Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334691.pdf: 804006 bytes, checksum: 0752fbbe5b1b5e200587dc173c23168f (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho propôs estudar a ação do Fator de Crescimento Fibroblástico 18 (FGF18) durante o processo de expansão das células do cúmulus, ma-turação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial. Os experimen-tos desenvolvidos utilizaram ovários provenientes de abatedouro e matu-rados durante 24h em meio de cultura suplementados ou na ausência de diferentes dosagens de FGF18 dependendo do ensaio proposto. O pri-meiro experimento desenvolvido utilizou 24 Complexos do cúmulus oophorus (CCOs) e avaliou diferentes doses de Hormônio folículo esti-mulate (FSH) (0, 1, 10, 50, 100 e 500 ng/ml) a fim de obter concentrações com diferentes efeitos sobre a expansão das células do cúmulus. Neste experimento, foi demonstrado que a suplementação do meio de maturação in vitro com 100 e 500 ng/ml (P< 0,05) resultam na expansão das células do cúmulus, sendo a dose de 500 ng/ml culminar em uma maior taxa de expansão. O segundo experimento visou avaliar a maturação nuclear de CCOs após o período de incubação com 100ng/ml de FGF18 nas concen-trações de FSH do experimento 1. Após o período de incubação da matu-ração in vitro, oócitos foram fixados e corados com HOESCHT-33342 para avaliar a taxa de oócitos que atingiram o estágio de metáfase II da meiose. Os resultados deste experimento demonstram que FGF18 não in-fluenciou a maturação oocitária (P< 0,05). O experimento 3 visou avaliar diferentes concentrações de FGF18 (100, 500 e 1000 ng/ml) sobre a ma-turação oocitária e expansão das células do cúmulus durante o período de incubação de 24h. Foram utilizados 50 CCOs por grupo em quatro repli-cações. Foi demonstrado que FGF18 não afetou a maturação e expansão dos CCOs nos grupos avaliados (P<0,05). O quarto experimento avaliou a suplementação de FGF18 em diferentes etapas da produção in vitro de embriões. Foram elaborados três grupos: controle (ausência de FGF18 em todos as etapas), FGF-MIV (CCOs tratados somente durante a maturação in vitro (MIV) com 100ng/ml de FGF18) e FGF-CIV (zigotos tratados somente durante o cutivo in vitro (CIV) com 100 ng/ml de FGF18). Os resultados apresentam menores taxas quantitativas e qualitativas no grupo FGF-CIV (P<0,05). O experimento 5 teve como objetivo avaliar a expres-são de diferentes genes (GADD54B, 53BP1, RAD52, Interferon-tau, FasL e Cox2) nos grupos do experimento 4. Apenas COX2 se apresentou menos expresso no grupo FGF-MIV. Conclui-se que o FGF18 não influ-encia nos processos de expansão das células do cúmulus e maturação oo-citária. No entanto, foi observado que a suplementação deste fator às eta-pas da PIV reduz a taxa de embriões produzidos, tal como retardo no de-senvolvimento destas células, entretanto, os mecanismos moleculares no controle deste evento ainda não estão elucidados.<br> / Abstract : This work proposed to study the Fibroblast Growth Factor 18 (FGF18) during the cumulus expansion, oocyte maturation and the early embryo development. The experiments used ovaries from slaughterhouses and matured for 24 hours in culture medium in the presence or not of FGF18 depending on the proposed test. The first experiment used 24 cumulus- oocyte complex (COCs) to to evaluate different doses of follicle stimulat-ing hormone (FSH) (0, 1, 10, 50, 100 and 500 ng / ml) to obtain concen-trations with different effects on the expansion of the cumulus cells. This experiment demonstrated that supplementation of the in vitro maturation medium with 100 and 500 ng / ml (P <0.05) result in cumulus expansion. The dose of 500 ng/ml culminate in an increased growth rate. The second experiment aimed avaliate the COC?s nuclear maturation after incubation period with 100 ng/ml FGF18, using the FSH doses of the first experi-ment. After the in vitro maturation, oocytes were fixed and stained with Hoechst 33342 to evaluate the rate of oocytes that reached the metaphase II stage. The results of this experiment demonstrate that FGF18 did not affect oocyte maturation (P <0.05). The third experiment was performed to evaluate different concentrations of FGF18 (100, 500, and 1000 ng / ml) on oocyte maturation and cumulus expansion during the 24 h incuba-tion period. 50 COCs were used per group on four replicates. It was shown that FGF18 did not affect the maturation and expansion of COCs in the study groups (P <0.05). The fourth experiment evaluate the supplementa-tion of FGF18 in different stages of in vitro production. Three groups were established: control (absence of FGF18 in all stages), FGF-IVM (COCs treated only during in vitro maturation (IVM) with 100 ng / ml FGF18) and FGF-IVC (zygotes treated only during the in vitro cultive (IVC) 100 ng / ml FGF18). The results show lower rates qualitative and quantitative FGF-IVC group (P <0.05). The experiment 5 aimed to eval-uate the expression of different genes (GADD54B, 53BP1, RAD52, in-terferon-tau, FasL and COX 2) in the embryos derived of the fourth assay. Only COX2 was downregulated in the FGF-IVM group. We conclude that the FGF18 does not influence the processes of the cumulus expansion cells and oocyte maturation. It was observed that FGF18 supplementation to the IVP steps reduces the rate of embryo production, such as delay in the development of these cells, however, the molecular mechanisms in-volved in this event are not deciphered.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-20T03:11:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334973.pdf: 2040826 bytes, checksum: 65382a521fa32fa2b68528aeb8e508c3 (MD5) Previous issue date: 2015 / Terapias regenerativas têm despertado o interesse no campo da Odontologia, acarretando uma mudança de paradigma ao empregar abordagens regenerativas para o tratamento das doenças ou agravos que afetam o dente.A polpa dental é caracterizada por apresentar uma população variada de células como odontoblastos, fibroblastos, células de defesa, microvasos e terminações nervosas sensoriais e simpáticas pós-ganglionares. As fibras nervosas são responsáveis pela homeostase do tecido, estando relacionadas com a manutenção do tônus vascular e condução de estímulos nociceptivos, dentre outros. A prerrogativa da engenharia tecidual é formar um tecido idêntico ou ao menos que apresente características morfológicas e funcionais muito semelhantes àquelas do original,assim, a engenharia de tecido pulpar deve formar um tecido inervado capaz de regular as estrutrasneoformadas. Deste modo, o objetivo geral deste estudo foi estudar a possibilidade de desenvolver polpas dentais inervadas utilizando o Modelo de Fatia Dental/Arcabouço para Engenharia de Tecido Pulpar. Para tanto, 3º molares hígidos tiveram a sua polpa removida e a cavidade pulpar preenchida com um arcabouço polimérico altamente poroso, onde foram semeado células-tronco de polpa dental (SHED).Os conjuntos fatia dental/arcabouços/SHED foram implantados bilateralmente no tecido subcutâneo do dorso de camundongos, decorridos 21 a 65 dias de implantação no tecido subcutâneo do dorso de camundongos, a imunolocalizaçãodos elementos nervososfoi realizada por imuno-histoquímica para ß tubulina III, NCAMe P75. Foi observada a formação de um tecido semelhante à polpa dental, com presença de terminações nervosas livres e organizadas em feixes nervosos. A organização fascicular foi proporcional com o aumento de tempo avaliado. Foi possível desenvolver polpa inervada utilizando o Modelo Fatia Dental/ Arcabouço para engenharia de tecido pulpar, sendo que o processo de neurogênese ocorreu de maneira espontânea.