overall contribution of efflux mechanism in M. tuberculosis clinical isolates resistant to the main first line drugs (isoniazid, INH; and rifampicin, RIF) and second line (ofloxacin, OFX; and amikacin, AMK). Three classical inhibitors of efflux pumps -EPI- (verapamil, VP; thioridazine, TZ; and chlorpromazine, CPZ) were selected to detect the efflux. Firstly, we analyzed three MDR strains, two Pre-XDR and an H37Rv reference susceptible strain. We used the checkerboard method combined with the tetrazolium microplate-based assay to analyze the interaction between EPIs and drugs. It was observed that EPIs effectively reduce the MIC of antibiotics, with four-fold to 64-fold reduction. Efflux activity was evaluated in real-time by fluorimetric method with ethidium bromide (EtBr), in the presence of EPIs. All strains showed intrinsic efflux, however the accumulation and efflux of EtBr was evident most in the pre-XDR strain with additional resistance to AMK. The quantification of mRNA transcriptional level of efflux pump genes (mmpl7, mmr, Rv1258, p55, efpA, Rv2459) and the transcriptional regulator, whib7, when strains were exposed to antibiotics subinibitory concentrations was examined by RT-qPCR. There was an increase in the transcriptional level of all genes in a MDR strain and pre-XDR strain with additional OFX resistance, when exposed to at least one of the drugs involved in resistance, INH, RIF or OFX. However, there was no correlation between the reduction of antibiotic resistance levels with the EPI and the expression of genes encoding the pumps. Finally, in order to demonstrate the time to detection (TTD) of the bacterial growth in the antimicrobial environment in presence and absence of EPI, were applied BACTECTM MGITTM system 960 and Epicenter V5.53A equipped with software TB eXiST. Were used the MDR strains, a pre-XDR strain with additional resistance to AMK, and a monorresistant to OFX strain. In general, strains have showed a slower grew in the presence of VP, TZ and/or CPZ when combined with INH or RIF. This suggests that efflux is essential for the strain to grow faster in the presence of certain antibiotics. In addition, the efflux can act synergistically with the presence of mutations in order to reduce the biological cost of the bacteria and promoting growth at high drug concentrations. In conclusion, the described results demonstrated that the efflux system plays an important role in resistance to antibiotics used in the treatment of TB, and that the use of efflux inhibitors may potentiate the antimicrobial activity.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328646.pdf: 3208248 bytes, checksum: 67c80ae89c45fc7d821245f62a795cd4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Gelidium floridanum W.R. Taylor é uma alga vermelha de grande importância comercial por ser fonte de ágar com melhor qualidade. Este estudo teve como objetivo ampliar os conhecimentos sobre a germinação de tetrásporos e os efeitos da radiação ultravioleta e do metal pesado cádmio (Cd) nos gametófitos jovens de G. floridanum. Para a análise dos mecanismos reguladores da polarização e germinação, os tetrásporos foram cultivados com brefeldina A (BFA), colchicina e citocalasina, sendo analisados por microscopia de luz (ML), fluorescência e eletrônica de trasmissão (MET). Com a utilização da BFA, a germinação dos esporos não ocorreu, a BFA levou a uma desmontagem das cisternas do Golgi com formação de regiões vesiculares no citoplasma, bloqueando a secreção do Golgi para a formação do tubo germinativo e deposição da parede celular. O tubo germinativo, nas amostras controle, é formado pela incorporação de vesículas derivadas do Golgi, a secreção das vesículas e organização dos corpos de Golgi são processos básicos e essenciais na adesão e formação do tubo. A BFA bloqueou a secreção de proteínas e de polissacarídeos amorfos da matriz, impedindo a germinação dos tetrásporos. Com os inibidores do citoesqueleto, citocalasina e colchicina, a germinação de tetrásporos de G. floridanum também foi afetada. Estes agentes causaram diminuição das taxas de germinação além da malformação dos tubos germinativos e no caso da citocalasina alteração no formato dos cloroplastos. Pode-se sugerir que tanto os microtúbulos quanto os filamentos de actina são reguladores dos processos de polarização e germinação de tetrásporos de G. floridanum. Para os efeitos da radiação ultravioleta, gametófitos jovens de G. floridanum foram cultivados em laboratório e expostos a radiação fotossinteticamente ativa (PAR) de 80µmol fótons m-2 s-1 e PAR+UVA+UVB durante 3 h por dia, por um período de 3 dias. As amostras foram processadas para ML e MET para análise ultraestrutural, bem como análise das taxas de crescimento, teor de pigmentos fotossintéticos, identificação dos carotenóides e avaliação do desempenho fotossintético. PAR + UVA + UVB promoveu aumento da espessura da parede celular, acúmulo de grãos de amido das florídeas no citoplasma e rompimento da organização interna do cloroplasto. As amostras expostas a PAR + UVA + UVB mostraram uma redução na taxa de crescimento de 97%, aumento dos carotenóides, diminuição dos pigmentos fotossintetizantes, em particular, a ficoeritrina e aviiialoficocianina, e consequente diminuição do desempenho fotossintético observados pela redução da taxa de tranporte de elétrons (ETR) e ETRmax. Para os efeitos do Cd, gametófitos jovens foram cultivados durante 7 dias com concentrações de 7,5 e 15 µM do Cd. Após o período