<br> / Abstract : Regenerative therapies have increased interest in the field of dentistry, causing a paradigm shift when using regenerative approaches for the treatment of diseases or injuries that affect the tooth. The dental pulp is characterized by presenting a diverse population of cells as odontoblasts, fibroblasts, immune cells, microvessels and sensory nerve endings and postganglionic sympathetic. The nerve fibers are responsible for the homeostasis of the tissue, being related to the maintenance of vascular tone and driving nociceptive stimuli, among others. The prerogative of tissue engineering is to form a fabric or at least equal to present morphological and functional characteristics very similar to those of the original, thus, the pulp tissue engineering must form a tissue innervated able to regulate the newly formed estrutras. Thus, the aim of this study was to evaluated the possibility of developing innervated dental pulps through the ?The tooth slice/scaffold model for Dental Pulp Tissue Engineering?. Third molars had their pulp tissue removed and the pulp chamber filled with a highs porous polymer scaffold and seeding with Stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED). The tooth slice/scaffolds/SHED were implanted bilaterallyin the subcutaneous tissue of the dorsum. The detection of neural elements was performed by immunohistochemical technique using the anti ß-tubulin III, anti-P75 and anti-NCAM. It was observed the formation of a similar material to the dental pulp in the presence of free nerve bundles and arranged in nerve endings. The proportional fascicular organization was evaluated with increasing time. We conclude that occurs a spontaneous neurogenesis process in dental / scaffolds seeded with (SHED).

MARTINS, Leonardo Arruda. O significado do infiltrado inflamatório em pacientes diagnosticados com vaginose bacteriana em citologia em meio líquido (SUREPATH). 2015. 51 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T16:11:55Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_lamartins.pdf: 571129 bytes, checksum: f7adee1b6a4f4e8b4daf0c5bdaa7d241 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-16T16:28:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_lamartins.pdf: 571129 bytes, checksum: f7adee1b6a4f4e8b4daf0c5bdaa7d241 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T16:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_lamartins.pdf: 571129 bytes, checksum: f7adee1b6a4f4e8b4daf0c5bdaa7d241 (MD5) Previous issue date: 2015 / Vulvovaginitis ( VV ) are reported since the fi fth century BC as a major health problem in women. Infectious agents are the main causes . The most commons are bacterial vaginosis (BV ) and vulvovaginal candidiasis ( VC ) . BV is the leading cause of VV, characterized by a change in bacterial vaginal popu lation with a prevalence of an aerobes strains. It is been observed in BV , which by defini tion is a non-inflammatory c ondition, some cases with the presence of inflammatory cells. However, this finding is not yet well defined. In the presence of two simultaneous microorganisms the pictur es would be defined as mixed vaginitis, in which cytological features are poorly defined and perhaps to influence the inflammatory infiltration presence. At the same time, it has been suggested that BV may play a role in carcinogenesis of the cervix since it has been observed that cytologic atypia is more frequent in women with shift of the vaginal flora, it is questionable whether th e inflammatory finding deserve the attention of the cyt opathologist . Objective: to ev aluate findings of liquid-based cytology ( SurePath ® ) in patients diagnosed with BV according to the presence of inflammatory cells. It was an observational , an alytical and cross-sectional study conducted in 1132 women diagnosed with BV , in the pe riod of October 2012 to June 2013. For the diagnosis of BV was used criteria of more than 20 % of clue cells in the smear ( SurePath ® ). The smears were evaluated for identification of morphotypes of pathogens, inflammatory infiltration and epithelial cell atypia . Trichom onas vaginalis , Candida sp ., Mobiluncus sp ., Actinomyces sp ., Cytopathy suggestive of Herpes Simplex Virus were searched . The presence of more than five polymorphonuclear leukocytes per epithelial cell in high power field (1000 x ) was considered in flammatory infiltrate . The ag e of patients ranged from 14 to 73 years (mean = 34.3, SD = 10.9) . The number of pregnancies was between 0 and 11 (mean = 1.5, SD = 2.08 ) . Two hundred and nine ( 34 % ) patients reported use of contraception and 828 ( 73.1 % ) were conducting a rou tine examination.The most fr equent clinical complaint was discharge in 130 cases (11.5 % ). Macroscopic ev aluation of vaginal discharge revealed that the white / milky color 115 ( 46,7 % ) pr evailed. On speculum examination was noted that 994 ( 87.8 % ) cases had described finding of normal mucosa and 50 ( 4.4% ) of vaginal mucosa inflamation. The morphotypes associated with bact erial vaginosis were mostly Mobiluncus sp. in 208 cases (66 %) and Candida sp. in 86 cases (27.3%) . The atypical cells were found in 84 cases ( 7.5%) and among these, AS C -US in 43 cases ( 51.2 % ) , LSIL in 31 ( 37 % ) and HSIL in 03 ( 3.6% ) . It was obser ved in the presence of inflammatory infiltrate 55 ( 4.9% ) cases with Mobiluncus sp ( p < 00.1 , RR = 0.61 [ 0.55 to 0.68 ] ) . Candida sp and 81 ( 7.2% ) cases ( p < 0.001, RR = 5.47 [ 2.93-10.19 ] ) . regarding cytological atypia was observed in the presence of leukocyte infiltrate atypia in 51 cases ( 4.5 % ) . RR = 1.27 [ 1.05 to 1.52 ] ) Among these the most frequent atyp ia was ASC -US with 24 ( 2.1% ) cases with leukocyte infiltration and 19 ( 1.7 % ) cases without infiltrate ( p = 0.2729 , RR = 0 , 86 [ 0.63 to 1.18 ] ) . For cases of LSIL observed 11 case s (1.0 % ) in the group w ithout infiltrate and 20 cases ( 1.8 % ) with inflammatory inf iltrate ( p = 0.0298 , RR = 1.346 [ 1.02 to 1.76 ]). In cases of bacterial vaginosis, by its current de finition, the presence of inflammtory infiltration suggests the possibility of mixed vaginitis (with Candida sp ) or epithelial atypia . / As vulvovaginites (VV) são referidas desde o século V a.C. como importantes agravos à saúde da mulher. Os agentes infecciosos estão entre as principais causas. As VV mais comuns são a vaginose bacteriana (VB) e a candidíase vulvovaginal (CV). A VB é a principal causa de VV, caracterizada por mudança de população bacteriana vaginal com predomínio de cepas anaeróbias. Tem sido observado na VB, que por definição é um quadro não inflamatório, alguns casos com presença de células inflamatórias. No entanto, este achado ainda não está bem definido. A associação entre microrganismos seria apontada como um quadro de vaginite mista, cujas características citológicas estão pouco definidas e talvez influenciassem no quadro inflamatório. Ao mesmo tempo tem sido sugerido que a VB, pode desempenhar um papel na carcinogénese do colo do útero uma vez que tem sido observado que atipias citológicas são encontrados mais em mulheres com uma flora vaginal alterada, questiona-se se o achado inflamatório deveria chamar a atenção do citopatologista. O objeitvo do trabalho foi avaliar achados da citologia em meio líquido (SurePath®) em casos com diagnóstico de VB segundo a presença de infiltrado inflamatório.Foi realizado um estudo observacional, analítico e em corte transversal, em 1132 mulheres com diagnóstico de VB, no período de Outubro de 2012 a Junho de 2013. Para o diagnóstico de VB foi utilizado critério de mais de 20% de clue cells no esfregaço de citologia de base líquida (SurePath®). Os esfregaços foram avaliados para identificação de morfotipos de patógenos, infiltrado inflamatório e atipías celulares epiteliais. Foram pesquisados Trichomonas vaginalis., Cândida sp., Mobiluncus sp., Actinomyces sp., citopatia sugestiva de Herpes Vírus Simplex. Foi considerado infiltrado inflamatório a presença de mais de cinco leucócitos polimorfonucleados por célula epitelial em campo de imersão (1.000x). A idade das pacientes variou de 14 a 73 anos (média = 34,3; dp =10,9). O número de gestações ficou entre 0 e 11 (média =1,5; dp=2,08). Duzentos e nove (34,%) pacientes referiam fazer uso de método contraceptivo e 830 (73,1%) estavam realizando exame de rotina. Quando havia uma queixa clínica a mais freqüente foi corrimento em 130 casos (11,5%). A avaliação macroscópica do conteúdo vaginal revelou que o de cor branco/leitoso 115 (46,7%) prevaleceu. No exame especular foi anotado que 994 (87,8%) dos casos descritos tinha achado de mucosa normal e 50(4,4%) de colpite. Os morfotipos de patógenos associados ao quadro de vaginose bacteriana foram principalmente Mobiluncus sp.em 208 casos (66%) e Cândida sp.em 86 casos (27,3%). As atipías celulares foram encontradas em 84 casos (7,5%) e dentre estas, prevaleceram ASC-US em 43 casos (51,2%), LSIL em 31(37%) e HSIL em 03 (3,6%). Observou-se na presença de infiltrado inflamatório 55 (4,9%) casos com Mobiluncus sp. (p<00,1; RR=0.61 (0,55-0,68)] e Cândida sp 81(7,2%) casos (p<0,001; RR=5,47 (2,93-10,19). Com relação às atipias citológicas observou-se na presença de infiltrado leucocitário atipias em 51 casos (4,5%) (RR=1,27 ([1,05-1,52]). Dentre estas a mais frequente foi ASC-US com 24 (2,1%) casos com infiltrado leucocitário e 19(1,7%) casos sem infiltrado (p =0,2729; RR=0,87 ([0,63-1,18]). Já para casos de LSIL observou-se 20 casos (1,8%) com infiltrado e 11 casos (1,0%) no grupo sem infiltrado inflamatório (p=0,0298; RR=1,35 ([1,02-1,76]). Nos casos de vaginose bacteriana, por sua definição atual, a presença de infiltrado inflamatório sugere a possibilidade de vaginite mista (com Cândida sp) ou atipia epitelial.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017 / Made available in DSpace on 2017-09-19T04:09:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347992.pdf: 2382912 bytes, checksum: 7d4dc8be152c8579ca29709f01adf318 (MD5) Previous issue date: 2017 / O glifosato e os herbicidas à base de glifosato são considerados praguicidas de amplo espectro e pós-emergente, e são os mais utilizados na agricultura mundial para matar uma variedade de ervas daninhas terrestres e aquáticas. Assim, pelo uso excessivo deste agroquímico nas culturas, especialmente quando aplicado por pulverização, pode ocorrer a sua infiltração no solo e a lixiviação para os corpos de água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi investigar a toxicidade celular do herbicida à base de glifosato, Roundup® WG (0,065; 0,65 e 6,5 mg/L), após 15 dias, sobre a morfologia, ultraestrutura e proteínas envolvidas na fusão e fissão mitocondrial no ovário do peixe-zebra, Danio rerio. Primeiramente, foi obtida a concentração letal média (CL50) de 42,61 mg/L em 96 horas para D. rerio após exposição ao Roundup® WG. Após exposição de D. rerio ao Roundup® WG por 15 dias, as células germinativas foram caracterizadas em três fases: ovócitos pré-vitelogênicos I (PreI), ovócitos pré-vitelogênicos II (Pre II) e ovócitos vitelogênicos (Vit), baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Uma diminuição no diâmetro dos ovócitos PreI foi observada nas três concentrações do Roundup® WG e uma diminuição do diâmetro dos ovócitos PreII nas duas maiores concentrações avaliadas. Em relação ao conteúdo da proteína vitelina, um aumento foi observado nos ovários das fêmeas expostas, sugerindo uma relação dose-dependente do Roundup® WG. Na análise ultraestrutural, foram observadas zonas de vacuolização nas células foliculares e um aumento do espaço perivitelínico, com presença de macro e micro vesículas, bem como compartimentos mitocondriais comprometidos nos ovários de fêmeas expostas. Também, foi observado uma redução do número de mitocôndrias e um aumento de mitocôndrias alteradas com uma severidade alta nos ovócitos, bem como uma diminuição no conteúdo de Drp1, Mfn1 e Mfn2 envolvidas na fissão e fusão mitocondrial, que pode indicar à mitocôndria como um dos alvos do Roundup® WG. Estes resultados, sugerem que Roundup® WG poderia ser considerado como um possível disruptor endócrino nos ovários de D. rerio, afetando à maturação ovariana. No entanto, devem ser realizados mais testes toxicológicos avaliando outros parâmetros reprodutivos e seu impacto nos peixes. Além disso, a menor concentração de glifosato avaliada neste estudo, que é a concentração permitida pelo CONAMA (0,065 mg/L), provocou diminuição no diâmetro dos ovócitos PreI, aumento do conteúdo de vitelina, bem como alteração nas mitocôndrias e diminuição de Drp1 e Mfn2, isso poderia indicar que o limite máximo permissível de