experimental, foram realizadas análises de ML, confocal e eletrônica de varredura (MEV), taxas de crescimento, quantificação dos pigmentos fotossintetizantes, carotenóides e a fluorescência da clorofila a. As amostras tratadas apresentaram diminuição das taxas de crescimento, com despigmentação dos talos, redução dos pigmentos fotossintetizantes, resultando num descréscimo da taxa de transporte de elétrons e da autofluorescência dos cloroplastos. Além disso, o Cd aumentou a quantidade de grãos de amido das florídeas e afetou a distribuição do conteúdo proteico no citoplasma. O metal cádmio é altamente tóxico, causando fotoinibição crônica para a espécie. Pode-se concluir que tanto os corpos de Golgi como o citoesqueleto, filamentos de actina e microtúbulos, estão envolvidos nos processos de polarização e formação do tubo germinativo durante a germinaçãos de tetrásporos e, que gametófitos jovens de G. floridanum quando expostos tanto a radiação quanto ao Cd apresentam alterações no metabolismo e na estrutura celular que afetam seu desenvolvimento.<br> / Abstract : Gelidium floridanum W. R. Taylor is a red alga of great commercial importance as a source of high-quality agar. This study aimed to examine the germination of tetraspores and the effects of ultraviolet radiation (UVR) and heavy metal cadmium (Cd) on young gametophytes of G. floridanum. To analyze the regulatory mechanisms of polarization and germination, the tetraspores were cultured with brefeldin A (BFA), colchicine and cytochalasin, followed by analysis under light (LM), fluorescence and transmission electron microscopy (TEM). The use of BFA blocked the secretion of protein and amorphous matrix polysaccharides. It also blocked secretion from Golgi bodies, affecting germ-tube formation, as well as, cell wall deposition, and leading to the disassembly of the Golgi cisternae with regions of vesicular formation in the cytoplasm. These events effectively prevented tetraspore germination. Tetraspore germination was also affected by the use of cytochalasin and colchicine, which are inhibitors of cytoskeleton. These agents caused a decrease in germination rates and, in high concentrations, complete inhibition of germination. In addition, the germ tube becames malformed and, in the case of cytochalasin, the shape of chloroplasts was altered. It can be suggested that both microtubule and actin are regulators of polarization and germination in tetraspores of G. floridanum. Next, to assess the effects of UVR, young gametophytes were cultivated under laboratory conditions and exposed to photosynthetically active radiation (PAR) at 80 µmol photons m-2 s-1 and PAR+UVA +UVB for 3 h per day, during three days. The samples were processed for LM and MET to carry out analyses of ultrastructure, growth rates, and content of photosynthetic pigments, as well as, identify carotenoids and evaluate photosynthetic performance. PAR + UVA + UVB caused an increase in cell wall thickness, accumulation of floridean starch grains and changes in the internal organization of the chloroplast. Samples exposed to PAR + UVA + UVB showed a reduction in growth rate of 97%, increased of carotenoids, decreased photosynthetic pigments, in particular, phycoerythrin and allophycocyanin, and a resulting reduction in photosynthetic performance, as observed by the reduction of transport electron (ETR) and ETRmax. Finally, to test the effects of the Cd, young gametophytes of G floridanum were cultured for 7 days with concentrations of 7.5 and 15µM Cd. After the experimental period, LM, confocal and scanning electron microscopy (SEM) were employed toxanalyze growth rates and quantify the content of photosynthetic pigments, carotenoids and chlorophyll a. The treated samples showed a decrease in growth rates, with depigmentation of the thallus and reduction of photosynthetic pigments, resulting in a decrease in the rate of electron transport and autofluorescence of chloroplasts. Furthermore, exposure to Cd proved to be highly toxic, causing chronic photoinhibition, increasing the amount of starch grains, and altering the distribution of protein content in the cytoplasm. It can be concluded that both the Golgi bodies such as the cytoskeletal actin and microtubules are involved in the processes of polarization and germ tube formation during germination tetraspores and that youngs gametophytes of G. floridanum when exposed to both radiation as to the Cd present alterations in metabolism and cellular structure that affect its development.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 329287.pdf: 4458122 bytes, checksum: 05f22109ff17d61098ddd6dfcbba1a0c (MD5) Previous issue date: 2014 / A identificação genética humana está centrada na utilização de um conjunto de marcadores autossômicos denominado microssatélite (Short Tanden Repeats-STRs). Todavia em algumas situações, como indivíduos com alto grau de parentesco, casos de deficiência paterna, amostras biológicas degradadas ou pouca quantidade, têm-se focado na utilização de outras classes de marcadores genéticos: inserções/deleções (InDels), do cromossomo X (X-STRs), do cromossomo Y (Y-STRs) e na região hipervariável 1 do DNA mitocondrial (mtDNA-HVR1). Visando avaliar a extensão da diversidade genética da população de Santa Catarina, indivíduos não aparentados foram genotipados para os marcadores do tipo (1) InDels, incluídos no Investigator DIPplex Kit®, (2) STRs autossômicos, incluídos no Investigator HDplexTM Kit®, (3) miniSTRs, incluídos no Investigator Hexaplex