glifosato no Brasil precisa ser reavaliado. Assim, o presente estudo demonstrou diferentes alterações no ovário de D. rerio expostos às concentrações do Roundup® WG, indicando a toxicidade reprodutiva deste herbicida. / Abstract: Glyphosate and glyphosate-based herbicides are considered broad-spectrum and post-emergent pesticides, and are the most widely used in global agriculture to kill a variety of terrestrial and aquatic weeds. Thus, due to the excessive use of this agrochemical in the crops, especially when applied by spraying, infiltration into the soil and leaching into the water bodies can occur, reaching different non-target aquatic organisms. Therefore, the objective of this study was to investigate the cellular toxicity of glyphosate-based herbicide, Roundup® WG (0.065, 0.65 and 6.5 mg/L) on morphology, ultrastructure and proteins involved in fusion and fission mitochondrial in the ovaries of zebrafish, Danio rerio. First, the determination of mean lethal concentration (LC50) was 42.61 mg/L in 96 hours for D. rerio after exposure to Roundup® WG. After exposure of D. rerio to concentrations of Roundup® WG for 15 days, germ cells of ovaries were characterized in three phases: pre-vitellogenic oocytes I (PreI), pre-vitellogenic oocytes II (PreII) and vitellogenic oocytes (Vit), based on morphological criteria already established in the literature. A diameter decrease in the PreI was observed in the three concentrations of Roundup® WG as well as a diameter decrease of the PreII oocytes when two highest concentrations were evaluated. In relation to the content of the vitellin protein, an increase in its content was observed in the ovaries of exposed females, depending on the concentration of the herbicide. In the ultrastructural analysis, zones of vacuolization in follicular cells and an increase of perivitelinic space with presence of macro and micro vesicles were observed, as well as compromised mitochondria compartments in the ovaries of exposed females. In addition, reductions in the number of mitochondria and an increase of altered mitochondria with high severity in oocytes were observed, as well as a decrease in the content of Drp1, Mfn1 and Mfn2 involved in mitochondrial fission and fusion. These may indicate the mitochondria as a Roundup® WG target. These results suggest that Roundup® WG could be considered as a possible endocrine disrupter in the ovaries of D. rerio, affecting ovarian maturation. However, further toxicological tests should be performed to evaluate other reproductive parameters and their impact on fish. In addition, the lowest concentration of glyphosate evaluated in this study, which is the concentration allowed by CONAMA (0.065 mg/L), caused a diameter decrease of the PreI, an increase in vitellin content, as well as a change in the mitochondria and a decrease in Drp1 and Mfn2. In this respect, the maximum permissible limit of glyphosate in Brazil needs to be reevaluated. Thus, the present study demonstrated different alterations in the ovaries of D. rerio exposed to concentrations of Roundup® WG, indicating reproductive toxicity of this herbicide.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:14:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310126.pdf: 1850967 bytes, checksum: 67fb92bdbc93e0e23a85bccd9bcc6cb5 (MD5) / A Célula-tronco (CT) é definida pela capacidade de autorrenovação e habilidade de se diferenciar em diversos fenótipos celulares. Nos últimos anos, vários estudos têm buscado a identificação e caracterização de CTs em tecidos adultos e extra-embrionários visando o desenvolvimento de alternativas para regeneração e reparo tecidual. Dentre as fontes de CTs adultas destaca-se a placenta, que além de desempenhar um papel crucial no desenvolvimento fetal, também é um importante reservatório de CTs mesenquimais (CTMs). A diferenciação de CTMs é um fenômeno ainda não totalmente esclarecido e influenciado pela atuação de diversas moléculas e pelo microambiente. Um grupo de proteínas de adesão conservadas evolutivamente que pode estar envolvido neste processo é o da família NEPH. Composta por NEPH1, NEPH2 e NEPH3, estas proteínas fazem parte da superfamília das imunoglobulinas (IgSF) e regulam a morfogênese de diferentes tecidos. Os ortólogos de NEPH têm sido amplamente caracterizados em vertebrados, onde atuam em diversos processos como no desenvolvimento neural, formação de sinapses e fusão de mioblastos. Além disso, vários estudos descrevem a expressão de NEPH1 e NEPH2 em diversos tecidos, o que apoia a hipótese de que tal expressão possa estar envolvida na diferenciação de CTs. Com isso, o enfoque deste trabalho foi comparar os níveis de expressão dos genes NEPH entre CTMs obtidas da placenta humana, no estado indiferenciado assim como após a indução à diferenciação adipogênica. As células da placenta utilizadas neste estudo apresentaram a expressão de marcadores de CTMs, a morfologia fibroblastóide esperada, bem como foram capazes de se diferenciar para o fenótipo adipogênico quando cultivadas em meio indutivo, caracterizando uma população de CTMs. Os resultados obtidos por RT-PCR em tempo real demonstraram que tanto as CTMs indiferenciadas quanto as induzidas para adipogênese apresentaram a expressão dos genes NEPH1 e NEPH2, sendo a expressão do gene NEPH1 75% mais alta nas CTMs induzidas à adipogênese do que nas células indiferenciadas. Com isso, sugerimos um papel do gene NEPH1 no processo de diferenciação das CTMs da placenta humana para adipócito. / The stem cell (SC), by definition, is undifferentiated and has the ability of self-renewal. SCs are also able to differentiate into diverse cell lineages. In recent years, several studies have searching for the characterization of SCs in adult and extra-embryonic tissues that could guide to develop strategies for tissue regeneration and repair. Among these tissues the placenta is an important source of adult SCs, being a reservoir of mesenchymal SCs (MSCs). Several biological signals and the environment influence the differentiation of MSCs, although this phenomenon is not yet fully understood. The NEPH protein family, which includes NEPH1, NEPH2 and NEPH3, is a group of evolutionarily conserved adhesion molecules that may be involved in this MSCs differentiation. These proteins are part of the immunoglobulin superfamily (IgSF) and regulate the morphogenesis of different tissues. The role of NEPH orthologs have been extensively characterized in vertebrates, where they act in neural development, synapse formation and myoblasts fusion. Moreover, several studies have described the expression of NEPH1 and NEPH2 in several tissues, supporting the hypothesis that they might be involved in SCs differentiation. Thus, the objective of this study was to compare the expression of NEPH genes between undifferentiated and differentiated MSCs obtained from human placenta. The placental cells used is this study comprise a population of MSCs, being characterized by the typical fibroblastic morphology, expression of MSCs markers and ability to differentiate into adipocytes when cultured in an inductive medium. Real time RT-PCR analysis demonstrated that both undifferentiated MSCs and MSCs differentiated into adipocytes express NEPH1 and NEPH2 genes. However, the expression of NEPH1 gene was 75% higher in MSCs differentiated into adipocytes than in the undifferentiated cells. In summary, our results suggest that NEPH1 gene may play a role in the differentiation of MSCs into adipocytes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-25T20:17:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 315204.pdf: 3762352 bytes, checksum: 2e50a1c177ecfeca603e388d031c121b (MD5) / As células tronco mesenquimais (CTMs) apresentam características como a multipotencialidade, auto-renovação e rápida expansão in vitro que as colocam numa posição estratégica e promissora para o uso em terapias celulares e na medicina regenerativa. A pele representa uma fonte de CTMs abundante, acessível e menos suscetível a questionamentos éticos. Atualmente, as células tronco mesenquimais da derme humana (CTMDH) tem sido pesquisadas quanto a sua habilidade em agir na cura, regeneração e reparo do tecido lesionado. O comportamento celular está intimamente associado ao complexo microambiente tridimensional presente no tecido nativo. Nesse sentido, scaffolds, feitos de polímeros naturais ou sintéticos, biocompatíveis e biodegradáveis vem sendo desenvolvidos. O hidrogel de carragenana tem atraído grande interesse devido a sua estrutura 3D e biocompatibilidade, conseguindo assim, mimetizar o microambiente encontrado pelas células in vivo. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um modelo para o cultivo de CTMDH, baseado na utilização do hidrogel produzido a partir de carragenana extraída da alga vermelha Kappaphycus alvarezii, cultivada no litoral do estado de Santa Catarina. Para isto, isolamos CTMDH a partir de fragmentos oriundos de cirurgias de lifting facial. Estas células foram cultivadas sob dois modelos: (1) CTMDH foram cultivadas sobre o hidrogel de carragenana; (2) CTMDH foram cultivadas encapsuladas em hidrogéis de carragenanas nativa e comercial (Sigma®). Os resultados do cultivo das CTMDH sobre o hidrogel de carragenana mostraram que nesta condição as células formaram dermo-esferas, as quais permaneceram em suspensão e num estado quiescente, com baixa taxa proliferativa. Devido a este comportamento atípico, as dermo-esferas foram transplantadas para placas de plástico. Nesta condição verificamos que as dermo-esferas conseguiram aderir e proliferar em superfície plástica. Elas também apresentaram marcação positiva para os marcadores de pluripotencialidade e para marcadores de CTMs diferenciadas. Além disso, estas células mantiveram a expressão dos antígenos característicos de CTMs e capacidade de diferenciação nos fenótipos adipogênico e osteogênico. Por outro lado, quando as CTMDH foram encapsuladas nos hidrogéis de carragenanas observou-se que as células apresentaram morfologia arredondada, apresentando pouca interação com gel. O ensaio de viabilidade por MTS e Qtracker demonstrou que no sétimo e oitavo dia há um aumento no número de células viáveis, porém no décimo quarto dia a viabilidade celular decai consideravelmente. A microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostrou que a microestrutura dos hidrogéis de carragenanas é composta por uma estrutura altamente porosa. Desta forma, concluímos que o modelo de cultivo sobre o hidrogel de carragenana não apresentou desempenho satisfatório para sustentar a adesão, proliferação e sobrevida das CTMDH. Por outro lado, verificamos que foi possível desenvolver um bom modelo 3D com a técnica de encapsulamento das CTMDH em hidrogéis de carragenanas nativa e comercial.<br> / Abstract : Mesenchymal stem cells (MSCs) exhibit features such as multipotentiality, self-renewal and rapid expansion in vitro that place them in a promising and strategic position for use in cell therapy and regenerative medicine. The skin represents an abundant source of MSCs, readily accessible and less susceptible to ethical questions. Currently, mesenchymal stem cells from human dermis (MSCHD) are being researched for its ability to act in healing, regeneration and injured tissue repair. The unique cell behavior is closely related to the complex three-dimensional microenvironment present in native tissue. Thus, scaffolds made of natural or synthetic polymers, biocompatible and biodegradable are being developed. Carrageenan hydrogel has attracted great interest due to its 3D structure and biocompatibility. This study aimed to develop a model for growing MSCHD based on the use of a hydrogel made from carrageenan, a polysaccharide extracted from red seaweed Kappaphycus alvarezii grown on the cost of the state of Santa Catarina. MSCHD were obtained from fragments originated from facial-lifting. These cells were cultured in two models: (1) MSCHD were cultured on carrageenan hydrogel; (2) MSCHD were cultured encapsulated in native and commercial (Sigma®) carrageenan hydrogels. The results revealed that MSCHD cultured on carrageenan hydrogel formed dermo-spheres, which remained in suspension and in a quiescent state, with low proliferative rate. Due to its unusual behavior the dermo-spheres were transplanted to plastic dishes. In this condition we found that the dermo-spheres were able to adhere and proliferate on the plastic surface. Furthermore, dermo-spheres showed positive staining for markers of pluripotency and MSC differentiation. In addition, these cells maintained the expression of characteristic antigens of MSC and the ability to differentiate into osteogenic and adipogenic phenotypes. On the other hand, when MSCHD were encapsulated in native and commercial carrageenan hydrogels, they exhibited a rounded morphology displaying little interaction with the gels. The viability test by MTS and Qtracker demonstrated that in the seventh and eighth day there was an increase in the number of viable cells. However, in the fourteenth day cell viability decreases considerably. Scanning electron microscopic (SEM) revealed that carrageenan hydrogels microstructure is composed of a highly porous structure. Thus, we conclude that the culture of MSCHD on carrageenan hydrogel had not provided satisfactory performance to support adhesion, proliferation and cell survival. On the other hand, we were able to develop a good 3D model using encapsulation technique of MSCHD in native and commercial carrageenan hydrogels.