ESS Kit®, (4) STRs do cromossomo X, através do Investigator Argus X-12 Kit®. Foram determinadas as frequências alélicas e heterozigoses observada e esperada (Ho e He), e a eficácia dos parâmetros forenses: Poder de Discriminação (PD), Probabilidade de Coincidência (PC), Índice de Paternidade Típico (TPI), Poder de Exclusão de Paternidade (PE) e Conteúdo da Informação Polimórfica (PIC), sendo que não foi observado nenhum desvio (p< 0,05) para os locos incluídos no Investigator HDplexTM Kit® e Investigator Hexaplex ESS Kit®, com exceção de DXS10135 e DXS1079 do Investigator Argus X-12 Kit®. Todos os locos apresentaram um elevado grau de polimorfismo genético. O maior PIC foi observado no SE33 (0,948), e o menor no D6S474 (0,745). Parâmetros forenses foram calculados com base em frequências alélicas para os sistemas Investigator HDplexTM Kit® e Investigator Hexaplex ESS Kit®, sendo o Poder de Discriminação Combinado (PDC) e o Poder de Exclusão Combinado (PEC) obtidos de 0,999999999999999999997752854927 e 0,99999999978062285, respectivamente. As frequências alélicas para 16 locos STRs analisados foram comparadas com as de outras populações de diferentes distribuições geográficas, sendo que a análise de distância genética (Dsw) mostrou proximidade entre a população de Santa Catarina e populações européias (França, Itália) e uma amostra da população Africana. O segundo agrupamento foi formado por populações que não participaram significativamente para a formação da identidade brasileira (Japão, México, Colômbia) e duas populações isoladas de índios do Brasil. Para o Sistema Investigator Argus X-12 Kit®, as frequências alélicas e os parâmetros estatísticos foram obtidos, sendo que o marcador DXS10135 foi o mais polimórfico, com 23 alelose o DXS8378 menos polimórfico, com 5 alelos. O Poder de Discriminação para o sexo Feminino (PDF) foi 0,9999999999999999103669, enquanto o Poder de Discriminação para o sexo Masculino (PDM) foi 0,999999999688867. O Poder de Exclusão Combinado para trios e duos foram de 0,99999999867687 e 0,999999589803, respectivamente. Testes de desequilíbrio de ligação foram realizados para todos os pares de locos e somente DXS7132-DXS10074 permaneceu significativo após correção de Bonferroni (p < 0,0008). Análise da distância genética foi usada e verificou-se que a população de Santa Catarina teve similaridade com populações européias (Alemanha, Dinamarca e Norte de Portugal) seguidas por populações africanas (Marrocos e Somália) e distante das populações de Shanghai e Groelândia, por não fazerem parte da formação da identidade catarinense. Foram também objetivos deste projeto a caracterização genética da variabilidade da população patrilinear de Santa Catarina por meio de dezessete marcadores do tipo STRs situados na região não recombinante do cromossomo Y, incluídos no sistema AmpFISTR®YfilerTM. Foram identificados 305 haplótipos dos quais 292 foram únicos (96%). Comparando estes resultados com outros previamente publicados para portugueses, espanhóis, italianos, alemães, africanos e outras populações brasileiras observou-se a importante contribuição de europeus da Península Ibérica. Foi também caracterizada a variabilidade da população matrilinear de Santa Catarina pelo sequenciamento da região hipervariável 1 do mtDNA (mtDNA-HVR1) e a padronização e implementação desta técnica no setor de Genética Forense do Instituto Geral de Perícia do Estado de SC (IGP-SC). Na análise da população de Santa Catarina foram identificados 221 haplótipos (n=342), classificados em 85 subhaplogrupos geográficos. Considerando os grandes haplogrupos, os resultados mostraram uma maior contribuição de haplogrupo europeu H (32,16%). Os haplogrupos ameríndios A, B, C e D representam 25,15% da população em contraste com os haplogrupos africano L, que totalizam 7,02%. A realização desta tese, além de mostrar a contribuição genética na construção da história da população de Santa Catarina, possibilitou a implementação de novas técnicas no Instituto de Análises Forenses do IGP-SC, incluindo mais 60 marcadores genéticos, além da análise de sequenciamento do DNA mitocondrial, para a resolução de casos forense de alta complexidade.|<br> / Abstract: Human genetic identification is centered on use of microsatellite markers (Short Tanden Repeats-STRs). However, in some situations as individuals with a high degree of kinship, cases of paternal disability, degraded biological samples and in low amounts of samples have been focused on the use of other markers such as: insertions/deletions (InDels), X chromosome markers (X-STRs), Y chromosome markers (Y-STRs) and hypervariable region 1 of mitochondrial DNA (HVR1-mtDNA). Thereby, to evaluate the extent of genetic diversity of the Santa Catarina population, unrelated individuals were genotyped for: (1) InDels markers, included in the DIPplex Investigator DIPplex Kit®, (2) autosomal STRs, included in the Investigator HDplexTM Kit®, (3) miniSTRs, included in the Investigator Hexaplex ESS Kit® and (4) the X chromosome STRs, through the Investigator Argus X -12 Kit®. Allele frequencies, observed and expected heterozygosity (Ho, He) were determined, and the effectiveness of forensic parameters such as Power of Discrimination (PD), Probability of Coincidence (PC), Typical Paternity Index (TPI), Paternity Exclusion Power (PE) and Polymorphic Information Content (PIC). No deviation was observed (p <0.05) for the loci analyzed, except DXS10135 and DXS1079 Investigator Argus X-12 Kit®. All loci showed