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2013-06-25T21:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303750.pdf: 2060621 bytes, checksum: ee1b2d096083e28dfeb39421d30a6e79 (MD5) / A pesquisa científica sobre o câncer mostra que a tumorigênese é um processo multifatorial, onde cada evento é o resultado de alterações genéticas e epigenéticas que conduzem as células a uma transformação progressiva, convertendo-as de um padrão de linhagem normal em derivados celulares malignizados. Os produtos naturais de origem vegetal têm sido investigados em função de suas propriedades biológicas, nutricionais e farmacológicas. O conhecimento da biologia e das relações existentes entre determinados metabólitos obtidos de espécies vegetais, e a profilaxia ou terapêutica de doenças, refletem em melhorias na qualidade de vida. Estudos prévios sobre as atividades biológicas de carotenóides e polifenóis obtidos de tecidos de milho, espécie Zea mays, demonstraram a ocorrência de inibição do crescimento tumoral e estímulo à função imune, além de inibição da proliferação celular e indução de apoptose. O presente estudo in vitro avaliou a potencial ação antitumoral de extratos carotenoídico (ECa) e polifenólico (EPf) derivados de folhas de Z. mays da variedade crioula Rajado 8 Carreiras. A cromatografia líquida de alta eficiência revelou a presença de luteína e ácido clorogênico como compostos majoritários de EC e EPf, respectivamente. Foram avaliados a citotoxicidade dos extratos foliares ECa e EPf e dos compostos puros ?-caroteno (?C), luteína (Lut), ácido gálico (AG), ácido cafeico (AC) e ácido ferúlico (AF) sobre quatro linhagens neoplásicas e uma linhagem não-neoplásica. Além disso foram avaliados os efeitos de ambos os extratos e de compostos puros sobre a morfologia, proliferação e adesão de células da linhagem B16F10. Ambos os extratos e os compostos puros, com exceção do AF, reduziram a viabilidade (método colorimétrico do MTT) de todas as linhagens de células tumorais sob estudo. No entanto, a única linhagem não-neoplásica, de fibroblasto de camundongo (L929), foi a menos susceptível, tendo, inclusive, apresentado um aumento (ao invés de redução) de 10% na viabilidade celular no grupo tratado com Lut (0,5 µg/mL). Além disso, ambos os extratos e os compostos ?C, e Lut (principalmente) causaram efeito citotóxico tempo-dependente (12 - 48 h) sobre a linhagem celular B16F10. Os ECa e EPf (5 µg/mL) também produziram alterações na morfologia (diminuição do espraiamento) e, após 24 h de exposição, induziram morte apoptótica nas células dessa linhagem. Os resultados do ensaio de BrdU mostraram que ECa e EPf (5 µg/mL, 24h) não inibiram a proliferação celular. Em um ensaio complementar, confirmou-se que ambos os extratos bloquearam a proliferação celular em até 99,5%; quantificada com base na capacidade de formar colônias (ensaio de clonogenicidade). Os ensaios de imunocitoquímica para detecção de actina e vinculina mostrou ocorrência de alterações nessas microestruturas evidenciadas pela distribuição dos pontos de adesão das células B16F10 expostas aos extratos (ECa e EPf). Com estes resultados sugere-se que os extratos de carotenóides e de polifenóis sob estudo teriam promovido alterações na estrutura do citoesqueleto (refletidas na morfologia celular), mais do que efeitos específicos nos mecanismos de viabilidade, migração e proliferação celular, os quais seriam uma consequência daquelas alterações. / The scientific research about cancer shows that the tumorigenesis is a multifactorial process, where each event is the result of genetics and epigenetic alterations that conduct the cells to a progressive transformation, converting them from a pattern of normal line to maligned cell derivatives. The natural products have been investigated because of their biological, nutritional and pharmacological properties. The knowledge of the biology and the existing relations between determined metabolites obtained from vegetal species and the prophylaxy or therapy of diseases, reflect in life quality improvement. Previous studies on the biological activities of carotenoids and polyphenols obtained from maize tissues, species Zea mays, demonstrate occurrence of tumor growth inhibition and stimulation of the immune function, beyond the inhibition of cell proliferation and apoptosis induction. This study in vitro evaluated the potential antitumoral action of carotenoidic (ECa) and polyphenolic (EPf) extracts derived from leaves of Z. mays of the creole mayze variety Brindle 8 Careers. The high performance liquid chromatography revealed that lutein and chlorogenic acid were the major compounds of the ECa and EPf, respectively. It was evaluated the cytotoxicity of the extracts ECa and EPf and the pure compounds â-carotene (âC), lutein (Lut), gallic acid (AG), caffeic acid (AC) and ferulic acid (AF) assaying four neoplastic cell lineages and also a non-neoplastic cell line. Besides, the effects of treatment with the extracts and some pure compounds were evaluated on the morphology, proliferation and adhesion of the B16F10 cell line. Both the extracts and pure compounds, with the exception of AF decreased the viability (MTT colorimetric method) in all the cell lineages under study. However, the only cell line non-neoplastic (mice fibroblasts; L929 cells) was the less susceptible, showing an 10 % increase (instead of increasing) in the viability of the cell group treated by Lut (0.5 ìg/mL). Moreover, both the extracts and the pure compounds âC, AG and Lut (mainly) caused time-dependent cytotoxic effects (12 - 48h) in the B16F10 cell line. Eca and EPf (5 ìg/mL) also afforded morphological alterations (spreading decrease) and, after 24 h of exposure, those extracts induced apoptotic death in the B16F10 cells. The results attained by means of the BrdU assay show that ECa and EPf (5 ìg/mL, 24h) did not inhibit cell proliferation. By means of a complementary assay based in the cell capacity to form colonies (clonogenicity), we demonstrated that both the extracts blocked (until 99.5%) the cell proliferation. With these findings we suggest that the extracts of carotenoids and polyphenols under study possibly promoted alteration in the cytoskeleton structure (reflected in the cell morphology) rather than the specific effects in the mechanisms of survival, migration and cell proliferation, which would be a consequence from those alterations.