a high degree of genetic polymorphism. The highest PIC was observed in SE33 (0.948) and the lowest was observed in D6S474 (0.745). Forensic parameters were calculated based on allele frequencies for the Investigator HDplexTM and Investigator Hexaplex ESS® Kits. Combined Discrimination Power (CDP) and Combined Power of Exclusion (PEC) were 0.999999999999999999997752854927 and 0.99999999978062285, respectively. Allele frequencies for the 16 analyzed STR loci were compared with those of other populations from different geographical distributions. Genetic distance (Dsw) showed proximity between the Santa Catarina population, the European populations (France, Italy) and the sampled African population. The second group consisted of populations that do not significantly participated in the formation of Brazilian identity (Japan, Mexico, Colombia) and two isolated populations of Amerindian from Brazil. Allele frequencies and the statistical parameters of the Investigator Argus X-12 Kit® were obtained and the most polymorphic marker was DXS10135 with 23 polymorphic alleles and less polymorphic marker was DXS8378 with 5 alleles. Power of discrimination in Females (PDF) was 0.9999999999999999103669, while the Power of Discrimination in Males (PDM) was 0.999999999688867. Combined Power of Exclusionfor Trios and Duos were 0.99999999867687 and 0.999999589803, respectively. Linkage Disequilibrium tests were performed for all pairs of loci and only DXS7132-DXS10074 remained significant after Bonferroni correction (p < 0.0008). Analysis of genetic distance was used and it was verified that the population of Santa Catarina had similarity with European populations (Germany, Denmark and Portugal) followed by North African populations (Morocco and Somalia) and distant from the populations of Shanghai and Greenland because these populations not participate in the formation of the Santa Catarina identity. Another objective of this project were the genetic characterization of the variability of patrilineal population of Santa Catarina through seventeen STRs located in a non-recombinant region of the Y chromosome, included in the AmpFISTR®YfilerTM Kit. After analysis, 305 haplotypes were identified and 292 of these were unique (96%). Comparing the results obtained in this study with data from Portuguese, Spanish, Italians, Germans, Africans and other Brazilian populations was observed the important contribution of Europeans from the Iberian Peninsula in the composition of the Santa Catarina population. Variability of matrilineal population of Santa Catarina was also characterized by the sequencing of the mtDNA hypervariable region 1 (mtDNA-HVR1). This technique was the standardized and implemented in the Forensic Genetics section of the Instituto Geral de Perícias do Estado de SC (IGP-SC). During the data analysis, 221 haplotypes (n = 342) were identified, these haplotypes were classified into 85 geographic subhaplogrupos. Considering the largest haplogroups, these results showed an important contribution of the European haplogroup H (32.16%). Amerindian haplogroups A, B, C and D represent 25.15% of the population in contrast to the African haplogroup L that totalize 7.02%. Besides the genetic contribution for the understanding of the history of Santa Catarina population, the realization of this thesis resulted in the implementation of new techniques in the Forensic Genetics section of the IGP-SC, including sixty new genetic markers in their analysis and the mitochondrial DNA sequencing to solve the forensic cases of high complexity.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330549.pdf: 2250244 bytes, checksum: 52aafb6ef597f19f359fe112a89bcdc1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Glifosato é um dos herbicidas mais usados no Brasil, sendo altamente solúvel em água e quando aplicado em ambiente terrestre e aéreo pode ocorrer a sua infiltração no solo e a percolação para os corpos d'água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos, como invertebrados e vertebrados. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do glifosato, na concentração de 65 µg/L, sobre a organização estrutural e ultraestrutural, bem como sobre os parâmetros bioquímicos de toxicidade nos ovários do peixe Danio rerio. Esta concentração foi estabelecida pelo CONAMA como a máxima permitida para os rios do Brasil. As células germinativas foram caracterizadas em quatro fases: ovogônia, ovócito pré-vitelogênico I, ovócito pré-vitelogênico II e ovócito vitelogênico, baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Verificou-se um aumento significativo no diâmetro dos ovócitos pré-vitelogênicos I e nos ovócitos vitelogênicos, assim como um aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) em ovários de peixes expostos ao glifosato por um período de 15 dias (exposição subcrônica). Na análise estrutural das células germinativas não foram identificadas alterações morfológicas, porém na análise ultraestrutural, observou-se no citoplasma dos ovócitos formações membranosas concêntricas tipo myelin-like, associadas aos grânulos de vitelo periféricos, além de alterações nas cisterna dos corpos de Golgi. Houve também redução do número de mitocôndrias e cristas mitocondriais nas células foliculares. Constatou-se maior expressão de SF-1, em ovários expostos ao glifosato. Identificou-se também um aumento significativo no número de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bak, porém um número significativamente menor de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bcl2. Na exposição dos peixes ao glifosato por um período de 96 h (exposição aguda), identificou-se redução nos níveis de tióis não proteicos (NPSH) e um aumento significativo nos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), caracterizando estresse oxidativo. Na exposição por um período de 360 h (15 dias), não houve a caracterização de estresse oxidativo. Mesmo na concentração de glifosato regulamentada para os rios do Brasil, efeitos subletais foram identificados nos ovários, sendo reconhecidos usando ferramentas bioquímicas e ultraestruturais. Desta forma, estas análises devem ser realizadas em testes toxicológicos na avaliação de parâmetros reprodutivos. Os efeitos adversos do glifosato sobre os ovócitos e as células foliculares demonstradas aqui representam um importante risco para a reprodução de peixes.<br> / Abstract: Glyphosate is one of the most commonly used herbicides in Brazil, being highly soluble in water and when applied in aerial and terrestrial environment can occur its infiltration into the soil and the percolation to the bodies of water, reaching different non-target aquatic organisms, such as invertebrates and vertebrates. The main goal of this study was to evaluate the effects of glyphosate, at a concentration of 65 µg/L, on structural and ultra-structural organization, as well as on the biochemical parameters of toxicity on the ovaries of the fish Danio rerio. This concentration was established by CONAMA as the maximum allowable for the Brazilian rivers. The germ cells were characterized in four stages: oogonia, previtellogenic I oocyte, previtellogenic II oocyte and vitellogenic oocyte, based on morphological criteria previously established on the literature. A significant increase on the diameter of the previtellogenic I and vitellogenic oocytes was verified, as well as a significant increase in the gonadosomatic index (GSI) in the ovaries of the fish exposed to the glyphosate for a 15 days period (sub-chronic exposure). In the structural analysis of the germ cells, morphologic changes were not identified. However, in ultrastructural analysis, concentric membranous formation of myelin-like kind were observed on the cytoplasm of the oocytes, associated to the peripheral yolk granules, and also morphological change Golgi cisterns. In follicular cells reduction on the number of mitochondria and mitochondrial cristae observed. In this analysis, it was also observed with. It was observed greater SF-1 expression in ovaries exposed to glyphosate. It was also identified a significant increase in the number of immunostained cells with the anti-Bak antibody, but a significantly lower number of immunostained cells with antibody anti-Bcl2. On exposure of fish to glyphosate for 96 hours (acute exposure), it was identified a reduction in levels of non-protein sulfhydryl (NPSH) and a significant increase in levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), featuring oxidative stress. On exposure of a period of 360 hours (15 days), there was no characterization of oxidative stress. Even with the glyphosate concentration regulated to Brazil's rivers, sublethal effects were identified on the ovaries, being recognized using biochemistry and ultrastructural tools. In this way, these analyses should be carried out in toxicological evaluation of reproductive parameters. The adverse effects of glyphosate on the oocytes and follicular cells shown here represent a major risk for the reproduction of fish.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:19:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 329421.pdf: 4339803 bytes, checksum: 994f6e86fd585dbe0f4319d6a52b7510 (MD5) Previous issue date: 2014 / Sargassum cymosum é uma alga parda da ordem Fucales, conspícua da flora marinha bentônica de regiões tropicais e temperadas. É encontrada, principalmente, nos costões rochosos protegidos, onde podem formar extensos bancos, sendo assim as algas mais representativas em biomassa e um importante representante na dinâmica ecológica destes ambientes costeiros. Estudos desenvolvidos ao longo de vários anos demonstram o interesse nas algas pardas da ordem Fucales como um modelo de estudo do processo de embriogênese. No entanto, muitos trabalhos referentes a estes processos são encontrados somente para espécies do gênero Fucus e Silvetia, algas presentes predominantemente em regiões frias. Sendo assim, o trabalho visou desenvolver estudos iniciais para a produção de um modelo de estudo de desenvolvimento de uma alga parda de regiões tropicais. O desenvolvimento inicial de zigotos e embriões de S. cymosum foi caracterizado e comparado com o padrão de desenvolvimento estabelecido para todas as algas fucóides, apresentando algumas características que diferem dos demais gêneros como: o zigoto permanece aderido ao receptáculo no inicio do desenvolvimento; a segunda divisão celular que forma a celula rizoidal; o eixo polar e fixado 2 horas após a fecundação e; núcleo extremamente pequeno. Quando analisado o envolvimento dos componentes do citoesqueleto neste processo, pode-se indicar que os microtúbulos e os filamentos de actina tem papel importante no desenvolvimento, pois, as amostras tratadas com colchicina sofreram polarização mas, as divisões celulares não foram observadas e, as tratadas com citocalasina B, alem de não dividir, também não sofreram polarização. Alem do citoesqueleto, o sistema de endomenbranas também mostrou-se importante para o desenvolvimento