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:05:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319594.pdf: 1052362 bytes, checksum: 0a20e8a17447a2c7e3f68fb2d8cfd7ad (MD5) / A formação dentária ocorre através de interações sequenciais entre o epitélio oral e o mesênquima facial. O epitélio oral dá origem aos ameloblastos, enquanto a formação da polpa dentária é derivada das células mesenquimais. A maior parte do tecido mesenquimal na região cefálica é formado pelas células da crista neural (CN). A CN compreende uma população de células altamente multipotentes. Células tronco com característica da CN vem sendo encontradas em vários tecidos adultos como na polpa dentária humana de dentes permanentes. As células tronco encontradas na polpa dentária apresentam potencial de utilização para fins terapêuticos em diversas áreas médicas. Neste trabalho, avaliamos o potencial de diferenciação celular da polpa dentária, in vivo e in vitro, durante o desenvolvimento embrionário e em adultos. Para esse fim, lâminas histológicas de dentes de ratos foram analisadas, através de imunohistoquímica, em 3 fases do desenvolvimento: idade fetal de 17 dias (F17), 4 dias após o nascimento (D4) e em idade adulta. As análises ocorreram por imunohistoquímica para os marcadores de pluripotencialidade (Oct4 e Nanog) e de CN (Sox10, HNK1 e p75). Além disso, células da polpa dentária humana obtida de terceiros molares de indivíduos adultos foram analisadas por RT-PCR para os mesmos marcadores de pluripotencialidade e para os marcadores de CN Sox10, p75, Nestina e Snail. Estas células foram ainda cultivadas em meio de cultura padrão (aMEM acrescido de SFB a 10%) e meio indutivo neural (MCTN) e analisadas por imunocitoquímica para os marcadores de pluripotencialidade descritos acima, marcadores neurais (Nestina e ßTubulina III) e marcador mesodermal (aSMA) e ainda para a capacidade de originar Unidades Formadoras de Colônias (UFCs). Os resultados demonstram que as células da PD de ratos expressam os marcadores de pluripotencialidade Oct4 e Nanog, assim como o marcador de CN Sox10, em F17, D4 e no adulto. Marcação para p75 e HNK1 foram observados em D4 e no adulto respectivamente. Os resultados demonstraram ainda que as células da PD adulta de humanos apresentam expressão gênica dos marcadores de pluripotencialidade analisados e de CN Sox10, Snail e Nestina. Após cultivo, a células de apresentam expressão proteica de OCT4, dos marcadores neurais (ectodermais) ßTubulinaIII e Nestina, e de músculo liso (mesodermal) aSMA. Além disso, as células de PD apresentam capacidade clonogênica, originando colônias com potencial ectomesenquimal (com células positivas para aSMA, ßTubulinaIII e Nestina). O cultivo em meio indutivo neural promoveu alterações morfológicas, e diminuição na proporção de células positivas para aSMA. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a PD contém população de células multipotentes, clonogênicas com potencial ectomesenquimal, aparentando estarem presentes desde o início do desenvolvimento até a fase adulta. Ao mesmo tempo, essas células apresentam potencial de diferenciação neural. Desse modo, nossos dados demonstram que as células da PD apresentam um real potencial terapêutico.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:18:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 324044.pdf: 2594337 bytes, checksum: 07471dd5db5dbfb3c45335c21797e8d2 (MD5) Previous issue date: 2013 / Inúmeros estudos relacionados à formação de vasos sanguíneos abordam ocorrência de atividade moduladora exercida por produtos naturais no microambiente das células endoteliais. A própolis vem sendo investigada como uma candidata à modulação angiogênica. Entre seus constituintes químicos, encontram-se ácidos fenólicos, ésteres, flavonóides, terpenos, beta-esteróides, aldeídos aromáticos, sesquiterpenos e estilbeno-terpenos, entre outros grupos, sendo que sua composição pode variar de acordo com a fonte botânica do exsudato coletado, bem como das condições ambientais. O extrato hidroalcoólico de própolis coletado no outono/2010 no planalto serrano (município de São Joaquim) teve a sua ação investigada na viabilidade celular, na capacidade de proliferação, na função migratória e na tubulogênese de células endoteliais de veia umbilical humana. Esse extrato apresentou teores elevados de ácidos fenólicos (ácido gálico, ácido protocatecuico, ácido clorogênico e seus ésteres como o ácido isoclorogênico A e ácido isoclorogênico C) e do flavonoide quercetina. O extrato (100 - 200 µg/ml) produziu citotoxicidade e diminuição dos mecanismos de proliferação, migração e tubulogênese. Ele também foi capaz de reverter o efeito proliferativo do fator de crescimento vascular endotelial nas células endoteliais. A atividade da metaloproteinase-9 não foi alterada com 200 µg/ml do extrato. Porém, esta mesma concentração inibiu a atividade proliferativa da proteína quinase C e promoveu um efeito aditivo na inibição do efeito proliferativo da enzima cicloxigenase 1 e 2. Além disso, a administração do composto puro quercetina isoladamente (40 µM) ou em associação com o extrato (200 µg/ml), inibiu a proliferação celular. No ensaio de morte celular, evidenciou-se uma tendência à ação pró-necrótica do extrato. Quando o extrato de própolis foi administrado, in vivo, em membranas extra-embrionárias de Gallus domesticus, observou-se significativa inibição dos processos de vasculogênese e angiogênese. Os resultados desses ensaios in vitro e in vivo evidenciam o efeito modulador do extrato hidroalcoólico de própolis outonal catarinense na formação de vasos sanguíneos indicando aplicação em condições patológicas caracterizadas e sustentadas por uma angiogênese excessiva.<br> / Abstract : A number of studies regarding the formation of blood vessels approach the occurrence of modulatory activity exerted by natural products in the microenvironment of endothelial cells. Propolis has been investigated as a candidate for angiogenic modulation. Among the chemical constituents of that complex matrix are phenolic acids, esters, flavonoids, terpenes, beta-steroids, aromatic aldehydes, terpenes, sesquiterpenes, stilbenes and others groups, and its composition may vary according to the botanical source of exudates collected as well as, the environmental conditions. Hydroalcoholic propolis extract collected at autumn/2010 in Santa Catarina State (São Joaquim county) was investigated regarding its action on the cell viability, proliferation and migration, and also on the tubulogenesis of human umbilical vein endothelial cells. This extract has showed a high content of phenolic acids (gallic acid, protocatechuic acid, chlorogenic acid and its ester derivates isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid C) and the flavonoid quercetin. Propolis extract displayed cytotoxic activity (100 - 200 µg/ml) and decreased the mechanisms of proliferation, cell migration, and vascular tubulogenesis. The propolis extract was also able in to reverse the proliferative effects of vascular endothelial growth factor on endothelial cells. Activity of metalloproteinase-9 was not influenced by 200 