de S. cymosum, pois quando tratados os zigotos com BFA, inibidor dos corpos de Golgi, este processo foi afetado. Tal tratamento afetou o correto funcionamento dos corpos de Golgi, assim, comprometendo a formação de parede celular e membrana celular, importantes para a determinação do eixo polar, afetando diretamente o dimensionamento do crescimento celular. Também contribuiu para a alta taxa de fusão de vesículas de compostos fenólicos, os fisóides. Esta fusão dos fisóides ocupou grande parte do citoplasma impedindo os demais processos citoplasmáticos, afetando diretamente o desenvolvimento desta alga. Alem disto tudo, os zigotos e embriões são estruturas com simplicidade celular, sendo assim, são extremamente sensíveis aos fatores ambientais. Para avaliar tal característica, plântulas jovens de S. cysomum foram tratadas com radiações UVB e UVA, e associação destas radiações. Estes tratamentos afetaram de diferentes formas as plântulas, com alterações nas taxas de crescimento, principalmente, no tratamento PAR+UVB que apresentou o menor valor; alterou levemente a concentração dos diferentes tipos de pigmentos; redução significativa na concentração de compostos fenólicos e; alterações na morfologia ultraestrutural especialmente nas células corticais com, espaçamento da parede celular, degradação dos fisóides e, alterações nos cloroplastos. Desta forma, as alterações nas condições naturais observadas, especialmente com as variações e aumentando da incidência da radiação UV, poderia afetar o recrutamento de S. cymosum em leitos naturais, com mudanças na estrutura da comunidade e redução da abundância da espécie no ambiente.<br> / Abstract: Sargassum cymosum is a brown algae of the order Fucales, conspicuous benthic marine flora of tropical and temperate regions. It is found, mainly, in protected rocky shores, where they can form extensive banks, thus being the most representative in algal biomass and a major representative of the ecological dynamics of these coastal environments. Studies conducted over several years show interest in brown algae of the order Fucales as a study model of embryogenesis. However, many papers related to these processes are found only for species of Fucus and Silvetia, algae present predominantly in cold regions. Therefore, the initial development work aimed to produce a model for studying the development of tropical brown alga studies. The initial development of zygotes and embryos of S. cymosum was characterized and compared with the established pattern of development for all fucodes algae, presenting some features that differ from other genres such as: the zygote remains attached to the receptacle at the beginning of development; the second cell division that forms the rhizodalccell; the polar axis and fixed 2 h after fertilization and; extremely small nucleous. When examined the involvement of cytoskeletal components in this process, could indicate that microtubules and actin filaments plays an important role in development, for the samples treated with colchicine undergone polarization but cell divisions were observed, and the treated with cytochalasin B, in addition to no cell divisions, did not suffer polarization. Besides cytoskeletal, the endomembranas system also proved important for the development of S. cymosum because when treated the zygotes with BFA, inhibitor of Golgi bodies, this process is affected. Such treatment affected the correct functioning Golgi bodies, thus jeopardizing the cell wall formation and of membrane cellular, important for determining the polar axis, directly affecting the sizing of cell growth. Also contributed to the high rate of vesicle fusion of phenolic compounds, fisodes. This fusion of fisóides occupied much of the cytoplasm, preventing other cytoplasmic processes, directly affecting the development of this alga. Besides all this, zygotes and embryos are cell structures with simplicity, therefore, are extremely sensitive to environmental factors. To evaluate this characteristic, young plants of S. cysomum were treated with UVB and UVA radiation, and combination of these radiations. These treatments affected differently seedlings with changes in growth rates, especially in the treatment PAR + UVB showed the lowest value; slightly alter the concentration of different types of pigments; significant reduction in the concentration of phenolic compounds and; changes in ultrastructural morphology especially in cortical cells with spacing of cell wall degradation fisodes and changes in chloroplasts. Thus, the observed changes in natural conditions, especially with the variations and increasing the incidence of UV radiation could affect the recruitment of S. cymosum in natural beds with changes in community structure and reduction of species abundance in the environment.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2015-06-02T04:08:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333914.pdf: 1463583 bytes, checksum: 4b55a96be627a5ad68a55463453ece36 (MD5) Previous issue date: 2015 / A incidência de doenças virais tem implicado em significativas perdas econômicas para a carcinicultura. Nesse contexto, a busca por estratégias que aumentem a capacidade dos camarões de sobreviver a surtos virais é de grande interesse para a aquicultura, como ativar as defesas antivirais utilizando a tecnologia de RNA de interferência (RNAi). O presente trabalho avaliou o efeito do silenciamento gênico do vírus da mionecrose infecciosa (IMNV) na sobrevivência de camarões Litopenaeus vannamei e no perfil transcricional de genes associados ao seu sistema imune. Animais previamente tratados com dsRNA específico para o genoma do IMNV (dsRNA-IMNV) foram desafiados com uma dose letal desse mesmo vírus (1,02×106 cópias virais), enquanto camarões do grupo controle foram tratados com dsRNA vírus-inespecífico (gene IGSF4D de Danio rerio). O tratamento com dsRNA-IMNV conferiu uma proteção específica contra o IMNV, levando a uma sobrevivência de 90 % (30 dias), enquanto todos os animais tratados com dsRNA inespecífico morreram em 17 dias. A expressão de 46 genes, de diferentes categorias funcionais, foi quantificada por PCR quantitativa em tempo real nos diferentes grupos experimentais nos tempos 0 h, 24 h e 48 h pós-infecção. Dos genes analisados, 39 (85 %) apresentaram a expressão inalterada em todas as condições analisadas. Por outro lado, seis genes (13 %) pertencentes às categorias funcionais defesa antiviral (Lv-Ago2 e LvDcr2), defesa antimicrobiana (Litvan ALF-D e LvCrustin), reconhecimento (LvGal) e apoptose (LvIAP) foram diferencialmente expressos entre os animais que sobreviveram ou não sobreviveram à infecção por IMNV. Em conjunto, a expressão desses genes constitui uma assinatura transcricional associada a uma resposta imune eficaz contra o IMNV. De maneira interessante, o gene de coagulação (LvClot) apresentou expressão diferenciada apenas em função do tratamento com o dsRNA inespecífico (24h e 48 h pós-desafio), apresentando maiores níveis de transcritos nos animais que sucumbiram à infecção. A expressão de LvClot pode representar assim um indicativo precoce de estado mionecrótico em camarões. Com base nos resultados obtidos no presente estudo, foi possível identificar uma assinatura transcricional em hemócitos de L. vannamei associada à indução de proteção antiviral específica nos camarões, utilizando a técnica de RNAi. Assim, este é o primeiro relato da identificação de efetores do sistema imune potencialmente envolvidos na proteção e sobrevivência de camarões frente à infecção pelo IMNV.<br> / Abstract: The incidence of viral diseases has been implied in significant economic losses to the shrimp farming industry. In this context, strategies to improve the ability of shrimp to survive viral outbreaks are a major goal for aquaculture, such as the activation of shrimp antiviral defenses by using the RNA interference (RNAi) technology. The present study evaluated the effect of the RNAi-mediated gene silencing of the Infectious Myonecrosis Virus (IMNV) on the survival of Litopenaeus vannamei shrimp and on the expression profile of genes associated to its immune system. Animals previously treated with dsRNA specific to the IMNV genome (dsRNA-IMNV) were challenged with a lethal dose of the virus (1.02×106 viral copies), while shrimp from the control group were treated with a nonspecific dsRNA (dsRNA-IGSF4D from Danio rerio). The dsRNA-IMNV treatment provided a specific protection against the IMNV, reaching a survival rate of 90 % (up to 30 days), whereas all animals treated with the nonspecific dsRNA died within 17 days. The expression of 46 genes, from different functional categories, was assessed in all experimental groups at 0 h, 24 h and 48 h post-infection. From those, 36 genes (85 %) did not change their expression pattern in all analyzed conditions. On the other hand, six genes (13 %) from the functional categories antiviral defense (Lv-Ago2and LvDcr2), antimicrobial defense (Litvan ALF-D and LvCrustin), microbial recognition (LvGal) and apoptosis (LvIAP) were differentially expressed between shrimp that survived and not survived to IMNV infection. Taken together, the expression of these genes can be considered as a transcriptional signature associated with an efficient immune response against IMNV. Interestingly, the coagulation gene (LvClot) was differently expressed only in the treatment with nonspecific dsRNA (24 h and 48 h post-infection), showing higher levels of transcripts in animals that succumbed to the infection. The expression of LvClot could be an indicative of an initial state of myonecrosis in shrimps. Based on these results, it was identified a hemocyte transcriptional signature in L. vannamei associated with the induction of a specific antiviral protection in shrimp, using the RNAi approach. Therefore, this is the first report on the identification of immune effectors potentially involved in shrimp protection and survival to IMNV infection.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-15T04:08:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334387.pdf: 2427839 bytes, checksum: d0ccfb04524cf81de776204eccbf0b9c (MD5) Previous issue date: 2015 / Os metais pesados, como cádmio, cobre e chumbo estão entre os poluentes mais comuns encontrados nos efluentes industriais e urbanos. Altas concentrações destes metais podem causar efeitos tóxicos graves, especialmente para os organismos que vivem nos ecossistemas aquáticos. Estes metais são encontrados com maior frequência no meio aquático e são considerados contaminantes ambientais que podem afetar o desenvolvimento, o crescimento, a fotossíntese e a respiração, organização celular e a morfologia de algas. As algas G. floridanum, H. musciformis e P. flagellifera possuem importância econômica por produzirem ágar, carragenana e compostos secundários halogenados, respectivamente. O presente estudo avaliou os efeitos fisiológicos, estruturais e ultraestruturais de Cd, Cu e Pb em G. floridanum, Cu e Pb em H. musciformis