µg/ml extract. However, this treatment inhibited the proliferative activity of protein kinase C and promoted an additive effect in the inhibition of proliferative effect carried by cyclooxygenase 1 and 2. Moreover, the pure compound quercetin when administered alone (40 µM) or in association with the extract inhibited the cell proliferation. Cell death assay showed a tendency a pro-necrotic action by the extract under study. When administered in vivo in extra-embryonic membranes of Gallus domesticus, the propolis extract promoted a significant inhibition of the vasculogenesis and angiogenesis. Taken together, the in vitro and in vivo findings evidence the modulatory effects of propolis extract studied on the blood vessels formation, and suggest application in morbidities characterized and sustained by excessive angiogenesis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:26:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 324993.pdf: 1370922 bytes, checksum: 69633f5130beb0a82d0fc07ff88f3382 (MD5) Previous issue date: 2013 / Os cultivos de camarão, tanto nas fazendas quanto nas larviculturas, são susceptíveis à ocorrência de mortalidades causadas por micro-organismos patogênicos, tais como vírus, bactérias e fungos. A grande maioria dos estudos sobre os mecanismos de defesa dos camarões enfocam principalmente a problemática ocorrida nos viveiros de cultivo com animais juvenis e adultos. Por outro lado, tais estudos são ainda escassos nas fases larvais e pós-larvais, mas são igualmente importantes, uma vez que enfermidades nesses estágios podem gerar perdas econômicas consideráveis para as larviculturas. Assim, o presente estudo teve como objetivo ampliar o conhecimento sobre a ontogenia do sistema imune durante o desenvolvimento de Litopenaeus vannamei, a espécie de camarão mais cultivada no mundo, através da avaliação da expressão de genes associados ao seu sistema imune utilizando RT-qPCR. Foram analisados 17 genes, de diferentes categorias funcionais, em subestágios de desenvolvimento: ovos fertilizados (0-4h e 7-11h pós-desova), Náuplios (I e V), Protozoeas (I e III), Misis (I e III) e Pós-larvas (2, 9 e 17). Todos os genes avaliados mostraram-se expressos no estágio de Pós-larva, o qual é o mais próximo de camarões juvenis. Os genes associados à defesa antiviral (Lv-Sid 1, LvDcr2 e Lv-Ago 2, LvDcr1, LvSVC1 e Lv-Ago 1), reconhecimento de micro-organismos (LvDscam), antioxidante (Lv-PRX), sinalização intracelular (fatores de transcrição LvDorsal e LvRelish) e apoptose (LvIAP) foram ubiquamente expressos de ovo a pós-larvas. Enquanto a expressão de genes envolvidos no sistema pró-fenoloxidase (LvproPO-1), a homeostasia (LvHHAP), coagulação (LvClot) e peptídeos antimicrobianos (Litvan PEN2, Litvan PEN3 e LvSty-II) não foi detectada em todos os subestágios. De maneira interessante, a expressão de genes de uma mesma família gênica (Litvan PEN2 e Litvan PEN3) não ocorreu simultaneamente em um mesmo subestágio de desenvolvimento. Por outro lado, os genes associados à defesa antiviral (LvDcr1/2, Lv-Ago 1/2 and Lv-Sid-1), fatores de transcrição (LvDorsal e xii LvRelish), defesa antioxidante (Lv-PRX) e apoptose (LvIAP) foram mais expressos no Ovo 0-4h em comparação ao Ovo 7-11h, sugerindo uma contribuição materna. A expressão de genes associados ao sistema imune nas fases larvais e pós-larvais de L. vannamei ressalta a importância de se conhecer o estabelecimento dos diferentes mecanismos de defesa ao longo do seu desenvolvimento. Assim, o presente estudo vem contribuir, de maneira original e pioneira, com informações a respeito da ontogenia de moléculas do sistema imune, especialmente àquelas associadas à defesa antiviral. Conhecimentos desta natureza poderão contribuir, em um futuro próximo, para o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas que servirão para avaliar as condições de saúde de animais nos cultivos (larviculturas e fazendas), bem como para orientar à seleção genética de camarões mais resistentes à infecções microbianas e virais.<br> / Abstract : Shrimp farms and hatcheries are susceptible to mortalities events caused by pathogenic microorganisms, such as virus, bacteria and fungi. The great majority of studies related to the defense mechanisms of shrimp are focused in problems that occur mainly in juvenile and adult shrimp farming. Moreover, studies in the shrimp larval and post-larval stages are very limited but are equally important, since diseases can generate considerable economic losses in those stages. Thus, the present study was aimed to expand the knowledge on the ontogeny of the immune system during the development of Litopenaeus vannamei, the most cultivated shrimp species in the world, through the evaluation of gene expression associated with the immune system using RT-qPCR. The stages examined in this work included the fertilized egg (0h and 7h post spawns), nauplius (I and V), protozoea (I and III), Mysis (I and III) and postlarval (PL2, PL9 and PL17). As result, it was observed that all analyzed genes were expressed in the post-larval stage, which is the previous stage to juvenile shrimp. While genes associated to antiviral defense (LvDcr1, LvDcr2, Lv-Ago 1, Lv-Ago 2, Lv-Sid-1 and LvSVC-1), microorganisms recognition(LvDscam), antioxidant defense (Lv-PRX), intracellular signaling (transcription factors LvDorsal and LvRelish) and apoptosis (LvIAP) were constitutively expressed from egg to postlarvae; genes involved in the prophenoloxidase system (LvproPO-1), homeostasis (LvHHAP), coagulation (LvClot) and antimicrobial peptides (Litvan PEN2, Litvan PEN3 and LvSty-II) were not detected in all stages. Interestingly, the expression of the same gene family (Litvan PEN2 and Litvan PEN3) did not occur simultaneously during the development. In addition, genes associated with antiviral defense (LvDcr1, LvDcr2, Lv-Ago 1, Lv-Ago 2 and Lv-Sid 1), transcription factors (LvDorsal and LvRelish), antioxidant defense (Lv-PRX) and apoptosis (LvIAP) were more expressed in egg 0h compared to egg 7h, which suggests a maternal contribution. The expression of genes associated with the immune system in larval and postlarval stages of L. vannamei highlights the importance of understanding the establishment of different defense mechanisms throughout the organism development. Thus, the present study aims to contribute in an original and pioneering way, with information about the ontogeny of molecules of the immune system, with especial attention given to molecules associated with antiviral defense. Such knowledge can contribute in the near future for the development of biotechnological tools to evaluate the health of animals in culture (hatchery and farm), as well as the genetic selection of shrimps more resistant to microbial and viral infections.