e Pb sob duas irradiâncias em P. flagellifera. Os experimentos com G. floridanum e H. musciformis foram realizados com PAR de 80 µmol fótons m-2.s-1 durante sete dias. Para G. floridanum foram utilizadas as concentrações de 50 e 100 ?M de Cd, Cu e Pb. Para H. musciformis e 0,05 e 0,1 mg.Kg-1 de Cu e 3,5 e 7 mg.Kg-1 de Pb. Para os experimentos com P. flagellifera foram realizados tratamentos e 0,5; 2,5 e 12,5 mg.Kg-1 de Pb sob as PAR de 50 e 100 µmol fótons m-2.s-1. As amostras de G. floridanum expostas ao Cd, Cu e Pb mostraram despigmentação do talo, alteração do cloroplasto, degeneração dos tilacóides, e diminuição em pigmentos fotossintéticos, tais como clorofila a e ficobiliproteínas, em amostras tratadas com Cd e Cu. Além disso, a espessura da parede da célula e a quantidade de plastoglóbulos aumentou. A microanálise de raios X (EDS) detectou Cd, Cu e Pb absorvidos pelas paredes celulares. Já nas amostras de H. musciformis, observou-se várias alterações intracelulares decorrentes da exposição ao chumbo e cobre, incluindo diminuição da ficobiliproteínas, bem como danos aos tilacóides. Além disso, a quantidade de carotenóides, flavonóides e compostos fenólicos foram diminuídos, como um reflexo aparente da mudança de rota metabólica para a produção de antioxidantes contra espécies reativas de oxigênio. A exposição ao cobre e chumbo também causou um aumento do número de grãos de amido das florídeas. Observou-se ainda, uma diminuição das taxas de crescimento de H. musciformis. Quanto ao experimento com P. flagellifera a PAR de 100 µmol fótons m-2.s-1 promoveu uma diminuição na quantidade de ficobiliproteínas, aumento na quantidade de clorofila a e carotenóides, promoveu leve aumento da viabilidade celular quando comparado com a irradiância de 50 µmol fótons m-2.s-1. Com maior intensidade de PAR, os tratamentos com Pb tiveram respostas mais intensas, como maior diminuição de taxa de crescimento. Os tratamentos com metais indicaram que tanto o Cd como Pb afetam negativamente o desempenho metabólico e a ultraestrutura celular de G. floridanum e porém o mais tóxico foi Cu. Para H. musciformis, no entanto, os resultados indicaram diferente susceptibilidade a diferentes concentrações de cobre e chumbo, sendo o Cu também o mais tóxico para esta espécie. Quanto ao efeito de Pb em P. flagellifera, os resultados se mostraram mais intensos no tratamento com maior concentração de Pb tratado sob PAR de 100 µmol fótons m-2.s-1.<br> / Abstract : Heavy metals such as cadmium, copper and lead are among the most common pollutants found in both industrial and urban effluents. High concentrations of these metals cause serious toxic effects, especially for organisms living in the aquatic ecosystem. These metals are most often found as environmental contaminants, and they have been shown to cause to affect the development, growth, photosynthesis and respiration, cellular organization and morphological algae. Algae G. floridanum, H. musciformis and P. flagellifera have economic importance for producing agar, carrageenan and halogenated compounds side, respectively. This study evaluated physiological and ultrastructural effects of Cd, Cu and Pb in G. floridanum, Cu and Pb in H. musciformis and Pb in two irradiances in P. flagellifera. The experiments with G. floridanum and H. musciformis were performed with PAR 80 ?mol photons m-2.s-1 for seven days. For G. floridanum were used concentrations of 50 and 100 ?M of Cd, Cu and Pb. For H. musciformis and 0.05 and 0.1 mg.Kg-1 Cu and 3.5 to 7 mg.Kg-1 Pb. For the experiments with P. flagellifera treatments were performed and 0.5, 2.5 and 12.5 mg.Kg-1 of Pb under the PAR 50 and 100 ?mol photons m-2.s-1. G. floridanum samples exposed to Cd, Cu and Pb shown depigmentation of the stem, change the chloroplast thylakoid degeneration, and decrease in photosynthetic pigments such as chlorophyll and phycobiliproteins, in samples treated with Cd and Cu. Furthermore, the thickness of the cell wall and the amount of plastoglobuli increased. The X-ray microanalysis (EDS) found Cd, Cu and Pb absorbed by the cell walls. Already in the samples of H. musciformis, several intracellular changes was observed from exposure to lead and copper, including decreased phycobiliproteins as well as damage to the thylakoids. Furthermore, the amount of carotenoids, flavonoids and phenolic compounds were decreased as a reflection of apparent change in the metabolic pathway for the production of antioxidants against reactive oxygen species. The copper and lead exposure also caused an increase in the number of florideans starch grains. There was also a decrease in the growth rates of H. musciformis. As to experiment with P. flagellifera the PAR 100 ?mol photons m-2.s-1 promoted a reduction in the amount of phycobiliproteins, increasing the amount of chlorophyll carotenoids, promoted a slight increase in cell viability compared to irradiance 50 ?mol photons m-2.s-1. With higher intensity of PAR in Pb treatments had stronger responses as greater reduction in growth rate. Metal treatments indicated that both Cd and Pb adversely affect the metabolic performance and cell ultrastructure of G. floridanum and yet most toxic was Cu. H. musciformis, however, the results showed different susceptibility to different concentrations of copper and lead, and Cu also more toxic for this this species. As for Pb effect in P. flagellifera, the results were more intense in the treatment with 12.5 mg.Kg-1 Pb treated under PAR 100 ?mol photons m-2.s-1.